EA024595B1 - Антибактериальный агент для лечения инфекционных заболеваний бактериальной природы - Google Patents

Антибактериальный агент для лечения инфекционных заболеваний бактериальной природы Download PDF

Info

Publication number
EA024595B1
EA024595B1 EA201290002A EA201290002A EA024595B1 EA 024595 B1 EA024595 B1 EA 024595B1 EA 201290002 A EA201290002 A EA 201290002A EA 201290002 A EA201290002 A EA 201290002A EA 024595 B1 EA024595 B1 EA 024595B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
aba
iodine
antibacterial agent
drug
complex
Prior art date
Application number
EA201290002A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201290002A1 (ru
Inventor
Александр Иванович ИЛЬИН
Мурат Есенгалиевич КУЛМАНОВ
Original Assignee
Республиканское Государственное Предприятие "Научный Центр Противоинфекционных Препаратов" Комитета Промышленности Министерства Индустрии И Новых Технологий Республики Казахстан
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Республиканское Государственное Предприятие "Научный Центр Противоинфекционных Препаратов" Комитета Промышленности Министерства Индустрии И Новых Технологий Республики Казахстан filed Critical Республиканское Государственное Предприятие "Научный Центр Противоинфекционных Препаратов" Комитета Промышленности Министерства Индустрии И Новых Технологий Республики Казахстан
Publication of EA201290002A1 publication Critical patent/EA201290002A1/ru
Publication of EA024595B1 publication Critical patent/EA024595B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A61K38/2013—IL-2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/18—Iodine; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/38—Albumins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/549—Sugars, nucleosides, nucleotides or nucleic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/643—Albumins, e.g. HSA, BSA, ovalbumin or a Keyhole Limpet Hemocyanin [KHL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
    • A61K9/5169—Proteins, e.g. albumin, gelatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A61P31/06—Antibacterial agents for tuberculosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

Изобретение относится к области медицины, а именно к антибактериальному агенту для лечения инфекционных заболеваний бактериальной природы, включая госпитальные инфекции и лекарственно-устойчивый туберкулез, представляющему собой ионный наноструктурированный комплекс (ИНСК), синтезированный из карбогидратов белков и/или полипептидами (альбумины, интерлейкины, интерфероны, сигнальные белки и др.), которые для повышения антимикробного действия in vivo путем активирования иммунокомпетентных клеток содержат по крайней мере одну концевую аминокислоту, такую как Phe, Ala, Val, Ala, Leu, Ile и др. с электронно-донорными функциональными группами, йода и галогенидов щелочных и щелочно-земельных элементов в четвертой стадии при определенной ионной силе; антибактериальный агент повышает чувствительность бактерий, в том числе антибиотико устойчивых, к антибиотикам, активность моноцитов и макрофагов, эффективность антибиотикотерапии госпитальных инфекций и лекарственно устойчивого туберкулеза, а также обладает антивирусным действием, стимулирует кроветворную функцию костного мозга, обладает противоопухолевым действием, радиопротекторными свойствами, в приемлемых концентрациях компонентов может быть использован как нелекарственное средство (БАД или парафармацевтик), представлен в фармакологической форме, пригодной для парентерального, орального, наружного и иного применения, а ИНСК имеет формулу [{(L(MeI))[Me(L)I]}(Cl)] с M=30-300 кДа.

Description

Изобретение относится к области медицины, а именно к фармацевтике, и может быть использовано при лечении заболеваний бактериальной природы, особенно при лечении болезней, вызванных лекарственно-устойчивыми штаммами микробов, и бактериально-вирусных (микст-) инфекций.
Предшествующий уровень техники
Основным способами и средствами поражения патогенных бактерий в настоящее время являются антибиотики, объединяющие все лекарственные препараты, подавляющие жизнедеятельность возбудителей инфекционных заболеваний, таких как бактерии, грибы и простейшие.
Однако в связи с увеличением лекарственной устойчивости возбудителей инфекционных заболеваний к известным группам антибиотиков проблема разработки новых противомикробных препаратов не потеряла актуальность.
Так, например, во всём мире отмечается рост заболеваемости туберкулезом и увеличение смертности, вызываемые резистентными к лекарственным средствам возбудителями. Резистентность к противотуберкулезным средствам была обнаружена во всех 35 обследованных странах и регионах, что говорит о глобальности проблемы.
Полирезистентность к противотуберкулезным препаратам является самой сложной формой лекарственной устойчивости, известной в настоящее время. По данным ВОЗ, с начала 90-х годов в разных регионах планеты было зарегистрировано несколько вспышек полирезистентного туберкулеза.
Известно, что молекулярный йод с лёгкостью проходит через билипидные клеточные мембраны микроорганизмов и проникает внутрь клетки. Антимикробное действие соединений йода обусловлено способностью йода (элементарный йод, гипойодная кислота, катион йода) взаимодействовать с ИН2-группами аминокислот (лизин, гистидин, аргинин и др)., а также с нуклеотидами (аденин, цитозин, гуанин), формируя Ν-йоддериваты. Кроме того, происходит окисление 8Н-групп цистеина, приводящее к нарушению синтеза белков. Взаимодействуя с фенольными группами тирозина, йод приводит к нарушению образования водородных связей этих аминокислот. Действуя на двойные углеродные связи ненасыщенны жирных кислот, йод, тем самым, изменяет также свойства липидов.
Способность йода с лёгкостью проникать через клеточные мембраны делает его применение особо ценным при тех инфекциях, основное развитие которых разворачивается во внутриклеточных структурах (бруцеллёз, хламидиоз, вирусные гепатиты и т.д).
Известен лечебный препарат Йодомидол, обладающий бактерицидным и вирулицидным действием, содержащий йод, йодид калия или натрия, синтетический водорастворимый полимер, природные полимеры, например полисахариды и моно- и олигосахариды, при следующем соотношении компонентов, г/л:
ЙОД 6-10
йодид калия 9-15
синтетический водорастворимый полимер 2-4
Природный полимер (полисахариды) и моно- и
олигосахаридов 8-120
вода Остальное
(ΚΖ 6730В, 16.11.1998).
Недостатком данного препарата является его относительно высокая токсичность.
Известен вирулицидный фармацевтический препарат (ЕР 0978289 А1, 09.02.2000), обладающий антивирусным действием, содержащий йод, йодид калия или натрия, синтетический водорастворимый полимер, смесь природных моно-, олиго- и полисахаридов и хлорид лития при следующем соотношении компонентов, г/л:
йод 0,8 - 25
иодид калия 1,2-38
хлорид лития 0,1-20
синтетический водорастворимый полимер 0,01-6
смесь моно-, олиго- и полисахаридов 8-400
вода Остальное
Известно бактерицидное и вирулицидное фармацевтическое средство для профилактики и лечения моно- и микстинфекций, в том числе туберкулёза, бруцеллёза, чумы, гепатитов, ВИЧ, содержащее пул белков и/или галогенированных белков, карбогидраты и/или галогенпроизводные карбогидраты, синтетический водорастворимый полимер, лития хлорид, калия или натрия йодид, йод, воду или физиологический раствор при следующем соотношении компонентов (г/л):
- 1 024595 пул белков и/или галогенпроизводных белков от 0,01 до 200 карбогидраты и/или галогенпроизводные крабогидратов от 0,01 до 450 синтетический водорастворимый полимер лития хлорид калия или натрия иодид йод вода или физиологический раствор от 0,01 до 100 от 0,01 до 200 от 0,01 до 300 от 0,01 до 200 до 1 л (ΚΖ 15116А, 15.12.2004),
Бактерицидное и вирулицидное фармацевтическое средство представляет собой сложную физикохимическую систему, образованную моно- и полифункциональными лигандами (анионы, белки, карбогидраты, синтетические водорастворимые полимеры) и кислотами (йод, катионы щелочных металлов), находящуюся в псевдоравновесном состоянии. В этой системе протекают сопряженные процессы комплексообразования, ассоциации и диссоциации. Совокупность процессов кислотно-основного взаимодействия, химическая природа участвующих в них полифункциональных лигандов (белков, карбогидратов, водорастворимых синтетических полимеров), наличие в этом процессе лигандов с различной молекулярной массой (например, моно-, олиго- и полисахаридов) приводит к структурообразованию в системе, и она, таким образом, приобретает все свойства коллоидной системы.
Наличие в составе фармацевтического средства йода обеспечивает не только усиление бактерицидных и вирулицидных свойств за счёт собственно таковых свойств самого йода, но и обеспечивает синергетический эффект каждого по отдельности и всех в совокупности активных субстанций, присутствующих в средстве в равновесных концентрациях.
Это средство содержит галогенпроизводные соединения: галогенированные белки и галогенированные карбогидраты.
Известен йодный комплекс алкилполигликозидов (\УО 96/39839 А1) содержащий (мас.%): 0,5-30 йода, 0,2-14 йодида в виде соли, кислоты или их смеси и 2-85 сурфактанта сахаров, выбранных из группы сахаров, содержащих эфир алкилглюкозы, альдобионамид, глюконамид, глицерамид, глицероглюколипид, амиды жирных полигидроксикислот, алкилполиглюкозидов общей формулы К1О(К2О)ь(2)а, где К1 - моновалентный органический радикал, содержащий от 6 до 30 атомов углерода; К2 - дивалентный алкиленовый радикал, содержащий от 2 до 4 атомов углерода; Ζ - производное сахаров, содержащее 5 или 6 атомов углерода; Ь - натуральное число от 0 до 12; а - натуральное число от 1 до 6.
Известен способ получения имобилизованных ферментов с помощью реакции комплексообразования с молекулярным йодом и иодидом калия (КИ 2157405 С2), в результате реакции комплексообразования образуются белки, содержащие связанный йод, которые из раствора, переходят в твёрдофазное состояние, т.е. образуются не растворимые в воде комплексы. Твёрдофазное состояние характеризуется образованием полидисперсных частиц размером от нескольких до десятков и сотен микрон, которые (частицы), в силу большой общей площади поверхности активных центров ферментов, способных взаимодействовать с молекулами микробных субстратов, обеспечивает антибактериальное действие иммобилизированных ферментов. Входящий в состав комплекса йод обеспечивает микробоцидное действие.
Известен препарат для введения антисептических веществ, включая галоген, в нижние дыхательные пути, содержащий, по крайней мере один антисептик в сочетании с носителем в виде частиц, полученным известными способами, причем носитель содержит по меньшей мере один липосомный препарат, препарат микросфер, препарат наночастиц, препарат больших пористых частиц или препарат молекул, покрытых полимером при помощи пульсирующего лазера размером от 1 до 30 мкм (КИ 2212884 С2). Во всех вышеперечисленных известных патентах авторы не ставили перед собой задачу синтеза комплексных соединений с заданной структурой и свойствами, а также выделение комплексных соединений из растворов и определение их состава и физико-химических свойств, что затрудняет использование комплексных соединений йода с карбогидратами и белками, обладающих биоцидными свойствами, в качестве лекарственных средств. Кроме того, затруднена разработка приемлемых лекарственных форм без определённого набора свойств и качеств комплексных соединений йода - антибактериальных агентов, охарактеризованных физико-химическими свойствами и составом.
В последние годы в научной литературе появились отдельные работы, посвященные изучению структуры комплексных соединений карбогидратов с солями магния, кальция и других комплексообразователей (О. Μηιζ, К. СеЬ1ет, I. Икоп, Заепдет // СатЬойубта1е Кекеагсй 2001. V. 336. Р. 141-153; М. ЫоЙетеует, Заепдет // 1АС8, 1980. V. 102:8.9. Р. 2710; М. ЫоЙетеует, 8аепдет // Ыа1иге. 1976.
V. 259:26. Р. 629).
Установлена кристаллическая структура целого ряда ферментов, имеющих в своём составе ионы магния, калия, кальция, лития, т.е. соли металлов. (Υ. Со1бдит, Р. Эуба. А.В. Нюктап, Т.М. Кпктк. К. Ста1д1е, Ό.Κ. Эго/ек // Ргос. Ыаб. Ашб. 8ск И8А, 1998. V. 95:16. Р. 9150-9154; Р. Оуба, А.В. Нюктап,
- 2 024595
Т.М. 1епки15. А. Епде1тап, К. Сга1д1е, Ό.Κ. Оа\)е5 // Баепсе. 1994. V. 266. Р. 1981-1986).
В то же время отсутствуют работы, в которых бы был осуществлён целенаправленный синтез координационных соединений йода с заданной структурой и, соответственно, заданными антибактериальными свойствами, подходящими для реализации того или иного механизма действия этих соединений.
Таким образом, задачей изобретения является создание антибактериального агента (АБА) для лечения заболеваний бактериальной природы, включая госпитальные инфекции и лекарственно устойчивый туберкулёз.
Дополнительными задачами данного изобретения также являются разработка способа получения антибактериального агента и создание лекарственного средства на основе АБА для лечения инфекционных заболеваний бактериальной природы.
Техническим результатом изобретения является повышение эффективности действия АБА ш νίνο путём активирования иммунокомпетентных клеток.
Сущность изобретения
Технический результат достигается тем, что разработан АБА, представляющий собой ионный нанострутурированный комплекс (ИНСК), образованный белками и/или карбогидратами, солями металлов и интеркалированным в них йодом, при этом для получения упорядоченной структуры антибактериального агента и необходимого иммунотропного действия реакцию комплексообразования проводят в четыре стадии:
стадия 1): взаимодействие карбогидратов и белков с солями металлов;
стадия 2): интеркаляция 5-95% необходимого количества йода в комплекс, образующийся на первой стадии реакции комплексообразования при определённой ионной силе;
стадия 3): введение в реакцию комплексообразования белков, содержащих по крайней мере одну концевую аминокислоту с электронодонорными функциональными группами и определённый сайт, обусловливающий необходимый иммунный отклик;
стадия 4): интеркаляция остального количества йода в антибактериальный агент.
Кроме того, согласно изобретению предложен АБА, который, несмотря на то что обладает слабой противоопухолевой активностью, слабым радиопротекторным действием, однако, в совокупности с уникальной способностью восстанавливать кроветворную функцию костного мозга может иметь огромное практическое значение для предупреждения возможных побочных эффектов химио- и радиотерапии в комплексной лекарственной сопроводительной терапии опухолей.
Другой технический результат достигается тем, что белки и/или полипептиды, входящие в состав АБА, обладают иммуногенной активностью и содержат по крайней мере одну концевую аминокислоту с электронодонорными функциональными группами, которые при введении АБА в организм заякориваются в области стимулирующих и костимулирующих рецепторов иммунокомпетентной клетки концевыми аминокислотами, обладающими гидрофобными свойствами и содержащими электронодонорные функциональные группы, а специфические сайты этих белков активируют иммунокомпетентные клетки первой и второй линий защиты - моноциты-макрофаги и цитотоксические Т-лимфоциты.
Далее изобретение включает лекарственную форму заявляемого АБА.
В зависимости от конкретно предлагаемого применения фармацевтический состав согласно настоящему изобретению можно приготовлять в форме раствора, суспензии, парентерального состава, мази, крема, аэрозоля, порошка, таблетки, капсулы или другой приемлемой лекарственной формы, которые вводят определёнными дозами, наносят или смешивают соответствующим образом. Фармацевтические составы могут включать:
а) потенциальные составы - наполнитель, в частности апирогенную воду, буфер или обычный физиологический раствор;
б) мази, кремы, аэрозоли - носитель, в частности растительное или синтетическое масло, ланолин, вазелин или высокомолекулярные спирты;
в) таблетки или капсулы - разбавители, в частности лактозу, связывающие вещества, смазывающие вещества (например, стеариновую кислоту), а также средство расщепления (например, кукурузный крахмал).
Все фармацевтические составы согласно настоящему изобретению могут сочетаться с антибактериальными (например с антибиотиками), антивирусными, противоопухолевыми, иммуномодулирующими и другими агентами в случае, если в сочетании они дают синергетический эффект с заявленными фармацевтическими составами или индифферентны по отношению к ним, но в комбинации расширяют терапевтический спектр.
Кроме того, согласно настоящему изобретению АБА можно использовать в качестве нелекарственного средства (БАД, пищевой добавки, кормовой добавки, компонента средств гигиены, такие как лосьоны, зубные пасты, жевательные резинки и др.) при соблюдении определённых условий. К таким условиям относится, например, использование в составах только тех компонентов и в тех концентрациях, которые указаны в Собех АйтеШагшв.
Нелекарственные средства на основе комплексного соединения в соответствии с настоящим изобретением, обладают иммуномодулирующим действием и могут быть использованы для профилактики
- 3 024595 инфекционных заболеваний, в частности сезонного гриппа, ОРВИ, йодной недостаточности, а также в качестве адаптогена.
Настоящее изобретение основано на неожиданном факте, что в растворах солей щелочных и щелочно-земельных металлов при определенной ионной силе в присутствии карбогидрата и/или белка происходит выделение комплекса в твердую фазу при интеркаляции йода.
Другой неожиданный факт, положенный в основу данного изобретения, заключается в том, что, как установлено экспериментальными данными, настоящее изобретение даёт возможность введения в состав антибактериального агента белков, содержащих сайты с определённой иммунологической функцией.
Перечень фигур чертежей
Заявленное изобретение проиллюстрировано следующими фигурами.
На фиг. 1-4 представлены микроснимки различных кристаллических структур препарата ФС-1.
На фиг. 5 представлена зависимость выхода кальциевого комплекса трийодид-иона с карбогидратом от ионной силы.
На фиг. 6 представлена зависимость выхода магниевого комплекса трийодид-иона с карбогидратом от ионной силы.
На фиг. 7 показано образование стабильных координационных соединений в системе карбогидратбелок-соли ЫС1, МдС12.
На фиг. 8 показаны структуры, иллюстрирующие взаимодействие молекулярного йода с галогенидами лития, гарбогидратами и боковыми аминокислотными остатками белка.
На фиг. 9 представлена схема образования субъединицы АБА.
На фиг. 10а-з приведены микроснимки соединений по примерам 1-9.
На фиг. 11 представлен микроснимок соединения по примеру 5 (ФС-1).
На фиг. 12 показана динамика выживаемости крыс в контрольной и опытных группах в течение 30 дней после облучения: 1) облучение в дозе 800 Р; 2) облучение в дозе 800 Р на фоне перорального введения в организм 1,0 мл ПХ за 30 мин до облучения.
Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения
Исходя из вышеописанного, в соответствии с изобретением в способ получения, с целью обеспечения сохранности свойств иммуногенных белков в составе антибактериального агента, добавлены третья и четвёртая стадия комплексообразования.
В контексте данного изобретения компоненты, их соотношение и интервал ионной силы является существенными признаками при синтезе АБА. Все признаки, определяющие состав и структуру АБА, являются необходимыми и достаточными для достижения поставленной цели. Ни один из них не может быть исключен или заменён на другой, в противном случае технический результат не будет достигнут.
Подбор как качественного состава веществ, образующих АБА, так и количественных соотношений компонентов и интервала ионной силы был основан на закономерностях комплексообразования и на многочисленных экспериментальных данных по определению антибактериальной активности АБА в зависимости от состава образующих его компонентов.
Качественный состав веществ был выбран исходя из их биологической значимости и химических свойств, обеспечивающих антибактериальное действие.
Карбогидраты, выбранные авторами настоящего изобретения в качестве лигандов, являются чрезвычайно важным классом природных соединений. В биологии и медицине значение карбогидратов заключается в доминирующей роли, которая отводится и в животных организмах, и в сложности их функций. Такие карбогидраты, как углеводы, участвуют в большинстве биохимических процессов в виде высокомолекулярных частиц, хотя во многих биологических жидкостях содержатся моно- и олигосахариды (Сошрге881уе Огдатс Сйет181гу / Ебйеб Ьу Е. НаЗат. V. 5. Вю1одюа1 Сотроипбк Регдатоп Рге88, 19).
Главной особенностью АБА, представляющего собой комплексное соединение йода с карбогидратами и/или белками и солями металлов, является наличие в его составе белков с определённым набором электронодонорных функциональных групп в концевых аминокислотах и сайтов.
Белки играют ключевую роль почти во всех биологических процессах, определяют ход биологических превращений в клетках, участвуют в осуществлении множества других функций, таких, например, как транспорт веществ и их накопление.
Настоящее изобретение включает также низкомолекулярные пептиды и составляющие их мономеры.
Транспортная роль белков исключительно важна, поскольку диффундирующая молекула, связанная с белком, в случае прохождения через мембрану не модифицируется химически и не соединяется с другими видами молекул. Для опосредованных, или облегченных, мембранных транспортных процессов характерны кинетика насыщения (т.е. транспортная система может насыщаться транспортируемым растворенным веществом) и специфичность к транспортируемому веществу.
Возможность опосредованного транспорта обусловливается белками, способными обратимо связывать специфические субстраты, в том числе и молекулу йода. Эти транспортирующие молекулы белка имеют различные названия: транспортные системы, переносчики, носители или транслоказы.
В табл. 1 представлены составы АБА, синтезированного из карбогидратов, белков и йода при раз- 4 024595 личной ионной силе раствора, создаваемой солями щелочных и щелочно-земельных металлов. Кристаллическая структура некоторых соединений (антибактериального агента) в зависимости от соотношения карбогидрат:белок (полипептид) представлена на оптических и электронных фотографиях фиг. 1-4.
Как видно на фотографиях, АБА может формировать нанокристаллы (фиг. 1: 1А при увел. 400х, 1В при увел. 40000х), микрокристаллы (фиг. 2: 2А при увел. 5000х, 2В при увел. 12000х) довольно крупные (0,1 мм), монокристаллы (фиг. 3) или кристаллы различных размеров (фиг. 4).
Размер кристаллов уменьшается с ростом содержания карбогидрата относительно белка (полипептида) при прочих равных условиях (ионная сила раствора), а также с увеличением соотношения йод:карбогидрат и/или белок (пептид).
Реакция синтеза АБА согласно заявленному способу проходит последовательно по реакциям комплексообразования. На первой стадии происходит образование комплексов между карбогидратом (Б]), белком (Ь2), полимеров (Ь3) и солями, содержащими катионы кальция и магния:
к,
я. Л·/^ +£+£,+£,» £, · £2 · £, п3Са +£,+£,+£,<=> СаЯ! £, - £3 £, [Л^Т *[£,£,£,] [^Д;
(1) (2)
В растворе, приготовленном для осуществления интеркаляции йода, происходит образование комплекса между йодом и йодидом калия:
1,+ΚΙ-^ΚΙ, (3)
При соединении вышеназванных растворов осуществляется интеркаляция йода, и/или полийодидиона, т.е. происходит взаимодействие между комплексными частицами, образующимися как в первом растворе, так и во втором. При этом происходит перераспределение веществ, составляющих АБА (комплекс) согласно их донорно-акцепторным свойствам:
Образующийся в результате реакции (3) трийодид-ион является также сильным комплексообразователем, как и молекулярный йод:
л4Л££2+ +п,Ц +Ь,+Ь2+Ь3<^ Μξηι [£3]я! £,£2£3 п6Са2+ + и,/; + £, + £2 + £3 <=> Са„( [£3]л; £3£2£3 к [^„ДП]п5 /,£,£,] [Ся», ΙΑ 1„71·/·/·} ] (5) (6)
Выходы АБА:
Выход конечного продукта зависит от физико-химических параметров реакции (табл. 2 и 3).
Неожиданным оказался тот факт, что при определённой ионной силе реакционной среды выход АБА приближается к 100%.
Еще более неожиданным оказался факт образования кристаллов АБА, представляющего собой ионный полимерный комплекс, в процессе выделения способом центробежной хроматографии и/или сушки, причём состав монокристаллов строго определённый и постоянный, что свидетельствует об образовании индивидуального соединения АБА.
По результатам расчёта предполагаемого равновесия выход АБА меняется (возрастает) с увеличением ионной силы (фиг. 5 и 6). Особенно существенное влияние ионной силы наблюдается для комплекса, содержащего ионы магния (фиг. 6), что может быть связанно с характеристикой этого иона как более жесткой кислоты по Пирсону [Реагкои КО, 1оитиа1 АС8, 1963, 85, р. 3533. Реагкои КО. 1оитиа1 СЬетюа1 Ебисайоп, 1968, 45, р. 643. Реагкои КО., СЬеш1еа1 СоттишсаНои, 1968, р. 65, ОеЫеи Η.Ζ., РЬук1са1 сйет1к1гу, 1954, 203, 125. Ршйои Η.Ζ., КусПтаи А.С., А пе\у Ое\у о£ сиггеШ асМ-Ъаке кепек. Ν.Υ., \νίΚ 1982].
Структура АБА и последовательность актов образования этой структуры, согласно заявленному по настоящему изобретению способу получения антибактериального агента, может быть представлена как на фиг. 7. На данной фигуре шары обозначают атомы углерода, азота, хлора, кислорода, магния, лития.
- 5 024595
Для структуры I ΔΕ=-106,01 ккал/моль, для структуры II ΔΕ=-79,12 ккал/моль, а для структуры III ΔΕ=-88,86 ккал/моль.
Образование комплексных полиионных соединений в системе карбогидрат-белок-соль щелочного или щелочно-земельного металла подтверждено квантово-химическими расчетами и данными УФ-, ИКФурье спектроскопии, электронной и оптической микроскопии, квантово-химических расчётов.
В рамках неэмпирического квантово-химического метода 3-210** проведен расчет структур (фиг. 7). В расчетах карбогидрат моделировали этанолом, белковый скелет амидом, а один из наиболее донорноактивных кислотных остатков гистидин-имидозолом. Энергия комплексообразования ΔΕ рассчитана как
ΔΕ = Е(компл)-(Е(ЫС1)+Е(этанол)+Е(амид или имидозол)
Для структуры I ΔΕ=-106,01 ккал/моль, для структуры II ΔΕ=-79,12 ккал/моль, для структуры III ΔΕ=-88,86 ккал/моль. Расчеты показали, что координация солей ЫС1, МдС12 донорно-активными группами белка и карбогидрата энергетически выгодна.
При интеркаляции молекулярного йода в систему образуются комплексы ЕУ-УП, в которых молекулярный йод координируется белком и галогенидами лития, а галогениды лития координируются карбогидратом.
Расчет стабильностей комплексов молекулярного йода с галогенидами лития, карбогидратами и боковыми аминокислотными остатками белков свидетельствует о том, что при интеркаляции молекулярного йода в систему образуются комплексы ЦУ-УЛ фиг. 8), в которых молекулярный йод координируется белком и галогенидами лития, а галогениды лития координируются карбогидратом.
В табл. 4 представлены длины координационных связей и ΔΕ энергии стабилизации комплексов.
ΔΕ рассчитаны как
ΔΕ = ЕДкомпл.) - (Е2+Е(), (9) где Ε1 - полная энергия комплекса;
Ε2 - полная энергия ЫС1ОНС2Н5;
Ε3 - полная энергия комплекса Е с аминокислотным остатком.
Как видно из табл. 4, наиболее стабильный комплекс образуется с участием аргинина (структура УН), при этом связь Ы рвется, в таком комплексе свойства молекулярного йода не сохраняются. Сравнение энергий стабилизации комплексов молекулярного йода с аргинином (-18,17 кДж/моль) и с аденозином (-10,93 ккал/моль) и гуанином (-11,50 кДж/моль) свидетельствует о том, что если в состав АБА будет входить аргинин, то в этом случае молекула и останется в структуре препарата и не будет образовывать комплекс с нуклеотидами ДНК.
В комплексах связь Ы не рвется, а только ослабляется. После аргинина наиболее стабильные комплексы получаются с участием карбонильной группы амидного фрагмента белка. Амидный фрагмент входит в состав полипептидного скелета и в состав аминокислотных остатков аспаргина и глутамина.
Выход конечного продукта зависит от физико-химических параметров реакции - Кобр, стехиометрического коэффициента п и концентрации реагентов.
На основании данных УФ-, ИК-Фурье спектроскопии, электронной и оптической микроскопии, квантово-химических расчётов, структура АБА и последовательность актов образования этой структуры, согласно заявленному по настоящему изобретению способу получения АБА, схематично может быть представлена следующим образом (фиг. 9).
Формирование субъединицы (молекулы) АБА происходит под действием ионной силы раствора в интервале от 0,015 до 10,2, соответствующей давлению 286-2860 кг/см2. Под действием такого давления (ионной силы) макромолекулы карбогидрата и белка упаковываются таким образом, что не задействованные в комплексообразовании концевые аминокислотные триплеты ориентированы наружу от основной скелетной цепи белка и/или полипептида и осуществляют заякоривание антибактериального агента на мембране клетки кристалла АБА аминокислот, содержащих электронодонорные функциональные группы, о чем напрямую свидетельствуют данные по иммунотроному действию АБА, приведённые ниже.
Способ получения заявленного АБА заключается в следующем.
В подходящем растворителе, например воде, диоксане и др. растворяют навеску карбогидрата. В этот раствор для получения комплексных соединений, вводят определённые навески солей металлов и хлорида натрия для создания соответствующей ионный силы раствора (продукт А).
В подходящем растворителе, например воде, диоксане и др. растворяют навеску белка. В этот раствор, для получения комплексных соединений, вводят определённые навески солей металлов и хлорида натрия для создания соответствующей ионный силы раствора (продукт Б).
В подходящем растворителе, например хлороформе, гексане и др., растворяют навеску йода кристаллического или йода и калия йодида и раствор перемешивают до полного растворения йода (продукт В).
- 6 024595
Затем к смеси продуктов А и Б при перемешивании добавляют порциями 70% продукта В. После перемешивания реакционной смеси в течение 1 ч при 42-43 °С в раствор вводят белок с определёнными иммунотропными функциями, содержащий по крайней мере одну концевую аминокислоту с электронодонорными функциональными группами, а затем проводят заключительную интеркаляцию 30% йода, добавляя порциями оставшиеся 30% продукта В. Образовавшийся антибактериальный агент (АБА) (комплексное соединение йода с карбогидратами и/или белками и солями металлов) выделяют приемлемым способом и высушивают.
Лекарственное средство на основе этого антибактериального агента получено известными способами в виде раствора для орального применения, раствора для парентерального применения, таблеток и капсул.
Анализ антибактериального агента проводили методами индикаторного титрования, потенциометрического титрования (8айогшк РгоГеккюшй Ме1ег РР-50), капиллярного электрофореза (Адйей Тсс1то1ощс5 СЕ3Э, США), колебательной (ИК) спектроскопии с Фурье-преобразованием (ТНегто Е1ес1гоп СогрогаЦоп №со1е1 6700), электронной спектроскопии в ультрафиолетовой и видимой областях спектра (Регк1пЕ1тег ЬатЬба 35).
Микроскопию комплексных соединений проводили на растровом электронном микроскопе ОнаШа 200ί 3И (ЕЕ1 Сотрапу, США).
Цитотоксичность препаратов определяли ίη уйго микроскопией и при помощи МТТ-теста в монослойных перевиваемых культурах клеток КИ, МИСК, МКС-5, суспензионных культурах МТ-2 и Н9 микрометодом в 96-луночных плашках, инкубируемых в атмосфере с 5% содержанием СО2 при 37°С (табл. 5).
Определение минимальных ингибирующей концентрации (МИК) АБА в отношении клинических изолятов МК8А и М88А и референсных штаммов 81арНу1ососсик аигеик АТСС 43300 и 81арНу1ососсик аигеик АТСС 29213 проводили методом серийных разведений в питательной среде [СНшса1 ЬаЬогаЮгу 81апбагбк 1пк1йи1е, Иоситей М7-А7. МеШобк Гог бййюп апйтюгоЫй киксерйЬййу 1ек1к Гог ЬасЮпа 1На1 дготе аегоЫсаНу; Арргоуеб йапбагб, 7|Н Ебйюп Уаупе, Ра: С1шса1 БаЬогаЮгу 81апбагбк 1пк1йи1е, 2006] (табл. 6).
Изучение синергетического действия АБА с антибиотиками в отношении клинических изолятов МК8А и М88А и референсных штаммов 81арНу1ососсик аигеик АТСС 43300 и 81арНу1ососсик аигеик АТСС 29213 проводили методом СНескегЬоагб [Е1юрои1ок С апб Мое11егшд К. Апйт1сгоЫа1 сотЬтаНопк. 1п АпйЫойск ш ЬаЬогаЮгу Мебюше, 1996, 4гб еб. (Ьопап, К., Еб), р. 331-396. ХУППатк апб ХУПктк Со., ВаШтоге, МИ, И8А].
Определение синергизма методом Пте-КШ проводили в отношении контрольного штамма МК8А АТСС 43300 [Иайопа1 Сотт1йее Гог СНшса1 ЬаЬогаЮгу 81апбагбк, Иоситей М26-А. Мебюбк Гог ЭеЮгтйипд Вас1епаба1 Асйуйу оГ АпйтюгоЫа1 Адейк; Арргоуеб СшбеНпе Уаупе, Ра: Иайопа1 Сотт1йее Гог СНтса1 ЬаЬогаЮгу 81апбагбк, 1999].
Антимикобактериальное действие АБА ФС-1 изучали по динамике роста микобактериальных штаммов МйиЬегсШокй Η37Κν, МйиЬегсШотк М8-115 и М.ЬоПк Воушик в обогащенной жидкой среде М1бб1еЬгоок 7Η9 в присутствии различных концентраций препарата по сравнению с ростом этих штаммов на среде, не содержащей препаратов, и среде, содержащей препарат 1-го ряда изониазид в концентрации 0,1 мкг/мл. Исследование вели в трипликатах. Детекцию роста проводили с помощью автоматизированной системы учета роста культур Вас(ес МС1Т 960 (ВесЮп Июкепкоп И8А) в специальных пробирках МС1Т. Детекция роста микобактериальных культур проводилась каждый час с помощью программного обеспечения Ерюейег (ВесЮп Июкепкоп, И8А).
Для изучения противотуберкулезного действия лекарственного средства из АБА по примеру 5 (ФС-1) использовали модель аэрогенного инфицирования на самках морских свинок-альбиносов. Заражение производили в аэрозольной камере С1акСо1 в дозе 150 КОЕ МйиЬегсШокй Η37Κν на легкое.
Для изучения противотуберкулезного действия ФС-1 использовали морских свинок линии Иипкт Най1еу. Заражение производили внутримышечно из расчета 0,5 мл взвеси, содержащей «307-692 бактериальных тел МйиЬегсШокй Н37Ку, в 1 мл на одно животное.
Определение антивирусного действия АБА ш уйго в отношении вируса гриппа А/РРУ/УауЬг1де/78/Н7М7 и вируса простого герпеса штамм УюЮгу проводили микрометодом на перевиваемых культурах клеток МДСК и КИ. Вещества вносили в концентрациях 1/2, 1/4, 1/8, 1/16 от максимально переносимой концентрации МПК.
Изучение антивирусного действия препарата ФС-1 в отношении вируса иммунодефицита человека ВИЧ-1 (ЬА1) проводили на клеточной культуре МТ-2 (человеческие, трансформированные вирусом НТЬУ-1 Т-лимфобластоидные клетки), референтное вещество - азидотимидин.
Источником вируссодержащего материала являлась культуральная жидкость клеток линии Н9/НТЕУ-ШВ, хронически зараженных вирусом иммунодефицита человека ВИЧ-1 штамм (ЬА1).
Оценка мутагенной активности ФС-1 в тесте Эймса проводилась на 4 мутагенных (ауксотрофных по гистидину) штаммах 8а1топе11а ШурНутигшт: ТА 98, ТА 100, ТА 102 и ТА 1535 с метаболической
- 7 024595 активацией и без метаболической активации.
Изучение ДНК-повреждающей активности ФС-1 в кометном анализе ίη νίίτο проводилось на линии клеток мышиной лимфомы Б5178У и линии клеток человеческой гепатомы НерС2.
Исследование цитогенетической активности АБА проводилось путем учета хромосомных аберраций в лейкоцитах костного мозга млекопитающих ίη νίνο на мышах.
Исследование цитогенетической активности АБА проводили с помощью микроядерного теста в полихроматических и нормохроматических эритроцитах костного мозга мышей ίη νίνο.
Изучение доминантных летальных мутаций в сперматозоидах у млекопитающих ίη νίνο при введении лекарственного средства ФС-1 проводили на мышах.
Большинство представленных в описании изобретения примеров, иллюстрирующих эффективность действия АБА в отношении патогенных микроорганизмов, включая музейные и клинические штаммы с множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ) микобактерий туберкулёза, относится к лекарственному средству на основе АБА по примеру 5 (ФС-1), без ограничения ими.
Эксперименты по изучению радиопротекторных свойств лекарственного средства АБА ФС-1 выполнены на белых крысах массой тела 190-200 г и белых мышах массой тела 22-25 г. В опытах с облучением животных подвергали однократному равномерному радиационному воздействию на терапевтической рентген-установке РУМ-17 (180 кВ, 10 мА, фильтры 0,5 мм Си + 1,0 А1, фокусное расстояние 40 см, мощность дозы облучения 178 Р/мин) в дозах 800 Р (доза радиации, близкие к ЛД50).
Индукция миелосупрессии АБА ФС-1 проводили по методу |Οα1οναη А.А., ΚοίΌεΙιΚίη ЬТ, КуЬа1к1иа Ε.Τ, Ρανίονα О.У., ЗаЬигша Ι.Ν., 2ага18к1 Ε.Ι., ОаКуап Ν.Α., ΩανΙναη Т.К., Веζ^^даηуаη К.В., Кеνίδΐιείιίη Α.ν. НуροίЬа1ат^с ргоПпе-пск рο1урерί^άе епкапсе8 Ьοηе тагго\у Μ1οην-Γοηηίη8 се11 ргоПГега1юп апб 81гота1 ргодешЮг се11 б^ΓΓе^еηί^аί^οη // Се11 Тгап8р1ап1а1юп. - 2008. - νο1. 17. - Ρ. 1061-1066].
Забор периферической крови и костного мозга животных проводился по методике ^ζίΓ^αηναη К.В., Оау!уап Т.К., Оа1οуаη А.А. НуροίЬа1ат^с ргоПпе г1сН ρο1уρеρί^бе геди1а!е8 Ьетаίορο^е8^8 // №игоскет. Кее. - 2010. - νο1. 35. - Ρ. 917-924. Гершанович М.Л., Пайкин М.Д. Симптоматическое лечение при злокачественных новообразованиях. 2-е изд. - Москва: Медицина, 1986. - 285 с].
Оценку миелосупрессии проводили с помощью подсчета абсолютного и относительного содержания лейкоцитов, лимфоцитов и моноцитов периферической крови с использованием автоматического гематологического анализатора Се11у ν 2.20, Нусе1 Οία§ηο8ίΚ8.
Оценку восстановления кроветворной функции костного мозга проводили с помощью клоногенного теста [Веζ^^даηуаη К.В., Эа\1уап Т.К., ОаЪуап А.А. НуροίЬа1ат^с ргоПпе г1сН ρο1уρеρί^бе теди1а1е8 Ьетаίορο^е8^8 // №игосЬет. Ке8. - 2010. - νο1. 35. - Ρ. 917-924] путем определения количества гранулоцит-моноцит колониеобразующих (КОЕ-ГМ или СРИ-ОМ) клеток-предшественников костного мозга. С этой целью клетки костного мозга культивировали в среде Мебюсиб™ ОР К3774, содержащей метилцеллюлозу и факторы роста клеток-предшественников (8!ет се11 ГасЮг, ОМ-С8Р апб 1Ь-3) §1етСе11 ТесЬηο1οд^е8 1пс (са! № 03774).
Пример № 1 ФС-1.1.
Синтез АБА проводят в лабораторном реакторе фирмы ΟνΡ ΕNОINΕΕКINО ОМВН 0-55122 Μαίηζ тип КиЬтдеГаВ 2Ь при постоянном перемешивании. Температура поддерживается термостатом фирмы НиЬег тнЙ81а1 230 СС2. В 500 мл воды растворяют 130 г карбогидрата при температуре 50°С. Далее приливают 3,0 г натрия хлорида и 1,98 г кальция хлорида растворённых, в 100 мл воды. Смесь хорошо перемешивают и охлаждают до 43°С (продукт А).
5,0 г альбумина растворяют в 150 мл воды и добавляют 3,96 г лития хлорида, 8,4 г хлорида магния и 2,0 г натрия хлорида (продукт Б). 135 мл полученного раствора вводят в реактор. Реакционная смесь перемешивается 20 мин, после чего температуру раствора снижают до 25°С.
В 100 мл воды растворяют 0,82 г Ι2 и 1,2 г калия йодида (продукт В). 70 мл полученного раствора приливают порциями в реактор. Интеркаляцию йода проводят в течение 2 ч при температуре 25°С, после чего прибавляют оставшиеся 15 мл Продукта В. через 1 ч в реактор порциями вводят оставшиеся 30 мл продукта В и завершают интеркаляцию йода в течение 2 ч.
Ионная сила раствора составляет 13,6.
Образовавшийся ионный наноструктурированный комплекс АБА выделяют из реакционной среды приемлемым методом, например методом центробежной хроматографии на установке КготаЮп РСРС (Ра8! СеиШГида! СЬготаЮдгарку) и высушивают (фиг. 10а).
- 8 024595
Результаты анализа.
Пример № 2 ФС-1.2.
Синтез АБА проводят в лабораторном реакторе фирмы ОУР ΕΝΟΡΝΕΕΚ.ΙΝΟ СМВН Ό-55122 Μαίηζ тип РиНгдсГаВ 2Ь при постоянном перемешивании. В 500 мл воды растворяют 108,3 г декстрана при температуре 45°С. Температура поддерживается термостатом фирмы 1шЪег тиийа! 230 СС2. Далее приливают 2,5 г ПВС, растворённого в 150 мл воды, 4,00 г натрия хлорида и 1,65 г кальция хлорида растворённых в 100 мл воды. Смесь хорошо перемешивают и охлаждают до 43°С (продукт А).
4,17 г альбумина растворяют в 150 мл воды и добавляют 3,3 г лития хлорида, 7,0 г хлорида магния и 0,17 г натрия хлорида. Полученный раствор переносят в реактор после достижения температуры Продукта А требуемого значения, указанного выше. Смесь перемешивается 20 мин, после чего температуру реакционной зоны снижают до 25°С (продукт Б).
В 100 мл воды растворяют 2,0 г Ι2 и 3,0 г калия йодида. Полученный раствор приливают порциями в раствор комплексного соединений (продукт В). Интеркаляцию йода проводят в течение 4 ч при температуре 25°С.
Ионная сила раствора составляет 13,2.
Образовавшийся ионный наноструктурированный комплекс АБА выделяют из реакционной среды приемлемым методом и высушивают, (фиг 10б).
Результаты анализа.
Пример № 3 ФС-1.3.
Синтез АБА проводят в лабораторном реакторе фирмы ОУР ΕΝΟΙΝΕΕΚΡΝΟ ОМВН Ό-55122 Μαίηζ тип КийгдеГаВ 2Ь при постоянном перемешивании. В 600 мл воды гидролизуют 72,0 г карбогидрата при температуре 60°С. Температура поддерживается термостатом фирмы йиЪег ιηίηίδίαΐ 230 СС2. Далее приливают 1,7 г ПВС, растворённого в 100 мл воды, 2,8 г натрия хлорида и 1,1 г кальция хлорида растворённых в 100 мл воды. Смесь хорошо перемешивают и охлаждают до 43°С (продукт А).
2,8 г альбумина растворяют в 100 мл воды и добавляют 2,2 г лития хлорида, 4,66 г хлорида магния, 0,8 г натрия хлорида. Полученный раствор переносят в реактор после достижения температуры продукта А требуемого значения, указанного выше. Смесь перемешивается в 20 мин (продукт Б), после чего температуру реакционной зоны снижают до 25°С.
Ионная сила раствора составляет 10,8.
В 100 мл воды растворяют 4,1 г Ι2 и 6,0 г калия йодида. Полученный раствор приливают порциями в раствор комплексного соединений (продукт Б). Интеркаляцию йода проводят в течение 4 ч при температуре 25°С.
Образовавшийся ионный наноструктурированный комплекс АБА выделяют из реакционной среды приемлемым методом и высушивают (фиг. 10в).
Результаты анализа.
- 9 024595
Пример № 4 ФС-1.4.
Синтез АБА проводят в лабораторном реакторе фирмы ЦУЕ ΕΝΟΙΝΕΕΚΙΝΟ ΟΜΒΗ Ό-55122 Μαίηζ тип КийгдеГаВ 2Ь при постоянном перемешивании. В 550 мл воды гидролизуют 72,0 г карбогидрата при температуре 100°С. Температура поддерживается термостатом фирмы йиЪег т1Ш51а1 230 СС2. Далее приливают 1,7 г ПВС, растворённого в 250 мл воды, (продукт А). Смесь перемешивается в течение 20 мин, после чего температуру реакционной зоны снижают до 25°С.
В 200 мл воды растворяют 4,1 г Ι2 и 6,0 г калия йодида. Полученный раствор приливают порциями в раствор комплексного соединения (продукт Б). Интеркаляцию йода проводят в течение 4 ч при температуре 25°С.
Образовавшийся ионный наноструктурированный комплекс АБА выделяют из реакционной среды приемлемым методом и высушивают (фиг. 10г).
Ионная сила раствора составляет 3,02.
Результаты анализа.
Карбогидрат ПВС Ь ΚΙ
Мольные доли, % 29,67 66,45 3,78 0,10
Пример № 5 ФС-1.
Синтез АБА проводят в лабораторном реакторе фирмы ЦУЕ ΕΝΟΙΝΕΕΚΙΝΟ ΟΜΒΗ Ό-55122 Μαίηζ тип КийгдеГаВ 2Ь при постоянном перемешивании. В 500 мл воды при 43°С растворяют 130 г смеси амилозы и амилопектина в соотношении (1:4). Температура поддерживается термостатом фирмы йиЪег ιηίηίκίαΐ 230 СС2. Далее приливают 3,0 г ПВС, растворённого в 150 мл воды, 4,5 г натрия хлорида и 2,0 г кальция хлорида, растворённых в 100 мл воды, (продукт А).
5,0 г альбумина растворяют в 150 мл воды и добавляют 4,0 г лития хлорида, 8,4 г хлорида магния, 0,5 г натрия хлорида. Полученный раствор переносят в реактор. Смесь перемешивается 20 мин, после чего температуру реакционной зоны снижают до 25°С (продукт Б).
В 100 мл воды растворяют 8,2 г Ι2 и 12,1 г калия йодида. Полученный раствор приливают порциями в раствор комплексного соединения (продукт В). Интеркаляцию йода проводят в два этапа, как описано в предыдущих примерах.
Образовавшийся ионный наноструктурированный комплекс АБА выделяют из реакционной среды приемлемым методом и высушивают (фиг. 11).
Ионная сила раствора составляет 20,60.
Результаты анализа:
Пример № 6 ФС-1.5.
Синтез АБА проводят в лабораторном реакторе фирмы ЦУЕ ΕΝΟΙΝΕΕΚΙΝΟ ΟΜΒΗ Ό-55122 Μαίηζ тип КийгдеГаВ 2Ь при постоянном перемешивании. В 500 мл воды гидролизуют 24,1 г карбогидрата при температуре 80°С до определённой молекулярной массы. Температура поддерживается термостатом фирмы йиЪег т1Ш51а1 230 СС2. Далее приливают 2,8 г ПВС, растворённого в 150 мл воды. Смесь хорошо перемешивают и охлаждают до 43°С (продукт А).
В 100 мл воды растворяют 34,0 г Ι2 и 50,5 г калия йодида. Полученный раствор приливают порциями в раствор комплексного соединения (продукт Б). Интеркаляцию йода проводят в два приёма в течение 4 ч при температуре 25°С.
Образовавшийся ионный наноструктурированный комплекс АБА выделяют из реакционной среды приемлемым методом и высушивают (фиг. 10д).
Ионная сила раствора составляет 25,3.
- 10 024595
Результаты анализа.
Карбогидрат ПВС Е ΚΙ
Мольные доли, % 0,16 0,02 30,50 69,32
[8Д ·1488ί2]·λ3
Пример № 7 ФС-1.6.
Синтез АБА проводят в лабораторном реакторе фирмы СУР ΕΝΟΙΝΕΕΚΙΝΟ ОМВН Ό-55122 Μαίηζ тип КиЬгдеГаВ 2Ь при постоянном перемешивании. В 500 мл воды гидролизуют 24,1 г карбогидрата до необходимой молекулярной массы при температуре 100°С. Температура поддерживается термостатом фирмы 1шЬсг ιηίηΜαΙ 230 СС2. Далее приливают 2,8 г ПВС, растворённого в 150 мл воды, 0,8 г натрия хлорида и 0,37 г кальция хлорида, растворённых в 100 мл. Смесь хорошо перемешивают и охлаждают до 43°С (продукт А).
0,93 г альбумина растворяют в 150 мл воды и добавляют 0,73 г лития хлорида, 1,55 г хлорида магния, 0,13 г натрия хлорида. Полученный раствор переносят в реактор после достижения температуры продукта А требуемого значения, указанного выше. Смесь перемешивается 20 мин (продукт Б), после чего температуру реакционной зоны снижают до 25°С.
В 100 мл воды растворяют 34,0 г Ι2 и 50,5 г калия йодида. Полученный раствор приливают порциями в раствор комплексного соединения (продукт В). Интеркаляцию йода проводят в два этапа в течение 4 ч при температуре 25°С.
Образовавшийся ионный наноструктурированный комплекс АБА выделяют из реакционной среды приемлемым методом и высушивают (фиг. 10е).
Ионная сила раствора составляет 27,9.
Результаты анализа.
Пример № 8 ФС-1.7.
Синтез АБА проводят в лабораторном реакторе фирмы СУР ΕΝΟΙΝΕΕΚΙΝΟ ОМВН Ό-55122 Μαίηζ тип КиЬгдеГаВ 2Ь при постоянном перемешивании. В 500 мл воды растворяют 130,0 г декстрина и 3,0 г ПВС при температуре 50°С. Температура поддерживается термостатом фирмы 1шЬег ιηίηΜαΙ 230 СС2. Далее приливают 4,0 г натрия хлорида и 2,0 г кальция хлорида, растворённых в 100 мл воды. Смесь хорошо перемешивают и охлаждают до 43°С (продукт А).
5,0 г альбумина растворяют в 150 мл воды и добавляют 4,0 г лития хлорида, 8,4 г хлорида магния, 1,0 г натрия хлорида. Полученный раствор переносят в реактор после достижения температуры продукта А требуемого значения, указанного выше. Смесь перемешивается 20 мин (продукт Б), после чего температуру реакционной зоны снижают до 25°С.
В 100 мл воды растворяют 08,2 г Ι2 и 12,1 г калия йодида. 70 мл полученного раствора приливают порциями в раствор комплексного соединений (продукт В). Интеркаляцию йода проводят в течение 4 ч при температуре 25°С.
В 150 мл воды растворяют 0,6 г ИЛ-2 и медленно добавляют в реактор. Через 30 мин после окончания загрузки ИЛ-2 в реактор добавляют 30 мл продукта В. Образовавшийся ионный наноструктурированный комплекс АБА выделяют из реакционной среды приемлемым методом и высушивают (фиг. 10ж).
Ионная сила раствора составляет 20,60.
- 11 024595
Результаты анализа.
Пример № 9 ФС-1.8.
Синтез АБА проводят в лабораторном реакторе фирмы ОУР ΕΝΟΙΝΕΕΚΡΝΟ СМВН Ό-55122 Μαίηζ тип РиНгдсГаВ 2Ь при постоянном перемешивании. В 100 мл воды гидролизуют 13,1 г карбогидрата при температуре 130°С. Температура поддерживается термостатом фирмы 1шЬег ш1П181а1 230 СС2. Далее приливают 3,0 г ПВС, растворённого в 150 мл воды, 0,3 г натрия хлорида и 0,2 г кальция хлорида, растворённых в 100 мл.
Смесь хорошо перемешивают и охлаждают до 43°С (продукт А).
0,51 г альбумина растворяют в 150 мл воды и добавляют 0,4 г лития хлорида, 0,84 г хлорида магния, 0,2 г натрия хлорида. Полученный раствор переносят в реактор после достижения температуры продукта А требуемого значения, указанного выше. Смесь перемешивается 20 мин (продукт Б), после чего температуру реакционной зоны снижают до 25°С.
В 500 мл воды растворяют 74,5 г Ι2 и 110,0 г калия йодида. Полученный раствор приливают порциями в раствор комплексного соединений (продукт В). Интеркаляцию йода проводят в два приёма в течение 4 ч при температуре 25°С.
Образовавшийся ионный наноструктурированный комплекс АБА выделяют из реакционной среды приемлемым методом и высушивают (фиг. 10з).
Ионная сила раствора составляет 56,3.
Результаты анализа.
В испытаниях на биологическую активность установлено, что АБА ФС-1 проявляет активность ίη νίίτο по отношению, как к клиническим изолятам, так и к контрольным штаммам МКБА и М88А. МИК антибактериального агента варьировали от 0,938 до 0,234 мг/мл.
Тест на синергизм с оксациллином показал снижение МИК обоих препаратов. Снижение составило с 256 до 64 мкг/мл для оксациллина и с 0,234 до 0,117 мг/мл для АБА ФС-1. Индекс ФИК для этого теста составил 0,75, что можно расценить как частичный синергизм между тестируемыми препаратами.
Тест на синергизм с цефамандолом показал снижение МИК обоих препаратов. Снижение составляло от 64 до 8 мкг/мл для цефамандола и от 0,469 до 0,234 мг/мл для АБА ФС-1. Индекс ФИК для данного теста 0,62, что определяет взаимодействие этих антибактериальных средств как частичный синергизм.
Тест на синергизм с линкомицином показал снижение МИК обоих препаратов. Снижение составляло от 64 до 8 мкг/мл для линкомицина и от 0,234 до 0,117 мг/мл для АБА ФС-1. Индекс ФИК для данного теста 0,625, что определяет взаимодействие этих антибактериальных средств как частичный синергизм.
АБА по примерам 1-9 (ФС-1.1 - ФС-1.8) обладает большей или меньшей бактерицидной активностью в отношении патогенных микроорганизмов различных классов (табл. 6). Наиболее приемлемым и эффективным, как следует из данных табл. 6, в отношении микобактерий туберкулёза является АБА по примеру 5 (ФС-1).
В результате исследовании антимикобактериального действия ФС-1 на М.1иЬегси1о515 Η37Κν, М.1иЬегси1о818 М8-115 с множественной лекарственной устойчивостью и М. Ьоуц было установлено, что при концентрациях препарата в разведениях 1:12,5; 1:25 и 1:50 наблюдалось полное подавление размножения микобактерий на протяжении всего срока регистрации.
Бактерицидную активность ФС-1 определяли ίη νίίτο микробиологическим методом двукратных серийных разведений в жидкой среде Школьниковой с последующим пересевом на среду Левенштейна- 12 024595
Иенсена. Установлено ίη νίΐτο бактерицидное действие ФС-1 в концентрациях от 1,750 до 0,0437 мг/мл в отношении полевых штаммов микобактерий, лекарственно устойчивых клинических изолятов и М.1иЬегси1о818 Η37Κν. Бактериостатическое действие ФС-1 наблюдается в концентрации от 0,0218 до 0,0109 мг/мл.
Бактерицидную активность ФС-1 ίη νίΐτο в концентрации 0,0437 мг/мл определяли в сочетании с противотуберкулезными препаратами 1-го рода с последующим пересевом на среду ЛевенштейнаИенсена в отношении музейного штамма М.1иЬегси1о818 Η37Κν и 8 мультирезистентных. В результате исследования выявлены с различными концентрациями противотуберкулезных препаратов 1 рода музейный чувствительный и мультирезистентные штаммы. Результаты представлены в табл. 7.
Как видно из табл. 7, после совместного действия ФС-1 с различными концентрациями противотуберкулезных препаратов рост мультирезистентных штаммов микобактерий туберкулеза не был обнаружен в опытных пробирках, т.е. штаммы были чувствительны ко всем концентрациям противотуберкулезных препаратов 1 рода по сравнению с музейным штаммом, где чувствительность наблюдалась как с ФС-1, так и без него.
Установлено ίη νίνο, что введение ФС-1 инфицированным морским свинкам в дозе 5 мг/кг уменьшало количество высеваемых микобактерий из легких инфицированных животных по сравнению с контрольной группой животных. АБА ФС-1 оказывает выраженное противовоспалительное действие на течение экспериментального туберкулеза морских свинок, повышая воздушность легочной паренхимы в два раза.
Ιη νίνο установлено, что совместное применение противотуберкулезных препаратов и ФС-1 в дозе из расчета 0,3 мл/кг на 21 сутки после начала лечения приводит к полному исчезновению туберкулезных изменений в органах животных, вне зависимости от типа резистентности заражающего штамма.
По результатам, представленных в табл. 8, видно, что в 3 группе отмечалось снижение количества туберкулезных поражений в легких и полное их исчезновение на 35 сутки после начала лечения. В 4 группе исчезновение туберкулезных очагов в легких и печени отмечалось на 28 сутки после начала лечения. В 5 группе исчезновение туберкулезных очагов в легких и печени отмечалось на 21 сутки после начала лечения.
В группах животных, зараженных мультирезистентным штаммом микобактерий, устойчивым к противотуберкулезным препаратам, наблюдались следующие результаты: в 6 группе отмечалось прогрессивное течение туберкулезной инфекции; в 7 группе исчезновение туберкулезных очагов в легких и печени отмечалось на 35 сутки после начала лечения; в 8 группе исчезновение туберкулезных очагов в легких и печени отмечалось на 21 сутки после начала лечения.
Лекарственное средство по примеру 5 (ФС-1) в сочетании с противотуберкулёзными препаратами как в группе животных, зараженных штаммом М.1иЬегси1о818 Η37Κν, так и в группе животных, зараженных мультирезистентным штаммом микобактерий, оказывает терапевтическое действие на течение туберкулезного процесса. Патологические изменения, характерные при туберкулезе, исчезают уже через 21 и 28 сутки соответственно (группы 4 и 7).
У животных в контрольной группе, не получавших никакого лечения, туберкулезный процесс перешел в генерализованную форму с поражением всех внутренних органов (группы 1 и 2).
Хотя любой механизм, предлагаемый для объяснения механизма действия комплексного соединения, не следует рассматривать как ограничительный, наиболее вероятно, что антимикробная активность АБА связана с а) структурой биологически активных карбогидратов и пептидов; б) окислительным действием молекулы йода как на клеточную оболочку, так и на клеточные структуры при диффузии активной субстанции через мембрану бактериальной клетки; в) галогенированием ДНК микроорганизмов;
г) индукцией интерферонов при воздействии комплексного соединения на иммунокомпетентные клетки;
д) активацией моноцитов-макрофагов и цитотоксических Т-лимфоцитов.
Изученные АБА по примерам 1-9 ίη νίίτο обладают большей или меньшей вирулицидной активностью в отношении вирусов гриппа, герпеса и иммунодефицита Н1У-1 (табл. 9-13).
При изучении антивирусного действия ФС-1 ίη νίίτο на суспензионных перевиваемых культурах клеток выявлена анти-ВИЧ активность ФС-1 в культуре клеток в отношении лабораторного штамма вируса ВИЧ-1 (ЬА1). Снижение показателей инфекционности вируса ВИЧ - содержания р24 и обратной ревертазы под действием препарата свидетельствует о вирусоцидном действии препарата на вирус иммунодефицита человека. Применение ФС-1 в дозах 0,188 и 0,094 мг/мл или азидотимидина в дозе 0,01 мг/мл приводило к значительному снижению показателя экстинции по сравнению с плацебо и, следовательно, к снижению содержания белка р24 вируса иммунодефицита человека (показатель инфекционности вируса) в 60 раз (табл. 12).
Применение ФС-1 в дозах 0,094 и 0,188 мг/мл приводило к снижению содержания обратной транскриптазы - (показателя инфекционности вируса) по сравнению с негативным контролем в 4,1 и 12,7 раз. При применении азидотимидина в качестве позитивного контроля в дозе 0,01 мг/мл этот показатель снижался только в 5 раз (табл. 13).
Выявлена антивирусная активность препарата ФС-1 в отношении вируса гриппа Α/ΡΡν/Κοδ^ν34 ίη νίίτο и ίη νίνο (табл. 14-16).
- 13 024595
Так, выживаемость цыплят, зараженных вирусом гриппа в дозе 100 ЭИД50/0,1 мл, после профилактического применения препарата ФС-1 в дозах 0,290 и 1,458 мг/кг составила 100%, а после профилактического применения ремантадина - 28±12,53%. Все контрольные цыплята, получившие физиологический раствор, погибли (100% летальность).
Исследования цитотоксичности и эффективности АБА по примерам 1-9 выявили три основных соединения, которые были исследованы на предмет острой токсичности. Токсикологические исследования проводились на лабораторных животных с соблюдением норм биоэтики (Руководство по содержанию и использованию лабораторных животных. Вашингтон: Ναΐίοηαΐ Лсайсту Рте88. 1996). Для установления параметров острой токсичности (ЬП50) АБА вводили энтерально и парентерально мышам и крысам.
Результаты острой токсичности трех АБА при энтеральном и парентеральном путях введения аутбредным мышам приведены в табл. 17 и 18.
Наименее токсичной оказалась субстанция АБА ФС-1. При энтеральном (внутрижелудочном) введении мышам и крысам ФС-1 летального эффекта достичь не удалось, поскольку максимальный объем вводимого лекарственного средства составлял 1 и 5 мл соответственно, при этом дозы составили 922 и 496 мг/кг соответственно. Макроскопическое исследование внутренних органов погибших животных позволило установить, что причина смерти, по-видимому, связана с нарушением гемодинамики, что косвенно подтверждается развитием у погибших животных диссеменирующего внутрисосудистого свертывания крови и сильной кровонаполненности внутренних органов. К концу 14 суток у выживших животных патоморфологические исследования не выявили каких-либо отклонений в структуре внутренних органов и тканей от контрольной группы. При этом значительных повреждений слизистых оболочек желудочно-кишечного тракта не выявлено. Коэффициент кумуляции (Ккум) составил 1,85, что по международной шкале оценки токсичности препаратов соответствует параметрам препаратов со слабовыраженным кумулятивным эффектом.
В дальнейшем было проведено исследование хронической токсичности на крысах и кроликах при внутрижелудочном способе введения в течение 60 и 30 дней восстановительного периода в дозах 5,0 мг/кг (доза соответствует 1/100 от МПД, определенной на крысах) и 50 мг/кг (доза соответствует 1/10 от МПД, определенной на крысах).
Хроническое введение лекарственного средства в дозе 5,0 мг/кг не вызывало отклонений от контрольной группы животных по динамике массы тела, соматическим, гематологическим, биохимическим показателям крови и мочи. Не отмечались также нарушения в сердечной деятельности. У всех животных сохранена нормальная макро- и микроструктура внутренних органов.
Хроническое введение лекарственного средства крысам и кроликам в дозе 50,0 мг/кг вызвало следующие токсические эффекты. Со стороны биохимических показателей крови наблюдалось незначительное увеличение активности печеночных ферментов: АлАт, АсАт и щелочной фосфатазы, а также компонентов азотного обмена: креатинина мочевины. У части животных обнаружено венозное полнокровие, гепатоциты с признаками дистрофических изменений в цитоплазме, в стенке желудка наблюдались точечные кровоизлияния не эрозивного характера. У отдельных животных встречался отек оболочки тонкой кишки. Изменения щитовидной железы у животных данной группы были очень разнообразны и индивидуальны. В целом, наблюдалось снижение функциональной активности щитовидной железы за счет появления крупных фолликул и уплощения эпителия. Однако проведенные исследования на 90 день эксперимента (30 сутки восстановительного периода) показали, что выявленные биохимические сдвиги и микроструктура изменения внутренних органов носят обратимый характер.
Репродуктивная токсичность исследовалась на мышах. Самкам до и во время беременности внутрижелудочно и внутримышечно вводили лекарственное средство по примеру 5. Результаты исследований представлены в табл. 19.
Установлено, что внутрижелудочное введение (до и после наступления беременности) не приводило к преждевременным родам у мышей даже при испытании препарата в высших дозах (100 мг/кг).
Исследование эмбриотоксичности проводили на эмбрионах курицы. Показано, что дозы АБА по примеру 5 до 12,5 мг/мл не оказывают патологического действия на развитие эмбрионов на различных стадиях.
В исследовании канцерогенной активности лекарственного средства по примеру 5 (ФС-1) использована батарея тестов, включавшая определение генотоксической активности в 808-хромотесте на штамме Е.соП Ес 1000 (РД Е 43); определение однонитевых разрывов ДНК и определение репаративного (внепланового) синтеза ДНК на клетках крови и культуре клеток рабдомиосаркоме в концентрациях от 1 до 2000 мкг/мл. Результаты исследований канцерогенной активности ФС-1 представлены в табл. 20. В использованных условиях испытанное ФС-1 не является индуктором 808-ответа в клетках тестерного штамма Е.сой Ес 1000(Р1Е43).
Выявлен негативный результат (отсутствие однонитевых разрывов ДНК) при воздействии 200, 300, 600 мкг/мл ФС-1.
Генотоксическая активность лекарственного средства по примеру 5 исследована в тесте индукции внепланового (репаративного) синтеза ДНК в клетках периферической крови донора. Показано, что в диапазоне концентраций 50, 100, 200 мкг/мл не обнаруживается стимуляция внепланового синтеза и с
- 14 024595 метаболической активацией и без нее.
В опытах как без метаболической активации, так и с метаболической активацией при проведении теста Эймса не было обнаружено никаких достоверных изменений в ростовой активности всех четырех исследованных мутагенных штаммов §а1шоие11а (НурНутипит под воздействием ФС-1 в сравнении с отрицательным контролем.
Причем подобное отсутствие эффекта на рост мутагенных штаммов было зарегистрировано и для его сравнительно высоких концентраций, таких как 1,0 и 2,0 мг/чашка. Следовательно, ФС-1 не обладает мутагенным действием в отношении ДНК ауксотрофных по гистидину штаммов 8а1топе11а (НурНутипит в тесте Эймса.
Анализ ДНК-повреждающего действия ФС-1 в отношении как клеток мышиной лимфомы Ь5178У, так и клеток человеческой гепатомы НерС2 не выявил достоверного повышения спонтанного образования кометной (хвостовой) ДНК в клетках данных линий. Более того, отсутствие индуцирующего влияния препарата на образование кометной (хвостовой) ДНК в цитоплазме обоих типов изученных клеточных линий было показано также и в присутствии метаболической активации ферментами печени мышей. Следовательно, лекарственное средство в исследуемом диапазоне концентраций, даже в таких значительных как 1,0 и 2,0 мг/мл, не оказывает повреждающего действия на ДНК эукариот в условиях ίη νίίτο, как в отсутствие, так и после его метаболической активации.
В табл. 21 представлены результаты исследований цитогенетической активности. Статистически достоверных различий в уровне лейкоцитов костного мозга с хромосомными аберрациями, а также количества и качества хромосомных аберраций в них под воздействием однократного введения ФС-1 в дозе 22 мг/кг массы животного не было обнаружено. Более того, многократное введение ФС-1 в дозе 8 мг/кг массы животного также характеризовалось отсутствием его воздействия как на количество, так и характер хромосомных аберраций в лейкоцитах костного мозга по сравнению с контролем (табл. 21).
Следовательно, ФС-1 в исследуемых дозах не оказывает повреждающего действия на ДНК эукариот в условиях ίη νίνο.
Представленные в табл. 22 данные показывают, что при однократном введении ФС-1 в дозе 22 мг/кг массы животного не наблюдается достоверного повышения как содержания полихроматических и нормохроматических эритроцитов костного мозга с микроядрами, так и количества микроядер в них. В дополнении к этому, многократное введение препарата в дозе 8 мг/кг массы животного также характеризовалось отсутствием его эффекта как на количество полихроматических и нормохроматических эритроцитов содержащих микроядра, так и на общее число микроядер в эритроцитах по сравнению с контролем (табл. 22).
Следовательно, лекарственное средство в исследуемых дозах не оказывает повреждающего действия на ДНК эукариот, в частности выброса части ДНК из ядра в виде микроядра, в условиях ίη νίνο в ходе их нормального развития.
Результаты эксперимента по изучению индукции ФС-1 доминантных летальных мутаций в зародышевых клетках продемонстрировали, что уровень постимплантационных потерь у животных, подвергавшихся воздействию лекарственного средства при его внутримышечном введении в дозе 22 мг/кг (опытная группа 1.1-1.3) массы животного, не изменялся по сравнению с контрольной группой (табл. 23).
Следовательно, ФС-1 при его введении в организм в исследуемых дозах не индуцирует развитие доминантных летальных мутаций в зародышевых клетках (зрелых спермиях, поздних и ранних сперматидах) млекопитающих в условиях ίη νίνο, т.е. не обладает мутагенной активностью в тесте доминантных летальных аллелей.
Результаты многочисленных экспериментов по анализу мутагенной активности ФС-1 на различных по чувствительности тест-системах как в условиях ίη νίίτο, так и ίη νίνο доказали, что препарат не обладает мутагенными свойствами даже в его значительных количествах. Это свидетельствует о том, что ФС-1 при своем взаимодействии с клетками эукариот, включая активно делящиеся и половые, которые принадлежат к категории особочувствительных, не оказывает на них ДНК-повреждающего и специфического мутагенного действия, т.е. не вызывает нарушений ДНК и/или дисфункций в нормальной реализации генетического аппарата.
В случае воздействия дозы ионизирующей радиации, а именно 800 Р, в группе мышей, получивших перед облучением 0,15 мл ФС-1, был получен определенный радиопротекторный эффект. Так, если в контрольной группе животных к концу 30 суток показатель выживаемости был равен 30%, а СПЖ 18,9±0,4 дней, то в опытной группе эти показатели составили соответственно 70% и 24,6±0,7 дней. Статистическая обработка полученных результатов (СПЖ) с помощью критерия Стьюдента показала достоверную разницу (30%) в отношении СПЖ (р<0,05).
В эксперименте на крысах при дозе в 800 Р к концу срока наблюдения выжило 26,7% крыс, а СПЖ данной группы составила 17,2±0,5 дней. У крыс, перед облучением в дозе 800 Р получивших внутрижелудочно 1,0 мл ФС-1, выживаемость составила 50%, а СПЖ удлинилась на 24% (21,3±0,8 дней) (фиг. 12). И в этом случае наблюдался определенный радиопротекторный эффект.
- 15 024595
Статистическая обработка полученных результатов (СПЖ) с помощью критерия Стьюдента показала достоверную разницу в отношении СПЖ (р<0,05). Сравнивая результаты экспериментов, можно сделать вывод, что ФС-1 обладает определенным радиопротекторным действием, которое проявляется при облучении животных в дозах, близких к полулетальной (ЛД50).
Согласно исследованиям УеШип (2000), йод был первым антиоксидантом при зарождении жизни на нашей планете, который сыграл огромную роль и в эволюции человека. Хорошо известно, что основным поражающим фактором радиации являются свободные радикалы, образующиеся в организме непосредственно после облучения (Васд, 1965; А1ехапйег, Васс.], 1974; НаШ^еИ, 1985, 1991). Антоксиданты, к которым относится йод, связывают свободные радикалы, препятствуя их взаимодействию с биомолекулами организма (Ыйток 1996; На11те11, 1985, 1991).
Эффективность терапевтического действия лекарственного средства на основе АБА по примеру 5 (ФС-1) установлена в клинических испытаниях на трёх группах добровольцев, больных мультирезистентным туберкулёзом лёгких (МОК) (табл. 24).
Первая группа (η=19) получала комплексную терапию противотуберкулезными препаратами ΙΙ ряда, а также АБА по примеру 5 в дозе 0,1 мл/кг массы тела. Вторая группа (η=17) принимала противотуберкулезные препараты ΙΙ ряда и плацебо в дозе 0,1 мл/кг массы тела, третья группа (η=19) принимала противотуберкулезные препараты ΙΙ ряда и ФС-1 в дозе 0,125 мл/кг массы тела. Все препараты назначались ежедневно, однократно.
Изучение безопасности лекарственного средства по показателям гемостаза (АПТВ (табл. 25), протромбиновый индекс (табл. 26), тромбиновое время (табл. 27), фибриноген в течение 1-го месяца комплексной терапии больных резистентными формами туберкулеза легких показало, что ФС-1 в применяемых дозах 0,1 и 0,125 мг/кг не оказывало влияния на свертываемость крови, кроме того, данные УЗИ щитовидной железы, полученные через месяц терапии, не выявили никакого рода изменений у испытуемых.
По тесту на определение лекарственной чувствительности микобактерий туберкулеза была доказана устойчивость на противотуберкулезные препараты (далее - ПТП) Ι ряда (изониазид (Н), рифампицин (К), этамбутол (Е), стрептомицин (§)). Больные были рандомизированы на 3 группы: 1 группа (основная) получала ПТП ΙΙ ряда (циклосерин (Сб), офлоксацин (ОГб), ПАСК (Рак), протионамид (РЮ), каприомицин (Ст)) + ФС-1 (0,1 мл/кг); 2 группа (основная) получала ПТП ΙΙ ряда (циклосерин (Сб), офлоксацин (ОГб), ПАСК (Рак), протионамид (Р!о), каприомицин (Ст)) + ФС-1 (0,125 мл/кг); 3 группа (контрольная) получала ПТП ΙΙ ряда (циклосерин (Сб), офлоксацин (ОГб), ПАСК (Рак), протионамид (РЮ), каприомицин (Ст)) + плацебо).
Средний возраст испытуемых составил 33,14±9,03 (лет), среди них мужчины составили 75,8%, женщины 24,2%. Среди клинических форм наиболее часто встречалась инфильтративная форма - 70,1%, реже - фиброзно-кавернозная - 28,2 %. Группы были однородными, достоверных различий по основным характеристикам не отмечалось.
Изучение предварительной терапевтической эффективности лекарственного средства свидетельствует, что конверсия мазка достоверно выше в основных группах начиная с 3-го месяца терапии, что доказывает эффективность применения ФС-1 в комбинированной терапии (табл. 28).
Данные, приведённые в табл. 29, также свидетельствует о том, что начиная с 3-го месяца терапии отрицательный посев наблюдается достоверно выше в основных группах, в сравнении с контрольной, что доказывает эффективность применения ФС-1 в противотуберкулезной терапии.
Классический метод посева мокроты на плотную среду (табл. 30) также свидетельствует о том, что у больных с устойчивой формой туберкулеза, получающих ФС-1 в комбинации с противотуберкулезными препаратами ΙΙ ряда, удельный вес бактериологического анализа с отрицательным результатом достоверно выше, в сравнении с контролем уже через два месяца терапии, которое прослеживается и через 3, 4 месяца.
Изменения рентгенологической картины больных с мультирезистентной формой (МОК) туберкулеза, получающих ФС-1 в комбинации с противотуберкулезными препаратами ΙΙ ряда, свидетельствуют о том, что уже через месяц терапии отмечалась положительная динамика достоверно выше, чем в контрольной группе (плацебо+ПТП ΙΙ ряда), т.е. раньше начинается рассасывание инфильтраций, уплотнение очагов, регрессия полостей распада (табл. 31).
Как видно из табл. 32, в основных группах наблюдается прибавка веса, тогда как в контрольной наоборот, снижение, причем через 3 месяца изменения массы тела достоверны в 1-й группе, в 3-й группе, и через 4 месяца - в 3-й группе.
Результаты ΙΙ фазы клинических испытаний доказывают эффективность применения ФС-1 в комбинированной противотуберкулезной терапии у больных с мультирезистентной формой туберкулеза.
- 16 024595
Таблица 1
Состав АБА
Пример № Соединение 12 г/л ΚΙ, г/л Карбогидрат, г/л Белок пвс, г/л ЫС1, г/л ШС1, г/л СаС12, г/л М§С12, г/л Ионная сила
Альбумин, г/л ИЛ-2 мг/л
1 ФС-1.1 0,82 1,2 130,0 5,0 — 3,0 3,96 5,0 1,98 8,4 13,6
2 ФС-1.2 2,0 3,0 108,3 4,17 — 2,5 3,3 4,17 1,65 7,0 13,2
3 ФС-1.3 4,1 6,0 72,0 2,8 — 1,7 2,2 2,8 1,1 4,66 10,8
4 ФС-1.4 4,1 6,0 72,0 — — 1,7 — — — — 3,02
5 ФС-1 8,2 12,1 130,0 5,0 — 3,0 4,0 5,0 2,0 8,4 20,60
6 ФС-1.5 34,0 50,5 24,1 — — 2,8 — — — — 25,3
7 ФС-1.6 34,0 50,5 24,1 0,93 — 2,8 0,73 0,93 0,37 1,55 27,9
8 ФС-1.7 8,2 12,1 130,0 5,0 0,6 3,0 4,0 5,0 2,0 8,4 20,60
9 ФС-1.8 74,5 110,0 13,1 0,51 — 3,0 0,4 0,5 0,2 0,84 56,3
Таблица 2
Выход комплекса Мд2+п413 -п6 в зависимости от избытка 12 по сравнению со стехиометрическим содержанием, %
Расчётный 78 86 94
Экспериментальный 74 82 93
Избыток 12 от 0 20 50
Таблица 3
Выход комплекса Са2+п513-п7 в зависимости от избытка 12 по сравнению со стехиометрическим содержанием
Расчётный 71 82 89
Экспериментальный 68 76 85
Избыток 12 от 0 20 50
Пространственные (длинны координационных связей (А)) и энергетические (энергии стабилизации ΔΕ, ккал/моль) характеристики комплексов Ι-ΐν
Таблица 4
I II III IV
П-1 2,93 2,96 2,97 2,80
Ν(Ο)-1 2,46 2,40 2,76 2,18
Ι-Ι 2,76 2,82 2,72 3,03
-ΔΕ 16,60 14,26 6,25 24,25
ЦТК50 и МНК для разных серий вещества ФС-1 на культуре клеток МЭСК после 72 ч инкубации
Таблица 5
Название препарата Разведения препарата
ЦТК50 МНК
ФС-1 1:20 1:80
АБА-1 1:50 1:100
АБА-2 1:800 1:3200
АБА-3 1:100 1:200
АБА-4 1:50 1:6400
АБА-5 1:1460 1:3200
АБА-6 1:5063 1:6000
АБА-7 1:565 1:1500
АБА-8 1:3637 1:6400
- 17 024595
Таблица 6
Бактерицидная активность в отношении микроорганизмов различных групп патогенности
Таблица 7
Результаты совместного действия лекарственного средства по примеру ряда чувствительных и мультирезистентных штаммов микобактерий туберкулеза
Препарат ФС-1 0,0437 мг/мл Штамм ы Концентрация противотуберкулезного препарата к
Н (мкг/мл) 5(мкг/мл) Е(мкг/мл) К(мкг/м л)
1,0 5,0 5,0 10,0 2,0 5,0 40,0
ФС-1 6* ч ч ч ч ч ч ч +-Н*
без ФС-1 У У У У У У У +++
ФС-1 1* ч ч ч ч ч ч ч +++
без ФС-1 У У У У У У У +++
ФС-1 7* ч ч ч ч ч ч ч +++
без ФС-1 У У У У У У У +++
ФС-1 510* ч ч ч ч ч ч ч
без ФС-1 У У У У У У У +++
ФС-1 516* ч ч ч ч ч ч ч +++
без ФС-1 У У У У У У У +++
ФС-1 517* ч ч ч ч ч ч ч +++
без ФС-1 У У У У У У У +++
ФС-1 518* ч ч ч ч ч ч ч +-н-
- 18 024595
Ч - чувствительный;
К - рифампицин;
Н - изониазид;
* - мультирезистентный штамм; 8 - стрептомицин;
Е - этамбутол;
+++ - сплошной рост.
Таблица 8
Туберкулезные поражения в органах морских свинок
№ группы Время после заражения (в днях) Время после начала лечения (в днях) Количество туберкулезных поражений в органах
Легкие Печень
1 группа Контрольные животные, зараженные М. 1иЬегси1о818 Н37Щ, 39 - 10 12
46 - 11 15
53 - 26 31
55 - 25 34
59 - 27 40
2 группа Контрольные животные, зараженные мультирезистентным штаммом микобактерий 39 - 14 11
46 - 13 14
53 - 18 14
57 - 27 31
60 - 30 42
3 группа Опытные животные, зараженные М. 1иЬегси1о513 Н17К, леченые птп 39 7 17 18
46 14 11 8
53 21 9 7
60 28 3 2
67 35 - -
4 группа Опытные животные зараженные М. 1иЪегси1о$1х Н37К,,· леченые препаратом ФС-1 39 7 11 13
46 14 10 9
53 21 4 7
60 28 - -
65 33 - -
5 группа Опытные животные, 39 7 16 7
46 14 6 5
- 19 024595
зараженные М. 1иЬегси1о.чгч Н^Ку леченые ПТПиФС-1 53 21 - -
60 28 - -
67 35 - -
6 группа Опытные животные, зараженные мультирезистентным штаммом микобактерий леченые ПТП 39 7 11 14
46 14 14 16
53 21 21 24
60 28 20 23
67 35 35 27
7 группа Опытные животные, зараженные мультирезистентным штаммом микобактерий леченые препаратом ФС-1 39 7 12 14
46 14 10 9
53 21 4 5
60 28 2 -
66 35 - -
8 группа Опытные животные, зараженные мультирезистентным штаммом микобактерий леченые ПТП и ФС-1 39 7 13 17
46 14 3 7
53 21 - -
60 28 - -
67 35 - -
Таблица 9
Титр гемагглютининов остаточного вируса гриппа
Название вещества Содержание веществ, мг/мл Разведения вируса Титр, ГАЕ
1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 И
ФС-1 0,188 -— — — — — — — — 0
0,094 ++++ ++++ — — — — — — 4
0,047 ++++ ++++ +444 — — — — — 8
АБА-1 5,0 ++++ ++++ +444 +4- — — — — 12
2,5 ++++ ++++ ++++ ++- — — — — 12
1,25 ++- — — — 24
АБА-2 0,31 — — -— 32
0,16 ++++ 44— — .— 48
0,08 ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++- _— _— 48
АБА-3 2,5 ++++ ++++ 4444- 4444 ++++ _— _— _— 32
1,25 -— — -— 32
ТТ“ГТ
0,63 ++- -— — 48
тттт
АБА-4 5,0 ++++ 44-- -— _— -— -— -— — 3
2,5 ++++ ++- — .— -— -— — _— 3
1,25 ++++ ++++ *— -— 64
АБА-5 0,2 ++++ ++++ 4444 44- — -— -— -— 12
0,1 ++++ 18 14 ++++ ++- — -— — — 12
0,05 ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++- -— -— 48
0,05 ++- -— -— -— 24
0,025 4+4+ +444 ++++ ++++ ++++ ++- — -— 48
0,01 ++++ ++++ ++++ -н-н- ++++ -н— -— -— 48
АБА-7 0,4 -— .— _— _— -— _— -— _— 0
0,2 _— .— _— _— .— _— -— — 0
0,1 -— -— -— -— -— -— — -— 0
АБА-8 0,06 ++++ +-Н-+ ++++ ++++ -— -— — -— 8
0,03 44+4 +4+4 4+4+ ++++ -— — .— -— 16
0,015 4+44 ++++ ++++ ++++ ++-- -— _— -— 24
Контроль вируса 4+44 +4+4 ++++ ++++ ++++ ++++ ++- -— 96
++++ - агглютинация 100% эритроцитов зонтик; +++ - агглютинация 75% эритроцитов;
++ - агглютинация 50% эритроцитов;
++ - агглютинация 25% эритроцитов;
- - отсутствие агглютинации.
- 20 024595
Таблица 10
Определение антивирусной активности ФС-1 в отношении вируса гриппа Л/РРУ/\УауЬп8е/78/Н7Ш в культуре клеток МОСК через 72 ч
Номер лунки Содержание активного вещества, мг/мл
0,038 0,019 0,009 0,005 0 (контроль клеток) 0(контроль вируса)
1 — ++- +++- — ++++
2 — — ++— +++- .— ++++
3 -— -— ++— +++- -— ++++
4 -— .— ++- +++- -— ++-+
- степень выраженности ЦПД;
++++ - выраженная дегенерация клеточного монослоя;
-----отсутствие дегенерации клеток.
Таблица 11
Определение антивирусной активности ФС-1 в отношении вируса простого герпеса 1-го типа штамм УюЮгу в культуре клеток ΚΌ через 72 ч
Номер лунки Содержание активного вещества, мг/мл
0,038 0,019 0,009 0,005 0 (контроль клеток) 0(контроль вируса)
1 ____* ++++ ++++ ++++ — ++++
2 — ++++ +++- ++++ -— ++++
3 -— ++- +++- ++++ _— ++++
4 .... +— +++- ++++ .... ++++
* - степень выраженности ЦПД;
++++ - выраженная дегенерация клеточного монослоя; -----отсутствие дегенерации клеток.
Таблица 12
Вирулицидный эффект ФС-1 на вирус иммунодефицита человека НГУ-1 (ΌΑΙ) (детекция в иммуноферментном анализе по белку р24)
Препарат Показатель экстинции
контроль вируса (п—6) 2,65517+0,76283
0,188 мг/мл ФС-1 (п=5) 0,04380+0,00086
0,094 мг/мл ФС-1 (п=5) 0,04660+0,000678
0,01 мг/мл азидотимидин (п=5) 0,04460+0,003187
Контроль клеток(п=5) 0,042+0,000400
Таблица 13
Вирулицидный эффект ФС-1 на вирус иммунодефицита человека ΗΙΥ-1 (ΌΑΙ) (детекция в иммуноферментном анализе по обратной транскриптазе)
Препарат Показатель экстинции
контроль вируса (п=5) 2,884+0,043052
0,188 мг/мл ФС-1 (п=5) 0,2274+0,004094
0,094 мг/мл ФС-1 (п=5) 0,7072+0,012464
0,01 мг/мл азидотимидин (п=5) 0,5724+0,005464
Контроль клеток(п=5) 0,2168+0,000583
Таблица 14
Определение антивирусной активности ФС-1 ίη νίΐτο в отношении вируса гриппа А/РРУЛУауЬп8е/78/Н7Ш в культуре клеток МОСК через 72 ч
Номер лунки Содержание активного вещества, мг/мл
0,038 0,019 0,009 0,005 0 (контроль клеток) 0 (контроль вируса)
1 — ++- +++- — ++++
2 — — ++- +++- — ++++
3 — — ++-- +++- — ++++
4 — _— ++- +++- -— ++++
* - степень выраженности ЦПД;
++++ - выраженная дегенерация клеточного монослоя; -----отсутствие дегенерации клеток.
- 21 024595
Таблица 15
Профилактическое действие препарата ФС-1 ίη νίνο на модели вируса гриппа штамм А/РРУ/Ко81оск/34
Препарат (доза на 1 кг массы) Общее количество цыплят Число выживших цыплят Число павших цыплят % выживания
Физиологический раствор 14 0 14 0
0,290 мг/кг ФС-1 14 14 0 100
1,458 мг/кг ФС-1 14 14 0 100
8,33мг/кг ремантадин 14 4 10 28,6+12,53
Таблица 16
Терапевтическое действие препарата ФС-1 ίη νίνο на модели вируса гриппа штамм А/РРУ/Ко81оск/34
Препарат (доза на 1 кг массы) Общее количество цыплят Число выживших цыплят Число павших цыплят % выживания
Физиологический раствор 14 0 14 0
0,290 мг/кг ФС-1 14 6 8 42,9+13,73
1,458 мг/кг ФС-1 14 14 0 100
8,33мг/кг ремантадин 14 6 8 42,9+13,73
Таблица 17
Параметры острой токсичности (ЬЭ50 мг/кг)
Пример Мыши Крысы
Энтеральный путь введения
АБА 330 243
АБА 579,25 360,5
АБА (ФС-1) Н.о. Н.о.
Парентеральный путь введения
АБА 65 48
АБА 106 75
АБА (ФС-1) 213 100
Н.о. - не определено.
Таблица 18
Результаты исследования кумулятивной токсичности ФС-1 на мышах
- 22 024595
Таблица 19
Результаты исследования эмбриональной токсичности АБА ФС-1
Результаты исследования канцерогенной активности ФС-1
Таблица 20
Наименование теста «Неэффективные» концентрации ФС-1, мкг/мл Токсические концентрации ФС-1
808-хромотест, Е.соП 1-1000 -
Однонитевые разрывы ДНК, клетки КО 200-600 1200-2000
Индукция внепланового (репаративного) синтеза ДНК, лимфоциты человека 50-200 400-800
Структурные нарушения хромосом в лейкоцитах костного мозга мышей при воздействии ФС-1
Таблица 21
Группа Тип хромосомных аббераций Νο(%) Μ±5ϋ
ΝΦ ΝΜ Μ±5ϋ Νπ Μ±5ϋ Νρπ Μ±8ϋ ΝΜ (%) Νπ« (%) Μ±5ϋ
^фод М±5О Νψπ М±5Э
3,67±1,0 0 0 0 0 0 0 1,33±Ο,52
Контрольная 1 3
Контрольная 2 3,ОО±О,8 9 0 0 0 0 0 0 1,67±0,47
Контрольная 3 6,00±1,2 б 4,17±0,75 ί,33±0,52 3,33±1,Ο3 1,83±0,40 5,ΟΟ±0,63 2,33±0,52 5,5Ο±2,17
Контрольная 4 7,17±1,4 7 3,67±0,81 ϊ,67±0,52 4,17±0,93 ϊ,67±0,82 8,ΟΟ±1,Ο9 ϊ,83±0,75 1,ό7±3,26
8 мг/кг 3,00±1,2 6 0 0 0 0 0 0 1,83±Ο?41
22 мг/кг 4,00±0,6 3 0 0 0 0 0 0 2,17±0,41
N Ф - количество фрагментов;
N ФОд - количество одиночных фрагментов;
N ФП - количество парных фрагментов;
N Об - количество обменов;
N П - количество пробелов;
N Рц - количество разрывов в центромере;
N М - количество клеток с множественными нарушениями; N Пд - количество клеток с полной деструкцией хромосом; N О - общее количество клеток с аберрациями.
- 23 024595
Структурные нарушения в полихроматических и нормохроматических костного мозга мышей при воздействии ФС-1
Таблица 22
Группа ΝΠχ3 (%) Μ±δϋ Νμπχ3 Μ±5ϋ ΝΗΧ3(%) Μ±3ϋ Νμηχο Μ±δΟ
Контрольная 1 0,18±0,08 2,67±1,37 0,05±0:05 0,67±0,82
Контрольная 2 0,25±0,10 3,17±0,98 0,07±0,05 0,83±0,75
Контрольная 3 4,48±0,67 93,83±11,87 0,98±0,13 21,67±2,94
Контрольная 4 6,43±0,80 123,00±8,51 1,38±0,15 28,83±3,19
8 мг/кг 0,30±0,11 3,50±1,38 0,07±0,05 0,83±0,75
22 мг/кг 0,37±0,12 4,50±1,38 0,10±0,06 1,33±1,03
N пхЭ - количество полихроматических эритроцитов с микроядрами в цитоплазме;
N МПХЭ - количество микроядер на 1000 полихроматических эритроцитов;
N МНХЭ - количество нормохроматических эритроцитов с микроядрами в цитоплазме;
N МНПХЭ - количество микроядер на 1000 нормохроматических эритроцитов.
Таблица 23
Изучения индуцирующего действия ФС-1 на развитие доминантных летальных мутаций в зародышевых клетках (сперматозоидах) мышей
Стадия сперматогенеза Группа Νο Νβο Р (%) 1пип Μ±5Ό
Зрелые спермин Контрольная 1.1 30 27 90,00 0,06±0,01
Контрольная 2.1 30 18 60,00 0,2ό±0,01
Опытная 1.1 30 23 76,67 0,08±0,02
Поздние сперматиды Контрольная 1.2 30 25 83,33 0,06±0,01
Контрольная 2.2 30 20 66,67 0,15±0,01
Опытная 1.2 30 27 90,00 0,07±0,01
Ранние сперматиды Контрольная 1.3 30 26 86,67 0,08±0,01
Контрольная 2.3 30 23 76,67 0,12±0,01
Опытная 1.3 30 27 80,00 0,06±0,01
N О - общее количество самок;
N БС - количество беременных самок;
Р - фертильность;
I пип - индекс постимплантационных потерь.
Таблица 24
Основные характеристики испытуемых
Параметры Испытуемое лекарственное средство, группы дозировок
ФС-1 0,1 мл/кг Плацебо 0,1 мл/кг ФС-1 0,125 мл/кг
1 2 3 4
Количество испытуемых 19 17 19
Средний возраст (стандартное отклонение) 32,5 ± 8,5 31,24 ±6,4 34,9 ± 10,9
1 2 3 4
Пол (% муж; % жен) 78,95 %; 21,05 % 70,59 %; 29,41% 78,95 %; 21,05 %
- 24 024595
Клинические формы (инфильтративный %; фиброзно-кавернозный %) 78,95 %; 21,05 % 70,59 %; 29,41% 78,95 %; 21,05 %
Распространенность процесса (односторонний %; двусторонний %) 55,5 %; 44,5 % 41,2 %; 58,8 % 68,4 %; 31,6 %
Распределение по продолжительности заболевания (до 1 года %; выше 1 года %) 66,70 %; 33,30 % 47,05 %; 52,95 % 42,10%; 57,89 %
Таблица 25
Сравнительные среднестатистические показатели АПТВ (с)
Точки 1 (основная) группа (п—12) 2(контрольная) группа (п—12) 3 (основная) группа (п=7)
М±т М±ш М±т
Исходная 40,15 ±8,01 43,31 ±7,10 43,63 ±4,22
1 месяц 43,83 ± 4,67 49,08 ± 8,56 29,29 ± 8,24
Таблица 26
Сравнительные среднестатистические показатели протромбинового индекса(%)
Точки 1 (основная) группа (п—12) 2(контрольная) группа (п=12) 3 (основная) группа (ч=7)
М± т М ± т М±т
Исходная 81,0 ±8,77 77,46 ± 8,28 82,13 ± 16,91
1 месяц 83,17± 8,36 87,69 ± 8,02 86,0 ± 13,14
Таблица 27
Сравнительные среднестатистические показатели тромбинового времени (с)
Точки 1 (осаовная) группа (п=12) 2 (контрольная) группа (п=12) 3 (основная) группа (п=7)
М ± т М ± т М± т
Исходная 16,1 ±4,06 16,34 ±2,44 21,88 ±5,06
1 месяц 19,58 ± 1,25 23,46 ± 2,88 24,43 ± 2,08
Статистически значимые различия с исходными показателями:
* р<0,05;
** р<0,01;
*** р<0,001.
Таблица 28
Динамика конверсии мазка (%)
* р<0,025; ** р<0,001.
- 25 024595
Сравнительные данные отсутствия роста колоний при посеве мокроты на жидкой среде (%)
Таблица 29
Группы 1 мес 2 мес 3 мес 4 мес 5 мес
1 группа 62,5 55 77,7* 82 100*
2 группа 40 55 81,3* 90* 100*
3 группа (контроль) 42,85 61,1 68,7* 80 88,8*
* р<0,025; ** р<0,001.
Сравнительные данные отсутствия роста колоний при посеве мокроты на плотной среде (%)
Таблица 30
Группы 1 мес 2 мес 3 мес 4 мес
1 группа 69,56 94,7* 100** 100**
2 группа 58,3 84,2* 100**
3 группа (контроль) 63,6 66,6* 75* 70**
* р<0,025;
** р<0,001.
Таблица 31
Сравнительные данные динамики рентгенологической картины
Группы 1 мес 2 мес 3 мес 4 мес 5 мес 6 мес
1 группа 80* 100*** 100*** 92,9** 92,3** 85,7*
2 группа 92* 100*** 93 3** 100***
3 группа (контроль) 63,2* 52 д*** 53,8*** 70** 62,5** 71,4*
* р<0,05;
** р<0,025; **** р<0,005.
Сравнительные среднестатистические показатели динамики массы тела в течение 1 месяца терапии
Таблица 32
Группы и ДОЗЫ ФС-1 0,1 мл/кг ФС-1 0,125 мл/кг плацебо
η М т п М ш η М ± т
исходная 28 59,04 ± 11,23 26 59,40 ± 9,95 26 57,85 ± 10,37
1 мес 21 59,57 ± 12,15 19 61,83 ± 10,51 19 57,96 ± 11,28
2 мес 20 61,77 11,29 17 57,34 11,15 17 57,34 ± 11,15
3 мес 16 63,1 ± 12,05* 15 64,19 ± 11,88* 14 54,56 ± 8,79
4 мес 11 59,89 ± 9,33 8 63,57 ± 10,72* ю 53,26 ± 6,87
5 мес 9 62,91 ± 9,41 - - - 8 54,86 7,93
* р<0,05;

Claims (16)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Способ получения антибактериального агента, который включает в себя реакцию комплексообразования карбогидратов, белков и/или полипептидов с солями щелочных и щелочно-земельных металлов, затем интеркаляцию йода в комплекс при ионной силе от 5-10-4 до 15 моль/л, при котором после интеркаляции 5-95% йода отдельной стадией дополнительно осуществляют введение иммунотропных белков, после чего осуществляют интеркаляцию остального количества йода.
  2. 2. Антибактериальный агент, полученный способом по п.1, который представляет собой ионный наноструктурированный комплекс, образованный белками и/или полипептидами, карбогидратами, солями щелочных и щелочно-земельных металлов и интеркалированным в них йодом, причем белки и/или полипептиды ионного наноструктурированного комплекса содержат по крайней мере одну концевую аминокислоту с электронодонорными функциональными группами.
  3. 3. Антибактериальный агент по п.2, который предназначен для лечения госпитальных инфекций и/или лекарственно устойчивого туберкулеза.
  4. 4. Антибактериальный агент по п.2 или 3, который содержит интерлейкины.
  5. 5. Антибактериальный агент по п.4, в котором концевыми аминокислотами являются РЬе, А1а, να1, А1а, Ьеи, Не.
  6. 6. Антибактериальный агент по любому из пп.2-5, который характеризуется способностью повышать чувствительность бактерий, в том числе антибиотикоустойчивых, к антибиотикам.
  7. 7. Антибактериальный агент по любому из пп.2-6, который характеризуется способностью повышать эффективность антибиотикотерапии инфекционных заболеваний бактериальной природы.
  8. 8. Антибактериальный агент по любому из пп.2-7, который характеризуется способностью повышать активность моноцитов-макрофагов и цитотоксических Т-лимфоцитов.
  9. 9. Антибактериальный агент по любому из пп.2-8, который характеризуется способностью стимулировать кроветворную функцию костного мозга.
  10. 10. Антибактериальный агент по любому из пп.2-9, который представляет собой ионный наноструктурированный комплекс формулы | !(Ι...(\ΚΙ;)4|\ΜΙ....)Ι|·..!((Ί)......·..| с М=3,0-300 кДа, где Ь- лиганд, представляющий собой карбогидрат, белок или полипептид, или ПВС;
    Ме - катион щелочного или щелочно-земельного металла;
    η, т, х, у, к - целые числа >1.
  11. 11. Антибактериальный агент по любому из пп.2-10 в форме для парентерального, перорального или наружного применения.
  12. 12. Применение агента, полученного способом по п.1, в качестве противовирусного средства.
  13. 13. Применение агента, полученного способом по п.1, в качестве противоопухолевого средства при комплексной лекарственной терапии опухолей.
  14. 14. Применение агента, полученного способом по п.1, в качестве радиопротекторного средства.
  15. 15. Применение агента, полученного способом по п.1, в качестве биологически активной добавки.
  16. 16. Применение агента, полученного способом по п.1, в качестве добавки к косметическим средствам.
EA201290002A 2010-12-30 2011-12-09 Антибактериальный агент для лечения инфекционных заболеваний бактериальной природы EA024595B1 (ru)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KZ20101816 2010-12-30

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201290002A1 EA201290002A1 (ru) 2012-09-28
EA024595B1 true EA024595B1 (ru) 2016-10-31

Family

ID=46383344

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201290002A EA024595B1 (ru) 2010-12-30 2011-12-09 Антибактериальный агент для лечения инфекционных заболеваний бактериальной природы

Country Status (19)

Country Link
US (3) US10149890B2 (ru)
EP (1) EP2722053B1 (ru)
JP (1) JP6041811B2 (ru)
CN (1) CN103442728B (ru)
CY (1) CY20142200001T2 (ru)
DE (1) DE11853027T1 (ru)
DK (1) DK2722053T3 (ru)
EA (1) EA024595B1 (ru)
ES (1) ES2476240T3 (ru)
HR (1) HRP20180075T1 (ru)
HU (1) HUE035149T2 (ru)
IL (1) IL227132B (ru)
LT (1) LT2722053T (ru)
NO (1) NO2722053T3 (ru)
PL (1) PL2722053T3 (ru)
RS (1) RS56687B1 (ru)
SG (1) SG192563A1 (ru)
SI (1) SI2722053T1 (ru)
WO (1) WO2012091534A1 (ru)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022126127A1 (en) * 2020-12-12 2022-06-16 Iocure, Inc. Iodine delivery compounds
CN114634762A (zh) * 2022-03-17 2022-06-17 东莞市人民医院 金属离子介导的蛋白质涂层、其制备方法及其应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2009117067A (ru) * 2009-05-04 2010-11-20 Некоммерческое партнерство по научной и инновационной деятельности "Томский атомный центр" (RU) Раневая повязка

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1066979A (zh) * 1991-05-20 1992-12-16 中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所 烧伤创面抗菌制剂的制备方法
US6777003B1 (en) 1995-06-07 2004-08-17 Cognis Corporation Iodine complex of alkyl polyglycosides
KZ6730B (ru) 1996-01-26 1998-11-16
DE29923848U1 (de) 1998-05-27 2001-04-12 Euroceltique S.A., Luxemburg/Luxembourg Präparate zur Anwendung von entzündungshemmenden, insbesondere antiseptischen Wirkstoffen und/oder die Wundheilung fördernden Wirkstoffen in den oberen Atemwegen und/oder dem Ohr
CZ295765B6 (cs) 1998-07-29 2005-10-12 Apa - Praha, S.R.O. Léčebný přípravek s virucidním účinkem
RU2157405C2 (ru) 1998-12-11 2000-10-10 Тверская государственная медицинская академия Способ получения иммобилизованных ферментов с помощью реакции комплексообразования с молекулярным йодом и йодидом калия
WO2001078751A1 (en) * 2000-04-17 2001-10-25 'armenicum+' Jsc Antiviral and antibacterial pharmaceutical preparation 'armenicum' and its use for treatment of infectious diseases
AM949A2 (ru) 2000-04-17 2001-06-10 Armenicum & Jsc
CN1162399C (zh) * 2001-04-28 2004-08-18 曾雄飞 氨基酸碘络合物
KZ15116A (ru) * 2002-11-08 2004-12-15
WO2004096180A1 (en) * 2003-04-29 2004-11-11 Baxter International Inc. Formulation to render an antimicrobial drug potent against organisms normally considered to be resistant to the drug

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2009117067A (ru) * 2009-05-04 2010-11-20 Некоммерческое партнерство по научной и инновационной деятельности "Томский атомный центр" (RU) Раневая повязка

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DATABASE, GenBank, AAA59134, 06.01.1995, [найдено 24.04.2012], Найдено из Интернет: URL:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/AAA59134.1 *
ГИСМАТОВ Р.Х. и др., Беталейкин в сопроводительной терапии больных туберкулезом легких. Журнал "Цитокины и воспаление", 2008, № 1, т. 7, с. 59-63, [найдено 25.04.2012]. Найдено из Интернет: URL:http://www.cytokines.ru/2008/1/Art12.php, с. 1-2 *

Also Published As

Publication number Publication date
IL227132B (en) 2019-01-31
CN103442728A (zh) 2013-12-11
LT2722053T (lt) 2017-12-11
HRP20180075T1 (hr) 2018-02-23
NO2722053T3 (ru) 2018-03-24
SI2722053T1 (en) 2018-02-28
US10251939B2 (en) 2019-04-09
DE11853027T1 (de) 2014-09-11
PL2722053T3 (pl) 2018-04-30
US20190134157A1 (en) 2019-05-09
EP2722053A4 (en) 2014-09-03
CN103442728B (zh) 2017-04-12
JP6041811B2 (ja) 2016-12-14
ES2476240T3 (es) 2018-03-06
CY20142200001T2 (el) 2016-06-22
WO2012091534A1 (ru) 2012-07-05
DK2722053T3 (da) 2017-11-20
US20150374837A1 (en) 2015-12-31
US10149890B2 (en) 2018-12-11
RS56687B1 (sr) 2018-03-30
JP2014502616A (ja) 2014-02-03
EP2722053B1 (en) 2017-10-25
ES2476240T1 (es) 2014-07-14
HUE035149T2 (en) 2018-05-02
SG192563A1 (en) 2013-09-30
US20140010782A1 (en) 2014-01-09
EA201290002A1 (ru) 2012-09-28
EP2722053A1 (en) 2014-04-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
BR112020017090A2 (pt) Imunoterapias relacionadas com microbioma
JP2001527541A (ja) ヒト免疫不全ウイルスおよびその他感染性疾患の抗菌予防と治療
EP1948196A2 (de) Verwendung von tetraorganosilizium-verbindungen
KR19990036138A (ko) 암 성장을 억제하기 위한 플루코나졸의 용도
KR19990036137A (ko) 암 성장을 억제하기 위한 그리세오풀빈의 용도
US20020068761A1 (en) Gallium complexes of 3-hydroxy-4-pyrones to treat mycobacterial infections
US20190134157A1 (en) Antibacterial agent for treating infectious diseases of bacterial origin
DE60032915T2 (de) Gallium komplexe von 3-hydroxy-4-pyronen zur behandlung von durch intrazelluläre prokaryoten, dns- und retro-viren verursachten infektionen
WO2002005850A2 (en) Enhancement of the action of anti-infective agents
EP3570860B1 (en) Anticancer heterobasidion annosum extract, compositions and uses thereof
JP2014502633A (ja) 抗ウイルス剤
US20130336990A1 (en) Enhancement of the action of anti-infective agents and of central and peripheral nervous system agents and transportation of nucleic acid substances
KR20030069910A (ko) 암치료제
ES2953032T3 (es) Métodos ex vivo para la activación de las células inmunológicas
RU2444358C1 (ru) Антиоксидантная и иммуностимулирующая композиция
JP6370634B2 (ja) 男性不妊症の予防乃至治療薬、及び食品乃至飼料
EP0306377A1 (fr) Nouvelles compositions d&#39;éléments minéraux et/ou oligoéléments et leur procédé de préparation
JPH01313433A (ja) 抗ｈｉｖ剤
RU2406518C1 (ru) Противотуберкулезное композиционное средство
US20220387346A1 (en) Compositions and methods comprising deoxy-pentitols
RU2292892C2 (ru) Иммуномодулирующее лекарственное средство (варианты)
JPH0220613B2 (ru)
RU2316321C1 (ru) Противовирусное средство для системного применения
PL240524B1 (pl) Nanokoniugat diglicynowej pochodnej [60]fullerenu z gemcytabiną, sposób jego otrzymywania oraz jego zastosowanie.
SK1202022A3 (sk) Nanoformulácie striebra na terapiu zápalových a degeneratívnych ochorení mäkkých a pevných tkanív

Legal Events

Date Code Title Description
PD4A Registration of transfer of a eurasian patent in accordance with the succession in title
QB4A Registration of a licence in a contracting state