ES2953032T3 - Métodos ex vivo para la activación de las células inmunológicas - Google Patents

Abstract

Se proporciona un método para activar células inmunitarias y/o una respuesta del sistema inmunitario en un sujeto. El método puede comprender administrar a un sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula (I): o un profármaco, derivado y/o sal del mismo. En algunas realizaciones, el método comprende poner en contacto una célula inmune con un compuesto de Fórmula (I) o un profármaco, derivado y/o sal del mismo. También se proporcionan compuestos, composiciones y kits para activar células inmunitarias y/o una respuesta del sistema inmunitario en un sujeto. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Métodos ex vivo para la activación de las células inmunológicas

Campo de la invención

La presente divulgación se refiere a compuestos, composiciones, kits y métodos ex vivo para activar células inmunitarias y/o una respuesta del sistema inmunitario en un sujeto que usa una prostaglandina-etanolamida de la serie J y/o una sal de la misma. La invención se refiere a un método ex vivo de activación de una célula inmunitaria que comprende poner en contacto una célula inmunitaria con un compuesto de fórmula (I), fórmula (II) y/o una sal de los mismos para proporcionar una célula inmunitaria modificada genéticamente, como se define en las reivindicaciones. La invención también se refiere a una célula inmunitaria modificada genéticamente proporcionada por dicho método ex vivo.

Antecedentes de la invención

La 15desoxi, A12,14 prostaglandina J2 (15dPGJ2-EA; véase la Patente de los Estados Unidos No. 9,328,060) es una molécula novedosa que ha mostrado actividad citotóxica en varios tipos de cáncer. Se ha determinado que 15dPGJ2-EA provoca preferentemente la muerte celular en las células tumorales en comparación con las células no tumorales y que esta preferencia se inicia a través de la inducción del estrés del retículo endoplásmico (ER). Ladin et al. (Molecular cancer therapeutics, vol.16, no.5, páginas 838-849), Patsos et al. (Gut Microbiota, vol.54, no.12, páginas 1741-1750), la Solicitud de la Patente Europea No. EP0172963 de Ono Pharmaceutical Co. Ltd. y la Solicitud de la Patente de los Estados Unidos No. US2015/111969 de East Carolina University describen las prostaglandinas y su actividad. Rujkijyanont et al. divulgan en Cancer Res., 73(8), 2013, 2608-2618 la activación ex vivo de células inmunitarias que pueden usarse para tratar el neuroblastoma.

El retículo endoplásmico (ER) es un orgánulo que es el principal responsable del plegamiento de proteínas. El estrés del ER ocurre cuando la demanda de plegamiento de proteínas excede la capacidad de las células para plegar proteínas, lo que lleva a una acumulación en proteínas desplegadas o mal plegadas. En respuesta a la acumulación de proteínas malformadas, la célula intenta aliviar el estrés o inicia la muerte si el estrés celular total es insuperable. Sumario de la invención

La invención reivindicada está definida por las reivindicaciones adjuntas. Un primer aspecto de la presente invención se refiere a un método ex vivo de activación de células inmunitarias, comprendiendo el método poner en contacto una célula inmunitaria con un compuesto de fórmula (I), fórmula (II) y/o una sal de los mismos:

para proporcionar una célula inmunitaria modificada genéticamente.

Estos y otros objetos y/o aspectos de la presente invención se explican en detalle en la memoria descriptiva que se expone a continuación. Los expertos en la materia apreciarán otras características, ventajas y detalles adicionales de la presente invención a partir de la lectura de las figuras y la descripción detallada de las realizaciones preferidas que siguen, siendo dicha descripción meramente ilustrativa de la presente invención que se define por las reivindicaciones.

Breve descripción de los dibujos

La figura 9 es según la invención; las otras figuras son para referencia.

La figura 1 es un gráfico que muestra la fluorescencia media (porcentaje de no tratadas) para la expresión de calreticulina en la superficie celular después de la exposición (de izquierda a derecha) a vehículo, oxaliplatino y 15d-PMJ25 μM.

La figura 2 es un gráfico de la cantidad de ATP extracelular liberado (en comparación con el no tratado) 4 horas después de la exposición (de izquierda a derecha) a vehículo, oxaliplatino y 15d-PMJ25 j M.

La figura 3 es un gráfico de la cantidad de ATP extracelular liberado (en comparación con el no tratado) después de la exposición (de izquierda a derecha) a vehículo, inhibidor de estrés ER (I) (GSK₂65615), oxaliplatino, inhibidor oxaliplatino, 15dPMJ2, inhibidor 15dPMJ2.

La figura 4 es un gráfico que muestra la fluorescencia media (porcentaje de no tratadas) para la expresión de calreticulina en la superficie celular después de la exposición (de izquierda a derecha) a vehículo, Brefeldin A (BFA), 15d-PMJ2 y 15dPMJ2 BFA.

La figura 5 es un gráfico que muestra la fluorescencia media (porcentaje de no tratadas) para la expresión de calreticulina en la superficie celular después de la exposición (de izquierda a derecha) a vehículo, oxaliplatino y 15d-PMJ25 j M en células A431 de cáncer de piel no melanoma (Nm Sc ).

La figura 6 es un gráfico que muestra la fluorescencia media (porcentaje de no tratadas) para la expresión de calreticulina en la superficie celular después de la exposición (de izquierda a derecha) a vehículo, oxaliplatino y 15d-PMJ25 ^j M en células HT-29 de cáncer de colon.

La figura 7 es un gráfico que muestra la fluorescencia media (porcentaje de cambio a partir de no tratadas) para la expresión de calreticulina en la superficie celular después de la exposición al vehículo o 15d-PMJ2 ya sea en células HaCaT de queratinocitos no tumorigénicos humanos (izquierda) o en células A431 de cáncer de piel humano no melanoma (derecha) .

La figura 8 es un gráfico que muestra la fluorescencia media (porcentaje de cambio a partir de no tratadas) para la expresión de CD47 en la superficie celular después de la exposición al vehículo o 15d-PMJ2 en células HaCaT de queratinocitos no tumorigénicos humanos (izquierda) o en células A431 de cáncer de piel humano no melanoma (derecha) .

La figura 9 es un gráfico que muestra el porcentaje de células dendríticas inmaduras aisladas de la médula ósea de ratones C57BL/6 (BMDC) con tinción de fluorescencia positiva de marcadores de maduración de activación MHClI y CD86.

La figura 10 es un gráfico que muestra el porcentaje de células dendríticas que infiltran el tumor en tumores sólidos de melanoma. Los grupos de tratamiento (de arriba hacia abajo) incluyeron cisplatino (CPT) a 5 mg/kg y 0.5 mg/kg, oxaplatino (OXA) a 10 mg/kg, 2 mg/kg y 1 mg/kg, 15d-PMJ2 (PMJ) a 0.5 mg/kg y 0.25 mg/kg, vehículo (VEH) y sin tratar (UH).

Descripción detallada

La presente invención se describe ahora con más detalle a continuación con referencia a los dibujos adjuntos.

La terminología usada en la descripción de la invención en este documento tiene el único propósito de describir realizaciones particulares y no pretende ser limitativa de la invención. Como se usan en la descripción de la invención y las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares "un", "uno, una" y "el, la" pretenden incluir también las formas plurales, a menos que el contexto indique claramente lo contrario.

A menos que se defina de otro modo, todos los términos (incluidos los términos técnicos y científicos) usados en este documento tienen el mismo significado que comúnmente entiende un experto en la técnica a la que pertenece esta invención.

Las referencias a métodos de tratamiento en esta descripción (que no forman parte de la invención reivindicada) deben interpretarse como referencias a los compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente divulgación para su uso en un método para el tratamiento del cuerpo humano (o animal) mediante terapia.

También como se usa en este documento, "y/o" se refiere y abarca todas y cada una de las combinaciones posibles de uno o más de los elementos enumerados asociados, así como la falta de combinaciones cuando se interpreta en la alternativa ("o").

Como se usa en este documento, la frase de transición "que consiste esencialmente en" (y variantes gramaticales) debe interpretarse como que abarca los materiales o etapas enumerados "y aquellos que no afectan materialmente las características básicas y novedosas" de la invención reivindicada.

El término "aproximadamente", como se usa en este documento cuando se refiere a un valor medible tal como una cantidad o concentración y similares, pretende abarcar variaciones de ± 10 %, ± 5 %, ± 1 %, ± 0.5 % o incluso ± 0.1 % del valor especificado así como el valor especificado. Por ejemplo, "aproximadamente X", donde X es el valor medible, incluye X así como variaciones de ± 10 %, ± 5 %, ± 1 %, ± 0.5 % o incluso ± 0.1 % de X. Un intervalo proporcionado en este documento para un valor medible puede incluir cualquier otro intervalo y/o valor individual en el mismo.

Se entenderá que aunque los términos "primero", "segundo", "tercero", "a)", "b)", y "c)", etc. pueden usarse en este documento para describir diversos elementos de la invención no deben estar limitados por estos términos. Estos términos se usan únicamente para distinguir un elemento de la invención de otro. De este modo, un primer elemento discutido a continuación podría denominarse un aspecto de elemento y, de manera similar, un tercero sin apartarse de las enseñanzas de la presente invención. De este modo, los términos "primero", "segundo", "tercero", "a)", "b)" y "c)", etc. no pretenden transmitir necesariamente una secuencia u otra jerarquía a los elementos asociados, sino se usan únicamente con fines de identificación. La secuencia de operaciones (o etapas) no se limita al orden presentado en las reivindicaciones o figuras a menos que se indique específicamente lo contrario.

Como se usa en este documento, "uno o más" puede significar uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez o más, hasta cualquier número.

Como se usa en este documento, los términos "aumentar", "aumenta", "aumentado", "que aumenta", "mejora", "potencia" y términos similares indican una elevación en el parámetro especificado de al menos aproximadamente 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 100 %, 150 %, 200 %, 300 %, 400 %, 500 % o más.

Como se usa en este documento, los términos "reducir", "reduce", "reducido", "reducción", "inhibir" y términos similares se refieren a una disminución en el parámetro especificado de al menos aproximadamente 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 97 %, o 100 %.

Los términos "administrar", "administrado", "suministrar" y las variantes gramaticales de los mismos, como se usan en este documento, incluyen la administración tópica, parenteral y/u oral, todas las cuales se describen en este documento. La administración parenteral incluye, sin limitación, la administración intravenosa, intraperitoneal, subcutánea y/o intramuscular (por ejemplo, administración al músculo esquelético o al músculo cardíaco). En los métodos de esta divulgación, un compuesto o composición de esta invención puede administrarse solo y/o simultáneamente con uno o más compuestos. En algunas realizaciones, los compuestos pueden administrarse secuencialmente, en cualquier orden y en cualquier momento. Se apreciará que el método real, el orden y/o el tiempo de administración pueden variar según, entre otras cosas, la preparación particular del(los) compuesto(s) que se usa(n) y la(s) formulación(es) particular(es) del uno o más compuestos que se usan. El método, el orden y/o el momento óptimos de administración de los compuestos de la divulgación para un conjunto dado de condiciones pueden determinarse para los expertos en la técnica usando técnicas convencionales y en vista de la información que se presenta en este documento.

Los términos "administración", "administrar", "entregado" y las variantes gramaticales de los mismos también se refieren, sin limitación, por vía oral, sublingual, bucal, transnasal, transdérmica, tópica, rectal, intraperitoneal, intramuscular, intravenosa, intraarterial (intracoronaria), intraventricular, intratecal y subcutánea. De acuerdo con la buena práctica clínica, los presentes compuestos se pueden administrar a una dosis que producirá efectos beneficiosos eficaces sin causar efectos secundarios dañinos o adversos indebidos, es decir, los beneficios asociados con la administración superan los efectos perjudiciales.

"Tratar", "que trata" o "tratamiento de" (y variaciones gramaticales de los mismos) como se usa en este documento se refiere a cualquier tipo de tratamiento que imparte un beneficio a un sujeto y puede significar que la gravedad de la afección, el trastorno, la enfermedad y la dolencia se reduce, al menos mejora parcialmente o mejora y/o se logra algún alivio, mitigación o disminución en al menos un síntoma clínico asociado con una condición, trastorno, enfermedad y/o dolencia y/o hay un retraso en la progresión del síntoma. En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, la gravedad de un síntoma asociado con el cáncer y/o el tamaño del tumor puede reducirse en un sujeto en comparación con la gravedad del síntoma y/o el tamaño del tumor en ausencia de un método. de la presente divulgación y/o en comparación con un tratamiento convencional.

En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, un compuesto de fórmula (I) o el profármaco, derivado y/o sal del mismo y/o una composición de la presente invención puede administrarse en una cantidad eficaz para el tratamiento. Una cantidad "eficaz para el tratamiento" como se usa en este documento es una cantidad que es suficiente para tratar (como se define en este documento) a un sujeto. Los expertos en la técnica apreciarán que los efectos terapéuticos no necesitan ser completos o curativos, siempre que se proporcione algún beneficio al sujeto. En algunos aspectos, se puede lograr una cantidad eficaz para el tratamiento mediante la administración de una composición descrita en este documento.

Los términos "prevenir", "que previene" y "prevención" (y variaciones gramaticales de los mismos) se refieren a evitar, reducir y/o retrasar la aparición de un síntoma asociado con una afección, trastorno, enfermedad y/o dolencia (por ejemplo, cáncer y/o un tumor) y/o una reducción en la gravedad de la condición, trastorno, enfermedad y/o dolencia en relación con lo que ocurriría en ausencia de un método de la presente divulgación y/o en comparación con un tratamiento convencional. La prevención puede ser completa, por ejemplo, la ausencia total del síntoma. La prevención también puede ser parcial, de modo que la aparición del síntoma en el sujeto y/o la gravedad del inicio sea menor de lo que ocurriría en ausencia de un método de la presente divulgación y/o en comparación con un tratamiento convencional.

En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, un compuesto de fórmula (I) o el profármaco, derivado y/o sal del mismo y/o una composición de la presente invención puede administrarse en una cantidad eficaz para la prevención. Una cantidad "eficaz para la prevención" como se usa en este documento es una cantidad que es suficiente para prevenir (como se define en este documento) un síntoma asociado con una afección, trastorno, enfermedad y/o dolencia (por ejemplo, cáncer y/o un tumor) en un sujeto. Los expertos en la técnica apreciarán que no es necesario que el nivel de prevención sea completo, siempre que se proporcione algún beneficio al sujeto. En algunos aspectos, se puede lograr una cantidad eficaz de prevención mediante la administración de una composición descrita en este documento.

Según sea apropiado, una cantidad eficaz para el tratamiento o una cantidad eficaz para la prevención en cualquier caso individual puede ser determinada por un experto normal en la técnica con referencia a los textos y literatura pertinentes y/o usando experimentación de rutina. (Véase, por ejemplo, Remington, The Science and Practice of Pharmacy (última edición)).

"15-desoxi A1214PGJ2-EA", "15dD12,14-PGJ2-EA", "15d-PGJ2-EA", 15-desoxi A1214PMJ2, "15dD12,14-PMJ2" y "15d-PMJ2-EA" se refieren a 15-desoxi A1214-prostagladina J2-etanolamida que tiene una estructura como se establece en la fórmula (I):

"Profármaco" se refiere a un compuesto que se transforma in vivo y/o in vitro (por ejemplo, en células cultivadas y/o sangre), tal como, por ejemplo, por hidrólisis en sangre, para producir un fármaco farmacéuticamente activo. Un ejemplo de fármaco farmacéuticamente activo es el compuesto de fórmula (I) o la forma iónica y/o la sal del mismo. Se proporciona una discusión detallada en T. Higuchi and V. Stella, Prodrugs as Novel delivery Systems, Vol. 14 of the A.C.S. Symposium Series y en Edward B. Roche, ed., Bioreversible Carriers in Drug Design, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987. Véase también la Patente de los Estados Unidos No. 6,680,299. Los ejemplos incluyen un profármaco que es metabolizado in vivo por un sujeto a un fármaco activo que tiene una actividad de compuestos activos como se describe en este documento, en el que el profármaco es un éster de un grupo de alcohol o ácido carboxílico, si dicho grupo está presente en el compuesto; un acetal o cetal de un grupo alcohol, si dicho grupo está presente en el compuesto; una base de N-Mannich o una imina de un grupo amino, si dicho grupo está presente en el compuesto; o una base de Schiff, oxima, acetal, éster de enol, oxazolidina o tiazolidina de un grupo carbonilo, si dicho grupo está presente en el compuesto.

El profármaco de la presente invención es la prostaglandina D2 etanolamida (PGD2-EA") como se establece en la fórmula (II):

"Farmacéuticamente aceptable" como se usa en este documento significa que el compuesto, anión o composición es apropiado para administrar a un sujeto para lograr los tratamientos descritos en este documento, sin efectos secundarios indebidamente perjudiciales a la luz de la gravedad de la enfermedad y la necesidad del tratamiento.

"Sal" o "sal farmacéuticamente aceptable" como se usa en este documento se refiere a una sal que retiene la eficacia biológica de los ácidos y bases libres de un compuesto específico y no es indeseable biológicamente o de otro modo. Los ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, sulfatos, pirosulfatos, bisulfatos, sulfitos, bisulfitos, fosfatos, monohidrogenofosfatos, dihidrogenofosfatos, metafosfatos, pirofosfatos, cloruros, bromuros, yoduros, acetatos, propionatos, decanoatos, caprilatos, acrilatos, formiatos, isobutiratos, caproatos, heptanoatos, propionatos, oxalatos, malonatos, succinatos, sebacatos, fumaratos, maleatos, butino-1,4-dioatos, hexino-1,6-dioatos, benzoatos, clorobenzoatos, benzoatos de metilo, dinitrobenzoatos, hidroxibenzoatos, metoxibenzoatos, ftalatos, sulfonatos, xilenosulfonatos, fenilacetatos, fenilpropionatos, fenilbutiratos, citratos, lactatos, Y-hidroxibutiratos, glicolatos, tartratos, metanosulfonatos, propanosulfonatos, naftaleno-1-sulfonatos, naftaleno-2-sulfonatos y mandelatos. En algunas realizaciones, la sal es una sal de clorhidrato, sulfito, benzoato, salicicato, cocoato, seboato, undecilenato o carboxilato.

"Antígeno específico de tejido", como se usa en este documento, se refiere a un antígeno que es característico de un tipo de tejido, incluidos tejidos tumorales específicos. Un ejemplo de antígeno específico de tejido expresado por un tejido tumoral es el antígeno fosfatasa ácida prostática, que está presente en más del 90 % de todos los tumores de próstata.

"Células presentadoras de antígenos" o "APC", como se usa en este documento, se refiere a células que son capaces de activar células T e incluyen, pero no se limitan a, ciertos macrófagos, células B y células dendríticas.

“Célula dendrítica”, como se usa en este documento, se refiere a cualquier miembro de una población diversa de tipos de células morfológicamente similares que se encuentran en tejidos linfoides o no linfoides. Estas células se caracterizan por su morfología distintiva, altos niveles de expresión superficial de MHC-clase II (Steinman, et al., Ann. Rev. Immunol. 9:271 (1991)). Estas células se pueden aislar de un número de fuentes de tejido y de sangre periférica.

Como se usa en este documento, los términos "madura(s)", "maduración" (por ejemplo, maduración de células dendríticas) y variaciones gramaticales de los mismos se refieren a una reprogramación funcional de una célula inmunitaria (por ejemplo, una célula dendrítica), caracterizada por la adquisición y/o mayor capacidad de múltiples propiedades. Estas propiedades incluyen, pero no se limitan a, fagocitosis, procesamiento y presentación de antígenos, migración y coestimulación de células T, como se revisa en Dalod et al. EMBO J. 33:1104-1116 (2014).

Los términos "fagocitosis", "fagocitosa" y/o "fagocítico", como se usa en este documento, se refieren al procedimiento de captación de antígenos por parte de células capaces de realizar esta función (es decir, "células fagocíticas"), incluidas, entre otras, células dendríticas y macrófagos. La fagocitosis es un método especializado de captación (es decir, "endocitosis") e internalización de antígeno extracelular por células fagocíticas (por ejemplo, células dendríticas o macrófagos), en el que el antígeno puede procesarse y presentarse sobre la superficie celular de las células fagocíticas para interactuar con (por ejemplo, contactar) y/o activar (por ejemplo, reactivar) otras células inmunitarias tales como, pero no se limitan a, células T y células B. Las células fagocíticas que están especializadas para la fagocitosis (por ejemplo, "profagocíticas"), el procesamiento y la presentación de antígenos, la migración y la coestimulación de células T también pueden denominarse indistintamente "células presentadoras de antígenos" ("APC"), opcionalmente como " APC profesionales". Los procedimientos y/o señales intracelulares, de superficie celular y/o extracelulares que promueven la fagocitosis de una célula diana (por ejemplo, una célula cancerosa y/o tumoral) por una célula fagocítica se denominan en este documento "señalización fagocítica" (por ejemplo, señalización profagocítica).

En este documento se proporcionan compuestos, composiciones, kits y métodos para activar células inmunitarias y/o una respuesta del sistema inmunitario en un sujeto. En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención, un método de la presente invención comprende administrar a un sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula (I) o un profármaco, derivado y/o sal del mismo. En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención, se administra al sujeto un compuesto de fórmula (II).

En algunas realizaciones, un método de la presente invención comprende activar una célula inmunitaria, comprendiendo el método poner en contacto una célula inmunitaria (por ejemplo, una célula T y/o una célula dendrítica) con un compuesto de fórmula (I) o fórmula (II), y/o sal del mismo para proporcionar una célula inmunitaria modificada genéticamente. El "contacto" y las variaciones gramaticales de los mismos, como se usan en este documento, se entiende que incluyen la mezcla, la adición, la disolución, la combinación, el remojo, la suspensión, la inmersión, la saturación, la inmersión, la incorporación, la humectación, la inmersión, la pulverización, la administración y/o cualquier variación y/o combinación de los mismos. En algunas realizaciones, la etapa de contacto puede comprender cultivar la célula inmunitaria en medios que comprenden el compuesto de fórmula (I) o fórmula (II), y/o una sal del mismo.

La célula inmunitaria se pone en contacto ex-vivo con el compuesto de fórmula (I), fórmula (II), y/o una sal del mismo. El método puede comprender cultivar la célula inmunitaria modificada genéticamente, opcionalmente para proporcionar una pluralidad de células inmunitarias modificadas genéticamente. La célula inmunitaria puede ser cualquier célula inmunitaria apropiada y puede obtenerse de un donante. En algunas realizaciones, el donante es un sujeto al que se va a tratar y/o administrar la célula inmunitaria modificada genéticamente y/o una pluralidad de células inmunitarias modificadas genéticamente (por ejemplo, un paciente), que puede proporcionar un tratamiento personalizado. Cuando el donante no es un sujeto que se va a tratar y/o administrar la célula inmunitaria modificada genéticamente y/o la pluralidad de células inmunitarias modificadas genéticamente, el donante puede ser de la misma especie que el sujeto y/o el paciente que se va a tratar. En algunas realizaciones, la célula inmunitaria se obtiene de un sujeto y/o donante mediante aféresis.

Cuando se contacta con una célula inmunitaria ex-vivo con el compuesto de fórmula (I), fórmula (II) y/o una sal de los mismos, la célula inmunitaria modificada genéticamente y/o la pluralidad de células inmunitarias modificadas genéticamente pueden administrarse a un sujeto. En algunas realizaciones, la célula inmunitaria modificada genéticamente y/o la pluralidad de células inmunitarias modificadas genéticamente pueden administrarse al sujeto mediante infusión.

En algunas realizaciones, un método de la presente invención comprende poner en contacto con una célula inmunitaria ex-vivo con un compuesto de fórmula (I), fórmula (II) y/o una sal de los mismos para proporcionar una célula inmunitaria modificada genéticamente. La célula inmunitaria modificada genéticamente y/o una pluralidad de células inmunitarias modificadas genéticamente pueden administrarse a un sujeto. La etapa de administración puede llevarse a cabo antes, durante y/o después de la etapa de contacto y/o administración.

Un método que no cae dentro del alcance de la invención reivindicada puede administrar el compuesto de fórmula (I) o el profármaco, derivado y/o sal del mismo en una cantidad eficaz para activar la inmunidad de la célula huésped en el sujeto. La inmunidad de la célula huésped en el sujeto puede activarse frente a células cancerosas y/o células tumorales, pero puede no activarse frente a células no cancerosas y/o células no tumorales.

Las células cancerosas y/o células tumorales pueden ser cualquier célula cancerosa apropiada y/o células tumorales tales como, pero no se limitan a, intestinales (intestino delgado, intestino grueso, colon), pulmón, mama, próstata, piel, hueso, cerebro, células de cáncer de hígado, páncreas, útero, cuello uterino, testicular y/u ovario y/o células tumorales. En algunos ejemplos, las células cancerosas y/o las células tumorales son células de la piel y/o células intestinales (por ejemplo, de colon). En algunos ejemplos, las células cancerosas y/o las células tumorales son células resistentes a fármacos, células tumorales metastásicas y/o tallos del tallo tumoral.

En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, el compuesto de fórmula (I) o el profármaco, derivado y/o sal del mismo puede administrarse en una cantidad eficaz para activar el patrón molecular asociado al daño (DAMP)-muerte celular inmunogénica (ICD) en el sujeto.

En algunas realizaciones, un método de la presente invención puede reprogramar y/o activar una célula inmunitaria (por ejemplo, una célula dendrítica) para atacar y/o destruir células cancerosas y/o células tumorales. En algunas realizaciones, un método de la presente invención puede activar células presentadoras de antígenos (por ejemplo, células dendríticas). En algunas realizaciones, un método de la presente invención activa (por ejemplo, reactiva) y/o reprograma (por ejemplo, madura) una célula dendrítica para captar, procesar y/o presentar péptidos antigénicos derivados de patógenos o derivados del hospedador a células T naive en tejidos periféricos. En algunas realizaciones, un método de la presente invención puede inducir una respuesta inmunitaria frente a un antígeno asociado a un tumor. En algunas realizaciones, un método de la presente invención puede activar las células T, opcionalmente para producir una respuesta inmunitaria celular multivalente frente a un antígeno dado y la respuesta puede ser mayor que la respuesta lograda con el antígeno dado solo. En algunas realizaciones, un método de la presente invención puede inducir la maduración de una célula inmunitaria (por ejemplo, una célula dendrítica).

En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, cuando una célula cancerosa y/o una célula tumoral se expone (por ejemplo, se pone en contacto y/o se administra) a un compuesto de fórmula (I) o un profármaco, derivado y/o sal del mismo, se produce la expresión de DAMP, que puede incluir la expresión de calreticulina en la superficie celular, la liberación de ATP y/o la liberación de HMGB1. Los DAMP (por ejemplo, ATP, HMGB1 y/o calreticulina) pueden unirse a los receptores en la superficie de las células dendríticas (DC), lo que puede hacer que las DC expresen MHClI, CD80 y/o CD86 en su superficie. La expresión de MHClI, CD89 y/o CD86 en la superficie de las DC es un indicador de la madurez de la célula. En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, un método de la presente divulgación puede aumentar la expresión de MHClI, CD89 y/o CD86 en al menos aproximadamente un 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 100 % o más en comparación con la expresión de MHClI, CD89 y/o CD86 en ausencia de un método de la presente divulgación y/o en comparación con un control. En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, las DC maduras pueden fagocitar células cancerosas y/o tumorales y/o exponer partes de la célula cancerosa y/o tumoral a células T citotóxicas (células T CD8+, células CD4+ y/o o células NK). En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, las células T citotóxicas pueden atacar las células cancerosas y/o tumorales. En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, un método de la presente divulgación aumenta el número de células inmunitarias (por ejemplo, células dendríticas) que se infiltran y/o están presentes en un tumor en al menos aproximadamente 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 100 %, 150 %, 200 % o más en comparación con un control y/o en comparación con el número de células inmunitarias infiltrantes en ausencia de un método de la presente divulgación.

En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, un método de la presente divulgación puede aumentar la señalización fagocítica (por ejemplo, profagocítica) en un sujeto, opcionalmente en el que el aumento de la señalización fagocítica (por ejemplo, profagocítica) está en células cancerosas y/o tumorales en el sujeto. El aumento en la señalización fagocítica puede ser preferentemente en células cancerosas y/o tumorales en el sujeto en comparación con células no cancerosas y/o no tumorales en el sujeto. En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, el aumento en la señalización fagocítica en células cancerosas y/o tumorales en un sujeto es al menos 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7-, 8 -, 9 o 10 veces mayor que la señalización fagocítica en células no cancerosas y/o no tumorales en el sujeto. En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, la administración de un compuesto de la presente divulgación a un sujeto aumenta la señalización fagocítica en células cancerosas y/o tumorales en un sujeto en al menos aproximadamente 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 100 %, 150 %, 200 % o más en comparación con un control (por ejemplo, un vehículo) y/o en comparación con la señalización fagocítica en las células en ausencia de un método de la presente divulgación.

Un método de la presente divulgación que no cae dentro del alcance de la invención reivindicada puede causar y/o proporcionar inmunidad protectora en el sujeto, opcionalmente la inmunidad protectora puede ser contra células cancerosas y/o células tumorales del mismo origen (por ejemplo, cáncer y/o células tumorales que tienen el mismo origen que el cáncer y/o células tumorales que exhiben un aumento del estrés del ER y/o estrés del ER citotóxico). En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, las células cancerosas y/o tumorales son las que quedan en el sujeto después de la cirugía, la radioterapia y/o la quimioterapia. En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, un método de la presente divulgación proporciona la muerte celular inmunogénica de células cancerosas y/o células tumorales en el sujeto. Un método de la presente divulgación puede no dar como resultado y/o proporcionar efectos secundarios autoinmunes en el sujeto (por ejemplo, efectos secundarios autoinmunes observados con inhibidores de puntos de control quimioterapéuticos).

En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, un método de la presente divulgación es selectivamente tóxico para las células que tienen un mayor nivel de estrés del ER en comparación con las células normales del mismo tipo. Un método de la presente divulgación puede administrar un compuesto de fórmula (I) o el profármaco, derivado y/o sal del mismo en una cantidad eficaz para proporcionar estrés citotóxico de ER en células cancerosas y/o células tumorales en el sujeto. En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, el método no proporciona estrés ER citotóxico en células no cancerosas y/o células no tumorales en el sujeto.

Un método de la presente divulgación puede inducir la muerte celular a través de un mecanismo dependiente del estrés del ER. En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, el método puede inducir la muerte celular en células cancerosas, células tumorales y/o en células que muestran un mayor estrés en el ER (por ejemplo, células que muestran un mayor estrés en el ER durante su ciclo de crecimiento) en comparación con células normales y sanas del mismo tipo.

Los estudios con 15d-PGJ2-EA y células tumorales determinaron que la muerte selectiva en células tumorales estuvo mediada por la inducción de estrés en el retículo endoplásmico (ER). En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de las invenciones reivindicadas, un compuesto y/o composición de la presente divulgación puede inducir estrés de ER en las células y puede empujar a las células con niveles moderados o mayores de estrés de ER más allá de su umbral de muerte. Por el contrario, las células normales pueden contener estrés de ER endógeno bajo, y una cantidad equivalente del compuesto y/o composición no dará como resultado la muerte celular de las células normales, produciendo así toxicidad selectiva. Dirigirse selectivamente a las células enfermas puede disminuir el riesgo de desarrollar efectos adversos. Los compuestos, composiciones y/o métodos de la presente divulgación pueden comprender los descritos en la Patente de los Estados Unidos No. 9,328,060 y/o PCT/US17/20315..

En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, un método de la presente divulgación puede provocar la muerte celular en células (por ejemplo, células cancerosas y/o tumorales) que presentan un aumento del estrés del ER. En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, el aumento del estrés del ER ocurre durante el ciclo de crecimiento de las células (por ejemplo, células infectadas). Las células tratadas por un método de la presente invención pueden exhibir un nivel de estrés de ER de al menos aproximadamente el 10 % (por ejemplo, aproximadamente el 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 100 %, 125 %, 150 %, 200 % o más) mayor que el nivel de estrés del ER en una célula sana normal del mismo tipo. El nivel de estrés de ER puede determinarse por el nivel de expresión de la proteína de estrés de ER en las células.

El ER es un orgánulo intracelular que es el principal responsable de plegar las proteínas recién sintetizadas. El estrés del ER se produce cuando la demanda de plegamiento de proteínas supera la capacidad de plegamiento de proteínas, lo que hace que se acumulen proteínas mal plegadas o desplegadas. En respuesta al estrés del ER, las células disminuyen la traducción global, aumentan la síntesis de enzimas de plegamiento de proteínas y degradan las proteínas mal plegadas o desplegadas para resolver el estrés del ER y sobrevivir. Sin embargo, cuando el estrés del ER es demasiado severo, la maquinaria de estrés del ER se sobrecarga y se inicia la muerte apoptótica.

En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, un método de la presente divulgación puede ser citotóxico para las células cancerosas, las células tumorales y/o las células que tienen un mayor nivel de estrés del ER en comparación con las células sanas normales. El método puede proporcionar una mayor citotoxicidad para tales células en comparación con un método diferente para tratar y/o prevenir el cáncer y/o el crecimiento tumoral, tal como, por ejemplo, uno que no administra un compuesto y/o composición de la presente divulgación. En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, la citotoxicidad puede aumentar al menos aproximadamente un 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 98 %, 99 %, 100 %, 150 % o más en comparación con un método diferente para tratar y/o prevenir el cáncer y/o el crecimiento de tumores. La citotoxicidad se puede determinar usando métodos conocidos para los expertos en la técnica, tales como, por ejemplo, una lectura cualitativa de portaobjetos de hematoxilina y eosina (H&E), un ensayo de lactato deshidrogenasa (LDH) y/o un ensayo de sal interna (MTS) de [3-(4, 5-dimetiltiazol-2-il)-5-(3-carboximetoxifenil)-2-(4-sulfofenil)-2H-tetrazolio. Para la administración, se entiende que ya sea el compuesto o la composición farmacéutica son o comprenden el ingrediente activo (por ejemplo, el compuesto de fórmula (I) o el profármaco, derivado y/o sal del mismo) y capaz de administrarse a un sujeto y, de este modo, en algunos casos, los términos son intercambiables. Los métodos de administración no limitantes incluyen, pero no se limitan a, administración oral, parenteral (por ejemplo, subcutánea, intramuscular, intradérmica, intraperitoneal o intravenosa), pulverización de inhalación (nasal y oral), tópica (es decir, tanto en la piel como en las superficies mucosas, incluidas las superficies de las vías respiratorias), transdérmica, rectal, nasal, sublingual, bucal o de reservorio implantado, etc. En un ejemplo que no cae dentro del alcance de la invención reivindicada, una composición de la presente divulgación se administra por vía tópica o transdérmica. En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, una composición de la presente divulgación se administra por vía tópica. En otro ejemplo más que no cae dentro del alcance de la invención reivindicada, una composición de la presente divulgación se administra por vía intraperitoneal.

Las composiciones farmacéuticas de la presente divulgación pueden formularse adecuadamente para su administración por cualquier medio conocido en la técnica. Los ejemplos no limitantes de formas de administración incluyen, pero no se limitan a, administración oral, parenteral (por ejemplo, inyección subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraarticular, intrasinovial, intraesternal, intratecal, intrahepática, intralesional e intracraneal o técnicas de infusión), pulverización de inhalación (nasal y oral), tópico (es decir, tanto para superficies de la piel como para la mucosas), incluidas las superficies de las vías respiratorias), transdérmica, rectal, nasal, sublingual, bucal o administración de reservorio implantado, etc. En un ejemplo que no cae dentro del alcance de la invención reivindicada, una composición de la presente divulgación se administra por vía tópica o transdérmica. Para la administración tópica, las formas apropiadas incluyen, pero no se limitan a, sistemas de administración transdérmica apropiados conocidos en la técnica, tales como parches, y para la administración nasal, las formas apropiadas incluyen, pero no se limitan a, sistemas de administración en aerosol y nebulizados conocidos en la técnica.

En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, una composición farmacéutica de la presente divulgación puede estar en una forma apropiada para la administración tópica. Los ejemplos no limitantes incluyen, pero no se limitan a, composiciones farmacéuticas en forma de solución tópica, ungüento, crema, emulsión, un gel, una dispersión, una suspensión, una espuma, un aerosol, una gota, forma inyectable y/o un recubrimiento en el que el componente activo puede suspenderse o disolverse en uno o más portadores. Se puede aplicar una composición tópica a las superficies corporales de un sujeto, incluidas la piel, las membranas mucosas, el cuero cabelludo, el cabello y/o las uñas. Los portadores para la administración tópica de los compuestos de esta invención incluyen, pero no se limitan a, aceite mineral, vaselina líquida, vaselina blanca, propilenglicol, polioxietileno, compuesto de polioxipropileno, cera emulsionante y/o agua. Cuando la formulación tópica está en forma de pomada o crema, los portadores apropiados incluyen, pero no se limitan a, aceite mineral, monoestearato de sorbitán, polisorbato 60, cera de ésteres de cetilo, alcohol cetearílico, 2 octildodecanol, alcohol bencílico y/o agua.

Los métodos de formulación de composiciones farmacéuticas se han descrito en numerosas publicaciones tales como Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets. Second Edition. Revisado y Ampliado. Volúmenes 1-3, editado por Lieberman et al.; Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications. Volúmenes 1-2, editado por Avis et al.; y Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems. Volúmenes 1-2, editado por Lieberman et al.; published by Marcel Dekker, Inc.

Las composiciones farmacéuticas se formulan generalmente como estériles, sustancialmente isotónicas y en pleno cumplimiento de todas las normas de Buenas Prácticas de Fabricación (GMP) de the U.S. Food and Drug Administration.

En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, un método de la presente divulgación puede prevenir y/o reducir la aparición (incluida la reaparición) y/o el tamaño de un tumor. Un método de la presente divulgación puede reducir la apariencia y/o el tamaño de un tumor en al menos aproximadamente un 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 97 % o 100 % en comparación con la apariencia y/o el tamaño de un tumor antes de la administración de un compuesto y/o composición de la presente divulgación. La apariencia y/o el tamaño del tumor pueden ser evaluados visualmente, tal como, pero no se limitan a, por el sujeto y/o un médico y/o usando un método conocido para los expertos en la técnica.

En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, el sujeto puede ver una reducción en el tamaño y/o apariencia de un tumor dentro de 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 o más día(s) y/o semana(s). En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, el método puede reducir el tamaño y/o la apariencia de un tumor en la piel del sujeto en 12 semanas o menos, en algunos ejemplos, en 8 semanas o menos, y en otros ejemplos, dentro de 4 semanas o menos.

Un método de la presente divulgación puede reducir el número de tumores en al menos aproximadamente 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 97 % o 100 % en comparación con el número de tumores antes de la administración de un compuesto y/o composición de la presente divulgación. El número de tumores puede evaluarse visualmente, tal como, pero no se limitan a, por el sujeto y/o un médico. El número de tumores puede determinarse usando métodos conocidos para los expertos en la técnica.

Un método de la presente divulgación puede disminuir la tasa de recurrencia de un tumor en un sujeto en al menos aproximadamente un 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 97 % o 100 % en comparación con la tasa de recurrencia del mismo tipo de tumor en ausencia de administración de un compuesto y/o composición de la presente divulgación. La tasa de recurrencia se puede determinar usando métodos conocidos para los expertos en la técnica. Por ejemplo, después de un tratamiento y/o extirpación de un tumor, el número de tumores puede determinarse visualmente y/o usar un método conocido para los expertos en la técnica después de un período de tiempo determinado para determinar la tasa de recurrencia.

Un método de la presente divulgación puede prevenir y/o reducir el riesgo de cáncer y/o tumor en un sujeto. En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, un método de la presente divulgación puede prevenir y/o reducir el riesgo de cáncer y/o tumor en un sujeto en al menos aproximadamente un 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 97 % o 100 % en comparación con el riesgo de cáncer y/o tumor en ausencia de la administración de un compuesto y/o composición de la presente divulgación. El riesgo puede determinarse usando métodos conocidos para los expertos en la técnica.

En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, al sujeto se le puede administrar un segundo agente terapéutico y/o terapia (como, por ejemplo, quimioterapia o radioterapia) antes, al mismo tiempo o después de recibir un compuesto y/o composición de la presente divulgación. En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, el segundo agente terapéutico comprende células T receptoras de antígenos quiméricos (CAR). En algunos ejemplos, el segundo agente terapéutico es un inhibidor de puntos de control y/o un agente quimioterapéutico (por ejemplo, un agente quimioterapéutico citotóxico). Ejemplos de inhibidores de puntos de control incluyen, pero no se limitan a, nivolumab (Bristol-Myers Squibb), pembrolizumab (KEYTRUDA®, Merck), pidilizumab (Curetech), AMP-224 (GlaxoSmithKline/Amplimmune), MPDL3280A (Roche), MDX-1 105 (Medarex, Inc./Bristol Myer Squibb), MEDI-4736 (Medimmune/AstraZeneca), arelumab (Merck Serono), tremelimumab (Pfizer), pidilizumab (CureTech, Ltd ), IMP321 (Immutep S.A.), MGA271 (Macrogenics), BMS-986016 (Bristol-Meyers Squibb), lirilumab (Bristol-Myers Squibb), urelumab (Bristol-Meyers Squibb), PF-05082566 (Pfizer), IPH2101 (Innate Pharma/Bristol-Myers Squibb), Me DI-6469 (Medlmmune/AZ), c P-870,893 (Genentech), Mogamulizumab (Kyowa Hakko Kirin), Varlilumab (CellDex Therapeutics), Avelumab (EMD Serono), Galiximab (Biogen Idee), ^a M^p -514 (Amplimmune/AZ), AUNP 12 (Aurigene and Pierre Fabre), Indoximod (NewLink Genetics), NLG-919 (NewLink Genetics), INCB024360 (Incyte) y/o ipilimumab (YERVOY, (Bristol-Myers Squibb). Ejemplos adicionales de inhibidores de puntos de control incluyen, pero no se limitan a, un inhibidor de muerte programada 1 (PD-1, CD279), un inhibidor de muerte programada-Ligando 1 (PD-L1, también conocido como B7-H1 y CD274), un inhibidor de PD-L2 (B7-DC, CD273), y/o un inhibidor de CTLA-4. En algunas realizaciones, un agente terapéutico (por ejemplo, un inhibidor del punto de control inmunitario) puede dirigirse a un receptor PD-1 y/o un antígeno CTLA-4.

También debe entenderse que una dosificación específica y un régimen de tratamiento para cualquier paciente en particular dependerán de una variedad de factores, que incluyen, pero no se limitan a, la edad, el peso corporal, la salud general, el sexo, la dieta, el momento de la administración, la tasa de excreción, combinación de fármacos y/o el juicio del médico tratante y/o la gravedad de la enfermedad particular que se está tratando.

En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, un compuesto y/o composición de la presente invención puede administrarse (por ejemplo, administrarse por vía tópica) a un sujeto usando cualquier método conocido para los expertos en la técnica. En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, el compuesto y/o la composición pueden administrarse (por ejemplo, aplicarse por vía tópica) al sujeto al menos 1, 2, 3 o más veces al día. En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, el compuesto y/o la composición pueden administrarse (por ejemplo, aplicarse por vía tópica) al sujeto al menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 o más veces por semana y/o mes. En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, el compuesto y/o la composición se pueden administrar al sujeto una vez al día, dos veces al día, cada dos días, cada tercer día, una vez por semana o dos veces por semana. En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, el compuesto y/o la composición pueden administrarse al menos una vez al día durante un período de tiempo prolongado (por ejemplo, una semana, mes, 2 meses, etc.) y/o hasta que el cáncer y/o tumor haya sido tratado y/o prevenido. En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, el compuesto y/o la composición pueden aplicarse según sea necesario.

La presente divulgación encuentra uso tanto en aplicaciones veterinarias como médicas. Los sujetos apropiados para ser tratados con un método de la presente divulgación incluyen, pero no se limitan a, sujetos mamíferos. Los mamíferos de la presente divulgación incluyen, pero no se limitan a, caninos, felinos, bovinos, caprinos, equinos, ovinos, porcinos, roedores (por ejemplo, ratas y ratones), lagomorfos, primates (por ejemplo, simios y humanos), primates no humanos (por ejemplo, monos, babuinos, chimpancés, gorilas), y similares, y mamíferos en el útero. Es apropiado cualquier sujeto mamífero que necesite ser tratado según la presente invención. Sujetos humanos de ambos sexos y en cualquier etapa de desarrollo (es decir, neonato, lactante, juvenil, adolescente, adulto) pueden tratarse según la presente divulgación. En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, el sujeto es un mamífero y, en ciertas realizaciones, el sujeto es un ser humano. Los sujetos humanos pueden ser hombres o mujeres y pueden ser de cualquier raza o etnia, incluidos, pero no se limitan a, caucásicos, afroamericanos, africanos, asiáticos, hispanos, indios, etc. Los sujetos humanos incluyen tanto hombres como mujeres de todas las edades incluidos sujetos fetales, neonatales, infantiles, juveniles, adolescentes, adultos y geriátricos, así como sujetos embarazadas. En realizaciones particulares de la presente invención, el sujeto es un adolescente y/o adulto humano.

Un método de la presente divulgación también se puede llevar a cabo en sujetos animales, particularmente en sujetos mamíferos tales como ratones, ratas, perros, gatos, ganado y caballos con fines veterinarios y/o con fines de cribado y desarrollo de fármacos.

En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, el sujeto "en necesidad de" o "en necesidad del mismo" un método de la presente divulgación, por ejemplo, el sujeto tiene hallazgos por lo general asociados con el cáncer y/o un tumor, se sospecha que tiene cáncer y/o un tumor, y/o el sujeto tiene cáncer y/o un tumor. En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, un sujeto tiene cáncer tal como, por ejemplo, melanoma, cáncer de piel no melanoma, cáncer de colon, etc. En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, un sujeto tiene una infección viral tal como, por ejemplo, el virus del papiloma humano (HVP) y/o el virus del herpes, y/o tiene hallazgos por lo general asociados con una infección viral tal como, por ejemplo, verrugas y/o cáncer.

Los compuestos de la presente divulgación pueden formularse como el único ingrediente farmacéuticamente activo en una composición de la presente divulgación o pueden combinarse con otros ingredientes activos.

Una composición de la presente divulgación puede contener uno o más compuestos de la presente divulgación. En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, los compuestos pueden formularse en preparaciones farmacéuticas apropiadas tales como soluciones, suspensiones, comprimidos, comprimidos dispersables, píldoras, cápsulas, polvos, formulaciones de liberación sostenida o elixires, para administración oral o en soluciones o suspensiones estériles para administración parenteral, así como preparación de parches transdérmicos e inhaladores de polvo seco. En un ejemplo que no cae dentro del alcance de la invención reivindicada, los compuestos descritos anteriormente se formulan en composiciones farmacéuticas usando técnicas y procedimientos bien conocidos en la técnica (véase, por ejemplo, Ansel, Introducción a las formas de dosificación farmacéuticas, cuarta edición 1985, 126).

En las composiciones, pueden mezclarse concentraciones eficaces de uno o más compuestos o derivados farmacéuticamente aceptables de los mismos con un portador farmacéutico apropiado. Los compuestos pueden derivarse como las correspondientes sales, ésteres, enol éteres o ésteres, acetales, cetales, ortoésteres, hemiacetales, hemicetales, ácidos, bases, solvatos, hidratos o profármacos antes de la formulación, como se ha descrito anteriormente. Las concentraciones de los compuestos en las composiciones pueden ser eficaces para el suministro de una cantidad, tras la administración, que trata, previene y/o mejora uno o más de los síntomas de enfermedades o trastornos asociados con cáncer y/o tumor.

En un ejemplo que no cae dentro del alcance de la invención reivindicada, las composiciones se formulan para la administración de una dosificación única. Para formular una composición, la fracción en peso de un compuesto de la presente invención se disuelve, suspende, dispersa o mezcla de otro modo en un portador seleccionado a una concentración eficaz de manera que se alivie, se prevenga la afección tratada o se mejoren uno o más síntomas.

El compuesto activo puede incluirse en el portador farmacéuticamente aceptable en una cantidad suficiente para ejercer un efecto terapéuticamente útil en ausencia de efectos secundarios indeseables en el sujeto tratado. La concentración terapéuticamente eficaz puede determinarse empíricamente mediante el ensayo de los compuestos en los sistemas in vitro e in vivo descritos en este documento y en la Patente de los Estados Unidos No. 5,952,366 de Pandey et al. (1999) y luego se extrapoló a partir de ahí para dosificaciones para humanos.

La concentración de compuesto activo en la composición farmacéutica puede depender de las tasas de absorción, inactivación y excreción del compuesto activo, las características fisicoquímicas del compuesto, el programa de dosificación y/o la cantidad administrada, así como otros factores conocidos para los expertos en la técnica. Por ejemplo, la cantidad que se administra puede ser suficiente para mejorar uno o más de los síntomas de cáncer y/o tumor como se describe en este documento.

En un ejemplo que no cae dentro del alcance de la invención reivindicada, una dosificación terapéuticamente eficaz debería producir una concentración sérica del ingrediente activo desde aproximadamente 0.1 ng/ml a aproximadamente 50-100 ug/ml. En un ejemplo que no cae dentro del alcance de la invención reivindicada, una dosificación terapéuticamente eficaz es desde 0.001, 0.01 o 0.1 a 10, 100 o 1000 mg de compuesto activo por kilogramo de peso corporal por día. Las formas farmacéuticas unitarias de dosificación se pueden preparar para proporcionar desde aproximadamente 0.01 mg, 0.1 mg o 1 mg hasta aproximadamente 500 mg, 1000 mg o 2000 mg, y en un ejemplo que no cae dentro del alcance de la invención reivindicada desde aproximadamente 10 mg hasta aproximadamente 500 mg del ingrediente activo o una combinación de ingredientes esenciales por forma unitaria de dosificación.

El ingrediente activo puede administrarse de una vez o puede dividirse un número de dosis más pequeñas para administrarse a intervalos de tiempo. Se entiende que la dosificación precisa y la duración del tratamiento son una función de la enfermedad que se está tratando y pueden determinarse empíricamente usando protocolos de prueba conocidos o por extrapolación de datos de prueba in vivo o in vitro. Cabe señalar que las concentraciones y los valores de dosificación también pueden variar con la gravedad de la afección a aliviar. Debe entenderse además que para cualquier sujeto en particular, los regímenes de dosificación específicos deben ajustarse con el tiempo según la necesidad individual y el juicio profesional de la persona que administra o supervisa la administración de las composiciones, y que los intervalos de concentración establecidos en este documento son solo a modo de ejemplo y no pretenden limitar el alcance o la práctica de las composiciones reivindicadas.

En los casos en los que los compuestos exhiban una solubilidad insuficiente, se pueden usar métodos para solubilizar compuestos. Tales métodos son conocidos por los expertos en esta técnica e incluyen, pero no se limitan a, el uso de codisolventes, tales como dimetilsulfóxido (DMSO), el uso de surfactantes, tales como TWEEN™, o disolución en bicarbonato de sodio acuoso. Los derivados de los compuestos, tales como profármacos de los compuestos, también se pueden usar para formular composiciones farmacéuticas eficaces.

Al mezclar o agregar el o los compuestos, la mezcla resultante puede ser una solución, suspensión, emulsión, gel o similar. La forma de la mezcla resultante depende de un número de factores, incluido el modo previsto de administración y la solubilidad del compuesto en el portador o vehículo seleccionado. La concentración eficaz puede ser suficiente para aliviar los síntomas de la enfermedad, trastorno o condición tratada y puede determinarse empíricamente.

Las composiciones farmacéuticas pueden proporcionarse para administración a humanos y/o animales en formas de dosificación unitaria, tales como comprimidos, cápsulas, píldoras, polvos, gránulos, soluciones o suspensiones parenterales estériles, y soluciones o suspensiones orales, y emulsiones de aceite y agua que contienen cantidades de los compuestos o derivados farmacéuticamente aceptables de los mismos. Los compuestos farmacéuticamente de forma terapéutica activos y derivados de los mismos se formulan y administran, en una realización, en formas de dosificación unitaria o formas de dosificación múltiple. Las formas de dosis unitaria, como se usan en este documento, se refieren a unidades físicamente discretas apropiadas para sujetos humanos y animales y envasadas individualmente como se conoce en la técnica. Cada dosis unitaria contiene una cantidad predeterminada del compuesto terapéuticamente activo suficiente para producir el efecto terapéutico deseado, en asociación con el portador, vehículo o diluyente farmacéutico requerido. Los ejemplos de formas de dosis unitaria incluyen ampollas y jeringas y comprimidos o cápsulas envasadas individualmente. Las formas de dosis unitaria pueden administrarse en fracciones o múltiplos de las mismas. Una forma de dosis múltiple es una pluralidad de formas de dosificación unitarias idénticas empaquetadas en un único recipiente para administrarse en forma de dosis unitaria separada. Los ejemplos de formas de dosis múltiples incluyen viales, botellas de comprimidos o cápsulas o botellas de pintas o galones. Por tanto, la forma de dosis múltiple es un múltiplo de dosis unitarias que no están segregadas en el envase.

Las composiciones farmacéuticamente administrables líquidas pueden, por ejemplo, prepararse disolviendo, dispersando o mezclando de otro modo un compuesto activo como se define anteriormente y adyuvantes farmacéuticos opcionales en un portador, tal como, por ejemplo, agua, solución salina, dextrosa acuosa, glicerol, glicoles, etanol y similares, para formar así una solución o suspensión. Si se desea, la composición farmacéutica a administrar también puede contener cantidades menores de sustancias auxiliares no tóxicas tales como agentes humectantes, agentes emulsionantes, agentes solubilizantes, agentes reguladores del pH y similares, por ejemplo, acetato, citrato de sodio, derivados de ciclodextrina, monolaurato de sorbitán, acetato de trietanolamina sódica, oleato de trietanolamina y otros agentes similares.

Los métodos reales de preparación de dichas formas de dosificación son conocidos, o serán evidentes, para los expertos en esta técnica; por ejemplo, véase Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 15th Edition, 1975.

Se pueden preparar formas de dosificación o composiciones que contengan ingrediente activo en el intervalo de 0.005 % a 100 % con el resto formado por un portador no tóxico. Los métodos de preparación de estas composiciones son conocidos para los expertos en la técnica. Las composiciones contempladas pueden contener del 0.001 % al 100 % del ingrediente activo en peso de la composición, en una realización de 0.1 a 95 % en peso de la composición, en otra realización de 75 a 85 % en peso de la composición y en otra realización de 0.5 %-50 % en peso de la composición.

En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, una composición de la presente invención puede ser apropiada para administración oral. Las formas de dosificación farmacéutica oral son sólidas, en gel o líquidas. Las formas de dosificación sólidas son comprimidos, cápsulas, gránulos y polvos a granel. Los tipos de comprimidos orales incluyen comprimidos para deshacer en la boca masticables y comprimidos que pueden tener un recubrimiento entérico, un recubrimiento de azúcar o un recubrimiento de película. Las cápsulas pueden ser cápsulas de gelatina dura o blanda, mientras que los gránulos y los polvos pueden proporcionarse en forma no efervescente o efervescente con la combinación de otros ingredientes conocidos para los expertos en la técnica.

En ciertos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, las formulaciones son formas de dosificación sólidas, en un ejemplo que no cae dentro del alcance de la invención reivindicada, cápsulas o comprimidos. Los comprimidos, píldoras, cápsulas, trociscos y similares pueden contener uno o más de los siguientes ingredientes o compuestos de naturaleza similar: un aglutinante; un lubricante; un diluyente; un deslizante; un agente desintegrante; un agente colorante; un agente edulcorante; un agente saborizante; un agente humectante; un recubrimiento emético; y un recubrimiento de película. Los ejemplos de aglutinantes incluyen celulosa microcristalina, goma de tragacanto, solución de glucosa, mucílago de acacia, solución de gelatina, melaza, polivinilpirrolidina, povidona, crospovidonas, sacarosa y pasta de almidón. Los lubricantes incluyen talco, almidón, estearato de magnesio o calcio, licopodio y ácido esteárico. Los diluyentes incluyen, por ejemplo, lactosa, sacarosa, almidón, caolín, sal, manitol y fosfato dicálcico. Los deslizantes incluyen, pero no se limitan a, dióxido de silicio coloidal. Los agentes desintegrantes incluyen croscarmelosa sódica, glicolato de almidón sódico, ácido algínico, almidón de maíz, almidón de patata, bentonita, metilcelulosa, agar y carboximetilcelulosa. Los agentes colorantes incluyen, por ejemplo, cualquiera de los tintes FD y C solubles en agua certificados aprobados, mezclas de los mismos; y tintes FD y C insolubles en agua suspendidos en hidrato de alúmina. Los agentes edulcorantes incluyen sacarosa, lactosa, manitol y agentes edulcorantes artificiales tales como la sacarina y cualquier número de sabores secados por pulverización. Los agentes saborizantes incluyen sabores naturales extraídos de plantas tales como frutas y mezclas sintéticas de compuestos que producen una sensación agradable, tales como, pero no se limitan a, menta y salicilato de metilo. Los agentes humectantes incluyen monoestearato de propilenglicol, monooleato de sorbitán, monolaurato de dietilenglicol y polioxietilen laural éter. Los recubrimientos eméticos incluyen ácidos grasos, grasas, ceras, goma laca, goma laca amoniacal y ftalatos de acetato de celulosa. Los recubrimientos de película incluyen hidroxietilcelulosa, goma gellan, carboximetilcelulosa de sodio, polietilenglicol 4000 y ftalato de acetato de celulosa.

El compuesto, o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo, puede proporcionarse en una composición que lo proteja del entorno ácido del estómago. Por ejemplo, la composición se puede formular en un recubrimiento entérico que mantiene su integridad en el estómago y libera el compuesto activo en el intestino. La composición también se puede formular en combinación con un antiácido u otro ingrediente similar. Cuando la forma de unidad de dosificación es una cápsula, puede contener, además del material del tipo anterior, un portador líquido tal como un aceite graso. Además, las formas de las unidades de dosificación pueden contener diversos otros materiales que modifican la forma física de la unidad de dosificación, por ejemplo, recubrimientos de azúcar y otros agentes entéricos. Los compuestos pueden administrarse como un componente de un elixir, suspensión, jarabe, barquillo, espolvoreado, goma de mascar o similares. Un jarabe puede contener, además de los compuestos activos, sacarosa como agente edulcorante y ciertos conservantes, tintes y colorantes y sabores.

Los materiales activos también se pueden mezclar con otros materiales activos que no perjudiquen la acción deseada, o con materiales que complementen la acción deseada, tal como antiácidos, bloqueadores H₂ y diuréticos. El ingrediente activo es un compuesto o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo como se describe en este documento. Pueden incluirse concentraciones más altas, hasta aproximadamente el 98 % en peso del ingrediente activo.

Las formulaciones de comprimidos y cápsulas se pueden recubrir como saben los expertos en la técnica para modificar o mantener la disolución del ingrediente activo. De este modo, por ejemplo, se pueden recubrir con un recubrimiento digestible entéricamente convencional, tal como salicilato de fenilo, ceras y acetato ftalato de celulosa.

Las formas de dosificación orales líquidas incluyen soluciones acuosas, emulsiones, suspensiones, soluciones y/o suspensiones reconstituidas a partir de gránulos no efervescentes y preparaciones efervescentes reconstituidas a partir de gránulos efervescentes. Las soluciones acuosas incluyen, por ejemplo, elixires y jarabes. Las emulsiones son ya sea de aceite en agua o de agua en aceite.

Los elixires son preparaciones hidroalcohólicas claras y edulcoradas. Los portadores farmacéuticamente aceptables usados en elixires incluyen disolventes. Los jarabes son soluciones acuosas concentradas de un azúcar, por ejemplo, sacarosa, y pueden contener un conservante. Una emulsión es un sistema de dos fases en el que un líquido se dispersa en forma de pequeños glóbulos en otro líquido. Los portadores farmacéuticamente aceptables usados en las emulsiones son líquidos no acuosos, agentes emulsionantes y conservantes. Las suspensiones usan agentes de suspensión y conservantes farmacéuticamente aceptables. Las sustancias farmacéuticamente aceptables usadas en gránulos no efervescentes, para ser reconstituidos en una forma de dosificación oral líquida, incluyen diluyentes, edulcorantes y agentes humectantes. Las sustancias farmacéuticamente aceptables usadas en gránulos efervescentes, para ser reconstituidas en una forma de dosificación oral líquida, incluyen ácidos orgánicos y una fuente de dióxido de carbono. Los agentes colorantes y saborizantes se usan en todas las formas de dosificación anteriores. Los disolventes incluyen glicerina, sorbitol, alcohol etílico y jarabe. Los ejemplos de conservantes incluyen glicerina, metil y propilparabeno, ácido benzoico, benzoato de sodio y alcohol. Los ejemplos de líquidos no acuosos usados en emulsiones incluyen aceite mineral y aceite de semilla de algodón. Los ejemplos de agentes emulsionantes incluyen gelatina, goma arábiga, tragacanto, bentonita y surfactantes tales como monooleato de polioxietilensorbitán. Los agentes de suspensión incluyen carboximetilcelulosa sódica, pectina, tragacanto, goma xantana, Veegum y acacia. Los agentes edulcorantes incluyen sacarosa, jarabes, glicerina y agentes edulcorantes artificiales tales como la sacarina. Los agentes humectantes incluyen monoestearato de propilenglicol, monooleato de sorbitán, monolaurato de dietilenglicol y polioxietilen lauril éter. Los ácidos orgánicos incluyen ácido cítrico y tartárico. Las fuentes de dióxido de carbono incluyen bicarbonato de sodio y carbonato de sodio. Los agentes colorantes incluyen cualquiera de los tintes FD y C solubles en agua certificados y aprobados, y mezclas de los mismos. Los agentes saborizantes incluyen sabores naturales extraídos de plantas tales como frutas y mezclas sintéticas de compuestos que producen una sensación de sabor agradable. Para una forma de dosificación sólida, la solución o suspensión, por ejemplo en carbonato de propileno, aceites vegetales o triglicéridos, se encapsula en una forma de realización en una cápsula de gelatina. Tales soluciones, y la preparación y encapsulación de las mismas, se divulgan en las Patentes de los Estados Unidos Nos. 4,328,245; 4,409,239; y 4,410,545. Para una forma de dosificación líquida, la solución, por ejemplo, en un polietilenglicol, se puede diluir con una cantidad suficiente de un portador líquido farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, agua, que se puede medir fácilmente para su administración.

Alternativamente, las formulaciones orales líquidas o semisólidas se pueden preparar disolviendo o dispersando el compuesto activo o la sal en aceites vegetales, glicoles, triglicéridos, ésteres de propilenglicol (por ejemplo, carbonato de propileno) y otros portadores similares, y encapsulando estas soluciones o suspensiones en cubiertas de cápsulas de gelatina dura o blanda. Otras formulaciones útiles pueden incluir las establecidas en las Patentes de los Estados Unidos Nos. RE28.819 y 4,358,603. En resumen, tales formulaciones pueden incluir, pero no se limitan a, las que contienen un compuesto proporcionado en este documento, un mono o polialquilenglicol dialquilado, que incluye, pero no se limitan a, 1,2-dimetoximetano, diglima, triglima, tetraglima, polietileno glicol-350-dimetil éter, polietilenglicol-550-dimetil éter, polietilenglicol-750-dimetil éter en el que 350, 550 y 750 se refieren al peso molecular medio aproximado del polietilenglicol, y/o uno o más antioxidantes, tales como hidroxitolueno butilado (BHT), hidroxianisol butilado (BHA), galato de propilo, vitamina E, hidroquinona, hidroxicumarinas, etanolamina, lecitina, cefalina, ácido ascórbico, ácido málico, sorbitol, ácido fosfórico, ácido tiodipropiónico y/o sus ésteres, y/o ditiocarbamatos.

Otras formulaciones incluyen, pero no se limitan a, soluciones alcohólicas acuosas que incluyen un acetal farmacéuticamente aceptable. Los alcoholes usados en estas formulaciones son cualquier disolvente miscible en agua farmacéuticamente aceptable que tenga uno o más grupos hidroxilo, incluidos, pero no se limitan a, propilenglicol y/o etanol. Los acetales incluyen, pero no se limitan a, acetales de di(alquilo inferior) de aldehídos de alquilo inferior tales como acetaldehído dietil acetal.

También se contempla en este documento la administración parenteral, en una realización caracterizada por inyección, ya sea por vía subcutánea, intramuscular o intravenosa. Los inyectables se pueden preparar en formas convencionales, ya sea como soluciones o suspensiones líquidas, formas sólidas apropiadas para solución o suspensión en líquido antes de la inyección, o como emulsiones. Los inyectables, soluciones y emulsiones también pueden contener uno o más excipientes. Los excipientes apropiados son, por ejemplo, agua, solución salina, dextrosa, glicerol o etanol. Además, si se desea, las composiciones farmacéuticas que se van a administrar también pueden contener cantidades menores de sustancias auxiliares no tóxicas tales como agentes humectantes o emulsionantes, agentes reguladores del pH, estabilizantes, potenciadores de la solubilidad y otros agentes tales como, por ejemplo, acetato de sodio, monolaurato de sorbitán, oleato de trietanolamina y ciclodextrinas.

La implantación de un sistema de liberación sostenida o de liberación lenta, de modo que se mantenga un nivel constante de dosificación (véase, por ejemplo, las Patentes de los Estados Unidos Nos. 3,710,795) también se contempla en este documento. En resumen, un compuesto proporcionado en este documento puede dispersarse en una matriz interna sólida, por ejemplo, polimetilmetacrilato, polibutilmetacrilato, cloruro de polivinilo plastificado o no plastificado, nailon plastificado, tereftalato de polietileno plastificado, caucho natural, poliisopreno, poliisobutileno, polibutadieno, polietileno, copolímeros de etileno-acetato de vinilo, cauchos de silicona, polidimetilsiloxanos, copolímeros de carbonato de silicona, polímeros hidrofílicos tales como hidrogeles de ésteres de ácido acrílico y metacrílico, colágeno, alcohol polivinílico reticulado y acetato de polivinilo parcialmente hidrolizado reticulado, que está rodeado por una membrana polimérica exterior, por ejemplo, polietileno, polipropileno, copolímeros de etileno/propileno, copolímeros de etileno/acrilato de etilo, copolímeros de etileno/acetato de vinilo, cauchos de silicona, polidimetil siloxanos, caucho de neopreno, polietileno clorado, cloruro de polivinilo, copolímeros de cloruro de vinilo con acetato de vinilo, cloruro de vinilideno, etileno y propileno, tereftalato de polietileno ionómero, cauchos de epiclorhidrina de caucho de butilo, copolímero de etileno/alcohol vinílico, terpolímero de etileno/acetato de vinilo/alcohol vinílico y/o copolímero de etileno/viniloxietanol, que es insoluble en fluidos corporales. El compuesto se difunde a través de la membrana polimérica exterior en una etapa de control de la tasa de liberación. El porcentaje de compuesto activo contenido en tales composiciones parenterales depende en gran medida de la naturaleza específica de las mismas, así como de la actividad del compuesto y las necesidades del sujeto.

La administración parenteral de las composiciones incluye administraciones intravenosas, subcutáneas e intramusculares. Las preparaciones para administración parenteral incluyen soluciones estériles listas para inyección, productos solubles secos estériles, tales como polvos liofilizados, listos para combinarse con un disolvente justo antes de su uso, incluidos comprimidos hipodérmicos, suspensiones estériles listas para inyección, productos insolubles secos estériles listos para ser combinados con un vehículo justo antes de su uso y emulsiones estériles. Las soluciones pueden ser acuosas o no acuosas.

Si se administran por vía intravenosa, los vehículos apropiados incluyen solución salina fisiológica o solución salina regulada con fosfato (PBS), y soluciones que contienen agentes espesantes y solubilizantes, tales como glucosa, polietilenglicol y/o polipropilenglicol y/o mezclas de los mismos.

Los vehículos farmacéuticamente aceptables usados en preparaciones parenterales incluyen vehículos acuosos, vehículos no acuosos, agentes antimicrobianos, agentes isotónicos, agentes reguladores, antioxidantes, anestésicos locales, agentes de suspensión y dispersión, agentes emulsionantes, agentes secuestrantes o quelantes y/u otras sustancias farmacéuticamente aceptables.

Los ejemplos de vehículos acuosos incluyen inyección de cloruro de sodio, inyección de Ringer, inyección de dextrosa isotónica, inyección de agua estéril, inyección de dextrosa y Ringer lactato. Los vehículos parenterales no acuosos incluyen aceites fijos de origen vegetal, aceite de semilla de algodón, aceite de maíz, aceite de sésamo y/o aceite de maní. Se deben agregar agentes antimicrobianos en concentraciones bacteriostáticas o fungistáticas a las preparaciones parenterales envasadas en envases multidosis que incluyen fenoles o cresoles, mercuriales, alcohol bencílico, clorobutanol, ésteres de ácido metil y propil p-hidroxibenzoico, timerosal, cloruro de benzalconio y/o cloruro de bencetonio. Los agentes isotónicos incluyen cloruro de sodio y dextrosa. Los agentes reguladores incluyen fosfato y/o citrato. Los antioxidantes incluyen bisulfato de sodio. Los anestésicos locales incluyen clorhidrato de procaína. Los agentes de suspensión y dispersión incluyen carboximetilcelulosa sódica, goma xantana, hidroxipropilmetilcelulosa y/o polivinilpirrolidona. Los agentes emulsionantes incluyen polisorbato 80 (TWEEN™ 80). Un agente secuestrante o quelante de iones metálicos incluye EDTA. Los portadores farmacéuticos también pueden incluir alcohol etílico, polietilenglicol y propilenglicol para vehículos miscibles en agua; e hidróxido de sodio, ácido clorhídrico, ácido cítrico o ácido láctico para el ajuste del pH.

La concentración del compuesto farmacéuticamente activo se ajusta para que una inyección proporcione una cantidad eficaz para producir el efecto farmacológico deseado. La dosis exacta depende de la edad, el peso y el estado del sujeto o animal, como se sabe en la técnica.

Las preparaciones parenterales de dosis unitaria pueden envasarse en una ampolla, un vial o una jeringa con aguja. Todas las preparaciones para administración parenteral deben ser estériles, como se conoce y practica en la técnica.

De manera ilustrativa, la infusión intravenosa o intraarterial de una solución acuosa estéril que contiene un compuesto activo es un modo eficaz de administración. Otra realización es una solución o suspensión acuosa u oleosa estéril que contiene un material activo inyectado según sea necesario para producir el efecto farmacológico deseado.

Los inyectables están diseñados para administración local y sistémica. En una realización, se formula una dosificación terapéuticamente eficaz para que contenga una concentración de al menos aproximadamente el 0.1 % p/p hasta aproximadamente el 90 % p/p o más, en ciertas realizaciones más del 1 % p/p del compuesto activo al(los) tejido(s) tratado(s).

El compuesto puede suspenderse en forma micronizada u otra forma apropiada o puede derivarse para producir un producto activo más soluble o para producir un profármaco. La forma de la mezcla resultante depende de un número de factores, incluido el modo previsto de administración y la solubilidad del compuesto en el portador o vehículo seleccionado. La concentración eficaz es suficiente para aliviar los síntomas de la condición y puede determinarse empíricamente.

Los polvos liofilizados, que pueden reconstituirse para su administración como soluciones, emulsiones y otras mezclas, también pueden usarse para llevar a cabo la presente invención. También pueden reconstituirse y formularse como sólidos o geles.

El polvo liofilizado estéril se prepara disolviendo un compuesto proporcionado en este documento, o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo, en un disolvente apropiado. El disolvente puede contener un excipiente que mejore la estabilidad u otro componente farmacológico del polvo o solución reconstituida, preparada a partir del polvo. Los excipientes que se pueden usar incluyen, pero no se limitan a, dextrosa, sorbital, fructosa, jarabe de maíz, xilitol, glicerina, glucosa, sacarosa u otro agente apropiado. El disolvente también puede contener una solución reguladora, tal como citrato, fosfato sódico o potásico u otra solución reguladora conocida para los expertos en la técnica, en una realización, a un pH aproximadamente neutro. La filtración estéril posterior de la solución seguida de liofilización en condiciones estándar conocidas para los expertos en la técnica proporciona la formulación deseada. En una realización, la solución resultante se repartirá en viales para liofilización. Cada vial contendrá una dosificación única o múltiples dosificaciones del compuesto. El polvo liofilizado se puede almacenar en condiciones apropiadas, tales como entre aproximadamente 4 °C y temperatura ambiente.

La reconstitución de este polvo liofilizado con agua para inyección proporciona una formulación para uso en administración parenteral. Para la reconstitución, el polvo liofilizado se agrega a agua estéril u otro vehículo apropiado. La cantidad precisa depende del compuesto seleccionado. Tal cantidad se puede determinar empíricamente.

Las mezclas tópicas se pueden preparar como se describe para la administración local y sistémica. La mezcla resultante puede ser una solución, suspensión, emulsiones o similares y puede formularse como cremas, geles, ungüentos, emulsiones, soluciones, elixires, lociones, suspensiones, tinturas, pastas, espumas, aerosoles, irrigaciones, pulverizaciones, supositorios, vendas, parches dérmicos o cualquier otra formulación apropiada para la administración tópica.

Los compuestos o derivados farmacéuticamente aceptables de los mismos pueden formularse como aerosoles para aplicación tópica, tal como por inhalación (véanse, por ejemplo, las Patentes de los Estados Unidos Nos. 4,044,126; 4,414,209; y 4,364,923, que describen aerosoles para la administración de un esteroide útil para el tratamiento de enfermedades inflamatorias, particularmente asma). Estas formulaciones para administración en el tracto respiratorio pueden estar en forma de aerosol o solución para un nebulizador, o como un polvo microfino para insuflar, solos o en combinación con un portador inerte tal como la lactosa. En dicho caso, las partículas de la formulación tendrán, en una realización, diámetros de menos de 50 micrómetros, en una realización de menos de 10 micrómetros.

Los compuestos pueden formularse para aplicación local o tópica, tal como para aplicación tópica en la piel y/o membranas mucosas, tales como en el ojo, en forma de geles, cremas y lociones y para aplicación en el ojo o para aplicación intracisternal o intraespinal. Se contempla la administración tópica para la administración transdérmica y también para la administración en los ojos o mucosas, o para terapias de inhalación. Pueden administrarse soluciones nasales del compuesto activo solo o en combinación con otros excipientes farmacéuticamente aceptables. Estas soluciones, en particular las destinadas a uso oftálmico, pueden formularse como soluciones isotónicas al 0.01 %-10 %, pH de aproximadamente 5-7, con sales apropiadas.

También se contemplan en este documento otras vías de administración, tales como parches transdérmicos, incluidos dispositivos iontoforéticos y electroforéticos, y/o administración rectal.

Los parches transdérmicos, incluidos los dispositivos iontoforéticos y electroforéticos, son bien conocidos para los expertos en la técnica. Por ejemplo, tales parches se describen en las Patentes de los Estados Unidos Nos6,267,983; 6,261,595; 6,256,533; 6,167,301; 6,024,975; 6,010715; 5,985,317; 5,983,134; 5,948,433 y 5,860,957.

Por ejemplo, las formas de dosificación farmacéutica para administración rectal son supositorios rectales, cápsulas y comprimidos para efecto sistémico. Los supositorios rectales como se usan en este documento significan cuerpos sólidos para la inserción en el recto que se funden o ablandan a la temperatura corporal liberando uno o más ingredientes farmacológica o terapéuticamente activos. Las sustancias farmacéuticamente aceptables usadas en los supositorios rectales son bases o vehículos y/o agentes para elevar el punto de fusión. Los ejemplos de bases incluyen manteca de cacao (aceite de teobroma), glicerina-gelatina, carbowax (polioxietilenglicol) y mezclas apropiadas de mono-, di- y/o triglicéridos de ácidos grasos. Pueden usarse combinaciones de las diversas bases. Los agentes para elevar el punto de fusión de los supositorios incluyen espermaceti y cera. Los óvulos rectales se pueden preparar ya sea por el método comprimido o por moldeo. El peso de un ovulo rectal puede ser de 2 a 3 g.

Los comprimidos y cápsulas para administración rectal se fabrican usando la misma sustancia farmacéuticamente aceptable y por los mismos métodos que las formulaciones para administración oral.

Los compuestos proporcionados en este documento, o los derivados farmacéuticamente aceptables de los mismos, también pueden formularse para dirigirse a un tejido, receptor, agente infeccioso u otra área particular del cuerpo del sujeto que se va a tratar. Muchos de estos métodos de direccionamiento son bien conocidos para los expertos en la técnica. Todos estos métodos de direccionamiento se contemplan en este documento para su uso en las presentes composiciones. Para ejemplos no limitativos de métodos de direccionamiento, véanse, por ejemplo, las Patentes de los Estados Unidos Nos. 6,316,652; 6,274,552; 6,271,359; 6,253,872; 6,139,865; 6,131,570; 6,120,751; 6,071,495; 6,060,082; 6,048,736; 6,039,975; 6,004,534; 5,985,307; 5,972,366; 5,900,252; 5,840,674; 5,759,542 y 5,709,874.

Las suspensiones liposomales, incluidos los liposomas dirigidos a tejidos, tales como los liposomas dirigidos a tumores, también pueden ser apropiadas como vehículos farmacéuticamente aceptables. Estos pueden prepararse según métodos conocidos por los expertos en la materia. Por ejemplo, las formulaciones de liposomas se pueden preparar como se describe en la Patente de los Estados Unidos No. 4,522,811. En resumen, se pueden formar liposomas tales como vesículas multilaminares (ML V) secando fosfatidilcolina de huevo y fosfatidilserina de cerebro (proporción molar 7:3) en el interior de un matraz. Se agrega una solución de un compuesto proporcionado en este documento en solución salina regulada con fosfato que carece de cationes divalentes (PBS) y se agita el matraz hasta que se dispersa la película lipídica. Las vesículas resultantes se lavan para eliminar el compuesto no encapsulado, se peletizan mediante centrifugación y luego se vuelven a suspender en PBS.

Los compuestos divulgados pueden dirigirse a tejidos diana específicos o composiciones diana usando ligandos específicos para el tejido diana o la composición diana, por ejemplo, usando ligandos o pares de ligando-receptor tales como anticuerpos y antígenos. Se conocen anticuerpos contra antígenos tumorales y contra patógenos. Por ejemplo, se han divulgado anticuerpos y fragmentos de anticuerpos que se unen específicamente a marcadores producidos por o asociados con tumores o lesiones infecciosas, incluidas infecciones virales, bacterianas, fúngicas y parasitarias, y antígenos y productos asociados con tales microorganismos, entre otros, en Hansen et al., Patente de los Estados Unidos No. 3,927,193 y Goldenberg, Patentes de los Estados Unidos Nos. 4,331,647; 4,348,376; 4,361,544; 4,468,457; 4,444,744; 4,818,709 y 4,624,846. Pueden usarse anticuerpos contra un antígeno, por ejemplo, un tumor gastrointestinal, de pulmón, de mama, de próstata, de ovario, testicular, cerebral o linfático, un sarcoma o un melanoma.

Se ha desarrollado una amplia variedad de anticuerpos monoclonales contra agentes de enfermedades infecciosas, y se resumen en una revisión de Polin, in Eur. J. Clin. Microbiol., 3(5): 387-398 (1984), que muestran disponibilidad inmediata. Estos incluyen anticuerpos monoclonales (MAbs) contra patógenos y sus antígenos, tales como los siguientes: Mab antibacterianos tales como los que combaten Streptococcus agalactiae, Legionella pneumophilia, Streptococcus pyogenes, Esherichia coli, Neisseria gonorrhosae, Neisseria meningitidis, Pneumococcus, Hemophilis influenzae B, Treponema pallidum, enfermedad de Lyme, espiroquetas, Pseudomonas aeruginosa, Mycobacterium leprae, Brucella abortus, Mycobacterium tuberculosis, toxina tetánica, Mab antiprotozoarios tales como aquellos contra Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax, Toxoplasma gondii, Trypanosoma rangeli, Trypanosoma cruzi, Trypanosoma rhodesiensei, Trypanosoma brucei, Schistosoma mansoni, Schistosoma japanicum, Mesocestoides corti, Emeria tenella, Onchocerca volvulus, Leishmania tropica, Trichinella spiralis, Theileria parva, Taenia hydatigena, Taenia ovis, Taenia saginata, MAb antivirales tales como aquellos contra el VIH-1, -2 y -3, hepatitis A, B, C, D, virus de la rabia, virus de la influenza, citomegalovirus, herpes simplex I y II, vrus tipo parvo del suero humano, virus respiratorio virus sincitial, virus de la varicela-zoster, virus de la hepatitis B, virus del sarampión, adenovirus, virus de la leucemia de células T humanas, virus de Epstein-Barr, virus de las paperas, virus de Sindbis, virus del tumor mamario del ratón, virus de la leucemia felina, virus de la coriomeningitis linfocítica, virus de las verrugas, virus de la lengua azul, virus Sendai, virus Reo, virus de la poliomielitis, virus del dengue, virus de la rubéola, virus de la leucemia murina, MAbs antimicoplasmáticos tales como aquellos contra Acholeplasma laidlawii, Mycoplasma arthritidis, M. hyorhinis, M. orale, M. arginini, M. pneumonia; etc.

Se han desarrollado MAb apropiados contra la mayoría de los microorganismos (bacterias, virus, protozoos, otros parásitos) responsables de la mayoría de las infecciones en humanos, y muchos se han utilizado previamente con fines de diagnóstico in vitro. Estos anticuerpos, y los MAb más nuevos que pueden generarse mediante métodos convencionales, pueden ser adecuados para su uso como agentes diana con los compuestos proporcionados en este documento.

Cabe señalar que pueden usarse mezclas de anticuerpos y clases de inmunoglobulinas, así como anticuerpos híbridos. Pueden usarse anticuerpos y fragmentos de anticuerpos multiespecíficos, incluidos biespecíficos e híbridos, en los métodos de la presente invención para detectar y tratar tejido diana y pueden comprender al menos dos anticuerpos o fragmentos de anticuerpos sustancialmente monoespecíficos diferentes, en los que al menos dos de los anticuerpos o fragmentos de anticuerpos se unen específicamente a al menos dos antígenos diferentes producidos o asociados con la lesión diana o al menos dos epítopos o moléculas diferentes de una sustancia marcadora producida o asociada con el tejido diana. Los anticuerpos multiespecíficos y los fragmentos de anticuerpos con especificidades duales se pueden preparar de manera análoga a los híbridos de marcadores antitumorales divulgados en la Patente de los Estados Unidos No. 4,361,544. Otras técnicas de preparación de anticuerpos híbridos se divulgan, por ejemplo, en las Patentes de los Estados Unidos Nos. 4,474,893 y 4,479,895, y en Milstein et al., Immunol. Today 5: 299 (1984).

Los fragmentos de anticuerpos útiles en la presente divulgación incluyen F(ab')₂, F(ab)₂, Fab', Fab, Fv y similares que incluyen fragmentos híbridos. Los fragmentos son Fab', F(ab')₂, Fab y F(ab)₂. También son útiles los subfragmentos que retienen la región hipervariable de unión a antígeno de una inmunoglobulina y que tienen un tamaño similar o menor que un fragmento Fab'. Esto incluirá proteínas modificadas genéticamente y/o recombinantes, ya sean monocatenarias o multicatenarias, que incorporen un sitio de unión a antígeno y en caso contrario funcionen in vivo como vehículos de dirección sustancialmente de la misma manera que los fragmentos de inmunoglobulina natural. Tales moléculas de unión de cadena sencilla se divulgan en la Patente de los Estados Unidos No. 4,946,778. Los fragmentos de anticuerpos Fab' pueden fabricarse convenientemente mediante escisión reductora de fragmentos de F(ab')₂, que a su vez pueden obtenerse por digestión con pepsina de inmunoglobulina intacta. Los fragmentos de anticuerpos Fab pueden obtenerse por digestión con papaína de inmunoglobulina intacta, en condiciones reductoras, o por escisión de fragmentos de F(ab)₂ que resultan de la cuidadosa digestión con papaína de la inmunoglobulina completa.

Un ligando o un miembro de un par de unión ligando-receptor puede conjugarse con los compuestos proporcionados en este documento para dirigir los compuestos a tejidos diana específicos o composiciones diana. Los ejemplos de pares de unión ligando-receptor se exponen en las Patentes de los Estados Unidos Nos. 4,374,925 y 3,817,837.

Se han identificado muchos compuestos que pueden servir como dianas para parejas de unión de ligando-receptor, y más específicamente, anticuerpos, y las técnicas para construir conjugados de tales ligandos a compuestos son bien conocidas por los expertos en esta técnica. Por ejemplo, Rakestraw et al. enseña la conjugación de cloro Sn (IV)6 a través de enlaces covalentes a anticuerpos monoclonales usando un portador de dextrano modificado (Rakestraw, S. L., Tompkins, R. D., and Yarmush, M. L., Proc. Nad. Acad. Sci. USA 87: 4217-4221 (1990). Los compuestos divulgados en este documento también se pueden conjugar con un ligando, tal como un anticuerpo, mediante el uso de un agente de acoplamiento. Es apropiado cualquier enlace que sea capaz de unir los componentes de manera que sean estables en condiciones fisiológicas durante el tiempo necesario para la administración y el tratamiento. En algunas realizaciones, el enlace puede ser un enlace covalente. El vínculo entre dos componentes puede ser directo, por ejemplo, cuando un compuesto está unido directamente a un agente diana, o indirecto, por ejemplo, cuando un compuesto está unido a un intermedio y ese intermedio está unido al agente diana.

Un agente de acoplamiento debe funcionar en condiciones de temperatura, pH, sal, sistema disolvente y otros reactivos que retengan sustancialmente la estabilidad química del compuesto, el esqueleto (si está presente) y el agente diana. Los agentes de acoplamiento deben unir las unidades estructurales de los componentes de manera estable, pero de manera que solo haya una desnaturalización o desactivación mínima o nula del compuesto o del agente de direccionamiento. Muchos agentes de acoplamiento reaccionan con una amina y un carboxilato para formar una amida, o un alcohol y un carboxilato para formar un éster. Los agentes de acoplamiento son conocidos en la técnica (véase, por ejemplo, M. Bodansky, "Principles of Peptide Synthesis", 2nd ed., y T Greene and P Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis”, 2nd Ed, 1991, John Wiley, NY).

Los compuestos o derivados farmacéuticamente aceptables de los mismos pueden envasarse como artículos de fabricación que contienen material de envasado y un compuesto o derivado farmacéuticamente aceptable del mismo proporcionado en este documento, que es eficaz para modular la actividad del cáncer y/o un tumor, o para el tratamiento, la prevención o el alivio de uno o más síntomas asociados con el cáncer y/o un tumor o en los que está implicado el cáncer y/o un tumor. Los artículos de fabricación pueden comprender además una etiqueta que indique que el compuesto o composición, o su derivado farmacéuticamente aceptable, se utiliza para modular la actividad del cáncer y/o un tumor, o para el tratamiento, prevención o alivio de uno o más síntomas asociados con un cáncer y/o un tumor o en el que está implicado un cáncer y/o un tumor.

Los artículos de fabricación proporcionados en este documento contienen materiales de envasado. Los materiales de envasado para su uso en el envasado de productos farmacéuticos son bien conocidos para los expertos en la técnica. Véanse, por ejemplo, las Patentes de los Estados Unidos Nos. 5,323,907; 5,052,558 y 5,033,252. Los ejemplos de materiales de envasado farmacéutico incluyen, pero no se limitan a, envases tipo blíster, frascos, tubos, inhaladores, bombas, bolsas, viales, recipientes, jeringas, frascos y cualquier material de envasado apropiado para una formulación seleccionada y el modo previsto de administración y tratamiento. Se contempla una amplia gama de formulaciones de los compuestos y composiciones proporcionadas en este documento, así como una variedad de tratamientos para el cáncer y/o un tumor.

Los ejemplos que no caen dentro de la invención reivindicada también proporcionan kits, que pueden incluir los elementos necesarios para llevar a cabo las terapias descritas anteriormente. En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, un kit puede comprender un soporte que se compartimenta para recibir en su interior uno o más recipientes, como tubos o viales. Uno o más de los recipientes pueden contener un compuesto descrito en este documento. Uno o más recipientes pueden contener una o más enzimas o reactivos para utilizar en las reacciones deseadas. Estas enzimas pueden estar presentes solas o mezcladas, en forma liofilizada o en agentes reguladores apropiados. El kit puede contener todos los elementos adicionales necesarios para llevar a cabo los métodos de la divulgación.

En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, un kit de la presente invención comprende un primer recipiente que comprende una composición farmacéutica de la presente divulgación. En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, la composición comprende un portador farmacéutico y un compuesto de fórmula (I) o un profármaco o derivado del mismo, y sales del mismo.

En algunos ejemplos que no caen dentro del alcance de la invención reivindicada, el kit puede comprender una segunda composición farmacéutica, en el que la segunda composición farmacéutica comprende un segundo vehículo farmacéutico y un segundo agente terapéutico. El kit puede almacenar por separado la primera y la segunda composición, opcionalmente en recipientes separados. Cualquier agente terapéutico adicional apropiado puede estar presente en la segunda composición. En algunas realizaciones, el segundo agente terapéutico es un inhibidor de puntos de control y/o un agente quimioterapéutico (por ejemplo, un agente quimioterapéutico citotóxico).

La presente divulgación se describirá ahora con más detalle con referencia a los siguientes ejemplos. Sin embargo, estos ejemplos se dan con fines ilustrativos y no deben interpretarse como limitativos del alcance de la invención.

Ejemplos

El ejemplo 7 es según la invención; los otros ejemplos son para referencia.

Ejemplo 1

Los DAMP son proteínas que se expresan en la superficie de las células cancerosas (por ejemplo, calreticulina (CRT)) o se liberan de las células cancerosas (por ejemplo, ATP y HMGB1) después de la exposición a agentes inductores de DAMP Los DAMP señalan la muerte por cáncer mediada por células inmunitarias.

Las células de melanoma B16F10 se trataron con 15dPMJ2 (PMJ) 5 uM, oxaliplatino (OX) 5 uM, vehículo farmacológico (VEH, DMSO al 0.1 %) o las células permanecieron sin tratar (UT) durante 2 horas. Después de 2 horas, se midió la expresión de calreticulina (CRT) de la superficie celular mediante análisis de citometría de flujo. Como se muestra en la figura 1, la expresión de CRT en la superficie celular mediada por 15dPMJ2 es significativamente mayor que la del oxaliplatino, que es un inductor DAMP conocido.

Ejemplo 2

Las células de melanoma B16F10 se trataron con 15dPMJ2 (PMJ) 5 uM, oxaliplatino (OX) 5 uM, vehículo farmacológico (VEH, DMSO al 0.1 %) o las células permanecieron sin tratar (UT) durante 4 horas. Después de 4 horas de tratamiento con el fármaco, se obtuvo el medio de cultivo celular de células B16F10 para medir los niveles de ATP. Como se muestra en la figura 2, 15dPMJ2 aumentó significativamente la liberación de ATP en comparación con las células tratadas con vehículo y oxaliplatino.

Ejemplo 3

Las células B16F10 se trataron con 15dPMJ2 (PMJ), oxaliplatino (OX) o vehículo farmacológico (VEH) en presencia o ausencia del inhibidor de estrés ER, GSK₂656157 ("inhibidor" (I)). Como se muestra en la figura 3, el inhibidor disminuyó significativamente los niveles de ATP extracelular, lo que demuestra que se requiere estrés en el ER para la secreción de ATP mediada por 15dPMJ2.

Ejemplo 4

Brefeldin A es una molécula que inhibe el movimiento de proteínas desde el ER hasta el aparato de Golgi (inhibe el tráfico entre ER y Golgi). Las proteínas deben moverse desde el ER hasta el aparato de Golgi para trasladarse a la superficie celular.

Las células B16f10 se trataron con vehículo (V), Brefeldin A (BFA), 15dPMJ2 (PMJ) o Brefeldin 15dPMJ2. Como se muestra en la figura 4, Brefeldin A inhibió la expresión de CRT en la superficie celular mediada por 15dPMJ2, lo que demuestra que el ER es esencial para la expresión de DAMP

Ejemplo 5

15dPMJ2 también provoca la expresión de DAMP en células de cáncer de piel no melanoma (NMSC) y cáncer de colon.

Las células A431 (NMSC) y las células HT-29 (cáncer de colon) se trataron con 15dPMJ2, oxaliplatino (OX), vehículo farmacológico (VEH) o las células no se trataron (UT) durante 2 horas. A continuación, se detectó la expresión de CRT en la superficie celular mediante análisis de citometría de flujo. Como se muestra en las figuras 5 y 6, 15dPMJ2 es un potente inductor de la expresión de DAMP en diferentes tipos de células cancerosas.

Ejemplo 6

15dPMJ2 aumenta preferentemente la señalización profagocítica en NMSC.

Las líneas celulares de queratinocitos HaCaT tumorigénicas, A431 y no tumorigénicas se trataron con 15dPMJ2 o vehículo farmacológico (DMSO al 0.1 %) y la expresión de la superficie celular de calreticulina (CRT; señal "eat me") y CD47 (señal "don't eat me") se detectó mediante la realización de análisis de citometría de flujo. Como se muestra en las figuras 7 y 8, 15dPMJ2 aumentó la señal de "eat me" (CRT) y disminuyó la señal de "don't eat me" (CD47) en las células tumorales; se espera que esta acción aumente la fagocitosis de células dendríticas del tumor. Por el contrario, 15dPMJ2 provocó un ligero aumento en la expresión de CRT en la superficie celular, pero también un aumento en la señal de "don't eat me" (CD47) en queratinocitos no tumorales; se espera que esta acción evite que la célula no tumoral sea fagocitada por las células dendríticas.

Ejemplo 7

Las células de melanoma tratadas con 15dPMJ2 provocan la maduración de las células dendríticas.

Las células de melanoma B16F10 permanecieron sin tratar (UT) o se trataron con lipopolisacárido (LPS; activador de células dendríticas de control positivo), vehículo (VEH; DMSO al 0.1 %), oxaliplatino 50o uM (OXA; inductor de DAMP de control positivo) o 15dPMJ2 (PMJ) 5 uM). A continuación, las células cancerosas tratadas con el fármaco se cocultivaron con células dendríticas inmaduras que se aislaron de la médula ósea de ratones C57BL/6 (cepa de ratón de la que se derivó la línea celular B16F10). Luego se detectaron marcadores de superficie celular para la maduración de células dendríticas. Como se muestra en la figura 9, 15dPMJ2 aumentó significativamente la expresión de MHC II y CD86. Este hallazgo indica que 15dPMJ2 hará que las células tumorales sean fagocitadas por las células dendríticas. El oxaliplatino (OXA), que se usó en una concentración 100 veces mayor que la de 15dPMJ2, provocó niveles similares de maduración de células dendríticas.

Ejemplo 8

Para determinar si 15dPMJ2 puede aumentar la cantidad de células inmunitarias que atacan los tumores en los tumores de melanoma, se realizó un estudio piloto de xenoinjerto. Se inyectaron células de melanoma B16F10 en la región del flanco subcutáneo de ratones C57BL/6 y se permitió el crecimiento del tumor hasta que los tumores eran palpables. A continuación, los animales se trataron por vía peritumoral con 15dPMJ2, oxaliplatino (inductor de DAMP de control positivo), cisplatino (inductor de DAMP de control negativo), vehículo (PBS que contenía 0.1 % de DMSO) o animales que no fueron tratados. Después de 5 días de tratamiento farmacológico, los animales fueron sacrificados y los tumores extirpados para el análisis de células inmunitarias infiltrantes (TIL). Los tumores se disociaron para crear una suspensión de células individuales. La expresión de MHC II y CD86 (marcadores de maduración de células dendríticas) se analizó mediante la realización de análisis de citometría de flujo.

El tratamiento con 15dPMJ2 aumentó la cantidad de células dendríticas maduras que se infiltraron en el tumor en comparación con los animales tratados con cisplatino (CPT), los tratados con oxaliplatino (OXA) y los animales no tratadas, como se muestra en la figura 10. Aunque sin desear estar ligado a ninguna teoría en particular, la presencia de células dendríticas maduras en los tumores indica que las células dendríticas están implicadas en la actividad antitumoral de 15dPMJ2.

Claims (7)

REIVINDICACIONES

1. Un método ex vivo de activación de una célula inmunitaria, el método ex vivo que comprende poner en contacto una célula inmunitaria con un compuesto de fórmula (I), fórmula (II) y/o una sal de los mismos:

para proporcionar una célula inmunitaria modificada genéticamente.

2. El método ex vivo de activación de una célula inmunitaria según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la célula inmunitaria se activa para atacar y/o destruir células cancerosas y/o células tumorales.

3. El método ex vivo de activación de una célula inmunitaria según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la célula inmunitaria es una célula dendrítica y la célula dendrítica se activa para captar, procesar y/o presentar péptidos antigénicos derivados de patógenos o derivados de hospedadores a células T naive en tejidos periféricos.

4. El método ex vivo de activación de una célula inmunitaria según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la célula inmunitaria es una célula T y el método activa la célula T para producir una respuesta inmunitaria celular multivalente contra un antígeno dado.

5. El método ex vivo de activación de una célula inmunitaria según la reivindicación 4, en el que la respuesta es mayor que la respuesta lograda con el antígeno dado solo.

6. El método ex vivo de activación de una célula inmunitaria según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, que comprende además cultivar la célula inmunitaria modificada genéticamente.

7. Una célula inmunitaria modificada genéticamente proporcionada por el método ex vivo de cualquiera de las reivindicaciones anteriores.