WO2012091534A1 - Антибактериальный агент для лечения инфекционных заболеваний бактериальной природы - Google Patents

Антибактериальный агент для лечения инфекционных заболеваний бактериальной природы Download PDF

Info

Publication number
WO2012091534A1
WO2012091534A1 PCT/KZ2011/000019 KZ2011000019W WO2012091534A1 WO 2012091534 A1 WO2012091534 A1 WO 2012091534A1 KZ 2011000019 W KZ2011000019 W KZ 2011000019W WO 2012091534 A1 WO2012091534 A1 WO 2012091534A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
antibacterial agent
agent according
iodine
aba
drug
Prior art date
Application number
PCT/KZ2011/000019
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Александр Иванович ИЛЬИН
Мурат Есенгалиевич КУЛМАНОВ
Original Assignee
Республиканское Государственное Предприятие "Научный Центр Противоинфекционных Препаратов" Комитета Промышленности Министерства Индустрии И Новых Технологий Республики Казахстан"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority to JP2013547373A priority Critical patent/JP6041811B2/ja
Priority to SI201131386T priority patent/SI2722053T1/en
Priority to RS20171276A priority patent/RS56687B1/sr
Priority to NO11853027A priority patent/NO2722053T3/no
Priority to US13/994,631 priority patent/US10149890B2/en
Priority to SG2013047105A priority patent/SG192563A1/en
Priority to EP11853027.8A priority patent/EP2722053B1/en
Application filed by Республиканское Государственное Предприятие "Научный Центр Противоинфекционных Препаратов" Комитета Промышленности Министерства Индустрии И Новых Технологий Республики Казахстан" filed Critical Республиканское Государственное Предприятие "Научный Центр Противоинфекционных Препаратов" Комитета Промышленности Министерства Индустрии И Новых Технологий Республики Казахстан"
Priority to ES11853027.8T priority patent/ES2476240T3/es
Priority to CN201180063245.3A priority patent/CN103442728B/zh
Priority to DK11853027.8T priority patent/DK2722053T3/da
Priority to PL11853027T priority patent/PL2722053T3/pl
Priority to DE11853027.8T priority patent/DE11853027T1/de
Priority to LTEP11853027.8T priority patent/LT2722053T/lt
Publication of WO2012091534A1 publication Critical patent/WO2012091534A1/ru
Priority to IL227132A priority patent/IL227132B/en
Priority to CY20142200001T priority patent/CY20142200001T2/el
Priority to US14/850,167 priority patent/US10251939B2/en
Priority to HRP20180075TT priority patent/HRP20180075T1/hr
Priority to US16/238,686 priority patent/US20190134157A1/en

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A61K38/2013—IL-2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/18—Iodine; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/38—Albumins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/549—Sugars, nucleosides, nucleotides or nucleic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/643—Albumins, e.g. HSA, BSA, ovalbumin or a Keyhole Limpet Hemocyanin [KHL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
    • A61K9/5169—Proteins, e.g. albumin, gelatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A61P31/06—Antibacterial agents for tuberculosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals

Definitions

  • the invention relates to medicine, namely to pharmaceuticals and can be used in the treatment of diseases of a bacterial nature, especially in the treatment of diseases caused by drug-resistant strains of microbes, and bacterial-viral (mixed) infections.
  • Tuberculosis drug resistance is the most complex form of drug resistance currently known. According to WHO, since the beginning of the 90s, several outbreaks of multiresistant tuberculosis have been recorded in different regions of the planet.
  • iodine easily passes through the bilipid cell membranes of microorganisms and penetrates into the cell.
  • the antimicrobial effect of iodine compounds is due to the ability of iodine (elemental iodine, hypoiodic acid, iodine cation) to interact with NH 2 -rpynnaMH amino acids (lysine, histidine, arginine, etc.), as well as with nucleotides (adenine, cytosine, guanine), forming ⁇ - iodine derivatives.
  • iodine electroactive oxygen species
  • iodine The ability of iodine to easily penetrate through cell membranes makes its use especially valuable in those infections whose main development takes place in intracellular structures (brucellosis, chlamydia, viral hepatitis, etc.).
  • Known therapeutic drug "Iodomidol” with a bactericidal and virucidal effect containing iodine, potassium or sodium iodide, a synthetic water-soluble polymer, natural polymers, for example polysaccharides and mono- and oligosaccharides in the following ratio of components, g / l:
  • Known virucidal pharmaceutical preparation (EP 0978289 A1, 02/03/2000), having an antiviral effect, containing iodine, potassium or sodium iodide, a synthetic water-soluble polymer, a mixture of natural mono-, oligo- and polysaccharides and lithium chloride in the following ratio of components, g / l : iodine 0.8 - 25 potassium iodide 1.2 - 38 lithium chloride 0.1 - 20
  • a bactericidal and virucidal pharmaceutical agent is known for the prophylaxis and treatment of mono- and mixed infections, including tuberculosis, brucellosis, plague, hepatitis, HIV, containing a pool of proteins and / or halogenated proteins, carbohydrates and / or halogenated carbohydrates, a synthetic water-soluble polymer, lithium chloride , potassium or sodium iodide, iodine, water or saline in the following ratio of components (g / l):
  • the bactericidal and virucidal pharmaceutical agent is a complex physicochemical system formed by mono- and polyfunctional ligands (anions, proteins, carbohydrates, synthetic water-soluble polymers) and acids (iodine, alkali metal cations) in a pseudo-equilibrium state. In this system, conjugated processes of complex formation, association and dissociation occur.
  • iodine in the pharmaceutical composition not only enhances the bactericidal and virucidal properties due to the properties of iodine itself, but also provides a synergistic effect for each individual and all in the aggregate of active substances present in the drug in equilibrium concentrations.
  • This product contains halogenated compounds: halogenated proteins and halogenated carbohydrates.
  • Known iodine complex of alkyl polyglycosides (WO 9639839 A1) containing (% wt.) From 0.5 to 30 iodine, from 0.2 to 14 iodide in the form of a salt, acid or a mixture thereof and from 2 to 85 Sugar surfactant selected from the Sugar group containing alkyl glucose ether, aldobionamide, gluconamide, glyceramide, glyceroglucolipid, fatty polyhydroxy acid amides, alkyl polyglucosides of the general formula R 1 0 (R 2 0) b (Z) a, where R] is a monovalent organic radical containing from 6 to 30 carbon atoms; R 2 is a divalent alkylene radical containing from 2 to 4 carbon atoms; Z is a sugar derivative containing 5 or 6 carbon atoms; b is a natural number from 0 to 12; a is a natural number from 1 to 6.
  • a known method of producing immobilized enzymes using the complexation reaction with molecular iodine and potassium iodide (RU 2157405 C2), as a result of the complexation reaction, proteins containing bound iodine are formed, which from the solution turn into a solid state state, i.e. water-insoluble complexes are formed.
  • the solid-state state is characterized by the formation of polydisperse particles ranging in size from several microns to tens and hundreds of microns, which (particles), due to the large total surface area of active centers of enzymes capable of interacting with molecules of microbial substrates, provide the antibacterial effect of immobilized enzymes.
  • the iodine included in the complex provides a microbicidal effect.
  • Known drug for the introduction of antiseptic substances, including halogen, in the lower respiratory tract containing at least one antiseptic in combination with a carrier in the form of particles obtained by known methods, and the carrier contains at least one liposome preparation, microsphere preparation, nanoparticle preparation , a preparation of large porous particles or a preparation of molecules coated with a polymer using a pulsed laser ranging in size from 1 to 30 microns (RU 2212884 C2).
  • the object of the invention is the creation of an antibacterial agent (ABA) for the treatment of diseases of a bacterial nature, including hospital infections and drug-resistant tuberculosis.
  • ABA antibacterial agent
  • Additional objectives of this invention are also the development of a method for producing an antibacterial agent and the creation of a drug based on ABA for the treatment of infectious diseases of a bacterial nature.
  • the technical result of the invention is to increase the effectiveness of the ABA in. vivo by activating immunocompetent cells.
  • an ABA which is an ionic nanostructured complex (INSK) formed by proteins and / or carbohydrates, metal salts and iodine intercalated in them, in order to obtain an ordered structure of the antibacterial agent and the necessary immunotropic effect
  • the complexation reaction is carried out in four stages, the first of which is the interaction of carbohydrates and proteins with metal salts, the second stage is the intercalation of 5-95% of the required amount of yes, in the complex formed at the first stage of the complexation reaction at a certain ionic strength, the third stage is the introduction of proteins containing at least one terminal amino acid with electron-donating functional groups and a specific site that determines the necessary immune response into the complexation reaction, and the fourth stage is intercalation of the remaining amount of iodine into an antibacterial agent.
  • INNK ionic nanostructured complex
  • an ABA is proposed, which, despite having a weak antitumor activity, a weak radioprotective effect, however, together with the unique ability to restore hematopoietic function of bone marrow, can be of great practical importance for the prevention of possible side effects of chemo and radiotherapy in the complex drug accompanying therapy of tumors
  • the proteins and / or polypeptides that make up the ABA have immunogenic activity and contain at least one terminal amino acid with electron-donating functional groups, which, when ABA is introduced into the body, anchor in the region of stimulating and costimulating receptors of an immunocompetent cell terminal amino acids with hydrophobic properties and containing electron-donating functional groups, and specific sites of these proteins activate the immune mpetentnye cells of the first and second lines of defense - monocytes, macrophages and cytotoxic T lymphocytes.
  • the invention includes a dosage form of the claimed ABA.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be prepared in the form of a solution, suspension, parenteral composition, ointment, cream, aerosol, powder, tablet, capsule, or other suitable dosage form that is administered in certain doses, applied or mixed accordingly .
  • Pharmaceutical formulations may include:
  • compositions - filler in particular pyrogen-free water, buffer or normal saline;
  • ointments creams, aerosols - a carrier, in particular vegetable or synthetic oil, lanolin, petrolatum or high molecular weight alcohols; c) tablets or capsules - diluents, in particular lactose, binders, lubricants (e.g. stearic acid), and a cleavage agent (e.g. corn starch).
  • a carrier in particular vegetable or synthetic oil, lanolin, petrolatum or high molecular weight alcohols
  • tablets or capsules - diluents in particular lactose, binders, lubricants (e.g. stearic acid), and a cleavage agent (e.g. corn starch).
  • compositions according to the present invention can be combined with antibacterial (e.g. antibiotics), antiviral, antitumor, immunomodulatory and other agents, if in combination they give a synergistic effect with the claimed pharmaceutical compositions, or are indifferent to them, but in combination expand therapeutic spectrum.
  • antibacterial e.g. antibiotics
  • ABA can be used as a non-medicinal product (dietary supplement, food supplement, feed additive, component of hygiene products, such as lotions, toothpastes, chewing gums, etc.) under certain conditions.
  • non-medicinal product dietary supplement, food supplement, feed additive, component of hygiene products, such as lotions, toothpastes, chewing gums, etc.
  • Such conditions include, for example, the use in the compositions of only those components and at those concentrations indicated in the Codex Alimentarius.
  • Drugs based on the complex compound in accordance with the present invention have an immunomodulating effect and can be used to prevent infectious diseases, in particular seasonal flu, acute respiratory viral infections, iodine deficiency, and also as an adaptogen.
  • the present invention is based on the unexpected fact that in solutions of salts of alkali and alkaline earth metals, with a certain ionic strength in the presence of carbohydrate and / or protein, the complex is released into the solid phase upon intercalation of iodine.
  • Another unexpected fact underlying the present invention is that, as established by experimental data, the present invention makes it possible to introduce proteins containing sites with a specific immunological function into the antibacterial agent.
  • FIG. 1-4 are micrographs of various crystal structures of the preparation FS-1.
  • FIG. Figure 5 shows the dependence of the yield of the calcium complex of the triiodide ion with carbohydrate on the ionic strength.
  • FIG. Figure 6 shows the dependence of the yield of magnesium complex of triiodide ion with carbohydrate on ionic strength.
  • FIG. 7 shows the formation of stable coordination compounds in the system of carbohydrate-protein-salt LiCl, MgCl 2 .
  • FIG. 8 shows structures illustrating the interaction of molecular iodine with lithium halides, hydrobohydrates, and protein side amino acid residues.
  • FIG. 9 is a diagram of the formation of an ABA subunit.
  • FIG. 10 a-z are micrographs of the compounds of examples 1-9.
  • FIG. 11 shows a micrograph of the compound of example 5 (FS-1)
  • FIG. 12 shows the dynamics of rat survival in the control and experimental groups within 30 days after irradiation: 1) irradiation at a dose of 800 R; 2) irradiation at a dose of 800 R against the background of oral administration of 1.0 ml of HRP 30 minutes before irradiation.
  • a third and fourth stage of complexation are added to the preparation method, in order to ensure the preservation of the properties of immunogenic proteins as part of an antibacterial agent.
  • the components, their ratio and the range of ionic strength are essential features in the synthesis of ABA. All the signs that determine the composition and structure of the ABA are necessary and sufficient to achieve the goal. None of them can be excluded or replaced by another, otherwise the technical result will not be achieved.
  • the selection of both the qualitative composition of the substances that form the ABA and the quantitative ratios of the components and the range of ionic strength was based on the laws of complexation and on numerous experimental data on the determination of the antibacterial activity of ABA depending on the composition of its constituent components.
  • the qualitative composition of the substances was chosen based on their biological significance and chemical properties that provide antibacterial action.
  • Carbohydrates selected by the authors of the present invention as ligands are an extremely important class of natural compounds. In biology and medicine, the importance of carbohydrates lies in the dominant role that they play in animal organisms, and in the complexity of their functions. Carbohydrates such as carbohydrates are involved in most biochemical processes in the form of high molecular weight particles, although many biological fluids contain mono- and oligosaccharides (Compressive Organic Chemistry / Edited by E. Haslam. V. 5. Biological Compounds Pergamon Press, 19).
  • ABA which is a complex compound of iodine with carbohydrates and / or proteins and metal salts, is the presence of proteins with a certain set of electron-donating functional groups in terminal amino acids and sites.
  • the present invention also includes low molecular weight peptides and their constituent monomers.
  • the transport role of proteins is extremely important because the diffusing molecule bound to the protein, when passing through the membrane is not chemically modified and does not combine with other types of molecules.
  • Mediated, or lightweight, membrane transport processes are characterized by saturation kinetics (i.e., the transport system may be saturated with the transported solute) and the specificity of the transported substance.
  • transporting protein molecules capable of reversibly binding specific substrates, including the iodine molecule. These transporting protein molecules have different names: transport systems, carriers, carriers, or translocases.
  • Table 1 presents the compositions of ABA synthesized from carbohydrates, proteins and iodine at different ionic strength of the solution created by salts of alkali and alkaline earth metals.
  • ABA can form nanocrystals (FigL: 1A with a magnification of 400x, 1B with a magnification of 40000x), microcrystals (Fig.2: 2A with a magnification of 5000x, 2B with a magnification of 12000x) are quite large (0.1 mm ), single crystals (FIG. 3) or crystals of various sizes ( Figure 4).
  • the size of the crystals decreases with increasing content of carbohydrate relative to the protein (polypeptide), ceteris paribus (ionic strength of the solution), as well as with an increase in the ratio of iodine: carbohydrate and / or protein (peptide).
  • the ABA synthesis reaction proceeds sequentially by complexation reactions. At the first stage, complexes are formed between carbohydrate (), protein (L 2 ), polymers (L 3 ) and salts containing calcium and magnesium cations.
  • the triiodide ion formed as a result of reaction (3) is also a strong complexing agent, as well as molecular iodine.
  • the yield of the final product depends on the physicochemical parameters of the reaction (table 2 and 3).
  • the structure of the ABA and the sequence of acts of formation of this structure, according to the method for producing an antibacterial agent of the present invention, can be represented as in FIG. 7.
  • blue balls are carbon atoms, blue are nitrogen, yellow are chlorine, red are oxygen, black are magnesium, brown are lithium.
  • ⁇ -106.01 kcal / mol
  • structure II ⁇ -79.12 kcal / mol
  • structure III ⁇ -88.86 kcal / mol.
  • Table 4 presents the lengths of coordination bonds and ⁇ of the stabilization energy of the complexes.
  • Ei is the total energy of the complex
  • E 2 is the total energy of LiC10HC 2 H 5
  • E 3 is the total energy of complex 1 2 with the amino acid residue.
  • the most stable complex is formed with the participation of arginine (structure VII), and bond II breaks, and the properties of molecular iodine are not preserved in such a complex.
  • a comparison of the stabilization energies of molecular iodine complexes with arginine (-18.17 kJ / mol) and adenosine (-10.93 kcal / mol) and guanine (-11, 50 kJ / mol) indicates that if arginine is included in the ABA , then in this case the molecule 1 2 will remain in the structure of the preparation and will not form a complex with DNA nucleotides.
  • the yield of the final product depends on the physicochemical parameters of the reaction — Cobr , the stoichiometric coefficient n, and the concentration of the reagents.
  • the formation of the ABA subunit occurs under the influence of the ionic strength of the solution in the range from 0.015 to 10.2, corresponding to a pressure of 286 - 2860 kg / cm.
  • the carbohydrate and protein macromolecules are packed in such a way that the terminal amino acid triplets not involved in complex formation are oriented outward from the main skeletal chain of the protein and / or polypeptide and anchor the antibacterial agent on the cell membrane by means of terminal amino acids containing electron-donating functional groups, as directly indicated by the data on the immunotronic effect of ABA, given below.
  • the method for preparing the claimed ABA is as follows.
  • a weighed portion of carbohydrate is dissolved in a suitable solvent, for example water, dioxane, etc.
  • a suitable solvent for example water, dioxane, etc.
  • certain weights of metal salts and sodium chloride are introduced into this solution to create the corresponding ionic strength of the solution (Product A).
  • a suspension of protein is dissolved in a suitable solvent, for example water, dioxane, etc.
  • a suitable solvent for example water, dioxane, etc.
  • certain weights of metal salts and sodium chloride are introduced into this solution to create the corresponding ionic strength of the solution (Product B).
  • a suitable solvent for example, chloroform, hexane, etc. Dissolve a sample of crystalline iodine or iodine and potassium iodide, and the solution is stirred until iodine is completely dissolved (Product B).
  • ABA antibacterial agent
  • a medicine based on this antibacterial agent is obtained by known methods in the form of a solution for oral administration, a solution for parenteral use, tablets and capsules.
  • the analysis of the antibacterial agent was carried out: by methods of indicator titration, potentiometric titration (Sartorius Professional Meter PP-50), capillary electrophoresis (Agilent Technologies CE3D, USA) vibrational (IR) spectroscopy with Fourier transform (Thermo
  • Microscopy of complex compounds was carried out using a Quanta 200i 3D scanning electron microscope (FEI Company, USA).
  • the cytotoxicity of the preparations was determined in vitro by microscopy and using the MTT test in monolayer transplantable cultures of RD, MDCK, MRC-5 cells, suspension cultures of MT-2 and H9 by a micromethod in 96 well plates incubated in an atmosphere with 5% CO 2 at 37 ° FROM. (table 5)
  • the antimycobacterial effect of ABA FS-1 was studied by the growth dynamics of mycobacterial strains M. tuberculosis H37Rv, M. tuberculosis MS-115 and M. bovis Bovinus in enriched liquid medium Middlebrook 7H9 in the presence of different concentrations of the drug compared to the growth of these strains on a medium not containing preparations and the medium containing the preparation of the first row of isoniazid at a concentration of 0.1 ⁇ g / ml.
  • the study was conducted in triplicates. Growth detection was carried out using an automated crop growth accounting system Bactec MGIT 960 (Becton Dickenson, USA) in special MGIT tubes. Mycobacterial culture growth was detected every hour using Epicenter software (Becton Dickenson, USA).
  • Example 5 To study the anti-tuberculosis effect of an ABA drug according to Example 5 (FS-1), we used a model of aerogenic infection in female albino guinea pigs. Infection produced in a GlasCol aerosol chamber at a dose of 150 CFU of M. tuberculosis H37Rv per lung.
  • guinea pigs of the Dunkin Hartley line were used. Infection was performed intramuscularly at the rate of 0.5 ml of suspension containing - 307 - 692 bacterial bodies of M. tuberculosis H 37 R V in 1 ml per animal.
  • Determination of the antiviral effect of ABA in vitro against influenza virus A / FPV / Waybrige / 78 / H7N7 and herpes simplex virus strain Victory was carried out by a micromethod on transplantable cell cultures of MDSK and RD. The substances were introduced in concentrations of 1/2, 1/4, 1/8, 1/16 of the maximum tolerated concentration of BMD.
  • the antiviral effect of the FS-1 preparation against the human immunodeficiency virus HIV-1 was studied on MT-2 cell culture (human transformed T-lymphoblastoid cells with the HTLV-1 virus), the reference substance is azidothymidine.
  • the source of the virus-containing material was the culture fluid of H9 / HTLV-IIIB cells chronically infected with the human immunodeficiency virus HIV-1 strain (LAI).
  • the study of the cytogenetic activity of ABA was carried out by taking into account the chromosomal aberrations in leukocytes of the bone marrow of mammals in vivo in mice.
  • the study of the cytogenetic activity of ABA was carried out using a micronuclear test in polychromatic and normochromatic erythrocytes of the bone marrow of mice in vivo.
  • mice The study of dominant lethal mutations in spermatozoa in mammals in vivo with the introduction of the drug FS-1 was carried out in mice.
  • peripheral blood and bone marrow of animals was collected according to the method [Bezirganyan K.V., Davtyan T.K., Galoyan A.A. Hypothalamic proline rich polypeptide regulates hematopoiesis // Neurochem. Res. - 2010 .-- Vol. 35. - P. 917-924. Gershanovich M.L., Paykin M.D. Symptomatic treatment for malignant neoplasms. 2nd ed. - Moscow: Medicine, 1986. - 285 s]
  • Myelosuppression was assessed by calculating the absolute and relative contents of leukocytes, lymphocytes, and peripheral blood monocytes using an automatic hematology analyzer Celly v 2.20, Hycel Diagnostics.
  • ABA The synthesis of ABA is carried out in a laboratory reactor of the company "QVF ENGINEERING)) GMBH D-5122 Mainz type RimrgefaB 2L with constant stirring. The temperature is maintained by a NiBeG thermostat ministat 230 CC2. 130 g of carbohydrate are dissolved in 500 ml of water at a temperature of 50 ° C. Then add 3.0 g of sodium chloride and 1.98 g of dissolved calcium chloride in 100 ml of water. The mixture was mixed well and cooled to 43 ° C (Product A).
  • the ionic strength of the solution is 13.6.
  • the resulting ionic nanostructured ABA complex is isolated from the reaction medium by an acceptable method, for example, by centrifugal chromatography on a Kromaton FCPC apparatus (Fast Centrifugal Chromatography) and dried (Fig. 10 (a)).
  • the resulting ionic nanostructured ABA complex is isolated from the reaction medium by an acceptable method and dried (Fig. 10 (6)).
  • the ionic strength of the solution is 10.8.
  • the resulting ionic nanostructured ABA complex is isolated from the reaction medium by an acceptable method and dried (Fig. 10 (g)).
  • the ionic strength of the solution is 3.02.
  • the resulting ionic nanostructured ABA complex is isolated from the reaction medium by an acceptable method and dried (Fig. 11).
  • the ionic strength of the solution is 20.60.
  • the resulting ionic nanostructured ABA complex is isolated from the reaction medium by a suitable dry method (Fig. 1000).
  • the ionic strength of the solution is 25.3.
  • the resulting ionic nanostructured ABA complex is isolated from the reaction medium by an acceptable method and dried (Fig. 10 (e)).
  • the ionic strength of the solution is 27.9.
  • IL-2 0.6 g is dissolved in 150 ml of water and slowly added to the reactor. 30 minutes after the end of loading of IL-2, 30 ml of product B was added to the reactor. The resulting ionic nanostructured ABA complex was isolated from the reaction medium by an acceptable method and dried (Fig. 10 (g)).
  • the ionic strength of the solution is 20.60.
  • the resulting ionic nanostructured ABA complex is isolated from the reaction medium by an acceptable method and dried (Fig. 10 (h)).
  • the ionic strength of the solution is 56.3.
  • ABA FS-1 is active in vitro with respect to both clinical isolates and control strains MRS A and MSSA.
  • MIC of an antibacterial agent ranged from 0.938 mg / ml to 0.234 mg / ml.
  • a synergism test with oxacillin showed a decrease in the MIC of both drugs.
  • the decrease was from 256 to 64 ⁇ g / ml for oxacillin and from 0.234 to 0.117 mg / ml for ABA FS-1.
  • the FIC index for this test was 0.75, which can be regarded as a partial synergy between the tested drugs.
  • a synergy test with cefamandol showed a decrease in the MIC of both drugs.
  • the decrease was from 64 to 8 ⁇ g / ml for cefamandole and from 0.469 mg / ml to 0.234 mg / ml for ABA FS-1.
  • the FIC index for this test is 0.62, which determines the interaction of these antibacterial agents as partial synergism.
  • a synergism test with lincomycin showed a decrease in the MIC of both drugs. The decrease ranged from 64 to 8 ⁇ g / ml for lincomycin and 0.234 mg / ml to 0.117 mg / ml for ABA FS-1.
  • the FIC index for this test is 0.625, which determines the interaction of these antibacterial agents as partial synergism.
  • ABA according to examples 1-9 has a greater or less bactericidal activity against pathogenic microorganisms of various classes (table 6).
  • Table 6 The most acceptable and effective, as follows from the data of table 6, in relation to mycobacterium tuberculosis is ABA according to example 5 (FS-1).
  • the bactericidal activity of FS-1 was determined in vitro by the microbiological method of double serial dilutions in Shkolnikova's liquid medium, followed by reseeding on Levenshtein-Jensen medium.
  • the bactericidal effect of FS-1 was established in vitro at concentrations from 1.750 to 0.0437 mg / ml against field strains of mycobacteria, drug-resistant clinical isolates, and M. tuberculosis H37Rv.
  • the bacteriostatic effect of FS-1 is observed at a concentration of 0.0218 to 0.0109 mg / ml.
  • Example 5 The medicine of Example 5 (FS-1) in combination with anti-TB drugs, both in the group of animals infected with M. tuberculosis H 37 R V strain and in the group of mycobacteria infected with the multi-resistant strain, has a therapeutic effect on the course of the tuberculosis process.
  • the pathological changes characteristic of tuberculosis disappear after 21 and 28 days, respectively (group 4 and 7).
  • the antimicrobial activity of ABA is associated with: a) the structure of biologically active carbohydrates and peptides; b) the oxidizing action of the iodine molecule both on the cell membrane and on the cellular structures upon diffusion of the active substance through the membrane of the bacterial cell; c) halogenation of DNA of microorganisms; g) the induction of interferons when exposed to complex compounds on immunocompetent cells; d) activation of macrophage monocytes and cytotoxic T-lymphocytes.
  • the studied ABA according to examples 1-9 in vitro have more or less virucidal activity against influenza viruses, herpes and HIV-1 immunodeficiency (tab. 9-13).
  • the anti-HIV activity of FS-1 in cell culture was detected against a laboratory strain of HIV-1 virus (LAI). Decrease in indicators of infectivity of the HIV virus - p24 content and reverse revertase. under the action of the drug indicates the virucidal effect of the drug on the human immunodeficiency virus.
  • FS-1 at doses of 0.188 mg / ml and 0.094 mg / ml, or azidothymidine at a dose of 0.01 mg / ml led to a significant decrease in the extinction rate compared to placebo and, consequently, to a decrease in the content of p24 protein of the human immunodeficiency virus (indicator virus infectivity) 60 times (table. 12).
  • the survival rate of chickens infected with the influenza virus at a dose of 100 EID 50 / 0.1 ml after the preventive use of the drug FS-1 at doses of 0.290 mg / kg and 1.458 mg / kg was 100%, and after the preventive use of remantadine - 28 ⁇ 12.53% . All control chickens that received saline died (100% mortality).
  • the least toxic substance was ABA FS-1.
  • enteral (intragastric) administration to mice and rats PS-1 a lethal effect was not achieved, since the maximum amount of drug administered was 1 and 5 ml, respectively, while the doses were 922 and 496 mg / kg, respectively.
  • a macroscopic examination of the internal organs of dead animals revealed that the cause of death is apparently associated with impaired hemodynamics, which is indirectly confirmed by the development of disseminated intravascular coagulation in blood of dead animals and a strong blood supply of internal organs. By the end of 14 days, pathomorphological studies in the surviving animals did not reveal any deviations in the structure of internal organs and tissues from the control group.
  • Chronic drug administration at a dose of 5.0 mg / kg did not cause deviations from the control group of animals in terms of body weight dynamics, somatic, hematological, biochemical parameters of blood and urine. No cardiac abnormalities were also noted. All animals retained the normal macro- and microstructure of internal organs. Chronic drug administration to rats and rabbits at a dose of 50.0 mg / kg caused the following toxic effects. On the part of blood biochemical parameters, there was a slight increase in the activity of liver enzymes: AlAt, AsAt and alkaline phosphatase, as well as nitrogen metabolism components: urea creatinine.
  • hepatocytes with signs of dystrophic changes in the cytoplasm were found in some animals, and point hemorrhages of a non-erosive nature were observed in the wall of the stomach. In some animals, there was swelling of the membrane of the small intestine. Changes in the thyroid gland in animals of this group were very diverse and individual. In general, a decrease in the functional activity of the thyroid gland due to the appearance of large follicles and flattening of the epithelium was observed. However, studies on the 90th day of the experiment (30 days of the recovery period) showed that the revealed biochemical shifts and the microstructure of changes in internal organs are reversible.
  • mice Reproductive toxicity was studied in mice. Females before and during pregnancy were intragastrically and intramuscularly injected with the drug of Example 5. The results of the studies are presented in table 19.
  • FS-1 carcinogenic activity of the drug according to example 5
  • a test battery was used, which included: determining the genotoxic activity in the SOS chromotest on E.coI Her 1000 strain (PJ E 43); determination of single stranded DNA breaks and determination of reparative (unscheduled) DNA synthesis on blood cells and rhabdomyosarcoma cell culture in concentrations from 1 to 2000 ⁇ g / ml.
  • the results of studies of the FS-1 concertogenic activity are presented in Table 20. Under the conditions used, the tested FS-1 is not an inducer of the SOS response in the cells of the E. coli E 1000 test strain (PJE43).
  • a negative result was revealed (the absence of single-stranded DNA breaks) when exposed to 200, 300, 600 ⁇ g / ml PS-1.
  • the genotoxic activity of the drug according to example 5 was investigated in the test of induction of unscheduled (reparative) DNA synthesis in the cells of the peripheral blood of the donor. It was shown that in the concentration range of 50, 100, 200 ⁇ g / ml, stimulation of unplanned synthesis with and without metabolic activation is not detected.
  • PS-1 does not have a mutagenic effect on DNA of histidine auxotrophic strains of Salmonella thyphymurium in the Ames test.
  • Table 21 presents the results of studies of cytogenetic activity. No statistically significant differences in the level of bone marrow leukocytes with chromosomal aberrations, as well as the number and quality of chromosomal aberrations in them under the influence of a single administration of PS-1 at a dose of 22 mg / kg, were found. Moreover, the multiple administration of FS-1 at a dose of 8 mg / kg of the animal’s weight was also characterized by the absence of its effect on the number and nature of chromosomal aberrations in bone marrow leukocytes compared with the control (table 21).
  • FS-1 in the studied doses does not have a damaging effect on eukaryotic DNA in vivo.
  • the drug in the studied doses does not have a damaging effect on the DNA of eukaryotes, in particular the ejection of part of the DNA from the nucleus in the form of a micronucleus, in vivo during their normal development.
  • PS-1 when introduced into the body in the studied doses, PS-1 does not induce the development of dominant lethal mutations in the germ cells (mature sperm, late and early spermatids) of mammals in vivo, i.e. does not have mutagenic activity in the test of dominant lethal alleles.
  • iodine was the first antioxidant in the birth of life on our planet, which played a huge role in human evolution. It is well known that the main damaging factor in radiation is free radicals that form in the body immediately after irradiation (Bacq, 1965; Alexander, Bacq, 1974; Halliwell, 1985, 1991). Antioxidants, which include iodine, bind free radicals, preventing their interaction with the biomolecules of the body (Shimoi, 1996; Halliwell, 1985, 1991).
  • - PTP anti-TB drugs
  • Group 1 (main) received PTP of the second row (cycloserine (Cs), ofloxacin (Ofs), PASK (Pas), protionamide (Pto), capriomycin (Cm)) + FS-1 (0.1 ml / kg);
  • Group 2 (main) received PTP of the second row (cycloserine (Cs), ofloxacin (Ofs), PASK (Pas), protionamide (Pto), capriomycin (Cm)) + PS-1 (0.125 ml / kg);
  • Group 3 (control) received PTP of the second row (cycloserine (Cs), ofloxacin (Ofs), PASK (Pas), protionamide (Pto), capriomycin (Cm) + placebo).
  • the average age of the subjects was 33.14 ⁇ 9.03 (years), Among them, men accounted for 75.8%, women 24.2%.
  • the most frequent form was the infiltrative form - 70.1%, less often - fibro-cavernous - 28.2%.
  • the groups were homogeneous, there were no significant differences in the main characteristics.
  • weight gain is observed in the main groups, while in the control group, on the contrary, there is a decrease, and after 3 months, changes in body weight are significant in the 1st group, in the 3rd group, and after 4 months - in the 3rd group.
  • ⁇ is the number of segments, ⁇ is the number of single fragments; ⁇ is the number of paired fragments; ⁇ is the number of exchanges; ⁇ ⁇ is the number of spaces; RC - the number of breaks in the centromere; ⁇ ⁇ - the number of cells with multiple disorders; To P d - the number of cells with complete destruction of chromosomes; No is the total number of cells with aberrations.
  • Nn a is the number of polychromatic red blood cells with micronuclei in the cytoplasm; ⁇ ⁇ ⁇ 3 - the number of micronuclei per 1000 polychromatic erythrocytes; ⁇ ⁇ 3 - the number of normochromatic red blood cells with micronuclei in the cytoplasm; ⁇ ⁇ 3 - the number of micronuclei per 1000 normochromatic red blood cells.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

Изобретение относится к области медицины, а именно к антибактериальному агенту для лечения инфекционных заболеваний бактериальной природы, включая госпитальные инфекции и лекарственно устойчивый туберкулез, представляющему собой ионный наноструктурированный комплекс (ИНСК), синтезированный из карбогидратов белков и/или полипептидами (альбумины, интерлекины, интерфероны, сигнальные белки и др), которые для повышения антимикробного действия in vivo, путём активирования иммунокомпетентных клеток, содержат по крайней мере одну концевую аминокислоту, такую как Phe, Ala, Val, Ala, Leu, He и др. с электронодонорными функциональными группами, йода и галогенидов щелочных и щелочноземельных элементов в четвёртой стадии при определённой ионной силе; антибактериальный агент повышает: чувствительность бактерий, в том числе антибиотикоустойчивых, к антибиотикам, активность моноцитов и макрофагов, эффективность антибиотикотерапии госпитальных инфекций и лекарственно устойчивого туберкулеза а также обладает антивирусным действием, стимулирует кроветворную функцию костного мозга, обладает противоопухолевым действием, радиопротекторными свойствами, в приемлемых концентрациях компонентов может быть использован как нелекарственное средство (БАД или парафармацевтик), представлен в фармакологической форме, пригодной для парентерального, орального, наружного и иного применения, а ИНСК имеет формулу [{(Ln(MeI3)+)y[Me(Lm)I]+ x}(Cl-)y+x+k] с М = 30-300 КДа.

Description

АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫЙ АГЕНТ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ПРИРОДЫ
Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к области медицины, а именно к фармацевтике и может быть использовано при лечении заболеваний бактериальной природы, особенно при лечении болезней, вызванных лекарственно-устойчивыми штаммами микробов, и бактериально-вирусных (микст-) инфекций.
Предшествующий уровень техники
Основным способами и средствами поражения патогенных бактерий в настоящее время являются антибиотики, объединяющие все лекарственные препараты, подавляющие жизнедеятельность возбудителей инфекционных заболеваний, таких как бактерии, грибы и простейшие.
Однако, в связи с увеличением лекарственной устойчивости возбудителей инфекционных заболеваний к известным группам антибиотиков, проблема разработки новых противомикробных препаратов не потеряла актуальность.
Так, например, во всём мире отмечается рост заболеваемости туберкулезом и увеличение смертности, вызываемых резистентными к лекарственным средствам возбудителями. Резистентность к противотуберкулезным средствам была обнаружена во всех 35 обследованных странах и регионах, что говорит о глобальности проблемы.
Полирезистентность к противотуберкулезным препаратам является самой сложной формой лекарственной устойчивости, известной в настоящее время. По данным ВОЗ, с начала 90-х годов в разных регионах планеты было зарегистрировано несколько вспышек полирезистентного туберкулеза.
Известно, что молекулярный йод с лёгкостью проходит через билипидные клеточные мембраны микроорганизмов и проникает внутрь клетки. Антимикробное действие соединений йода обусловлено способностью йода (элементарный йод, гипойодная кислота, катион йода) взаимодействовать с NH2-rpynnaMH аминокислот (лизин, гистидин, аргинин и др.), а также с нуклеотидами (аденин, цитозин, гуанин), формируя Ν-йоддериваты. Кроме того, происходит окисление SH-групп цистеина, приводящее к нарушению синтеза белков. Взаимодействуя с фенольными группами тирозина йода приводит к нарушению образования водородных связей этих аминокислот. Действуя на двойные углеродные связи ненасыщенны жирных кислот, йод, тем самым, изменяет также свойства липидов.
Способность йода с лёгкостью проникать через клеточные мембраны делает его применение особо ценным при тех инфекциях, основное развитие которых разворачивается во внутриклеточных структурах (бруцеллёз, хламидиоз, вирусные гепатиты и т.д.).
Известен лечебный препарат «Иодомидол», обладающий бактерицидным и вирулицидным действием, содержащий йод, иодид калия или натрия, синтетический водорастворимый полимер, природные полимеры, например полисахариды и моно- и олигосахариды при следующем соотношении компонентов, г/л:
йод 6-10
иодид калия 9-15
синтетический водорастворимый полимер 2-4
Природный полимер (полисахариды) и моно- и
олигосахаридов , 8-120
вода Остальное
(KZ 6730В, 16.11.1998).
Недостатком данного препарата является его относительно высокая токсичность.
Известен вирулицидный фармацевтический препарат (ЕР 0978289 А1 , 09.02.2000), обладающий антивирусным действием, содержащий йод, иодид калия или натрия, синтетический водорастворимый полимер, смесь природных моно-, олиго- и полисахаридов и хлорид лития при следующем соотношении компонентов, г/л: йод 0,8 - 25 иодид калия 1,2 - 38 хлорид лития 0,1 - 20
синтетический водорастворимый полимер 0,01 - 6
смесь моно-, олиго- и полисахаридов 8- 400
вода Остальное
Известно бактерицидное и вирулицидное фармацевтическое средство для профилактики и лечения моно- и микстинфекций, в том числе туберкулёза, бруцеллеза, чумы, гепатитов, ВИЧ, содержащее пул белков и/или галогенированных белков, карбогидраты и/или галогенпроизводные карбогидраты, синтетический водорастворимый полимер, лития хлорид, калия или натрия йодид, йод, воду или физиологический раствор при следующем соотношении компонентов (г/л):
пул белков и/или галогенпроизводных белков от 0,01 до 200 карбогидраты и/или галогенпроизводные крабогидратов от 0,01 до 450 синтетический водорастворимый полимер от 0,01 до 100 лития хлорид от 0,01 до 200 калия или натрия иодид от 0,01 до 300 йод от 0,01 до 200 вода или физиологический раствор до 1 л
(KZ 15116А, 15.12.2004). Бактерицидное и вирулицидное фармацевтическое средство представляет собой сложную физико-химическую систему, образованную моно- и полифункциональными лигандами (анионы, белки, карбогидраты, синтетические водорастворимые полимеры) и кислотами (йод, катионы щелочных металлов), находящуюся в псевдоравновесном состоянии. В этой системе протекают сопряженные процессы комплексообразования, ассоциации и диссоциации. Совокупность процессов кислотно-основного взаимодействия, химическая природа участвующих в них полифункциональных лигандов (белков, карбогидратов, водорастворимых синтетических полимеров), наличие в этом процессе лигандов с различной молекулярной массой (например, моно-, олиго- и полисахаридов) приводит к структурообразованию в системе и она, таким образом, приобретает все свойства коллоидной системы.
Наличие в составе фармацевтического средства йода обеспечивает не только усиление бактерицидных и вирулицидных свойств за счёт собственно таковых свойств самого йода, но и обеспечивает синергетический эффект каждого по отдельности и всех в совокупности активных субстанций, присутствующих в средстве в равновесных концентрациях.
Это средство содержит галогенпроизводные соединения: галогенированные белки и галогенированные карбогидраты.
Известен йодный комплекс алкилполигликозидов (WO 9639839 А1) содержащий (% масс.) от 0,5 до 30 йода, от 0,2 до 14 иодида в виде соли, кислоты или их смеси и от 2 до 85 сурфактанта Сахаров, выбранных из группы Сахаров, содержащих эфир алкилглюкозы, альдобионамид, глюконамид, глицерамид, глицероглюколипид, амиды жирных полигидроксикислот, алкилполиглюкозидов общей формулы R10(R20)b(Z)a, где R] - моновалентный органический радикал, содержащий от 6 до 30 атомов углерода; R2 - дивалентный алкиленовый радикал, содержащий от 2 до 4 атомов углерода; Z— производное Сахаров, содержащее 5 или 6 атомов углерода; b - натуральное число от 0 до 12; а - натуральное число от 1 до 6.
Известен способ получения имобилизованных ферментов с помощью реакции комплексообразования с молекулярным йодом и иодидом калия (RU 2157405 С2), в результате реакции комплексообразования образуются белки, содержащие связанный йод, которые из раствора, переходят в твердофазное состояние, т.е. образуются не растворимые в воде комплексы. Твердофазное состояние характеризуется образованием полидисперсных частиц размером от нескольких мкм до десятков и сотен мкм, которые (частицы), в силу большой общей площади поверхности активных центров ферментов, способных взаимодействовать с молекулами микробных субстратов, обеспечивает антибактериальное действие иммобилизированных ферментов. Входящий в состав комплекса йод обеспечивает микробоцидное действие. Известен препарат для введения антисептических веществ, включая галоген, в нижние дыхательные пути, содержащий, по крайней мере один антисептик в сочетании с носителем в виде частиц, полученным известными способами, причем носитель содержит, по меньшей мере один липосомный препарат, препарат микросфер, препарат наночастиц, препарат больших пористых частиц или препарат молекул, покрытых полимером при помощи пульсирующего лазера размером от 1 до 30 мкм (RU 2212884 С2). Во всех вышеперечисленных известных патентах авторы не ставили перед собой задачу синтеза комплексных соединений с заданной структурой и свойствами, а также выделение комплексных соединений из растворов и определение их состава и физико-химических свойств, что затрудняет использование комплексных соединений йода с карбогидратами и белками, обладающих биоцидными свойствами, в качестве лекарственных средств. Кроме того, затруднена разработка приемлемых лекарственных форм без определённого набора свойств и качеств комплексных соединений йода - антибактериальных агентов, охарактеризованных физико-химическими свойствами и составом.
В последние годы в научной литературе появились отдельные работы, посвященные изучению структуры комплексных соединений карбогидратов с солями магния, кальция и других комплексообразователей (O.Nimz, K.Gefiler, I. Uson, W.Saenger // Carbohydrate Research 2001. V. 336. P.141-153.; M.Noltemeyer, W. Saenger // JACS 1980. V.102:8.9.P.2710.; M.Noltemeyer, W. Saenger //Nature.1976. V.259. 26.P.629.).
Установлена кристаллическая структура целого ряда ферментов имеющих в своём составе ионы магния, калия, кальция, лития, т.е. соли металлов. {Y.Goldgur, F.Dyda, A.B.Hickman, T.M.Jenkins, R.Craigie, D.R.Davies // Proc.Natl.Acid.Sci USA 1998. V.95. No 16. P.9150-9154.; F.Dyda, A.B.Hickman, T.M.Jenkins, A. Engelman, R.Craigie, D.R.Davies // Science. 1994. V.266. P.1981-1986.).
В то же время отсутствуют работы, в которых бы был осуществлён целенаправленный синтез координационных соединений йода с заданной структурой и, соответственно, заданными антибактериальными свойствами, подходящими для реализации того, или иного механизма действия этих соединений.
Таким образом, задачей изобретения является создание антибактериального агента (АБА) для лечения заболеваний бактериальной природы, включая госпитальные инфекции и лекарственно устойчивый туберкулёз.
Дополнительными задачами данного изобретения также являются разработка способа получения антибактериального агента и создание лекарственного средства на основе АБА для лечения инфекционных заболеваний бактериальной природы.
Техническим результатом изобретения является повышение эффективности действия АБА in . vivo путём активирования иммунокомпетентых клеток.
Сущность изобретения
Технический результат достигается тем, что разработан АБА, представляющий собой ионный нанострутурированный комплекс (ИНСК), образованный белками и/или карбогидратами, солями металлов и интеркалированным в них йодом, при этом для получения упорядоченной структуры антибактериального агента и необходимого иммунотропного действия, реакцию комплексообразования проводят в четыре стадии, первой из которых является взаимодействие карбогидратов и белков с солями металлов, второй стадией является интеркаляция 5-95 % необходимого количества йода в комплекс, образующийся на первой стадии реакции комплексообразования при определённой ионной силе, третьей стадией является введение в реакцию комплексообразования белков, содержащих, по крайней мере, одну концевую аминокислоту с электронодонорными функциональными группами и определённый сайт, обусловливающий необходимый иммунный отклик, а четвёртой стадией является интеркаляция остального количества йода в антибактериальный агент. Кроме того, согласно изобретению предложен АБА, который, не смотря на то, что обладает слабой противоопухолевой активностью, слабым радиопротекторным действием, однако, в совокупности с уникальной способностью восстанавливать кроветворную функцию костного мозга, может иметь огромное практическое значение для предупреждения возможных побочных эффектов химио- и радиотерапии в комплексной лекарственной сопроводительной терапии опухолей
Другой технический результат достигается тем, что белки и/или полипептиды, входящие в состав АБА, обладают иммуногенной активностью и содержат по крайней метре одну концевую аминокислоту с электронодонорными функциональными группами, которые при введении АБА в организм, заякориваются в области стимулирующих и костимулирующих рецепторов иммунокомпетентной клетки концевыми аминокислотами, обладающими гидрофобными свойствами и содержащими электронодонорные функциональные группы, а специфические сайты этих белков активируют иммунокомпетентные клетки первой и второй линий защиты - моноциты-макрофаги и цитотоксические Т- лимфоциты.
Далее изобретение включает лекарственную форму заявляемого АБА. В зависимости от конкретно предлагаемого применения фармацевтический состав согласно настоящему изобретению можно приготовлять в форме раствора, суспензии, парентерального состава, мази, крема, аэрозоля, порошка, таблетки, капсулы, или другой приемлемой лекарственной формы, которые вводят определёнными дозами, наносят или смешивают соответствующим образом. Фармацевтические составы могут включать:
а) потенциальные составы - наполнитель, в частности апирогенную воду, буфер или обычный физиологический раствор;
б) мази, кремы, аэрозоли - носитель, в частности растительное или синтетическое масло, ланолин, вазелин или высокомолекулярные спирты; в) таблетки или капсулы - разбавители, в частности лактозу, связывающие вещества, смазывающие вещества (например, стеариновую кислоту), а также средство расщепления (например, кукурузный крахмал).
Все фармацевтические составы согласно настоящему изобретению могут сочетаться с антибактериальными (например с антибиотиками), антивирусными, противоопухолевыми, иммуномодулирующими и другими агентами в случае, если в сочетании они дают синергетический эффект с заявленными фармацевтическими составами, или индифферентны по отношению к ним, но в комбинации расширяют терапевтический спектр.
Кроме того, согласно настоящему изобретению АБА, можно использовать в качеств нелекарственного средства (БАД, пищевой добавки, кормовой добавки, компонента средств гигиены, такие как лосьоны, зубные пасты, жевательные резинки и др.) при соблюдении определённых условий. К таким условиям относится, например, использование в составах только тех компонентов и в тех концентрациях, которые указаны в Codex Alimentarius.
Нелекарственные средства на основе комплексного соединения в соответствии с настоящим изобретением, обладают иммуномодулирующим действием и могут быть использованы для профилактики инфекционных заболеваний, в частности сезонного гриппа, ОРВИ, йодной недостаточности, а также в качестве адаптогена.
Настоящее изобретение основано на неожиданном факте, что в растворах солей щелочных и щелочноземельных металлов, при определенной ионной силе в присутствии карбогидрата и/или белка происходит выделение комплекса в твердую фазу при интеркаляции йода.
Другой неожиданный факт, положенный в основу данного изобретения, заключается в том, что, как установлено экспериментальными данными, настоящее изобретение даёт возможность введения в состав антибактериального агента белков, содержащих сайты с определённой иммунологической функцией.
Перечень фигур чертежей
Заявленное изобретение проиллюстрировано следующими фигурами чертежей.
На Фиг. 1-4 представлены микроснимки различных кристаллических структур препарата ФС-1.
На Фиг. 5 представлена зависимость выхода кальциевого комплекса трииодид-иона с карбогидратом от ионной силы.
На Фиг. 6 представлена зависимость выхода магниевого комплекса трииодид-иона с карбогидратом от ионной силы.
На Фиг. 7 показано образование стабильных координационных соединений в системе карбогидрат-белок-соли LiCl, MgCl2.
На Фиг. 8 показаны структуры, иллюстрирующие взаимодействие молекулярного йода с галогенидами лития, гарбогидратами и боковыми аминокислотными остатками белка.
На Фиг. 9 представлена схема образования субъединицы АБА.
На Фиг. 10 а-з приведены микроснимки соединений по примерам 1-9. На Фиг. 11 представлен микроснимок соединения по примеру 5 (ФС-1)
На Фиг. 12 показана динамика выживаемости крыс в контрольной и опытных группах в течение 30 дней после облучения: 1) облучение в дозе 800 Р; 2) облучение в дозе 800 Р на фоне перорального введения в организм 1 ,0 мл ПХ за 30 минут до облучения.
Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения Исходя из вышеописанного, в соответствии с изобретением, в способ получения, с целью обеспечения сохранности свойств иммуногенных белков в составе антибактериального агента, добавлены третья и четвёртая стадия комплексообразования.
В контексте данного изобретения компоненты, их соотношение и интервал ионной силы является существенными признаками при синтезе АБА. Все признаки, определяющие состав и структуру АБА, являются необходимыми и достаточными для достижения поставленной цели. Ни один из них не может быть исключен или заменён на другой, в противном случае технический результат не будет достигнут. Подбор как качественного состава веществ, образующих АБА, так и количественных соотношений компонентов и интервала ионной силы, был основан закономерностях комплексообразования и на многочисленных экспериментальных данных по определению антибактериальной активности АБА в зависимости от состава образующих его компонентов.
Качественный состав веществ был выбран исходя из их биологической значимости и химических свойств, обеспечивающих антибактериальное действие.
Карбогидраты, выбранные авторами настоящего изобретения в качестве лигандов, являются чрезвычайно важным классом природных соединений. В биологии и медицине значение карбогидратов заключается в доминирующей роли, которая отводится их в животных организмах, и в сложности их функций. Такие карбогидраты, как углеводы, участвуют в большинстве биохимических процессов в виде высокомолекулярных частиц, хотя во многих биологических жидкостях содержатся моно- и олигосахариды (Compressive Organic Chemistry / Edited by E. Haslam. V. 5. Biological Compounds Pergamon Press, 19).
Главной особенностью АБА, представляющего собой комплексное соединение йода с карбогидратами и/или белками и солями металлов, является наличие в его составе белков с определённым набором электронодонорных функциональных групп в концевых аминокислотах и сайтов.
Белки играют ключевую роль почти во всех биологических процессах, определяют ход биологических превращений в клетках, участвуют в осуществлении множества других функций, - таких, например, как транспорт веществ и их накопление.
Настоящее изобретение включает также низкомолекулярные пептиды и составляющие их мономеры.
Транспортная роль белков исключительно важна, поскольку диффундирующая молекула, связанная с белком, в случае прохождения через мембрану не модифицируется химически и не соединяется с другими видами молекул. Для опосредованных, или облегченных, мембранных транспортных процессов характерны кинетика насыщения (т.е. транспортная система может насыщаться транспортируемым растворенным веществом) и специфичность к транспортируемому веществу.
Возможность опосредованного транспорта обусловливается белками, способными обратимо связывать специфические субстраты, в том числе и молекулу йода. Эти транспортирующие молекулы белка имеют различные названия: транспортные системы, переносчики, носители или транслоказы.
В таблице 1 представлены составы АБА, синтезированного из карбогидратов, белков и йода при различной ионной силе раствора, создаваемой солями щелочных и щелочноземельных металлов. Кристаллическая структура некоторых соединений (антибактериального агента), в зависимости о соотношения карбогидрат: белок (полипептид) представлена на оптических и электронных фотографиях фиг. 1-4.
Как видно на фотографиях, АБА может формировать нанокристаллы (ФигЛ : 1А при увл. 400х, 1В при увл. 40000х), микрокристаллы (Фиг.2: 2А при увл. 5000х, 2В при увл. 12000х) довольно крупные (0,1 мм), монокристаллы (Фиг.З) или кристаллы различных размеров (Фиг.4).
Размер кристаллов уменьшается с ростом содержания карбогидрата относительно белка (полипептида) при прочих равных условиях (ионная сила раствора), а также с увеличением соотношения йод : карбогидрат и/или белок (пептид).
Реакция синтеза АБА, согласно заявленному способу, проходит последовательно по реакциям комплексообразования. На первой стадии происходит образование комплексов между карбогидратом ( ), белком (L2), полимеров (L3) и солями, содержащими катионы кальция и магния.
Figure imgf000013_0001
Figure imgf000014_0001
В растворе, приготовленном для осуществления интеркаляции йода, происходит образование комплекса между йодом и иодидом калия:
Figure imgf000014_0004
При соединении вышеназванных растворов осуществляется интеркаляция йода, и/или полииодид-иона, т.е. происходит взаимодействие между комплексными частицами, образующимися как в первом растворе, так и во втором. При этом происходит перераспределение веществ, составляющих АБА (комплекс) согласно их донорно-акцепто ным свойствам.
Figure imgf000014_0002
Образующийся в результате реакции (3) трииодид-ион является также сильным комплексообразователем, как и молекулярный йод.
Figure imgf000014_0003
Выходы АБА:
Figure imgf000014_0005
Выход конечного продукта зависит от физико-химических параметров реакции (таблица 2 и 3).
Неожиданным оказался тот факт, что при определённой ионной силе реакционной среды выход АБА приближается к 100 %.
Еще более неожиданным оказался факт образования кристаллов АБА, представляющего собой ионный полимерный комплекс, в процессе выделения способом центробежной хроматографии и/или сушки, причём состав монокристаллов строго определённый и постоянный, что свидетельствует об образовании индивидуального соединения АБА.
По результатам расчёта предполагаемого равновесия выход АБА меняется (возрастает) с увеличением ионной силы (Фиг.5 и 6). Особенно существенное влияние ионной силы наблюдается для комплекса, содержащего ионы магния (Фиг.6), что может быть связанно с характеристикой этого иона как более жесткой кислоты по Пирсону [Pearson R.G., Journal ACS, 1963, 85, p. 3533. Pearson R.G Journal Chemical Education, 1968, 45, p. 643. Pearson R.G, Chemical Communication, 1968, p. 65, Gehlen H.Z., Physical chemistry, 1954, 203, 125. Finston H.Z., Rychtman A.C., A new view of current acid-base series. N.Y., Wile, 1982.]
Структура АБА и последовательность актов образования этой структуры, согласно заявленному по настоящему изобретению способу получения антибактериального агента, может быть представлена как на Фиг. 7. На данной фигуре голубые шары - атомы углерода, синие - азота, желтые - хлора, красные - кислорода, черные - магния, коричневые - лития. Для структуры I ΔΕ= -106,01 ккал/моль, для структуры II ΔΕ = -79,12 ккал/моль, а для структуры III ΔΕ = -88,86 ккал/моль.
Образование комплексных полиионных соединений в системе карбогидрат-белок-соль щелочного или щелочноземельного металла подтверждено квантово-химическими расчетами и данными УФ-, ИК-Фурье спектроскопии, электронной и оптической микроскопии, квантово-химических расчётов.
В рамках неэмпирического квантово-химического метода 3-21G** проведен расчет структур Ι-ΙΙΙ (Фиг.7). В расчетах карбогидрат моделировали этанолом, белковый скелет амидом, а один из наиболее донорноактивных кислотных остатков гистидин-имидозолом. Энергия комплексообразования ΔΕ рассчитана как:
ΔΕ = Е(компл)-(Е(1лС1)+Е(этанол)+Е(амид или имидозол) Для структуры I ΔΕ = -106,01ккал/моль, для структуры II ΔΕ = -79,12 ккал/моль, для структуры III ΔΕ = -88,86ккал/моль. Расчеты показали, что координация солей LiCl, MgCl2 донорно-активными группами белка и карбогидрата энергетически выгодна.
При интеркаляции молекулярного йода в систему образуются комплексы
IV- VII, в которых молекулярный йод координируется белком и галогенидами лития, а галогениды лития координируются карбогидратом.
Расчет стабильностей комплексов молекулярного йода с галогенидами лития, карбогидратами, и боковыми аминокислотными остатками белков свидетельствует о том, что при интеркаляции молекулярного йода в систему образуются комплексы (IV- VII Фиг.8), в которых молекулярный йод координируется белком и галогенидами лития, а галогениды лития координируются карбогидратом.
В таблице 4 представлены длины координационных связей и ΔΕ энергии стабилизации комплексов.
ΔΕ рассчитаны как:
Figure imgf000016_0001
где Ei - полная энергия комплекса, Е2 - полная энергия LiC10HC2H5, Е3 - полная энергия комплекса 12 с аминокислотным остатком.
Как видно из таблицы 4 наиболее стабильный комплекс образуется с участием аргинина (структура VII) при этом связь I-I рвется, в таком комплексе свойства молекулярного йода не сохраняются. Сравнение энергий стабилизации комплексов молекулярного йода с аргинином (-18,17кДж/моль) и с аденозином (-10,93 ккал/моль) и гуанином (-11, 50кДж/моль) свидетельствует о том, что если в состав АБА будет входить аргинин, то в этом случае молекула 12 останется в структуре препарата и не будет образовывать комплекс с нуклеотидами ДНК.
В комплексах I-III связь I-I не рвется, а только ослабляется. После аргинина наиболее стабильные комплексы получаются с участием карбонильной группы амидного фрагмента белка. Амидный фрагмент входит в состав полипептидного скелета и в состав аминокислотных остатков аспаргина и глутамина.
Выход конечного продукта зависит от физико-химических параметров реакции - Кобр, стехиометрического коэффициента п и концентраци реагентов.
На основании данных УФ-, ИК-Фурие спектроскопии, электронной и оптической микроскопии, квантово-химических расчётов, структура АБА и последовательность актов образования этой структуры, согласно заявленному по настоящему изобретению способу получения АБА, схематично может быть представлена следующим образом (фиг. 9)
Формирование субъединицы (молекулы) АБА происходит под действием ионной силы раствора в интервале от 0,015 и до 10,2, соответствующей давлению 286 - 2860 кг/см . Под действием такого давления (ионной силы) макромолекулы карбогидрата и белка упаковываются таким образом, что не задействованные в комплексообразовании концевые аминокислотные триплеты ориентированы наружу от основной скелетной цепи белка и/или полипептида и осуществляют заякоривание антибактериального агента на мембране клетки посредством концевых аминокислот, содержащих электронодонорные функциональные группы, о чем напрямую свидетельствуют данные по иммунотроному действию АБА, приведённые ниже.
Способ получени заявленного АБА заключается в следующем.
В подходящем растворителе, например воде, диоксане и др. растворяют навеску карбогидрата. В этот раствор, для получения комплексных соединений, вводят определённые навески солей металлов и хлорида натрия для создания соответствующей ионный силы раствора (Продукт А).
В подходящем растворителе, например воде, диоксане и др. растворяют навеску белка. В этот раствор, для получения комплексных соединений, вводят определённые навески солей металлов и хлорида натрия для создания соответствующей ионный силы раствора (Продукт Б).
В подходящем растворителе, например хлороформе, гексане и др. растворяют навеску йода кристаллического или йода и калия иодида и раствор перемешивают до полного растворения йода (Продукт В).
Затем к смеси Продуктов А и Б при перемешивании добавляют порциями 70 % Продукта В. После перемешивания реакционной смеси в течение 1 часа при 42Ή3 °С в раствор вводят белок с определёнными иммунотропными функциями, содержащий по крайней мере одну концевую аминокислоту с электронодонорными функциональными группами, а затем проводят заключительную интеркаляцию 30% йода, добавляя порциями оставшиеся 30 % Продукта В. Образовавшийся антибактериальный агент (АБА) (комплексное соединение йода с карбогидратами и/или белками и солями металлов), выделяют приемлемым способом и высушивают.
Лекарственное средство на основе этого антибактериального агента, получено известными способами в виде раствора для орального применения, раствора для парентерального применения, таблеток и капсул.
Анализ антибактериального агента проводили: методами индикаторного титрования, потенциометрического титрования (Sartorius Professional Meter РР-50), капиллярного электрофореза (Agilent Technologies CE3D, США) колебательной (ИК) спектроскопии с Фурье преобразованием (Thermo
Electron Corporation Nicolet 6700), электронной спектроскопии в ультрафиолетовой и видимой областях спектра (PerkinElmer Lambda 35).
Микроскопию комплексных соединений проводили на растровом электронном микроскопе Quanta 200i 3D (FEI Company, США).
Цитотоксичность препаратов определяли in vitro микроскопией и при помощи МТТ-теста в монослойных перевиваемых культурах клеток RD, MDCK, MRC-5 , суспензионных культурах МТ-2 и Н9 микрометодом в 96 луночных плашках , инкубируемых в атмосфере с 5% содержанием СО2 при 37°С. (табл. 5)
Определение минимальных ингибирующей концентрации (МИК) АБА в отношении клинических изолятов MRS А и MSSA, и референсных штаммов Staphylococcus aureus АТСС 43300 и Staphylococcus aureus АТСС 29213 проводили методом серийных разведений в питательной среде [Clinical Laboratory Standards Institute, Document M7-A 7. Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically; Approved standard-7 th Edition, Wayne, Pa: Clincal Laboratory Standards Institute, 2006] (табл. 6).
Изучение синергетического действия АБА с антибиотиками в отношении клинических изолятов MRS А и MSSA, и референсных штаммов Staphylococcus aureus АТСС 43300 и Staphylococcus aureus АТСС 29213 проводили методом «Checkerboard» [Eliopoulos G and Moellering R. Antimicrobial combinations. In Antibiotics in Laboratory Medicine, 1996, 4rd edn (Lorian, V., Ed.), pp. 331-396. Williams and Wilkins Co., Baltimore, MD, USA].
Определение синергизма методом Time-Kill проводили в отношении контрольного штамма MRSA АТСС 43300 [National Committee for Clinical Laboratory Standards, Document M26-A. Methods for Determining Bactericidal Activity of Antimicrobial Agents; Approved Guideline Wayne, Pa: National Committee for Clinical Laboratory Standards, 1999.].
Антимикобактериальное действие АБА ФС-1 изучали по динамике роста микобактериальных штаммов М. tuberculosis H37Rv, M.tuberculosis MS-115 и M.bovis Bovinus в обогащенной жидкой среде Middlebrook 7Н9 в присутствии различных концентраций препарата по сравнению с ростом этих штаммов на среде, не содержащей препаратов и среде, содержащей препарат 1-го ряда изониазид в концентрации 0,1 мкг/мл. Исследование вели в трипликатах. Детекцию роста проводили с помощью автоматизированной системы учета роста культур Bactec MGIT 960 (Becton Dickenson, USA) в специальных пробирках MGIT. Детекция роста микобактериальных культур проводилась каждый час с помощью программного обеспечения Epicenter (Becton Dickenson, USA).
Для изучения противотуберкулезного действия лекарственного средства из АБА по примеру 5 (ФС-1) использовали модель аэрогенного инфицирования на самках морских свинок-альбиносов. Заражение производили в аэрозольной камере "GlasCol" в дозе 150 КОЕ М. tuberculosis H37Rv на легкое.
Для изучения противотуберкулезного действия ФС-1 использовали морских свинок линии Dunkin Hartley. Заражение производили внутримышечно из расчета 0,5 мл взвеси содержащей - 307 - 692 бактериальных тел М. tuberculosis H37RV в 1 мл на одно животное.
Определение антивирусного действия АБА in vitro в отношении вируса гриппа A/FPV/Waybrige/78/H7N7 и вируса простого герпеса штамм «Victory» проводили микрометодом на перевиваемых культурах клеток МДСК и RD. Вещества вносили в концентрациях 1/2, 1/4, 1/8, 1/16 от максимально переносимая концентрация МПК.
Изучение антивирусного действия препарата ФС-1 в отношении вируса иммунодефицита человека ВИЧ-1 (LAI) проводили на клеточной культуре МТ-2 (человеческие трансформированные вирусом HTLV-1 Т-лимфобластоидные клетки), референтное вещество-азидотимидин.
Источником вируссодержащего материала являлась культуральная жидкость клеток линии H9/HTLV-IIIB, хронически зараженных вирусом иммунодефицита человека ВИЧ-1 штамм (LAI).
Оценка мутагенной активности ФС-1 в тесте Эймса проводилась на 4 мутагенных (ауксотрофных по гистидину) штаммах Salmonella thyphymurium ТА 98, ТА 100, ТА 102 и ТА 1535 с метаболической активацией и без метаболической активации.
Изучение ДНК-повреждающей активности ФС-1 в кометном анализе in vitro проводился на линии клеток мышиной лимфомы L5178Y и линии клеток человеческой гепатомы HepG2.
Исследование цитогенетической активности АБА проводилось путем учета хромосомных аберраций в лейкоцитах костного мозга млекопитающих in vivo на мышах. Исследование цитогенетической активности АБА проводили с помощью микроядерного теста в полихроматических и нормохроматических эритроцитах костного мозга мышей in vivo.
Изучение доминантных летальных мутаций в сперматозоидах у млекопитающих in vivo при введении лекарственного средства ФС-1 проводили на мышах.
Большинство представленных в описании изобретения примеров, иллюстрирующих эффективность действия АБА в отношении патогенных микроорганизмов, включая музейные и клинические штаммы с множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ) микобактерий туберкулёза, относится к лекарственному средству на основе АБА по примеру 5 (ФС-1), без ограничения ими.
Эксперименты по изучению радиопротекторных свойств лекарственного средства АБА ФС-1 вьшолнены на белых крысах массой тела 190-200 г и белых мышах массой тела 22-25 г. В опытах с облучением животных подвергали однократному равномерному радиационному воздействию на терапевтической рентген-установке РУМ-17 (180 кВ, 10 мА, фильтры 0,5 мм Си + 1,0 А1, фокусное расстояние 40 см, мощность дозы облучения 178 Р/мин) в дозах 800 Р (доза радиации, близкие к ЛД50).
Индукция миелосупрессии АБА ФС-1 проводили по методу [Galoyan
А.А., Korochkin L.I., Rybalkina E.J., Pavlova G.V., Saburina I.N., Zaraiski E.I., Galoyan N.A., Davtyan Т.К., Bezirganyan K.B., Revishchin A.V. Hypothalamic proline-rich polypeptide enhances bone marrow colony-forming cell proliferation and stromal progenitor cell differentiation // Cell Transplantation. - 2008. - Vol. 17. - P. 1061-1066.]
Забор периферической крови и костного мозга животных проводился по методике [Bezirganyan К.В., Davtyan Т.К., Galoyan А.А. Hypothalamic proline rich polypeptide regulates hematopoiesis // Neurochem. Res. - 2010. - Vol. 35. - P. 917-924. Гершанович М.Л., Пайкин М.Д. Симптоматическое лечение при злокачественных новообразованиях. 2-е изд. - Москва: Медицина, 1986. - 285 с]
Оценку миелосупрессии проводили с помощью подсчета абсолютного и относительного содержания лейкоцитов, лимфоцитов и моноцитов периферической крови с использованием автоматического гематологического анализатора Celly v 2.20, Hycel Diagnostics.
Оценку восстановления кроветворной функции костного мозга проводили с помощью клоногенного теста [2 Bezirganyan К.В., Davtyan Т.К., Galoyan А.А. Hypothalamic proline rich polypeptide regulates hematopoiesis // Neurochem. Res. - 2010. - Vol. 35. - P. 917-924] путем определения количества гранулоцит-моноцит колониеобразующих (КОЕ-ГМ или CFU-GM) клеток-предшественников костного мозга. С этой целью клетки костного мозга культивировали в среде Methocult™ GF R3774, содержащей метилцеллюлозу и факторы роста клеток-предшественников (stem cell factor, GM-CSF and IL-3) StemCell Technologies Inc (cat JVo 03774).
Пример g 1 ФС-1.1
Синтез АБА проводят в лабораторном реакторе фирмы «QVF ENGINEERING)) GMBH D- 5122 Mainz тип RimrgefaB 2L при постоянном перемешивании. Температура поддерживается термостатом фирмы «НиЬег» ministat 230 СС2. В 500 мл воды растворяют 130 г карбогидрата при температуре 50 °С. Далее приливают 3,0 г натрия хлорида и 1,98 г кальция хлорида растворённых, в 100 мл воды. Смесь хорошо перемешивают и охлаждают до 43 °С (Продукт А).
5,0 г альбумина растворяют в 150 мл воды и добавляют 3,96 г лития хлорида, 8,4 г хлорида магния и 2,0 г натрия хлорида (Продукт Б). 135 мл полученного раствора вводят в реактор. Реакционная смесь перемешивается 20 минут, после чего температуру раствора снижают до 25 °С.
В 100 мл воды растворяют 0,82 г 12 и 1,2 г калия иодида (Продукт В). 70 мл полученного раствора приливают порциями в реактор. Интеркаляцию йода проводят в течении 2-х часов при температуре 25 °С, после чего прибавляют оставшиеся 15 мл Продукта В. через 1 час в реактор порциями вводят оставшиеся 30 мл продукта В и завершают интеркаляцию йода в течении 2-х часов.
Ионная сила раствора составляет 13,6.
Образовавшийся ионный наноструктурированный комплекс АБА выделяют из реакционной среды приемлемым методом, например методом центробежной хроматографии на установке "Kromaton" FCPC (Fast Centrifugal Chromatography) и высушивают (фиг. 10 (а)).
Результаты анализа:
Figure imgf000023_0002
Figure imgf000023_0001
Пример JVs 2 ФС-1.2
Синтез АБА проводят в лабораторном реакторе фирмы «QVF
ENGINEERING)) GMBH D-55122 Mainz тип RuhrgefaB 2L при постоянном перемешивании. В 500 мл воды растворяют 108,3 г декстрана при температуре 45 °С. Температура поддерживается термостатом фирмы «huber» ministat 230 СС2. Далее приливают 2,5 г ПВС, растворённого в 150 мл воды, 4,00 г натрия хлорида и 1,65 г кальция хлорида растворённых в 100 мл воды. Смесь хорошо перемешивают и охлаждают до 43 °С (Продукт А).
4,17 г альбумина растворяют в 150 мл воды и добавляют 3,3 г лития хлорида, 7,0 г хлорида магния и 0,17 г натрия хлорида. Полученный раствор переносят в реактор после достижения температуры Продукта А требуемого значения, указанного выше. Смесь перемешивается 20 минут, после чего температуру реакционной зоны снижают до 25 °С (Продукт Б).
В 100 мл воды растворяют 2,0 г 12 и 3,0 г калия иодида. Полученный раствор приливают порциями в раствор комплексного соединений (продукт В). Интеркаляцию йода проводят в течении 4-х часов при температуре 25 °С. Ионная сила раствора составляет 13,2.
Образовавшийся ионный наноструктурированный комплекс АБА выделяют из реакционной среды приемлемым методом и высушивают, (фиг 10(6)).
Результаты анализа:
Figure imgf000024_0002
Figure imgf000024_0001
Пример JNb з фС-1.3
Синтез АБА проводят в лабораторном реакторе фирмы «QVF ENGINEERING)) GMBH D-55122 Mainz тип RuhrgefaB 2L при постоянном перемешивании. В 600 мл воды гидролизуют 72,0 г карбогидрата при температуре 60 °С. Температура поддерживается термостатом фирмы «huber» ministat 230 GC2. Далее приливают 1,7 г ПВС, растворённого в 100 мл воды, 2,8 г натрия хлорида и 1,1 г кальция хлорида растворённых в 100 мл воды. Смесь хорошо перемешивают и охлаждают до 43 °С (продукт А).
2,8 г альбумина растворяют в 100 мл воды и добавляют 2,2 г лития хлорида, 4,66 г хлорида магния, 0,8 г натрия хлорида. Полученный раствор переносят в реактор после достижения температуры продукта А требуемого значения, указанного выше. Смесь перемешивается в 20 минут (продукт Б), после чего температуру реакционной зоны снижают до 25 °С.
Ионная сила раствора составляет 10,8.
В 100 мл воды растворяют 4,1 г ^ и 6,0 г калия иодида. Полученный раствор приливают порциями в раствор комплексного соединений (продукт Б). Интеркаляцию йода проводят в течении 4-х часов при температуре 25 °С.
Образовавшийся ионный наноструктурированный комплекс АБА выделяют из реакционной среды приемлемым методом и высушивают (фиг. 10 (B)). Результаты анализа:
Figure imgf000025_0003
Figure imgf000025_0001
Пример J\b 4 ФС-1.4
Синтез АБА проводят в лабораторном реакторе фирмы «QVF
ENGINEERING)) GMBH D-55122 Mainz тип RiihrgefaB 2L при постоянном перемешивании. В 550 мл воды гидролизуют 72,0 г карбогидрата при температуре 100 °С. Температура поддерживается термостатом фирмы «huber» ministat 230 СС2. Далее приливают 1,7г ПВС, растворённого в 250 мл воды, (продукт А). Смесь перемешивается в 20 минут, после чего температуру реакционной зоны снижают до 25 °С.
В 200 мл воды растворяют 4,1 г 12 и 6,0 г калия иодида. Полученный раствор приливают порциями в раствор комплексного соединений (продукт Б). Интеркаляцию йода проводят в течении 4-х часов при температуре 25 °С.
Образовавшийся ионный наноструктурированный комплекс АБА выделяют из реакционной среды приемлемым методом и высушивают (фиг. 10(г)).
Ионная сила раствора составляет 3,02.
Результаты анализа:
Figure imgf000025_0004
Figure imgf000025_0002
Пример JVb 5 ФС-1
Синтез АБА проводят в лабораторном реакторе фирмы «QVF ENGINEERING» GMBH D-55122 Mainz тип RuhrgefaB 2L при постоянном перемешивании. В 500 мл воды при 43°С растворяют 130 г смеси амилозы и амилопектина в соотношении (1 :4). Температура поддерживается термостатом фирмы «huber» ministat 230 СС2. Далее приливают 3,0 г ПВС, растворённого в 150 мл воды, 4,5 г натрия хлорида и 2,0 г кальция хлорида растворённых в 100 мл воды (Продукт А).
5,0 г альбумина растворяют в 150 мл воды и добавляют 4,0 г лития хлорида, 8,4 г хлорида магния, 0,5 г натрия хлорида. Полученный раствор переносят в реактор. Смесь перемешивается 20 минут, после чего температуру реакционной зоны снижают до 25 °С (Продукт Б).
В 100 мл воды растворяют 8,2 г 12 и 12,1 г калия иодида. Полученный раствор приливают порциями в раствор комплексного соединений (продукт В). Интеркаляцию йода проводят в два этапа, как описано в предыдущих примерах.
Образовавшийся ионный наноструктурированный комплекс АБА выделяют из реакционной среды приемлемым методом и высушивают (фиг. 11).
Ионная сила раствора составляет 20,60.
Результаты анализа:
Figure imgf000026_0002
Figure imgf000026_0001
Пример JVs 6 ФС-1.5
Синтез АБА проводят в лабораторном реакторе фирмы «QVF ENGINEERING)) GMBH D-55122 Mainz тип RuhrgefaB 2L при постоянном перемешивании. В 500 мл воды гидролизуют 24,1 г карбогидрата при температуре 80 °С до определённой молекулярной массы. Температура поддерживается термостатом фирмы «huber» ministat 230 СС2. Далее приливают 2,8 г ПВС, растворённого в 150 мл воды. Смесь хорошо перемешивают и охлаждают до 43 °С (продукт А).
В 100 мл воды растворяют 34,0 г 12 и 50,5 г калия иодида. Полученный раствор приливают порциями в раствор комплексного соединений (продукт Б). Интеркаляцию йода проводят в два приёма в течении 4-х часов при температуре 25 °С.
Образовавшийся ионный наноструктурированный комплекс АБА выделяют из реакционной среды приемлемым методом высушивают (фиг. 1000).
Ионная сила раствора составляет 25,3.
Результаты анализа:
Figure imgf000027_0002
Figure imgf000027_0001
Пример JVs 7 ФС-1.6
Синтез АБА проводят в лабораторном реакторе фирмы «QVF ENGINEERING)) GMBH D-55122 Mainz тип RuhrgefaB 2L при постоянном перемешивании. В 500 мл воды гидролизуют 24,1 г карбогидрата до необходимой молекулярной массы при температуре 100 °С. Температура поддерживается термостатом фирмы «huber» ministat 230 СС2. Далее приливают 2,8 г ПВС, растворённого в 150 мл воды, 0,8 г натрия хлорида и 0,37 г кальция хлорида растворённых в 100 мл. Смесь хорошо перемешивают и охлаждают до 43 °С (продукт А).
0,93 г альбумина растворяют в 150 мл воды и добавляют 0,73 г лития хлорида, 1,55 г хлорида магния, 0,13 г натрия хлорида. Полученный раствор переносят в реактор после достижения температуры продукта А требуемого значения, указанного выше. Смесь перемешивается 20 минут (продукт Б), после чего температуру реакционной зоны снижают до 25 °С.
В 100 мл воды растворяют 34,0 г 12 и 50,5 г калия иодида. Полученный раствор приливают порциями в раствор комплексного соединений (продукт В). Интеркаляцию йода проводят в два этапа в течении 4-х часов при температуре 25 °С.
Образовавшийся ионный наноструктурированный комплекс АБА выделяют из реакционной среды приемлемым методом и высушивают (фиг. 10(e)).
Ионная сила раствора составляет 27,9.
Результаты анализа:
Figure imgf000028_0002
Figure imgf000028_0001
Пример JNb 8 ФС-1.7
Синтез АБА проводят в лабораторном реакторе фирмы «QVF
ENGINEERING)) GMBH D-55122 Mainz тип RiihrgefaB 2L при постоянном перемешивании. В 500 мл воды растворяют 130,0 г декстрина и 3,0 г ПВС при температуре 50 °С. Температура поддерживается термостатом фирмы «huber» ministat 230 СС2. Далее приливают 4,0 г натрия хлорида и 2,0 г кальция хлорида растворённых в 100 мл воды. Смесь хорошо перемешивают и охлаждают до 43 °С (продукт А).
5,0 г альбумина растворяют в 150 мл воды и добавляют 4,0 г лития хлорида, 8,4 г хлорида магния, 1,0 г натрия хлорида. Полученный раствор переносят в реактор после достижения температуры продукта А требуемого значения, указанного выше. Смесь перемешивается 20 минут (продукт Б), после чего температуру реакционной зоны снижают до 25 °С.
В 100 мл воды растворяют 08,2 г 12 и 12,1 г калия иодида. 70 мл полученного раствора приливают порциями в раствор комплексного соединений (продукт В). Интеркаляцию йода проводят в течении 4-х часов при температуре 25 °С.
В 150 мл воды растворяют 0,6 г ИЛ-2 и медленно добавляют в реактор. Через 30 минут после окончания загрузки ИЛ-2 в реактор добавляют 30 мл продукта В. Образовавшийся ионный наноструктурированный комплекс АБА выделяют из реакционной среды приемлемым методом и высушивают (фиг. 10(ж)).
Ионная сила раствора составляет 20,60.
Результаты анализа:
Figure imgf000029_0002
Figure imgf000029_0001
Пример JVs 9 ФС-1.8
Синтез АБА проводят в лабораторном реакторе фирмы «QVF ENGINEERING)) GMBH D-55122 Mainz тип RuhrgefaB 2L при постоянном перемешивании. В 100 мл воды гидролизуют 13,1 г карбогидрата при температуре 130 °С. Температура поддерживается термостатом фирмы «huber» ministat 230 СС2. Далее приливают 3,0 г ПВС, растворённого в 150 мл воды, 0,3 г натрия хлорида и 0,2 г кальция хлорида растворённых в 100 мл. Смесь хорошо перемешивают и охлаждают до 43 °С (продукт А). 0,51 г альбумина растворяют в 150 мл воды и добавляют 0,4 г лития хлорида, 0,84 г хлорида магния, 0,2 г натрия хлорида. Полученный раствор переносят в реактор после достижения температуры продукта А требуемого значения, указанного выше. Смесь перемешивается 20 минут (продукт Б), после чего температуру реакционной зоны снижают до 25 °С.
В 500 мл воды растворяют 74,5 г 12 и 110,0 г калия иодида. Полученный раствор приливают порциями в раствор комплексного соединений (продукт В). Интеркаляцию йода проводят в два приёма в течении 4-х часов при температуре 25 °С.
Образовавшийся ионный наноструктурированный комплекс АБА выделяют из реакционной среды приемлемым методом и высушивают (фиг. 10(з)).
Ионная сила раствора составляет 56,3.
Результаты анализа:
Figure imgf000030_0002
Figure imgf000030_0001
В испытаниях на биологическую активность установлено, что АБА ФС-1 проявляет активность in vitro по отношению, как к клиническим изолятам, так и к контрольным штаммам MRS А и MSSA. МИК антибактериального агента варьировали от 0,938 мг/мл до 0,234 мг/мл.
Тест на синергизм с оксациллином показал снижение МИК обоих препаратов. Снижение составило с 256 до 64 мкг/мл для оксациллина и с 0,234 до 0,117 мг/мл для АБА ФС-1. Индекс ФИК для этого теста составил 0,75, что можно расценить как частичный синергизм между тестируемыми препаратами. Тест на синергизм с цефамандолом показал снижение МИК обоих препаратов. Снижение составляло от 64 до 8 мкг/мл для цефамандола и от 0,469 мг/мл до 0,234 мг/мл для АБА ФС-1. Индекс ФИК для данного теста 0,62, что определяет взаимодействие этих антибактериальных средств как частичный синергизм.
Тест на синергизм с линкомицином показал снижение МИК обоих препаратов. Снижение составляло от 64 до 8 мкг/мл для линкомицина и 0,234 мг/мл до 0,117 мг/мл для АБА ФС-1. Индекс ФИК для данного теста 0,625, что определяет взаимодействие этих антибактериальных средств как частичный синергизм.
АБА по примерам 1-9 (ФС-1.1 - ФС-1.8) обладает большей или меньшей бактерицидной активностью в отношении патогенных микроорганизмов различных классов (таблица 6). Наиболее приемлемым и эффективным, как следует из данных таблицы 6, в отношении микобактерий туберкулёза является АБА по примеру 5 (ФС-1).
В результате исследовании антимикобактериального действия ФС-1 на M.tuberculosis H37Rv, М. tuberculosis MS-115 с множественной лекарственной устойчивостью и М. bovis было установлено, что при концентрациях препарата в разведениях 1 : 12,5; 1 :25 и 1 :50 наблюдалось полное подавление размножения микобактерий на протяжении всего срока регистрации.
Бактерицидную активность ФС-1 определяли in vitro микробиологическим методом двукратных серийных разведений в жидкой среде Школьниковой с последующим пересевом на среду Левенштейна-Иенсена. Установлено in vitro бактерицидное действие ФС-1 в концентрациях от 1,750 до 0,0437 мг/мл в отношении полевых штаммов микобактерий, лекарственноустойчивых клинических изолятов и М. tuberculosis H37Rv. Бактериостатическое действие ФС-1 наблюдается в концентрации 0,0218 до 0,0109 мг/мл. Бактерицидную активность in vitro ФС-1 в концентрации 0,0437мг/мл в сочетании с противотуберкулезными препаратами 1-го рода с последующим пересевом на среду Левенштейна-Йенсена в отношении музейного штамма М. tuberculosis H37Rv и 8 мультирезистентных. в результате исследования выявлена с различными концентрациями противотуберкулезных препаратов 1 ряда музейный чувствительный и мультирезистентные штаммы. Результаты представлены в таблице 7.
Как видно из таблицы 7 после совместного действия ФС-1 с различными концентрациями противотуберкулезных препаратов рост мультирезистентных штаммов микобактерий туберкулеза не был обнаружен в опытных пробирках, т.е. штаммы были чувствительны ко всем концентрациям противотуберкулезных препаратов 1 рода по сравнению с музейным штаммом, где чувствительность наблюдалась как с ФС-1, так и без него.
Установлено in vivo, что введение ФС-1 инфицированным морским свинкам в дозе 5 мг/кг уменьшало количество высеваемых микобактерий из легких инфицированных животных по сравнению с контрольной группой животных. АБА ФС-1 оказывает выраженное противовоспалительное действие на течение экспериментального туберкулеза морских свинок, повышая воздушность легочной паренхимы в два раза.
In vivo установлено, что совместное применение противотуберкулезных препаратов и ФС-1 в дозе из расчета 0,3 мл/кг на 21 сутки после начала лечения приводит к полному исчезновению туберкулезных изменений в органах животных, в независимости от типа резистентности заражающего штамма.
По результатам, представленных в таблице 8 видно, что в 3 группе отмечалось снижение количества туберкулезных поражений в легких и полное их исчезновение на 35 сутки после начала лечения. В 4 группе исчезновение туберкулезных очагов в легких и печени отмечалось на 28 сутки после начала лечения. В 5 группе исчезновение туберкулезных очагов в легких и печени отмечалось на 21 сутки после начала лечения. В группах животных, зараженных мультирезистентным штаммом микобактерий, устойчивого к противотуберкулезным препаратам, наблюдалась следующие результаты: в 6 группе отмечалось прогрессивное течение туберкулезной инфекции; в 7 группе исчезновение туберкулезных очагов в легких и печени отмечалось на 35 сутки после начала лечения; в 8 группе исчезновение туберкулезных очагов в легких и печени отмечалось на 21 сутки после начала лечения.
Лекарственное средство по примеру 5 (ФС-1) в сочетании с противотуберкулёзными препаратами, как в группе животных зараженных штаммом М. tuberculosis H37RV, так и в группе зараженных мультирезистентным штаммом микобактерий оказывает терапевтическое действие на течение туберкулезного процесса. Патологические изменения, характерные при туберкулезе, исчезают уже через 21 и 28 сутки соответственно (группа 4 и 7).
У животных в контрольной группе, не получавших никакого лечения, туберкулезный процесс перешел в генерализованную форму с поражением всех внутренних органов (группа 1 и 2).
Хотя любой механизм, предлагаемый для объяснения механизма действия комплексного соединения не следует рассматривать как ограничительный, наиболее вероятно, что антимикробная активность АБА связана с: а) структурой биологически активных карбогидратов и пептидов; б) окислительным действием молекулы йода как на клеточную оболочку, так и на клеточные структуры при диффузии активной субстанции через мембрану бактериальной клетки; в) галогенированием ДНК микроорганизмов; г) индукцией интерферонов при воздействии комплексного соединения на иммунокомпетентные клетки; д) активацией моноцитов-макрофагов и цитотоксических Т- лимфоцитов.
Изученные АБА по примерам 1 -9 in vitro обладают большей или меньшей вирулицидной активностью в отношении вирусов гриппа, герпеса и иммунодефицита HIV- 1 (табл. 9-13). При изучении антивирусного действия ФС-1 in vitro на суспензионных перевиваемых культурах клеток выявлена анти-ВИЧ активность ФС-1 в культуре клеток в отношении лабораторного штамма вируса ВИЧ-1 (LAI). Снижение показателей инфекционности вируса ВИЧ - содержания р24 и обратной ревертазы. под действием препарата свидетельствует о вирусоцидном действии препарата на вирус иммунодефицита человека. Применение ФС-1 в дозах 0,188 мг/мл и 0,094 мг/мл, или азидотимидина в дозе 0,01 мг/мл приводило к значительному снижению показателя экстинции по сравнению с плацебо и, следовательно, к снижению содержания белка р24 вируса иммунодефицита человека (показатель инфекционности вируса) в 60 раз (табл. 12).
Применение ФС-1 в дозах 0,094 мг/мл и 0,188 мг/мл, приводило к снижению содержания обратной транскриптазы - (показателя инфекционности вируса) по сравнению с негативным контролем в 4,1 и 12,7 раз. При применении азидотимидина в качестве позитивного контроля в дозе 0,01 мг/мл этот показатель снижался только в 5 раз (табл. 13).
Выявлена антивирусная активность препарата ФС-1 в отношении вируса гриппа A FPV/Rostock/34 in vitro и in vivo (табл. 14-16).
Так, выживаемость цыплят зараженных вирусом гриппа в дозе 100 ЭИД50/0,1мл после профилактического применения препарата ФС-1 в дозах 0,290 мг/кг и 1,458 мг/кг составила 100%, а после профилактического применения ремантадина - 28±12,53%. Все контрольные цыплята, получившие физиологический раствор, погибли (100% летальность).
Исследования цитотоксичности и эффективности АБА по примерам 1 -9 выявили три основных соединения, которые были исследованы на предмет острой токсичности. Токсикологические исследования проводились на лабораторных животных с соблюдением норм биоэтики (Руководство по содержанию и использования лабораторных животных. Вашингтон: National Academy Press. 1996). Для установления параметров острой токсичности (LD50) АБА вводили энтерально и парентерально мышам и крысам. Результаты острой токсичности трех АБА при энтеральном и парентеральной пути введения аутбредным мышам приведены в таблице 17 и 18.
Наименее токсичной оказалась субстанция АБА ФС-1. При энтеральном (внутрижелудочном) введении мышам и крысам ФС-1 летального эффекта достичь не удалось, поскольку максимальный объем вводимого лекарственного средства составлял 1 и 5 мл, соответственно, при этом дозы составили 922 и 496 мг/кг, соответственно. Макроскопическое исследование внутренних органов погибших животных позволило установить, что причина смерти, по-видимому, связано с нарушением гемодинамики, что косвенно подтверждается развитием у погибших животных диссеменирующего внутрисосудистого свертывания крови и сильной кровонаполеннности внутренних органов. К концу 14 суток у выживших животных патоморфологические исследования не выявили каких-либо отклонений в структуре внутренних органов и тканей от контрольной группы. При этом значительных повреждений слизистых оболочек желудочно-кишечного тракта не выявлено. Коэффициент кумуляции (Κ^) составил 1,85, что по международной шкале оценки токсичности препаратов соответствует параметрам препаратов со слабовыраженным кумулятивным эффектом.
В дальнейшем было проведено исследование хронической токсичности на крысах и кроликах при внутрижелудочном способе введения в течение 60 дней и 30 дней восстановительного периода в дозах 5,0 мг/кг (доза соответствует 1/100 от МПД определенной на крысах) и 50 мг/кг (доза соответствует 1/10 от МПД определенной на крысах).
Хроническое введение лекарственного средства в дозе 5,0 мг/кг не вызывало отклонений от контрольной группы животных по динамике массы тела, соматическим, гематологическим, биохимическим показателям крови и мочи. Не отмечались также нарушения в сердечной деятельности. У всех животных сохранена нормальная макро- и микроструктура внутренних органов. Хроническое введение лекарственного средства крысам и кроликам в дозе 50,0 мг/кг вызвало следующие токсические эффекты. Со стороны биохимических показателей крови наблюдалось незначительное увеличение активности печеночных ферментов: АлАт, АсАт и щелочной фосфатазы, а также компонентов азотного обмена: креатинина мочевины. У части животных обнаружено венозное полнокровие, гепатоциты с признаками дистрофических изменений в цитоплазме, в стенке желудка наблюдались точечные кровоизлияния не эрозивного характера. У отдельных животных встречался отек оболочки тонкой кишки. Изменения щитовидной железы у животных данной группы были очень разнообразны и индивидуальны. В целом, наблюдались снижение функциональной активности щитовидной железы за счет появления крупных фолликул и уплощения эпителия. Однако, проведенные исследования на 90 день эксперимента (30 сутки восстановительного периода) показали, что выявленные биохимические сдвиги и микроструктура изменения внутренних органов носит обратимый характер.
Репродуктивная токсичность исследовалась на мышах. Самкам до и вовремя беременности внутрижелудочно и внутримышечно вводили лекарственное средство по примеру 5. Результаты исследований представлены в таблице 19.
Установлено, что внутрижелудочное введение (до и после наступления беременности) не приводило к преждевременным родам у мышей даже при испытании препарата в высших дозах (100 мг/кг).
Исследование эмбриотоксичности проводили на эмбрионах курицы. Показано, что дозы АБА по примеру 5 до 12,5 мг/мл не оказывают патологического действия на развитие эмбрионов на различных стадиях.
В исследовании канцерогенной активности лекарственного средства по примеру 5 (ФС-1) использована батарея тестов, включавшая: определение генотоксической активности в SOS-хромотесте на штамме Е.соИ Ее 1000 (PJ Е 43); определение однонитевых разрывов ДНК и определение репаративного (внепланового) синтеза ДНК на клетках крови и культуре клеток рабдомиосаркоме в концентрациях от 1 до 2000 мкг/мл. Результаты исследований концерогенной активности ФС-1 представлены в таблице 20. В использованных условиях испытанное ФС-1 не является индуктором SOS-ответа в клетках тестерного штамма E.coli Ее 1000(PJE43).
Выявлен негативный результат (отсутствие однонитевых разрывов ДНК) при воздействии 200, 300, 600 мкг/мл ФС- 1.
Генотоксическая активность лекарственного средства по примеру 5 исследована в тесте индукции внепланового (репаративного) синтеза ДНК в клетках периферической крови донора. Показано, что в диапазоне концентраций 50, 100, 200 мкг/мл не обнаруживается стимуляция внепланового синтеза и с метаболической активацией и без нее.
В опытах, как без метаболической активации, так и с метаболической активацией при проведении теста Эймса не было обнаружено ни каких достоверных изменений в ростовой активности всех четырех исследованных мутагенных штаммов Salmonella thyphymurium под воздействием ФС-1 в сравнении с отрицательным контролем.
Причем подобное отсутствие эффекта на рост мутагенных штаммов было зарегистрировано и для его сравнительно высоких концентраций, таких как 1,0 и 2,0 мг/чашка. Следовательно, ФС-1 не обладает мутагенным действием в отношении ДНК ауксотрофных по гистидину штаммов Salmonella thyphymurium в тесте Эймса.
Анализ ДНК-повреждающего действия ФС-1 в отношении как клеток мышиной лимфомы L5178Y, так и клеток человеческой гепатомы HepG2 не выявил достоверного повышения спонтанного образования кометной (хвостовой) ДНК в клетках данных линий. Более того, отсутствие индуцирующего влияния препарата на образование кометной (хвостовой) ДНК в цитоплазме обоих типов изученных клеточных линий было показано также и в присутствии метаболической активации ферментами печени мышей. Следовательно, лекарственное средство в исследуемом диапазоне концентраций, даже в таких значительных как 1 ,0 и 2,0 мг/мл, не оказывает повреждающего действия на ДНК эукариот в условиях in vitro, как в отсутствии, так и после его метаболической активации.
В таблице 21 представлены результаты исследований цитогенетической активности. Статистически достоверных различий в уровне лейкоцитов костного мозга с хромосомными аберрациями, а также количества и качества хромосомных аберраций в них под воздействием однократного введения ФС-1 в дозе 22 мг/кг массы животного не было обнаружено. Более того, многократное введение ФС-1 в дозе 8 мг/кг массы животного также характеризовалось отсутствием его воздействие как на количество и характер хромосомных аберраций в лейкоцитах костного мозга по сравнению с контролем (таблица 21).
Следовательно, ФС-1 в исследуемых дозах, не оказывает повреждающего действия на ДНК эукариот в условиях in vivo.
Представленные в таблице 22 данные показывают, что при однократном введении ФС-1 в дозе 22 мг/кг массы животного не наблюдается достоверного повышения как содержания полихроматических и нормохроматических эритроцитов костного мозга с микроядрами, так и количества микроядер в них. В дополнении к этому, многократное введение препарата в дозе 8 мг/кг массы животного также характеризовалось отсутствием его эффекта как на количество полихроматических и нормохроматических эритроцитов содержащих микроядра, так и на общее число микроядер в эритроцитах по сравнению с контролем (таблица 22).
Следовательно, лекарственное средство в исследуемых дозах, не оказывает повреждающего действия на ДНК эукариот, в частности выброса части ДНК из ядра в виде микроядра, в условиях in vivo в ходе их нормального развития.
Результаты эксперимента по изучению индукции ФС-1 доминантных летальных мутаций в зародышевых клетках продемонстрировали, что уровень постимплантационных потерь у животных, подвергавшихся воздействию лекарственного средства при его внутримышечном введении в дозе 22 мг/кг (опытная группа 1.1 - 1.3) массы животного, не изменялся по сравнению с контрольной группой (таблица 23).
Следовательно, ФС-1 при его введении в организм в исследуемых дозах не индуцирует развитие доминантных летальных мутаций в зародышевых клетках (зрелых спермиях, поздних и ранних сперматидах) млекопитающих в условиях in vivo, т.е. не обладает мутагенной активностью в тесте доминантных летальных аллелей.
Результаты многочисленных экспериментов по анализу мутагенной активности ФС-1 на различных по чувствительности тест-системах как в условиях in vitro, так и in vivo доказали, что препарат не обладает мутагенными свойствами даже в его значительных количествах. Это свидетельствует о том, что ФС-1 при своем взаимодействии с клетками эукариот, включая активно делящиеся и половые, которые принадлежат к категории особо-чувствительных, не оказывает на них ДНК-повреждающего и специфического мутагенного действия, т.е. не вызывает нарушений ДНК и/или дисфункций в нормальной реализации генетического аппарата.
В случае воздействия дозы ионизирующей радиации, а именно, 800 Р, в группе мышей, получивших перед облучением 0,15 мл ФС-1, был получен определенный радиопротекторный эффект. Так, если в контрольной группе животных к концу 30 суток показатель выживаемости был равен 30 %, а СПЖ - 18,9±0,4 дней, то в опытной группе эти показатели составили, соответственно, 70 % и 24,6±0,7 дней. Статистическая обработка полученных результатов (СПЖ) с помощью критерия Стьюдента показала достоверную разницу (30 %) в отношении СПЖ (р<0,05).
В эксперименте на крысах при дозе в 800 Р к концу срока наблюдения выжило 26,7 % крыс, а СПЖ данной группы составила 17,2±0,5 дней. У крыс, перед облучением в дозе 800 Р получивших внутрижелудочно 1,0 мл ФС-1, выживаемость составила 50%, а СПЖ удлинилась на 24% (21,3±0,8 дней) (фиг. 12). И в этом случае наблюдался определенный радиопротекторный эффект. Статистическая обработка полученных результатов (СПЖ) с помощью критерия Стьюдента показала достоверную разницу в отношении СПЖ (р<0,05). Сравнивая результаты экспериментов, можно сделать вывод о том, что ФС-1 обладает определенным радиопротекторным действием, которое проявляется при облучении животных в дозах, близких к полулетальной (Л 50).
Согласно исследованиям Venturi (2000), йод был первым антиоксидантом при зарождении жизни на нашей планете, который сыграл огромную роль и в эволюции человека. Хорошо известно, что основным поражающим фактором радиации являются свободные радикалы, образующиеся в организме непосредственно после облучения (Bacq, 1965; Alexander, Bacq, 1974; Halliwell, 1985, 1991). Антоксиданты, к которым относится йод, связывают свободные радикалы, препятствуя их взаимодействию с биомолекулами организма (Shimoi, 1996; Halliwell, 1985, 1991).
Эффективность терапевтического действия лекарственного средства на основе АБА по примеру 5 (ФС-1) установлено в клинических испытаниях на трёх группах добровольцев, больных мультирезистентным туберкулёзом лёгких (MDR) (табл. 24).
Первая группа (п=19), получала комплексную терапию противотуберкулезными препаратами II ряда, а также АБА по примеру 5 в дозе 0,1 мл/кг массы тела. Вторая группа (п=17) принимала противотуберкулезные препараты II ряда и плацебо в дозе 0,1 мл/кг массы тела, третья группа (п=19) принимала противотуберкулезные препараты II ряда и ФС-1 в дозе 0,125 мл/кг массы тела. Все препараты назначались ежедневно, однократно.
Изучение безопасности лекарственного средства по показателям гемостаза (АПТВ (табл. 25), протромбиновый индекс (табл. 26), тромбиновое время (табл. 27), фибриноген) в течение 1-го месяца комплексной терапии больных резистентными формами туберкулеза легких показало, что ФС-1 в применяемых дозах 0,1 и 0,125 мг/кг не оказывало влияния на свертываемость крови, кроме того, данные УЗИ щитовидной железы, полученные через месяц терапии, не выявили никакого рода изменений у испытуемых.
По тесту на определение лекарственной чувствительности микобактерий туберкулеза была доказана устойчивость на противотуберкулезные препараты (далее - ПТП) I ряда (изониазид (Н), рифампицин (R), этамбутол (Е), стрептомицин (S)). Больные были рандомизированы на 3 группы: 1 группа (основная) получали ПТП II ряда (циклосерин (Cs), офлоксацин (Ofs), ПАСК (Pas), протионамид (Pto), каприомицин (Cm)) + ФС-1 (0,1 мл/кг); 2 группа (основная) получали ПТП II ряда (циклосерин (Cs), офлоксацин (Ofs), ПАСК (Pas), протионамид (Pto), каприомицин (Cm)) + ФС-1 (0,125 мл/кг); 3 группа (контрольная) получали ПТП II ряда (циклосерин (Cs), офлоксацин (Ofs), ПАСК (Pas), протионамид (Pto), каприомицин (Cm)) + плацебо).
Средний возраст испытуемых составил 33,14±9,03 (лет), Среди них мужчины составили 75,8 %, женщины 24,2 %. Среди клинических форм наиболее часто встречалась инфильтративная форма - 70,1 %, реже - фиброзно-кавернозная - 28,2 %. Группы были однородными, достоверных различий по основным характеристикам не отмечалось.
Изучение предварительной терапевтической эффективности лекарственного средства свидетельствует, что конверсия мазка достоверно выше в основных группах начиная с 3-го месяца терапии, что доказывает эффективность применения ФС-1 в комбинированной терапии (таб. 28).
Данные, приведённые в таблица 29 также свидетельствует о том, что начиная с 3-го месяца терапии, отрицательный посев наблюдается достоверно выше в основных группах, в сравнении с контрольной, что доказывает эффективность применения ФС-1 в противотуберкулезной терапии.
Классический метод посева мокроты на плотную среду (таблица 30) также свидетельствует о том, что у больных с устойчивой формой туберкулеза, получающих ФС-1 в комбинации с противотуберкулезными препаратами II ряда удельный вес бактериологического анализа с отрицательным результатом достоверно выше, в сравнении с контролем уже через два месяца терапии, которое прослеживается через и 3, 4 месяца.
Изменения рентгенологической картины больных с мультирезистентной формой (MDR) туберкулеза, получающих ФС-1 в комбинации с противотуберкулезными препаратами II ряда свидетельствуют о том, что уже через месяц терапии отмечалась положительная динамика достоверно выше, чем в контрольной группе (плацебо+ПТП II ряда), то есть раньше начинается рассасывание инфильтраций, уплотнение очагов, регрессия полостей распада (таблица 31).
Как видно из таблицы 32 в основных группах наблюдается прибавка веса, тогда как в контрольной - наоборот, снижение, причем через 3 месяца изменения массы тела достоверны в 1-й группе, в 3-й группе, и через 4 месяца - в 3-й группе.
Результаты II фазы клинических испытаний доказывают эффективность применения ФС-1 в комбинированной противотуберкулезной терапии у больных с мультирезистентной формой туберкулеза.
Figure imgf000043_0001
Figure imgf000044_0001
Figure imgf000045_0001
Figure imgf000046_0001
Figure imgf000047_0001
Figure imgf000048_0001
Figure imgf000048_0002
Figure imgf000048_0003
„
7
вируса гриппа A/FPV/Waybrige/78/H7N7 в культуре клеток MDCK через 72 ч
Figure imgf000049_0001
Таблица 11 - Определение антивирусной активности ФС-1 в отношении вируса простого герпеса 1-го типа штамм «Victory» в культуре клеток RD через 72 ч
Figure imgf000049_0002
Таблица 12 - Вирулицидный эффект ФС-1 на вирус иммунодефицита человек HIV-l(LAI) (детекция в иммуноферментном анализе по белку р24)
Figure imgf000049_0003
Таблица 13 - Вирулицидный эффект ФС-1 на вирус иммунодефицита человека HIV-l(LAI) (детекция в иммуноферментном анализе по обратной транскриптазе)
Figure imgf000050_0001
Таблица 14 - Определение антивирусной активности ФС-1 in vitro в отношении вируса гриппа A FPV/Waybrige/78/H7N7 в культуре клеток MDCK через 72 ч
Figure imgf000050_0002
Таблица 15 - Профилактическое действие препарата ФС-1 in vivo на модели вируса гриппа штамм A FPV/Rostock/34
Figure imgf000050_0003
Таблица 16 - Терапевтическое действие препарата ФС-1 in vivo на модели вируса гриппа штамм A/FPV/Rostock/34
Figure imgf000051_0001
Figure imgf000052_0001
Figure imgf000053_0001
римечания: φ - количество рагментов, φθΛ - количество одиночных фрагментов; Νφπ - количество парных фрагментов; Νοβ - количество обменов; Νπ - количество пробелов; РЦ - количество разрывов в центромере; ΝΜ - количество клеток с множественными нарушениями; КПд - количество клеток с полной деструкцией хромосом; No - общее количество клеток с аберрациями.
Figure imgf000053_0002
Примечания: Nn a - количество полихроматических эритроцитов с микроядрами в цитоплазме; ΝΜπχ3 - количество микроядер на 1000 полихроматических эритроцитов; ΝΜΗΧ3 - количество нормохроматических эритроцитов с микроядрами в цитоплазме; ΝΜΗΠΧ3 - количеств микроядер на 1000 нормохроматических эритроцитов.
Figure imgf000054_0001
Figure imgf000055_0001
Figure imgf000056_0001
Figure imgf000057_0001
Figure imgf000058_0001

Claims

Формула изобретения
1. Антибактериальный агент для лечения инфекционных заболеваний бактериальной природы, включая госпитальные инфекции и лекарственно устойчивый туберкулез, представляющий собой ионный наноструктурированный комплекс, образованный белками и/или полипептидами, карбогидратами, солями щелочных и щелочноземельных металлов и интеркалированным в них йодом, отличающийся тем, что белки и/или полипептиды ионного наноструктурированного комплекса содержат, по крайней мере, одну концевую аминокислоту с электронодонорными функциональными группами.
2. Антибактериальный агент по п. 1, отличающийся тем, что в качестве белков используют интерлейкины, а концевыми аминокислотами являются Phe, Ala, Val, Ala, Leu, He и др.
3. Антибактериальный агент по п.1, 2, отличающийся тем, что антибактериальный агент повышает чувствительность бактерий, в том числе антибиотикоустойчивых, к антибиотикам.
4. Антибактериальный агент по п.1-4, отличающийся тем, что повышает эффективность антибиотикотерапии инфекционных заболеваний бактериальной природы, включая госпитальные инфекции и лекарственно устойчивый туберкулез.
5. Антибактериальный агент по п.1-5, отличающийся тем, что обладает антивирусным действием.
6. Антибактериальный агент по п. 1-6, обладают иммуногенной активностью, повышая активность моноцитов-макрофагов и цитотоксических Т-лимфоцитов.
7. Антибактериальный агент по п. 1-5, отличающийся тем, что стимулирует кроветворную функцию костного мозга.
8. Антибактериальный агент по п. 1-5, отличающийся тем, что обладает противоопухолевым действием.
9. Антибактериальный агент по п.1-5, отличающийся тем, что обладает радиопротекторными свойствами.
10. Антибактериальный агент по п.1-6, отличающийся тем, что ИНСК имеет формулу [{(Ln(MeI3)+)y[Me(Lm)I]+ x}(Cr)y+x+k] с М = 30-300 КДа.
11. Антибактериальный агент по п. 1-5, отличающийся тем, что представлен в фармакологической форме, пригодной для парентерального, орального, наружного и иного применения.
12. Антибактериальный агент по п.1-5, отличающийся тем, что в приемлемых концентрациях компонентов является нелекарственным средством.
13. Способ получения антибактериального агента по п. 1, включающий реакцию комплексообразования карбогидратов и белков с солями металлов и интеркаляцию йода в комплекс при ионной силе от 5-10"4 до 15, отличающийся тем, что введение иммунотропных белков осуществляется отдельной стадией, после интеркаляции 5-95 % йода.
PCT/KZ2011/000019 2010-12-30 2011-12-09 Антибактериальный агент для лечения инфекционных заболеваний бактериальной природы WO2012091534A1 (ru)

Priority Applications (18)

Application Number Priority Date Filing Date Title
LTEP11853027.8T LT2722053T (lt) 2010-12-30 2011-12-09 Antibakterinis agentas, skirtas bakterinės kilmės infekcinių ligų gydymui
RS20171276A RS56687B1 (sr) 2010-12-30 2011-12-09 Antibakterijsko sredstvo za tretman infektivnih bolesti bakterijskog porekla
NO11853027A NO2722053T3 (ru) 2010-12-30 2011-12-09
US13/994,631 US10149890B2 (en) 2010-12-30 2011-12-09 Antibacterial agent for treating infectious diseases of bacterial origin
SG2013047105A SG192563A1 (en) 2010-12-30 2011-12-09 Antibacterial agent for treating infectious diseases of bacterial origin
EP11853027.8A EP2722053B1 (en) 2010-12-30 2011-12-09 Antibacterial agent for treating infectious diseases of bacterial origin
DK11853027.8T DK2722053T3 (da) 2010-12-30 2011-12-09 Antibakterielt middel til behandling af infektionssygdomme af bakteriel oprindelse
ES11853027.8T ES2476240T3 (es) 2010-12-30 2011-12-09 Agente antibacteriano para el tratamiento de enfermedades infecciosas de origen bacteriano
CN201180063245.3A CN103442728B (zh) 2010-12-30 2011-12-09 用于治疗细菌来源的传染性疾病的抗菌剂
JP2013547373A JP6041811B2 (ja) 2010-12-30 2011-12-09 細菌由来の感染症を治療する抗細菌剤
PL11853027T PL2722053T3 (pl) 2010-12-30 2011-12-09 Środek przeciwbakteryjny do leczenia chorób zakaźnych pochodzenia bakteryjnego
DE11853027.8T DE11853027T1 (de) 2010-12-30 2011-12-09 Antibakterielles mittel zur behandlung von infektionskrankheiten bakteriellen ursprungs
SI201131386T SI2722053T1 (en) 2010-12-30 2011-12-09 An antibacterial agent for the treatment of infectious diseases of bacterial origin
IL227132A IL227132B (en) 2010-12-30 2013-06-23 An antibacterial agent for the treatment of infectious diseases of bacterial origin
CY20142200001T CY20142200001T2 (el) 2010-12-30 2014-07-25 Αντιβακτηριακος παραγοντας για τη θεραπεια λοιμωδων νοσηματων βακτηριακης προελευσης
US14/850,167 US10251939B2 (en) 2010-12-30 2015-09-10 Antibacterial agent for treating infectious diseases of bacterial origin
HRP20180075TT HRP20180075T1 (hr) 2010-12-30 2018-01-16 Antibakterijsko sredstvo za liječenje infektivnih bolesti bakterijskog porijekla
US16/238,686 US20190134157A1 (en) 2010-12-30 2019-01-03 Antibacterial agent for treating infectious diseases of bacterial origin

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KZ2010/1816.1 2010-12-30
KZ20101816 2010-12-30

Related Child Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
US13/994,631 A-371-Of-International US10149890B2 (en) 2010-12-30 2011-12-09 Antibacterial agent for treating infectious diseases of bacterial origin
US14/850,167 Division US10251939B2 (en) 2010-12-30 2015-09-10 Antibacterial agent for treating infectious diseases of bacterial origin

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2012091534A1 true WO2012091534A1 (ru) 2012-07-05

Family

ID=46383344

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/KZ2011/000019 WO2012091534A1 (ru) 2010-12-30 2011-12-09 Антибактериальный агент для лечения инфекционных заболеваний бактериальной природы

Country Status (19)

Country Link
US (3) US10149890B2 (ru)
EP (1) EP2722053B1 (ru)
JP (1) JP6041811B2 (ru)
CN (1) CN103442728B (ru)
CY (1) CY20142200001T2 (ru)
DE (1) DE11853027T1 (ru)
DK (1) DK2722053T3 (ru)
EA (1) EA024595B1 (ru)
ES (1) ES2476240T3 (ru)
HR (1) HRP20180075T1 (ru)
HU (1) HUE035149T2 (ru)
IL (1) IL227132B (ru)
LT (1) LT2722053T (ru)
NO (1) NO2722053T3 (ru)
PL (1) PL2722053T3 (ru)
RS (1) RS56687B1 (ru)
SG (1) SG192563A1 (ru)
SI (1) SI2722053T1 (ru)
WO (1) WO2012091534A1 (ru)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022126127A1 (en) * 2020-12-12 2022-06-16 Iocure, Inc. Iodine delivery compounds
CN114634762A (zh) * 2022-03-17 2022-06-17 东莞市人民医院 金属离子介导的蛋白质涂层、其制备方法及其应用

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1996039839A1 (en) 1995-06-07 1996-12-19 Henkel Corporation Iodine complex of alkyl polyglycosides
RU2130312C1 (ru) * 1996-01-26 1999-05-20 Александр Иванович Ильин Лечебный препарат, обладающий бактерицидным и вирулицидным действием - йодомидол
EP0978289A1 (en) 1998-07-29 2000-02-09 Aleksandr Ivanovic Iljin Virucide drug containing iodine
RU2157405C2 (ru) 1998-12-11 2000-10-10 Тверская государственная медицинская академия Способ получения иммобилизованных ферментов с помощью реакции комплексообразования с молекулярным йодом и йодидом калия
RU2212884C2 (ru) 1998-05-27 2003-09-27 Юроселтик С.А. Препараты для введения противовоспалительных, особенно антисептических, агентов и/или агентов, способствующих заживлению ран, в нижние дыхательные пути
EA004203B1 (ru) * 2000-04-17 2004-02-26 Зао "Арменикум+" Антивирусный и антибактериальный фармацевтический препарат "арменикум" и его применение для лечения инфекционных заболеваний
KZ15116A (ru) * 2002-11-08 2004-12-15

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1066979A (zh) * 1991-05-20 1992-12-16 中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所 烧伤创面抗菌制剂的制备方法
WO2001078751A1 (en) * 2000-04-17 2001-10-25 'armenicum+' Jsc Antiviral and antibacterial pharmaceutical preparation 'armenicum' and its use for treatment of infectious diseases
CN1162399C (zh) * 2001-04-28 2004-08-18 曾雄飞 氨基酸碘络合物
WO2004096180A1 (en) * 2003-04-29 2004-11-11 Baxter International Inc. Formulation to render an antimicrobial drug potent against organisms normally considered to be resistant to the drug
RU2411960C2 (ru) * 2009-05-04 2011-02-20 Некоммерческое партнерство по научной и инновационной деятельности "Томский атомный центр" Раневая повязка

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1996039839A1 (en) 1995-06-07 1996-12-19 Henkel Corporation Iodine complex of alkyl polyglycosides
RU2130312C1 (ru) * 1996-01-26 1999-05-20 Александр Иванович Ильин Лечебный препарат, обладающий бактерицидным и вирулицидным действием - йодомидол
RU2212884C2 (ru) 1998-05-27 2003-09-27 Юроселтик С.А. Препараты для введения противовоспалительных, особенно антисептических, агентов и/или агентов, способствующих заживлению ран, в нижние дыхательные пути
EP0978289A1 (en) 1998-07-29 2000-02-09 Aleksandr Ivanovic Iljin Virucide drug containing iodine
RU2157405C2 (ru) 1998-12-11 2000-10-10 Тверская государственная медицинская академия Способ получения иммобилизованных ферментов с помощью реакции комплексообразования с молекулярным йодом и йодидом калия
EA004203B1 (ru) * 2000-04-17 2004-02-26 Зао "Арменикум+" Антивирусный и антибактериальный фармацевтический препарат "арменикум" и его применение для лечения инфекционных заболеваний
KZ15116A (ru) * 2002-11-08 2004-12-15

Non-Patent Citations (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Clinical Laboratory Standards Institute", 2006, CLINCAL LABORATORY STANDARDS INSTITUTE, article "Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically", pages: M7 - A7
"Guide for the Care and Use of Laboratory Animals", 1996, NATIONAL ACADEMY PRESS
"Interleukin-1 beta (163-171)", 9 August 2005 (2005-08-09), pages 1 - 4, XP008169458, Retrieved from the Internet <URL:http://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/summary/summary.cgi? cid=123872&loc=ec_rcs> *
"Methods for Determining Bactericidal Activity of Antimicrobial Agents", 1999, CLINICAL LABORATORY STANDARDS
BEZIRGANYAN K.B.; DAVTYAN T.K.; GALOYAN A.A.: "Hypothalamic proline rich polypeptide regulates hematopoiesis", NEUROCHEM. RES., vol. 35, 2010, pages 917 - 924, XP019827321
BEZIRGANYAN KB; DAVTYAN TK; GALOYAN AA: "Hypothalamic proline rich polypeptide regulates hematopoiesis", NEUROCHEM. RES., vol. 35, 2010, pages 917 - 924, XP019827321
DATABASE GENBANK [online] 6 January 1995 (1995-01-06), XP003030219, Database accession no. AAA59134 *
E. HASLAM: "Biological Compounds", vol. 5, PERGAMON PRESS, article "Compressive Organic Chemistry", pages: 19
ELIOPOULOS G; MOELLERING R: "Antibiotics in Laboratory Medicine", 1996, WILLIAMS AND WILKINS CO., article "Antimicrobial combinations", pages: 331 - 396
F.DYDA; A.B.HICKMAN; T.M.JENKINS; A. ENGELMAN; R.CRAIGIE; D.R.DAVIES, SCIENCE, vol. V266, 1994, pages 1981 - 1986
FINSTON H.Z.; RYCHTMAN A.C., A NEW VIEW OF CURRENT ACID-BASE SERIES, 1982
GALOYAN A.A.; KOROCHKIN L.I.; RYBALKINA E.J.; PAVLOVA G.V.; SABURINA I.N.; ZARAISKI E.I.; GALOYAN N.A.; DAVTYAN T.K.; BEZIRGANYAN: "Hypothalamic proline-rich polypeptide enhances bone marrow colony-forming cell proliferation and stromal progenitor cell differentiation", CELL TRANSPLANTATION, vol. 17, 2008, pages 1061 - 1066
GEHLEN H.Z., PHYSICAL CHEMISTRY, vol. 203, 1954, pages 125
GERSHANOVICH M.L.; PAIKIN M.D.: "Symptomatic treatment of malignancies", 1986, MOSCOW: MEDICINE, pages: 285P
GISMATOV R.KH ET AL.: "Betaleykin v soprovoditelnoy terapii bolnykh tuberkulezom legkikh", TSITOKINY I VOSPALENIE, vol. 7, no. 1, 2008, pages 59 - 63., XP008169500, Retrieved from the Internet <URL:http://www.cytokines.rU/2008/1/Artl2.php> *
M. NOLTEMEYER; W SAENGER, JACS, vol. 102, no. 8.9., 1980, pages 2710
M. NOLTEMEYER; W. SAENGER, NATURE, vol. V259, no. 26, 1976, pages 629
O.NIMZ; K. GE?LER; I.USON; WSAENGER, CARBOHYDRATE RESEARCH, vol. 336, 2001, pages 141 - 153
PEARSON R.G, JOURNAL CHEMICAL EDUCATION, vol. 45, 1968, pages 643
PEARSON R.G., CHEMICAL COMMUNICATION, 1968, pages 65
PEARSON R.G., JOURNAL ACS, vol. 85, 1963, pages 3533
RUMYANTSEV E.V ET AL.: ""Khimiya" "KolosS", C. 44-19", KHIMICHESKIE OSNOVY ZHIZNI. M., 2007 *
See also references of EP2722053A4
Y. GOLDGUR; FDYDA; A.B.HICKMAN; T.M.JENKINS; R.CRAIGIE; D.R.DAVIES, PROC.NATL.ACID.SCI USA, vol. V95, no. 16, 1998, pages 9150 - 9154

Also Published As

Publication number Publication date
IL227132B (en) 2019-01-31
CN103442728A (zh) 2013-12-11
LT2722053T (lt) 2017-12-11
HRP20180075T1 (hr) 2018-02-23
NO2722053T3 (ru) 2018-03-24
SI2722053T1 (en) 2018-02-28
US10251939B2 (en) 2019-04-09
DE11853027T1 (de) 2014-09-11
PL2722053T3 (pl) 2018-04-30
US20190134157A1 (en) 2019-05-09
EP2722053A4 (en) 2014-09-03
EA024595B1 (ru) 2016-10-31
CN103442728B (zh) 2017-04-12
JP6041811B2 (ja) 2016-12-14
ES2476240T3 (es) 2018-03-06
CY20142200001T2 (el) 2016-06-22
DK2722053T3 (da) 2017-11-20
US20150374837A1 (en) 2015-12-31
US10149890B2 (en) 2018-12-11
RS56687B1 (sr) 2018-03-30
JP2014502616A (ja) 2014-02-03
EP2722053B1 (en) 2017-10-25
ES2476240T1 (es) 2014-07-14
HUE035149T2 (en) 2018-05-02
SG192563A1 (en) 2013-09-30
US20140010782A1 (en) 2014-01-09
EA201290002A1 (ru) 2012-09-28
EP2722053A1 (en) 2014-04-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6685991B2 (ja) 細菌バイオフィルムの処置および他の使用をはじめとする、生体医学的使用のための消毒薬としてのビスマス−チオール
US10183041B2 (en) Antibacterial composition and its use in treating bacterial infections
EP1948196A2 (de) Verwendung von tetraorganosilizium-verbindungen
KR19990036138A (ko) 암 성장을 억제하기 위한 플루코나졸의 용도
US20190134157A1 (en) Antibacterial agent for treating infectious diseases of bacterial origin
US20020068761A1 (en) Gallium complexes of 3-hydroxy-4-pyrones to treat mycobacterial infections
Andre et al. Exploring antibiotics as ligands in metal–organic and hydrogen bonding frameworks: Our novel approach towards enhanced antimicrobial activity (mini-review)
JP7512206B2 (ja) ミトコンドリア障害を処置するための方法
DE60032915T2 (de) Gallium komplexe von 3-hydroxy-4-pyronen zur behandlung von durch intrazelluläre prokaryoten, dns- und retro-viren verursachten infektionen
WO2006104292A1 (en) Pharmaceutical composition comprising arsenic acid, meta-arsenite, and pharmaceutically acceptable salts
CN104892727B (zh) 具有抗耐药性的含三唑结构链接子的组合抗菌肽及其合成方法
EP3570860B1 (en) Anticancer heterobasidion annosum extract, compositions and uses thereof
JP2014502633A (ja) 抗ウイルス剤
JP5616065B2 (ja) 抗微生物テルペン組成物
Davtyan et al. Design of iodine-lithium-α-dextrin liquid crystal with potent antimicrobial and anti-inflammatory properties
RU2444358C1 (ru) Антиоксидантная и иммуностимулирующая композиция
WO2009002227A1 (ru) Лекарственное средство на основе рифабутина, препарат противомикробного действия, содержащий наночастицы, и способ его получения
KR20030069910A (ko) 암치료제
RU2406518C1 (ru) Противотуберкулезное композиционное средство
KR102562167B1 (ko) 기능화된 전이금속 디칼코게나이드를 포함하는 패혈증 예방 또는 치료용 약학적 조성물
Elo Antimicrobial activity of two antitumour agents and ribonucleotide reductase inhibitors, pyridine-2-carboxaldehyde thiosemicarbazone and the acetate form of its copper (II) chelate
JPH01313433A (ja) 抗ｈｉｖ剤
SK1202022A3 (sk) Nanoformulácie striebra na terapiu zápalových a degeneratívnych ochorení mäkkých a pevných tkanív
RU2292892C2 (ru) Иммуномодулирующее лекарственное средство (варианты)
Miles Synthesis and Characterization of Co (II) and Cu (II) Pyrophosphate Coordination Complexes for Treatment of Pathogenic Agents.

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 11853027

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

REEP Request for entry into the european phase

Ref document number: 2011853027

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2011853027

Country of ref document: EP

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2013547373

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 13994631

Country of ref document: US