EA015712B1

EA015712B1 - Ингибиторы akt (протеинкиназы в)

Info

Publication number: EA015712B1
Application number: EA200970041A
Authority: EA
Inventors: Саджан Джозеф; Жэньхуа Ли; Майкл Рэй Майерс; Актхам Абуруб; Дженни Пингкви Дай; Кристофер Рэндалл Шмид
Original assignee: Эли Лилли Энд Компани
Priority date: 2006-06-20
Filing date: 2007-06-12
Publication date: 2011-10-31
Also published as: SI2035385T1; WO2007149730A2; EA200970041A1; ATE455102T1; JP2009541335A; ES2336630T3; IL195005A0; DE602007004333D1; TW200812970A; PE20080338A1; PL2035385T3; BRPI0713136A2; WO2007149730A3; AU2007261120A1; KR101067551B1; MA30757B1; EP2035385A2; KR20090015978A; DOP2008000053A; AR061240A1

Abstract

Настоящее изобретение относится к 4-[5-(2-аминэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенолу или его фармацевтически приемлемой соли либо гидрату указанного соединения или его соли в качестве ингибиторов Akt, которые являются противоопухолевыми и/или противовирусными агентами, а также к композициям, содержащим указанные соединения, и способам применения указанных соединений.

Description

Настоящее изобретение предоставляет соединения, являющиеся ингибиторами Лк1. композиции, содержащие такие соединения, и способы применения таких соединений.

Протеинкиназы вовлечены в пути передачи сигнала, связывающие факторы роста, гормоны и другие молекулы, влияющие на клетки, с ростом, выживанием и метаболизмом клеток в норме и в условиях патологии. Одна из таких протеинкиназ, протеинкиназа В (называемая также как Ак1), представляет собой серин/треонин киназу, которая играет центральную роль в промотировании пролиферации и выживания разнообразных типов клеток, защищая, таким образом, клетки от апоптоза (запрограммированной гибели клеток).

Активность Ак1 регулируется рядом протеинкиназ и фосфатаз. Например, активацию Ак1 опосредует фосфоиназитол 3-киназа (ΡΙ3-Κ), которая запускает связывание вторичных мессенджеров фосфолипидов со связывающим доменом Ак1 гомологии плекстрина (РН). Связывание закрепляет Ак1 в плазматической мембране и приводит к фосфорилированию и активации данного фермента. Амплификация каталитических субъединиц ΡΙ3-Κ, ρ110α, или мутации в регуляторной субъединице ΡΙ3-Κ, р85а, приводят к активации Ак1 при некоторых видах рака у человека. Недавние исследования продемонстрировали также роль пути Р13-К/АКТ в жизненном цикле многочисленных вирусов.

XVО 01/91754 относится к ингибиторам протеинкиназ. В νθ 2005/011697 приведены ингибиторы протеинкиназ А и В. νθ 2005/054202 относится к ингибиторам АКТ.

Поскольку Лк1 играет первостепенную роль в регулировании выживания клеток, Лк1 представляет новую терапевтическую мишень для эффективного лечения различных заболеваний, в частности рака и вирусных инфекций. Однако такое лечение требует разработки мощных, селективных, биодоступных ингибиторов Ак1. Существует потребность в альтернативных ингибиторах Ак1. Таким образом, настоящее изобретение предоставляет новые ингибиторы Ак1, которые демонстрируют повышенную эффективность, селективность и/или биодоступность, композиции, содержащие такие соединения, и способы применения таких соединений.

Кроме того, фармацевтические композиции, содержащие новые ингибиторы Ак1, в обязательном порядке, после разбавления или в растворе не должны осаждаться. Настоящее изобретение предоставляет фармацевтические композиции, содержащие новые ингибиторы Ак1 в некоторых диапазонах рН, которые не допускают такого осаждения.

Настоящее изобретение предоставляет 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенол или его фармацевтически приемлемую соль либо гидрат указанного соединения или его соли.

Настоящее изобретение предоставляет также дигидрохлорид 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола.

Настоящее изобретение предоставляет далее полугидрат моногидрохлорида 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола.

Настоящее изобретение предоставляет также 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенол или его фармацевтически приемлемую соль либо гидрат указанного соединения или его соли, включая дигидрохлорид 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола или полугидрат моногидрохлорида 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола для применения в качестве лекарственного средства.

Кроме того, настоящее изобретение предоставляет применение 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола или его фармацевтически приемлемой соли либо гидрата указанного соединения или его соли, включая дигидрохлорид 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола или полугидрат моногидрохлорида 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола, для получения лекарственного средства для лечения множественной миеломы, немелкоклеточного рака легкого, глиобластомы, нейробластомы, меланомы или опухолей предстательной железы, молочной железы, яичников, первичной опухоли желудка, кишечного типа, эндометрия, щитовидной железы, поджелудочной железы, легкого или мочевого пузыря.

Настоящее изобретение предоставляет также применение 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин7-ил]фенола или его фармацевтически приемлемой соли либо гидрата указанного соединения или его соли, включая дигидрохлорид 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола или полугидрат моногидрохлорида 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола, для получения лекарственного средства для лечения множественной миеломы, немелкоклеточного рака легкого, глиобластомы или опухолей предстательной железы, молочной железы или яичников.

Настоящее изобретение дополнительно предоставляет применение 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола или его фармацевтически приемлемой соли либо гидрата указанного соединения или его соли, включая дигидрохлорид 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола или полугидрат моногидрохлорида 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола, для получения лекарственного средства для лечения немелкоклеточной карциномы легкого или глиобластомы.

Настоящее изобретение предоставляет далее применение 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин7-ил]фенола или его фармацевтически приемлемой соли либо гидрата указанного соединения или его соли, включая дигидрохлорид 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола или полугидрат моногидрохлорида 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола, для получения лекарственного

- 1 015712 средства для лечения гепатита С, краснухи, вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), гепатита В или цитомегаловируса человека (НСМУ).

Дополнительно настоящее изобретение предоставляет 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7ил] фенол или его фармацевтически приемлемую соль либо гидрат указанного соединения или его соли, включая дигидрохлорид 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола или полугидрат моногидрохлорида 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола, для лечения множественной миеломы, немелкоклеточного рака легкого, глиобластомы, нейробластомы, меланомы или опухолей предстательной железы, молочной железы, яичников, первичной опухоли желудка, кишечного типа, эндометрия, щитовидной железы, поджелудочной железы, легкого или мочевого пузыря.

Настоящее изобретение предоставляет также 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенол или его фармацевтически приемлемую соль либо гидрат указанного соединения или его соли, включая дигидрохлорид 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола или полугидрат моногидрохлорида 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола, для лечения множественной меланомы, немелкоклеточного рака легкого, глиобластомы или опухолей предстательной железы, молочной железы или яичников.

Настоящее изобретение дополнительно предоставляет 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7ил]фенол или его фармацевтически приемлемую соль либо гидрат указанного соединения или его соли, включая дигидрохлорид 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола или полугидрат моногидрохлорида 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола, для лечения немелкоклеточного рака легкого или глиобластомы.

Настоящее изобретение предоставляет далее 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенол или его фармацевтически приемлемую соль либо гидрат указанного соединения или его соли, включая дигидрохлорид 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола или полугидрат моногидрохлорида 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола, для лечения гепатита С, краснухи, вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), гепатита В или цитомегаловируса человека (НСМУ).

Настоящее изобретение предоставляет дополнительно способ лечения множественной миеломы, немелкоклеточного рака легкого, глиобластомы, нейробластомы, меланомы или опухолей предстательной железы, молочной железы, яичников, первичной опухоли желудка, кишечного типа, эндометрия, щитовидной железы, поджелудочной железы, легкого или мочевого пузыря у пациента, нуждающегося в этом, включающий введение эффективного количества 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7ил]фенола или его фармацевтически приемлемой соли либо гидрата указанного соединения или его соли, включая дигидрохлорид 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола или полугидрат моногидрохлорида 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола.

Настоящее изобретение предоставляет также способ лечения множественной миеломы, немелкоклеточного рака легкого, глиобластомы или опухолей предстательной железы, молочной железы или яичников у пациента, нуждающегося в этом, включающий введение эффективного количества 4-[5-(2аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола или его фармацевтически приемлемой соли либо гидрата указанного соединения или его соли, включая дигидрохлорид 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин7-ил]фенола или полугидрат моногидрохлорида 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола.

Настоящее изобретение дополнительно предоставляет способ лечения немелкоклеточного рака легкого или глиобластомы у пациента, нуждающегося в этом, включающий введение эффективного количества 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола или его фармацевтически приемлемой соли либо гидрата указанного соединения или его соли, включая дигидрохлорид 4-[5-(2аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола или полугидрат моногидрохлорида 4-[5-(2аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола.

Настоящее изобретение предоставляет далее способ лечения гепатита С, краснухи, вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), гепатита В или цитомегаловируса человека (НСМУ) у пациента, нуждающегося в этом, включающий введение эффективного количества 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин7-ил]фенола или его фармацевтически приемлемой соли либо гидрата указанного соединения или его соли, включая дигидрохлорид 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола или полугидрат моногидрохлорида 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола.

Настоящее изобретение предоставляет также фармацевтическую композицию, содержащую 4-[5-(2аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенол или его фармацевтически приемлемую соль либо гидрат указанного соединения или его соли, включая дигидрохлорид 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин7-ил]фенола или полугидрат моногидрохлорида 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола, и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или эксципиент.

Настоящее изобретение дополнительно предоставляет лиофилизированную фармацевтическую композицию, содержащую 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенол или его фармацевтически приемлемую соль либо гидрат указанного соединения или его соли, включая дигидрохлорид 4-[5-(2аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола или полугидрат моногидрохлорида 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола, и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или эксципиент, где рН указанной композиции после разбавления водным разбавителем меньше 4,2, но больше

- 2 015712

2,0, меньше 3,2, но больше 2,0, либо меньше 2,8, но больше 2,0.

Настоящее изобретение предоставляет также фармацевтическую композицию, содержащую 4-[5-(2аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил] фенол или его фармацевтически приемлемую соль либо гидрат указанного соединения или его соли, включая дигидрохлорид 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин7-ил]фенола или полугидрат моногидрохлорида 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола, и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или эксципиент, где рН указанной композиции меньше 4,2, но больше 2,0, меньше 3,2, но больше 2,0, или меньше 2,8, но больше 2,0.

Настоящее изобретение предоставляет далее полугидрат моногидрохлорида 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил] фенола в кристаллической форме, которая при рентгеноструктурном анализе демонстрирует пики интенсивности при 2θ=4,9, 14,8 и 10,2.

Настоящее изобретение предоставляет также 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенол или его фармацевтически приемлемую соль либо гидрат.

Соединения согласно настоящему изобретению представляют собой ингибиторы Ак! и полагают, что они могут быть полезны при лечении заболеваний, связанных с активностью Ак! Таким образом, соединения согласно настоящему изобретению являются противоопухолевыми и/или противовирусными агентами.

Соединения согласно настоящему изобретению полезны при лечении опухолей, которые демонстрируют дефект ΡΤΕΝ, опухолей с нарушенной регуляцией активности Р13-киназы или опухолей, демонстрирующих повышенный уровень активности Ак! Полагают, что ингибиторы Ак! полезны при лечении множественной миеломы (Нки е! а1., В1ооб (2001) 98(9) 2853-2855); немелкоклеточного рака легкого (Ва1кага, Сагс1подспс515 (2004) 25(11) 2053-2059); глиобластомы (Кои1 е! а1., Μοί. Сапсег Тйег. (2006) 5: 637644); нейробластомы (Ь1 е! а1., Сапсег Век. (2005) 65(6), 2070-2075); меланомы (Ош е! а1., 1. о£ С1ш. Опсо1оду (2005) 23(7), 1473-1482), а также опухолей предстательной железы (Мащтбег е! а1., Опсодепе (2005) 24, 7465-7474); молочной железы (Токипада е! а1., 1. о£ С1ш. Опсо1оду (Меебпд АЬк!гас!к) (2005) 23(168), 9500); яичников (Сйеипд е! а1., ΡΝΑ8 (1992) 89, 9267-9271; Уиап е! а1. (2000); Ни е! а1. (2000)); первичных опухолей желудка или опухолей кишечного типа (Апд е! а1., Сапсег Ье!!. (2005) 225(1), 53-59); опухолей эндометрия (Лп е! а1., Впбкй 1. о£ Сапсег (2004) 91, 1808-1812); щитовидной железы (В1пде1 е! а1., Сапсег Век. (2001) 61(16), 6105-6111; Эе Уйа е! а1., Сапсег Век. (2000) 60, 3916-3920); поджелудочной железы (8сйЛетеп е! а1., Вгй. 1. о£ Сапсег (2003) 89, 2110-2115); легкого (Маккюп е! а1., Ат. 1. Векр. Сгй. Саге Меб. (2004) 170, 1088-1094) или мочевого пузыря (В1едег-Сйпк! е! а1., Опсодепе (2004) 23(27), 4745-4753). Также полагают, что ингибиторы Ак! полезны при лечении вирусов, таких как гепатит С и Ν85Α вируса гепатита С (Маииоуа е! а1., 1. У1го1. (2005) 79(14), 8742-8749; Не е! а1. (2002)); краснухи (Соогау е! а1., У1го1оду 1. (2005) 2(1), 1-12); белка Та! вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) (Вогда!!1 е! а1. (1997)); белка X вируса гепатита В (Лее е! а1. (2001)) или цитомегаловируса человека (НСМУ) Оойпкоп е! а1. (2001)).

4-[5-(2-Аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенол образует фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты, например, с физиологически приемлемыми солями, которые часто используются в фармацевтической химии. Такие соли также являются частью настоящего изобретения. Фармацевтически приемлемые соли и стандартные методики их получения хорошо известны в данной области. См., например, Р. 8!ай1 е! а1., НапбЬоок о£ Рйагтасеи!1са1 8а1!к: РгорегЛек, 8е1ес!юп апб Ике, (УСНАЖ11еу-УСН, 2002); 8.М. Вегде е! а1., Рйагтасеи!1са1 8а1!к, 1оита1 о£ Рйагтасеибса1 8с1епсек, уо1. 66, №. 1, январь 1977.

Предпочтительные соли для 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола включают моногидрохлорид и дигидрохлорид.

Описанные в настоящем описании промежуточные соединения могут образовывать соли.

Кроме солей, соединения согласно настоящему изобретению и описанные в настоящем описании промежуточные соединения могут образовывать гидраты или гидраты фармацевтически приемлемых солей.

Предпочтительным соединением является 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенол. Другим предпочтительным соединением является дигидрохлорид 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил] фенола. Более предпочтительным соединением является полугидрат моногидрохлорида 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола.

В настоящем описании термин пациент означает млекопитающее, страдающее одним или несколькими расстройствами, связанными с повышением активности Ак!. Следует понимать, что наиболее предпочтительным пациентом является человек. Также очевидно, что настоящее изобретение относится, в частности, к ингибированию Ак!/РКВ человека.

Термины лечение, лечить, подвергать лечению и т.п. включают эффекты, такие как снижение и/или подавление роста опухолей, амплификации и/или повышенной экспрессии Ак!1, Ак!2 и/или Ак!3, пролиферации и выживания клеток и/или репликации вируса.

В настоящем описании термин эффективное количество означает количество, которое ингибирует Ак! до степени, обеспечивающей фармакологический эффект.

Настоящее изобретение предоставляет также фармацевтическую композицию, содержащую 4-[5-(2аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенол или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат ука

- 3 015712 занного соединения или его фармацевтически приемлемой соли, и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или эксципиент. Фармацевтические композиции настоящего изобретения включают формы для последующего разведения, например лиофилизированную форму, а также уже разведенные формы, например формы, готовые для введения пациенту. рН таких фармацевтических композиций находится в диапазоне от менее 4,2 до более 2,0. Более предпочтительно рН равен приблизительно от менее 3,2 приблизительно до более 2,0. Наиболее предпочтителен рН, равный приблизительно от менее 2,8 приблизительно до более 2,0.

Фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или эксципиент представляет собой среду, которую в данной области используют для доставки биологически активных веществ в организм пациентов, например млекопитающих, предпочтительно людей. Такие носители, разбавители или эксципиенты обычно готовят, руководствуясь рядом факторов, которые специалист в данной области вполне в состоянии определить и учесть. Такие факторы включают, но не ограничиваются ими: тип и природу активного компонента, который составляют в композицию; субъекта, которому предстоит вводить композицию, содержащую указанный агент, предполагаемый путь введения композиции и терапевтические показания для применения композиции. Фармацевтически приемлемые носители и эксципиенты включают водные и неводные жидкие среды, а также разнообразные твердые и полутвердые дозированные формы. Такие носители, разбавители и эксципиенты включают ряд различных ингредиентов и добавок в дополнение к активному агенту, при этом такие дополнительные ингредиенты включают в композиции по ряду причин, например, для стабилизации активного агента, хорошо известных специалистам в данной области. Описания подходящих фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей и эксципиентов, а также факторов, влияющих на их выбор, можно найти в различных легко доступных источниках. См., например, РеттЦоп: Тйс 8с1еисе апб Ртасбсе оГРйаттасу (А. Оеппато с1 а1., еб§., 19^Л еб., Маск РиЫкЫид Со., 1995).

Соединения согласно настоящему изобретению можно вводить системно, например внутривенно (например, путем болюсного вливания), в формах единичного дозирования, содержащих стандартные нетоксичные фармацевтически приемлемые носители, разбавители или эксципиенты.

В фармацевтических композициях 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола активный ингредиент обычно будет присутствовать в количестве приблизительно от 0,5 до 95 мас.% от общей массы композиции. Можно использовать подходящие покрытия для улучшения вкусовых качеств или замедления всасывания.

Терапевтически эффективные количества соединений согласно настоящему изобретению для лечения описанных в настоящем описании нарушений у пациента можно определить различными методами, известными среднему специалисту в данной области. Однако следует понимать, что конкретные уровни дозирования для каждого конкретного пациента зависят от множества факторов, включая активность конкретного применяемого соединения, возраст, массу тела, общее состояние здоровья, пол, диету, время введения, путь введения и скорость выведения, другие применяемые лекарства, а также тяжесть конкретного заболевания. Частота введения доз может меняться в зависимости от того, какое соединение применяют и какое конкретное заболевание подергают лечению. Например, обычная ежедневная доза может содержать от 1 мг до 1 г активного ингредиента.

Соединения согласно настоящему изобретению можно получить, используя информацию, содержащуюся в настоящем описании, в дополнение к другим стандартным методикам, которые известны из литературы или примерами которых являются приведенные экспериментальные методики.

Если не указано иное, термины и аббревиатуры, применяемые в настоящем описании, имеют свои обычные значения. Например ЖХ обозначает жидкостную хроматографию; бррЬ обозначает бис(дифенилфосфин)бутан; Рб(ОАс)₂ обозначает ацетат палладия; ДМФА обозначает Ν,Ν-диметилформамид, ДМСО обозначает диметилсульфоксид; ЕйО обозначает диэтиловый эфир; Е1ОАс обозначает этилацетат; ТФУК обозначает трифторуксусную кислоту; МеОН обозначает метанол.

Получение соединений

Препаративный синтез 1.

Дигидрохлорид 2-[7-(4-метоксифенил)изохинолин-5-сульфонил]этиламина.

К суспензии трет-бутилового эфира {2-[7-(4-метоксифенил)изохинолин-5-сульфонил]этил}карбаминовой кислоты (11,00 г, 24,85 ммоль) в безводном МеОН (150 мл) добавляли 4 N НС1 в диоксане (350 мл). Полученную в результате реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, концентрировали в вакууме до '/₂ объема и добавляли избыток Е1ОАс, что вызвало осаждение твердого желтого вещества. Полученное твердое вещество выделяли вакуумным фильтрованием в атмосфере Ν₂; промывали Е1ОАс и сушили в вакууме (в атмосфере Ν₂), с получением в результате указанного в заголовке соединения (10,23 г, 99% выход) в виде желтого твердого вещества: МС (Е8): т/ζ 343,0 (М⁺+Н).

Препаративный синтез 2.

7-Бромизохинолин-5-сульфоновая кислота.

Дымящуюся Н₂8О₄ (2,000 мл, 21,33 моль; 26-29,5% свободного 8О₃) вливали в круглодонную колбу объемом 5 л, снабженную механической мешалкой, дефлегматором, контуром Ν2 и термометром. Дымя

- 4 015712 щуюся Н₂8О₄ охлаждали до ~10°С на бане лед/ацетон, затем порциями добавляли 7-бромизохинолин-НС1 (500,00 г, 2,04 моль), поддерживая температуру реакционной смеси ниже ~15-20°С. После завершения добавления 7-бромизохинолин-НС1 полученную в результате реакционную смесь нагревали при -100°С в течение ночи. Охлаждали реакционную смесь до комнатной температуры, затем осторожно вливали в перемешиваемый раствор ледяной Н₂О. Выделяли полученный в результате осадок вакуумным фильтрованием, промывали Н₂О и затем ЕьО и сушили вакуумным фильтрованием с последующей сушкой в сушильном шкафу при пониженном давлении и температуре ~35°С, получая в результате указанное соединение (501,42 г, 85% выход) в виде не совсем белого твердого вещества: ТОЕ-МС [Е8+; т/ζ] 287,9331/287,9330.

Препаративный синтез 3.

7-(4-(Метоксифенил)изохинолин-5-сульфоновая кислота.

К раствору 7-бромизохинолин-5-сульфоновой кислоты (150,00 г, 0,520 моль) и 4метоксифенилбороновой кислоты (90,87 г, 0,598 моль) в ДМФА (1,400 мл) и МеОН (375 мл) добавляли 2 М водный Ыа₂СОз (652 мл). Полученную в результате суспензию трижды подвергали деоксигенации с Ν₂, затем добавляли Р6(ОЛе)₂ (2,33 г, 0,0104 моль) и дифенилфосфинбутан (6ррЬ, 5,54 г, 0,0130 моль). Полученную в результате реакционную смесь нагревали при ~70°С в течение 3 ч, затем оставляли на ночь для охлаждения до комнатной температуры. Разбавляли реакционную смесь Н₂О (4,000 мл) и доводили рН до ~2 добавлением 5 N водной НС1. Полученную суспензию оставляли для перемешивания при комнатной температуре на 30 мин, затем выделяли коричневое твердое вещество вакуумным фильтрованием, промывали Н₂О и сушили вакуумным фильтрованием. Твердое коричневое вещество растворяли в ДМФА (1,000 мл) и 2 М водном №-ьСО₃ (650 мл), затем фильтровали полученный раствор через рыхлый слой Се1йе®, промывая ДМФА (400 мл)/Н₂О (400 мл). Добавляли к фильтрату 5 N водную НС1, для доведения рН до ~2. Полученную в результате суспензию оставляли для перемешивания при комнатной температуре на 30 мин, затем выделяли твердое вещество вакуумным фильтрованием, промывали Н2О и сушили вакуумным фильтрованием в течение ночи. Снова растворяли твердое вещество в ДМФА (1,000 мл) и 2 М водном №-ьСО₃ (1,000 мл) и добавляли к полученному раствору Се1йе® с получением суспензии. Полученную в результате суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, затем фильтровали через рыхлый слой Се1йе® и промывали Н₂О. К фильтрату добавляли 5 N водную НС1 для доведения рН до ~2. Перемешивали полученную в результате суспензию при комнатной температуре в течение 30 мин, затем отделяли твердое вещество вакуумным фильтрованием, промывали Н2О и сушили вакуумным фильтрованием в течение ночи. Твердое вещество дробили, затем промывали Е1ОЛе и сушили вакуумным фильтрованием в течение ночи с последующей сушкой в сушильном шкафу при пониженном давлении и температуре ~35°С, получая указанное в заголовке соединение (136,79 г, 83% выход) в виде желтого твердого вещества: ТОЕ-МС [Е8+; т/ζ] 316,0624/316,0643. Анализ. Вычислено для С1₆Н!^О₄8: С 60,94; Н 4,15; N 4,44; 8 10,16. Найдено С 60,76; Н 4,13; N 4,50; 8 9,90.

Препаративный синтез 4.

7-(4-Метоксифенил)изохинолин-5-сульфонилхлорид.

К суспензии 7-(4-метоксифенил)изохинолин-5-сульфоновой кислоты (12,13 г, 38,5 ммоль) в 1,2-дихлорметане (200 мл) и ДМФА (2,99 мл, 38,5 ммоль) по каплям добавляли оксалилхлорид (26,8 мл, 308 ммоль. Перемешивали суспензию механическими средствами в атмосфере азота с одновременным нагревом при 60-65°С в течение 4 ч. Суспензию охлаждали до -10°С. Выдерживали 30 мин и затем фильтровали. Промывали желтое твердое вещество смесью 20% эфир/дихлорметан и сушили в атмосфере азота с получением в результате указанного в заголовке соединения (14,8 г) в виде желтого порошка.

Препаративный синтез 5.

Натриевая соль 7-(4-метоксифенил)изохинолин-5-тиола.

A. К суспензии 7-(4-метоксифенил)изохинолин-5-сульфонилхлорида (4,0 г, 12 ммоль) в диоксане (40 мл) добавляли гидрохлорид трикарбоксиэтилфосфина (13,73 г, 48 ммоль) и воду (10 мл). Нагревали смесь до 100°С и перемешивали в течение 3 ч. Охлаждали смесь на ледяной бане и медленно при помощи пипетки добавляли №ЮН (5 N 60 мл). Фильтровали и сушили на воздухе бледно-желтый осадок с получением указанного в заголовке соединения (3,2 г, 95%). Масс-спектр (ЖХМС) ιη/ζ=266.2 (М-№£).

Альтернативно, указанное в заголовке соединение можно получить следующим способом:

B. (ί) Подвергали деоксигенации раствор 7-(4-метоксифенил)изохинолин-5-сульфоновой кислоты (100,00 г, 0,317 моль) в безводном толуоле (2,500 мл) 3х с N2, затем обрабатывали Р1з₃Р (332,58 г, 1,268 моль), 1₂ (80,46 г, 0,317 моль) и Ви₃№ (152,00 мл, 0,638 моль). Реакционную смесь нагревали при кипячении с обратным холодильником в течение 1 ч в атмосфере N2, затем охлаждали в течение ночи до комнатной температуры, барботируя через реакционную смесь воздух. Реакционную смесь обрабатывали водным раствором 1 N №ЮН (500 мл), затем перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение ночи, барботируя в реакционную смесь воздух. Образовавшийся в результате коричневатый осадок отделяли вакуумным фильтрованием. Промывали раствором 1/1 ТГФ/Е1₂О, затем сушили вакуумным фильтрованием с получением бис-(7-(4-метоксифенил)изохинолин-5)дисульфида (72,50 г, 86% выход) в виде светло-коричневого твердого вещества: 'Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО) δ 9,39 (с, 2Н), 8,51

- 5 015712 (д, 2Н), 8,41 (с, 2Н), 8,11 (д, 2Н), 8,00 (д, 2Н), 7,53 (д, 4Н), 6,94 (д, 4Н), 3,78 (с, 6Н).

В. (ίί) Суспензию бис-(7-(4-метоксифенил)изохинолин-5)дисульфида в безводном ТГФ (850 мл) обрабатывали ΝαΒΗ₄ (2,84 г, 75,07 ммоль). Нагревали полученную в результате реакционную смесь при ~35°С в атмосфере Ν₂ в течение ~1 ч, затем нагревали при ~45°С в атмосфере Ν₂ в течение 1 ч.

Препаративный синтез 6.

7-(4-Метоксифенил)изохинолин-5-сульфинат натрия.

К 7-(4-метоксифенил)изохинолин-5-сульфонилхлориду (1,48 г, 4 ммоль) в воде (10 мл) добавляли №₂8О₃ (1,01 г, 8 ммоль) и №1НСО₃ (1,01 г, 12 ммоль). Нагревали смесь до 100°С и перемешивали в течение 1 ч. Охлаждали реакционную смесь до комнатной температуры и удаляли воду при пониженном давлении. К осадку добавляли метанол (40 мл), перемешивали в течение 10 мин. Отфильтровывали белое твердое вещество, промывали метанолом и объединяли фильтраты. После концентрирования получали указанное соединение (1,1 г).

Препаративный синтез 7. (3,5-Дихлорбензилиден)-(2,2-диэтоксиэтил)амин.

2,2-Диэтоксиэтиламин (1852,5 г; 1,00 экв.; 13,63 моль), 3,5-дихлорбензальдегид (2453 г; 1,00 экв.; 13,60 моль) и толуол (12 л) помещали в сосуд объемом 22 л, снабженный насадкой Дина-Старка, конденсатором, впускным отверстием для азота, верхнеприводной мешалкой и термопарой. Светло-желтую реакционную смесь нагревали до температуры кипения с обратным холодильником. Дистилляция растворителя начиналась при 88°С. Всего собрали ~650 мл дистиллята (~240 мл воды). В процессе дистилляции температуру увеличивали до 114°С. После 2 ч кипения с обратным холодильником ЯМР показал присутствие продукта. Нагревание прекращали через 2,5 ч. Раствор подвергали гравитационному фильтрованию в бутыль через фильтровальную бумагу, для удаления немногочисленных частиц (включая небольшие. кусочки стеклянных трубок, которые, вероятно, представляли собой 3,5-дихлорбензальдегид). Профильтрованный раствор концентрировали при помощи колбы ВисЫ на водяной бане, установленной на 45°С. По окончании перегонки растворителя, температуру увеличивали до 70°С в условиях полного вакуума и поддерживали в течение ~1,5 ч, для удаления остатков толуола. Выход (3,5-дихлорбензальдегида)-(2,2-диэтоксиэтил)амина составил 4059,3 г (102,9% теоретического). Масс-спектр (ЖХМС) μ/ζ=291,2 (М+Н⁺).

Препаративный синтез 8.

Гидрохлорид 5,7-дихлоризохинолина.

Трифлатную кислоту (2,97 л; 33,52 моль; 5,03 кг) помещали в колбу объемом 12 л, снабженную насадкой Дина-Старка, верхнеприводной мешалкой, конденсатором, впускным отверстием для азота, капельной воронкой объемом 3 л (отделенной от колбы конденсатором) и термопарой. Трифлатную кислоту нагревали при 120°С. (3,5-Дихлорбензилиден)-(2,2-диэтоксиэтил)амин (1350,5 г; 1,00 экв.; 4,65 моль) разбавляли дихлорметаном (1350 мл) и заливали в капельную воронку. Добавление начинали при температуре 119°С. Добавление завершали через 90 мин, поддерживая температуру 120°С. В ходе добавления собирали приблизительно 1500 мл дистиллята. Процент площади ВЭЖХ через 45 мин после завершения добавления показал 94,14% продукта и 4,86% (3,5-дихлорбензилиден)-(2,2-диэтоксиэтил)амина. Нагревание прекращали через 1,5 ч. Реакционную смесь охлаждали до ~80°С. В этот момент колбу помещали на баню с ледяной водой и продолжали охлаждение. При 9°С к реакционной смеси добавляли метанол (2,7 л). Добавление завершали через 60 мин. Максимальная температура составила 27°С. В ходе добавления метанола образовывалось некоторое количество твердого вещества. Смесь порциями переносили в капельную воронку объемом 2 л и добавляли раствор гидроксида аммония (5,1 л; 36,67 моль; 4,59 кг) и воду (5,1 л) в колбу объемом 22 л, охлажденную в ледяной воде до <2°С. Капельная воронка оборудована отводом ТеДои® для предотвращения стекания материала по стенке колбы, что может привести к налипанию более маслянистого твердого вещества на стенку колбы. Материал добавляли мелкими порциями, чтобы воронка не забилась твердым веществом. Добавление, включая промывку колбы и капельной воронки, 900 мл метанола завершали через 35 мин. Максимальная температура составила 26°С. Образовывалось коричневое твердое вещество. Суспензию охлаждали до 14°С. Твердое вещество отфильтровывали на рыхлом слое полипропилена. Твердое вещество промывали 2x4 л и 1x2 л воды. Затем твердое вещество промывали 2 л гептана для облегчения сушки. Сушили твердое вещество в вакууме при 50°С до массы 999,0 г (108,4% теоретической). 5,7-Дихлоризохинолин (997 г; 1,00 экв.; 5,03 моль) и этанол (14,97 л) помещают в колбу объемом 22 л, снабженную капельной воронкой, впускным отверстием для азота, верхнеприводной мешалкой и термопарой. Коричневую суспензию перемешивали при комнатной температуре (22°С). Ацетилхлорид (1180 мл; 16,58 моль; 1,30 кг) помещали в капельную воронку. Добавление в колбу осуществляли по каплям. Коричневая суспензия темнеет. Образовавшееся твердое вещество практически полностью растворяется после добавления 100-200 мл ацетилхлорида. Полного растворения не происходило. При продолжении добавления снова появлялось твердое вещество. Добавление завершалось через 45 мин. Максимальная температура составляла 43°С, которая была достигнута в середине добавления, и ее поддерживали при помощи бани с холодной водой. После добавления приблизительно ~3/4 ацетилхлорида брали пробу реакционной смеси для анализа методом ЯМР. Поскольку

- 6 015712 проба оказалась солью, необходимости в добавлении избытка ацетилхлорида не потребовалось. Смесь перемешали и давали ей возможность остыть. Через 40 мин температура составила 30°С. Смесь охлаждали до <2°С и выдерживали на бане с ледяной водой в течение 1,5 ч. Суспензию фильтровали. Твердое вещество промывали 2x1,3 л ледяного этанола. Масса остатка на фильтре составила 811,4 г. Твердое вещество сушили в вакууме при 50°С. Масса сухого вещества составила 648,4 г. Это соответствует 61,0% выходу. Масс-спектр (ЖХМС) т/х=199,05 (М+Н⁺).

Препаративный синтез 9.

трет-Бутиловый эфир [2-(7-хлоризохинолин-5-илсульфанил)этил]карбаминовой кислоты.

Карбонат калия (1952 г; 14,12 моль) помещали в колбу объемом 22 л, снабженную верхнеприводной мешалкой, капельной воронкой, входным отверстием для азота и термопарой. Добавляли диметилформамид (4 л). Порциями добавляли гидрохлорид 5,7-дихлоризохинолина (646,1 г; 1,00 экв.; 2,76 моль) и ДМФА (330 мл). Вос-цистамин (514 г; 1,05 экв.; 2,90 моль) растворяли в диметилформамиде (1520 мл) и помещали в капельную воронку. Смесь нагревали до 60°С. В ходе нагревания смеси барботировали азот через газоотделитель в течение 15 мин. Через 2 ч и 15 мин при 60°С добавляли Вос-цистамин. ВЭЖХ через 1 ч и 20 мин после добавления показывала 28,1% исходного вещества, 67,26% продукта, 4,22% изомера и 0,25% бис-формы. Реакционную смесь нагревали до 75°С. Данные ВЭЖХ, полученные при 75°С, приведены в табл. А.

Таблица А

Данные ВЭЖХ реакционной смеси для получения трет-бутилового эфира [2- (7-хлоризохинолия-5-илсульфанил) этил] карбаминовой
	КИСЛОТЫ
Время при 75°С	% 5,7дихлоризох инолин * НС1	% трет-бутилового эфира [2-(7хлоризохинолин-5илсульфояил)этил]ка рбаминовой кислоты	% изомера	% бисзамещенной формы
30 минут	2,75	90, 27	5, 54	1, 44
1 час	0, 93	91,39	5, 52	2,16
1,5 часа	0,20	91,25	5, 32	3, 23

Через 1,5 ч колбонагреватель заменяли охлаждающей баней. Реакционную смесь охлаждали до 20-25°С. Твердое вещество фильтровали и промывали ДМФА (2x810 мл). Раствор ДМФА разбавляли МТВЕ (5,15 л) и 5% Ь1С1 (5,15 л). После перемешивания в колбе объемом 50 л со сливом на дне разделяли фазы. Водную фазу экстрагировали МТВЕ (2,9 л). Фазы МТВЕ объединяли и промывали 5% Ь1С1 (2x2,9 л). Слой МТВЕ подвергали гравитационному фильтрованию и концентрировали при помощи колбы ВйсЫ на водяной бане, установленной на 35°С, с получением 892,7 г (95,6% теоретического, без поправки) трет-бутилового эфира [2-(7-хлоризохинолин-5-илсульфанил)этил]карбаминовой кислоты. Массспектр (ЖХМС) 111//=339,85 (М+Н⁺).

Препаративный синтез 10.

трет-Бутиловый эфир [2-(7-хлоризохинолин-5-сульфонил)этил]карбаминовой кислоты. трет-Бутиловый эфир [2-(7-хлоризохинолин-5-илсульфанил)этил] карбаминовой кислоты (700 г;

1,00 экв.; 2,07 моль) растворяли в изопропиловом спирте (10,53 л), поворачивая колбу ВйсЫ на водяной бане, установленной на 50°С. Мехинол (12,29 г; 98,01 ммоль; 12,29 г), дигидрат вольфрамата натрия (31,4 г; 95,20 ммоль), раствор трет-бутилового эфира [2-(7-хлоризохинолин-5-илсульфанил)этил]карбаминовой кислоты, изопропилового спирта (2,77 л), воды (3,38 л) и уксусной кислоты (123 мл; 2,15 моль; 128,90 г) помещали в колбу объемом 22 л, снабженную конденсатором, впускным отверстием для азота, верхнеприводной мешалкой, капельной воронкой и термопарой. Добавление воды приводило к тому, что коричневый раствор приобретал несколько молочный вид. Реакционную смесь нагревали до 50°С, используя баню с горячей водой. Затем в течение 1 ч добавляли пероксид водорода (607 мл; 5,94 моль; 673,77 г). Температуру в ходе добавления поддерживали на уровне 50-55°С путем добавления перекиси водорода и добавления холодной или теплой воды в баню по мере необходимости. Реакционная смесь становилась молочно-коричневой. В конце добавления температура составила 54°С и ее поддерживали на уровне 53-57°С, используя теплую водяную баню. ВЭЖХ после 10 мин добавления продемонстрировала 24,69% пик на 2,89 мин, 65,57% продукта, 5,03% изомера, 4,33% бис-формы и 0,18% пик на 3,05 мин. ВЭЖХ через 2 ч после добавления выявила 0,06% сульфоксида, 1,27% пик на 3,046 мин, 88,10% продукта, 4,61% изомера и 5,79% бис-формы. Воду из бани удаляли и заменили ледяной водой для охлаждения реакционной смеси. Когда температура достигла 27°С, пероксид гасили добавлением 9% раствора дисульфита натрия (250 мл). Повышения температуры не наблюдали. Тест-полоски на пероксид и бумага с крахмалом для определения йода показали отсутствие перекиси. В течение 15-20 мин добавляли воду (5,64 л). В ходе добавления температуру увеличивали с 18 до 24°С. Смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение ночи. Суспензию охлаждали на бане с ледяной водой до <5°С и далее поддерживали такую температуру. Через 1,5 ч ВЭЖХ надосадочной жидкости показала заверше

- 7 015712 ние кристаллизации при <5°С. Твердое вещество фильтровали и промывали водой (2x2 л). Масса влажного осадка на фильтре составила 831 г. Твердое вещество сушили в вакууме при 50°С. Масса сухого трет-бутилового эфира [2-(7-хлоризохинолин-5-сульфонил)этил]карбаминовой кислоты составила 531 г (69,31% теоретического). Масс-спектр (ЖХМС) ш/х=371.85 (М+Н⁺).

Препаративный синтез 11.

трет-Бутиловый эфир (2-{7-[4-(тетрагидропиран-2-илокси)фенил]изохинолин-5-сульфонил}этил)карбаминовой кислоты.

В реактор объемом 60 л помещали ΡΕΡΡ8Ι™ (усиленный пиридином реагент для стабилизации и инициации состава; 51,0 г; 74,9 ммоль). трет-бутиловый эфир [2-(7-хлоризохинолин-5сульфонил)этил]карбаминовой кислоты (1,383 кг, 3,729 моль), фенилбороновую кислоту (895 г; 4,03 моль), К₂СО₃ (1,039 кг, 7,518 моль) и этанол (15 л) при барботировании азотом. Сначала в реактор добавляли 12 л этанола и оставшиеся 3 л использовали для смыва других загружаемых материалов. Реакционную смесь нагревали до температуры кипения с обратным холодильником (78°С). Через '/₂ ч ВЭЖХ показала завершение реакции. Реакционную смесь охлаждали до 59°С при помощи мешалки НиЬег®. В течение 18 мин к реакционной смеси добавляли воду (8,7 л). В ходе добавления воды температуру снижали с 59 до 42°С. В течение 1 ч температуру снижали с 42 до 0°С при помощи мешалки НиЬег®. Суспензию выдерживали при 0°С в течение 1 ч. Твердое вещество отфильтровывали через рыхлый слой полипропилена и промывали смесью 1:1 этанол:вода (3,7 л; ледяная). Твердое вещество сушили на фильтре в течение ночи. Затем твердое вещество сушили в вакууме при 60°С в течение 22 ч. Сухая масса твердого вещества составила 2,171 кг. Уровень Ρά в неочищенном трет-бутиловом эфире (2-{7-[4(тетрагидропиран-2-илокси)фенил]изохинолин-5-сульфонил}этил)карбаминовой кислоты составил 2196 мкг/г, и содержание воды в твердом веществе составило 6,9% по КР. В колбу объемом 50 л со стоком у дна помещали дихлорметан (4 л). Неочищенный трет-бутиловый эфир (2-{7-[4-(тетрагидропиран2-илокси)фенил]изохинолин-5-сульфонил}этил)карбаминовой кислоты помещали в колбу объемом 50 л и смывали дихлорметаном (1 л). Добавляли Ыа₂8О₄ (1,9 кг) и смывали внутрь дихлорметаном (0,1 л). Эагсо С-60® (3,8 кг) помещали в колбу ВйсЫ объемом 20 л и разбавляли в дихлорметане (12 л). Полученную смесь переносили в колбу объемом 50 л и смывали внутрь дихлорметаном (4,9 л). Смесь перемешивали в течение 2 ч при температуре окружающей среды. На 50-см фильтр из нержавеющей стали устанавливали вкладыш из полипропилена и наполняли Нуйо 8ирег Се1® (1,7 кг). Слой Нуйо 8ирег Се1® промывали дихлорметаном (2 л). Содержимое 50 л колбы фильтровали на вкладыше Нуйо 8ирег Се1®. Колбу и осадок споласкивали дихлорметаном (22 л). Фильтрат помещали в реактор объемом 60 л через патронный фильтр с размером отверстий 0,45 мкм. Содержимое реактора нагревали и концентрировали путем дистилляции в условиях низкого вакуума (~640 мм рт. ст.). В течение 2 ч при 35-37°С собирали приблизительно 33 л. Добавляли этанол (10 л). Медленно доводили вакуум до 280 мм рт. ст., продолжая дистилляцию. После достижения вакуума температуру повышали для поддержания дистилляции. После того как объем в реакторе достиг ~10 л, добавляли этанол (6,5 л) с такой скоростью, чтобы поддерживать постоянный объем при уменьшении объема растворителя в результате дистилляции. Дистилляцию останавливали после добавления всего этанола. Конечный объем составлял ~10 л. Температура в конце дистилляции составила 56°С. Суспензию, которая образуется при замене растворителя, охлаждают до 20°С и выдерживают в течение ночи. Суспензию фильтровали. Твердое вещество промывали смесью 1:1 этанол:вода (1,8 л). Масса влажного осадка на фильтре составил 1,878 кг. Твердое вещество сушили в вакууме при 50°С, с получением 1,2306 кг (64,36% выход) трет-бутилового эфира (2-{7-[4(тетрагидропиран-2-илокси)фенил]изохинолин-5-сульфонил}этил)карбаминовой кислоты. Масс-спектр (ЖХМС) 111//=513,62 (М+Н).

Примеры

Пример 1. Дигидрохлоридная соль 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола.

.ΝΙΙ,

НС!

Ν.

ОН

А. трет-Бутиловый эфир {2-[7-(4-метоксифенил)изохинолин-5-илсульфонил]этил}карбаминовой кислоты.

К натриевой соли 7-(4-метоксифенил)изохинолин-5-тиола (0,29 г, 1 ммоль) в ацетоне (10 мл) добавляли трет-бутиловый эфир (2-бромэтил)карбаминовой кислоты (0,22 г, 1 ммоль) и карбонат калия (0,14 г, 1 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч, затем загружали на колонку с силикагелем и элюировали 65% этилацетатом в гексане, с получением указанного в заголовке соединения (0,35 г, 86%). Масс-спектр (ЖХМС) т//=355,2 (М+Н⁺).

- 8 015712

B. трет-Бутиловый эфир {2-[7-(4-метоксифенил)изохинолин-5-сульфонил]этил}карбаминовой кислоты.

К раствору трет-бутилового эфира {2-[7-(4-метоксифенил)изохинолин-5-илсульфонил]этил}карбаминовой кислоты (0,35 г, 0,85 ммоль) в уксусной кислоте (8 мл) добавляли воду (2 мл). Смесь охлаждали до 0°С на ледяной бане. По каплям в течение 5 мин добавляли раствор КМпО₄ (0,27 г, 1,7 ммоль) в воде (2 мл). После добавления реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 30 мин. По каплям добавляли Н₂О₂ (30% в воде) до исчезновения коричневого цвета. Смесь распределяли между этилацетатом (50 мл) и насыщенным бикарбонатом натрия (40 мл). Органическую фазу отделяли, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Осадок подвергали хроматографии на силикагеле, используя 66% этилацетат в гексане, с получением указанного в заголовке соединения (0,245 г) в виде белого твердого вещества. Масс-спектр (ЖХМС) т/х=433.2 (М+Н⁺).

C. Дигидрохлорид 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола.

К трет-бутиловому эфиру {2-[7-(4-метоксифенил)изохинолин-5-сульфонил]этил}карбаминовой кислоты (0,22 г, 0,51 ммоль) в дихлорэтане (10 мл) добавляли ВВг₃ (1,0 М в дихлорметане, 3,0 мл) при -20°С. После добавления реакционную смесь перемешивали при -20°С в течение 2 ч, медленно нагревали до комнатной температуры и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Добавляли метанол (5 мл) для гашения избытка ВВг₃. При пониженном давлении выпаривали растворитель и очищали осадок ВЭЖХ с обращенной фазой (0-100% ацетонитрил:вода с 0,01% ТФУК), с получением 4-[5-(2аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил] фенола в виде соли ТФУК (0,18 г). Затем 0,12 г соли ТФУК преобразовывали в дигидрохлорид путем добавления 2 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия к соли ТФУК и перемешивания в течение ночи (перемешивание способствует преобразованию соли ТФУК в свободное основание). Свободное основание фильтровали, промывали сначала водой, затем диэтиловым эфиром. Твердое вещество сушили. Затем суспендировали твердое вещество в МеОН. Добавляли 0,2 мл концентрированного водного раствора НС1 и перемешивали в течение 1 ч. Растворитель концентрировали при пониженном давлении с получением дигидрохлоридной соли (0,10 г). Масс-спектр (ЖХМС) т/х=329,0 (М+Н⁺).

Пример 2.

4-[5-(2-Аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенол.

К трет-бутиловому эфиру {2-[7-(4-метоксифенил)изохинолин-5-сульфонил]этил}карбаминовой кислоты (25,00 г, 56,49 ммоль) в дихлорметане (1 л) при 0°С добавляли ВВг₃ (1,0 М в дихлорметане, 200 мл, 200 ммоль) в течение 40 мин при интенсивном перемешивании верхнеприводной мешалкой. Удаляли охлаждающую баню и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Охлаждали до 0°С и по каплям в течение 1 ч добавляли метанол (500 мл). Полученную суспензию фильтровали, споласкивали колбу дихлорметаном (100 мл) и промывали твердое вещество жидкостью после промывки. Затем еще раз промывали твердый остаток дихлорметаном (150 мл) и сушили при вакуумном фильтровании. Суспендировали твердое вещество в метаноле (400 мл) при перемешивании, затем концентрировали в вакууме с получением жидкой пасты. Добавляли еще метанол (400 мл) и продолжали суспендирование при перемешивании. Суспензию концентрировали в вакууме досуха и сушили твердое вещество в течение ночи в вакууме. Растирали твердое вещество в порошок и суспендировали в метаноле (1 л). Добавляли смолу АтЬсг1у51® А-21 (75 г) и перемешивали до растворения порошка. Смолу фильтровали и суспендировали профильтрованную смолу в метаноле (220 мл), затем снова фильтровали смолу и объединяли фильтраты. Профильтрованную смолу промывали метанолом (100 мл) и добавляли промывочную жидкость к фильтратам. Фильтраты объединяли с этанолом (200 мл) и концентрировали смесь в вакууме до объема приблизительно 200 мл с получением суспензии. Добавляли этанол (400 мл), нагревали суспензию до 50°С за приблизительно 15 мин, затем концентрировали в вакууме до объема примерно 200 мл. Охлаждали суспензию до комнатной температуры, фильтровали и промывали отфильтрованный осадок этанолом (2x15 мл), затем сушили в вакууме с получением указанного в заголовке соединения 10,22 г, 55%) в виде коричневатого твердого вещества. Масс-спектр (ЖХМС) ιη/ζ=329,0 (М+Н⁺).

Пример 3.

Суспензию дигидрохлорида 2-[7-(4-метоксифенил)изохинолин-5-сульфонил]этиламина (9,5504 г, 22,99 ммоль) в безводном СН₂С1₂ (400 мл) охлаждали до ~5°С на бане лед/Н₂О, затем к охлажденной смеси по каплям добавляли 1,0 М раствор ВВг₃ в СН₂С1₂ (92,00 мл, 92,00 ммоль). После завершения добавления ВВг₃ холодную баню удаляли и оставляли полученную реакционную смесь на ночь для перемешивания в атмосфере Ν₂ при комнатной температуре. Полученную реакционную смесь гасили МеОН и затем концентрировали в вакууме с получением осадка. Полученный осадок растворяли в МеОН (200 мл) и концентрировали в вакууме с получением осадка. Описанные операции повторяли 3 раза, затем суспендировали осадок в ЕьО (300 мл) и добавляли насыщенный водный раствор №-1НС'О₃ до достижения ~рН 7. Образовавшееся в результате твердое вещество отделяли вакуумным фильтрованием и растворяли в растворе 3/1 СНС1₃/МеОН. Насыщали фильтрат №С1, затем экстрагировали раствором 3/1 СНС1₃/МеОН (2x400 мл каждого). Сушили смешанные органические вещества на Мд§О₄, фильтровали и

- 9 015712 концентрировали в вакууме с получением твердого вещества/осадка. Суспендировали в небольшом количестве МеОН (20 мл) и избытке гексанов, затем выделяли твердое вещество вакуумным фильтрованием, промывали гексанами и сушили в вакууме с получением (7,60 г) светло-желтого твердого вещества. Суспендировали полученное светло-желтое твердое вещество (7,60 г) в безводном СН₂С1₂ (400 мл) и охлаждали до ~5°С на бане лед/Н₂О, затем по каплям добавляли раствор 1,0 М ВВг₃ в СН₂С1₂ (70,00 мл, 70,00 ммоль). После завершения добавления ВВг₃ удаляли охлаждающую баню и оставляли реакционную смесь для перемешивания при комнатной температуре в атмосфере Ν₂ на 4 ч. По каплям добавляли к реакционной смеси еще 1,0 М ВВг₃ в СН₂С1₂ (70,00 мл, 70,00 ммоль), затем оставляли реакционную смесь для перемешивания при комнатной температуре в атмосфере Ν2 на ночь. Нагревали реакционную смесь при ~40°С в течение ~1 ч, затем по каплям добавляли еще 1,0 М ВВг₃ в СН₂С1₂ (23,00 мл, 23,00 ммоль). Нагревали полученную в результате реакционную смесь при ~40°С в течение ~2 ч, затем гасили МеОН и концентрировали в вакууме с получением осадка. Полученный в результате осадок растворяли в МеОН (200 мл) и концентрировали в вакууме с получением желтого осадка. Повторяли описанные операции 3 раза. Обрабатывали желтый осадок насыщенным №1НСО₃ для доведения рН до ~7, затем отделяли полученное твердое вещество вакуумным фильтрованием. Реабсорбировали твердое вещество на силикагеле, затем полу очищали колоночной хроматографией (330 г силикагеля 18СО, от чистого СН₂С1₂ до 5% 2 N ΝΠ-ι/МсОН в СН₂С1₂ до 10% 2 N ΝΠ-ι/МсОН в СН₂С1₂). Полученное твердое вещество реабсорбировали на силикагеле и затем повторно очищали колоночной хроматографией (330 г силикагеля 18СО, чистый СН₂С1₂ до 5% 2 N ΝΠ/МсОН в СН₂С1₂ до 10% 2 N NН₄/ΜеОН в СН₂С1₂). Полученное твердое вещество реабсорбировали на силикагеле и затем повторно очищали колоночной хроматографией (330 г силикагеля 18СО, чистый СН₂С1₂ до 5% 2 N МР/\1еО11 в СН₂С1₂ до 10% 2 N МР/\1еО11 в СН₂С1₂ до 15% 2 N NН₄/ΜеОН в СН₂С1₂). Полученное твердое вещество реабсорбировали на силикагеле и затем повторно очищали колоночной хроматографии (330 г силикагеля 18СО, 5% МеОН в СНС1₃ до 10% МеОН в СНС1₃ до 20% МеОН в СНС1₃ до 30% МеОН в СНС1₃) с получением (6,85 г, 90,8% выход) указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества: МС (Е8+, т/ζ): 329,0 (М+1).

Пример 4.

Моногидрохлорид 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола (степень гидратации не установлена).

4-[5-(2-Аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенол (171,8 мг) помещали в сосуд вместе с 15 мл 95% ЕЮН. Сосуд помещали на нагревательную плитку, установленную на 80°С, при перемешивании раствора для растворения соединения. Поскольку наблюдали почти полное отсутствие растворения, добавляли один молярный эквивалент НС1 (0,52 мл 1 N НС1 в воде) для растворения твердого вещества и получали ярко-желтый раствор. Менее чем через 1 мин после добавления НС1 начиналось образование твердого вещества, которое со временем усиливалось. Спустя ~2 ч при 80°С образец снимали с подогревающей плитки и оставляли для перемешивания на ночь при комнатной температуре. Отделяли твердое вещество вакуумным фильтрованием через фильтровальную бумагу. После сушки на воздухе в течение ночи выделяли 107,8 мг указанного в заголовке соединения (63% выход). Рентгеноструктурный анализ порошка: угол 2Θ (% интенсивности): 11,8 (100,0); 16,6 (52,9); 8,2 (43,4).

Пример 5.

Полугидрат моногидрохлорида 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола.

A. Приготовление затравочного материала. К суспензии 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин7-ил]фенола (0,2509 г, 0,764 ммоль) в этаноле (5 мл) добавляли водный раствор НС1 (1 М, 0,765 мл, 0,765 ммоль). Полученную смесь нагревали до кипения с обратным холодильником в течение ночи. Суспензию охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Споласкивали твердое вещество этанолом и сушили вакуумным фильтрованием с получением 0,1842 г желтого твердого вещества.

B. Полугидрат моногидрохлорида 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола.

К суспензии 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола (1,75 г, 5,33 ммоль) в этаноле (35 мл) добавляли водную НС1 (1М, 5,33 мл, 5,33 ммоль). Нагревали смесь до температуры кипения с обратным холодильником и добавляли воду (2,5 мл) с получением раствора. Полученный в результате раствор охлаждали до 60°С и вносили в него примерно 2 мг желтого твердого вещества, полученного на стадии А. Полученную в результате суспензию охлаждали до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Подвергали суспензию вакуумному фильтрованию и споласкивали осадок на фильтре этанолом, с получением 1,331 г (67%) указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества. Масс-спектр (ЖХМС) ιη/ζ=329.0 (М+Н⁺). Каг1 РБсйег: 3,00%. Данные рентгеноструктурного анализа порошка: угол 2Θ (% интенсивности): 4,9 (47,3); 14,8 (55,8); 10,2 (45,5).

Пример 6.

Дигидрохлоридная соль 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола.

Суспендировали 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенол (16,57 г, 50,45 ммоль) в метаноле (500 мл). Отдельно путем добавления ацетилхлорида (12,60 мл, 177,05 ммоль) к метанолу (165 мл) получали раствор НС1 в метаноле. По каплям при комнатной температуре за 30 мин добавляли раствор НС1 в метаноле к суспензии 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола в метаноле.

- 10 015712

Перемешивали в течение 30 мин, затем по каплям в течение 1 ч добавляли этилацетат (600 мл). Перемешивали в течение 30 мин, затем отфильтровывали твердое вещество и промывали этилацетатом (2x100 мл). Сушили твердое вещество в вакууме при 50°С, затем также в вакууме при комнатной температуре, одновременно медленно вводя азот с получением указанного в заголовке соединения (18,3 г, 90%). Массспектр (ЖХМС) 111// 329,0 (М+Н⁺).

Пример 7.

Дигидрохлоридная соль 4-[5 -(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил] фенола.

В реактор объемом 60 л помещали этанол (24 л) и трет-бутиловый эфир (2-{7-[4-(тетрагидропиран2-илокси)фенил]изохинолин-5-сульфонил}этил)карбаминовой кислоты (2,652 кг, 5,173 моль). третБутиловый эфир (2-{7-[4-(тетрагидропиран-2-илокси)фенил]изохинолин-5-сульфонил}этил)карбаминовой кислоты смывали внутрь этанолом (2,6 л). Раствор хлористо-водородной кислоты (31,9%; 1780 г; 15,6 моль) разбавляли водой (1,42 л). Полученный раствор НС1 вливали в реактор и смывали вниз водой (0,2 л). Реакционную смесь нагревали до 70°С. Примерно при 30°С образовывался желтый раствор, желтая суспензия появлялась около 70°С. Реакционную смесь выдерживали при 70°С в течение ¹/2 ч и затем нагревали до температуры кипения с обратным холодильником (78°С). Через 1,5 часа кипячения с обратным холодильником ВЭЖХ показала завершение реакции. В течение 13 мин к реакционной смеси добавляли воду (14,5 л). Температура упала до 69°С. Реакционную смесь снова нагревали до температуры кипения с обратным холодильником (80°С), и образовывался раствор. Реакционную смесь охлаждали до 68°С, и начиналось образование твердого вещества. Реакционную смесь выдерживали при 68°С в течение ¹/2 ч и затем охлаждали до 2°С в течение 1,5 ч. Суспензию выдерживали при 1-2°С в течение 1 ч. Отфильтровывали твердое вещество и промывали этанолом (4,6 л). Масса влажного осадка на фильтре составила 3,236 кг. Твердое вещество сушили в вакууме при 50°С с получением 2,106 кг (101,4% теоретической) дигидрохлоридной соли 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола. Масс-спектр (ЖХМС) 111//=402,31 (М+Н).

Пример 8.

Растворы этанола и гидроксида натрия, используемые в данном примере, фильтровали через патронный фильтр с размером отверстий 0,22 мкм. Использовали очищенную воду при контроле на эндотоксин.

Этанол (8 л) и дигидрохлоридную соль 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола (841,6 г; 2,097 моль) помещали в колбу объемом 22 л, снабженную верхнеприводной мешалкой, конденсатором, впускным отверстием для азота, колбонагревателем, термопарой и капельной воронкой. Дигидрохлоридную соль 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола смывали внутрь этанолом (3,28 л). Реакционную смесь нагревали до 55°С. К реакционной смеси добавляли раствор гидроксида натрия (1100 мл; 1,91 Ν; 2,10 моль) в течение 7 мин, причем за это время температура увеличивалась до 62°С. Реакционную смесь нагревали до температуры кипения с обратным холодильником (78°С) и поддерживали ее в течение 1 ч. К реакционной смеси немедленно добавляли воду (1,96 л). Температура снизилась до 68°С. Реакционную смесь вновь нагревали до температуры кипения с обратным холодильником (79°С) и образовывался раствор. К реакционной смеси добавляли Иагсо С-60® (438 г). Реакционную смесь выдерживали при температуре кипения с обратным холодильником в течение 1,25 часа. Горячую суспензию Иагсо С-60® фильтровали через бумагу СРР в другую колбу объемом 22 л. В результате получали светло-желтый раствор. Первую колбу и осадок на фильтре Иагсо С-60® споласкивали горячим этанолом (2,5 л). В процессе споласкивания в фильтрате начинало образовываться твердое вещество. 22-л колбу, содержащую фильтрат и промывочную жидкость, снабжали верхнеприводной мешалкой, впускным отверстием для азота и термопарой. Суспензию перемешивали и давали ей остыть до температуры окружающей среды. Твердое вещество отфильтровывали и промывали этанолом (2 л). Масса влажного осадка на фильтре составила 672 г. Твердое вещество сушили в вакууме при 50°С с получением 540 г (68,9% выход) полугидрата моногидрохлорида 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола. Масс-спектр (ЖХМС) ш//=329,3 (М+Н⁺).

Приведенные в качестве примеров соединения являются ингибиторами активности Ак1. Ингибирующую активность таких соединений можно продемонстрировать описанными ниже методами.

Анализ на фосфорилирование АкП.

В данном анализе измеряли фосфорилирование пептида псевдосубстрата РКС-альфа методом конкурентного флуоресцентного поляризационного иммуноанализа (РР1А). Данный анализ дает возможность косвенно определить концентрацию фосфорилированного пептида, образовавшегося в реакционной смеси, путем измерения изменения интенсивности поляризованного света, испускаемого пептидом, меченным флуоресцентной меткой, при замене фосфоспецифичного антитела фосфопептидным продуктом. Полученные количественные результаты калибровали по стандартной кривой.

Фермент и субстрат.

Активную рекомбинантную АкП человека (полноразмерную), выделенную из клеток насекомого 8£9, получали от ирв!а1е Вю1есйпо1оду, 1пс. Субстратный пептид (М.^.1561) покупали.

- 11 015712

Стандартные растворы для анализа.

Раствор (А): 20% ДМСО (фиметилсульфоксид) или соединение в 20% ДМСО или 500 мМ ΕΌΤΑ; раствор (В): смешанный аналитический буфер: 75 мкМ пептида-субстрата, 38 мМ МдС1₂, 70 мМ ΗΕΡΕ8, рН 7,4, 0,01% Τήΐοη Х-100® и 50 мк АТФ (аденозинтрифосфат); раствор (С): смесь киназы Ак1: 70 мМ ΗΕΡΕ8, рН 7,4, 1 мМ ΌΤΤ (дитиотрейтол), 0,01% Τήΐοη-Χ-100® и фермент АкН.

Методика ΕΡΙΑ.

Сначала 5 мкМ раствора (А) смешивали с 10 мкл раствора (В). Ферментативную реакцию запускали путем добавления к смеси 10 мкл раствора (С). (Конечная концентрация или количество в 25 мкл реакционной смеси: 4% ДМСО (лунки с минимальным ингибированием) или различные концентрации соединения в 4% ДМСО или 100 мМ ΕΌΤΑ (лунки с максимальным ингибированием); 30 мкМ пептидасубстрата; 15 мМ МдС1₂; 70 мМ ΗΕΡΕ8, рН 7,4; 20 мкМ АТФ; 0,4 мМ ΌΤΤ; 0,01% Τήίοη Х-100®). Реакцию проводили в черных плоскодонных 96-луночных планшетах.

Через 60 мин при комнатной температуре реакцию останавливали путем добавления 25 мкл смеси для нейтрализации/детектирования, содержащей 260 мМ ΕΌΤΑ, 3,4 нМ флуоресцентной метки и 7,5 нМ антитела к фосфосерину. Планшеты инкубировали в темноте при комнатной температуре в течение более 3 ч и затем считывали поляризацию флюоресценции (при Х_ех=485 нм, Х_ех=530 нм) на планшет-ридере Τесаη и11га. Концентрацию фосфорилированного продукта в лунке рассчитывали на основе единиц миллиполяризации (ιηΡ) с использованием набора заранее приготовленных разведений конкурирующего пептида для получения стандартной кривой. Примеры соединений согласно настоящему изобретению ингибируют фосфорилирование Α1<1 с 1С₅₀, равной 1 мкМ или меньше. Соединение примера 1 в данном анализе ингибировало фосфорилирование Α1<11 с 1С₅₀, равной 45+/-17 нМ (η=3).

Клеточный твердофазный ΕΌΙ8Α (εΕΌΙδΑ) для определения фосфо-С8К3Ь (рС8К3Ь).

Мишень Α1<1 в клетках.

Клетки И87МС, полученные из глиобластомы человека, в экспоненциальной фазе роста высевали в 96-луночные планшеты и инкубировали в течение ночи при 37°С с 5% СО₂. Из 4 мМ исходного раствора (в 100% ДМСО) получали десять концентраций соединения примера путем серийных разведений 1:2 в культуральной среде. Добавляли непосредственно к клеткам равные количества каждого из серийных разведений. Через 2 ч останавливали обработку. В конце обработки удаляли культуральную среду и промывали клетки однократно ледяным забуференным фосфатом физиологическим раствором (ΡΒ8). Клетки фиксировали в ΡΚΕΕΕΚ. согласно инструкциям производителя с последующим ополаскиванием их смесью ΡΒ8/0,1% 8Ό8 и ΡΒ8/0,1% Τήΐοη Х-100®, затем в течение ночи инкубировали в блокирующем буфере 8ΕΑ. После инкубации в блокирующем буфере следовала стадия ночной инкубации клеток с антителом кролика против рС8К3Ь/8ет9 и затем с антителами козы против 1дС кролика. рС8К3Ь определяли при помощи субстрата Зирег^дгиН ΕΌΙ8Α ЕешФ, следуя инструкциям производителя. Соединение примера 1 в данном анализе ингибировало рС8К3Ь с 1С₅₀, равной 2,04+/-0,68 (η=8) мкМ.

Исследование ингибирования мишени ίη νίνο.

Ингибирование мишени ίη νίνο после однократной внутривенной инъекции.

Клетки И87МС, полученные из глиобластомы человека, находящиеся в экспоненциальной фазе роста, имплантировали под кожу задней части бока бестимусных мышей. После того как опухоли достигали размера 200-250 мм³, животным вводили соединения путем однократной внутривенной инъекции в рамках исследования зависимости доза-ответ или динамики. В конце каждой обработки мышей асфиксировали СО₂. Хирургическим путем извлекали опухоли, быстро замораживали их в жидком азоте и хранили при -80°С до проведения анализа. Из крови, отобранной из сердца путем пункции, получали сыворотку и хранили ее при -80°С до проведения анализа.

Анализ образцов.

Ингибитор Α1<1 экстрагировали из сыворотки смесью ацетонитрил/метанол и анализировали параллельно со стандартным анализом ЖХ/МС/МС. Опухоли гомогенизировали в 2 об. лизирующего буфера, содержащего 25 мМ ΤιΝ (рН 7,5), полные ингибиторы протеаз Ροοίκ и 1 мМ ванадата, в гомогенизаторе Ρο\\ΌΓ^η 125 и затем последовательно прогоняли через иглы калибров 18 и 23. Из надосадочной фракции, полученной путем центрифугирования лизатов в течение 30 мин при 20000хд, получали растворимые цитоплазматические экстракты. Концентрацию белка в цитоплазматических экстрактах определяли при помощи набора ВСА. Количество фосфо-С8К3Ь (рС8К3Ь) в растворимых экстрактах определяли при помощи набора для твердофазного ΕΌΙ8Α.

В данном анализе с клетками глиобластомы соединение примера 1 ингибировало рС8К3Ь на 76% через 1 час после введения путем внутривенной инъекции в дозе 25 мг/кг.

Анализ ингибирования роста опухоли ίη νίνο.

Клетки И87МС, полученные из глиобластомы человека, или клетки Н1155, полученные из немелкоклеточной опухоли легкого человека, находящиеся в экспоненциальной фазе роста, имплантировали под кожу на боку (сзади) бестимусным мышам. Через три дня после имплантирования опухолей, путем микрохирургической процедуры устанавливали катетер для непрерывного вливания через яремную вену. На следующий день мышам путем инфузии вводили соединение примера 1 в Ό5\ν (5% декстрозы в воде)

- 12 015712 в различных концентрациях по 40 мкл/ч в течение 4 дней. Опухоли измеряли дважды в неделю до прекращения исследования, которое обычно завершали через 24 дня после имплантации. Ингибирование роста опухоли рассчитывали путем деления среднего объема опухолей в группе, получавшей лечение, к среднему размеру в группе, получавшей только носитель.

В случае глиобластомы, при непрерывном вливании 27 мг/кг/день соединения примера 1, ингибирование роста опухоли в конце исследования составило 50%.

В случае немелкоклеточного рака легкого, при непрерывном вливании 24 мг/кг/день соединения примера 1, ингибирование роста опухоли в конце исследования составило 63%.

Анализ фармацевтической композиции.

Фармацевтическая композиция полугидрата моногидрохлорида 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил] фенола содержала невосстанавливающий сахар и агент, регулирующий рН. Исследования растворимости показали, что маннит не влияет на растворимость полугидрата моногидрохлорида 4-[5-(2аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола. Однако растворимость полугидрата зависит от рН и составляет >19 мг/мл при рН<3,91. Скорость выпадения осадка также зависит от рН.

Влияние исходного рН раствора на скорость осаждения (ррЪ). Сначала готовили все растворы с приблизительно 15 мг полугидрата моногидрохлорида 4-(5-(2аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола /мл и хранили при комнатной температуре

Среда рН (исходный) Осаждение (ррЪ)

05н НС1/3% маннит	1,68	ррХ отсутствует до 96 часов
01н НС1/3% маннит	3,19	ррЬ отсутствует до 96 часов
005н НС1/3% маннит	3, 58	ррб	после часов	48
0025н НС1/3% маннит	3, 91	ррС	после часов	36
001н НС1/3% маннит	4,20	рре	после часов	24

Анализ ЖХ/МС повторно растворенного осадка показал, что он представляет собой димероподобные молекулы (масс-спектр (ЖХМС) 111//=640,2 (М+Н⁺)), которые образуются из двух молекул 4-[5-(2аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола (масс-спектр (ЖХМС) 111//=329,1 (М+Н⁺) для 4-[5-(2аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил] фенола) после потери аммония. Кроме того, маловероятно, что осаждение происходит из-за перехода в менее растворимую форму.

Claims

1. Соединение, которое представляет собой 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенол или его фармацевтически приемлемую соль либо гидрат указанного соединения или его фармацевтически приемлемой соли.

2. Соединение по п.1, которое представляет собой дигидрохлорид 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола.

3. Соединение по п.1, которое представляет собой полугидрат моногидрохлорида 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола.

4. Применение соединения по любому из пп.1-3 в качестве лекарственного средства.

5. Применение соединения по любому из пп.1-3 для получения лекарственного средства для лечения множественной миеломы, немелкоклеточного рака легких, глиобластомы, нейробластомы, меланомы или опухоли предстательной железы, молочной железы, яичников, первичной опухоли желудка, опухоли кишечного типа, эндометрия, щитовидной железы, поджелудочной железы, легкого или мочевого пузыря.

6. Применение соединения по любому из пп.1-3 для получения лекарственного средства для лечения множественной миеломы, немелкоклеточного рака легких, глиобластомы или опухоли предстательной железы, молочной железы или яичников.

7. Применение соединения по любому из пп.1-3 для получения лекарственного средства для лечения немелкоклеточного рака легкого или глиобластомы.

8. Применение соединения по любому из пп.1-3 для получения лекарственного средства для лечения гепатита С, краснухи, вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), гепатита В или цитомегаловируса человека (НСМУ).

- 13 015712

9. Применение соединения по любому из пп.1-3 для лечения множественной миеломы, немелкоклеточного рака легкого, глиобластомы, нейробластомы, меланомы или опухолей предстательной железы, молочной железы, яичников, первичных опухолей желудка, опухолей кишечного типа, эндометрия, щитовидной железы, поджелудочной железы, легкого или мочевого пузыря у пациента, нуждающегося в этом.

10. Применение соединения по любому из пп.1-3 для лечения множественной миеломы, немелкоклеточного рака легкого, глиобластомы или опухолей предстательной железы, молочной железы или яичников у пациента, нуждающегося в этом.

11. Применение соединения по любому из пп.1-3 для лечения немелкоклеточного рака легкого или глиобластомы у пациента, нуждающегося в этом.

12. Применение соединения по любому из пп.1-3 для лечения гепатита С, краснухи, вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), гепатита В или цитомегаловируса человека (НСМУ) у пациента, нуждающегося в этом.

13. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по любому из пп.1-3 и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или эксципиент.

14. Лиофилизированная фармацевтическая композиция, содержащая соединение по любому из пп.1-3 и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или эксципиент, где рН указанной композиции после разбавления водным разбавителем меньше 4,2, но больше 2,0.

15. Лиофилизированная фармацевтическая композиция по п.14, где рН меньше 3,2, но больше 2,0.

16. Лиофилизированная фармацевтическая композиция по п.15, где рН меньше 2,8, но больше 2,0.

17. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по любому из пп.1-3 и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или эксципиент в растворе, где рН указанной композиции меньше 4,2, но больше 2,0.

18. Фармацевтическая композиция по п.17, где рН указанной композиции меньше 3,2, но больше 2,0.

19. Фармацевтическая композиция по п.18, где рН указанной композиции меньше 2,8, но больше 2,0.

20. Полугидрат моногидрохлорида 4-[5-(2-аминоэтансульфонил)изохинолин-7-ил]фенола в кристаллической форме, характеризующейся порошковой дифрактограммой, имеющей пики при угле дифракции 2θ=4,9, 14,8 и 10,2.