TW200812970A - Inhibitors of AKT (protein kinase B) - Google Patents

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200812970 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明提供為Akt之抑制劑之化合物、包括該等化合物 之組合物及使用該等化合物之方法。 ^ 【先前技術】 蛋白質激酶涉及在正常及病理狀況下使生長因子、激素 及其他細胞調節分子與細胞生長、存活及新陳代謝相聯繫 之信號轉導路徑。一種如此之蛋白質激酶，即蛋白質激酶 B(亦稱為Akt)為絲胺酸/蘇胺酸激酶，其在促進各種細胞類 型之增殖及存活中起重要作用，進而保護細胞免於細田= 亡（程式化細胞死亡）。 大量蛋白質激酶及磷酸酶調節Akt之活性。舉例而十， Akt之活化為磷脂醯肌醇3-激酶（PI3-K)所介導，該灯弘艮激 酶促使第二信使磷脂與Akt之普列克底物蛋白（pleckstrin)同源 (PH)結合域結合。該結合使Akt錨定至質膜且引起酶之攝 酸化及活化。PI3-K之催化亞單位Ρ11〇α之擴增或^、〖調 節亞單位ρ85α之突變導致若干類人類癌症中之Akt之活 化。近期研究亦已證明了 PI3-K/AKT路徑在眾多病毒之生 命週期中之作用。 ' WO 01/91754係關於蛋白質激酶抑制劑。w〇 2〇〇5/ 0 11697涉及蛋白質激酶A抑制劑及蛋白質激酶B抑制劑。 WO 2005/054202係關於AKT抑制劑。 由於Akt在調節細胞存活中之關鍵作用，因此其為各種 病症、尤其癌症及病毒性感染之有效治療提供新穎治療乾 120821.doc 200812970 點。然而，該等治療需要開發Akt之有效、選擇性、生物 可用型抑制劑。對替代性Akt抑制劑存在需要。因此，本 發明提供顯示增強之效能、選擇性及/或生物可用性之新 穎Akt抑制劑、包括該等化合物之組合物及使用該等化合 物之方法。 另外，當含有新穎Akt抑制劑之醫藥組合物經稀釋或於 溶液中時，其必定必須沒有沈澱現象以便傳遞至患者。本 發明提供包括處於缺乏如此之沈澱現象的特定1)11值範圍内 t 之新穎Akt抑制劑的醫藥組合物。 【發明内容】 本發明提供4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基異喹啉_7_基]_苯 紛或其醫藥學上可接受之鹽，或該化合物或其鹽之水合 物0 本發明亦提供4-[5-(2-胺基-乙烧績酿基）-異喧嚇^7-基]_ 苯酚二鹽酸鹽。 I 本發明另外提供4-[5·(2-胺基-乙烧石黃龜基）-異喧琳_7_ 基]-苯紛單鹽酸鹽半水合物。 本發明亦提供用作藥劑之4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異 4 喹啉-7-基]-苯酚或包含4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉- ^ 7-基]-苯酚二鹽酸鹽或4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉- 7-基]-苯酚單鹽酸鹽半水合物的其醫藥學上可接受之鹽或 該化合物或其鹽之水合物。 另外，本發明提供4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉-7-基]-苯酚或包含4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉-7-基]-苯 120821.doc 200812970 酚二鹽酸鹽或4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉基卜苯 盼單鹽酸鹽半水合物的其醫藥學上可接受之鹽或該化合物 或其鹽之水合物的用途，其用於製造供治療以下疾病用之 藥劑：多發性骨髓瘤、非小細胞肺癌、神經膠母細胞瘤、 神經母細胞瘤、黑素瘤或前列腺、乳房、卵巢、原發性 胃、腸類型、子宮内膜、甲狀腺、胰腺、肺或膀胱之贅 瘤。 本發明亦提供4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）_異喹啉-7_基卜 本紛或包含4-[5-(2-胺基-乙烧績醯基）-異喧琳-7-基]•苯紛 二鹽酸鹽或4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基異喹啉·7·基]-苯酚 單鹽酸鹽半水合物的其醫藥學上可接受之鹽或該化合物或 其鹽之水合物的用途，其用於製造供治療以下疾病用之藥 劑：多發性骨髓瘤、非小細胞肺癌、神經膠母細胞瘤或前 列腺、乳房或卵巢之贅瘤。 本發明另外提供4-[5-(2-胺基-乙燒石黃醯基）_異喹琳-7-基]-苯酚或包含4_[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）_異喹啉基卜苯 酚二鹽酸鹽或4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）_異喹啉基卜苯 紛單鹽酸鹽半水合物的其醫藥學上可接受之鹽或該化合物 或其鹽之水合物的用途，其用於製造供治療非小細胞肺癌 或神經膠母細胞瘤用之藥劑。 本發明另外提供4-[5-(2-胺基-乙垸磺醯基）_異喹琳 基]-苯酚或包含4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基異喹啉_7_基]_苯 紛一鹽酸鹽或4-[5-(2 -胺基-乙烧磺醯基）_異唾琳_7_基]-苯 盼單鹽酸鹽半水合物的其醫藥學上可接受之鹽或該化合物 120821 .doc 200812970 或其鹽之水合物的用途，其用於製造供治療以下疾病用之 藥d · C型肝炎、風疹、人類免疫缺乏症病毒（mv)、b型 肝火或人類巨細胞病毒（HCMV)。 另外’本發明提供用於治療多發性骨髓瘤、非小細胞肺 癌、神經膠母細胞瘤、神經母細胞瘤、黑素瘤或前列腺、 礼房、卵巢、原發性胃、腸類型、子宮内膜、曱狀腺、胰 腺、肺或膀胱之贅瘤的4_[5_(2_胺基-乙烷磺醯基）_異喹啉_ 7一基]β笨酚或包含4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉_7_基]_ " a酉夂鹽或4·[5_(2-胺基·乙烧石黃酿基）_異喧·琳基]_ 苯紛單鹽酸鹽半水合物的其醫藥學上可接受之鹽或該化合 物或其鹽之水合物。 本發明亦提供用於治療多發性骨髓瘤、非小細胞肺癌、 神經膠母細胞瘤或前列腺、乳房或卵巢之贅瘤的4_[5_(2_ 胺基-乙烷磺醯基）_異喹啉_7_基卜苯酚或包含4_[5_(2_胺基_ 乙烷磺醯基）-異喹啉_7_基]_苯酚二鹽酸鹽或4_[5_(2_胺基_ 乙烷磺醯基）-異喹啉_7_基卜苯酚單鹽酸鹽半水合物的其醫 藥學上可接受之鹽或該化合物或其鹽之水合物。 本發明另外提供用於治療非小細胞肺癌或神經膠母細胞 瘤的4-[5-(2-胺基_乙烷磺醯基）_異喹啉_7_基卜苯酚或包含 4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）_異喹啉_7_基]_苯酚二鹽酸鹽或 4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基>異喹啉_7_基卜苯酚單鹽酸鹽半 水合物的其醫藥學上可接受之鹽或該化合物或其鹽之水合 物。 本發明另外提供用於治療c型肝炎、風疹、人類免疫缺 120821.doc 200812970 乏症病毋（HIV)、B型肝炎或人類巨細胞病毒（HCMV)的4_ [5♦胺基-乙院石黃醯基）-異，奎琳乂基卜苯盼或包含心[5私

胺基-乙烧績醯基）.異㈣_7_基卜苯紛二鹽酸鹽或4七I 胺基乙烧石尹、酸基）-異喧琳基]•苯紛單鹽酸鹽半水合物的 其醫藥學上可接受之鹽或該化合物或其鹽之水合物。 本發明另外提供一種治療有需要之患者之多發性骨髓 瘤、非小細胞肺癌、神經膠母細胞瘤、神經母細胞瘤、黑 素瘤或前列腺、乳房、印巢、原發性胃、腸類型、子宮内 膜、曱狀腺、胰腺、肺或膀胱之贅瘤的方法，其包括投與 有效S之4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）_異喹啉_7_基]·苯酚或 包含4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基異喹啉_7_基卜苯酚二鹽酸 鹽或4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）·異喹啉_7_基]_苯酚單鹽酸 鹽半水合物的其醫藥學上可接受之鹽或該化合物或其鹽之 水合物。 本發明亦提供一種治療有需要之患者之多發性骨髓瘤、 非小細胞肺癌、神經膠母細胞瘤或前列腺、乳房或卵巢之 贅瘤的方法，其包括投與有效量之4_[5_(2_胺基_乙烷磺醯 基異喹啉-7-基]-苯酚或包含4_[5_(2-胺基_乙烷磺醯基）_異 喹啉-7-基]-苯酚二鹽酸鹽或4_[5-(2_胺基-乙烷磺醯基）_異 1琳-7-基]-本紛單鹽酸鹽半水合物的其醫藥學上可接受之 鹽或該化合物或其鹽之水合物。 本發明另外提供一種治療有需要之患者之非小細胞肺癌 或神經膠母細胞瘤的方法，其包括投與有效量之4_[5_(2_ 胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉-7-基]-苯酚或包含4_[5_(2_胺基· 120821.doc -10· 200812970 乙烷磺醯基）-異喹啉_7_基]_苯酚二鹽酸鹽或4_[5_(2_胺基_ 乙烷磺醯基）-異喹啉_7_基]_苯酚單鹽酸鹽半水合物的其醫 藥學上可接受之鹽或該化合物或其鹽之水合物。 本發明另外提供一種治療有需要之患者之c型肝炎、風 疹、人類免疫缺乏症病毒（HIV)、B型肝炎或人類巨細胞病 ， 毒（HCMV)的方法，其包括投與有效量之4_[5_(2_胺基-乙烷 ^ 磺醯基）_異喹啉_7-基]-苯酚或包含4-[5-(2•胺基·乙烷磺醯 ( 基）_異喹啉基]-苯酚二鹽酸鹽或4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯 基）/、土琳-7-基]-本齡單鹽酸鹽半水合物的其醫藥學上可 接义之鹽或該化合物或其鹽之水合物。 本發明亦提供一種醫藥組合物，其包括4_[5_(2_胺基_乙 烷磺醯基異喹啉_7_基]_苯酚或包含‘[5_(2_胺基-乙烷磺 醯基）-異喹啉_7•基]_苯酚二鹽酸鹽或4_[5_(2_胺基·乙烷磺 醯基異喹啉_7_基]_苯酚單鹽酸鹽半水合物的其醫藥學上 可接X之鹽或該化合物或其鹽之水合物，及醫藥學上可接 (/ 受之載劑、稀釋劑或賦形劑。 本發明另外提供一種冷凍乾燥醫藥組合物，其包括4_[5_ (2-胺基-乙烷磺醯基）_異喹啉_7_基]_苯酚或包含4^5_(2_胺 * 基_乙烷磺醯基）_異喹啉-7-基]-苯酚二鹽酸鹽或4_[5_(2-胺 ’ 基-乙烷磺醯基）_異喹啉-7-基]-苯酚單鹽酸鹽半水合物的其 酉為车上了接受之鹽或該化合物或其鹽之水合物，及醫藥 學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑，其中當用水性稀释 劑稀釋時，該組合物之PH值小於4.2且大於2.0、小於3·2且 大於2.0，或小於2·8且大於2.〇。 120821 .doc 200812970 本發明亦提供—種醫藥組合物，其包括於溶液中之4_[5· (2-fe基-乙烷磺醯基）_異喹琳·7_基]苯酚或包含4·[5_(二胺 基-乙烷磺醯基）-異喹琳_7_基]_苯酚二鹽酸鹽或4·[5·(2_胺 基-乙烧續醯基）_異喹琳_7_基]_苯盼單鹽酸鹽半水合物的其 醫藥學上可接受之鹽或該化合物或其鹽之水合物，及醫藥 學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑，其中該組合物之ρΗ 值小於4.2且大於2.0、小於32且大於2〇，或小於28且大 於 2.0。 本發明另外提供呈結晶形式的4_[5_(2_胺基-乙烷磺醯 基）-異喹啉-7-基]-苯酚單鹽酸鹽半水合物，其具有在 2Θ=4·9、14·8及1〇·2處具有強峰之X射線粉末繞射圖。 本發明亦提供4-[5-(2-胺基_乙烷磺醯基 >異喹啉_7_基]_ 苯酚或其醫藥學上可接受之鹽或其水合物。 【實施方式】 本务明之化合物為Akt之抑制劑且據信適用於治療與Akt 活性有關之病症。因此，本發明之化合物為抗贅生劑及/ 或抗病毒劑。 本發明之化合物適用於治療顯示缺乏PTEN之贅瘤、具 有失調（deregulated)PI3-激酶活性之贅瘤或顯示高Akt活性 之贅瘤。據# Akt抑制劑適用於治療多發性骨髓瘤（pjsu等 人，(2001) 98(9) 2853-2855);非小細胞肺癌 (Balsara，以（2004) 25(11) 2053_2059);神經 朦母細胞瘤（Koul等人，Μα/· Cancer 77zer. (2006) 5. 637-644);神經母細胞瘤（Li等人，及以·（2005) 65(6)， 12082Ldoc -12- 200812970 2070-2075);黑素瘤（Dai等人，/·〇/ Cm (2005) 23(7)，1473-1482)及前列腺贅瘤（Majumder等人 ’ C^coge^ze (2005) 24，7465-7474);乳房贅瘤（Tokunaga 等人，/· 〇/ Clin. Oncology (Meeting Abstracts) (2005) 23(16S), 9500);卵巢贅瘤（Cheung 等人，PNAS (1992) 89，9267-9271 ; Yuan等人（2000) ; Hu等人（2000));原發性胃或腸類 型贅瘤（Ang等人，Ze"· (2005) 225(1)，53-59);子 宮内膜贅瘤（Jin 等人 ’ 5r"/*y/2 J. 〇/ Cawcer (2004) 91 1808-1812);甲狀腺贅瘤（Ringel 等人，C⑽cer iia· (2001) 61(16)，6105_6111 ; De Vita等人，(2000) 60, 3916-3920);胰腺贅瘤（Schliemen等人，«/·〇/ C⑽cer (2003) 89，2110-2115);肺贅瘤（Massion 等人，dm. «/· CWi· Care Mei (2004) 170，1088-1094);或膀胱贅 瘤（Rieger-Christ 等人，Oncogwe (2004) 23(27)，4745-4753)。亦據信Akt抑制劑適用於治療諸如以下者之病毒： C型肝炎及C型肝炎之NS5A(Mannova等人，J· Fz>o/· (2005) 79(14)，8742-8749; He 等人（2002));風疹（Cooray等人， P7 〜/og>y (2005) 2(1)，1-12);人類免疫缺乏症病毒（HIV) 之Tat蛋白質（Borgatti等人（1997)) ; B型肝炎之蛋白質 X(Lee等人（2001))，或人類巨細胞病毒（HCMV)(Johnson# 乂（2001)) 〇 4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉-7-基]-苯酚與（例如）常 用於醫藥化學領域之生理學上可接受之鹽形成醫藥學上可 接受之酸加成鹽。該等鹽亦為本發明之部分。醫藥學上可 120821.doc -13- 200812970 接受之鹽及製備其之通用方法在此項技術中為熟知的。參 見（例如），P. Stahl 等人，Handbook of Pharmaceutical

Salts: Properties，Selection and Use，（VCHA/Wiley-VCH， 2002) ； S. M. Berge等人，丨’Pharmaceutical Salts，” Journal of Pharmaceutical Sciences，第 66 卷，第 1 期，1977 年 1 月。 4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉-7-基]-苯酚之較佳鹽 包含單鹽酸鹽及二鹽酸鹽。 本文中所描述之中間物可形成鹽。 除鹽以外，本發明之化合物及本文中所描述之中間物可 形成水合物或醫藥學上可接受之鹽之水合物。 較佳化合物為4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉-7-基]-苯酚。另一較佳化合物為4-[5-(2·胺基-乙烷磺醯基）-異喹 啉-7-基]_苯酚二鹽酸鹽。更佳化合物為4-[5-(2-胺基-乙烷 磺醯基）-異喹啉-7-基]-苯酚單鹽酸鹽半水合物。 如本文中所使用，術語’’患者”係指罹患一或多種與高 Akt活性相關之病症之哺乳動物。應瞭解，最佳患者為人 類。亦應瞭解，本發明特別係關於抑制哺乳動物 Akt/PKB。 術語π治療’’及其類似術語意謂包含諸如減少及/或抑制贅 瘤之生長、Akt 1、Akt 2及/或Akt 3之擴增及/或過度表 現、細胞增殖及存活及/或病毒複製的效應。 如本文中所使用，術語π有效量”係指抑制Akt達至提供 藥理學效應之程度之量。 120821.doc -14- 200812970 本發明亦提供一種醫藥組合物，其包括4_[5-(2-胺基-乙 烷磺醯基）-異喹啉-7-基]-苯酚或其醫藥學上可接受之骑 或其水合物’以及醫藥學上可接受之载劑、稀释劑或&形 劑。本發明之醫藥組合物包含稀釋前之形式，諸如冷凍乾 燥形式；及稀釋後之形式，諸如有待於投與患者之形式 該等醫藥組合物之pH值為小於約4.2至大於約2 〇。更件 地，PH值為小於約3.2至大於約2.〇。最佳pH值為小於二 2·8至大於約2·〇。”醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形 劑”為此項技術中一般公認用於將生物活性劑傳遞至患者 (例如哺乳動物，較佳為人類）之介f。該等載劑、稀釋劑 或賦形劑通常係根據完全屬於熟習此項技術者能夠確定i 解釋之能力範圍内之大量因素來調配。該等因素包含（但 不限於）：所調配之活性劑之類型及性質；欲投與含有藥 劑之組合物之受檢者；組合物之所欲投藥途徑；及所靶向 之治療適應症。醫藥學上可接受之載劑及賦形劑包含水性 及非水性液體介質以及各種固體及半固體劑型。該等載 劍、稀釋劑或賦形劑可包含大量除活性劑以外之不同成分 及添加劑，該等額外成分因熟習此項技術者所熟知之各種 原因（例如對活性劑之穩定化作用）而包含於調配物中。關 於合適醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑以及其選 擇所涉及之因素的描述見於各種易得到之來源。參見（例 如），Remington: The Science and Practice of Pharmacy(A·

Gennaro等人編，第 19版，Mack Publishing Co.，1995)。 本發明之化合物可以含有習知無毒醫藥學上可接受之載 I20821.doc -15- 200812970 劑、稀釋劑或賦形劑 式全身性投與，諸如 與。 之酉藥組合物之劑量單位調配物的形 靜脈内（例如藉由快速注射或輸液）投 對4 [5 (2·版基-乙燒石黃酿基）_異哇淋1基]-苯齡之醫藥 組合物而言’活性成分將通常以按組合物之總重量計為約 0.5至95重量％之量存在。可應用適當包衣以增加可口性或 延緩吸收。 用於治療患者之本文中所 又T所描述之病症的本發明之化合物 療有效里可以熟習此項技術者已知之各種方式來確 定。然而應瞭解，對於任何特定患者而言，具體之劑量水 平將視各種因素而$，該等因素包含：所採用之特定化合 :之活性、年齡、冑重、-般健康狀況、性別、飲食、投 藥時間、技藥途技及排泄速率、藥物組合及特^疾病之嚴 重性。劑量頻率亦可視所使用之化合物及所治療之特定疾 病而變化。舉例而言，典型日劑量可含有約i mg至i §之 活性成分。 本發明之化合物可藉由採用除文獻中已知或例示於實驗 私序中之其他標準操作以外的本文中所提供之資訊來箩 備。 、 除非另外指定，否則本文中使用之術語及縮寫具有其正 系s義。舉例而言，，’LC„係指液相層析；，，扣^，，係指雙 (一苯膦基）丁烷；Pd (〇Ac)2係指乙酸鈀；"DMF”係指n，n_ 二曱基甲醯胺；，，dmso”係指二曱亞砜；，，扮2〇，，係指乙 醚；”Et〇AC”係指乙酸乙醋；"TFA"係指以乙酸； 120821.doc -16· 200812970 係指甲醇。 製備 製備1 2-[7-(4-甲氧基-苯基）-異喹琳-5-石黃醯基]-乙胺二鹽酸鹽 用於二噁烷（350 mL)中之4 N HC1處理{2-[7·(4_甲氧基_ 苯基）-異喹啉_5_磺醯基卜乙基}-胺基甲酸第三丁酯（u.〇〇 g，24.85 mmol)於無水MeOH(150 mL)中之漿料。在室溫下 將所得反應混合物攪拌隔夜，隨後真空濃縮至1 /2體積且 用過量EtOAc處理，使黃色固體沈澱。藉由在N2氣氛下真 空過濾回收所得固體；用EtOAc洗滌且在真空下（在N2氣氛 下）乾燥以得到呈黃色固體之標題化合物（10.23 g，產率 99%) : MS (ES): m/z 343.0 (M++H)。 製備2 7-溴·異喹啉-5-磺酸 將發煙 H2S04(2,000 mL，21.33 mol ; 26-29.5% 游離 s〇3) 添加至一配備機械攪;摔器、回流冷凝器、&管線及溫度計 之圓底燒瓶中。用冰/丙酮浴將發煙HJO4冷卻至大約 l〇°C，隨後逐份添加7-溴異喹啉HC1(500.00 g，2>Q4 m〇l)，保持反應混合物之溫度在大約15-20°C以下。_旦完 成7-溴異喹啉HC1之添加後，在大約l〇〇°c下將所得反靡混 合物加熱隔夜。將反應混合物冷卻至室溫，隨後緩慢傾倒 至正攪拌著之冰H2〇溶液中。藉由真空過濾回收所得沈澱 物’用HzO洗務，隨後用Et2〇洗丨條，且真空過渡乾燥，接 著在乾燥烘箱中，在大約35°C下減壓乾燥以得到呈灰白色 120821.doc -17- 200812970 固體之標題化合物（501.42 §，產率85%):丁〇卩-%8[^8 + ; m/z] 287.933 1/287.9330 ° 製備3 7-(4-(甲氧基-苯基）-異喹啉-5-磺酸 用2 M Na2C03水溶液（652 mL)處理7_漠-異喧琳-5-石黃酸 (150.00 g，0.520 mol)及 4-甲氧基苯基賴酸（90.87 g，0.598 mol)於 DMF(1，400 mL)及 MeOH(375 mL)中之溶液。用 N2 將 所得漿料脫氧3次，隨後添加Pd(OAc)2(2.33 g，0.0104 mol)及 dppb(5.54 g，0.0130 mol)。在大約 70°C 下將所得反 應混合物加熱3 hr，隨後使其冷卻至室溫隔夜。用 H20(4,000 mL)稀釋反應混合物且用5 N HC1水溶液將pH值 調節至大約pH 2。使所得漿料在室溫下攪拌30 min，隨後 藉由真空過濾回收棕色固體，用H20洗滌且真空過濾乾 燥。將棕色固體溶於DMF(1，000 mL)及2 M Na2C03水溶液 (650 mL)中，且經由Celite®墊過濾所得溶液，用DMF(400 mL)/H20(400 mL)洗滌。用5 N HCM水溶液處理濾液以將pH 值調節至大約pH 2。使所得漿料在室溫下攪拌30 min，隨 後藉由真空過濾回收固體，用H20洗滌且真空過濾乾燥隔 夜。再次將固體溶於DMF(1，000 mL)及2 M Na2C03水溶液 (1，000 mL)中且用Celite®處理所得溶液以產生漿料。在室 溫下將所得漿料攪拌30 min，隨後經由Celite⑧墊過濾，用 HW洗滌。用5 N HC1水溶液處理濾液以將pH值調節至大 約pH 2。在室溫下將所得漿料攪拌30 min，隨後藉由真空 過濾回收固體，用H20洗滌且真空過濾乾燥隔夜。將固體 120821.doc -18 - 200812970 壓碎，隨後用EtOAc洗滌，真空過濾乾燥隔夜，接著在乾 爍烘箱中，在大約35 C下減壓乾燥以得到呈黃色固體之標 題化合物（136.79 g，產率 83%) : tof.ms' [ES + ; 316.0624/316.0643。分析計算值 Ci6Hi3N〇4S: c 6〇94; H 4·15; N 4.44; S 10·16。實驗值 C 6〇 76; H 4 13; N 4 5〇; § 9.90 〇 製備4 7-(4-曱氧基-苯基）_異喧琳石黃醢氯 向7-(4-曱氧基-苯基）-異啥琳石黃酸（1213 g， mmol)於 1，2-二氣乙烷（200 mL)及 DMF(2.99 mL，38.5 mmol)中之漿料中逐滴添加乙二醯氣（26 8 mL，3〇8 mmol)。在氮氣氛下機械攪拌該漿料，同時在6〇_65它下加 熱4 hr。將該漿料冷卻至-l〇°C。等待30 min，隨後過溏。 用20%乙醚/二氣曱烷洗滌黃色固體且在氮氣氛下乾燥，得 到呈黃色粉末之標題化合物（14.8 g)。 製備5 7-(4-甲氧基-苯基）-異喹琳-5-硫醇鈉鹽 A·向7-(4-甲氧基-苯基）-異喧琳-5-續醯氯（4.0 g，12 mmol)於二噁烷（40 mL)中之漿料中添加三羧基乙基膦鹽酸 鹽（13.73 g，48 mmol)及水（10 mL)。將該混合物加熱至 100°C且攪拌3 hr。在冰浴中冷卻該混合物，且經由吸管緩 慢添加NaOH(5 N，60 mL)。過遽淺黃色沈殿物且空氣乾 燥以得到標題化合物（3·2 g，95%)。質譜（LCMS)m/z= 266.2 (M-Na+) ° 120821.doc -19- 200812970 或者，標題化合物可如下製得： B.⑴用N2將7-(4-甲氧基-苯基）-異喹啉_5_磺酸（100.00 g，0.317 mol)於無水甲苯（2,500 mL)中之溶液去氧3次，隨 後用 Ph3P(332.58 g，1.268 mol)、12(80.46 g，〇·317 mol)及 Βιι3Ν(152·00 mL，0.638 mol)處理。使所得反應混合物在 %下回流1小時，隨後冷卻至室溫隔夜同時將空氣鼓入反 應混合物中。用1 N NaOH水溶液（500 mL)處理該反應混合 物，隨後在室溫下將所得反應混合物攪拌隔夜同時將空氣 鼓入反應混合物中。藉由真空過濾回收所得棕褐色沈澱 物。用THF/EhO之1/1溶液洗滌，隨後真空過濾乾燥以得 到呈淺棕褐色固體之雙-(7-(4-曱氧基-苯基）_異喹啉_5)_二 硫化物（72.50 g ’ 產率 86%) : 4 NMR (400 MHz，DM SO) δ 9.39 (s，2Η)，8.51 (d，2Η)，8·41 (s，2Η)，8·11 (d，2Η)，8·00 (d，2H)，7.53 (d，4H)，6.94 (d，4H)，3.78 (s，6H)。 Β· (ii)用 NaBH4(2.84 g，75.07 mmol)處理雙 _(7_(4_ 甲氧 基-苯基）-異喹啉-5)·二硫化物於無水THF(850 mL)中之聚 料。在大約35°C下，在A下將所得反應混合物加熱大約1 小時’隨後在大約45 C下’在N2下加熱1小時。 製備6 7-(4-甲氧基-苯基）-異喹啉-5_亞磺酸納 向於水（10 mL)中之7-(4-甲氧基-苯基）_異喹啉磺醯氯 (1.48 g，4 mmol)中添加 Na2S〇3(1〇1 g，8 mm〇i)及

NaHC03(l .01 g，12 mmol)。將混合物加熱至1〇〇。〇且攪拌 1 hr。將反應混合物冷卻至室溫，且減壓移除水。將甲醇 120821.doc •20- 200812970 (40 mL)添加至殘餘物中，攪拌1〇 min。過濾白色固體，用 甲醇洗滌且合併濾液。濃縮得到標題化合物（11 g)。 製備7 (3,5_二氯-亞苄基）-(2,2_二乙氧基_乙基）_胺 將2,2-二乙氧基-乙胺（1852 5 g; 100當量；13 63莫 耳）、3,5-二氯-苯甲醛（2453 g ; ΐ·〇〇當量；13.60莫耳）及甲 苯（12 L)裝至一配備迪恩·斯達克收集器（Dean Stark 、 冷凝器、氮氣入口、頂置式攪拌及熱電偶之22 L燒瓶中。 使淺黃色反應物溫至回流。在88。〇下溶劑開始蒸餾。收集 總共大約65 0 mL餾出物（大約24〇 mL之水）。在蒸餾期間， 使溫度增加至114°C。在回流2 hr後，NMR顯示產物。在 2.5 hr後停止加熱。經由有凹槽濾紙，將溶液以重力過濾 至大玻璃瓶中以移除少數微粒（包含一小部分玻璃管，其 最有可月b來自3,5-二氯-苯甲駿）。使用Buchi燒瓶與設定在 45 C下之水浴，濃縮所過濾之溶液。一旦溶劑停止餾出 後’就在完全真空下使溫度增加至7(rc且保持大約15 hr 以移除任何殘餘甲苯。（3,5·二氣-亞苄基>(2,2_二乙氧基_ 乙基）-胺之重量為4059.3 g(理論值之ι〇2·9%)。質譜 (LCMS)m/z=291.2 (Μ+Η+)。 製備8 5,7-二氯-異喹啉鹽酸鹽 將三就甲磺酸（2.97 L ; 33.52莫耳·，5.03 kg)裝至一配備 迪恩-斯達克收集器、頂置式攪拌、冷凝器、氮氣入口、3 L加料漏斗（經由冷凝器自燒瓶緩衝）及熱電偶之12 [燒瓶 120821.doc -21 - 200812970 中。將二氟甲磺酸加熱至12〇°C。用二氯甲烷（1350 mL)稀 釋（3,5-二氯-亞苄基）_(2,2_二乙氧基·乙基）_胺（135〇5呂； 1·〇〇當量；4·65莫耳）且將其裝至加料漏斗中。添加係以 119 C之溫度開始。經90分鐘完成添加，保持溫度在12〇。〇 下。在添加期間收集大致1500 mL之餾出物。面積％ HPLC 在添加後45夯鐘完成且顯示94.14%產物及4.86% (3，5-二 氯-亞苄基Η2,2·二乙氧基-乙基）_胺。15 hr後停止加熱。 將反應物冷卻至大約80°C。此時，將燒瓶置放於冰水浴中 且進一步冷卻。添加甲醇（2.7 ，同時在9。〇下反應。經 60分鐘完成添加。最高溫度為27。〇。一些固體在甲醇添加 期間形成。分若干份將該漿料轉移至一 2 L加料漏斗中且 將其添加至在冰水中經冷卻至低於2。〇之於22 L燒瓶中之 氫氧化銨溶液（5.1 L ; 36.67莫耳；4.59 kg)及水（5.1 L)中。 該加料漏斗具有Teflon®管延伸部分以防止材料沿燒瓶之 側面向下跑，此不良狀況會導致較多油性之固體附著於燒 瓶壁。以小塊方式添加材料以防止加料漏斗由於固體而堵 塞。經3 5分鐘完成添加，包含燒瓶及加料漏斗之曱醇（9〇〇 mL)沖洗。最咼溫度為26°C。棕色固體形成。將漿料冷卻 至14C。將固體過濾、於聚丙稀塾上。用2x4 L及ix2 L之水 洗滌固體。隨後用2 L庚烷洗滌固體以輔助乾燥。在5〇。〇 下將固體真空乾燥至999.0 g(理論值之1〇8·4%)之重量。將 5,7-二氣-異喹啉（997 g ; ι·〇〇當量；5 〇3莫耳）及乙醇 (14.97 L)裝至一配備加料漏斗、氮氣入口、頂置式攪拌及 熱電偶之22 L燒瓶中。在環境溫度（22。〇)下攪拌棕色漿 120821.doc -22 - 200812970 莫耳；1·3〇 kg)裝至加料漏 。棕色漿料變暗。藉由添加 料。將乙醯氯（11 8 0 mL ; 16.5 8 斗中。將其逐滴添加至燒瓶中 100-200 mL乙醯氣，固體顯現大部分_ 未形成。當繼續添加時，固體再現。經45分鐘完成添加。 最高溫度為43°C，其在添加進行至接近一半時達到i在浴 中以冷水保持。在添加大約3/4之乙醯氯之後，移取反應 樣本以作NMR分析。因為樣本顯現為鹽’所以可能不需要 過量的乙醯氯。將漿料攪拌且使其冷卻。4〇分鐘後，温度 為30°C。將漿料冷卻至低於2它且在冰水浴中保持丨5 hr。 過濾漿料。用2χ 1.3 L之冷卻乙醇洗滌固體。濕濾餅重量為 811.4 g。在50°C下真空乾燥固體。乾重為648 4 g。其表示 產率為 61.0。/〇。質譜（LCMS)m/z=199.05 (M+H+)。 製備9 -氣-異啥琳-5-基硫基）-乙基]-胺基曱酸第三丁酉旨 將碳酸鉀（1952 g ; 14· 12莫耳）裝至一配備頂置式攪拌、 加料漏斗、氮氣入口及熱電偶之22 L燒瓶中。添加二甲基 甲醯胺（4 L)。分若干份添加5,7-二氯-異喹啉鹽酸鹽（646β1 g ; 1.00當量；2.76莫耳）及連同DMF(330 mL)。將Boc-半 胱胺（514 g; 1·〇5當量；2.90莫耳）溶於二曱基甲醯胺（152〇 mL)中且裝至加料漏斗中。將混合物溫至60。〇。經由頂部 空間氮淨化15分鐘同時將混合物升溫。在60°C下，經2小 時又1 5分鐘添加b〇c_半胱胺溶液。添加之後1小時又2〇分 鐘之HPLC顯示28.1 %起始物質、67.26%產物、4.22%異構 體及0·25%雙取代物（0.25% bis)。使反應物溫至75°C。在 120821.doc -23- 200812970 75°C下，收集表a中之HPLC資料。 75°C下之時間~~ 5,7-二氯- 異喹啉 HC1 % [2-(7-氯-異嗤淋-5-基硫 基)乙基]-胺基曱酸第三 丁酯％ 異構體％ 雙取代物％ 30分鐘 2.75 90.27 5.54 1.44 1小時 0.93 91.39 5.52 2.16 1.5小時 0.20 91.25 5.32 3.23 表Α·製備[2-(7-氯-異喹啉_5_基硫基）-乙基]-胺基曱酸第三 丁酯之反應HPLC資料 1 · 5小時後，用冷卻水浴置換加熱套。使反應物冷卻至 20-25°C。過濾固體且用DMF(2x810 mL)洗滌。用MTBE (5.15 L)及 5% LiCl(5.15 L)稀釋 DMF溶液。在 50 L底部出口 燒瓶中攪拌後，分離諸層。用ΜΤΒΕ(2·9 L)萃取水層。將 ΜΤΒΕ層合併且用5% LiCl(2x2.9 L)洗滌。經由有凹槽濾紙 將MTBE層以重力過濾且使用Buchi燒瓶與設定在35°C下之 水浴使其濃縮以得到892.7 g(理論值之95.6%，未校正）之 [2-(7-氣-異喹啉基硫基）-乙基]-胺基甲酸第三丁酯。質 譜（LCMS)m/z=339.85 (M+H+)。 製備10 [2-(7-氯-異喹啉-5-磺醯基）-乙基]•胺基曱酸第三丁酯 藉由在設定在50°C下之水浴中旋轉Buchi燒瓶使[2-(7-氣-異喹啉-5-基硫基）-乙基]-胺基甲酸第三丁酯（700 g ; 1.00當 量；2.07莫耳）溶於異丙醇（ι〇·53 L)中。將對甲氧酚（12.29 g ; 98.01毫莫耳；12.29 g)、鎢酸鈉二水合物（31·4 g ; 95.20毫莫耳）、[2-(7-氣-異喹啉-5-基硫基）-乙基]_胺基甲酸 第三丁酯溶液、異丙醇（2·77 L)、水（3.38 L)及乙酸（123 120821.doc •24- 200812970 mL，2.15莫耳；128.90 g)裝至一配備冷凝器、氮氣入口、 頂置式攪拌、加料漏斗及熱電偶之22 l燒瓶中。添加水使 標色溶液變成微乳狀外觀。纟用熱水浴使反應物溫至 5〇°C。經！小時添加過氧化氫（6〇7 mL; 5_94莫耳；673 77 g)。在添加期間，藉由過氧化氫添加速率且當需要時藉由 將冷水或溫水添加至浴中將溫度維持在5〇_55它下。反應 物仍為乳狀棕色。在添加結束時反應溫度為54。〇且使用溫 水浴維持在53-57 C下。添加之後10分鐘iHpLC顯示在 2.89 min 處之 24·69% 峰、65·57%產物、5〇3%異構體、 4.33%雙取代物及在3·〇5 min處之〇18%峰。添加之後2小 日守之HPLC顯示0.06%亞石風、在3.046 min處之1.27%峰、 88.10%產物、4·61%異構體及5·79%雙取代物。將浴排乾且 用冰水置換以冷卻反應。當反應溫度達到27C時，藉由添 加9%亞硫酸氫鈉溶液（25〇 mL)中止過氧化物。未觀察到溫 度增加。過氧化物試片及澱粉碘化物試紙顯示無剩餘過氧 化物。經15-20分鐘添加水（5.64 L)。在添加期間，溫度自 18°C增加至24t。在環境溫度下將混合物攪拌隔夜。在冰 水浴中將漿料冷卻至低於rc且保持。對上清液隨時間之 定量HPLC顯示，在低於5它下，h5小時後完成結晶。過濾 固體且用水（2x2 L)洗滌。濕濾餅重量為831 g。在5(rc下 將固體真空乾燥。乾燥[2-(7-氯-異喹啉-5-磺醯基）_乙基]_ 胺基甲酸第三丁酯之重量為531 g(理論值之69.31%，未校 正）。質譜（LCMS)m/z=371.85 (M+H+)。 製備11 120821.doc -25- 200812970 (2-{7-[4-(四氫-哌喃-2-基氧基）-苯基]-異喹啉-5-磺醯 基}-乙基）-胺基曱酸第三丁酯 在氮淨化條件下，將PEPPSITM(Pyridine_Enhanced Precatalyst

Preparation Stabilization and Initiation ; 51·0 g ; 74.9 毫莫 耳）、[2-(7-氣-異喹啉-5-磺醯基）_乙基]-胺基甲酸第三丁酯 (1-3 83 1^;3.729 莫耳）、苯基_酸（895 §;4_03莫耳）、 〖2(：03(1.〇3 9 1^;7.518莫耳）及乙醇（15 1〇裝入60 1^反應器 中。最初將12 L乙醇添加至反應器中且剩餘3 L用於沖洗 f ； 其他裝料。將反應物溫至回流（78。〇。HPLC顯示，％小時 後完成反應。使用Huber⑧循環器使反應物冷卻至59°C。經 18分鐘將水（8.7 L)添加至反應物中。在水添加期間，溫度 自59 C降低至42°C。使用Huber®循環器，經1小時使反應 物自42°C冷卻至0°C。在0°C下將漿料保持1小時。使用聚丙 烯墊過濾固體且用1:1乙醇：水（3.7 L ;經冷卻）洗滌。在過 濾器上乾燥固體隔夜。隨後在60°C下真空乾燥固體22小 f 時。固體之乾重為2.171 kg。粗製（2-{7-[4-(四氫-u辰π南·2· 基氧基）-苯基]-異喹琳-5-績醯基}-乙基）-胺基甲酸第三丁 酯中之Pd含量為2196 mcg/g且藉由KF得知，固體含有6.9% 之水。將一氟甲烧（4 L)裝入50 L底部出口燒瓶中。將粗製 - (2-{7-[4-(四氫-哌喃-2-基氧基）-苯基]-異喹啉_5_磺醯基卜 乙基）-胺基甲酸第三丁酯裝至該50 L燒瓶中且用二氯甲烧 (1 L)沖洗。裝入Na2S〇4(1.9 kg)且用二氣甲烷（(M L)沖 洗。將Darco G-60®(3.8 kg)裝至20 L Btichi燒瓶中且於二 鼠甲烧（12 L)中製成衆料。將該聚料轉移至5〇 l燒航且用 120821.doc -26- 200812970 一虱甲烷（4.9 L)沖洗。在環境溫度下將混合物攪拌2小 時。使50 cm不錄鋼過濾器裝備有聚丙烯墊且用Hyfl〇 Super Cel®(l，7 kg)裝填。用二氯甲烷（2 L)沖洗Hyfl〇 8叩以 Cel墊。將50 L燒甑之内含物過濾於Hyfi〇 Super匸❻广墊 上。用二氯曱烷（22 L)沖洗燒瓶及濾餅。經由〇·45微米過 濾筒，將濾液裝至60 L反應器中。使反應器之内含物升溫 且藉由在低度真空（大約64〇 mm Hg)下蒸餾來使其濃縮。 在35-37°C下，經2小時收集大致33 L之餾出物。添加乙醇 (10 L)。將真空緩慢調節降至28〇 mm Hg同時繼續蒸館。 一旦達到真空，就增加溫度以維持蒸餾。一旦反應器中之 體積達到大約10 L後，就以維持反應器中之體積同時蒸館 出溶劑之速率添加乙醇（6.5 L)。一旦所有乙醇添加完後， 就停止蒸餾。最終體積為大約1〇 L。蒸餾結束時之溫度為 5 6°C。使在溶劑交換期間形成之漿料冷卻至2〇它且保持隔 夜。過濾漿料。用1:1乙醇：水（1.8 L)洗滌固體。濕遽餅重 里為1 ·878 kg。在50C下真空乾综固體以得到ι·23〇6 kg (產 率64·36%)(2-{7-[4-(四氳-哌喃-2-基氧基苯基 >異唾琳_5_ 磺醯基卜乙基）-胺基曱酸第三丁酯。質譜 (LCMS)m/z=513.62 (Μ+Η) 〇 實例 實例1 4 - [ 5 - (2 -胺基-乙烧績酿基）-異啥琳-7-基]-苯驗二鹽酸鹽 120821.doc -27- 200812970

Α·{2-[7-(4_曱氧基苯基）異喧啉基硫基]_乙基}-胺基曱 酸第三丁酯 向於丙酮（10 mL)中之7-(4-曱氧基-苯基）-異喹琳-5-硫醇 鈉鹽（0.29 g，1 mmol)中添加（2-溴-乙基）-胺基甲酸第三丁 酯（0.22 g，1 mmol)及碳酸鉀（〇·ΐ4 g，1 mm〇i)。在室溫下 將該混合物攪拌4 hr，隨後裝載於矽膠管柱上，且用己烷 中之65%乙酸乙酯溶離以得到標題化合物（〇·35 g，86%)。 質譜（LCMS)m/z=3 5 5.2 (M+H+)。 Β·{2-[7-(4·甲氧基-苯基異喹啉_5_磺醯基乙基卜胺基曱 酸第三丁酯 向{2-[7-(4-曱氧基-苯基）-異喹啉_5_基硫基]_乙基卜胺基 甲酸第三丁酯（0·35 g，0.85 mmol)於乙酸（8 mL)中之溶液 中添加水（2 mL)。在冰浴中將混合物冷卻至〇。〇。經5 min 之時期，逐滴添加ΚΜηΟ4(0·27 g，1.7 mmol)於水（2 mL)中 之溶液。在添加後，在0°C下將反應混合物攪拌3 〇 min。逐 滴添加H2〇2(30%於水中）直至棕色消失。將混合物在乙酸 乙6旨（5 0 mL)與飽和碳酸氫納（40 mL)之間分溶。分離有機 層，經硫酸鈉乾燥；過濾且濃縮。在矽膠管柱上用己烧中 之66%乙酸乙酯層析殘餘物而得到呈白色固體之標題化合 物（0.245 g)。質譜（LCMS)m/z=433.2 (M+H+)。 120821.doc -28- 200812970 C-4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉-7-基]-苯酚二鹽酸鹽 在-20°C下，向於二氣乙烷（10 mL)中之{2-[7-(4-曱氧基_ 苯基）-異嗜琳-5-石黃酿基]-乙基}-胺基甲酸第三丁 g旨（0.22 g，0.51 mmol)中添加 BBr3(1.0 Μ於二氯甲烷中，3.0 mL)。在添加後，在-20°C下將反應混合物攪拌2 hr，緩慢 溫至室溫且在室溫下授拌2 hr。添加甲醇（5 mL)以中止過 量BBr3。減壓蒸發溶劑，且經由逆相HPLC(具有0.01% TFA之0-100%乙腈：水）純化殘餘物以得到呈TFA鹽之4-[5-(2-胺基-乙烧績醯基）-異喹琳-7-基]-苯酚（0.18 g)。隨後， 藉由將2 mL飽和碳酸氫納水溶液添加至TFA鹽中且攪拌隔 夜以便使TFA鹽轉化成游離鹼來使〇·ΐ2 g TFA鹽轉化成二 鹽酸鹽。過濾游離鹼。首先用水，隨後用乙醚洗滌游離 鹼。乾燥固體。隨後，使固體懸浮於甲醇中。添加〇.2 mL 濃HC1水溶液且攪拌1 hr。減壓濃縮溶劑以得到二鹽酸鹽 (0.10 g)。質譜（LCMS)m/z=329.0 (M+H+)。 實例2 4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）_異喹啉·7_基卜苯酚 在〇°C下，經40 min，在有力地頂置式攪拌之情況下， 向於二氯甲烷（1 L)中之{2-[7-(4-甲氧基-苯基）_異喹啉 磺醯基]_乙基}-胺基曱酸第三丁酯（25〇〇 g，56 49 mm〇1) 中添加BBr3(l.〇 Μ於二氣甲烷中，200 mL，2〇〇 mm〇1)。 移除冷卻浴且在室溫下攪拌隔夜。冷卻至且經丨匕逐滴 添加甲醇（500 mL)。過濾所得漿料，用二氯甲烷（1〇〇 mL) 沖洗燒瓶且用沖洗液洗滌固體。用額外二氯甲烷（15〇 mL) 12082l.d〇( -29- 200812970 洗務固體且真空過濾乾燥。在攪拌下，在曱醇（400 mL)中 將固體製成漿料，隨後真空濃縮成薄糊狀物。添加額外甲 醇（400 mL)且在攪拌下將固體進一步製成漿料。將漿料真 空濃縮至乾燥，且將固體真空乾燥隔夜。將固體粉碎成粉 末且在甲醇（1 L)中製成漿料。添加Amberlyst® Α·21樹脂 (75 g)且稅拌直至粉末溶解。過濾樹脂，將經過濾樹脂在 甲醇（220 mL)中製成漿料且再次過濾樹脂，合併濾液。用 甲醇（100 mL)洗滌經過濾樹脂且將該洗滌液添加至濾液 中。將濾液與乙醇（200 mL)合併且將混合物真空濃縮至約 200 mL之體積以得到漿料。添加乙醇（4〇〇 mL)，將漿料溫 至50°C歷時約15 min，隨後真空濃縮至約2〇〇 mLi體積。 將漿料冷卻至室溫，過渡且用乙醇（2x15 mL)沖洗遽餅， ik後真空乾燥以得到呈棕褐色固體之標題化合物（ι〇·22 g，55%)。質譜（LCMS)m/z=329 〇 (M+H+)。 實例3 4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）·異喹啉_7_基]_苯酚 用冰/Ηβ浴將2-[7-(4·甲氧基_苯基）_異喹琳巧·確醯基]一 乙胺二鹽酸鹽（9·55(Μ m.99 _D於無水CH2Cl2(400 mL)中之水料冷卻至大約5 c，隨後藉由逐滴添加於 CH2Cl2中之U贿液（92.〇〇扯，％ 〇〇 _〇1)來處理該冷 漿料。完成BBg添加後，移除冷浴且使所得反應混合物 在室溫下於N2下攪拌隔夜。”醇中止所得反應混合物， 隨後真空濃縮以得到殘餘物。將所得殘餘物溶於甲醇(2〇〇 机）中且真空濃縮以得到殘餘物。重複上述步驟3次，隨後 120821.doc -30- 200812970 將殘餘物在Et2〇(300 mL)中製成漿料且用飽和NaHC〇3水 溶液處理直至達到大約pH 7。藉由真空過濾回收所得固 體’隨後溶於CHCh/MeOH之3/1溶液中。用Naci使遽液飽 和，隨後用CHCl3/MeOH之3/1溶液（每次2x4〇() mL)萃取。 經MgSCU乾燥合併之有機物，過濾，隨後真空濃縮以得到 固體/殘餘物。將固體/殘餘物在少量甲醇（2〇 mL)及過量己 烧中製成聚料’隨後藉由真空過據回收所得固體，用己烧 洗滌且真空過濾乾燥以得到（7.60 g)之淺黃色固體。將淺 汽色固體（7.6〇 g)在無水CH2Cl2(4〇〇 mL)中製成漿料且用 冰/H2〇浴冷卻至大約5°C，隨後藉由逐滴添加1〇 Μ ΒΒγ3κ CH2C12中之溶液（70.00 mL，70.00 mmol)進行處理。完成 BBn之添加後，移除冷浴且使所得反應混合物在室溫下於 A下攪拌4小時。再取一份含於CH2Cl2中之1〇 M BBq (70·00 mL，70.00 mmol)逐滴添加至該反應混合物中，隨 後使所得反應混合物在室溫下於A下攪拌隔夜。在大約 4〇°C下將反應物加熱大約1小時，隨後藉由逐滴添加另一 份含於 CH2C12 中之 1.0 M BBr3(23.00 mL，23·〇〇 mm〇i)來進 行處理。在大約40T：下將所得反應混合物加熱大約2小 時，隨後用MeOH中止反應且真空濃縮以得到殘餘物。將 所得殘餘物溶於曱醇（200 mL)中且真空濃縮以得到黃色殘 餘物。重複上述步驟3次。用飽和NaHC〇3處理黃色殘餘物 以將pH值調節至大約7，隨後藉由真空過濾回收所得固 體。使固體預吸附於矽膠上，隨後藉由管柱層析法（isc〇 330 g矽膠，純 CH2C12 至含於 CH2Cl2ti5% 2 n 120821.doc -31 - 200812970

MeOH至含於CH2C12中之10% 2 N NH4/MeOH)半純化以得 到固體。使固體預吸附於矽膠上，隨後藉由管柱層析法 (ISCO 330 g矽膠，純 CH2C12至含於 CH2C12 中之 5% 2 N NH4/MeOH至含於 CH2C12 中之 10% 2 N NH4/MeOH)再純化 以得到固體。使固體預吸附於矽膠上，隨後藉由管柱層析 法（ISCO 330 g石夕膠，純CH2C12至含於CH2C12中之5% 2 N w NH4/MeOH至含於 CH2C12 中之 10% 2 N NH4/MeOH 至含於 CH2C12中之150/〇 2 N NH4/MeOH)再純化以得到固體。使固 體預吸附於矽膠上，隨後藉由管柱層析法（ISC〇 33〇 g石夕 膠，於CHC13中之5% MeOH至含於CHC13中之1〇〇/0 MeOH至 含於CHC13中之20% MeOH至含於CHC13中之30% MeOH)再 純化以得到呈黃色固體之（6.85 g，產率90·8%)之標題化合 物：MS (ES +，m/z): 329.0 (M+1)。 實例4 4-[5-(2-胺基-乙烧石頁醯基）_異啥琳基]-苯紛單鹽酸 ； 鹽，未知水合物狀態 將4-[5-(2-胺基·乙烷磺醯基異喹啉-基]_苯酚（ι7ι ·8 mg)連同15 mL之95% Et0H一起置放於小瓶中。將小瓶置 放於設定至8(TC之加熱板上，同時攪拌該溶液以溶解化合 物。因為存在極少溶解甚至無溶解發生，所以添加丨莫耳 當量之HC1(0.52 mL之於水中之丨N HC1)以溶解固體且產生 壳黃色溶液。在HC1添加後不到〗分鐘，固體形成開始且隨 時間增加。在m：下大約2小時後，自熱源移除樣本°且使 其在RTT_隔夜。經由濾紙，使用真空過渡收集固體。 120821.doc -32· 200812970 在空氣乾燥隔夜後，回收107.8 mg之標題化合物（產率 63%)。X射線粉末繞射：角度，2Θ(強度％) : 11·8 (100〇); 16.6 (52·9); 8·2 (43.4)。 實例5 4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉-7-基]-苯酚單鹽酸鹽 半水合物 Α·製備種子材料。向4-[5-(2·胺基-乙烧石黃酿基）-異噎琳 基]-苯酚（0.2509 g，0.764 mmol)於乙醇（5 mL)中之聚料中 添加HC1水溶液（1 Μ，0.765 mL，0.765 mmol)。將所得混 合物加熱至回流隔夜。冷卻至室溫且真空過濾漿料。用乙 醇沖洗固體，且真空過濾乾燥以得到0.1842 g之黃色固 體。 B·4-[5-(2-胺基-乙烧續醯基）-異嗜琳_7_基]-苯紛單鹽酸鹽 半水合物 向4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）_異喹啉-7_基>苯酚（175 g，5.33 mmol)於乙醇（35 mL)中之漿料中添加HC1水溶液（1 Μ，5·3 3 mL，5.3 3 mmol)。將該混合物加熱至回流且添加 水（2.5 mL)以獲得溶液。將溶液冷卻至6〇它且用自上述a獲 付之約2 mg頁色固體接種以獲得漿料。冷卻至室溫且授拌 隔夜。真空過濾漿料且用乙醇沖洗濾餅，隨後真空過濾乾 燥以得到呈黃色固體之1.331 g(67%)之標題化合物。質譜 (LCMS)m/z=329.0 (M+H+)。卡爾費舍值（Kad Fischer): 3·〇〇%。X射線粉末繞射：角度，2Θ(強度％): 4 9 (47 3); 14.8 (55.8); 10.2 (45.5)。 120821.doc •33- 200812970 實例6 4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉-7_基卜苯酚二鹽酸鹽 將心[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉_7_基]_苯盼〇6 57 g，50.45 mm〇l)在甲醇（500 mL)中製成漿料。獨立地，藉 由將乙醯氯（12.60 mL，177.05 mmol)添加至曱醇（165 mL) 中來製備HC1於甲醇中之溶液。在室溫下，經min將hci 於甲醇中之溶液逐滴添加至4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）_異 啥琳-7-基]-苯酚於甲醇中之漿料中。攪拌3〇 min，隨後經 1小時逐滴添加乙酸乙酯（600 mL)。攪拌30 min，隨後過溏 固體且用乙酸乙酯洗滌（2\10〇1111〇。在50。(：下真空乾燥固 體，隨後在室溫下伴以緩慢投與氮氣進一步真空乾燥以得 到標題化合物（18.3 g，90%)。質譜（LCMS)m/z=329.0 (M+H+)。 實例7 4-[5-(2-胺基-乙烧績醯基）-異噎琳-7-基]-苯紛二鹽酸鹽 將乙醉（24 L)及（2-{7-[4-(四氫-旅喃-2 -基氧基）-苯基]_異 喹啉-5-磺醯基}-乙基）-胺基甲酸第三丁酯（2.652 kg; 5.173 莫耳）裝入60 L反應器中。用乙醇（2.6 L)沖洗（2-{7-[4-(四 氫-哌喃-2_基氧基）-苯基]-異喹啉-5-磺醯基}-乙基）-胺基甲 酸第三丁酯。用水（1·42 L)稀釋鹽酸溶液（31.9% ; 1780 g; 15·6莫耳）。將該HC1溶液裝至反應器中且用水（0.2 L)沖 洗。將反應物溫至70°C。黃色溶液在約30°C形成且黃色漿 料在接近70°C時再形成。在70°C下將反應物保持％ hr且隨 後溫至回流（78°C)。HPLC顯示在回流下1.5小時後完成反 120821.doc -34- 200812970 應。經13分鐘將水（14.5 L)添加至反應物中。將溫度降至 69°C。將反應物加熱返回至回流（8〇。〇且溶液形成。使反 應物冷卻至68°C且固體開始形成。在68°C下將反應物保持 % hr且隨後經ΐ·5小時冷卻至2°C。在1-2°C下，將漿料保持 1 hr。過濾固體且用乙醇（4·6 L)洗滌。濕濾餅重量為3 236 kg。在50°C下真空乾燥固體以得到2.106 kg(理論值之 101.4%)4-[5-(2-胺基-乙烧績醯基）-異唾淋_7_基]-苯紛二鹽 酸鹽。質譜（LCMS)m/z=402.31 (M+H)。 實例8 4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基異喹啉_7_基卜苯酚單鹽酸鹽 半水合物 使用於該實例之乙醇及氫氧化鈉溶液經由〇·22微米過濾 筒過濾。所用水為具有内毒素對照之純化水。 將乙醇（8 L)及4-[5-(2·胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉_7•基]_ 苯酚二鹽酸鹽（841.6 g ; 2.097莫耳）裝至一配備頂置式攪 拌、冷凝器、氮氣入口、加熱套、熱電偶及加料漏斗之22 L燒瓶中。用乙醇（3.28 L)沖洗4-[5·(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹琳-7-基]-苯齡二鹽酸鹽。使反應物溫至55c。經7分 鐘，將氫氧化鈉溶液（1100 mL ; 1.91 Ν ; 2· 10莫耳）添加至 反應物中，在此期間，溫度增加至62°C。將反應物加熱至 回流（78°C)且保持1 hr。立刻將水（ι·96 L)添加至反應物 中。溫度降低至68°C。將反應物加熱返回至回流（79°C)且 溶液形成。將Darco G_60®(43 8 g)添加至反應物中。在回 流下將反應物保持1.25小時。經由GFF紙將熱Darco G-60® 120821.doc -35- 200812970 漿料過濾至另一 22 L燒瓶中。得到淺黃色溶液。用熱乙醇 (2.5 L)沖洗原始燒瓶及Darco G-60®濾、餅。在沖洗期間， 固體開始在濾液中形成。使含有濾液及洗滌液之22 L燒瓶 配備頂置式攪拌器、氮氣入口及熱電偶。將漿料攪拌且使 其冷卻至環境溫度。過濾固體且用乙醇（2 L)洗滌。濕濾餅 重量為672 g。在50°C下真空乾燥固體以得到540 g(產率 68.9%)之4-[5_(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉-7-基]-苯酚單 鹽酸鹽半水合物。質譜（LCMS)m/z=329.3 (M+H+)。 所例示化合物為Akt活性之抑制劑。該等化合物之抑制 活性可藉由以下方法證明。

Aktl磷酸化檢定 該檢定藉由競爭性螢光偏振免疫檢定（FPIA)量測PKC α 假底物肽之Α粦酸化。該檢定藉由量測當填酸特異性抗體為 磷酸肽產物所置換時自經螢光標記之示蹤肽發射之偏振光 的強度變化來間接量測反應中所形成之磷酸肽產物之濃 度。用標準曲線校正來得到定量結果。 酶及底物 自Sf9昆蟲細胞純化之活性人類重組Aktl(全長）係得自 Upstate Biotechnology，Inc 〇 肽底物（M.W.1561)係購得。 標準檢定溶液 溶液（A) : 20% DMSO(二甲亞颯）或於20% DMSO或5 00 mM EDTA中之化合物；溶液（B):檢定緩衝液混合物：75 μΜ肽底物、38 mM MgCl2、pH 7·4 之 70 mM HEPES、 0·01% Triton X-100® 及 50 μΜ ATP(腺苷三磷酸）；溶液 120821.doc -36- 200812970 (C) : Akt激酶混合物：PH 7·4 之 70 mM HEPES、1 mM DTT(二硫蘇糖醇）、〇·〇1% Triton-X-100® 及 Aktl 酶。 FPIA之程序 首先將5 pL之溶液（A)與10 pL溶液（B)混合。藉由將10 pL溶液（C)添加至該混合物中來引發酶反應。（25 pL反應 混合物中之最終濃度或量：4% DMSO(最小受抑制之孔）或 於4% DMSO或100 mM EDTA(最大受抑制之孔）中之各種化 合物濃度；30 μΜ肽底物；15 mM MgCl2 ; pH 7·4 之 70 mM HEPES ； 20 μΜ ATP ； 0.4 mM DTT ； 0.01% Triton X-100®)。在黑色半區平底96孔微量滴定盤中執行反應。 在室溫下60 min後，藉由添加含有260 mM EDTA、3.4 nM螢光素示蹤劑及7.5 nM抗磷酸絲胺酸抗體之25 μι中止/ 偵測混合物來終止反應。在室溫下，在暗處將盤培育3 hr 以上，且隨後使用Tecan Ultra盤讀取器讀取螢光偏振（在 λβχ=485 nm、λβχ=530 nm處）。每孔之填酸化產物之濃度係 使用所製偫之肽競爭物稀釋液系列作為標準曲線，根據毫 偏振（mP)單位計算。本發明之所例示化合物以1 μΜ或更小 之ICw抑制Aktl磷酸化。實例1之化合物在該檢定中以45 +/-17 nM(n=3)之 IC5G 抑制 Aktl 磷酸化。

用於偵測磷酸GSK3b(pGSK3b)之基於細胞之ELISA (cELISA):

Akt在細胞中之標靶 將得自人類神經膠母細胞瘤之指數生長之U87MG細胞接 種至96孔板中且在37°C下用5% C02培育隔夜。10個濃度之 120821.doc -37- 200812970 實例1化合物係藉由1:2連續稀釋至培養基中，自4 mM儲備 液（於100% DMSO中）製備。將等體積之連續稀釋液之各者 直接添加至細胞中。2 hr後停止處理。在處理結束時，移 除培養基，且用冰冷磷酸鹽緩衝鹽水（PBS)將細胞洗滌一 次。根據供應商之程序將細胞固定於PREFER中，接著在 PBS/0.1% SDS 及 PBS/0.1% Triton X-100® 中清洗，隨後在 SEA Block阻斷緩衝液中隔夜培育。繼阻斷步驟之後用抗 pGSK3b/Ser9之兔抗體隔夜培育細胞，接著用山羊抗兔IgG 培育。按照供應商之程序’藉由SuperSignal ELISA Femto 偵測pGSK3b。實例1之化合物在該檢定中以2.04 +/-0.68(η=8)μΜ之 IC50抑制 pGSK3b。 活體内標乾抑制研究 藉由單一 IV注射之活體内標靶抑制： 將得自人類神經膠母細胞瘤之指數生長之U87MG細胞皮 下地植入裸小鼠之後側腹中。當腫瘤達到200-250 mm3之 大小時，在劑量-反應研究中或在時間-過程研究中，藉由 單一 IV注射向動物投與化合物。在各次治療結束時，用 C02使動物窒息。藉由外科切除術採集腫瘤，快速冷凍於 液氮中且在-80°C下儲存直至分析。自藉由心臟穿刺而自 心臟採集之血液製備血清且在-80°C下儲存直至分析。 樣本分析： 用乙醯亞硝酸鹽/曱醇自血清萃取Akt抑制劑且藉由 LC/MS/MS將其與内標物一起加以分析。使用Powergen 125均質器在2體積之含有25 mM THs(pH 7.5)、Roche完整 120821.doc -38- 200812970 蛋白酶抑制劑及1 mM飢酸鹽之溶解緩衝液中將腫瘤均質 化，隨後相繼地通過18號針及23號針。在將溶胞產物在 20,〇〇〇Xg下離心3〇分鐘後，自上清液部分收集可溶性細胞 質萃取物。用BC A套組測定細胞質萃取物中之蛋白質濃 度。用ELISA套組分析可溶性萃取物中之鱗酸-GSK3b (pGSK3b) 〇 對該檢定中之神經膠母細胞瘤而言，實例1之化合物在 使用25 mg/kg之單一 IV注射i小時時，抑制pGSK3b 76%。 活體内腫瘤生長抑制研究 將得自人類神經膠母細胞瘤之指數生長之u87Mg細胞或 得自人類非小細胞肺癌之H1155細胞皮下地植入裸小鼠之 後側腹中。在腫瘤細胞植入後3天，執行顯微手術以將套 管插入導管用於經由頸靜脈連續輸液。隨後，在第二天， 以4〇 ML/hr將以各種濃度調配於D5 W(於水中之右旋糖5%) 中之實例1輸注人小鼠中歷時4天。每週量測腫瘤兩次直至 研究終止’通常在初始植入後第24天。腫瘤生長抑制係藉 由將治療組之平均腫瘤體積除以媒劑治療組之平均腫瘤體 積來計算。 對神、、、工膠母細胞瘤而言，當在檢定結束時量測時，使用 27 mg/kg/天之連續輸液，實例1化合物抑制腫瘤生長 50%。 對非小細胞肺癌而言，當在檢定結束時量測時，使用24 mg/kg/天之連續輸液，實例1化合物抑制腫瘤生長63%。 醫藥組合物研究 120821.doc -39- 200812970 4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉-7-基]-苯酚單鹽酸鹽 半水合物之醫藥組合物包括非還原糖及pH調節劑。可溶性 研究展不’甘露醉看來似乎不影響4-[5-(2 -胺基-乙烧續酿 基）-異啥琳-7-基]-苯紛單鹽酸鹽半水合物之可溶性。然 而，半水合物之可溶性為pH值依賴性的且在pH值$3.91時 為>19 mg/mL。又，沈殿發生之速率為pH值依賴性的。 表1 :初始溶液pH值對沈澱速率（ppt)之影響。所有溶液 係最初以大致15 mg 4-[5-(2 -胺基-乙烧績酿基）-異喧琳-7· 基]-苯酚單鹽酸鹽半水合物/mL來製備且在室溫下儲存。 介質 pH值(初始） 沈澱(ppt) 0.05 NHC1/3%甘露醇 1.68 無ppt直至96小時 0.01 NHC1/3% 甘露醇 3.19 無ppt直至96小時 0.005 NHC1/3%甘露醇 3.58 48 hr後ppt 0.0025 NHC1/3%甘露醇 3.91 36 hr 後 ppt 0.001 NHC1/3% 甘露醇 4.20 24 hr後ppt 再溶解沈澱物之LC/MS分析顯示，其為氨損失後自兩種 4_[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉-7-基]-苯酚分子（4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉-7-基]-苯酚之質譜：（LCMS) m/z=329.1 (M+H+))形成之”二聚體類”分子（質譜（LCMS) m/z=640.2 (M+H+))。另外，沈澱看來似乎並不歸因於向可 溶性較低之固態形式之改變。 120821.doc 40·

Claims (1)

1. 200812970 十、申請專利範圍： 1· 一種化合物，其為4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異喹啉-7- 基l·苯酚或其醫藥學上可接受之鹽或該化合物或其鹽之 水合物。 2·如請求項1之化合物，其為4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）·異 喧琳-7-基]-苯紛二鹽酸鹽。 3·如請求項1之化合物，其為4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）-異 唾啉-7-基]-苯酚單鹽酸鹽半水合物。 4·如請求項1至3中任一項之化合物，其係用作藥劑。 5 · 一種如請求項1至3中任一項之化合物的用途，其用於製 造供治療以下疾病用之藥劑··多發性骨髓瘤、非小細胞 肺癌、神經膠母細胞瘤、神經母細胞瘤、黑素瘤或前列 腺乳房、印巢、原發性胃、腸類型、子宮内膜、甲狀 腺、胰腺、肺或膀胱之贅瘤。 6· 種如请求項1至3中任一項之化合物的用途，其用於製 造供治療以下疾病用之藥劑：多發性骨髓瘤、非小細胞 肺癌、神經膠母細胞瘤或前列腺、乳房或卵巢之贅瘤。 7· 一種如請求項1至3中任一項之化合物的用途，其用於製 造供治療非小細胞肺癌或神經膠母細胞瘤用之藥劑。 種如明求項1至3中任一項之化合物的用途，其用於製 造供治療以下疾病用之藥劑：C型肝炎、風疹、人類免 疫缺乏症病毒（mv)、b型肝炎或人類巨細胞病毒 (HCMV) 〇 9’ -種醫藥組合物’其包括如請求項⑴中任一項之化合 120821.doc 200812970 物及醫藥學上可控 ίο. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 又载背丨、稀釋劑或賦形劑。 “凍乾知醫藥組合物，其包括如請求項1至3中任〜 亦、:物及西藥學上可接受之載劑、稀釋劑或職步 W〜、中當用水性稀釋劑稀釋時，該組合物 ^ 4·2且大於2.〇。 』於 士明求項1G之冷;東乾燥醫藥組合物，其中該阳值小於 3.2且大於2,〇。 、 如請求項u之冷;東乾燥醫藥組合物，其中該ρΗ值小於 2.8且大於2.0。 種商藥組合物，其包括含於溶液中之如請求項丨至3中 任一項之化合物及醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦 形劑，其中該組合物之pH值小於42且大於2.〇。 如請求項13之醫藥組合物，其中該組合物之該pH值小於 3.2且大於2.〇。 如睛求項14之醫藥組合物，其中該組合物之該pH值小於 2.8且大於2.0。 一種呈結晶形式之4-[5-(2-胺基-乙烷磺醯基）_異喹啉_7_ 基]-笨盼單鹽酸鹽半水合物，其具有在20=49、14.8及 10.2處具有強峰之X射線粉末繞射圖。 120821.doc 200812970 七、指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：（無） (二) 本代表圖之元件符號簡單說明： 八、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式： (無）

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