EA011302B1 - Антитела, которые связывают рецептор интерлейкина-4 - Google Patents

Антитела, которые связывают рецептор интерлейкина-4 Download PDF

Info

Publication number
EA011302B1
EA011302B1 EA200600869A EA200600869A EA011302B1 EA 011302 B1 EA011302 B1 EA 011302B1 EA 200600869 A EA200600869 A EA 200600869A EA 200600869 A EA200600869 A EA 200600869A EA 011302 B1 EA011302 B1 EA 011302B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
residues
group
antibody
sequence
antibodies
Prior art date
Application number
EA200600869A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200600869A1 (ru
Inventor
Пол Дж. Картер
Хонгсинг Жоу
Original Assignee
Иммунекс Корпорейшн
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Иммунекс Корпорейшн filed Critical Иммунекс Корпорейшн
Publication of EA200600869A1 publication Critical patent/EA200600869A1/ru
Publication of EA011302B1 publication Critical patent/EA011302B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/14—Prodigestives, e.g. acids, enzymes, appetite stimulants, antidyspeptics, tonics, antiflatulents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/16—Central respiratory analeptics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A61P31/06—Antibacterial agents for tuberculosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Данное изобретение относится к антителам, которые связываются с IL-4 рецептором, фрагментам, мутеинам и дериватам таких антител; нуклеиновым кислотам, кодирующим такие антитела, фрагменты, мутеины и дериваты; способам получения и применения таких антител, фрагментов, мутеинов, дериватов; нуклеиновым кислотам. Способы лечения медицинских состояний, вызванных интерлейкином-4, включают введение антитела, связывающего IL-4 рецептор, или фрагмента, мутеина или деривата антитела, связывающего IL-4 рецептор, больного, пораженного таким состоянием. Отдельные антитела, предлагаемые в данном изобретении, включают человеческие моноклональные антитела. Некоторые антитела ингибируют как вызванные IL-4, так и вызванные IL-13 биологические активности.

Description

Перекрестная ссылка к родственной заявке
Данная заявка заявляет право на преимущество, вытекающее из предварительной американской патентной заявки И8 ρτονίδίοηαΐ аррБса!юп № 60/518166, зарегистрированной 7 ноября 2003 г.
Предпосылки изобретения
Интерлейкин-4 (ш!ет1еикш-4. ГО-4). ранее известный как фактор стимуляции Β-клеток или В8Е-1 (В се11 811ти1а11пд Гас!ог). первоначально характеризовался его способностью стимулировать пролиферацию В-клеток в ответ на низкие концентрации антител. направленных к поверхности иммуноглобулина. Было показано. что 1Ь-4 обладает значительно более широким спектром биологических активностей. включая рост дополнительной стимуляции Т-клеток. тучных клеток. гранулоцитов. мегакариоцитов и эритроцитов. Кроме того. 1Ь-4 стимулирует пролиферацию нескольких 1Ь-2- и 1Ь-3-зависимых линий клеток. вызывает экспрессию главных комплексных молекул тканевой совместимости класса II на покоящихся Вклетках и усиливает секрецию изотипов 1дЕ и 1§С 1 стимулированием В-клеток. 1Ь-4 ассоциируется с иммунным ответом ТН2-типа. причем один из цитокинов секретируется ТН2 клетками.
Были идентифицированы и охарактеризованы мышиный или крысиный и человеческий 1Ь-4. включая клонирование 1Ь-4 кДНК-т и определение нуклеотидных последовательностей и кодируемых аминокислотных последовательностей. См. Уоко1а е! а1.. 1986. Ргос. №111. Асай. 8с1. И8А 83:5894; Кота е! а1.. 1986. №Пиге 319:640; ОтабЛеш е! а1.. 1986. 1. Ехр. Мей. 163:1405; и И8 Ра!еп! 5017691.
1Ь-4 связывается с отдельными рецепторами на поверхности клетки. что приводит к трансдукции биологического сигнала клеткам. как. например. различным иммунным эффекторным клеткам. 1Ь-4 рецепторы описываются. и информация по ДНК и аминокислотной последовательности присутствует в работах Мок1еу е! а1.. 1989. Се11 59:335-48 (мышиный или крысиный ГО-4К); 1йхегйа е! а1.. 1990. 1. Ехр. Мей. 171:861-73 (человеческий 1Б-4К); и И8 Ра!еп! 5599905. 1Ь-4 рецептор. описанный в данных публикациях. иногда называется 1Б-4К альфа.
О других протеинах сообщалось. что они ассоциировались с 1Ь-4К альфа на некоторых типах клеток и что они являлись компонентами мультисубъединичных комплексов 1Ь-4 рецептора. Одна из таких субъединиц представляет 1Ь-2К гамма. также известная как ГО-2К гамма с. См. обсуждение ГО-4К комплексов в публикации 8а!о е! а1.. 1994. Сштеп! Оршюп ίη Се11 Вю1оду. 6:174-79. Также сообщалось. что 1Б-4К альфа является компонентом некоторых мультисубъединичных комплексов рецептора ГО-13. См. 2ита№к1 е! а1.. 1995. 1. Вю1. Сйет. 270:13869; йе Упе5. 1998. 1. А11егду Сйп. 1ттипо1. 102:165; и Са11агй е! а1.. 1996. 1ттипо1оду Тойау. 17:108.
1Ь-4 вовлекались в ряд расстройств. примерами которых являются аллергия и астма.
Сущность изобретения
Предлагаются способы и композиции. относящиеся к новым антагонистам ГО-4К, в особенности к антителам или дериватам антител. которые связывают 1Ь-4К альфа.
Один из аспектов настоящего изобретения предлагает антитело. в котором вариабельная область легкой цепи включает аминокислотную последовательность. которая отличается от 8ЕО ГО N0:4 только по меньшей мере одной заменой аминокислоты. выбираемой из группы. состоящей из 828Т. 830Ν. 8300. 831Ν. 832Ό. 832Ν. А52Т. 854Υ. Т57Р. Т578. Ο93Ό. 894Н. 894В. Р96А. Р97С и Т99М и. возможно. одной или несколькими заменами аминокислот. выбираемых из группы. состоящей из ЕГО. Ь4М. 87Т. С9А. К40К. Ε50Υ. 868Е. 877Т. У861. К105К. У106Ь и Е107И; и/или вариабельная область тяжелой цепи включает аминокислотную последовательность. которая отличается от 8ЕО ГО N0:16 только по меньшей мере одной заменой аминокислоты. выбираемой из группы. состоящей из N588. Υ101V. Ε102Υ. И103Т. Ό103Ν. И103Р. Υ104Η. Υ104Ν. Υ104ν и Υ104Κ и. возможно. одной или несколькими заменами аминокислот. выбираемых из группы. состоящей из 06Е. Н130. С24А. К888 и М90Т. где антитело связывается с 1Ь-4 рецептором альфа. В одном варианте легкая цепь СИРТ включает последовательность. выбираемую из группы. состоящей из остатков 24-35 8Е0 ГО Ν0:6; остатков 24-35 8Е0 ГО Ν0:8; остатков 24-35 8Е0 ГО Ν0:10; остатков 24-35 8Е0 ГО Ν0:12 и остатков 24-35 8Е0 ГО Ν0:14; легкая цепь СЭК2 включает последовательность. выбираемую из группы. состоящей из остатков 51-57 8Е0 ГО Ν0:4; остатков 5157 8Е0 ГО Ν0:6; остатков 51-57 8Е0 ГО Ν0:10 и остатков 51-57 8Е0 ГО Ν0:12; легкая цепь СИКЗ включает последовательность. выбираемую из группы. состоящей из остатков 90-99 8Е0 ГО Ν0:4; остатков 90-99 8Е0 ГО Ν0:6; остатков 90-99 8Е0 ГО Ν0:8 и остатков 90-99 8Е0 ГО Ν0:14; тяжелая цепь СИРТ включает последовательность остатков 31-35 8Е0 ГО Ν0:16; тяжелая цепь СЭК2 включает последовательность. выбираемую из группы. состоящей из остатков 50-65 8Е0 ГО Ν0:16 и остатков 50-65 8Е0 ГО Ν0:18; и/или тяжелая цепь СЭК3 включает последовательность. выбираемую из группы. состоящей из остатков 98-104 8Е0 ГО Ν0:16; остатков 98-104 8ЕО ГО Ν0:18; остатков 98-104 8ЕО ГО Ν0:20; остатков 98-104 8ЕО ГО Ν0:22; остатков 98-104 8ЕО ГО Ν0:24; остатков 98-104 8ЕО ГО Ν0:26; остатков 98-104 8ЕО ГО Ν0:30 и остатков 98-104 8ЕО ГО Ν0:34. В другом варианте легкая цепь ЕК1 включает последовательность. выбираемую из группы. состоящей из остатков 1-23 8ЕО ГО Ν0:4; остатков 1-23 8ЕО ГО Ν0:10; остатков 1-23 8ЕО ГО Ν0:12 и остатков 1-23 8ЕО ГО Ν0:14; легкая цепь ЕК2 включает последовательность. выбираемую из группы. состоящей из остатков 36-50 8ЕО ГО Ν0:4 и остатков 36-50 8ЕО ГО Ν0:14; легкая цепь ЕК3 включает последовательность. выбираемую из группы. состоящей из остатков 58-89 8ЕО ГО Ν0:4; остатков 58-89 8ЕО ГО Ν0:10 и остатков 58-89 8ЕО ГО Ν0:12; легкая цепь ЕК4
- 1 011302 включает последовательность, выбираемую из группы, состоящей из остатков 100-109 8ЕО ГО N0:4; остатков 100-109 8Е0 ГО N0:8 и остатков 100-109 8Е0 ГО N0:12; тяжелая цепь ЕЕ1 включает последовательность, выбираемую из группы, состоящей из остатков 1-30 8Е0 ГО N0:16 и остатков 1-30 8Е0 ГО N0:42; тяжелая цепь ЕВ2 включает последовательность остатков 1-30 8Е0 ГО N0:16; тяжелая цепь ЕЕ3 включает последовательность, выбираемую из группы, состоящей из остатков 66-97 8Е0 ГО N0:16; остатков 66-97 8Е0 ГО N0:18 и остатков 66-97 8Е0 ГО N0:42; и/или тяжелая цепь ЕЕ4 включает последовательность остатков 105-115 8Е0 ГО N0:16.
В другом варианте предлагается антитело, включающее вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична последовательности, которую выбирают из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0:4, 6, 8, 10, 12 и 14; при условии, что вариабельная область легкой цепи не содержит последовательность 8Е0 ГО N0:4; и/или вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична последовательности, которую выбирают из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0:16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 и 62; при условии, что вариабельная область тяжелой цепи не содержит последовательность 8Е0 ГО N0:16, где антитело связывается с ГО-4 рецептором альфа. В одном варианте, вариабельная область легкой цепи включает последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0:4, 6, 8, 10, 12 и 14; и/или вариабельная область тяжелой цепи включает последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0:16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 и 62. В другом варианте, вариабельная область легкой цепи включает последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0:4, 6, 8, 10, 12 и 14; и/или вариабельная область тяжелой цепи включает последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0:16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 и 62. В другом варианте вариабельная область легкой цепи включает последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0:4, 6, 8, 10, 12 и 14; и/или вариабельная область тяжелой цепи включает последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕО ГО N0:16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 и 62. В другом варианте вариабельная область легкой цепи включает последовательность, выбираемую из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0: 6, 8, 10, 12 и 14; и/или вариабельная область тяжелой цепи включает последовательность, выбираемую из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0:16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 и 62.
В другом варианте предлагается антитело, в котором вариабельная область легкой цепи включает последовательность по меньшей мере из 15 соседних аминокислот с последовательностью, выбираемой из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0: 4, 6, 8, 10, 12 и 14; при условии, что вариабельная область легкой цепи не включает последовательность 8Е0 ГО N0: 4; и/или где вариабельная область тяжелой цепи включает последовательность по меньшей мере из 15 соседних аминокислот с последовательностью, выбираемой из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0:16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 и 62; при условии, что вариабельная область тяжелой цепи не включает последовательность 8Е0 ГО N0: 16, где антитело связывается с ГО-4 рецептором альфа. В одном варианте, вариабельная область легкой цепи включает последовательность по меньшей мере из 20 соседних аминокислот с последовательностью, выбираемой из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0: 4, 6, 8, 10, 12 и 14; и/или вариабельная область тяжелой цепи включает последовательность по меньшей мере из 20 соседних аминокислот с последовательностью, выбираемой из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0:16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 и 62. В другом варианте вариабельная область легкой цепи включает последовательность по меньшей мере из 25 соседних аминокислот с последовательностью, выбираемой из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0: 4, 6, 8, 10, 12 и 14; и/или вариабельная область тяжелой цепи включает последовательность по меньшей мере из 25 соседних аминокислот с последовательностью, выбираемой из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0:16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 и 62. В другом варианте вариабельная область легкой цепи включает последовательность по меньшей мере из 35 соседних аминокислот с последовательностью, выбираемой из группы, состоящей из: 8Е0 ГО N0: 4, 6, 8, 10, 12 и 14; и/или вариабельная область тяжелой цепи включает последовательность по меньшей мере из 35 соседних аминокислот с последовательностью, выбираемой из группы, состоящей из: 8Е0 ГО N0:16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 и 62. В другом варианте вариабельная область легкой цепи включает последовательность по меньшей мере из 50 соседних аминокислот с последовательностью, выбираемой из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0: 4, 6, 8, 10, 12 и 14; и/или вариабельная область тяжелой цепи включает последовательность по меньшей мере из 50 соседних аминокислот с последовательностью, выбираемой из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0:16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 и 62. В другом варианте вариабельная область легкой цепи включает последовательность по меньшей мере из 75 соседних аминокислот с последовательностью, выбираемой из группы,
- 2 011302 состоящей из 8ЕЦ ГО N0: 4, 6, 8, 10, 12 и 14; и/или вариабельная область тяжелой цепи включает последовательность по крайней мере из 75 соседних аминокислот с последовательностью, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0:16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 и 62. В другом варианте вариабельная область легкой цепи включает последовательность по меньшей мере из 100 соседних аминокислот с последовательностью, выбираемой из группы, состоящей из: 8ЕЦ ГО N0: 4, 6, 8, 10, 12 и 14; и/или вариабельная область тяжелой цепи включает последовательность по меньшей мере из 100 соседних аминокислот с последовательностью, выбираемой из группы, состоящей из: 8ЕЦ ГО N0:16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 и 62.
В другом варианте предлагается антитело, включающее вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 80% идентична нуклеотидной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0: 3, 5, 7, 9, 11 и 13; и/или вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 80% идентична нуклеотидной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0:15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59 и 61; при условии, что антитело не включает как вариабельную область легкой цепи с последовательностью 8ЕЦ ГО N0:4, так и вариабельную область тяжелой цепи с последовательностью 8ЕЦ ГО N0:16; и где антитело связывается с 1Ь-4 рецептором альфа. В другом варианте, вариабельная область легкой цепи включает аминокислотную последовательность, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 85% идентична нуклеотидной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0: 3, 5, 7, 9, 11 и 13; и/или вариабельная область тяжелой цепи включает аминокислотную последовательность, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 85% идентична нуклеотидной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0:15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59 и 61. В другом варианте вариабельная область легкой цепи включает аминокислотную последовательность, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 90% идентична нуклеотидной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0: 3, 5, 7, 9, 11 и 13; и/или вариабельная область тяжелой цепи включает аминокислотную последовательность, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 90% идентична нуклеотидной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0:15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59 и 61. В другом варианте вариабельная область легкой цепи включает аминокислотную последовательность, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична нуклеотидной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0: 3, 5, 7, 9, 11 и 13; и/или вариабельная область тяжелой цепи включает аминокислотную последовательность, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична нуклеотидной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0:15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59 и 61. В другом варианте вариабельная область легкой цепи включает аминокислотную последовательность, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 98% идентична нуклеотидной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0: 3, 5, 7, 9, 11 и 13; и/или вариабельная область тяжелой цепи включает аминокислотную последовательность, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 98% идентична нуклеотидной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0:15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59 и 61. В другом варианте вариабельная область легкой цепи включает аминокислотную последовательность, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0: 3, 5, 7, 9, 11 и 13; и/или вариабельная область тяжелой цепи включает аминокислотную последовательность, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0: 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 и 62.
В другом варианте предлагается антитело, включающее вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, которая гибридизируется в умеренно точных (жестких) условиях с комплементом нуклеотидной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0: 3, 5, 7, 9, 11 и 13; и/или вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, которая гибридизируется в умеренно точных (жестких) условиях с комплементом нуклеотидной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0:15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59 и 61; при условии, что антитело не включает как вариабельную область легкой цепи с последовательностью 8ЕЦ ГО N0:4, так и вариабельную область тяжелой цепи с последовательностью 8ЕЦ ГО N0:16; и где антитело связывается с 1Ь-4 рецептором альфа. В одном варианте, вариабельная область легкой цепи включает аминокислотную последовательность, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, которая гибридизируется
- 3 011302 при точных (жестких) условиях с комплементом нуклеотидной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕО ΙΌ N0: 3, 5, 7, 9, 11 и 13; и/или вариабельная область тяжелой цепи включает аминокислотную последовательность, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, которая гибридизируется при точных (жестких) условиях с комплементом нуклеотидной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8Е0 ΙΌ N0: 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51,53, 55, 57, 59 и 61.
В другом варианте предлагается изолированное антитело, в котором вариабельная область легкой цепи антитела включает аминокислотную последовательность, выбираемую из группы, состоящей из 8Е0 ΙΌ N0: 6, 8, 10, 12 и 14; и данное антитело связывается с 1Ь-4 рецептором альфа.
В другом варианте предлагается изолированное антитело, в котором вариабельная область тяжелой цепи антитела включает аминокислотную последовательность, выбираемую из группы, состоящей из 8ЕО ΙΌ N0: 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 и 62; и данное антитело связывается с 1Ь-4 рецептором альфа.
В другом варианте предлагается антитело, выбираемое из группы, состоящей из Ь2Н1, Ь3Н1, Ь4Н1, Ь5Н1, Ь1Н2, Ь1Н3, Ь1Н4, Ь1Н5, Ь1Н6, Ь1Н7, Ь1Н8, Ь1Н9, Б1Н10, Б1Н11, Ь2Н4, Ь2Н12, Ь2Н13, Ь2Н14, Ь6Н1, Ь2Н2, Ь2Н3, Ь2Н6, Ь2Н7, Ь2Н8, Ь2Н9, Ь2Н10 и Б2Н11.
В другом варианте предлагается человеческое антитело, гуманизированное антитело или химерное антитело.
В другом варианте предлагается моноклональное антитело.
В другом варианте предлагается антитело, выбираемое из группы, состоящей из ΙβΌ. 1дЕ, 1дМ, 1дС1, 1дС2, 1дС3, 1дС4 и 1дС4 по меньшей мере с одной мутацией в шарнирной области, которая облегчает тенденцию к образованию дисульфидной связи внутри Н-цепи антитела.
В другом варианте предлагается изолированный полипептид, включающий 1Ь-4 рецептор, связывающую часть антитела, описанного в изобретении. В одном варианте, данный полипептид содержит ЕаЬ, Е(аЬ')2, 8сЕу, диатело, триатело и тетратело.
В другом варианте предлагается изолированная нуклеиновая кислота, включающая нуклеотидную последовательность, кодирующую легкую цепь антитела по предлагаемому изобретению, тяжелую цепь антитела по предлагаемому изобретению или полипептид по предлагаемому изобретению.
В другом варианте предлагается вектор, включающий изолированную нуклеиновую кислоту, описанную в изобретении. В другом варианте данный вектор является экспрессирующим вектором.
В другом варианте предлагается изолированная клетка, включающая нуклеиновую кислоту, описанную в изобретении. В одном варианте данная клетка является гибридомой. В другом варианте данная клетка является трансгенной клеткой.
В другом варианте предлагается клетка, включающая антитело, описанное в изобретении. В одном варианте данная клетка является гибридомой. В другом варианте данная клетка является трансгенной клеткой.
В другом варианте предлагается клетка, включающая полипептид, описанный в изобретении. В одном варианте данная клетка является трансгенной клеткой.
В другом варианте предлагается способ получения антитела, описанного в изобретении, включающий инкубирование клетки, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую легкую цепь данного антитела, и нуклеиновую кислоту, кодирующую тяжелую цепь данного антитела, в условиях, которые позволяют клетке экспрессировать легкую цепь и тяжелую цепь и которые позволяют легкой цепи и тяжелой цепи входить в антитело, и изолирование антитела из клетки. В одном варианте данная клетка является гибридомой. В другом варианте клетка является трансгенной клеткой.
В другом варианте предлагается способ ингибирования 1Ь-4 рецептора, включающий контактирование клетки, экспрессирующей 1Ь-4 рецептор альфа, с антителом, описанным в изобретении, или полипептидом, описанным в изобретении, в условиях, которые позволяют антителу или полипептиду связываться с 1Ь-4 рецептором альфа. В одном варианте данная клетка является человеческой клеткой. В другом варианте человеческая клетка находится в человеке.
В другом варианте предлагается способ лечения состояния у субъекта, включающий введение данному субъекту эффективного количества антитела, описанного в изобретении, или полипептида, описанного в изобретении, для лечения данного состояния. В одном варианте данное состояние является воспалительным или раковым состоянием. В другом варианте воспалительное или раковое состояние является иммунологическим состоянием. В другом варианте состояние представляет собой астму, септический артрит, герпетиформный дерматит, хроническую идиопатическую крапивницу, неспецифический язвенный колит, склеродермию, гипертрофическое рубцевание, болезнь Уиппла, доброкачественную гиперплазию простаты, легочное расстройство, в котором играет роль рецептор 1Ь-4, состояние, в котором играет роль опосредованное рецептором 1Ь-4 разрушение этителиального барьера, нарушение пищеварительной системы, в которой играет роль рецептор 1Ь-4, аллергическую реакцию к лекарственным препаратам, болезнь Кавасаки, болезнь дрепаноцита, синдром Черджа (Черга)-Стросса, болезнь Грейвса, преэклампсию, синдром Шенгрена, аутоиммунный лимфопролиферативный синдром, аутоиммунную гемолитическую анемию, пищевод Барретта, аутоиммунный увеит, туберкулез, муковисцидоз, аллергический
- 4 011302 бронхо-легочный микоз, хроническую легочную болезнь непроходимости; пневмопатию и фиброз, вызванные блеомицином; пневмосклероз, вызванный радиацией; легочно-альвеолярный протеиноз, респираторный дистресс-синдром у взрослых, саркоидоз, гипер 1дЕ синдром, идиопатический гиперэозинофильный синдром; аутоаллергическую болезнь, вызывающую образование пузырей, обыкновенную пузырчатку, буллезный пемфигоид, тяжелую миастению, синдром хронического утомления или нефроз.
В другом варианте предлагается фармацевтическая композиция, включающая антитело, описанное в изобретении, или полипептид, описанный в изобретении, и наполнитель, разбавитель или буфер.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1А-В представлена нуклеотидная последовательность кодирующей области человеческого 1Ь-4 рецептора альфа кДНК. Также представлена аминокислотная последовательность, кодируемая кДНК. кДНК клон изолировался из библиотеки кДНК, полученной из человеческой Т-клеточной линии Т22. Кодируемый протеин включает (от Ν- до С-конца) Т-концевой сигнальный пептид, за которым следует внеклеточный домен, трансмембранный участок (подчеркнутый) и цитоплазмический домен, как к тому же обсуждалось в заявке - РСТ риЫюайоп АО 01/92340 А3. Нуклеотидная последовательность и аминокислотные последовательности, приведенные на фиг. 1А-1В, также присутствуют в 8ЕО ГО N0: 1 и 2 соответственно.
На фиг. 2А-2Г представлены полинуклеотидные последовательности, кодирующие вариабельные участки легкой цепи Ь1 (5ЕО ГО N0: 3), Ь2 (8ЕЦ ΙΌ N0: 5), Ь3 (8Ер ГО N0: 7), Ь4 (5ЕО ГО N0: 9), Ь5 (8Е0 ГО N0: 11) и Ьб (8Е0 ΙΌ N0: 13), и полинуклеотидные последовательности, кодирующие вариабельные участки тяжелой цепи Н1 (5ЕО ГО N0: 15), Н2 (5ЕО ГО N0: 17), Н3 (5ЕО ГО N0: 19), Н4 (5ЕО ГО N0: 21), Н5 (5ЕО ΙΌ N0: 23), Нб (5ЕО ГО N0: 25), Н7 (5ЕО ГО N0: 27), Н8 (5ЕО ГО N0: 29), Н9 (5ЕО ГО N0: 31), Н10 (5ЕО ГО N0: 33), Н11 (5ЕО ГО N0: 35), Н12 (5ЕО ГО N0: 37), Н13 (5ЕО ГО N0: 39), Н14 (5ЕО ΙΌ N0: 41), Н15 (5ЕО ГО N0: 43), Н1б (5ЕО ΙΌ N0: 45), Н17 (5ЕО ГО N0: 47), Н18 (5ЕО ΙΌ N0: 49), Н19 (5ЕО ГО N0: 51), Н20 (5ЕО ГО N0: 53), Н21 (5ЕО ГО N0: 55), Н22 (5ЕО ГО N0: 57), Н23 (5ЕО ГО N0: 59) и Н24 (8Е0 ГО N0: б1). Последовательности приводятся, используя сокращения нуклеотида из одной буквы. Последовательности, соответствующие областям СЭКЕ ί.ΌΚ2 и СОК3, приводятся жирным шрифтом для каждой последовательности и подчеркивают в Ь1 и Н1. Последовательности, соответствующие ЕК1, ЕК2, ЕК3 и ЕК4, приводятся в обыкновенном виде.
На фиг. 3 присутствуют аминокислотные последовательности вариабельных участков легкой цепи Ь1 №ЕО ГО N0: 4), Ь2 (5ЕО ΙΌ N0: б), Ь3 (5ЕО ГО N0: 8), Ь4 (5ЕО ГО N0: 10), Ь5 (5ЕО ГО N0: 12) и Ьб (8Е0 ГО N0: 14), и аминокислотные последовательности вариабельных участков тяжелой цепи Н1 (8Е0 ГО N0: 1б), Н2 (5ЕО ΙΌ N0: 18), Н3 (5ЕО ГО N0: 20), Н4 (5ЕО ГО N0: 22), Н5 (5ЕО ГО N0: 24), Нб (5ЕО ГО N0: 2б), Н7 (5ЕО ГО N0: 28), Н8 (5ЕО ГО N0: 30), Н9 (5ЕО ГО N0: 32), Н10 (5ЕО ГО N0: 34), Н11 (5ЕО ΙΌ N0: 3б), Н12 (5ЕО ГО N0: 38), Н13 (5ЕО ΙΌ N0: 40), Н14 (5ЕО ГО N0: 42), Н15 (5ЕО ГО N0: 44), Н1б (5ЕО ГО N0: 4б), Н17 (5ЕО ГО N0: 48), Н18 (5ЕО ГО N0: 50), Н19 (5ЕО ГО N0: 52), Н20 (5ЕО ΙΌ N0: 54), Н21 (5ЕО ΙΌ N0: 5б), Н22 (5ЕО ГО N0: 58), Н23 (5ЕО ГО N0: б0) и Н24 (5ЕО ГО N0: б2). Последовательности вариабельных участков Ь1 и Н1 приводятся, используя сокращения аминокислот из одной буквы. Другие вариабельные последовательности легкой цепи и тяжелой цепи указываются с помощью тире у остатков, где они идентичны для Ь1 или Н1, и с соответствующим сокращением аминокислоты из одной буквы, где они отличаются от Ь1 или Н1. Последовательности, соответствующие областям СЭКЕ ί.ΌΚ2 и СОК3, приводятся жирным шрифтом для каждой последовательности и подчеркиваются в Ь1 и Н1. Последовательности, соответствующие ЕК.1, ЕК2, ЕК3 и ЕК4, приводятся в обыкновенном виде.
Подробное описание изобретения
Данное изобретение предлагает композиции и способы, относящиеся к антителам анти-ГЬЧ рецептора (ΙΕ-4Κ), включая способы лечения некоторых состояний, опосредованных ΙΕ-4Κ, и ингибирования биологических активностей интерлейкина-4 (ΙΕ-4) и интерлейкина-13 (ΙΕ-13) ίη νίνο. Композиции, описанные в изобретении, включают, например, анти-ГЬЧК. антитела, полипептиды, полинуклеотиды; клетки, содержащие или экспрессирующие антитела; полипептиды или полинуклеотиды, описанные в изобретении, и фармацевтические композиции, примеры которых приводятся ниже.
Полинуклеотидные и полипептидные последовательности обозначаются, применяя стандартные одно- или трехбуквенные сокращения. Если не указано особо, у полипептидных последовательностей имеются концевые аминогруппы слева и карбоксильные группы справа и последовательности одноцепочечных нуклеиновых кислот и верхняя часть нити последовательностей двухцепочечных нуклеиновых кислот, имеются 5'-концы слева и 3'-концы справа. Отдельная полипептидная или полинуклеотидная последовательность также может описываться, представляя объяснение, чем она отличается от стандартной последовательности. Например, фраза «полипептидная последовательность, которая отличается от 8Е0 ГО N0: 4 при 828Т описывает полипептидную последовательность, которая идентична 8Е0 ГО N0: 4, за исключением того, что остаток серина в положении 28 8Е0 ГО N0: 4 заменяется на остаток треонина.
Полипептидные или полинуклеотидные последовательности отдельных вариабельных участков легкой и тяжелой цепи приведены на фиг. 2 и 3 соответственно, где они маркируются, например, Ь1 («вариабельный участок 1 легкой цепи»), Н1 («вариабельный участок 1 тяжелой цепи») и т.д. Антитела,
- 5 011302 включающие легкую цепь и тяжелую цепь из фиг. 3, обозначаются путем комбинирования названия вариабельного участка легкой цепи и названия вариабельного участка тяжелой цепи. Например, Ь4Н7 обозначает антитело, включающее вариабельную последовательность легкой цепи Ь4 и вариабельную последовательность тяжелой цепи Н7.
«Вариабельная область (или участок) легкой цепи», «вариабельная область (или участок) тяжелой цепи», СЭКТ, 2 и 3 и ЕКТ, 2, 3 и 4 определяются согласно схеме Кабата - КаЬа1 с1 а1. ίη 8ес.|иепсез о£ Рго1с1пз о£ 1ттипо1ощса1 1п1сгс51. 54Ь Еб., И8 Эср1. о£ НеаИй апб Нитап 8егукез, РН8, ΝΙΗ, ΝΙΗ РиЬБсаΐίοη по. 91-3242, 1991.
«Процент идентичности» двух полинуклеотидных или двух полипептидных последовательностей определяется путем сравнения последовательностей, используя компьютерную программу САР (часть от ССС ХУйсопзт Раскаде, уетзюп 10.3 (Ассе1гуз, 8ап Окдо, СА)) с применением параметров, используемых по умолчанию.
Биологическая молекула (например, полипептид, антитело или нуклеиновая кислота) является «изолированной» или «практически очищенной», если она достаточна свободна от других биологических молекул, клеточного дебриса и других субстанций, применяемых в стандартных лабораторных процедурах (например, связывающий или гибридизационный анализ). Методы, приводящие к существенной очистке полипептидов, антител и нуклеиновых кислот, хорошо известны.
Термины «пептид», «полипептид» и «протеин» применяют повсюду равнозначно и относят к молекуле, содержащей два или несколько аминокислотных остатков, соединенных друг с другом пептидными связями.
Термины «полинуклеотид», «олигонуклеотид» и «нуклеиновая кислота» применяют повсюду равнозначно и включают молекулы ДНК (например, кДНК или геномную ДНК), молекулы РНК (например, мРНК), аналоги ДНК или РНК, генерированные с применением нуклеотидных аналогов (например, пептид-нуклеиновые кислоты и не встречающиеся в природе аналоги нуклеотидов) и их гибриды. Молекула нуклеиновой кислоты может быть одноцепочечной или двухцепочечной. В одном варианте, молекулы нуклеиновых кислот, описанных в изобретении, включают смежную открытую рамку считывания, кодирующую антитело или фрагмент, дериват, мутеин или его вариант, описанный в изобретении.
Две одноцепочечные молекулы нуклеиновых кислот являются «комплементом» одна другой, если их последовательности могут выстраиваться в анти-параллельную ориентацию, так что каждый нуклеотид в одной последовательности расположен напротив комплементарного нуклеотида в другой последовательности, без введения двухцепочечных разрывов («брешей») и без неспареных нуклеотидов при 5' или 3' конце каждой последовательности. Молекула нуклеиновой кислоты, которая является «комплементарной» к данной нуклеотидной последовательности, является молекулой, которая достаточно комплементарна к данной нуклеотидной последовательности, которая может гибридизироваться при умеренно строгих условиях с данной нуклеотидной последовательностью. Таким образом, нуклеиновая кислота может быть комплементарной к другой нуклеиновой кислоте, не являясь ее комплементом.
«Вектор» является нуклеиновой кислотой, которая может применяться для введения другой нуклеиновой кислоты, связанной с ней в клетке. Одним видом вектора является «плазмида», которая относится к линейной или кольцевой двухцепочечной молекуле ДНК, в которой могут лигироваться (сшиваться) дополнительные сегменты нуклеиновой кислоты. Другой тип вектора является вирусным вектором (например, ретровирусами с дефектной репликацией, аденовирусами и аденоассоциированными вирусами), в котором дополнительные сегменты ДНК могут вводиться в вирусный геном. Некоторые векторы способны к автономной репликации в клетке-хозяин, в которую они вводятся (например, бактериальные векторы, включающие репликацию бактериального происхождения и эписомные векторы млекопитающих). Другие векторы (например, неэписомные векторы млекопитающих) интегрируются в геном клетки-хозяин при введении в клетку-хозяин и, тем самым, реплицируются наряду с геномом хозяина. «Вектор экспрессии» представляет тип вектора, который может направить экспрессию выбранного полинуклеотида.
Нуклеотидная последовательность «операбельно связывается» с регуляторной последовательностью, если регуляторная последовательность влияет на экспрессию (например, на уровень, продолжительность или локализацию экспрессии) нуклеотидной последовательности. «Регуляторная последовательность» представляет нуклеиновую кислоту, которая влияет на экспрессию (например, на уровень, продолжительность или локализацию экспрессии) нуклеиновой кислоты. Регуляторная последовательность может, например, оказывать свое влияние непосредственно на регулируемую нуклеиновую кислоту или через воздействие одного или нескольких полипептидов (например, полипептидов, которые связываются с регуляторной последовательностью и/или с нуклеиновой кислотой). Примеры регуляторных последовательностей включают промоторы, энхансеры и другие элементы контроля экспрессии (например, сигналы полиаденилирования). Другие примеры регуляторных последовательностей описываются, например, в Соеббе1, 1990, Сепе Ехртеззюп Тесйпо1оду: МеШобз ш Епхуто1оду 185, Асабетк Ргезз, 8ап Окдо, СА апб Вагоп е1 а1., 1995, Шскк Ас1бз Вез. 23:3605-06.
«Клетка-хозяин» является клеткой, которая может применяться для экспрессии нуклеиновой кислоты, например нуклеиновой кислоты по предлагаемому изобретению. Клетка-хозяин может быть прока
- 6 011302 риотической, например, Е.соШ, или может быть эукариотической, например одноклеточным эукариотом (например, дрожжи или другие грибы), растительной клеткой (например, растительной клеткой табака или томата), животной клеткой (например, клеткой человека, клеткой обезьяны, клеткой хомяка, клеткой крысы, клеткой мыши или клеткой инсекта) или гибридомой. Примеры клеток-хозяина включают СО8-7 линию клеток почек обезьяны (АТСС СКЬ 1651) (см. С1и/тап е! а1., 1981, Се11 23:175), Ь клетки, С127 клетки, 3Т3 клетки (АТСС ССЬ 163), клетки яичника китайского хомячка (СЫпеке йатк!ег оуагу, СНО) или их дериваты, такие как Уед§1е СНО и родственные линии клеток, которые растут в бессывороточной среде (см. Кактиккеп е! а1., 1998, Су1о1ес11по1оду 28:31) или СНО штамме ΌΧ-Β11, который является неполным в ЭНЕК (см. ИпаиЬ е! а1., 1980, Ргос. ЫаО. Асаб. 8с1. И8А 77:4216-20), НеЬа клетках, ВНК (АТСС СКЬ 10) линии клеток, СУ1/ЕВЫА линии клеток, полученных от линии клеток почек африканской зеленой обезьяны СУ1 (АТСС ССЬ 70) (см. МсМайап е! а1., 1991, ЕМВО 1. 10:2821), эмбриональных клетках почки человека 293, 293 ΕΒΝΛ или М8К. 293, эпидермальных А431 клетках человека, клетках Со1о205 человека, других трансформированных линиях клеток примата, нормальных диплоидных клетках, клетках штаммов, полученных из культуры основной (первичной) ткани ίη У1!го, первичных эксплантатов НЬ-60, И937, НаК или клетки 1игка!. Обычно клетка-хозяин является культивируемой клеткой, которая может трансформироваться или трансфектироваться с нуклеиновой кислотой, кодирующей полипептид, который далее может экспрессироваться в клетке-хозяине. Фраза «рекомбинантная клеткахозяин» может применяться для обозначения клетки-хозяин, которая была трансформирована или трансфектирована с экспрессируемой нуклеиновой кислотой. Клетка-хозяин также может быть клеткой, которая включает нуклеиновую кислоту, но не экспрессирует ее при требуемом уровне, если только регуляторная последовательность не вводится в клетку-хозяин, так что она становится операбельно связанной с нуклеиновой кислотой. Следует иметь ввиду, что термин клетка-хозяин относится не только к отдельной клетке субъекта, но и к потомству или потенциальному потомству такой клетки. Так как могут происходить некоторые модификации в последующих генерациях (потомствах) вследствие или мутации, или влияний окружающей среды, такое потомство, в действительности, не может быть идентичным родительской клетке, но все же оно охватывается термином, применяемым в данном изобретении.
«Химерное антитело» является антителом, в котором часть тяжелой и/или легкой цепи идентична антителу определенного вида или принадлежит к определенному классу или подклассу антитела, гомологична этому антителу или происходит от него, в то время как остаток цепи(ей) идентичен(ы) антителу(лам) другого вида или принадлежит к другому классу или подклассу антитела, гомологичен этому антителу или происходит от него. Также включенными являются фрагменты таких антител, которые проявляют нужную биологическую активность (т.е. способность специфически связывать 1Ь-4 рецептор). См. патент США И8 Ра!еп! № 4816567 и публикацию Моткоп, 1985, 8с1епсе 229:1202-07.
«СОК трансплантационное антитело» является антителом, включающим один или несколько СЭКк. которые происходят от антитела определенного вида или изотипа и остова другого антитела такого же или другого вида или изотипа.
«Мультиспецифическое антитело» является антителом, которое распознает более чем один эпитоп на одном или нескольких антигенах. Подклассом этого типа антитела является «биспецифическое антитело», которое распознает два отдельных эпитопа на одном и том же антигене или на различных антигенах.
«Вариант» полипептида (например, антитело) включает аминокислотную последовательность, в которой один или несколько аминокислотных остатков вставляются в аминокислотную последовательность, удаляются из нее и/или заменяются в аминокислотной последовательности относительно другой полипептидной последовательности. Варианты, описанные в изобретении, включают слитые белки.
«Дериват» полипептида представляет полипептид (например, антитело), который был химически модифицирован каким-либо способом, который отличался от вариантов вставки, делеции или замены, например, путем конъюгирования с другим химическим остатком. Если не указано особо, термин «антитело» включает кроме антител, содержащих две первичные тяжелые цепи и две первичные легкие цепи, дериваты, варианты, фрагменты и мутеины его, примеры которых приводятся ниже.
Молекула (например, антитело) «специфически связывает рецептор 1Ь-4», если она связывает рецептор 1Ь-4 или его фрагмент по меньшей мере с в 10 раз большей аффинностью (сродством), чем молекула связывается с полипептидом, не имеющим отношения к рецептору 1Ь-4.
«Антиген-связывающий домен» или «антиген-связывающая область» представляет часть молекулы антитела, которая содержит аминокислотные остатки (или другие молекулы), которые взаимодействуют с антигеном и дают антителу специфичность и сродство для антигена.
«Эпитоп» является частью молекулы, которая связывается антителом. Эпитоп может не содержать соседних частей молекулы (например, в полипептиде, аминокислотных остатках, которые не являются соседними по отношению один к другому в последовательности полипептида, но которые, одновременно в контексте молекулы, связываются антителом).
Показания.
В одном варианте предлагаются способы лечения, предупреждения, исцеления, ослабления или уменьшения симптомов болезни, нарушения, состояния или расстройства. Среди состояний, которые
- 7 011302 лечатся согласно данному изобретению, это астма, септический/реактивный артрит, сходный с герпесом дерматит, хроническая идиопатическая крапивница, склеродермия, гипертрофическое рубцевание, болезнь Уиппла, доброкачественная гиперплазия простаты, легочные расстройства, в которых играет роль 1Ь-4; состояния, в которых играет роль вызванное 1Ь-4 разрушение эпителиального барьера, нарушения пищеварительной системы, в которой играет роль 1Ь-4, включая воспалительную болезнь кишечника и другие воспалительные состояния в пищеварительном тракте, аллергическая реакция к лекарственным препаратам, болезнь Кавасаки, серповидно-клеточная анемия (включая серповидно-клеточный криз), синдром Черджа (Черга)-Стросса, болезнь Грейвса, преэклампсия, синдром Шенгрена, аутоиммунный лимфопролиферативный синдром, аутоиммунная гемолитическая анемия, пищевод Барретта, аутоиммунный увеит, туберкулез и нефроз, как описано ниже более подробно. Антагонисты 1Ь-4К. также находят применение в качестве адъювантов для аллергической иммунотерапии и в качестве адъювантов вакцины.
Примеры антител, пригодных для лечения данных состояний, описываются ниже и включают, например, антитела, которые связывают 1Ь-4К. и ингибируют связывание 1Ь-4 к ним. Особенно пригодные антитела также ингибируют связывание ΣΕ-13 с рецептором 1Ь-13 (1Ь-13Я). Особые способы осуществления изобретения включают новые антитела и дериваты антител, фрагменты, мутеины и его варианты, полипептиды, молекулы нуклеиновых кислот, клетки, способы получения предшествующих, способы ингибирования 1Ь-4К.а и способы лечения субъекта, примеры которых описываются ниже.
В одном варианте предлагаются способы, включающие введение анти-1Г-4К.а антитела субъекту. В одном варианте субъект поражается состоянием или имеется риск развития этого состояния (включая, например, расстройство, инфекцию, повреждение (травму), болезнь или нарушение), которое вызывается, индуцируется, посредничает, потенцируется, обостряется или, иначе говоря, осуществляется непосредственно или косвенно с помощью активности 1Ь-4К.а. Такие состояния включают, например, состояния вызванные, индуцируемые, опосредованные, потенцируемые, обостряемые или, иначе говоря, осуществляемые непосредственно или косвенно с помощью 1Ь-4 и/или 1Ь-13. Другие факторы или цитокины также могут играть роль в таких состояниях.
Биологические активности 1Ь-4 посредничают через связывание со специфическими рецепторами клеточной поверхности, называемыми рецепторами интерлейкина-4 (1Ь-4Я). Вызванные 1Ь-4 состояния включают состояния, возникающие из биологических реакций, которые происходят в результате связывания 1Ь-4 с нативным 1Ь-4 рецептором на клетке или которые могут ингибироваться или подавляться путем предохранения 1Ь-4 от связывания с 1Ь-4 рецептором. Состояния, которые можно лечить, включают медицинские нарушения, характеризующиеся аномальной экспрессией 1Ь-4 или одного или нескольких компонентов 1Ь-4Я или 1Б-13В (включая, например, сверхэкспрессию, ошибочную экспрессию в отдельной ткани или типе клеток или ошибочную экспрессию на отдельной стадии развития) или аномальной реакцией хозяина к продуцированию 1Ь-4, но выбор этим не ограничивается. Другие примеры представляют состояния, в которых играют роль вызванное 1Ь-4 продуцирование антитела или пролиферация, или приток отдельного типа клеток. Вызванные 1Ь-4 нарушения включают нарушения, в которых 1Ь-4 индуцирует активацию 1Ь-4 рецепторов или усиленное продуцирование другого протеина, который играет роль при заболевании (например, другой цитокин).
Способ лечения млекопитающего, включая человека, который имеет такое медицинское нарушение, включает введение анти-1Ь-4К антитела или его деривата млекопитающему или же контактирование 1Б-4К. млекопитающего с антителом или дериватом, например в процедуре ех νίνο. Состояния, которые могут лечиться согласно данному изобретению, описываются, например, в υδδΝ 09/847816, зарегистрированной 1 мая 2001 г., соответствующее описание которой приводится в данном изобретении в качестве ссылки. Такие состояния включают астму, септический/реактивный артрит, сходный с герпесом дерматит, крапивницу (особенно хроническую идиопатическую крапивницу), язвы, желудочно-кишечное воспаление, воспаление слизистой оболочки, неспецифический язвенный колит, болезнь Крона, воспалительную болезнь кишечника, другие нарушения пищеварительной системы, в которых играет роль 1Ь-4 (например, вызванное 1Ь-4 воспаление части пищеварительного тракта); состояния, в которых играет роль вызванное 1Ь-4 разрушение барьера (например, состояния, характеризующиеся уменьшенной функцией эпителиального барьера в легком или пищеварительном тракте), склеродермию, гипертрофическое рубцевание, болезнь Уиппла, доброкачественную гиперплазию простаты; вызванные 1Ь-4 легочные состояния (включая те, которые перечисляются ниже), аллергические реакции к лекарственным препаратам, болезнь Кавасаки, серповидно-клеточную анемию или криз, синдром Черджа (Черга)-Стросса, болезнь Грейвса, преэклампсию, синдром Шенгрена, аутоиммунный лимфопролиферативный синдром, аутоиммунную гемолитическую анемию, пищевод Барретта, аутоиммунный увеит, туберкулез, нефроз, обыкновенную пузырчатку или буллезный пемфигоид (аутоаллергические болезни, вызывающие образование пузырей) и тяжелую миастению (аутоаллергическую мышечную болезнь).
Анти-1Ь-4К антитела и их дериваты также находят применение в качестве адъювантов для иммунотерапевтического лечения аллергии и в качестве адъювантов вакцины. Таким образом, анти-1Ь-4К антитело может применяться в качестве адъюванта для иммунотерапевтического лечения аллергии. Аити-ТЬ
- 8 011302
4К. антитело нашло другое применение в качестве адъювантов вакцины, таких как адъювантов для раковых вакцин или вакцин инфекционных заболеваний. Применение 1Ь-4К адъювантов, особенно при направлении иммунной реакции к ТН1 ответной реакции, будет благотворным в лечении или профилактике рассматриваемой болезни.
Септический/реактивный артрит.
Анти-1Ь-4К антитело может применяться в лечении септического артрита, который известен также как реактивный артрит или бактериальный артрит. Септический артрит может вызываться инфекцией (является следствием или развивается после ее), такими микробами, как 81арбу1ососсн5 аигеиз, СЫашуШа йасбошаИз, Уегчша. например Υ. еШетосоййса, 8а1шопе11а, например 8. еп1еийб18, 81нде11а и Сашру1оЬас(ег. Сообщалось, что 8. аитеиз является главным патогенным микроорганизмом у человека в септическом артрите, ответственным за большинство случаев.
1Ь-4 и 1Ь-4-зависимые Т112 ответные реакции играют роль в провоцировании септического артрита. Анти-1Ь-4К антитело может применяться согласно данному изобретению для ингибирования 1Ь-4 и также для подавления Т112 ответной реакции у больных с септическим артритом или риском возникновения септического артрита.
1Ь-4 увеличивает бактериальную нагрузку и бактериальную персистенцию в суставах ингибированием обезвреживания [удаления] бактерий. Анти-1Ь-4К антитело может применяться для содействия в обезвреживании [удалении] бактерий, связанных с реактивным артритом, тем самым уменьшая клинические проявления, такие как припухлость суставов. Анти-1Ь-4К антитело может вводиться человеку, пораженному септическим артритом, чтобы уменьшить опосредованное 1Ь-4 воспаление суставов.
При одном подходе антагонист парентерально вводится в сустав, например в синовиальную жидкость в коленном суставе.
Применение анти-1Ь-4К антитела может приносить пользу субъектам с септическим артритом (или при риске его развития) путем подавления ТН2 реакции и стимулирования ТН1 ответной реакции против воспаления. ТН2 цитокины могут приводить к бактериальной персистенции в суставе, тогда как ТН1 реакция играет роль в ликвидации бактерий.
Антитело может вводиться субъектам, зараженным бактериями или другими микробами, как, например, перечисленными выше, для предупреждения развития септического артрита. Антитело может вводиться, например, после установления диагноза с такой инфекцией, но до проявления клинических симптомов септического артрита.
Болезнь Уиппла.
Тгорбегуша \\'1нрре1Н является бактерией, вызывающей болезнь Уиппла, также известной как интестинальная липодистрофия и липогранулематоз. Болезнь характеризуется стеатореей, часто генерализованной лимфаденопатией, артритом, лихорадочным состоянием и кашлем. Также сообщалось, что у больных болезнью Уиппла имеется избыток пенящихся макрофагов в тощекишечном тонком слое и лимфатических узлах, содержащих перйодную кислоту -шифф (8сЫГГ) положительные частицы, кажущиеся бациллярными (палочковидными) с помощью электронной микроскопии (81еабшап'8 Меб1са1 Όκйопату, 2611' Еййюп, ^1Шаш8 & ^йкшз, ВаШшоте, ΜΌ, 1995).
Применение анти-1Ь-4К. антитела может принести пользу субъектам с (или при риске) болезнью Уиппла путем восстановления нормального баланса между ТН1 и ТН2 компонентами иммунной реакции больного. Увеличенное продуцирование 1Ь-4 (цитокина ТН2-типа) и пониженные уровни некоторых цитокинов ТН1-типа были связаны с болезнью Уиппла. ТН2 цитокины могут привести к бактериальной персистенции, тогда как ТН1 реакция играет роль в устранении бактерий, вызывающих болезнь. Антагонисты 1Б-4К. могут вводиться субъектам, зараженным Т. \\'1ирре11т независимо от того проявлял ли субъект клинические симптомы болезни Уиппла.
Сходный с герпесом дерматит.
Сходный с герпесом дерматит, также известный как болезнь Дюринга (герпетиформный дерматит), представляет хроническое состояние кожи, характеризующееся повреждениями кожи, сопровождаемыми образованием пузырей, кожными 1дЛ отложениями и зудом. У больных имеется иммунобуллеозное нарушение кожи, сопровождаемое глютензависимой энтеропатией, которая опосредована Т1 2 иммунной реакцией. Анти-1Ь-4К. антитело вводится, согласно данному изобретению, для подавления 1Ь-4 и Т12 реакции, таким образом, стимулируя излечивание существующих повреждений и уменьшая или предотвращая образование пузырей (волдырей) на разгибающихся поверхностях тела.
Гипертрофическое рубцевание.
Согласно данному изобретению, анти-1Е-4К. антитело вводится субъектам, у которых имеется гипертрофическое рубцевание или существует восприимчивость к его развитию. В одном способе, приведенном в данном изобретении, анти-1Е-4К. антитело вводится субъекту с ожоговым повреждением (травмой). Полагают, что иммунная реакция на ожоги и другое повреждение играет роль в патогенезе гипертрофического рубцевания. Сообщалось об увеличенном продуцировании цитокинов ТН2-типа, включая 1Ь-4, и уменьшенных уровнях некоторых цитокинов ТН1-типа у обожженных больных, у которых имелось гипертрофическое рубцевание. Применение анти-1Е-4К. антител может принести пользу субъектам с гипертрофическим рубцеванием (или с риском развития его) путем подавления иммунной реакции ТН2
- 9 011302 типа.
Крапивница.
Крапивницу, особенно хронические формы ее, такие как хроническую идиопатическую крапивницу (сйтошс 1бюра1Ыс шИсапа, СГО) можно, согласно данному изобретению, лечить анти-1Ь-4В антителом. У СГО больных имеются более высокие уровни 1Ь-4 в сыворотке по сравнению с контролем, и могут преимущественно иметь профиль цитокина ТН2-типа. Тучные клетки и Т клетки Т112-типа вовлекаются как эмбриональные эффекторные клетки в хроническую крапивницу. 1Ь-4 стимулируют пролиферацию тучных клеток. Дегрануляция (потеря зернистости) тучных клеток приводит к высвобождению гистамина, последующей эритеме, эозинофилии, покраснению кожи и зуду. Анти-1Ь-4В антитела вводятся для ингибирования 1Ь-4 и уменьшения реакции ТН2-типа, тем самым, помогая контролировать крапивницу субъекта.
Неспецифический язвенный колит, другие нарушения желудочно-кишечного тракта.
1Ь-4 вовлекаются в патогенез неспецифического язвенного колита. Цитокины Т112-типа. включая 1Ь-4, могут преобладать в слизистой оболочке, относящейся к ободочной или толстой кишке, больных с данным расстройством. Применение анти-1Ь-4В антител для подавления ТН2 реакции может облегчить данное состояние.
Кроме неспецифического язвенного колита, анти-1Ь-4В антителами можно лечить другие нарушения желудочно-кишечного тракта или пищеварительной системы. Примеры таких нарушений включают воспалительную болезнь кишечника (шПашша1огу Ьо\уе1 бкеаке, ΙΒΌ) с неспецифическим язвенным колитом и болезнью Крона, являющихся формами ΙΒΌ, гастрит, язвы и воспаление, относящееся к слизистой оболочке, но выбор этими нарушениями не ограничивается.
Любое желудочно-кишечное состояние, в котором играет роль 1Ь-4, можно, согласно данному изобретению, лечить анти-1Ь-4В антителом. Например, состояния, включающие вызванное 1Ь-4 воспаление части желудочно-кишечного тракта, можно лечить анти-1Ь-4В антителом. Отдельные варианты относятся к лечению хронических воспалительных состояний в желудочно-кишечном тракте.
Другие варианты относятся к состояниям, в которых играет роль вызванное 1Ь-4 разрушение барьера, например, состояниям, характеризуемым пониженной функцией эпителиального барьера по меньшей мере в части желудочно-кишечного тракта. Такие состояния могут, например, включать повреждение эпителия, которое непосредственно или косвенно вызывается 1Ь-4.
Кишечная эпителиальная ткань образует относительно непроницаемый барьер между полостью и подслизистой основой. Разрушение этителиального барьера было связано с состояниями, такими как воспалительная болезнь кишечника. См. обсуждение в Уоиактт, А., М. А1Л1е11 (Ат. 1. Р11У5Ю1. 276 (Оа§1тош1е81. Ыует Р11У5Ю1. 39):01279-01288, 1999), включенное, таким образом, полностью в качестве ссылки. Поврежденный или «неплотно соединенный» барьер может позволить антигенам пересечь барьер, который, в свою очередь, выявляет иммунную реакцию, которая может вызвать дальнейшее повреждение желудочно-кишечной ткани. Такая иммунная реакция может включать, например, восстановление нейтрофилов или Т клеток. Анти-1Ь-4В антитело может вводиться для ингибирования нежелательной стимуляции иммунной реакции.
Легочные расстройства.
В данном изобретении предлагаются способы лечения легочных расстройств, вызванных 1Ь-4. Такие расстройства включают фиброз легкого, включая хроническую болезнь пневмофиброза, другие состояния, характеризующиеся вызванной 1Ь-4 пролиферацией фибробласта или отложением коллагена в легких, легочные состояния, в которых играет роль иммунная реакция ТН2-типа, состояния, характеризующиеся уменьшением функции барьера в легком (например, являющееся следствием вызванного 1Ь-4 повреждения эпителия) или состояния, в которых играет роль 1Ь-4 в воспалительном ответе (например, астма), но выбор состояний этим не ограничивается.
Муковисцитоз характеризуется сверхпродуцированием слизи и развитием хронических инфекций. Ингибирование 1Ь-4 и Т112 реакции уменьшит продуцирование слизи и поможет контролировать инфекции, такие как аллергический бронхолегочный аспергиллез (а11егщс Ьтопсйори1топагу акретдШокк, АВРА).
Аллергический бронхолегочный микоз встречается, главным образом, у больных с цистическим муковисцидозом или астмой, где Т112 иммунная реакция является доминантной. Ингибирование 1Ь-4 и Т112 реакции поможет устранить и контролировать данные инфекции.
Хроническая обструктивная (закупоривающая) легочная болезнь обуславливается повышенной секрецией слизи и фиброзом. Ингибирование 1Ь-4 и Т112 реакции уменьшит продуцирование слизи и развитие фиброза, тем самым, улучшая респираторную функцию и задерживая прогрессирование болезни.
Вызванная блеомицином пневмопатия и фиброз и вызванный радиацией легочный фиброз являются нарушениями, характеризующимися фиброзом легкого, который проявляется притоком ТР2, СИ4+ клеток и макрофагов, которые продуцируют 1Ь-4, который, в свою очередь, посредничает в развитии фиброза. Ингибирование 1Ь-4 и ТП2 реакции уменьшит или предупредит развитие данных нарушений.
Легочно-альвеолярный протеиноз характеризуется разрушением клиренса поверхностно-активного вещества. 1Ь-4 увеличивает поверхностно-активный продукт. Применение анти-1Ь-4В антитела увеличит
- 10 011302 продуцирование поверхностно-активного вещества и уменьшит необходимость для полного лаважа легкого.
Респираторный дистресс-синдром у взрослых (айиИ текрпаЮгу Й151гс55 куийгоше, ΆΚΌ8) может быть отнесен к ряду факторов, одним из которых является выдержка с токсическими химическими веществами. Одна группа больных, восприимчивых к ΑΚΌ8, являлась группой из тяжелобольных, у которых происходит искусственная вентиляции легких. ΆΚΌ8 является частым осложнением у таких больных. Лечение анти-1Ь-4К антителом может облегчить ΆΚΌ8 уменьшением воспаления и адгезии молекул, хотя способы лечения таких субъектов, согласно данному изобретению, не ограничиваются отдельным механизмом действия. Анти-1Ь-4К антитела могут применяться для предупреждения или лечения ΑΚΌ8.
Саркоидоз характеризуется гранулематозными повреждениями (поражениями). В данном изобретении рассматривается применение анти-1Ь-4К. антитела для лечения саркоидоза, в частности легочного саркоидоза.
Состояния, в которых играет роль разрушение барьера, вызванного 1Ь-4 (например, состояния, характеризуемого увеличенной функцией эпителиального барьера в легком), можно лечить анти-1Ь-4К. антителом. Повреждение эпителиального барьера в легких может непосредственно или косвенно вызываться 1Ь-4. Эпителий в легком функционирует в качестве селективного барьера, который предохраняет содержимое полости легкого от вхождения подслизистой основы. Поврежденный или «неплотно соединенный» барьер позволяет антигенам пересечь барьер, который, в свою очередь, выявляет иммунную реакцию, которая может вызвать дополнительное повреждение ткани легкого. Такая иммунная реакция может, например, включать восстановление эозинофилов или тучных клеток. Анти-1Ь-4К. антитело может вводиться для ингибирования такой нежелательной стимуляции иммунной реакции.
Анти-1Ь-4К. антитело может применяться для стимулирования излечения эпителия легкого, таким образом, восстанавливая функцию барьера. Анти-1Ь-4К. антитело может применяться для стимулирования излечения эпителия легкого, например, у астматиков. Или же вводится антагонист для профилактических целей, чтобы предотвратить вызванное 1Ь-4 повреждение легочного эпителия.
Туберкулез.
Иммунная реакция ТН2-типа играет роль в повреждении ткани (например, некроз легочной ткани) у больных туберкулезом (1иЬегси1о8Щ, ТВ). Повышенные уровни 1Ь-4 ассоциируются с ТВ. Продуцирование 1Ь-4 может особенно понижаться в полостном туберкулезе (т.е. у ТВ больных, у которых развились легочные полости, которые могут детектироваться/детектироваться визуально такими методами, как рентгенограммы грудной клетки).
Анти-1Ь-4К. антитела могут приносить пользу ТВ больным (особенно тем, у кого полостной туберкулез) путем подавления ТН2 иммунной реакции. Способы лечения таких субъектов, согласно данному изобретению, не ограничиваются, однако, отдельным механизмом действия. Анти-1Ь-4К. антитело преимущественно вводится в количестве, которое восстанавливает нужный баланс между ТН1 и ТН2 компонентами иммунной реакции и уменьшает вызванное 1Ь-4 повреждение тканей у больного.
Синдром Черджа (Черга)-Стросса.
Синдром Черджа (Черга)-Стросса, болезнь также известная как аллергический гранулематозный ангиит, характеризуется воспалением кровеносных сосудов у людей, в истории болезни которых имелась астма или аллергия, и эозинофилией. Анти-1Ь-4К. антитела могут вводиться для облегчения воспаления у субъектов с данным синдромом. Пользу субъектам принесет применение анти-1Ь-4К. антител для подавления ТН2-типа иммунной реакции и для борьбы против эозинофилии.
Преэклампсия.
Преэклампсия является токсемией позднего срока беременности. Состояние характеризуется резким повышением кровяного давления, обычно сопровождаемого отеком и протеинурией во время третьего периода беременности.
В состоянии могут играть роль повышенные иммунные реакции ТН1-типа и ТН2-типа. Один способ, приведенный в данном изобретении, включает введение анти-1Ь-4К. антитела беременной женщине, у которой развилась преэклампсия. Аити-1Ь-4К. антитело вводится в количестве и в течение периода времени, достаточном для уменьшения уровня 1Ь-4 (или цитокинов ТН2-типа совместно) до уровня, который считается нормальным во время беременности. Обычно, анти-ГЬ^К антитело вводится неоднократно на протяжении всей беременности.
Склеродермия.
Анти-1Т-4К антитела, в соответствии с изобретением, вводятся субъектам со склеродермией. Антитела уменьшают вызванный 1Ь-4 синтез коллагена фибробластами у больных. Антитела могут применяться для предупреждения или уменьшения фиброза в коже и тканях легких, а также в других тканях, в которых фиброз встречается у больных склеродермией, подавляя синтез коллагена в таких тканях, и при лечении легочной болезни, относящейся к склеродермии.
Доброкачественная гиперплазия простаты.
Доброкачественную гиперплазию простаты (Ьешди рто81а1е Йуретр1а81а, ВРН), также известную как доброкачественная гипертрофия простаты, можно лечить анти-1Т-4К. антителами. При не желании связываться с отдельным механизмом действия, введение анти-1Т-4К. антитела может приносить пользу
- 11 011302 субъекту с ВРН путем подавления вызванного 1Ь-4 воспаления или путем подавления иммунной реакции ТН2-типа.
Болезнь Грейвса.
Антитела, направленные против тиротропинового рецептора, играют важную роль в болезни Грейвса, болезни, характеризующейся гипертиреозом. Исследования по продуцированию цитокинов у больных болезнью Грейвса показывают сдвиг к реакции цитокина ТН2-типа. Применение анти-1Ь-4В антитела для подавления иммунной реакции ТН2-типа и для подавления продуцирования антитела должно приносить пользу больным болезнью Грейвса.
Болезнь серповидно-клеточной анемии.
Больные болезнью серповидно-клеточной анемии обычно испытывают скачкообразные (перемежающиеся) периоды острого обострения, называемые кризами, причем кризы распределяются по категориям как анемичные или вазо-обтурирующие. Анти-1Ь-4В антитела нашли применение при лечении или профилактике кризов серповидно-клеточной анемии, особенно у субъектов с повышенными уровнями 1Ь-4 или у которых иммунная реакция сместилась к реакции ТН2-типа. Болезнь серповидно-клеточной анемии (особенно криз серповидно-клеточной анемии) была обусловлена увеличенной восприимчивостью к инфекционным болезням, включая бактериальные инфекции. Введение анти-1Ь-4В антител больным с серповидно-клеточной анемией может помочь больному повысить иммунную реакцию против инфекционных болезней.
Синдром Шегрена.
Аутоаллергическая болезнь, известная как синдром Шегрена или сухой синдром, обычно сочетает сухие глаза и сухой рот с болезнью соединительных тканей, такой как ревматоидный артрит, волчанка, склеродермия или полимиозит. Подавляющее большинство больных являются женщинами среднего (или пожилого) возраста. Синдром Шегрена является воспалительным заболеванием желез (например, слезных и слюнных желез) и других тканей тела. Синдром обычно связывается с продуцированием аутоантитела.
Анти-1Ь-4В антитела могут вводиться для уменьшения воспалительной реакции (как, например, воспаления желез, включая слезные железы) у таких субъектов. Анти-1Ь-4В антитела могут приносить пользу больным синдромом Шегрена, подавляя иммунную реакцию ТН2-типа. Однако способы лечения субъектов согласно данному изобретению не ограничиваются отдельным механизмом действия.
Аллергический лимфопролиферативный синдром.
Проявление аллергического лимфопролиферативного синдрома включает лимфопролиферацию и продуцирование аутоантитела. Больные с синдромом косвенно имеют унаследованную недостаточность в апоптозе. Анти-1Ь-4В антитела могут приносить пользу больным этим синдромом путем подавления иммунной реакции ТН2-типа. Способы лечения таких субъектов согласно данному изобретению не ограничиваются, однако, отдельным механизмом действия.
Аллергическая гемолитическая анемия.
Чрезмерная секреция 1Ь-4 и дефицит цитокинов в ТН1-типе причастны к участию в патогенезе аллергической гемолитической анемии. Анти-1Ь-4В антитела вводятся согласно данному изобретению, чтобы принести пользу больным путем уменьшения продуцирования аутоантитела и путем восстановления более нормального баланса между компонентами ТН1 и ТН2 иммунной реакции.
Аутоиммунный увеит.
Увеит включает воспаление сосудистой оболочки глазного яблока (обычно полагали, что включает радужную оболочку, ресничное тело и собственно сосудистую оболочку глаза). Избыток секреции 1Ь-4 играет роль в патогенезе угрожающей зрению воспалительной болезни глаз. Согласно данному изобретению анти-1Ь-4В антитела вводятся субъекту с увеитом или субъекту с риском развития этого заболевания. В одном варианте анти-1Ь-4В антитела вводятся человеку, у которого имеется аутоиммунный увеоретинит.
Болезнь Кавасаки.
Болезнь Кавасаки (Кагакак! бЬсахс. ΚΌ), также известная как синдром кожно-слизистого лимфатического узла, главным образом поражает младенца. Болезнь характеризуется отдельными изменениями в слизистых оболочках, покрывающих губы и рот, и увеличенными болезненными лимфатическими узлами. Симптомы обычно включают жар, конъюнктивит, воспаление губ и слизистых оболочек рта, распухшие узлы на шее и сыпь, покрывающую руки и ноги, приводящую к затвердению, распуханию и шелушению кожи на руках и ногах. У ребенка с болезнью Кавасаки (КО) может развиться воспаление артерий (васкулит). Вследствие влияния болезни на сердечно-сосудистую систему КО косвенно является основной причиной приобретенной болезни сердца у ребенка.
Анти-1Ь-4В антитела могут вводится субъектам с болезнью Кавасаки. Чрезмерная секреция 1Ь-4 и дефицит цитокинов в ТН1-типе причастны к патогенезу болезни.
Пищевод Барретта.
Пищевод Барретта является состоянием, характеризуемым изменением (после раздражения) клеток в эпителиальной ткани, которая покрывает нижнюю часть пищевода. Частый рефлюкс содержимого желудка по времени может приводить к пищеводу Барретта. Больные пищеводом Барретта имеют риск для
- 12 011302 развития рака пищевода (например, аденокарциномы). Не желая связываться с особым механизмом действия, введение анти-1Ь-4К антитела может приносить пользу субъекту с пищеводом Барретта, подавляя иммунную реакцию ТН2-типа. В одном варианте анти-1Ь-4К антитело вводится субъекту с эзофагитом, чтобы замедлить прогрессирование пищевода Барретта.
Нефроз.
Нефроз, также известный как нефротический синдром, представляет заболевание почек, которое не является воспалительным и злокачественным. В состоянии, известном как нефроз с минимальными изменениями, гломерулярное повреждение (полагают, что является результатом структурных изменений в гломерулярных висцеральных эпителиальных клетках) приводит к отклонениям от нормы, которые включают протеинурию. Иммунная реакция ТН-2-типа (особенно секреция ТН-2-типа цитокинов 1Ь-4 и 1Ь-13) играет роль в патогенезе нефроза с минимальными изменениями.
Другие показания.
Дополнительные примеры состояний, которые могут согласно данному изобретению лечиться, включают, но не ограничиваются следующим. Анти-1Ь-4К антитела могут применяться при лечении или в профилактике гипер-ЦЕ синдрома, идиопатического гиперэозинофильного синдрома, аллергических реакций к медикаментам, аутоаллергических болезней, вызывающих образование пузырей (например, обыкновенная пузырчатка или буллезный пемфигоид), тяжелой миастении (аутоаллергическая мышечная болезнь) и синдрома хронической усталости. Анти-1Ь-4К антитела могут применяться при лечении ОУНИ; отдельные способы лечения ОУНИ вместе с другими терапевтическими агентами описываются ниже. Анти-1Ь-4К антитела также находят применение в лечении или профилактике гепатотоксичности, вызванной лекарственными препаратами, таким как диклофенак (нестероидный противовоспалительный лекарственный препарат).
Анти-1Ь-4К антитело может применяться в качестве адъюванта для иммунотерапевтического лечения аллергии. Анти-1Ь-4К антитела нашли другое применение в качестве адъювантов вакцин, таких как адъюванты для вакцин рака и вакцин инфекционных болезней. Применение анти-1Ь-4К антител особенно выгодно, когда поддержание иммунной реакции ТН-1-типа будет полезным в профилактике или лечении состояния, для которого вводилась вакцина. Анти-1Ь-4К антитела могут применяться, если требуется уменьшение иммунной реакции, опосредованной антителом, и/или стимулирование иммунной реакции, опосредованной Т-клетками.
Анти-1Ь-4К антитела.
В одном варианте предлагаются антитела и их фрагменты, дериваты, мутеины и варианты, которые связываются с 1Ь-4 рецептором альфа, например человеческим 1Ь-4 рецептором альфа.
Анти-1Ь-4К антитела, которые могут согласно данному изобретению применяться, включают антитела, которые ингибируют биологическую активность 1Ь-4. Примеры таких биологических активностей включают ассоциирование с другим компонентом рецептора (например, 1Ь-2К гамма или 1Ь-13К альфа), связывание (или одного или в виде части мультимерного рецепторного комплекса) сигнальной молекулы (например, 1Ь-4 или 1Ь-13) и трансдукция сигнала в ответ на связывание сигнальной молекулы.
Различные анти-1Ь-4К антитела могут связываются с различными доменами или эпитопами 1Ь-4К или действовать по различным механизмам. Примеры включают антитела, которые мешают связыванию 1Ь-4 с 1Ь-4К или которые ингибируют сигнальную трансдукцию, но не ограничиваются ими. Участок взаимодействия может быть, например, внутриклеточным (например, при помехе внутриклеточным сигнальным путем) или внеклеточным. Антителу не требуется полностью ингибировать вызванную 1Ь-4 активность, чтобы найти применение в данном изобретении; вернее, антитела, которые уменьшают отдельную активность 1Ь-4, также предполагаются для применения.
Представленные выше обсуждения отдельных механизмов действия анти-1Ь-4К антител при лечении отдельных болезней являются лишь иллюстративными и, тем самым, способы, представленные в данном изобретении, ими не ограничиваются. Механизмы действия, с помощью которых анти-1Ь-4К антитела облегчают заболевания, не ограничиваются обсуждаемыми выше механизмами.
Анти-1Ь-4К антитело может ингибировать опосредованный 1Ь-4 приток клеток, вовлеченных в иммунную или воспалительную реакцию. Антитело может действовать, например, путем уменьшения пролиферации, активации, миграции, притока или накопления особого типа клеток, или путем ингибирования биологической реакции, непосредственно или косвенно приписываемой отдельному типу клеток. Примерами отдельных типов клеток являются фибробласты, тучные клетки и эозинофилы.
Как обсуждалось выше, некоторые состояния можно лечить подавлением иммунной реакции ТН2типа. 1Ь-4К ассоциируется с ТН2 реакцией и является одним из цитокинов, секретируемым Т- клеткамихелперами типа 2 (ТН2 клетками). Анти-1Ь-4К антитело может вводиться для уменьшения иммунной реакции ТН2-типа. Можно предположить, что 1Ь-4К антитело уменьшает пролиферацию ТН2 клеток, подавляет ТН2 реакцию, смещает иммунную реакцию к ТН1 реакции или способствует реакции ТН1типа. Антагонисты другого(их) цинокина(ов) ТН2-типа, такого как 1Ь-5, ΙΠ-10 или ΙΠ-13, могут дополнительно вводиться субъектам, у которых имелось нарушение, включающее повышенные уровни таких цитокинов. Хорошо известны методики измерения количества таких цитокинов в субъекте, например в его сыворотке.
- 13 011302
Один вариант осуществления данного изобретения относится к способу ингибирования вызванного 1Ь-4 повреждения эпителия, включающему введение анти-1Ь-4К антитела субъекту, у которого имеется состояние или существует риск его развития, в котором играет роль опосредованное 1Ь-4 разрушение эпителиального барьера.
Отдельные варианты способов, приведенных в данном изобретении, включают введение анти-1Ь-4К антитела для ингибирования вызванного 1Ь-4 повреждения эпителия в желудочно-кишечном тракте или легком. Такие методы могут применяться для предупреждения эпителиального повреждения или для восстановления функции эпителиального барьера (т. е. стимулирование заживления или излечения эпителия). Способность анти-1Ь-4К антитела ингибировать вызванное 1Ь-4 повреждение эпителия может подтвердиться любым количеством соответствующих анализов, таких как описанных в данном изобретении.
Любое воспаление, обусловленное инфекцией (или являющееся результатом ее), можно лечить анти-1Ь-4К антителом. Антитело можно вводить для ингибирования любого вызванного 1Ь-4 компонента воспалительной реакции, являющейся следствием микробной инфекции, например, в желудочнокишечном тракте.
Комбинирование двух или более антител или дериватов антител, или антитела, или деривата антитела и одного или нескольких 1Ь-4, 1Ь-13, 1Ь-4К и/или 1Ь-13К антагонистов (как описано, например, в патентах США И8 Ра!еп!к 5599905; 5840869; 5856296; 5767065; 5717072; 6391581; 5710023; и публикациях 1бхегба е! а1., 1990, 1. Ехр. Меб. 171:861-73; и Мок1еу е! а1., 1989, Се11 59:335-48, полностью приведенных в данном изобретении в качестве ссылок) можно применять в способах и композициях, описанных в данном изобретении.
Методики сайтнаправленного мутагенеза с использованием олигонуклеотидов могут применяться для обеспечения измененного гена, имеющего отдельный кодон, измененный в соответствии с требуемой заменой, делецией или инсерцией. Примеры технических приемов для получения таких изменений описываются в работах \Уа1бег е! а1., 1986, Сеие 42:133; Ваиег е! а1., 1985, Сеие 37:73; Сга1к, Βίο Тесктциек, •Гаииагу 1985, 12-19; 8ιηί11ι е! а1., 1981, Сепебс Епдтееппд: Рг1пс1р1еч апб Ме!кобк, Р1епит Ргекк; и в патентах США И8 Ра1еп1 №№ 4518584 и 4737462. Эти и другие способы могут применяться для получения, например, дериватов анти-1Е-4К антител, которые обладают, например, увеличенной аффинностью, авидностью или специфичностью для 1Ь-4К по сравнению с недериватизированным антителом.
Другие дериваты анти-1Ь-4К антител, в пределах объема изобретения, включают ковалентные или собранные в одно целое конъюгаты анти-1Е-4К антител или их фрагменты с другими протеинами или полипептидами, например, при экспрессии рекомбинантных слитых белков, включающих ксеногенные (гетерогенные) полипептиды слитые с ^концевым или С-концевым полипептидом анти-1Е-4К антитела. Например, конъюгированный пептид может быть ксеногенным (гетерогенным) сигнальным (или лидерным) полипептидом, например, лидером дрожжевого альфа-фактора или пептидом, таким как метка эпитопа. Слитые белки, содержащие анти-1Е-4К антитело, могут содержать пептиды, прибавленные для облегчения очистки или идентификации анти-1Е-4К антитела (например, ро1у-Н1к). Полипептид анти-1Е-4К антитела также может связываться с ЕЬАС пептидом Акр-Туг-Еук-Акр-Акр-Акр-Акр-Ьук (ΌΥΚΌΌΌΌΚ) (8ЕО ГО N0:69), как описано у Норр е! а1., Вю/Тескпо1оду 6:1204, 1988 и в патенте США И8 Ра1еп1 5011912. ЕЬАС пептид является высоко антигенным и обеспечивает эпитоп, обратимо связанный специфическим моноклональным антителом (тАЬ), облегчающим быстрый анализ и легкую очистку экспрессированного рекомбинантного протеина. Реагенты, пригодные для получения слитых белков, в которых ЕЬАС пептид сливается с данным полипептидом, коммерчески доступны (81дта, 8ΐ. Ьошк, М0).
Олигомеры, которые содержат один или несколько полипептидов анти-1Ь-4К антитела, могут применяться в качестве 1Ь-4К антагонистов. Олигомеры могут быть в форме ковалентно-связанных или ковалентно-несвязанных димеров, тримеров или высших олигомеров. Для применения предлагаются олигомеры, содержащие два или несколько полипептидов анти-1Ь-4К антитела, причем один пример является гомодимером. Другие олигомеры включают гетеродимеры, гетеротримеры и т.д.
Один вариант относится к олигомерам, включающим множественные полипептиды анти-1Е-4К антитела, соединенные через ковалентные или нековалентные взаимодействия между остатками пептидов, слитых с полипептидами анти-1Ь-4К антитела. Такие пептиды могут быть пептидными линкерами (спейсерами) или пептидами, которые обладают свойством стимулирования олигомеризации. Лейциновые зипперы и некоторые полипептиды, полученные из антител, находятся среди пептидов, которые могут стимулировать олигомеризацию 1Ь-4К полипептидов, присоединенных к ним, как описано ниже более подробно.
В отдельных вариантах, олигомеры включают от двух до четырех полипептидов анти-1Е-4К антитела. Остатки анти-1Ь-4К антител олигомера могут быть в любой из форм, описанных выше, например вариантах или фрагментах. Предпочтительно, когда олигомеры включают полипептиды анти-1Е-4К антитела, которые обладают 1Ь-4К связывающей активностью.
В одном варианте олигомер получают с применением полипептидов, полученных из иммуноглобулинов. Например, в публикациях АкИкепах! е! а1., 1991, РNА8 И8А 88:10535; Вут е! а1., 1990, №11иге 344:677; и Но11епЬаидк е! а1., 1992 «Сопкбисбоп о£ 1ттипод1оЬи1т Еикюп Рго!етк», ίη Сиггеп! Рго!осо1к ίη 1ттипо1оду, 8ирр1. 4, раде к 10.19.1-10.19.11 было описано приготовление слитых белков, включающих
- 14 011302 некоторые ксеногенные (гетерогенные) полипептиды, слитые с различными частями полипептидов, полученных из антитела (включая Ес домен).
Один способ осуществления изобретения относится к димеру, включающему два слитых белка, созданных сливанием 1Ь-4К. связывающего фрагмента анти-1Ь-4К. антитела с Ес доменом антитела. Димер можно получить, например, вставкой гена слияния, кодирующего слитый белок, в соответствующий вектор экспрессии, экспрессирующий ген слияния в клетках-хозяине, трансформированных с рекомбинантным вектором экспрессии, и дающих возможность экспрессируемому слитому белку для сбора очень близких молекул антител, после чего образуются межцепочечные дисульфидные связи между Ес остатками с образованием димера.
Термин «Ес полипептид», как он применяется в данном изобретении, включает нативные и мутеиновые формы полипептидов, полученных из Ес области антитела. Также включаются процессированные формы таких полипептидов, содержащих шарнирную область, которая стимулирует димеризацию. Слитые белки, включающие Ес остатки (и олигомеры, образованные из них), оказывают преимущество для легкой очистки аффинной хроматографией на колонках с протеином А или протеином С.
Один пригодный Ес полипептид, описанный в заявке РСТ аррйсайои \νϋ 93/10151 (включена в качестве ссылки), является пептидом с одной цепью, простирающейся от Ν-конца шарнирной области до нативного С-конца Ес области человеческого 1дС1 антитела. Другим пригодным Ес полипептидом является Ес мутеин, описанный в патенте США И8 Ра!еи! 5457035 и в публикации Вайт е! а1., 1994, ЕМВО 1. 13:3992-4001. Аминокислотная последовательность данного мутеина идентична аминокислотной последовательности нативной Ес последовательности, представленной в заявке νθ 93/10151, за исключением того, что аминокислота 19 была изменена с Ьеи на А1а, аминокислота 20 была изменена с Ьеи на С1и и аминокислота 22 была изменена с С1у на А1а. Мутеин проявляет уменьшенную аффинность (сродство) к Ес рецепторам.
В другом варианте осуществления изобретения вариабельный участок тяжелой и/или легкой цепи анти-1Ь-4К. антитела может заменяться на вариабельный участок тяжелой и/или легкой цепи антитела.
Наоборот, олигомер является слитым белком, включающим множественные полипептиды анти-Ш4К. антитела с пептидными линкерами (спейсерными пептидами) или без них. Среди пригодных пептидных линкеров имеются линкеры, описанные в патентах США И8 Ра!еик 4751180 и 4935233.
Другой способ приготовления олигомерных дериватов анти-1Ь-4К. антитела включает применение лейцинового зиппера. Доменами лейцинового зиппера являются пептиды, которые стимулируют олигомеризацию протеинов, в которых они находятся. Лейциновые зипперы первоначально идентифицировались в нескольких ДНК-связывающих протеинах. Шапб5с1ш1/ е! а1., 1988, 8с1еисе 240:1759) и с тех пор были найдены в целом ряде различных протеинов. Среди известных лейциновых зипперов имеются встречающиеся в природе пептиды и дериваты их, которые димеризуются или тримеризуются. Примеры доменов лейциновых зипперов, пригодных для продуцирования растворимых олигомерных протеинов, описываются в заявке РСТ аррйсайои νθ 94/10308 и лейциновый зиппер, извлеченный из поверхностноактивного протеина Ό легкого (5игГас1аи1 рго!ет Ό, 8РЭ). описывается в статье Норре е! а1., 1994, ЕЕВ8 Ьейетк 344:191, включенной в данное изобретение в качестве ссылки. Применение модифицированного лейцинового зиппера, который предусматривает стабильную тримеризацию ксеногенного (гетерогенного) протеина, слитого с ним, описывается в публикации ЕаиДоет е! а1., 1994, 8етт. 1ттиио1. 6:267-78. В одном методе рекомбинантные слитые белки, включающие фрагмент анти-1Ь-4К. антитела или дериват, слитый с пептидом лейцинового зиппера, экспрессируют в соответствующих клетках-хозяине и растворимые олигомерные фрагменты или дериваты анти-1Ь-4К. антитела, которые образуются, извлекаются из супернатанта культуры.
Полипептиды анти-1Ь-4К. антитела и слитые белки, описанные в данном изобретении, можно приготовить с помощью любой из целого ряда стандартных методик. Например, полипептиды анти-1Ь-4К. антитела можно очистить от клеток, которые естественно экспрессируют их, или они могут продуцироваться рекомбинатными системами экспрессии, применяя любую известную в данной области методику.
Любая система экспрессии, известная в данной области, может применяться для получения рекомбинантных полипептидов, описанных в данном изобретении. Обычно, клетки-хозяина трансформируются рекомбинантным вектором экспрессии, который включает ДНК, кодирующую нужный полипептид анти-1Ь-4К. антитела. Среди клеток-хозяин, которые могут применяться, имеются прокариоты, дрожжевые и высшие эукариотные клетки. Прокариоты включают грамотрицательные или грамположительные организмы, например Е.со11 или бациллы. Высшие эукариотные клетки включают клетки насекомых и установленные клеточные линии, происходящие от млекопитающих. Примеры соответствующих линий клеток-хозяин млекопитающих включают СО8-7 линию клеток почки обезьяны (АТСС СКТ 1651) (Шихтам е! а1., 1981, Се11 23:175), Ь клетки, 293 клетки, С127 клетки, 3Т3 клетки (АТСС ССЬ 163), клетки яичника китайского хомячка (СЫиеке Натйег оуату, СНО), НеЬа клетки, линии клеток ВНК (АТСС СВЬ 10) и линию клеток СVI/ΕВNА, полученной из линии клеток СУ1 (АТСС ССЬ 70) почки африканской зеленой обезьяны, как описано у МсМайаи е! а1., 1991, ЕМВО 1. 10:2821. Соответствующие клонирующие и экспрессирующие векторы, применяемые с бактериальными, грибковыми, дрожжевыми и клетками-хозяин, относящимися к млекопитающим, описываются у РоиетеН е! а1. (С1ошид Уес!ога: А
- 15 011302
ЬаЬога!огу Мапиа1., Е15СУ1СГ. №\ν Уогк, 1985).
Трансформированные клетки культивируются в условиях, которые стимулируют экспрессию полипептида анти-1Ь-4В антитела, и полипептид очищается с помощью обычных методик очистки протеинов. Одна такая методика очистки включает применение аффинной хроматографии, например, на матрице, имеющей весь или часть 1Б-4К, связанного с ней. Полипептиды, предполагаемые для применения в данном изобретении, включают практически гомогенные рекомбинантные полипептиды анти-1Ь-4В антитела млекопитающих, по существу, несодержащих эндогенных контаминантов.
В одном варианте предлагаются антитела, которые мешают связыванию 1Ь-4 с рецептором 1Ь-4. Такие антитела, называемые неполными (блокирующими) антителами, могут индуцироваться против 1Ь-4К или его фрагмента, варианта или деривата и подвергаться скринингу при обычных проверках на способность мешать связыванию 1Ь-4 с рецептором 1Ь-4. Примеры соответствующих проверок представляют собой испытания, которые проверяют антитела на способность ингибировать связывание 1Ь-4 с клетками, экспрессирующими 1Ь-4К или которые проверяют антитела на способность уменьшать биологический или клеточный ответ, который является следствием связывания 1Ь-4 с клеточной поверхностью 1Ь-4 рецепторов.
Сообщалось, что 1Ь-4К альфа является составной частью некоторых мультисубъединичных комплексов 1Б-13 рецепторов (ΖιιππνδΚί е! а1., 1995, 1. Бю1. СБет. 270:13869; бе Упек, 1998, 1. А11егду С1т. 1ттипо1. 102:165; и Са11агб е! а1., 1996, 1ттипо1оду Тобау, 17:108, каждая из которых включена в данное изобретение в качестве ссылки). Таким образом, в одном способе осуществления изобретения предлагается антитело, которое блокирует связывание 1Ь-4 и также 1Б-13 с клетками. Антитела ингибируют вызванную 1Ь-4 биологическую активность и также ингибируют вызванную 1Б-13 активность и, таким образом, могут применяться при лечении состояний, вызванных каждым из двух или обоими цитокинами. Примеры таких состояний включают 1дЕ-опосредованные состояния - астму, аллергические состояния, аллергический ринит и дерматит, включая атопический дерматит, но выбор состояний этим не ограничивается.
Антитела, которые связываются с 1Б-4Р альфа, могут подвергаться скринингу при различных стандартных проверках для определения мешают ли они связыванию ΣΚ-13 с 1Ь-4К альфа-содержащими 1Ь13 рецепторными комплексами. Антитела могут подвергаться скринингу, например, в анализе связывания или проверяться на способность к ингибированию вызванной 1Ь- 1Б-13 биологической активности. Примеры соответствующего анализа иллюстрируются ниже в примере 2.
Антитела, специфичные для 1Ь-4К альфа, можно приготовить, используя любую методику, известную в данной области техники. См., например, Мопос1опа1 АпбЬоб1е§, НуЬпботак: Α №\ν Оппепбоп ίη Вю1одюа1 Апа1у§е8, Кеппе! е! а1. (ебк.), Р1епит Ргекк, №\ν Уогк (1980); и Ап!1Ьоб1е§: А ЬаЬога!огу Мапиа1., Наг1о\у апб Ьапб (ебк.), Со1б 8рппд НагЬог ЬаЬога!огу Ргекк, Со1б 8рппд КагЬог, ПУ, (1988).
Антиген-связывающие фрагменты антител, описанных в изобретении, могут продуцироваться обычными техническими приемами. Примеры таких фрагментов включают ЕаЬ и Е(аЬ')2 фрагменты, но выбор фрагментов ими не ограничивается. Также рассматриваются фрагменты и дериваты антитела, продуцируемого методами генной инженерии. Если не указано особо, термин «антитело» и «моноклональное антитело», как применяется в данном изобретении, относится как к полным антителам, так и к антиген-связывающим фрагментам и/или их дериватам.
Другие варианты включают химерные антитела, например гуманизированные версии моноклональных антител мышей или крыс. Такие гуманизированные антитела можно приготовить известными методиками, и они имеют преимущество, заключающееся в пониженной иммуногенности при введении антител людям. В одном варианте, гуманизированное моноклональное антитело включает вариабельную область мышиного или крысиного антитела (или весь антигенсвязывающий центр антитела или его часть) и константную область, полученную от человеческого антитела. Или же фрагмент гуманизированного антитела может включать антиген-связывающий центр мышиного или крысиного моноклонального антитела и фрагмент вариабельной области (отсутствие антиген-связывающего центра), полученной от человеческого антитела. Методики продуцирования химерного и других моноклональных антител, полученных генной инженерией, включают методики, описанные у Шесйтапп е! а1., 1988, №11иге 332:323, Ьш е! а1., 1987, Ргос. №11. Асаб. 8с1. И8А 84:3439, Ьатск е! а1., 1989 Вю/Тес1то1оду 7:934 и \Ут1ег е! а1., 1993, Т1Р8 14:139. В другом варианте химерное антитело является СИР. трансплантационным антителом.
Были разработаны методики для генерирования человеческих антител или частично человеческих антител у животных, не относящихся к человеку. Например, получены мыши, у которых один или несколько эндогенных генов иммуноглобулина были инактивированы различными способами. Человеческие гены иммуноглобулина были введены мышам для замены инактивированных мышиных генов. Антитела, продуцированные в животном, включали полипептидные цепи человеческого иммуноглобулина, кодируемого человеческим генетическим материалом, введенным животному. В одном варианте осуществления изобретения, животное, не относящееся к человеку, например трансгенную мышь, иммунизируют 1Ь-4К полипептидом так, чтобы антитела, направленные против 1Ь-4К полипептида, генерировались бы в животном. Одним примером пригодного иммуногена является растворимый человеческий 1Ь4Р, например полипептид, включающий внеклеточную область протеина последовательности 8ЕО ΙΌ
- 16 011302
N0: 2; или другой иммуногенный фрагмент протеина последовательности 8ЕЦ Ш N0: 2.
Примеры методик продуцирования и применения трансгенных животных для продуцирования человеческих антител или частично человеческих антител описываются в патентах США и8 Ра!еп!§ 5814318; 5569825 и 5545806, которые включены в данное изобретение в качестве ссылок.
Другие варианты включают химерные антитела, например гуманизированные версии моноклональных антител мышей или крыс. Такие гуманизированные антитела можно приготовить известными методиками и они имеют преимущество, заключающееся в пониженной иммуногенности при введении антител людям. В одном варианте гуманизированное моноклональное антитело включает вариабельную область мышиного или крысиного антитела (или весь антиген-связывающий центр антитела или его часть) и константную область, полученную от человеческого антитела. Или же фрагмент гуманизированного антитела может включать антиген-связывающий центр мышиного или крысиного моноклонального антитела и фрагмент вариабельной области (отсутствие антиген-связывающего центра), полученной от человеческого антитела. Методики продуцирования химерного и других моноклональных антител, полученных генной инженерией, включают методики, описанные у Втесйшаип е! а1., 1988, №щ.1ге 332:323, Ьш е! а1., 1987, Ргос. Ναι. Асаб. 8с1. И8А 84:3439, Ьатск е! а1., 1989 Вю/Теско1оду 7:934 и ^1п1ет е! а1., 1993, Т1Р8 14:139. В другом варианте, химерное антитело является СИВ трансплантационным антителом.
Были разработаны методики для генерирования человеческих антител или частично человеческих антител у животных, не относящихся к человеку. Например, получены мыши, у которых один или несколько эндогенных генов иммуноглобулина были инактивированы различными способами. Человеческие гены иммуноглобулина были введены мышам для замены инактивированных мышиных генов. Антитела, продуцированные в животном, включали полипептидные цепи человеческого иммуноглобулина, кодируемого человеческим генетическим материалом, введенным животному. В одном варианте осуществления изобретения животное, не относящееся к человеку, например трансгенную мышь, иммунизируют Ш-4В полипептидом так, чтобы антитела, направленные против Ш-4В полипептида, генерировались бы в животном. Одним примером пригодного иммуногена является растворимый человеческий 1Б4В, например полипептид, включающий внеклеточную область протеина последовательности 8ЕЦ Ш N0:2; или другой иммуногенный фрагмент протеина последовательности 8ЕЦ Ш N0:2.
Примеры методик продуцирования и применения трансгенных животных для продуцирования человеческих антител или частично человеческих антител описываются в патентах США И8 Ра!еп!§ 5814318; 5569825 и 5545806, которые включены в данное изобретение в качестве ссылок.
В другом варианте предлагаются моноклональные антитела, которые связываются с Ш-4 рецептором. Моноклональные антитела могут продуцироваться с применением любой методики, известной в данной области техники, например, с помощью иммортализации клеток селезенки, собранных от трансгенного животного после завершения схемы иммунизации. Клетки селезенки могут иммортализироваться с применением любой методики, известной в данной области техники, например, путем слияния их с миеломными клетками для продуцирования гибридом. Миеломные клетки, применяемые в гибридомпродуцирующих методиках слияния, предпочтительно являются не продуцирующими антитела с высокой эффективностью слияния и дефицитами ферментов, которые делают их неспособными к росту в некоторых селективных средах, которые поддерживают рост только нужных слитых клеток (гибридом). Примеры соответствующих клеточных линий, применяемых в мышиных слияниях, включают 8р-20, Р3Х63/Ад8, Р3-Х63-Ад8.653, N8 1/1.А§41, 8р210-А§14, Р0, №0/И, МРС-11, МРС11-Х45-СТС 1.7 и 8194/5ХХ0 Ви1; примеры клеточных линий, применяемых в крысиных слияниях, включают В210.ВСУ3, У3-Ад 1.2.3, 1В983Р и 4В210. Другие клеточные линии, пригодные для слияния клеток, включают И-266, СМ1500-СВС2, ЫСВ-Т0№НМу2 и ИС729-6.
В одном варианте линия гибридомных клеток продуцируется иммунизацией животного (например, трансгенное животное с последовательностями человеческого иммуноглобулина) Ш-4В иммуногеном; сбором клеток селезенки от иммунизированного животного; слиянием собранных клеток селезенки с линией миеломных клеток, тем самым генерируя гибридомные клетки; установлением линий гибридомных клеток из гибридомных клеток и идентифицированием линии гибридомных клеток, которые продуцируют антитело, которое связывает Ш-4В полипептид. Такие линии гибридомных клеток и продуцируемые из них анти-Ш-4В моноклональные антитела относятся к данному изобретению.
Моноклональные антитела, секретируемые линией гибридомных клеток, можно очистить с применением любого технического приема, известного в данной области техники. Гибридомы шАЬ§ могут далее подвергаться скринингу для идентифицирования шАЬ§ с определенными свойствами, такими как способность блокировать вызванную 1Ь-4 и/или Ш-13 активность. Примеры таких скринингов приводятся в примерах 2, 3 и 4.
Другие примеры методик для приготовления антител, направленных против человеческого Ш-4 (включая моноклональные антитела), анализы, с помощью которых блокирующие антитела идентифицируются и методики для генерирования гуманизированных или полученных генной инженерией дериватов анти-Ш-4В антител описываются в патентах США И8 Ра!еп!§ 5041381; 5863537; 5928904 и 5676940, которые включены в данное изобретение в качестве ссылок. Другие примеры антител, которые могут применяться в качестве Ш-4 антагонистов, описываются в заявке XV0 91/09059, также включенной в
- 17 011302 данное изобретение в качестве ссылки.
В другом варианте предлагаются человеческие антитела, которые связывают 1Ь-4К. В одном способе осуществления изобретения человеческие антитела, выращенные (индуцированные) против 1Ь-4К альфа и продуцируемые техническими приемами, включающими применение трансгенных мышей, блокируют связывание 1Ь-4 и также ΣΠ-13 с клетками. Такими антителами являются 1Б-4 антагонисты и дополнительно функционируют в качестве ΣΠ-13 антагонистов.
Антитела, описанные в изобретении, могут включать любую константную область, известную в данной области техники. Константная область легкой цепи может быть, например, константной областью легкой цепи каппа-типа или лямда-типа, например человеческой константной областью легкой цепи каппа-типа или лямда-типа. Константная область тяжелой цепи может быть, например, константными областями тяжелых цепей альфа-, дельта-, эпсилон-, гамма- или мю-типа, например человеческой константной областью тяжелой цепи альфа-, дельта-, эпсилон-, гамма- или мю-типа. В одном варианте осуществления изобретения константная область легкой или тяжелой цепи является фрагментом, дериватом, вариантом или мутеином встречающейся в природе константной области.
Антитела, направленные против 1Ь-4К, можно применять, например, в анализах для детектирования присутствия 1Ь-4К полипептидов или ίη У1!го или ίη νί\Ό. Антитела также могут применяться при очистке 1Б-4К протеинов с помощью иммуноаффинной хроматографии. Те антитела, которые дополнительно могут блокировать связывание 1Ь-4 с 1Ь-4К, могут применяться для ингибирования биологической активности, которая является следствием такого связывания. Блокирующие (неполные) антитела находят применение в способах, описанных в данном изобретении. Такие антитела, которые функционируют в качестве 1Ь-4 антагонистов, могут применяться в лечении любого вызванного 1Ь-4 состояния, включая астму и аллергии, например аллергический ринит, контактный дерматит и атопический дерматит, но выбор состояния этим не ограничивается. В одном варианте при лечении таких состояний применяют человеческое анти-1Ь-4К моноклональное антитело, генерированное с помощью методик, включающих иммунизацию трансгенных мышей.
Антитела могут применяться в методике ίη У1!го, или вводиться ίη νί\Ό для ингибирования вызванной 1Ь-4 биологической активности. Таким образом, можно лечить нарушения, вызванные или обострившиеся (непосредственно или косвенно) при взаимодействии 1Ь-4 с клеточной поверхностью 1Б-4 рецепторов, примеры которых приводятся выше. В одном варианте данное изобретение предлагает терапевтический способ, включающий введение ίη У11го 1Ь-4 и/или ΣΠ-13 блокирующего антитела млекопитающему, который нуждается в нем, в количестве, эффективном для уменьшения вызванной 1Б-4 и/или ΣΠ-13 биологической активности.
Антитела, описанные в изобретении, включают частично человеческие или полностью человеческие моноклональные антитела, которые ингибируют биологическую активность 1Б-4 и также ингибируют биологическую активность 1Б-13. Один вариант относится к человеческому моноклональному антителу, которое, по меньшей мере, частично блокирует связывание 1Б-4 с клеткой и, по меньшей мере, частично блокирует связывание ΣΠ-13 с клеткой. В одном варианте антитела генерируются путем иммунизации трансгенной мыши 1Б-4 рецептором иммуногена. В другом варианте иммуноген является полипептидом человеческого 1Б-4 рецептора. В данном изобретении также приводятся линии гибридомных клеток, полученных из таким образом иммунизированных мышей, где гибридома секретирует моноклональное антитело, которое связывает 1Б-4К.
Хотя человеческие, частично человеческие и гуманизированные антитела будут пригодны для многих применений, в особенности, тех, которые включают введение антитела человеку, другие типы антител будут пригодны для других применений. Не относящиеся к человеку антитела, описанные в изобретении, можно, например, получить из любого животного, продуцирующего антитело, такого как мышь, крыса, кролик, козел, осел или неотносящийся к человеку примат (такой как обезьяна (например, собакоподобная или макака-резус) или человекообразная обезьяна (например, шимпанзе)). Не относящиеся к человеку антитела, описанные в данном изобретении, могут применяться, например, ίη ν 11го и в применениях, основанных на культуре клеток, или в любом другом применении, где иммунная реакция с антителом, описанным в данном изобретении, не происходит или является недостаточной, может предотвращаться, не имеет значения, или является нужной. В другом варианте не относящееся к человеку антитело вводят не относящемуся к человеку субъекту. В другом варианте не относящееся к человеку антитело не выявляет иммунной реакции в не относящемся к человеку субъекте. В другом варианте не относящееся к человеку антитело состоит из того же вида, что и не относящийся к человеку субъект, например антитело мыши, описанное в данном изобретении, вводят мыши. Антитело из отдельного вида можно получить, например, путем иммунизации животного этим видом с нужным иммуногеном (например, полипептид растворимого 1Б-4 рецептора) или применением искусственной системы для генерирования антител этого вида (например, бактериальная система или система на основе отображения фага для генерирования антител отдельного вида) или путем превращения антитела из одного вида в антитело из другого вида заменой, например, константной области антитела константной областью из другого вида, или заменой одного или нескольких аминокислотных остатков антитела с тем, чтобы оно более близко походило бы на последовательность антитела из другого вида. В одном варианте антитело является химерным антите
- 18 011302 лом, включающим аминокислотные последовательности, полученные из антител из двух или нескольких различных видов.
В одном варианте предлагаются антитела, которые включают вариабельную область легкой цепи, которую выбирают из группы, состоящей из Ь1-Ь6, и/или вариабельную область тяжелой цепи, которую выбирают из группы, состоящей из Н1-Н24, и их фрагменты, дериваты, мутеины и варианты (см. фиг. 2 и 3). Такое антитело можно обозначить, применяя номенклатуру «ЬхНу», где х относится к номеру вариабельной области легкой цепи и у относится к номеру вариабельной области тяжелой цепи, как их маркируют на фиг. 3. Например, Ь4Н17 относится к антителу с вариабельной областью легкой цепи, включающей аминокислотную последовательность Ь4, и с вариабельной областью тяжелой цепи, включающей аминокислотную последовательность Н17, как показано на фиг. 3. Фиг. 2 и 3 также показывают расположение СОВ области и остовной области каждой их этих последовательностей вариабельной области. Антитела, описанные в изобретении, включают, например, Ь2Н1, Ь3Н1, Ь4Н1, Ь5Н1, Ь1Н2, Ь1Н3, Ь1Н4, Ь1Н5, Ь1Н6, Ь1Н7, Ь1Н8, Ь1Н9, Ь1Н10, Ь1Н11, Ь2Н4, Ь2Н12, Ь2Н13, Ь2Н14, Ь6Н1, Ь2Н2, Ь2Н3, Ь2Н6, Ь2Н7, Ь2Н8, Ь2Н9, Ь2Н10 и Ь2Н11. Также могут применяться дополнительные вариабельные последовательности антитела, например вариабельные последовательности человеческого антитела. См., например, 8Ь1а!!его е! а1., 1998, 1ттипо!есйпо1оду 3:271-78, бе Наагб е! а1., 1999, 1. Вю1. Сйет. 274:1821830.
В одном варианте данное изобретение предлагает антитело, которое включает вариабельную область легкой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, которая отличается от последовательности Ь1 только одним или несколькими остатками, где каждая из последовательностей Ь2-Ь6 отличается от последовательности Ь1 (например, последовательность антитела отличается от последовательности Ь1 при остатках 1, 4, 7 и т.д.). В другом варианте последовательность вариабельной области легкой цепи содержит по меньшей мере один аминокислотный остаток любой из последовательностей Ь2-Ь6 в положениях, где он отличается от последовательности Ь1 (например, последовательность включает остаток(ки) ЕШ, Ь4М, 87Т и т.д.). В другом варианте последовательность отличается от последовательности Ь1 по меньшей мере в одном СОВ (например, СОВ1, СОВ2 или СОВ3). В другом варианте последовательность отличается от последовательности Ь1 по меньшей мере в одном ЕВ (например, РВ1, РВ2, РВ3 или РВ4). В другом варианте изобретение предлагает антитело, включающее вариабельную область тяжелой цепи, содержащей последовательность аминокислот, которая отличается от последовательности Н1 только при одном или нескольких остатках, где каждая из последовательностей Н2-Н24 отличается от последовательности Н1 (например, последовательность антитела отличается от последовательности Н1 при остатках 6, 13, 24 и т.д.). В другом варианте последовательность вариабельной области тяжелой цепи, включает по меньшей мере один аминокислотный остаток любой из последовательностей Н2-Н24 в положении, где оно отличается от последовательности Н1 (например, последовательность включает остаток(ки) 06Е, Н13С, С24А и т.д.). В другом варианте последовательность отличается от последовательности Н1 по меньшей мере в одном СЭВ (например, СЭВ2 или СЭВ3). В другом варианте последовательность отличается от последовательности Н1 по меньшей мере в одном РВ (например, РВ1 или РВ3).
В другом варианте данное изобретение предлагает антитело, включающее аминокислотную последовательность, выбираемую из группы, состоящей из гипервариабельного участка (сотр1етеп!ап!у бе!егт1шпд гедюп, СЭВ) 1 легкой цепи, которая отличается инсерцией, делецией или заменой не более чем 3, 2, 1 или 0 аминокислотных остатков из последовательности, выбираемой из группы, состоящей из остатков 24-35 8Е0 ΙΌ N0: 6, где N при остатке 8 не заменяется на 8; остатков 24-35 8Е0 ΙΌ N0: 8, где Т при остатке 5 не заменяется на 8 и/или N при остатке 7 не заменяется на 8 и/или Ό при остатке 9 не заменяется на 8; остатков 24-35 8Е0 ΙΌ N0: 10, где Ό при остатке 9 не заменяется на 8; остатков 24-35 8Е0 ΙΌ N0: 12, где N при остатке 7 не заменяется на 8 и/или N при остатке 9 не заменяется на 8; и остатков 24-35 8Е0 ΙΌ N0: 14, где С при остатке 7 не заменяется на 8; СЭВ2 легкой цепи, которая отличается инсерцией, делецией или заменой не более чем 3, 2, 1 или 0 аминокислотных остатков из последовательности, выбираемой из группы, состоящей из остатков 51-57 8Е0 ΙΌ N0: 6, где Р при остатке 7 не заменяется на Т; остатков 51-57 8Е0 ΙΌ N0: 10, где 8 при остатке 7 не заменяется на Т; и остатков 51-57 8Е0 ΙΌ N0: 12, где Т при остатке 2 не заменяется на А и/или Υ при остатке 4 не заменяется на 8; СЭВ3 легкой цепи, которая отличается инсерцией, делецией или заменой не более чем 3, 2, 1 или 0 аминокислотных остатков из последовательности, выбираемой из группы, состоящей из остатков 90-99 8Е0 ΙΌ N0: 6, где Ό при остатке 4 не заменяется на С, Н при остатке 5 не заменяется на 8, А при остатке 7 не заменяется на Р и/или С при остатке 8 не заменяется на Р; остатков 90-99 8Е0 ΙΌ N0: 8, где В при остатке 5 не заменяется на 8; и остатков 90-99 8Е0 ΙΌ N0: 14, где М при остатке 10 не заменяется на Т; СОВ2 тяжелой цепи, которая отличается инсерцией, делецией или заменой не более чем 3 аминокислотных остатков из последовательности остатков 50-65 8Е0 ΙΌ N0: 18, где 8 при остатке 9 не заменяется на N и СЭВ3 тяжелой цепи, которая отличается инсерцией, делецией или заменой не более чем 3, 2, 1 или 0 аминокислотных остатков из последовательности, выбираемой из группы, состоящей из остатков 98-104 8Е0 ΙΌ N0: 18, где Т при остатке 6 не заменяется на Ό и/или Н при остатке 7 не заменяется на Υ; остатков 98104 8Е0 ΙΌ N0: 20, где V при остатке 4 не заменяется на Υ, Υ при остатке 5 не заменяется на Р, N при остатке 6 не заменяется на Ό и/или N при остатке 7 не заменяется на Υ; остатков 98-104 8Е0 ΙΌ N0: 22,
- 19 011302 где Р при остатке 6 не заменяется на Ό и/или А при остатке 7 не заменяется на Υ; остатков 98-104 8ЕО ГО N0: 24, где Т при остатке 6 не заменяется на Ό и/или К при остатке 7 не заменяется на Υ; остатков 98104 8Е0 ГО N0: 26, где Υ при остатке 5 не заменяется на Е; остатков 98-104 8Е0 ГО N0: 30, где А при остатке 4 не заменяется на Υ; и остатков 98-104 8ЕЦ ГО N0: 34, где А при остатке 4 не заменяется на Υ и/или Υ при остатке 5 не заменяется на Е; где антитело связывается с 1Ь-4 рецептором альфа.
В другом варианте антитело ингибирует связывание 1Ь-4 с 1Ь-4 рецептором. В другом способе осуществления изобретения антитело ингибирует связывание ΣΕ-13 с ΣΕ-13 рецептором. В другом варианте антитело ингибирует связывание Ш-4 с Ш-4 рецептором и [Ш-13 с 1Ш-13 рецептором. В другом варианте антитело специфично связывается с Ш-4 рецептором альфа.
В другом варианте антитело включает два или три таких гипервариабельных участков (СЭЕ) легкой цепи.
В другом варианте антитело далее содержит остовный сегмент (Ггате^огк 5едтеп1. ЕК), включающий последовательность, выбираемую из группы, состоящей из остовного сегмента (ЕК) 1 легкой цепи, которая отличается инсерцией, делецией или заменой не более чем 3, 2, 1 или 0 аминокислотных остатков из последовательности, выбираемой из группы, состоящей из остатков 1-23 8ЕЦ ΣΌ N0:4; остатков 1-23 8ЕЦ ΣΌ N0: 10; остатков 1-23 8ЕЦ ΣΌ N0: 12; и остатков 1-23 8ЕЦ ГО N0: 14; ЕК2 легкой цепи, которая отличается инсерцией, делецией или заменой не более чем 3, 2, 1 или 0 аминокислотных остатков из последовательности, выбираемой из группы, состоящей из остатков 36-50 8ЕЦ ΣΌ N0: 4; остатков 3650 8ЕЦ ΣΌ N0: 6 и остатков 36-50 8ЕЦ ΣΌ N0: 14; ЕК3 легкой цепи, которая отличается инсерцией, делецией или заменой не более чем 3, 2, 1 или 0 аминокислотных остатков из последовательности, выбираемой из группы, состоящей из остатков 58-89 8ЕЦ ΣΌ N0: 4; остатков 58-89 8ЕЦ ΣΌ N0: 10; и остатков 5889 8ЕЦ ΣΌ N0: 12; ЕК4 легкой цепи, которая отличается инсерцией, делецией или заменой не более чем 3, 2, 1 или 0 аминокислотных остатков из последовательности, выбираемой из группы, состоящей из остатков 100-109 8ЕЦ ГО N0: 4; остатков 100-109 8ЕЦ ΣΌ N0: 8 и остатков 100-109 8ЕЦ ΣΌ N0: 12; ЕК1 тяжелой цепи, которая отличается инсерцией, делецией или заменой не более чем 3, 2, 1 или 0 аминокислотных остатков из последовательности, выбираемой из группы, состоящей из остатков 1-30 8ЕЦ ΣΌ N0: 16 и остатков 1-30 8ЕЦ ΣΌ N0: 42; ЕК2 тяжелой цепи, которая отличается инсерцией, делецией или заменой не более чем 3, 2, 1 или 0 аминокислотных остатков из последовательности остатков 36-49 8ЕЦ ΣΌ N0: 16; ЕК3 тяжелой цепи, которая отличается инсерцией, делецией или заменой не более чем 3, 2, 1 или 0 аминокислотных остатков из последовательности, выбираемой из группы, состоящей из остатков 66-97 8ЕЦ ΣΌ N0: 16; остатков 66-97 8ЕЦ ΣΌ N0: 18 и остатков 66-97 8ЕЦ ΣΌ N0: 42; и ЕК4 тяжелой цепи, которая отличается инсерцией, делецией или заменой не более 3 аминокислотных остатков из последовательности остатков 105-115 8ЕЦ ГО N0: 16.
В другом варианте антитело включает вариабельную область легкой цепи, которая по меньшей мере на 80, 85, 90, 95 или 100% идентична последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕЦ ΣΌ N0: 6, 8, 10, 12 и 14, при условии, что вариабельная область легкой цепи не включает последовательность 8Е0 ΣΌ N0: 4.
В другом варианте антитело включает вариабельную область тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 80, 85, 90, 95 или 100% идентична последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕО ΣΌ N0: 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 и 62 при условии, что вариабельная область тяжелой цепи не включает последовательность 8ЕЦ ГО N0: 16.
В другом варианте данное изобретение предлагает фрагмент такого антитела, где фрагмент связывается с ΣΕ-4 рецептором альфа.
В одном варианте отдельные антитела по предлагаемому изобретению выбирают из группы, состоящей из Ь2Н1; антитела, которое является перекрестно-реактивным Ь2Н1; антитела, которое связывается с тем же самым эпитопом, что и Ь2Н1; антитела, которое конкурирует с Ь2Н1 за связывание с клеткой, которая экспрессирует человеческий ΣΕ-4Κ; антитела, которое обладает биологической активностью Ь2Н1; и антиген-связывающего домена (включая один, полученный из рекомбинантных средств) Ь2Н1. В одном варианте антитело имеет связывающую аффинность (сродство) к человеческому ΣΕ-4Κ, которая, по существу, эквивалентна связывающей аффинности (сродству) Ь2Н1 к человеческому ΣΕ-4Κ. Линии гибридомных клеток, которые продуцируют любые такие антитела, также предлагаются в данном изобретении.
Одним примером биологической активности Ь2Н1 является способность функционировать в качестве и ΣΕ-4 антагониста, и ΣΕ-13 антагониста. В одном варианте антитело, описанное в изобретении, обладает ΣΕ-4 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь2Н1; и обладает ΣΕ-13 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь2Н1. Такую активность можно измерить в любом пригодном стандартном анализе (например, как измерено в СГО23 экспрессионном анализе, описанном в примере 2).
Гипервариабельные участки (сотр1етеп[ап[у 6е1егтттд гедюпк, СГОШ) данного антитела можно идентифицировать, используя систему, описанную КаЬа1 е1 а1. ίη 8ес.|иепсе5 оГ РгсИепъ оГ Σттиηο1οд^са1 Σηΐοκδΐ, 54Ь Е6., υδ Эерк оГ НеаИЪ апб Нитап 8еМсе§, РН8, МН, МН РиЫюабоп по. 91-3242, 1991. Отдельные варианты антител, описанных в данном изобретении, включают в пределах вариабельной облас
- 20 011302 ти их легкой цепи по меньшей мере один из гипервариабельных участков (ί'ΌΒδ) или гипервариабельные участки, имеющиеся в легкой цепи Ь2Н1. ΟΌΚδ Ь2Н1 обсуждаются в примере 5. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области легкой цепи Ь2Н1: аминокислотные остатки 24-35; остатки 51-57 и остатки 90-99 8ЕО ΙΌ N0: 6. Отдельные антитела, описанные в изобретении, включают в пределах вариабельной области их тяжелой цепи по меньшей мере один из ΟΌΚδ, имеющийся в тяжелой цепи Ь2Н1. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области тяжелой цепи: остатки 31-35; остатки 50-65 и остатки 98-104 8Е0 ΙΌ N0: 16.
ДНК последовательность вариабельной области легкой цепи Ь2Н1 присутствует в 8Е0 ΙΌ N0: 5 и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8Е0 ΙΌ N0: 6. ДНК последовательность вариабельной области тяжелой цепи Ь2Н1 присутствует в 8Е0 ΙΌ N0: 15 и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8Е0 ΙΌ N0: 16. Антитела, описанные в данном изобретении, включают антитела, которые содержат в их легкой цепи 8Е0 ΙΌ N0: 6; и антитела, которые дополнительно или альтернативно содержат в их тяжелой цепи 8Е0 ΙΌ N0: 16, но выбор этим не ограничивается.
В другом варианте отдельные антитела, описанные в изобретении, выбирают из группы, состоящей из Ь3Н1; антитела, которое является перекрестно-реактивным с Ь3Н1; антитела, которое связывается с тем же самым эпитопом, что и Ь3Н1; антитело, которое конкурирует с Ь3Н1 за связывание с клеткой, которая экспрессирует человеческий ΙΕ-4Β; антитела, которое обладает биологической активностью Ь3Н1; и антиген-связывающего домена любого из вышеприведенных антител. В одном варианте антитело имеет связывающую аффинность (сродство) к человеческому Ш-4 Я которая, по существу, эквивалентна связывающей аффинности (сродству) Ь3Н1 к человеческому ΙΕ-4Κ. Линии гибридомных клеток, которые продуцируют любые такие антитела, также предлагаются в данном изобретении.
Одним примером биологической активности Ь3Н1 является способность функционировать в качестве и ΙΕ-4 антагониста, и ΙΕ-13 антагониста. В одном варианте антитело, описанное в изобретении, обладает ΙΕ-4 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь3Н1; и обладает ΙΕ-13 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь3Н1. Такую активность можно измерить в любом пригодном стандартном анализе (например, как измерено в ΟΌ23 экспрессионном анализе, описанном в примере 2).
В данном изобретении предлагаются Ι§04 антитела, полученные из Ь3Н1. Другой вариант относится к Ι§Μ антителам, полученным из Ь3Н1. В данной области известны методики переключения (изменения) подкласса или изотипа антитела. Такие методики могут включать, например, технологию рекомбинантной ДНК, тем самым ДНК, кодирующая полипептидные цепи антитела, которым присваивается нужный подкласс, заменяется ДНК, кодирующей соответствующую полипептидную цепь исходного антитела.
ДНК последовательность вариабельной области легкой цепи Ь3Н1 присутствует в 8Е0 ΙΌ N0: 7 и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8Е0 ΙΌ N0: 8. ДНК последовательность вариабельной области тяжелой цепи Ь3Н1 присутствует в виде 8Е0 ΙΌ N0: 15, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8Е0 ΙΌ N0: 16. Антитела, описанные в данном изобретении, включают антитела, которые содержат в их легкой цепи остатки 1-109 8Е0 ΙΌ N0: 8; и антитела, которые дополнительно или альтернативно содержат в их тяжелой цепи остатки 1-115 8Е0 ΙΌ N0: 16, но выбор этим не ограничивается.
Отдельные варианты антител, описанных в изобретении, включают в пределах вариабельной области их легкой цепи по меньшей мере один из гипервариабельных участков (ΟΌΚδ) или гипервариабельные участки, имеющиеся в легкой цепи Ь3Н1. ΟΌΚδ Ь3Н1 обсуждаются в примере 5. Таким образом, среди антител, приведенных в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области легкой цепи: аминокислотные остатки 24-35; остатки 51-57 и остатки 90-99 8Е0 ΙΌ N0: 8. Отдельные антитела, описанные в изобретении, включают в пределах вариабельной области их тяжелой цепи по меньшей мере один из ΟΌΚδ, имеющийся в тяжелой цепи Ь3Н1. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области тяжелой цепи: остатки 31-35; остатки 50-65 и остатки 98-104 8Е0 ΙΌ N0: 16.
В другом варианте отдельные антитела, описанные в изобретении, выбирают из группы, состоящей из Ь4Н1; антитела, которое является перекрестно-реактивным с Ь4Н1; антитела, которое связывается с тем же самым эпитопом, что и Ь4Н1; антитела, которое конкурирует с Ь4Н1 за связывание с клеткой, которая экспрессирует человеческий ΙΕ-4Β; антитела, которое обладает биологической активностью Ь4Н1; и антиген-связывающего домена любого из вышеприведенных антител. В одном варианте антитело имеет связывающую аффинность (сродство) к человеческому Ш-4Я которая, по существу, эквивалентна связывающей аффинности (сродству) Ь4Н1 к человеческому ΙΕ-4Κ. Линии гибридомных клеток, которые продуцируют любые такие антитела, также предлагаются в данном изобретении.
Одним примером биологической активности Ь4Н1 является способность функционировать в качестве и ΙΕ-4 антагониста и ГЛ-13 антагониста. В одном варианте антитело, описанное в изобретении, обла- 21 011302 дает 1Ь-4 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь4Н1; и обладает ГЬ-13 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь4Н1. Такую активность можно измерить в любом пригодном стандартном анализе (например, как измерено в СЭ23 экспрессионном анализе, описанном в примере 2).
ДНК последовательность вариабельной области легкой цепи Ь4Н1 присутствует в 8ЕО ΙΌ N0: 9 и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8Е0 ΙΌ N0: 10. ДНК последовательность вариабельной области тяжелой цепи Ь4Н1 присутствует в виде 8Е0 ΙΌ N0: 15, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8Е0 ΙΌ N0: 16. Антитела, описанные в данном изобретении, включают антитела, которые содержат в их легкой цепи остатки 1-109 8Е0 ΙΌ N0: 10; и антитела, которые дополнительно или альтернативно содержат в их тяжелой цепи остатки 1-115 8Е0 ΙΌ N0: 16, но выбор этим не ограничивается.
Отдельные варианты антител, описанных в изобретении, включают в пределах вариабельной области их легкой цепи по меньшей мере один из гипервариабельных участков (СЭЮ) или гипервариабельные участки, имеющиеся в легкой цепи Ь4Н1. СЭЮ Ь4Н1 обсуждаются в примере 5. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области легкой цепи: аминокислотные остатки 24-35; остатки 51-57 и остатки 90-99 8Е0 ΙΌ N0: 10. Отдельные антитела, предлагаемые в изобретении, включают в пределах вариабельной области их тяжелой цепи по меньшей мере один из СЭЮ имеющихся в тяжелой цепи Ь4Н1. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области тяжелой цепи: остатки 31-35; остатки 50-65 и остатки 99-104 8Е0 ΙΌ N0: 16.
В другом варианте отдельные антитела, описанные в изобретении, выбирают из группы, состоящей из Ь5Н1; антитела, которое является перекрестно-реактивным с Ь5Н1; антитела, которое связывается с тем же самым эпитопом, что и Ь5Н1; антитела, которое конкурирует с Ь5Н1 за связывание с клеткой, которая экспрессирует человеческий ГЬ-4К; антитела, которое обладает биологической активностью Ь5Н1; и антиген-связывающего домена любого из вышеприведенных антител. В одном варианте антитело имеет связывающую аффинность (сродство) к человеческому ΙΕ-4Κ, которая, по существу, эквивалентна связывающей аффинности (сродству) Ь5Н1 к человеческому ГЬ-4К. Линии гибридомных клеток, которые продуцируют любые такие антитела, также предлагаются в данном изобретении.
Одним примером биологической активности Ь5Н1 является способность функционировать в качестве и ГЬ-4 антагониста и ГЬ-13 антагониста. В одном варианте антитело, описанное в изобретении, обладает ГЬ-4 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь5Н1; и обладает ГЬ-13 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь5Н1. Такую активность можно измерить в любом пригодном стандартном анализе (например, как измерено в СЭ23 экспрессионном анализе, описанном в примере 2).
ДНК последовательность вариабельной области легкой цепи Ь5Н1 присутствует в 8Е0 ΙΌ N0: 11 и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8Е0 ΙΌ N0: 12. ДНК последовательность вариабельной области тяжелой цепи Ь5Н1 присутствует в виде 8Е0 ΙΌ N0: 15, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8Е0 ΙΌ N0: 16. Антитела, описанные в данном изобретении, включают антитела, которые содержат в их легкой цепи остатки 1-109 8Е0 ΙΌ N0: 12; и антитела, которые дополнительно или альтернативно содержат в их тяжелой цепи остатки 1-115 8Е0 ΙΌ N0: 16, но выбор этим не ограничивается.
Отдельные варианты антител, описанных в изобретении, включают в пределах вариабельной области их легкой цепи по меньшей мере один из гипервариабельных участков (СЭЮ) или гипервариабельные участки, имеющиеся в легкой цепи Ь5Н1. СЭЮ Ь5Н1 обсуждаются в примере 5. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области легкой цепи: аминокислотные остатки 24-35; остатки 51-57 и остатки 90-99 8Е0 ΙΌ N0: 12. Отдельные антитела, предлагаемые в изобретении, включают в пределах вариабельной области их тяжелой цепи по меньшей мере один из СЭЮ имеющихся в тяжелой цепи Ь5Н1. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области тяжелой цепи: остатки 31-35; остатки 50-65 и остатки 98-104 8Е0 ΙΌ N0: 16.
В другом варианте отдельные антитела, описанные в изобретении, выбирают из группы, состоящей из Ь1Н2; антитела, которое является перекрестно-реактивным с Ь1Н2; антитела, которое связывается с тем же самым эпитопом, что и Ь1Н2; антитела, которое конкурирует с Ь1Н2 за связывание с клеткой, которая экспрессирует человеческий ГЬ-4К; антитела, которое обладает биологической активностью Ь1Н2; и антиген-связывающего домена любого из вышеприведенных антител. В одном варианте антитело имеет связывающую аффинность (сродство) к человеческому ]Ь-4К, которая, по существу, эквивалентна связывающей аффинности (сродству) Ь1Н2 к человеческому ГЬ-4К. Линии гибридомных клеток, которые продуцируют любые такие антитела, также предлагаются в данном изобретении.
Одним примером биологической активности Ь1Н2 является способность функционировать в качестве и ГЬ-4 антагониста, и ГЬ-13 антагониста. В одном варианте антитело, описанное в изобретении, об- 22 011302 ладает 1Ь-4 блокирующей активностью. практически эквивалентной активности Ь1Н2; и обладает 1ГО-13 блокирующей активностью. практически эквивалентной активности Ь1Н2. Такую активность можно измерить в любом пригодном стандартном анализе (например. как измерено в СЭ23 экспрессионном анализе. описанном в примере 2).
ДНК последовательность вариабельной области легкой цепи Ь1Н2 присутствует в 8ЕО ГО Ν0: 3. и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8ЕО ГО Ν0: 4. ДНК последовательность вариабельной области тяжелой цепи Ь1Н2 присутствует в виде 8ЕО ГО Ν0: 17. и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8ЕО ГО Ν0: 18. Антитела. описанные в данном изобретении. включают антитела. которые содержат в их легкой цепи остатки 1-109 8ЕО ΙΌ Ν0: 4; и антитела. которые дополнительно или альтернативно содержат в их тяжелой цепи остатки 1-115 8ЕО ГО Ν0: 18. но выбор этим не ограничивается.
Отдельные варианты антител. описанных в изобретении. включают в пределах вариабельной области их легкой цепи по меньшей мере один из гипервариабельных участков (СЭКк) или гипервариабельные участки. имеющиеся в легкой цепи Ь1Н2. СЭКк Ь1Н2 обсуждаются в примере 5. Таким образом. среди антител. предлагаемых в данном изобретении. имеются антитела. включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области легкой цепи: аминокислотные остатки 24-35; остатки 51-57 и остатки 90-99 8ЕО ГО Ν0: 4. Отдельные антитела. описанные в изобретении. включают в пределах вариабельной области их тяжелой цепи по меньшей мере один из СЭКк. имеющихся в тяжелой цепи Ь1Н2. Таким образом. среди антител. предлагаемых в данном изобретении. имеются антитела. включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области тяжелой цепи: остатки 31-35; остатки 50-65 и остатки 98-104 8ЕО ΙΌ Ν0: 18.
В другом варианте отдельные антитела. описанные в изобретении. выбирают из группы. состоящей из Ь1Н3; антитела. которое является перекрестно-реактивным с Ь1Н3; антитела. которое связывается с тем же самым эпитопом. что и Ь1Н3; антитела. которое конкурирует с Ь1Н3 за связывание с клеткой. которая экспрессирует человеческий ГО-4К; антитела. которое обладает биологической активностью Ь1Н3; и антиген-связывающего домена любого из вышеприведенных антител. В одном варианте антитело имеет связывающую аффинность (сродство) к человеческому ГО-4К. которая. по существу. эквивалентна связывающей аффинности (сродству) Ь1Н3 к человеческому ГО-4К. Линии гибридомных клеток. которые продуцируют любые такие антитела. также предлагаются в данном изобретении.
Одним примером биологической активности Ь1Н3 является способность функционировать в качестве и ГО-4 антагониста. и ГО-13 антагониста. В одном варианте антитело. описанное в изобретении. обладает ГО-4 блокирующей активностью. практически эквивалентной активности Ь1Н3; и обладает ГО-13 блокирующей активностью. практически эквивалентной активности Ь1Н3. Такую активность можно измерить в любом пригодном стандартном анализе (например. как измерено в СЭ23 экспрессионном анализе. описанном в примере 2).
ДНК последовательность вариабельной области легкой цепи Ь1Н3 присутствует в 8ЕО ГО Ν0: 3. и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8ЕО ГО Ν0: 4. ДНК последовательность вариабельной области тяжелой цепи Ь1Н3 присутствует в виде 8ЕО ГО Ν0: 19. и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8ЕО ГО Ν0: 20. Антитела. описанные в данном изобретении. включают антитела. которые содержат в их легкой цепи остатки 1-109 8ЕО ΙΌ Ν0: 4; и антитела. которые дополнительно или альтернативно содержат в их тяжелой цепи остатки 1-115 8ЕО ГО Ν0: 20. но выбор этим не ограничивается.
Отдельные варианты антител. описанных в изобретении. включают в пределах вариабельной области их легкой цепи по меньшей мере один из гипервариабельных участков (СЭКк) или гипервариабельные участки. имеющиеся в легкой цепи Ь1Н3. СЭКк Ь1Н3 обсуждаются в примере 5. Таким образом. среди антител. предлагаемых в данном изобретении. имеются антитела. включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области легкой цепи: аминокислотные остатки 24-35; остатки 51-57 и остатки 90-99 8ЕО ГО Ν0:4. Отдельные антитела. предлагаемые в данном изобретении. включают в пределах вариабельной области их тяжелой цепи по меньшей мере один из СЭКк. имеющихся в тяжелой цепи Ь1Н3. Таким образом. среди антител. предлагаемых в данном изобретении. имеются антитела. включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области тяжелой цепи: остатки 31-35; остатки 50-65 и остатки 98-104 8ЕО ГО Ν0: 20.
В другом варианте отдельные антитела. описанные в изобретении. выбирают из группы. состоящей из Ь1Н4; антитела. которое является перекрестно-реактивным с Ь1Н4; антитела. которое связывается с тем же самым эпитопом. что и Ь1Н4; антитела. которое конкурирует с Ь1Н4 за связывание с клеткой. которая экспрессирует человеческий ГО-4К; антитела. которое обладает биологической активностью Ь1Н4; и антиген-связывающего домена любого из вышеприведенных антител. В одном варианте антитело имеет связывающую аффинность (сродство) к человеческому ГО-4К. которая. по существу. эквивалентна связывающей аффинности (сродству) Ь1Н4 к человеческому ГО-4К. Линии гибридомных клеток. которые продуцируют любые такие антитела. также предлагаются в данном изобретении.
Одним примером биологической активности Ь1Н4 является способность функционировать в качестве и ГО-4 антагониста. и ГО-13 антагониста. В одном варианте антитело. описанное в изобретении. об- 23 011302 ладает ΙΤ-4 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь1Н4; и обладает ΙΠ-13 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь1Н4. Такую активность можно измерить в любом пригодном стандартном анализе (например, как измерено в СЭ23 экспрессионном анализе, описанном в примере 2).
ДНК последовательность вариабельной области легкой цепи Ь1Н4 присутствует в 8ЕО ΙΌ N0: 3, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8Е0 ΙΌ N0: 4. ДНК последовательность вариабельной области тяжелой цепи Ь1Н4 присутствует в виде 8Е0 ΙΌ N0: 21, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8Е0 ΙΌ N0: 22. Антитела, описанные в данном изобретении, включают антитела, которые содержат в их легкой цепи остатки 1-109 8Е0 ΙΌ N0: 4; и антитела, которые дополнительно или альтернативно содержат в их тяжелой цепи остатки 1-115 8Е0 ΙΌ N0: 22, но выбор этим не ограничивается.
Отдельные варианты антител, описанных в изобретении, включают в пределах вариабельной области их легкой цепи по меньшей мере один из гипервариабельных участков (СЭЮ) или гипервариабельные участки, имеющиеся в легкой цепи Ь1Н4.
СЭЮ Ь1Н4 обсуждаются в примере 5. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области легкой цепи: аминокислотные остатки 24-35; остатки 51-57 и остатки 90-99 8Е0 ΙΌ N0: 4. Отдельные антитела, предлагаемые в изобретении, включают в пределах вариабельной области их тяжелой цепи по меньшей мере один из СЭЮ имеющихся в тяжелой цепи Ь1Н4. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области тяжелой цепи: остатки 31-35; остатки 50-65 и остатки 98-104 8Е0 ΙΌ N0: 22.
В другом варианте отдельные антитела, описанные в изобретении, выбирают из группы, состоящей из Ь1Н5; антитела, которое является перекрестно-реактивным с Ь1Н5; антитела, которое связывается с тем же самым эпитопом, что и Ь1Н5; антитела, которое конкурирует с Ь1Н5 за связывание с клеткой, которая экспрессирует человеческий ΙΤ-4Κ; антитела, которое обладает биологической активностью Ь1Н5; и антиген-связывающего домена любого из вышеприведенных антител. В одном варианте антитело имеет связывающую аффинность (сродство) к человеческому ΙΕ-4Κ, которая, по существу, эквивалентна связывающей аффинности (сродству) Ь1Н5 к человеческому ΙΤ-4Κ. Линии гибридомных клеток, которые продуцируют любые такие антитела, также предлагаются в данном изобретении.
Одним примером биологической активности Ь1Н5 является способность функционировать в качестве и ΙΤ-4 антагониста, и ΙΠ-13 антагониста. В одном варианте антитело, описанное в изобретении, обладает ΙΤ-4 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь1Н5; и обладает ΙΠ-13 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь1Н5. Такую активность можно измерить в любом пригодном стандартном анализе (например, как измерено в СЭ23 экспрессионном анализе, описанном в примере 2).
ДНК последовательность вариабельной области легкой цепи Ь1Н5 присутствует в 8Е0 ΙΌ N0: 3, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8Е0 ΙΌ N0: 4. ДНК последовательность вариабельной области тяжелой цепи Ь1Н5 присутствует в виде 8Е0 ΙΌ N0: 23, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8Е0 ΙΌ N0: 24. Антитела, описанные в данном изобретении, включают антитела, которые содержат в их легкой цепи остатки 1-109 8Е0 ΙΌ N0: 4; и антитела, которые дополнительно или альтернативно содержат в их тяжелой цепи остатки 1-115 8Е0 ΙΌ N0: 24, но выбор этим не ограничивается.
Отдельные варианты антител, описанных в изобретении, включают в пределах вариабельной области их легкой цепи по меньшей мере один из гипервариабельных участков (СЭЮ) или гипервариабельные участки, имеющиеся в легкой цепи Ь1Н5. СЭЮ Ь1Н5 обсуждаются в примере 5. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области легкой цепи: аминокислотные остатки 24-35; остатки 51-57 и остатки 90-99 8Е0 ΙΌ N0: 4. Отдельные антитела, предлагаемые в изобретении, включают в пределах вариабельной области их тяжелой цепи по меньшей мере один из СЭЮ имеющихся в тяжелой цепи Ь1Н5. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области тяжелой цепи: остатки 31-35; остатки 50-65 и остатки 98-104 8Е0 ΙΌ N0: 24.
В другом варианте отдельные антитела, описанные в изобретении, выбирают из группы, состоящей из Ь1Н6; антитела, которое является перекрестно-реактивным с Ь1Н6; антитела, которое связывается с тем же самым эпитопом, что и Ь1Н6; антитела, которое конкурирует с Ь1Н6 за связывание с клеткой, которая экспрессирует человеческий ΙΤ-4Κ; антитела, которое обладает биологической активностью Ь1Н6; и антиген-связывающего домена любого из вышеприведенных антител. В одном варианте антитело имеет связывающую аффинность (сродство) к человеческому ΙΕ-4Κ, которая, по существу, эквивалентна связывающей аффинности (сродству) Ь1Н6 к человеческому ΙΤ-4Κ. Линии гибридомных клеток, которые продуцируют любые такие антитела, также предлагаются в данном изобретении.
Одним примером биологической активности Ь1Н6 является способность функционировать в каче- 24 011302 стве и 1Ь-4 антагониста, и ΣΠ-13 антагониста. В одном варианте антитело, описанное в изобретении, обладает 1Ь-4 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь1Н6; и обладает ΣΠ-13 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь1Н6. Такую активность можно измерить в любом пригодном стандартном анализе (например, как измерено в СГО23 экспрессионном анализе, описанном в примере 2).
ДНК последовательность вариабельной области легкой цепи Ь1Н6 присутствует в 8ЕО ΣΟ N0: 3, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8Е0 ΣΌ N0: 4. ДНК последовательность вариабельной области тяжелой цепи Ь1Н6 присутствует в виде 8Е0 ΣΌ N0: 25, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8Е0 ΣΌ N0: 26. Антитела, описанные в данном изобретении, включают антитела, которые содержат в их легкой цепи остатки 1-109 8Е0 ΣΌ N0: 4; и антитела, которые дополнительно или альтернативно содержат в их тяжелой цепи остатки 1-115 8Е0 ΣΌ N0: 26, но выбор этим не ограничивается.
Отдельные варианты антител, описанных в изобретении, включают в пределах вариабельной области их легкой цепи по меньшей мере один из гипервариабельных участков (СГОХ) или гипервариабельные участки, имеющиеся в легкой цепи Ь1Н6. СГОХ Ь1Н6 обсуждаются в примере 5. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области легкой цепи: аминокислотные остатки 24-35; остатки 51-57 и остатки 90-99 8Е0 ΣΌ N0: 4. Отдельные антитела, предлагаемые в изобретении, включают в пределах вариабельной области их тяжелой цепи по меньшей мере один из СГОХ, имеющихся в тяжелой цепи Ь1Н6. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области тяжелой цепи: остатки 31-35; остатки 50-65 и остатки 98-104 8Е0 ΣΌ N0: 26.
В другом варианте отдельные антитела, описанные в изобретении, выбирают из группы, состоящей из Ь1Н7; антитела, которое является перекрестно-реактивным с Ь1Н7; антитела, которое связывается с тем же самым эпитопом, что и Ь1Н7; антитела, которое конкурирует с Ь1Н7 за связывание с клеткой, которая экспрессирует человеческий 1Ь-4К; антитела, которое обладает биологической активностью Ь1Н7; и антиген-связывающего домена любого из вышеприведенных антител. В одном варианте антитело имеет связывающую аффинность (сродство) к человеческому ГО-4К, которая, по существу, эквивалентна связывающей аффинности (сродству) Ь1Н7 к человеческому 1Ь-4К. Линии гибридомных клеток, которые продуцируют любые такие антитела, также предлагаются в данном изобретении.
Одним примером биологической активности Ь1Н7 является способность функционировать в качестве и 1Ь-4 антагониста, и 1Ь-13 антагониста. В одном варианте антитело, описанное в изобретении, обладает 1Ь-4 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь1Н7; и обладает 1Ь-13 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь1Н7. Такую активность можно измерить в любом пригодном стандартном анализе (например, как измерено в СГО23 экспрессионном анализе, описанном в примере 2).
ДНК последовательность вариабельной области легкой цепи Ь1Н7 присутствует в 8Е0 ΣΌ N0: 3, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8Е0 ΣΌ N0: 4. ДНК последовательность вариабельной области тяжелой цепи Ь1Н7 присутствует в виде 8Е0 ΣΌ N0: 27, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8Е0 ΣΌ N0: 28. Антитела, описанные в данном изобретении, включают антитела, которые содержат в их легкой цепи остатки 1-109 8Е0 ГО N0: 4; и антитела, которые дополнительно или альтернативно содержат в их тяжелой цепи остатки 1-115 8Е0 ΣΌ N0: 28, но выбор этим не ограничивается.
Отдельные варианты антител, описанных в изобретении, включают в пределах вариабельной области их легкой цепи по меньшей мере один из гипервариабельных участков (СГОХ) или гипервариабельные участки, имеющиеся в легкой цепи Ь1Н7. СГОХ Ь1Н7 обсуждаются в примере 5. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области легкой цепи: аминокислотные остатки 24-35; остатки 51-57 и остатки 90-99 8Е0 ΣΌ N0: 4. Отдельные антитела, предлагаемые в изобретении, включают в пределах вариабельной области их тяжелой цепи по меньшей мере один из СГОХ, имеющихся в тяжелой цепи Ь1Н7. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области тяжелой цепи: остатки 31-35; остатки 50-65 и остатки 98-104 8Е0 ΣΌ N0: 28.
В другом варианте отдельные антитела, описанные в изобретении, выбирают из группы, состоящей из Ь1Н8; антитела, которое является перекрестно-реактивным с Ь1Н8; антитела, которое связывается с тем же самым эпитопом, что и Ь1Н8; антитела, которое конкурирует с Ь1Н8 за связывание с клеткой, которая экспрессирует человеческого 1Ь-4К; антитела, которое обладает биологической активностью Ь1Н8; и антиген-связывающего домена любого из вышеприведенных антител. В одном варианте антитело имеет связывающую аффинность (сродство) к человеческому ГО-4К, которая, по существу, эквивалентна связывающей аффинности (сродству) Ь1Н8 к человеческому ГО-4К. Линии гибридомных клеток, которые продуцируют любые такие антитела, также предлагаются в данном изобретении.
Одним примером биологической активности Ь1Н8 является способность функционировать в каче
- 25 011302 стве и 1Ь-4 антагониста, и ΙΠ-13 антагониста. В одном варианте антитело, описанное в изобретении, обладает 1Ь-4 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь1Н8; и обладает ΙΠ-13 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь1Н8. Такую активность можно измерить в любом пригодном стандартном анализе (например, как измерено в ί.Ό23 экспрессионном анализе, описанном в примере 2).
ДНК последовательность вариабельной области легкой цепи Ь1Н8 присутствует в БЕО ΙΌ N0: 3, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в БЕО ΙΌ N0: 4. ДНК последовательность вариабельной области тяжелой цепи Ь1Н8 присутствует в виде БЕО ΙΌ N0: 29, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в БЕО ΙΌ N0: 30. Антитела, описанные в данном изобретении, включают антитела, которые содержат в их легкой цепи остатки 1-109 БЕО Ш N0: 4; и антитела, которые дополнительно или альтернативно содержат в их тяжелой цепи остатки 1-115 БЕО ΙΌ N0: 30, но выбор этим не ограничивается.
Отдельные варианты антител, описанных в изобретении, включают в пределах вариабельной области их легкой цепи по меньшей мере один из гипервариабельных участков (СОВк) или гипервариабельные участки, имеющиеся в легкой цепи Ь1Н8. СОВк Ь1Н8 обсуждаются в примере 5. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области легкой цепи: аминокислотные остатки 24-35; остатки 51-57 и остатки 90-99 БЕО ΙΌ N0: 4. Отдельные антитела, предлагаемые в изобретении, включают в пределах вариабельной области их тяжелой цепи по меньшей мере один из СЭВк, имеющихся в тяжелой цепи Ь1Н8. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области тяжелой цепи: остатки 31-35; остатки 50-65 и остатки 98-104 БЕО ΙΌ N0: 30.
В другом варианте отдельные антитела, описанные в изобретении, выбирают из группы, состоящей из Ь1Н9; антитела, которое является перекрестно-реактивным с Ь1Н9; антитела, которое связывается с тем же самым эпитопом, что и Ь1Н9; антитела, которое конкурирует с Ь1Н9 за связывание с клеткой, которая экспрессирует человеческий ΙΕ-4Β; антитела, которое обладает биологической активностью Ь1Н9; и антиген-связывающего домена любого из вышеприведенных антител. В одном способе осуществления изобретения антитело имеет связывающую аффинность (сродство) к человеческому ΙΕ-4Β, которая, по существу, эквивалентна связывающей аффинности (сродству) Ь1Н9 к человеческому ΙΕ-4Β. Линии гибридомных клеток, которые продуцируют любые такие антитела, также предлагаются в данном изобретении.
Одним примером биологической активности Ь1Н9 является способность функционировать в качестве и ГЬ-4 антагониста, и ГЬ-13 антагониста. В одном варианте антитело, описанное в изобретении, обладает ГЬ-4 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь1Н9; и обладает ГЬ-13 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь1Н9. Такую активность можно измерить в любом пригодном стандартном анализе (например, как измерено в ί.Ό23 экспрессионном анализе, описанном в примере 2).
ДНК последовательность вариабельной области легкой цепи Ь1Н9 присутствует в БЕО ΙΌ N0: 3, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в БЕО ΙΌ N0: 4. ДНК последовательность вариабельной области тяжелой цепи Ь1Н9 присутствует в виде БЕО ΙΌ N0: 31, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в БЕО ΙΌ N0: 32. Антитела, описанные в данном изобретении, включают антитела, которые содержат в их легкой цепи остатки 1-109 БЕО Ш N0: 4; и антитела, которые дополнительно или альтернативно содержат в их тяжелой цепи остатки 1-115 БЕО ΙΌ N0: 32, но выбор этим не ограничивается.
Отдельные варианты антител, описанных в изобретении, включают в пределах вариабельной области их легкой цепи по меньшей мере один из гипервариабельных участков (СЭВк) или гипервариабельные участки, имеющиеся в легкой цепи Ь1Н9. СЭВк Ь1Н9 обсуждаются в примере 5. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области легкой цепи: аминокислотные остатки 24-35; остатки 51-57 и остатки 90-99 БЕО ΙΌ N0: 4. Отдельные антитела, предлагаемые в изобретении, включают в пределах вариабельной области их тяжелой цепи по меньшей мере один из СЭВк, имеющихся в тяжелой цепи Ь1Н9. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области тяжелой цепи: остатки 31-35; остатки 50-65 и остатки 98-104 БЕО ΙΌ N0: 32.
В другом варианте отдельные антитела, описанные в изобретении, выбирают из группы, состоящей из Ь1Н10; антитела, которое является перекрестно-реактивным с Ь1Н10; антитела, которое связывается с тем же самым эпитопом, что и Ь1Н10; антитела, которое конкурирует с Ь1Н10 за связывание с клеткой, которая экспрессирует человеческий ΙΕ-4Β; антитела, которое обладает биологической активностью Ь1Н10; и антиген-связывающего домена любого из вышеприведенных антител. В одном варианте антитело имеет связывающую аффинность (сродство) к человеческому ΙΕ-4Β, которая, по существу, эквивалентна связывающей аффинности (сродству) Ь1Н10 к человеческому ΙΕ-4Β. Линии гибридомных клеток, которые продуцируют любые такие антитела, также предлагаются в данном изобретении.
- 26 011302
Одним примером биологической активности Ь1Н10 является способность функционировать в качестве и ГЬ-4 антагониста, и ΣΠ-13 антагониста. В одном варианте антитело, описанное в изобретении, обладает ГЬ-4 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь1Н10; и обладает ΣΠ-13 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь1Н10. Такую активность можно измерить в любом пригодном стандартном анализе (например, как измерено в СЭ23 экспрессионном анализе, описанном в примере 2).
ДНК последовательность вариабельной области легкой цепи Ь1Н10 присутствует в 8Εβ ΣΌ N0: 3, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8Ε0 ΣΌ N0: 4. ДНК последовательность вариабельной области тяжелой цепи Ь1Н10 присутствует в виде 8Εβ ΣΌ N0: 33, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8Ε0 ГО N0: 34. Антитела, описанные в данном изобретении, включают антитела, которые содержат в их легкой цепи остатки 1-109 8Ε0 ΣΌ N0: 4; и антитела, которые дополнительно или альтернативно содержат в их тяжелой цепи остатки 1-115 8Ε0 ΣΌ N0: 34, но выбор этим не ограничивается.
Отдельные варианты антител, описанных в изобретении, включают в пределах вариабельной области их легкой цепи по меньшей мере один из гипервариабельных участков (СГОК) или гипервариабельные участки, имеющиеся в легкой цепи Ь1Н10. СГОК Ь1Н10 обсуждаются в примере 5. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области легкой цепи: аминокислотные остатки 24-35; остатки 51-57 и остатки 90-99 8Ε0 ГО N0: 4. Отдельные антитела, предлагаемые в изобретении, включают в пределах вариабельной области их тяжелой цепи по меньшей мере один из СГОК, имеющихся в тяжелой цепи Ь1Н10. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области тяжелой цепи: остатки 31-35; остатки 50-65 и остатки 98-104 8Ε0 ΣΌ N0: 34.
В другом варианте отдельные антитела, описанные в изобретении, выбирают из группы, состоящей из Ь1Н11; антитела, которое является перекрестно-реактивным с Ь1Н11; антитела, которое связывается с тем же самым эпитопом, что и Ь1Н11; антитела, которое конкурирует с Ь1Н11 за связывание с клеткой, которая экспрессирует человеческий ГЬ-4К; антитела, которое обладает биологической активностью Ь1Н11; и антиген-связывающего домена любого из вышеприведенных антител. В одном варианте антитело имеет связывающую аффинность (сродство) к человеческому ГЬ-4К, которая, по существу, эквивалентна связывающей аффинности (сродству) Ь1Н11 к человеческому ГЬ-4К. Линии гибридомных клеток, которые продуцируют любые такие антитела, также предлагаются в данном изобретении.
Одним примером биологической активности Ь1Н11 является способность функционировать в качестве и ГЬ-4 антагониста, и ГЬ-13 антагониста. В одном варианте антитело, описанное в изобретении, обладает ГЬ-4 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь1Н11; и обладает ГЬ-13 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь1Н11. Такую активность можно измерить в любом пригодном стандартном анализе (например, как измерено в СГО23 экспрессионном анализе, описанном в примере 2).
ДНК последовательность вариабельной области легкой цепи Ь1Н11 присутствует в 8Ε0 ГО N0: 3, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8Ε0 ΣΌ N0: 4. ДНК последовательность вариабельной области тяжелой цепи Ь1Н11 присутствует в виде 8Ε0 ΣΌ N0: 35, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8Ε0 ГО N0: 36. Антитела, описанные в данном изобретении, включают антитела, которые содержат в их легкой цепи остатки 1-109 8Ε0 ΣΌ N0: 4; и антитела, которые дополнительно или альтернативно содержат в их тяжелой цепи остатки 1-115 8Ε0 ΣΌ N0: 36, но выбор этим не ограничивается.
Отдельные варианты антител, описанных в изобретении, включают в пределах вариабельной области их легкой цепи по меньшей мере один из гипервариабельных участков (СОК) или гипервариабельные участки, имеющиеся в легкой цепи Ь1Н11. СГОК Ь1Н11 обсуждаются в примере 5. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области легкой цепи: аминокислотные остатки 24-35; остатки 51-57 и остатки 90-99 8Ε0 ΣΌ N0: 4. Отдельные антитела, предлагаемые в изобретении, включают в пределах вариабельной области их тяжелой цепи по меньшей мере один из СОК, имеющихся в тяжелой цепи Ь1Н11. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области тяжелой цепи: остатки 31-35; остатки 50-65 и остатки 98-104 8Ε0 ΣΌ N0: 36.
В другом варианте отдельные антитела, описанные в изобретении, выбирают из группы, состоящей из Ь2Н4; антитела, которое является перекрестно-реактивным с Ь2Н4; антитела, которое связывается с тем же самым эпитопом, что и Ь2Н4; антитела, которое конкурирует с Ь2Н4 за связывание с клеткой, которая экспрессирует человеческий ГЬ-4К; антитела, которое обладает биологической активностью Ь2Н4; и антиген-связывающего домена любого из вышеприведенных антител. В одном варианте антитело имеет связывающую аффинность (сродство) к человеческому ГЬ-4К, которая, по существу, эквивалентна связывающей аффинности (сродству) Ь2Н4 к человеческому ГЬ-4К. Линии гибридомных клеток, которые продуцируют любые такие антитела, также предлагаются в данном изобретении.
- 27 011302
Одним примером биологической активности Ь2Н4 является способность функционировать в качестве и 1Ь-4 антагониста, и 1Ь-13 антагониста. В одном варианте антитело, описанное в изобретении, обладает 1Ь-4 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь2Н4; и обладает 1Ь-13 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь2Н4. Такую активность можно измерить в любом пригодном стандартном анализе (например, как измерено в СЭ23 экспрессионном анализе, описанном в примере 2).
ДНК последовательность вариабельной области легкой цепи Ь2Н4 присутствует в 8ЕЦ ΣΌ NО: 5, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8ЕЦ ΣΌ NО: 6. ДНК последовательность вариабельной области тяжелой цепи Ь2Н4 присутствует в виде 8ЕЦ ΣΌ NО: 21, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8ЕЦ ΣΌ NО: 22. Антитела, описанные в данном изобретении, включают антитела, которые содержат в их легкой цепи остатки 1-109 8ЕЦ ΣΌ NО: 6; и антитела, которые дополнительно или альтернативно содержат в их тяжелой цепи остатки 1-115 8ЕЦ ΣΌ NО: 22, но выбор этим не ограничивается.
Отдельные варианты антител, описанных в изобретении, включают в пределах вариабельной области их легкой цепи по меньшей мере один из гипервариабельных участков (СЭКк) или гипервариабельные участки, имеющиеся в легкой цепи Ь2Н4. СЭКк Ь2Н4 обсуждаются в примере 5. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области легкой цепи: аминокислотные остатки 24-35; остатки 51-57 и остатки 90-99 8ЕЦ ΣΌ NО: 6. Отдельные антитела, предлагаемые в изобретении, включают в пределах вариабельной области их тяжелой цепи по меньшей мере один из СЭКк, имеющихся в тяжелой цепи Ь2Н4. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области тяжелой цепи: остатки 31-35; остатки 50-65 и остатки 98-104 8ЕЦ ΣΌ NО: 22.
В другом варианте отдельные антитела, описанные в изобретении, выбирают из группы, состоящей из Ь2Н12; антитела, которое является перекрестно-реактивным с Ь2Н12; антитела, которое связывается с тем же самым эпитопом, что и Ь2Н12; антитела, которое конкурирует с Ь2Н12 за связывание с клеткой, которая экспрессирует человеческий ΣΕ-4Η; антитела, которое обладает биологической активностью Ь2Н12; и антиген-связывающего домена любого из вышеприведенных антител. В одном варианте антитело имеет связывающую аффинность (сродство) к человеческому ΣΕ-4Η, которая, по существу, эквивалентна связывающей аффинности (сродству) Ь2Н12 к человеческому ΣΕ-4Η. Линии гибридомных клеток, которые продуцируют любые такие антитела, также предлагаются в данном изобретении.
Одним примером биологической активности Ь2Н12 является способность функционировать в качестве и ΣΕ-4 антагониста, и ΣΠ-13 антагониста. В одном варианте антитело, описанное в изобретении, обладает ΣΕ-4 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь2Н12; и обладает ΣΠ-13 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь2Н12. Такую активность можно измерить в любом пригодном стандартном анализе (например, как измерено в СЭ23 экспресс ионном анализе, описанном в примере 2).
ДНК последовательность вариабельной области легкой цепи Ь2Н12 присутствует в 8ЕЦ ΣΌ NО: 5, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8ЕЦ ΣΌ NО: 6. ДНК последовательность вариабельной области тяжелой цепи Ь2Н12 присутствует в виде 8ЕЦ ΣΌ NО: 37, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8ЕЦ ΣΌ NО: 38. Антитела, описанные в данном изобретении, включают антитела, которые содержат в их легкой цепи остатки 1-109 8ЕЦ ΣΌ NО: 6; и антитела, которые дополнительно или альтернативно содержат в их тяжелой цепи остатки 1-115 8ЕЦ ΣΌ NО: 38, но выбор этим не ограничивается.
Отдельные варианты антител, описанных в изобретении, включают в пределах вариабельной области их легкой цепи по меньшей мере один из гипервариабельных участков (СЭКк) или гипервариабельные участки, имеющиеся в легкой цепи Ь2Н12. СЭКк Ь2Н12 обсуждаются в примере 5. Таким образом, среди антител, прелагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области легкой цепи: аминокислотные остатки 24-35; остатки 51-57 и остатки 90-99 8ЕЦ ΣΌ NО: 6. Отдельные антитела, предлагаемые в изобретении, включают в пределах вариабельной области их тяжелой цепи по меньшей мере один из СЭКк, имеющихся в тяжелой цепи Ь2Н12. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области тяжелой цепи: остатки 31-35; остатки 50-65 и остатки 98-104 8ЕЦ ΣΌ NО: 38.
В другом варианте отдельные антитела, описанные в изобретении, выбирают из группы, состоящей из Ь2Н13; антитела, которое является перекрестно-реактивным с Ь2Н13; антитела, которое связывается с тем же самым эпитопом, что и Ь2Н13; антитела, которое конкурирует с Ь2Н13 за связывание с клеткой, которая экспрессирует человеческий ΣΕ-4Η; антитела, которое обладает биологической активностью Ь2Н13; и антиген-связывающего домена любого из вышеприведенных антител. В одном варианте антитело имеет связывающую аффинность (сродство) к человеческому ΣΕ-4Η, которая, по существу, эквивалентна связывающей аффинности (сродству) Ь2Н13 к человеческому ΣΕ-4Η. Линии гибридомных клеток, которые продуцируют любые такие антитела, также предлагаются в данном изобретении.
- 28 011302
Одним примером биологической активности Ь2Н13 является способность функционировать в качестве и ΙΕ-4 антагониста, и ЕС-13 антагониста. В одном варианте антитело, описанное в изобретении, обладает ΙΕ-4 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь2Н13; и обладает ЕС-13 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь2Н13. Такую активность можно измерить в любом пригодном стандартном анализе (например, как измерено в ί.Ό23 экспрессионном анализе, описанном в примере 2).
ДНК последовательность вариабельной области легкой цепи Ь2Н13 присутствует в 8ЕО ΙΌ N0: 5, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8Е0 ΙΌ N0: б. ДНК последовательность вариабельной области тяжелой цепи Ь2Н13 присутствует в виде 8Е0 ΙΌ N0: 39, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8Е0 ΙΌ N0: 40. Антитела, описанные в данном изобретении, включают антитела, которые содержат в их легкой цепи остатки 1-109 8Е0 ΙΌ N0: б; и антитела, которые дополнительно или альтернативно содержат в их тяжелой цепи остатки 1-115 8Е0 ΙΌ N0: 40, но выбор этим не ограничивается.
Отдельные варианты антител, описанных в изобретении, включают в пределах вариабельной области их легкой цепи по меньшей мере один из гипервариабельных участков (СЭКх) или гипервариабельные участки, имеющиеся в легкой цепи Ь2Н13. СЭК5 Ь2Н13 обсуждаются в примере 5. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области легкой цепи: аминокислотные остатки 24-35; остатки 51-57 и остатки 90-99 8Е0 ΙΌ N0: б. Отдельные антитела, предлагаемые в изобретении, включают в пределах вариабельной области их тяжелой цепи по меньшей мере один из СЭКх, имеющихся в тяжелой цепи Ь2Н13. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области тяжелой цепи: остатки 31-35; остатки 50-б5 и остатки 98-104 8Е0 ΙΌ N0: 40.
В другом варианте отдельные антитела, описанные в изобретении, выбирают из группы, состоящей из Ь2Н14; антитела, которое является перекрестно-реактивным с Ь2Н14; антитела, которое связывается с тем же самым эпитопом, что и Ь2Н14; антитела, которое конкурирует с Ь2Н14 за связывание с клеткой, которая экспрессирует человеческий ΙΕ-4Κ; антитела, которое обладает биологической активностью Ь2Н14; и антиген-связывающего домена любого из вышеприведенных антител. В одном варианте антитело имеет связывающую аффинность (сродство) к человеческому ΙΕ-4Κ, которая, по существу, эквивалентна связывающей аффинности (сродству) Ь2Н14 к человеческому ΙΕ-4Κ. Линии гибридомных клеток, которые продуцируют любые такие антитела, также предлагаются в данном изобретении.
Одним примером биологической активности Ь2Н14 является способность функционировать в качестве и ΙΕ-4 антагониста, и ЕС-13 антагониста. В одном варианте антитело, описанное в изобретении, обладает ΙΕ-4 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь2Н14; и обладает ЕС-13 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь2Н14. Такую активность можно измерить в любом пригодном стандартном анализе (например, как измерено в ί.Ό23 экспрессионном анализе, описанном в примере 2).
ДНК последовательность вариабельной области легкой цепи Ь2Н14 присутствует в 8Е0 ΙΌ N0: 5, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8Е0 ΙΌ N0: б. ДНК последовательность вариабельной области тяжелой цепи Ь2Н14 присутствует в виде 8Е0 ΙΌ N0: 41, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8Е0 ΙΌ N0: 42. Антитела, описанные в данном изобретении, включают антитела, которые содержат в их легкой цепи остатки 1-109 8Е0 ΙΌ N0: б; и антитела, которые дополнительно или альтернативно содержат в их тяжелой цепи остатки 1-115 8Е0 ΙΌ N0: 42, но выбор этим не ограничивается.
Отдельные варианты антител, описанных в изобретении, включают в пределах вариабельной области их легкой цепи по меньшей мере один из гипервариабельных участков (СЭКх) или гипервариабельные участки, имеющиеся в легкой цепи Ь2Н14. СЭК5 Ь2Н14 обсуждаются в примере 5. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области легкой цепи: аминокислотные остатки 24-35; остатки 51-57 и остатки 90-99 8Е0 ΙΌ N0: б. Отдельные антитела, предлагаемые в изобретении, включают в пределах вариабельной области их тяжелой цепи по меньшей мере один из СЭКх, имеющихся в тяжелой цепи Ь2Н14. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области тяжелой цепи: остатки 31-35; остатки 50-б5 и остатки 98-104 8Е0 ΙΌ N0: 42.
В другом варианте отдельные антитела, описанные в изобретении, выбирают из группы, состоящей из ЬбН1; антитела, которое является перекрестно-реактивным с ЬбН1; антитела, которое связывается с тем же самым эпитопом, что и ЬбН1; антитела, которое конкурирует с ЬбН1 за связывание с клеткой, которая экспрессирует человеческий ΙΕ-4Κ; антитела, которое обладает биологической активностью ЬбН1; и антиген-связывающего домена любого из вышеприведенных антител. В одном варианте антитело имеет связывающую аффинность (сродство) к человеческому ΙΕ-4Κ, которая, по существу, эквивалентна связывающей аффинности (сродству) ЬбН1 к человеческому ΙΕ-4Κ. Линии гибридомных клеток, которые продуцируют любые такие антитела, также предлагаются в данном изобретении.
- 29 011302
Одним примером биологической активности Ь6Н1 является способность функционировать в качестве и 1Ь-4 антагониста, и 1Ь-13 антагониста. В одном варианте антитело, описанное в изобретении, обладает 1Ь-4 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь6Н1; и обладает 1Ь-13 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь6Н1. Такую активность можно измерить в любом пригодном стандартном анализе (например, как измерено в СЭ23 экспрессионном анализе, описанном в примере 2).
ДНК последовательность вариабельной области легкой цепи Ь6Н1 присутствует в 8ЕЦ ГО N0: 13, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8ЕЦ ГО N0: 14. ДНК последовательность вариабельной области тяжелой цепи Ь6Н1 присутствует в виде 8ЕЦ ГО N0: 15, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8ЕЦ ГО N0: 16. Антитела, описанные в данном изобретении, включают антитела, которые содержат в их легкой цепи остатки 1-109 8ЕЦ ГО N0: 14; и антитела, которые дополнительно или альтернативно содержат в их тяжелой цепи, остатки 1-115 8ЕЦ ГО N0: 16, но выбор этим не ограничивается.
Отдельные варианты антител, описанных в изобретении, включают в пределах вариабельной области их легкой цепи по меньшей мере один из гипервариабельных участков (СОВ§) или гипервариабельные участки, имеющиеся в легкой цепи Ь6Н1. СОВ§ Ь6Н1 обсуждаются в примере 5. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области легкой цепи: аминокислотные остатки 24-35; остатки 51-57 и остатки 90-99 8ЕЦ ГО N0: 14. Отдельные антитела, предлагаемые в изобретении, включают в пределах вариабельной области их тяжелой цепи по меньшей мере один из СОВ§, имеющихся в тяжелой цепи Ь6Н1. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области тяжелой цепи: остатки 31-35; остатки 50-65 и остатки 98-104 8ЕЦ ГО N0: 16.
В другом варианте отдельные антитела, описанные в изобретении, выбирают из группы, состоящей из Ь2Н2; антитела, которое является перекрестно-реактивным с Ь2Н2; антитела, которое связывается с тем же самым эпитопом, что и Ь2Н2; антитела, которое конкурирует с Ь2Н2 за связывание с клеткой, которая экспрессирует человеческий 1Ь-4В; антитела, которое обладает биологической активностью Ь2Н2; и антиген-связывающего домена любого из вышеприведенных антител. В одном варианте антитело имеет связывающую аффинность (сродство) к человеческому 1Ь-4В, которая, по существу, эквивалентна связывающей аффинности (сродству) Ь2Н2 к человеческому 1Ь-4В. Линии гибридомных клеток, которые продуцируют любые такие антитела, также предлагаются в данном изобретении.
Одним примером биологической активности Ь2Н2 является способность функционировать в качестве и 1Ь-4 антагониста, и 1Ь-13 антагониста. В одном варианте антитело, описанное в изобретении, обладает 1Ь-4 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь2Н2; и обладает 1Ь-13 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь2Н2. Такую активность можно измерить в любом пригодном стандартном анализе (например, как измерено в СЭ23 эксирессионном анализе, описанном в примере 2).
ДНК последовательность вариабельной области легкой цепи Ь2Н2 присутствует в 8ЕЦ ГО N0: 5, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8ЕЦ ГО N0: 6. ДНК последовательность вариабельной области тяжелой цепи Ь2Н2 присутствует как 8ЕЦ ГО N0: 17, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8ЕЦ ГО N0: 18. Антитела, описанные в данном изобретении, включают антитела, которые содержат в их легкой цепи остатки 1-109 8ЕЦ ГО N0: 6; и антитела, которые дополнительно или альтернативно содержат в их тяжелой цепи остатки 1-115 8ЕЦ ГО N0: 18, но выбор этим не ограничивается.
Отдельные варианты антител, описанных в изобретении, включают в пределах вариабельной области их легкой цепи по меньшей мере один из гипервариабельных участков (СОВ§) или гипервариабельные участки, имеющиеся в легкой цепи Ь2Н2. СЭВ Ь2Н2 обсуждаются в примере 5. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области легкой цепи: аминокислотные остатки 24-35; остатки 51-57 и остатки 90-99 8ЕЦ ГО N0: 6. Отдельные антитела, предлагаемые в изобретении, включают в пределах вариабельной области их тяжелой цепи по меньшей мере один из СОВ§, имеющихся в тяжелой цепи Ь2Н2. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области тяжелой цепи: остатки 31-35; остатки 50-65 и остатки 98-104 8ЕЦ ГО N0: 18.
В другом варианте отдельные антитела, описанные в изобретении, выбирают из группы, состоящей из Ь2Н3; антитела, которое является перекрестно-реактивным с Ь2Н3; антитела, которое связывается с тем же самым эпитопом, что и Ь2Н3; антитела, которое конкурирует с Ь2Н3 за связывание с клеткой, которая экспрессирует человеческий 1Ь-4В; антитела, которое обладает биологической активностью Ь2Н3; и антиген-связывающего домена любого из вышеприведенных антител. В одном варианте антитело имеет связывающую аффинность (сродство) к человеческому 1Ь-4В, которая, по существу, эквивалентна связывающей аффинности (сродству) Ь2Н3 к человеческому 1Ь-4В. Линии гибридомных клеток, которые продуцируют любые такие антитела, также предлагаются в данном изобретении.
- 30 011302
Одним примером биологической активности Ь2Н3 является способность функционировать в качестве и 1Ь-4 антагониста, и ΣΧ-13 антагониста. В одном варианте антитело, описанное в изобретении, обладает 1Ь-4 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь2Н3; и обладает ΣΧ-13 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь2Н3. Такую активность можно измерить в любом пригодном стандартном анализе (например, как измерено в СГО23 экспрессионном анализе, описанном в примере 2).
ДНК последовательность вариабельной области легкой цепи Ь2Н3 присутствует в 8ЕЦ ГО NО: 5, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в ЗЕЦ ГО NО: 6. ДНК последовательность вариабельной области тяжелой цепи Ь2Н3 присутствует в виде 8ЕЦ ГО NО: 19, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в ЗЕЦ ГО NО: 20. Антитела, описанные в данном изобретении, включают антитела, которые содержат в их легкой цепи остатки 1-109 8ЕЦ ГО NО: 6; и антитела, которые дополнительно или альтернативно содержат в их тяжелой цепи остатки 1-115 ЗЕЦ ГО NО: 20, но выбор этим не ограничивается.
Отдельные варианты антител, описанных в изобретении, включают в пределах вариабельной области их легкой цепи по меньшей мере один из гипервариабельных участков (СГОХ) или гипервариабельные участки, имеющиеся в легкой цепи Ь2Н3. СГОХ Ь2Н3 обсуждаются в примере 5. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области легкой цепи: аминокислотные остатки 24-35; остатки 51-57 и остатки 90-99 ЗЕЦ ГО NО: 6. Отдельные антитела, предлагаемые в изобретении, включают в пределах вариабельной области их тяжелой цепи по меньшей мере один из СГОХ, имеющихся в тяжелой цепи Ь2Н3. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области тяжелой цепи: остатки 31-35; остатки 50-65 и остатки 98-104 ЗЕЦ ГО NО: 20.
В другом варианте отдельные антитела, описанные в изобретении, выбирают из группы, состоящей из Ь2Н6; антитела, которое является перекрестно-реактивным с Ь2Н6; антитела, которое связывается с тем же самым эпитопом, что и Ь2Н6; антитела, которое конкурирует с Ь2Н6 за связывание с клеткой, которая экспрессирует человеческий 1Ь-4В; антитела, которое обладает биологической активностью Ь2Н6; и антиген-связывающего домена любого из вышеприведенных антител. В одном варианте антитело имеет связывающую аффинность (сродство) к человеческому ГО-4К, которая, по существу, эквивалентна связывающей аффинности (сродству) Ь2Н6 к человеческому ГО-4В. Линии гибридомных клеток, которые продуцируют любые такие антитела, также предлагаются в данном изобретении.
Одним примером биологической активности Ь2Н6 является способность функционировать в качестве и 1X4 антагониста, и ΣΧ-13 антагониста. В одном варианте антитело, описанное в изобретении, обладает 1X4 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь2Н6; и обладает 1Ь-13 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь2Н6. Такую активность можно измерить в любом пригодном стандартном анализе (например, как измерено в СГО23 экспрессионном анализе, описанном в примере 2).
ДНК последовательность вариабельной области легкой цепи Ь2Н6 присутствует в 8ЕЦ ГО NО: 5, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в ЗЕЦ ГО NО: 6. ДНК последовательность вариабельной области тяжелой цепи Ь2Н6 присутствует в виде 8ЕЦ ГО NО: 25, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в ЗЕЦ ГО NО: 26. Антитела, описанные в данном изобретении, включают антитела, которые содержат в их легкой цепи остатки 1-109 8ЕЦ ГО NО: 6; и антитела, которые дополнительно или альтернативно содержат в их тяжелой цепи остатки 1-115 ЗЕЦ ГО NО: 26, но выбор этим не ограничивается.
Отдельные варианты антител, описанных в изобретении, включают в пределах вариабельной области их легкой цепи по меньшей мере один из гипервариабельных участков (СГОХ) или гипервариабельные участки, имеющиеся в легкой цепи Ь2Н6. СГОХ Ь2Н6 обсуждаются в примере 5. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области легкой цепи: аминокислотные остатки 24-35; остатки 51-57 и остатки 90-99 ЗЕЦ ГО NО: 6. Отдельные антитела, предлагаемые в изобретении, включают в пределах вариабельной области их тяжелой цепи по меньшей мере один из СГОХ, имеющихся в тяжелой цепи Ь2Н6. Таким образом, среди антител, прелагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области тяжелой цепи: остатки 31-35; остатки 50-65 и остатки 98-104 ЗЕЦ ГО NО: 26.
В другом варианте отдельные антитела, описанные в изобретении, выбирают из группы, состоящей из Ь2Н7; антитела, которое является перекрестно-реактивным с Ь2Н7; антитела, которое связывается с тем же самым эпитопом, что и Ь2Н7; антитела, которое конкурирует с Ь2Н7 за связывание с клеткой, которая экспрессирует человеческий 1Ь-4В; антитела, которое обладает биологической активностью Ь2Н7; и антиген-связывающего домена любого из вышеприведенных антител. В одном варианте, антитело имеет связывающую аффинность (сродство) к человеческому ΣΧ4Β, которая, по существу, эквивалентна связывающей аффинности (сродству) Ь2Н7 к человеческому ΣΧ4Β. Линии гибридомных клеток, которые продуцируют любые такие антитела, также предлагаются в данном изобретении.
- 31 011302
Одним примером биологической активности Ь2Н7 является способность функционировать в качестве и 1Ь-4 антагониста, и ГЬ-13 антагониста. В одном варианте антитело, описанное в изобретении, обладает 1Ь-4 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь2Н7; и обладает ГЬ-13 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь2Н7. Такую активность можно измерить в любом пригодном стандартном анализе (например, как измерено в ΟΌ23 экспрессионном анализе, описанном в примере 2).
ДНК последовательность вариабельной области легкой цепи Ь2Н7 присутствует в 8ЕО ΙΌ N0: 5, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8Е0 ΙΌ N0: 6. ДНК последовательность вариабельной области тяжелой цепи Ь2Н7 присутствует в виде 8Е0 ΙΌ N0: 27, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8Е0 ΙΌ N0: 28. Антитела, описанные в данном изобретении, включают антитела, которые содержат в их легкой цепи остатки 1-109 8Е0 ΙΌ N0: 6; и антитела, которые дополнительно или альтернативно содержат в их тяжелой цепи остатки 1-115 8Е0 ΙΌ N0: 28, но выбор этим не ограничивается.
Отдельные варианты антител, описанных в изобретении, включают в пределах вариабельной области их легкой цепи по меньшей мере один из гипервариабельных участков (СЭКк) или гипервариабельные участки, имеющиеся в легкой цепи Ь2Н7. СЭКк Ь2Н7 обсуждаются в примере 5. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области легкой цепи: аминокислотные остатки 24-35; остатки 51-57 и остатки 90-99 8Е0 ΙΌ N0: 6. Отдельные антитела, предлагаемые в изобретении, включают в пределах вариабельной области их тяжелой цепи по меньшей мере один из СЭКк, имеющихся в тяжелой цепи Ь2Н7. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области тяжелой цепи: остатки 31-35; остатки 50-65 и остатки 98-104 8Е0 ΙΌ N0: 28.
В другом варианте отдельные антитела, описанные в изобретении, выбирают из группы, состоящей из Ь2Н8; антитела, которое является перекрестно-реактивным с Ь2Н8; антитела, которое связывается с тем же самым эпитопом, что и Ь2Н8; антитела, которое конкурирует с Ь2Н8 за связывание с клеткой, которая экспрессирует человеческий ΙΕ-4Κ; антитела, которое обладает биологической активностью Ь2Н8; и антиген-связывающего домена любого из вышеприведенных антител. В одном варианте, антитело имеет связывающую аффинность (сродство) к человеческому ΙΕ-4Κ, которая, по существу, эквивалентна связывающей аффинности (сродству) Ь2Н8 к человеческому ΙΕ-4Κ. Линии гибридомных клеток, которые продуцируют любые такие антитела, также предлагаются в данном изобретении.
Одним примером биологической активности Ь2Н8 является способность функционировать в качестве и ГЬ-4 антагониста, и ГЬ-13 антагониста. В одном варианте антитело, описанное в изобретении, обладает ГЬ-4 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь2Н8; и обладает ГЬ-13 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь2Н8. Такую активность можно измерить в любом пригодном стандартном анализе (например, как измерено в ΟΌ23 экспрессионном анализе, описанном в примере 2).
ДНК последовательность вариабельной области легкой цепи Ь2Н8 присутствует в 8Е0 ΙΌ N0: 5, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8Е0 ΙΌ N0: 6. ДНК последовательность вариабельной области тяжелой цепи Ь2Н8 присутствует в виде 8Е0 ΙΌ N0: 29, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8Е0 ΙΌ N0: 30. Антитела, описанные в данном изобретении, включают антитела, которые содержат в их легкой цепи остатки 1-109 8Е0 ΙΌ N0: 6; и антитела, которые дополнительно или альтернативно содержат в их тяжелой цепи остатки 1-115 8Е0 ΙΌ N0: 30, но выбор этим не ограничивается.
Отдельные варианты антител, описанных в изобретении, включают в пределах вариабельной области их легкой цепи по меньшей мере один из гипервариабельных участков (СЭКк) или гипервариабельные участки, имеющиеся в легкой цепи Ь2Н8. СЭКк Ь2Н8 обсуждаются в примере 5. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области легкой цепи: аминокислотные остатки 24-35; остатки 51-57 и остатки 90-99 8Е0 ΙΌ N0: 6. Отдельные антитела, предлагаемые в изобретении, включают в пределах вариабельной области их тяжелой цепи по меньшей мере один из СЭКк, имеющихся в тяжелой цепи Ь2Н8. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области тяжелой цепи: остатки 31-35; остатки 50-65 и остатки 98-104 8Е0 ΙΌ N0: 30.
В другом варианте отдельные антитела, описанные в изобретении, выбирают из группы, состоящей из Ь2Н9; антитела, которое является перекрестно-реактивным с Ь2Н9; антитела, которое связывается с тем же самым эпитопом, что и Ь2Н9; антитела, которое конкурирует с Ь2Н9 за связывание с клеткой, которая экспрессирует человеческий ΙΕ-4Κ; антитела, которое обладает биологической активностью Ь2Н9; и антиген-связывающего домена любого из вышеприведенных антител. В одном варианте антитело имеет связывающую аффинность (сродство) к человеческому ΙΕ-4Κ, которая, по существу, эквивалентна связывающей аффинности (сродству) Ь2Н9 к человеческому ΙΕ-4Κ. Линии гибридомных клеток, которые продуцируют любые такие антитела, также предлагаются в данном изобретении.
- 32 011302
Одним примером биологической активности Ь2Н9 является способность функционировать в качестве и ГЬ-4 антагониста, и ГЬ-13 антагониста. В одном варианте антитело обладает ГЬ-4 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь2Н9; и обладает ГЬ-13 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь2Н9. Такую активность можно измерить в любом пригодном стандартном анализе (например, как измерено в ΟΌ23 экспрессионном анализе, описанном в примере 2).
ДНК последовательность вариабельной области легкой цепи Ь2Н9 присутствует в 8ЕО ΙΌ N0: 5, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8Е0 ΙΌ N0: 6. ДНК последовательность вариабельной области тяжелой цепи Ь2Н9 присутствует в виде 8Е0 ΙΌ N0: 31, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8Е0 ΙΌ N0: 32. Антитела, описанные в данном изобретении, включают антитела, которые включают в их легкой цепи остатки 1-109 8Е0 ΙΌ N0: 6; и антитела, которые дополнительно или альтернативно включают в их тяжелой цепи остатки 1-115 8Е0 ΙΌ N0: 32, но выбор этим не ограничивается.
Отдельные варианты антител, описанных в изобретении, включают в пределах вариабельной области их легкой цепи по меньшей мере один из гипервариабельных участков (СОВз) или гипервариабельные участки, имеющиеся в легкой цепи Ь2Н9. СОВз Ь2Н9 обсуждаются в примере 5. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области легкой цепи: аминокислотные остатки 24-35; остатки 51-57 и остатки 90-99 8Е0 ΙΌ N0: 6. Отдельные антитела, предлагаемые в изобретении, включают в пределах вариабельной области их тяжелой цепи по меньшей мере один из СОВз, имеющихся в тяжелой цепи Ь2Н9.
Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области тяжелой цепи: остатки 31-35; остатки 50-65 и остатки 98-104 8Е0 ΙΌ N0: 32.
В другом варианте отдельные антитела, описанные в изобретении, выбирают из группы, состоящей из Ь2Н10; антитела, которое является перекрестно-реактивным с Ь2Н10; антитела, которое связывается с тем же самым эпитопом, что и Ь2Н10; антитела, которое конкурирует с Ь2Н10 за связывание с клеткой, которая экспрессирует человеческий ГЕ-4В; антитела, которое обладает биологической активностью Ь2Н10; и антиген-связывающего домена любого из вышеприведенных антител. В одном варианте антитело имеет связывающую аффинность (сродство) к человеческому ГЕ-4В, которая, по существу, эквивалентна связывающей аффинности (сродству) Ь2Н10 к человеческому ГЕ-4В. Линии гибридомных клеток, которые продуцируют любые такие антитела, также предлагаются в данном изобретении.
Одним примером биологической активности Ь2Н10 является способность функционировать в качестве и ГЬ-4 антагониста, и ГЬ-13 антагониста. В одном варианте антитело, описанное в изобретении, обладает ГЬ-4 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь2Н10; и обладает ГЬ-13 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь2Н10. Такую активность можно измерить в любом пригодном стандартном анализе (например, как измерено в СЭ23 экспрессионном анализе, описанном в примере 2).
ДНК последовательность вариабельной области легкой цепи Ь2Н10 присутствует в 8Е0 ΙΌ N0: 5, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8Е0 ΙΌ N0: 6. ДНК последовательность вариабельной области тяжелой цепи Ь2Н10 присутствует в виде 8Е0 ΙΌ N0: 33, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8Е0 ΙΌ N0: 34. Антитела, описанные в данном изобретении, включают антитела, которые содержат в их легкой цепи остатки 1-109 8Е0 ΙΌ N0: 6; и антитела, которые дополнительно или альтернативно содержат в их тяжелой цепи остатки 1-115 8Е0 ΙΌ N0: 34, но выбор этим не ограничивается.
Отдельные варианты антител, описанных в изобретении, включают в пределах вариабельной области их легкой цепи по меньшей мере один из гипервариабельных участков (СОВз) или гипервариабельные участки, имеющиеся в легкой цепи Ь2Н10. СОВз Ь2Н10 обсуждаются в примере 5. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области легкой цепи: аминокислотные остатки 24-35; остатки 51-57 и остатки 90-99 8Е0 ΙΌ N0: 6. Отдельные антитела, предлагаемые в изобретении, включают в пределах вариабельной области их тяжелой цепи по меньшей мере один из СОВз, имеющихся в тяжелой цепи Ь2Н10. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области тяжелой цепи: остатки 31-35; остатки 50-65 и остатки 98-104 8Е0 ΙΌ N0: 34.
В другом варианте отдельные антитела, описанные в изобретении, выбирают из группы, состоящей из Ь2Н11; антитела, которое является перекрестно-реактивным с Ь2Н11; антитела, которое связывается с тем же самым эпитопом, что и Ь2Н11; антитела, которое конкурирует с Ь2Н11 за связывание с клеткой, которая экспрессирует человеческий ГЕ-4В; антитела, которое обладает биологической активностью Ь2Н11; и антиген-связывающего домена любого из вышеприведенных антител. В одном варианте антитело имеет связывающую аффинность (сродство) к человеческому ГЕ-4В, которая, по существу, эквивалентна связывающей аффинности (сродству) Ь2Н11 к человеческому ГЕ-4В. Линии гибридомных клеток,
- 33 011302 которые продуцируют любые такие антитела, также предлагаются в данном изобретении.
Одним примером биологической активности Ь2Н11 является способность функционировать в качестве и Σ6-4 антагониста, и ΣΠ-13 антагониста. В одном варианте антитело обладает Σ6-4 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь2Н11; и обладает ΣΠ-13 блокирующей активностью, практически эквивалентной активности Ь2Н11. Такую активность можно измерить в любом пригодном стандартном анализе (например, как измерено в ί.Ό23 экспрессионном анализе, описанном в примере 2).
ДНК последовательность вариабельной области легкой цепи Ь2Н11 присутствует в 8ЕЦ ΣΟ N0: 5, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8ЕЦ ΣΌ N0: 6. ДНК последовательность вариабельной области тяжелой цепи Ь2Н11 присутствует в виде 8ЕЦ ΣΌ N0: 35, и кодируемая аминокислотная последовательность присутствует в 8ЕЦ ΣΌ N0: 36. Антитела, описанные в данном изобретении, включают антитела, которые содержат в их легкой цепи остатки 1-109 8ЕЦ ΣΌ N0: 6; и антитела, которые дополнительно или альтернативно содержат в их тяжелой цепи остатки 1-115 8ЕЦ ΣΌ N0: 36, но выбор этим не ограничивается.
Отдельные варианты антител, описанных в изобретении, включают в пределах вариабельной области их легкой цепи по меньшей мере один из гипервариабельных участков (СЭЕк) или гипервариабельные участки, имеющиеся в легкой цепи Ь2Н11.
СЭЕк Ь2Н11 обсуждаются в примере 5. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области легкой цепи: аминокислотные остатки 24-35; остатки 51-57 и остатки 90-99 8ЕЦ ΣΌ N0: 6. Отдельные антитела, предлагаемые в изобретении, включают в пределах вариабельной области их тяжелой цепи по меньшей мере один из СЭЕк, имеющихся в тяжелой цепи Ь2Н11. Таким образом, среди антител, предлагаемых в данном изобретении, имеются антитела, включающие от одной до всех трех следующих последовательностей в вариабельной области тяжелой цепи: остатки 31-35; остатки 50-65 и остатки 98-104 8ЕЦ ΣΌ N0: 36.
Нуклеиновые кислоты.
В одном варианте предлагаются изолированные молекулы нуклеиновых кислот. Нуклеиновые кислоты включают, например, полинуклеотиды, которые кодируют антитело, описанное в изобретении, или его фрагмент, дериват или вариант; достаточное количество полинуклеотидов для применения в качестве зондов гибридизации, праймеров полимеразной реакции синтеза цепи (РСЕ, ро1утегаке скат геасЦоп) или праймеров секвенирования для идентификации, анализирования, мутации или амплификации полинуклеотида, кодирующего полипептид; античувствительные (апб-кепке) нуклеиновые кислоты для ингибирования экспрессии полинуклеотида и комплементарные последовательности их. Нуклеиновые кислоты могут быть любой длины. Они могут содержать, например, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 750, 1000, 1500, 3000, 5000 или более нуклеотидов и/или могут включать одну или несколько дополнительных последовательностей, например регуляторные последовательности, и/или являться частью большей нуклеиновой кислоты, например вектором. Нуклеиновые кислоты могут быть одноцепочечными или двухцепочечными и могут включать нуклеотиды РНК и/или ДНК и искусственные варианты их (например, пептидные нуклеиновые кислоты).
ДНК, кодирующую полипептиды антител (например, только вариабельную область тяжелой или легкой цепи или полной длины), можно изолировать из В-клеток мышей, которые были иммунизированы Σ6-4Κ. ДНК можно изолировать стандартными методиками, такими как полимеразная реакция синтеза цепи (ро1етепке скат геасбоп, РСЕ). Фаговый дисплей является другим примером известного способа, посредством которого можно приготовить дериваты антител. В одном методе полипептиды, которые являются компонентами представляющего интерес антитела, экспрессируются в любой подходящей рекомбинантной экспрессирующей системе и экспрессированные полипептиды имеют возможность собраться с получением молекул антитела.
Фиг. 2 относится к последовательностям нуклеиновых кислот, кодирующих вариабельные области тяжелой цепи и вариабельные области легкой цепи, приведенных на фиг. 3. Вследствие вырождения генетического кода, каждая из полипептидных последовательностей фиг. 3 также кодируется большим количеством последовательностей нуклеиновых кислот. Данное изобретение предлагает каждую вырожденную нуклеотидную последовательность, кодирующую каждое антитело, описанное в изобретении.
Изобретение также относится к нуклеиновым кислотам, которые гибридизируются с другими нуклеиновыми кислотами (например, нуклеиновыми кислотами, включающими нуклеотидную последовательность, приведенную на фиг. 2) при определенных условиях гибридизации. Методы гибридизации нуклеиновых кислот известны в данной области техники. См., например, Сиггеп! Рго!осо1к ш Мо1еси1аг Вю1оду, 1окп ^беу & 8опк, КУ. (1989), 6.3.1-6.3.6. Как определено в данном изобретении, умеренно точное (жесткое) условие гибридизации применяет раствор для предварительной промывки, содержащий 5Х хлорида натрия/цитрата натрия (кобшт ск1опбе/кобшт сбга!е, 88С), 0,5% 8Ό8 (кобшт бобесу1 ки1£а!е, додецилсульфат натрия), 1,0 тМ ЕЭТА (е!ку1епеб1ашше!ебаасебс ас1б, этилендиаминтетрауксусная кислота) рН 8,0), буфер для гибридизации из 50% формамида, 6Х 88С и температуру гибридизации 55°С (или другие аналогичные растворы для гибридизации, как, например, содержащий около 50% формами
- 34 011302 да, с температурой гибридизации 42°С) и условия для промывки при температуре 60°С, в 0,5Х 88С (§об1ит бобесу1 8и1Га1е, додецилсульфат натрия), 0,1% 8Ό8 (кобшт бобесу1 8и1Га1е, додецилсульфат натрия). Точное (жесткое) условие гибридизации включает 6Х 88С (кобшт бобесу1 8и1Га1е, додецилсульфат натрия) при 45°С с последующей одной или несколькими промывками в 0,1Х 88С (кобшт бобесу1 8и1Га1е, додецилсульфат натрия), 0,2% 8Ό8 (кобшт бобесу1 8и1Га1е, додецилсульфат натрия) при 68°С. Кроме того, специалист в данной области техники может манипулировать условиями гибридизации и/или промывки, чтобы увеличить или уменьшить точность гибридизации с тем, чтобы нуклеиновые кислоты, содержащие нуклеотидные последовательности, которые по меньшей мере на 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 98 или 99% идентичны друг другу, обычно оставались бы гибридизованными друг с другом. Основные параметры, влияющие на выбор условий гибридизации, и рекомендации для разработки соответствующих условий излагаются в 8атЬгоок, ЕгШск апб Мап1аШ (1989, Мо1еси1аг С1ошпд: А ЬаЬога1огу Мапиа1., Со1б 8ргтд НагЬог ЬаЬога1огу Рге§8, Со1б 8ргтд НагЬог, ΚΥ., сНар1ег5 9 апб 11; и Сиггеп! Рго1осок ш Мо1еси1аг Вю1оду, 1995, Аи8иЬе1 е! а1., ебх, 1оЬп Абеу & 8оп§, Ечс., кесйопк 2.10 апб 6.3-6.4), и могут легко определяться специалистом в данной области техники, основываясь, например, на длине и/или основном составе ДНК.
Изменения могут вводиться с помощью мутации в нуклеиновую кислоту, тем самым, приводя к изменениям в аминокислотной последовательности полипептида (например, антитела), которую он кодирует. Мутации могут вводиться стандартными методиками, такими как сайт-направленный мутагенез или мутагенез опосредованный РСК. Предпочтительно, когда консервативные аминокислотные замены проводят в одном или нескольких предсказанных несущественных аминокислотных остатках. Или же мутации могут вводиться рандоминизированно на протяжении всей или части кодирующей последовательности, как, например, с помощью мутагенеза насыщения, и полученные мутанты можно подвергнуть скринингу по биологической активности, чтобы определить мутанты, которые сохраняют активность (например, связывание с рецептором ΣΕ-4). Вслед за мутагенезом, кодируемый протеин можно экспрессировать рекомбинантно и можно определить активность протеина. Мутации могут вводиться в нуклеиновую кислоту без существенного изменения биологической активности пептида, которую он кодирует. Например, можно получить нуклеотидные замены, приводящие к аминокислотным заменам в несущественных аминокислотных остатках. В одном варианте нуклеотидная последовательность, представленная на фиг. 2, или ее нужный фрагмент, вариант или дериват мутируется так, чтобы она кодировала бы аминокислотную последовательность, включающую одну или несколько делеций или замен аминокислотных остатков, которые приведены на фиг. 3, являясь остатками, где две или несколько последовательностей отличаются. В другом варианте мутагенез вставляет аминокислоту по соседству с одним или несколькими аминокислотными остатками, приведенными на фиг. 3, которые являются остатками, где две или несколько последовательностей отличаются. Или же мутации могут вводиться в нуклеиновую кислоту, которая селективно изменяет биологическую активность (например, связывание рецептора ΣΕ-4, ингибирование ΣΕ-4 и/или ΣΕ-13 и т.д.) полипептида, которую она кодирует. Например, мутация может количественно или качественно изменить биологическую активность. Например, количественные изменения включают увеличение, уменьшение или элиминацию активности. Например, качественные изменения включают изменения антигенной специфичности антитела.
В другом варианте предлагаются молекулы нуклеиновых кислот, которые пригодны для применения в качестве праймеров или гибридизационных зондов для детекции описанных в изобретении последовательностей нуклеиновых кислот. Молекула нуклеиновой кислоты по предлагаемому изобретению может включать только часть последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей первичный полипептид, например фрагмент, который может применяться в качестве зонда или праймера, или фрагмент, кодирующий активную часть (участок) (например, участок, связывающий рецептор ΣΕ-4) полипептида, описанного в изобретении.
Зонды, основанные на последовательности нуклеиновой кислоты по предлагаемому изобретению, могут применяться для детектирования нуклеиновой кислоты или подобных нуклеиновым кислотам, например транскриптов, кодирующих полипептид, описанный в изобретении. Зонд может включать меченую группу, например радиоизотоп, флуоресцентное соединение, фермент или кофактор фермента. Такие зонды могут применяться для определения клетки, которая экспрессирует полипептид.
В другом варианте предлагаются векторы, включающие нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, описанный в изобретении, или его часть. Примеры векторов включат плазмиды, вирусные векторы, неэписомные векторы млекопитающих и экспрессирующие векторы, например рекомбинантные экспрессирующие векторы.
Рекомбинантные экспрессирующие векторы по предлагаемому изобретению могут включать нуклеиновую кислоту, описанную в изобретении, в форме, пригодной для экспрессии нуклеиновой кислоты в клетке-хозяин. Рекомбинантные экспрессирующие векторы включают одну или несколько регуляторных последовательностей, выбираемых на основе клеток-хозяин, применяемых для экспрессии, которая операбельно связывается с экспрессируемой последовательностью нуклеиновой кислоты. Регуляторные последовательности включают последовательности, которые направляют постоянную экспрессию нук
- 35 011302 леотидной последовательности во многие типы клеток-хозяин (например, 8У40 ранний ген-усилитель, вирусный стимулятор саркомы Рауса и цитомегаловирусный промотор); последовательности, которые направляют экспрессию нуклеотидной последовательности только в определенные клетки-хозяин (например, ткань-специфические регуляторные последовательности, см. Уо88 с1 а1., 1986, Тгепбз Вюсйеш. δοί. 11:287, Мап1аЙ8 е1 а1., 1987, 8с1епсе 236:1237, полностью приведенные в данном изобретении в качестве ссылок); и последовательности, которые направляют индуцируемую экспрессию нуклеотидной последовательности в ответ на определенное лечение или состояние (например, металлотиониновый промотор в клетках млекопитающих и промотор тетвосприимчивый и/или восприимчивого к стрептомицину как в прокариотических, так и эйкариотических системах (см. там же). Специалисту в данной области техники понятно, что конструкция вектора экспрессии может зависеть от таких факторов, как выбор клетки-хозяин, которую трансформируют, уровня экспрессии нужного протеина и т.д. Векторы экспрессии, описанные в изобретении, могут вводиться в клетки-хозяин, тем самым, продуцируя протеины или пептиды, включая слитые протеины (белки) или пептиды, кодируемые нуклеиновыми кислотами, как описано в данном изобретении.
В другом варианте предлагаются клетки-хозяин, в которые был введен рекомбинантный экспрессирующий вектор, описанный в изобретении. Клетка-хозяин может быть любой прокариотической клеткой (например, Е.сой) или эукариотической клеткой (например, дрожжевой клеткой, клетками насекомого или млекопитающего) (например, СН0 клетками - клетками яичника китайского хомячка)). Вектор ДНК может вводиться в прокариотические или эукариотические клетки с помощью обычных методов трансформации и трансфекции. Известно, что для стабильной трансфекции клеток млекопитающих в зависимости от вектора экспрессии и примененной методики трансфекции, только малая часть клеток может интегрировать чужеродную ДНК в ее геном. Для того чтобы идентифицировать и выбрать эти интегранты, ген, который кодирует селектируемый маркер (например, для резистентности к антибиотикам), обычно вводится в клетки-хозяин наряду с представляющим интерес геном. Предпочтительные селектируемые маркеры включают маркеры, которые придают резистентность лекарственным препаратам, как например С418, гигромицину и метотрексату. Клетки стабильно трансфектированные с введенной нуклеиновой кислотой можно идентифицировать, среди прочих методов, выбором лекарственного препарата (например, клетки, которые включали ген селектируемого маркера будут выживать, в то время как другие клетки умирают).
Дериваты фрагменты и мутеины антител.
Дериваты антител, направленных против ΙΕ-4Κ, можно приготовить и провести скрининг желаемых свойств любым количеством известных методик. Некоторые из методик включают изолирование ДНК, кодирующей полипептидную цепь (или часть ее) антитела, имеющего интерес, и обработку ДНК посредством метода рекомбинантной ДНК (генной инженерией). ДНК может сливаться с другой представляющий интерес ДНК или изменяться (например, с помощью мутагенеза или другой стандартной методики), чтобы, например, прибавить, удалить или заменить один или несколько аминокислотных остатков.
В другом варианте предлагаются антигенсвязывающие фрагменты антител, описанных в изобретении. Такие фрагменты могут полностью состоять из последовательностей, полученных из антител, или могут включать дополнительные последовательности. Примеры антигенсвязывающих фрагментов включают Рай и Р(ай')2. Другие примеры приводятся в публикации Ьипбе е1 а1., 2002, Вюсйет. 8ос. Тгаиз. 30:500-06.
Отдельные цепи антител могут образоваться путем связывания фрагментов вариабельной области тяжелой и легкой цепи (Ρν участок) посредством аминокислотного мостика (короткий пептидный линкер), давая в результате отдельную полипептидную цепь. Такие одноцепочечные Ρνβ (ксРте) были приготовлены путем слияния ДНК, кодирующей пептидный линкер между ДНК-ами, кодирующими полипептиды двух вариабельных областей (Уь и УН). Полученные полипептиды можно отвернуть на себя с образованием антиген-связывающих мономеров или они могут образовать мультимеры (например, димеры, тримеры или тетрамеры) в зависимости от длины гибкого линкера между двумя вариабельными областями (Когй е! а1., 1997, Рго!. Епд. 10:423; Когй е! а1., 2001, Вюто1. Епд. 18:95-108). Комбинированием различных Уь- и УН-содержащих полипептидов могут образоваться мультимерные ксРте, которые связываются с различными эпитопами (Кпаидкит е! а1., 2001, Вюто1. Епд. 18:31-40). Методики, разработанные для продуцирования одноцепочечных антител, включают методики, описанные в патенте США И8 Ра!еп! № 4946778; и публикациях Вйб, 1988, 8с1епсе 242:423; Низ!оп е! а1., 1988, Ргос. ИаИ. Асаб. 8ск И8Л 85:5879; \\агб е! а1., 1989, ХаИае 334:544, бе СгааР е! а1., 2002, Ме!йобз Мо1. Вю1. 178:379-87. Одноцепочечные антитела, полученные из антител, приведенных в изобретении (включая, но не ограничиваясь 8сΡν8, содержащими комбинации вариабельных областей Ь2Н1, Ь3Н1, Ь4Н1, Ь5Н1, Ь1Н2, Ь1Н3, Ь1Н4, Ь1Н5, Ь1Н6, Ь1Н7, Ь1Н8, Ь1Н9, Й1Н10, Й1Н11, Ь2Н4, Й2Н12, Й2Н13, Й2Н14, Ь6Н1 Ь2Н2, Ь2Н3, Ь2Н6, Ь2Н7, Ь2Н8, Ь2Н9, Й2Н10 и Й2Н11), относятся к данному изобретению.
Известны методики для получения антитела другого подкласса или изотипа из антитела, представляющего интерес, т.е. «переключение» подкласса. Таким образом, Ι§Ο антитела можно получить, например, из ΙβΜ антитела и \зсе νе^8а (наоборот). Такие методики позволяют приготовить новые антитела, которые обладают антиген-связывающими свойствами данного антитела (родительского антитела), но
- 36 011302 также проявляет биологические свойства, связанные с антителом изотипа или подкласса, отличающегося от таковых для родительского антитела. Могут применяться методы рекомбинантных ДНК. В таких методиках может применяться клонированная ДНК, кодирующая отдельные полипептиды антител, например ДНК, кодирующая константную область антитела нужного изотипа. См. также Тайбо е! а1., 2002, МеШобз Мо1. Бю1. 178:303-16.
Таким образом, антитела, описанные в изобретении, включают антитела, содержащие, например, комбинации вариабельных областей Ь2Н1, Ь3Н1, Ь4Н1, Ь5Н1, Ь1Н2, Ь1Н3, Ь1Н4, Ь1Н5, Ь1Н6, Ь1Н7, Ь1Н8, Ь1Н9, Ь1Н10, Ь1Н11, Ь2Н4, Ь2Н12, Ь2Н13, Ь2Н14, Ь6Н1 Ь2Н2, Ь2Н3, Ь2Н6, Ь2Н7, Ь2Н8, Ь2Н9, Ь2Н10 и Ь2Н11 с нужным изотипом (например, Ι§Α, Ι§61, Ι§62, Ι§63, Ι§64, Ι§Μ, Ι§Ε и Ι§Ό), а также РаЬ или Р(аЬ)'2 фрагменты его. Кроме того, если нужен Ι§Θ4, то также требуется ввести точковую мутацию (СР8СР СРРСР) в шарнирную область, как описано в работе В1оот е! а1., 1997, Рго!ет 8с1епсе 6:407, приведенной в данном изобретении в качестве ссылки, чтобы облегчить стремление к образованию дисульфидных связей внутри Н-цепи, которые могут привести к гетерогенности в Ц64 антителах.
Кроме того, также известны методики для получения антител с различными свойствами (т. е. изменяя аффинность (сродство) для антигена, с которым они связываются). Одна такая методика, называемая перестановкой цепи, включает отображение спектров генов вариабельной области иммуноглобулина на поверхности нитевидного бактериофага, часто называемое [отображение] фаговым дисплеем. Перестановку цепи применяли для приготовления антител высокой аффинности (сродства) к гаптену 2фенилоксазол-5-ону, как описано в работе Магкз е! а1., 1992, ВюТескпо1оду, 10:779.
Молекулярная эволюция гипервариабельных участков (сотр1етеп1ап1у бе!егт1шпд гедюпз, СЭКз) в центре рецепторной зоны также применялась для изолирования антител с увеличенной аффинностью (сродством), например, антител, с увеличенной аффинностью (сродством) к с-егЬВ-2, как описано у 8сЫег е! а1., 1996, I. Мо1. Вю1. 263:551. Таким образом, такие методики пригодны в приготовлении антител для ΙΕ-4Κ.
В отдельных вариантах, антитела, описанные в данном изобретении, имеют связывающую аффинность (Ка) для ΙΕ-4Κ, по меньшей мере равную 1х108. В других вариантах, антитела показывают Ка, по меньшей мере равную 1х109, по меньшей мере равную 1 х 1010, по меньшей мере равную 1x10й.
Далее, данное изобретение включает мультиспецифические антитела, например биспецифические антитела, т.е. два различных эпитопа ΙΕ-4Κ или эпитопа ΙΕ-4Κ и эпитопа ΙΕ-13Κ, через два разных антиген-связывающих центра или участка. Кроме того, биспецифические антитела, как описано в данном изобретении, могут включать антиген-связывающий центр от одного из описанных антител и второй антиген-связывающий участок от других описанных в данном изобретении антител. Или же биспецифическое антитело может включать антиген-связывающий центр от одного из описанных антител и второй антиген-связывающий центр от другого ΙΕ-4Κ антитела, что известно в данной области техники (или которое можно приготовить известными способами).
Многочисленные способы приготовления биспецифических антител известны в данной области технике и обсуждаются в патентной заявке США И8 Ра!еп! АррШабоп 09/839632, зарегистрированной 20 апреля 2001 г. (приведенной в данном изобретении в качестве ссылки). Такие способы включают применение межвидовых гибридом, как описано у М1181еш е! а1., 1983, №1!иге 305:537 и у других (И8 Ра!еп! 4474893; И8 Ра!еп! 6106833), и химическое связывание фрагментов антитела (Вгегтап е! а1., 1985, 8с1епсе 229:81; О1епп1е е! а1., 1987, I. Iттипо1. 139:2367; И8 Ра!еп! 6010902). Кроме того, биспецифические антитела могут продуцироваться посредством рекомбинантных средств, например, используя остатки лейцинового зиппера (т.е. из Роз и 1ип протеинов, которые предпочтительно образуют гетеродимеры; Коз1е1пу е! а1., 1992, I. Iттипо1. 148:1547) или другие структуры интерактивных областей замка и ключа, как описано в патенте США И8 Ра!еп! 5582996. Дополнительные полезные методики включают методики, описанные в работе Когй е! а1., 1997, зирга (см.выше); в патентах США И8 Ра!еп! 5959083 и И8 Ра!еп! 5807706.
В другом варианте предлагается дериват антитела. Дериватизированное антитело может включать любую молекулу или вещество, которое придает желаемое свойство антителу, как, например, увеличенное время полупериода существования в отдельном применении. Дериватизированное антитело может включать, например, поддающийся обнаружению (или меченый) остаток (например, радиоактивную, колориметрическую, антигенную или ферментную молекулу, поддающуюся обнаружению гранулу (как, например, магнитную или золотую гранулу) или молекулу, которая связывается с другой молекулой (например, биотином)), терапевтический или диагностический остаток (например, радиоактивный, цитотоксический или фармацевтически активный остаток), или молекулу, которая увеличивает пригодность антитела для отдельного применения (например, введение субъекту, например человеку, или другим применениях ш у1уо или ш убго). Примерами молекул, которые могут применяться для дериватизации антитела, являются альбумин (например, альбумин сыворотки человека) и полиэтиленгликоль (ро1уе!11у1епе д1усо1, РЕО). Альбумин-связанные или ПЕГилированные (связанные с полиэтиленгликолем, РЕСу1а!еб) дериваты антител можно приготовить с применением известных в данной области технике методик. В одном варианте антитело образует конъюгат или, другими словами, связывается с транс-тиретином
- 37 011302 (!гапк!йуге!ш. ТТК) или вариантом ТТК. ТТК или вариант ТТК можно химически модифицировать. например. химическими соединениями. выбираемыми из группы. состоящей из декстрана. поли(нвинилпирролидона). полиэтиленгликолей. гомополимеров пропиленгликолей. сополимеров пропиленоксида/этиленоксида. полиоксиэтилированных полиолов и поливиниловых спиртов. Патентная заявка США И8 Ра!. Арр. № 20030195154.
Терапевтические способы и введение антител.
Способы. предложенные в данном изобретении. включают введение анти-ГО-4К антитела субъекту. тем самым. понижая вызванную ГО-4К биологическую реакцию. которая играет роль при отдельном состоянии. В отдельном варианте способы. описанные в изобретении. включают контактирование эндогенного ГО-4К с анти-ГО-4К антителом. например. в процедуре ех νί\Ό.
Лечение заключается в облегчении или предупреждении по меньшей мере одного симптома болезни или уменьшении тяжести заболевания и тому подобное. Антителу не требуется осуществлять полное «лечение» или ликвидировать каждый симптом или проявление болезни для того. чтобы войти в состав жизнеспособного терапевтического средства. Как признается в области. имеющей отношение к данному вопросу. лекарственные препараты. применяемые в качестве терапевтических средств. могут уменьшить тяжесть данного болезненного состояния. но не требуют устранения каждого проявления болезни. для того чтобы их рассматривать в качестве пригодных терапевтических средств. Один способ осуществления изобретения относится к способу. включающему введение больному ГО-4К антагониста в количестве и в течение времени. достаточном для того. чтобы вызвать длительное улучшение по сравнению с показателем исходного состояния. которое отражает тяжесть отдельного заболевания.
В данном изобретении рассматриваются антитела. которые ингибируют связывание как ГО-4. так и ГО-13 с клетками. Способ подавления вызванных ГО-4 и вызванных ГО-13 активностей у людей включает введение эффективного количества такого антитела. Таким образом могут лечиться состояния. вызванные ГО-4 или ГО-13 или обоими цитокинами.
Как понимается в имеющей отношение к данному вопросу области. антитела вводятся субъекту способом. соответствующим показанию. Антитела могут вводиться любым подходящим техническим приемом. включая парентеральное. местное введение или введение с помощью ингаляции. но выбор этим не ограничивается. При парентеральном введении антитело можно вводить. например. посредством внутрисуставного. внутривенного. внутримышечного введения. введения внутрь пораженного органа. интраперитонеального или подкожного пути введения. с помощью инъекции ударной дозы вещества или непрерывной инфузии. Локальное введение. если предполагается. например. в болезненное место или участок повреждения. является трансдермальной доставкой и продолжительным выделением из имплантатов. Доставка с помощью ингаляции включает. например. ингаляцию через нос или рот. применение распылителя. ингаляцию антагониста в аэрозольной форме и тому подобное. Другие альтернативы включают глазные капли; пероральные препараты. включая драже. сиропы. таблетки и жевательную резинку; и местные (локальные) препараты. такие как примочки (лосьоны). гели. аэрозоли и мази.
Также предполагается применение анти-ГО-4К антител в методиках ех νί\Ό. Например. кровь больного или другая жидкость. имеющаяся в организме. может контактировать с антителом. которое связывает ГО-4К ех νί\Ό. Антитело может связываться с подходящей нерастворимой матрицей или материалом твердой подложки.
Полезно. когда антитела вводятся в форме композиции. включающей по меньшей мере одно антиГО-4К антитело и один или несколько дополнительных компонентов. таких как физиологически приемлемый носитель. наполнитель или разбавитель. Данное изобретение предлагает такие композиции. включающие эффективное количество анти-ГО-4К антитела. для применения в способах. предлагаемых в данном изобретении.
Композиции содержат анти-ГО-4К антитело(а). например. в формах. описанных выше. Антитело может быть. например. полным антителом или антиген-связывающим фрагментом или его дериватом. полученным генной инженерией.
Композиции могут. например. включать антитело вместе с буфером. антиоксидантом. как. например. аскорбиновая кислота. низкомолекулярным полипептидом (например. полипептид. имеющий менее 10 аминокислот). протеином. аминокислотой. углеводом. таким как глюкоза. сахароза или декстрины. агентами. образующими комплексы. такими как ЭДТА (этилендиаминтетрауксусная кислота). глутатионом и другими стабилизаторами и наполнителями. Нейтральный забуференный физиологический раствор или солевой раствор. смешанный с неспецифическим сывороточным альбумином. являются примерами соответствующих разбавителей. Согласно соответствующим промышленным стандартам. могут также добавляться консерванты. такие как бензиловый спирт. Композиция может входить в состав в виде лиофилизата. применяя соответствующие растворы наполнителей (например. сахарозу) в качестве разбавителей. Соответствующие компоненты являются нетоксическими для реципиентов при применяемых величинах доз и концентраций. Другие примеры компонентов. которые могут применяться в фармацевтических составах. имеются в Кеттд1оп'к Рйагтасеийса1 8с1епсек. 16'1' Ей.. Маск РиЬИкЫпд Сотрапу. Еак!оп. РА. 1980.
Комплекты для применения практикующими врачами включают анти-ГО-4К антитело и этикетку
- 38 011302 или другие инструкции по применению для лечения любого из состояний, обсуждаемых в данном изобретении. Комплект предпочтительно включает стерильный препарат одного или нескольких антиЛЬМК антител, которые могут быть в форме композиции, как описано выше, и могут быть в одном или нескольких сосудах.
Дозировки и частота введения может изменяться согласно таким факторам, как путь введения, конкретный применяемый тип антитела, природа и тяжесть заболевания, которое требует лечения, является ли это состояние острым или хроническим и размер (вес) и общее состояние субъекта. Соответствующие дозировки можно определить методиками, известными в имеющей отношение к данному вопросу области, например в клинических исследованиях, которые могут включать изучение по увеличению масштабов дозы.
Антитело могут вводить, например, один раз или более одного раза, например, с постоянными интервалами в течение какого-то промежутка времени. В отдельных вариантах осуществления изобретения антитело вводят в течение периода времени, соответствующего, по меньшей мере, месяцу или более, например в течение одного, двух или трех месяцев или даже в течение неопределенного времени. Для лечения хронических состояний обычно наиболее эффективно длительное лечение. Однако для лечения острых состояний может быть достаточным введение в течение более коротких периодов времени, например от одной до шести недель. Обычно антитело вводят до тех пор, пока больной явно ощутит соответствующую степень улучшения по сравнению с исходным состоянием для выбранного медицинского показателя или выбранных медицинских показателей.
Отдельные варианты осуществления данного изобретения включают введение субъекту антитела при дозе в 1 нг антитела на 1 кг веса больного в день (1 нг/кг/день) до 10 мг/кг/день, более предпочтительно от 500 нг/кг/день до 5 мг/кг/день и наиболее предпочтительно от 500 мкг/кг/день до 2 мг/кг/день. В дополнительных вариантах антитело вводят взрослым один раз в неделю, два раза в неделю или три и более раз в неделю для лечения опосредованной ΣΕ-4 и/или ΣΠ-13 болезни, состояния или нарушения, например медицинского нарушения, раскрытого в данном изобретении. Если вводят в виде инъекции, эффективное количество антитела в дозе для взрослого человека может варьироваться от 1-20 мг/м и предпочтительно составляет 5-12 мг/м2. Или же может вводиться ровная доза, количество может варьироваться в пределах 5-100 мг/в дозе. Один интервал для ровной дозы составляет 20-30 мг/в дозе. В одном способе осуществления изобретения ровная доза в 25 мг/в дозе повторно вводится в виде инъекции. Если применяют путь введения, отличный от инъекционного, дозу, соответственно, корректируют согласно стандартным медицинским приемам. Один пример лечебной схемы включает введение инъекции в дозе 20-30 мг анти-ШИК антитела от одного до трех раз в неделю в течение периода времени по меньшей мере трех недель, хотя может быть необходимым лечение в течение более длительных периодов для стимулирования желаемой степени улучшения. Для субъекта педиатрического возраста (возраст 4-17 лет) одна типично пригодная схема лечения включает подкожную инъекцию 0,4 мг/кг вплоть до максимальной дозы в 25 мг антитела, введенного два или три раза в неделю.
Отдельные варианты способов, представленных в данном изобретении, включают подкожную инъекцию от 0,5 до 10 мг, предпочтительно от 3 до 5 мг антиЛЬ^К антитела один или два раза в неделю. Другой способ относится к легочному введению (например, с помощью распылителя) 3 мг или более антитела в неделю.
Примеры лечебных схем, предложенных в данном изобретении, включают подкожную инъекцию антиИЬЛК антитела раз в неделю при дозе от 1,5 до 3 мг для лечения астмы, легочного саркоидоза, нефроза минимальных изменений, аутоаллергического увеита, серповидно-клеточного анемического криза, синдрома Черджа (Черга)-Стросса, синдрома Шенгрена, аутоиммунного лимфопролиферативного синдрома, преэклампсии, аутоиммунной гемолитической анемии, пищевода Барретта, болезни Грейвса, болезни Кавасаки и полостного туберкулеза. Еженедельное введение антиЛЬ^К антитела продолжается до тех пор, пока достигают желаемого результата, например притупляются симптомы у субъекта. Если требуется, лечение можно возобновить, или же могут вводиться поддерживающие дозы.
В другом способе осуществления изобретения антитело вводят субъекту в количестве и в течение времени, достаточном для стимулирования улучшения, предпочтительно длительного улучшения по меньшей мере по одному показателю, который отражает тяжесть расстройства, которое требует лечения. Различные показатели, которые отражают степень заболевания, болезни или состояния субъекта, можно оценить с помощью определения того, является ли количество препарата и время лечения достаточным. Такие показатели включают, например, клинически признанные показатели тяжести болезни, симптомы или проявления рассматриваемого расстройства. В большинстве случаев полагают, что улучшение является длительным, если субъект ощущает улучшение по меньшей мере в двух случаях, разделенных двумя-четырьмя неделями. Степень улучшения обычно определяется врачом, который может провести данное определение, основываясь на признаках или симптомах, и кто также может применить вопросники (анкеты), которые предназначаются для субъекта, как, например, анкеты о качестве жизни, разработанные для данной болезни.
В качестве одного примера при лечении доброкачественной гиперплазии простаты антиЛЬ^К антитело вводят субъекту в количестве и в течение времени, эффективных в регрессии рубца или полного
- 39 011302 излечивания. Могут даваться поддерживающие дозы, или лечение, если таковое требуется, может возобновиться.
Повышенные уровни 1Ь-4 ассоциируются с рядом нарушений, которые обсуждались выше. Субъектов с данным нарушением можно подвергнуть скринингу, чтобы определить тех индивидов, которые имеют повышенные уровни 1Ь-4, или, чтобы определить тех, у которых повышенная иммунная реакция ТН-2-типа, тем самым, выявив субъектов, кому наибольшую пользу может принести лечение анти-1Ь-4Х антителом. Таким образом, способы лечения, предлагаемые в данном изобретении, возможно включают первую стадию измерения уровня 1Ь-4 у субъекта. Анти-1Ь-4Х антитело может вводиться субъекту, у которого 1Ь-4 уровни повышены по сравнению с нормой. Наоборот или дополнительно, субъекта можно подвергнуть предварительному скринингу, чтобы определить, имеет ли субъект повышенную иммунную реакцию ТН-2-типа, до введения антител(а) и/или антагониста(ов) против одного или нескольких цитокинов ТН-2-типа.
Уровни 1Ь-4 у субъекта (и, возможно, других цитокинов ТН-2-типа) могут контролироваться во время и/или после лечения анти-1Ь-4Х антителом, чтобы обнаружить понижение уровней цитокинов. Для некоторых расстройств случай повышенных 1Ь-4 уровней и баланс между иммунными реакциями ТН-1типа и ТН-2-типа может изменяться согласно таким факторам, как стадия заболевания или конкретная форма болезни. Известные методики могут применяться для измерения 1Ь-4 уровней, например, в сыворотке субъекта и для оценки иммунных реакций ТН-2-типа. Уровни цитокинов в образцах крови могут измеряться с помощью ЕЫ8Л (епхуше-бпкеб ппшипокогЬегИ аккау - твердофазного иммуноферментного анализа) или с помощью, например, ЬиМГИЕХ™ мультиплексного анализа цитокина (Ьиш1пех Согрогайоп, Ликин ТХ) или ИЕЬНЛ® (Регк1пЕ1шег ЬгГе8с1епсек, \Уа11ас 0у., Тигки, Ип1апб).
Отдельные варианты способов и композиций, описанных в изобретении, включают применение анти-1Ь-4Х антитела и одного или нескольких дополнительных 1Ь-4Х антагонистов, например двух или более антител или дериватов антител, описанных в изобретении, или антитела или деривата антитела, описанного в изобретении, и одного или нескольких других 1Ь-4Х антагонистов. В других вариантах анти-1Ь-4Х антитела вводятся как таковые или вместе с другими агентами, пригодными для лечения состояния, которым больной страдает. Примеры таких агентов включают и относящиеся к белку, и не относящиеся к белку лекарственные препараты. Если одновременно назначаются многие терапевтические агенты, соответственно, можно корректировать дозировки, как признается в имеющей отношение к данному вопросу области. Одновременное назначение (соназначение) и комбинационная терапия не ограничиваются одновременным введением, а включают лечебные схемы, в которых 1Ь-4Х антитело вводится по меньшей мере один раз в течение курса лечения, который включает введение по меньшей мере одного другого терапевтического агента больному.
Примерами других агентов, которые могут одновременно вводиться с 1Ь-4Х антителами, являются другие антитела, цитокины или рецепторы цитокинов, которые выбираются согласно конкретному состоянию, которое требует лечения. Или же не относящиеся к белку лекарственные препараты, которые пригодны при лечении одного определенного состояния, обсуждаемого выше, могут совместно вводиться с 1Ь-4Х антагонистом.
При лечения 1дЕ-опосредованных состояний, анти-1Е-4Х антитело может совместно вводиться с 1дЕ антагонистом. Одним примером является анти-1Ь-4Х антитело, например Х0ЬА1К® (СепегИесй 8ои111 8ап Егапс1ксо, СА). Гуманизированные анти-1Е-4Х моноклональные антитела описываются, например, у Ргек(а е( а1., 1993, 1. 1шшипо1. 151:2623-32 и у Айе1го111 е( а1., 2000, 1. А11егду Сйп. 1шшипо1. 106:253-59.
Анти-1Ь-4Х антитела могут совместно вводиться с 1Ь-5 антагонистом, который может быть молекулой, которая мешает связыванию 1Ь-5 с 1Ь-5 рецептором, таким как анти-1Ь-5Х или анти-1Ь-5 антителом (например, человеческое или гуманизированное анти-1Ь-5 или анти-1Ь-5Х моноклональное антитело) или с рецептором, таким как полипептид растворимого человеческого 1Ь-5 рецептора. Подразумевалось, что 1Ь-5 рецептор играет роль в опосредовании аллергических реакций. Таким образом, введение антагониста(ов) 1Ь-4Х и 1Ь-5 предполагается для лечения аллергических реакций, включая аллергическую астму, но выбор этим не ограничивается.
Другие примеры агентов, которые могут применяться вместе с 1Й-4И антителами, включают анти1Ь-4 антитела, 1Ь-4 мутеины, 1Ь-4 связывающие дериваты 1Ь-4Х (как описывается, например, в патентах США И8 Ра1еп1к 5840869; 5599905; 5856296; 5767065; 5717072; 6391581; 6548655; 6472179 и 5844099), 1Й-13 связывающие дериваты 1Ь-13, 1Ь-4 и/или 1Й-13 связывающие химерные дериваты 1Ь-4Х и 1Ь-13Х, 1Й-13 мутеины и антагонисты СИ23 (например, анти-СИ23 антитела, такие как ГОЕС-152™ (ГОЕС Рйагшасеийса1к, 8ап И1едо, СА), фосфодиэстераза 4 (например, Х0ЕЬиМ1ЕА8Т®, Вук Сн1йеп Рйагшасеийсак, КопкЕт/, Сегшапу), интегрины (например, Х411™, Хосбе, №Иеу, N1), Т1Мк, СоЬ5, 8ТАТ6 и лейкотриены.
Для лечения астмы 1Ь-4Х антитела могут совместно вводиться с другими противоастматическими препаратами, как, например, вдыхаемые кортикостероиды, β-антагонисты, лейкотриеновые антагонисты, ксантины, флутиказон, салметерол, албутерол, нестероидные агенты, такие как кромолин и тому подобные. 1Ь-4Х антитела могут совместно вводиться с другими противоаллергическими препаратами для ле
- 40 011302 чения аллергических реакций.
Один способ осуществления данного изобретения относится к совместному введению антитела или деривата антитела, описанного в изобретении, и флутиказона и/или салметерола для лечения нарушения, такого как астма. В данном изобретении приводятся композиции, включающие антитело или дериват антитела, флутиказон и салметерол. ΛΩνΆΙΒ Э[БКиБ* (61ахоБтййК1те, Βе8еа^с11 ТпапДе Рагк, КС) включает флутиказон пропионат и салметерол ксинафоат. А^VАIΒ ОККИБ® и антитело или дериват антитела могут доставляться любым путем введения, эффективным для лечения или предупреждения конкретной болезни, нарушения, повреждения или состояния, например, с помощью ингаляции для лечения астмы.
Другой пример комбинационной терапии включает совместное введение антитела или деривата антитела, описанного в изобретении, и ГЬ-9 антагониста больному, у которого астма. Может применяться любой пригодный ГЬ-9 антагонист, как, например, ГЬ-9 рецептор (например, растворимая форма его), антитело, которое мешает связыванию ΙΕ-9 с клеточной поверхностью рецептра (например, антитело, которое связывается с ГЬ-9 или с полипептидом ΙΕ-9 рецептора), или другое соединение, которое ингибирует вызванную ГЬ-9 биологическую активность. ГЬ-9 рецепторы включают рецепторы, описанные в XV 0 93/18047 и в ИБ Ра1еп1к 5789237; и 5962269, которые приводятся в данном изобретении в качестве ссылок.
В дополнительном варианте комбинационной терапии способ лечения неспецифического язвенного колита включает совместное введение антитела и деривата антитела, описанного в изобретении, и по меньшей мере одного ГЬ-1 антагониста. Примеры ΙΠ-1 антагонистов включают ГЬ-1 рецептор типа Ι, ГЬ-1 рецептор типа ΙΙ, антагонист ΙΠ-1 рецептора (Ш-Ша), антагонистические (блокирующие) антитела, направленные против ΙΕ-1, и антагонистические антитела, направленные против ΙΠ-1 рецептора. Могут применяться различные формы рецепторов, такие как фрагменты, варианты и слияния, например растворимая форма ΙΠ-1 рецептора типа ΙΙ, например, как описано в патенте США ИБ Ра1еп1 5350683, приведенном в данном изобретении в качестве ссылки.
Один способ осуществления данного изобретения включает совместное введение антитела или деривата антитела как такового или вместе с ΙΠ-13 антагонистом(ами) больному, у которого имеется нефроз с минимальными изменениями, например, чтобы уменьшить тяжесть заболевания.
Другим способом, предложенным в изобретении, является способ лечения различных аллергических воспалительных состояний, включающих совместное введение антитела или деривата антитела, описанного в изобретении, и ΙΠ-13 антагониста(ов). Таким способом лечат состояния, как, например, астму, аллергии, и хронические заболевания легких, такие как муковисцидоз и хроническая легочная болезнь непроходимости.
Может применяться любой пригодный ΙΠ-13 антагонист, включая ΙΠ-13 рецепторы (предпочтительно растворимые формы их), антагонисты ΙΠ-13 рецепторов, антитела, направленные против ΙΠ-13 или Ш13Β, другие протеины, которые мешают связыванию ΙΠ-13 с ΙΠ-13 Β, и соединения, которые ингибируют опосредованную ΙΠ-13 сигнальную трансдукцию. ΙΠ-13 рецепторы и гетеродимеры, включающие ΙΕ-13Β полипептиды в качестве их компонентов, описаны выше. Антитела, которые индуцируются против Ш4Β, могут подвергаться скринингу по способности также функционировать в качестве ΙΠ-13 антагонистов, как обсуждалось выше.
Способ лечения или предупреждения состояния, характеризующегося пониженной функцией эпителиального барьера, включает совместное введение антитела или деривата антитела, описанного в изобретении, и одного или нескольких ΙΠ-13 антагонистов. Такие состояния обсуждались выше. В одном варианте состояние представляет собой астму. Отдельные варианты относятся к совместному введению одного или нескольких антител или дериватов антител, описанных в изобретении, и одного или нескольких ΙΠ-13 антагонистов больному с состоянием, затрагивающим снижение функции эпителиального барьера легких или функции эпителиального барьера кишечника, где и Ш-4, и ΙΠ-13 играют роль в пониженной функции барьера. Отрицательное действие ΙΠ-13 на функцию эпителиального барьера легких или кишечника можно подтвердить, применяя методы анализа, такие как описаны в примере 3. См. также ΖιιικΙ е1 а1., 1996, 1. Вю1. Скет. 271:7460-64.
Другой способ, предложенный в данном изобретении, включает совместное введение антитела или деривата антитела и интерферона-γ (т!ег£егоп-у, ШЫ-у) больному с состоянием, затрагивающим снижение функции эпителиального барьера легкого. Возможно, такой способ далее включает совместное введение одного или нескольких ΙΠ-13 антагонистов больному (т.е. совместное введение антитела или деривата антитела, описанного в изобретении, ΙΡΝ-γ и ΙΠ-13 антагониста). В одном варианте у больного астма. Антитело или дериват антитела, описанный в изобретении, ШИ-у и/или ΙΠ-13 антагонист могут вводиться любым способом доставки, эффективным для лечения или предупреждения конкретной болезни, расстройства (нарушения), состояния или повреждения, например для лечения астмы путем ингаляции или инъекции.
Один способ, предложенный в данном изобретении для лечения астмы, включает введение антитела или деривата антитела, описанного в изобретении, и интерферона-γ больному, у которого астма. Другой
- 41 011302 способ лечения астмы включает совместное введение антитела или деривата антитела, описанного в изобретении, ΣЕN -γ и ГЬ-13 антагониста больному, у которого астма. В одном варианте ΣЕN -γ совместно вводится астматику вместе с антителом, которое функционирует в качестве антагониста как ГЬ-4, так и ГЬ-13. Примеры таких антител описываются в другом месте данного изобретения.
Одиночное антитело или дериват антитела по предлагаемому изобретению может функционировать в качестве ГЬ-4 антагониста и ГЬ-13 антагониста, как обсуждалось выше. Как пример такого агента, некоторые антитела, индуцированные против ГЬ-4Ка, могут мешать связыванию как с ГЬ-4, так и с ГЬ-13 рецепторными комплексами вследствие обменного ГЬ-4Ка компонента в таких мультисубъединичных рецепторных комплексах (обсуждалось выше). Таким образом, одиночное антитело или дериват антитела по предлагаемому изобретению может применяться в способе для ингибирования уменьшения функции барьера.
Антитело или дериват антитела по предлагаемому изобретению может совместно вводиться с одним или несколькими антагонистами лейкотриеновых рецепторов для лечения нарушений, таких как аллергические воспалительные заболевания, например астма и аллергии. Примеры антагонистов лейкотриеновых рецепторов включают монтелукаст (например, 8INСυ^ΑIКΛ Мегск & Со., ^кйейоике, N1), пранлукаст (например, 0N0N®, 0по Рйагтасеийсак, 0кака, 1араи) и зафирлукаст (например, АСС0ЕАТБ®, АкйаЕепеса, ^11т1пд1оп, ΌΕ). Лекарственные препараты, которые функционируют в качестве ингибиторов 5-липоксигеназы, могут совместно вводиться с ГЬ-4К антагонистом для лечения астмы.
Способы, представленные в данном изобретении, включают введение больным с синдромом Черджа (Черга)-Стросса антитела или деривата антитела и одного или нескольких из следующих антагонистов: ГЬ-4К антагонистов), ГЬ-5 антагониста^в), ГЬ-13 антагониста^в) и ГдБ антагониста(ов). Один пример такого способа включает совместное введение антитела или деривата антитела по предлагаемому изобретению и ГЬ-5 антагониста(ов) больному с синдромом Черджа (Черга)-Стросса. В другом варианте больному совместно вводятся антитело или дериват антитела по предлагаемому изобретению и ГдБ антагонист(ы). Еще в другом варианте больному совместно вводятся антитело или дериват антитела по предлагаемому изобретению и ГБ-13 антагонисты).
Гормон релаксин может совместно вводиться с антителом или дериватом антитела по предлагаемому изобретению для лечения склеродермии (системного склероза), идиопатического пневмосклероза или любого другого нарушения, характеризующегося пневмосклерозом, как, например, состояний, включающих фиброз легких, которые обсуждались выше. Рекомбинантный человеческий релаксин предпочтителен для применения при лечении людей.
Способ лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы включает совместное введение антитела и деривата антитела по предлагаемому изобретению и одного или нескольких дополнительных противовоспалительных агентов. Примеры агентов, которые подавляют воспаление, включают антагонисты фактора некроза опухоли ((итог песго818 ГасЮг, ТЯЕ) и ГБ-17 антагонисты.
Может применяться любой подходящий ГБ-17 антагонист, включая ГБ-17 рецептор (например, растворимые формы его), антагонисты ГБ-17 рецептора, антитела, направленные против ГБ-17 или ГБ-17 рецептора, другие протеины, которые мешают связыванию ГБ-17 с ГБ-17 рецептором, и соединения, которые ингибируют опосредованную ГБ-17 сигнальную трансдукцию, но выбор этим не ограничивается. Рецептор ГБ-17, включая растворимые формы его и олигомеры, описывается в заявке \¥0 96/29408, приведенной в данном изобретении в качестве ссылки. Альтернативный способ, предложенный в данном изобретении, включает введение ГБ-17 антагониста для лечения больного с доброкачественной гиперплазией предстательной железы.
Аналогично, может применяться любой подходящий ТКЕ антагонист, включая ТКЕ рецептор (предпочтительно растворимые формы его), слитые белки, включающие ТНЕ рецептор (или включающий ТНЕ-связывающую часть ТМЕ рецептора), антагонисты ТМЕ рецептора, антитела, направленные против ТПЕ или ТПЕ рецептора, другие протеины, которые мешают связыванию ТПЕ с ТПЕ рецептором, и соединения, которые ингибируют опосредованную ТПЕ сигнальную трансдукцию, но выбор этим не ограничивается. Другими примерами ТПЕ ингибиторов являются лекарственные препараты талидомид и пентоксифиллин. Предпочтительно, когда применяется протеин ТПЕ рецептора, известный как р75 или р80 ТХЕ-К. Предпочтительным ТПЕ антагонистом является растворимый человеческий ТПЕ рецептор (8ТХЕ-К) в димерной форме, как, например, димеры кТЫЕ-КЕс слитых белков (протеинов). Одним таким димером является этанерцепт (ΕХВКΕ^®, Гттипех Согрогайоп, 8еаШе, XVА). р75/р80 ЮТ-К включая растворимые фрагменты и другие формы его, описывается в заявке ν0 91/03553, приведенной в данном изобретении в качестве ссылки.
Соответственно в одном способе осуществления изобретения антитело или дериват антитела по предлагаемому изобретению совместно вводится с ЮТ· антагонистом для лечения любого состояния, в котором играют роль опосредованные ГБ-4К и вызванные нежелательные иммунные реакции, как, например, воспаление. Один способ, предложенный в данном изобретении, включает совместное введение антитела или деривата антитела и ТNЕ антагониста больному с воспалительным заболеванием пищеварительного тракта, болезнью Крона (гранулематозной болезнью) или неспецифическим язвенным ко
- 42 011302 литом. Другие варианты относятся к способу, включающему совместное введение антитела или деривата антитела по предлагаемому изобретению и Т№ антагониста больному, у которого болезнь Кавасаки, аутоиммунная гемолитическая анемия, аутоиммунный увеоретинит, аутоиммунный лимфопролиферативный синдром, синдром Шегрена, хронический синдром усталости (утомления) или гепатотоксичность, вызванная лекарственным препаратом, таким как диклофенак.
Другой способ, предложенный в данном изобретении, включает совместное введение антитела или деривата антитела и Т№ антагониста беременной женщине, у которой развилась преэклампсия. В другом варианте введение антитела или деривата антитела, описанного в изобретении, и ТИР антагониста продолжается на протяжении беременности.
Соответствующие дозировки этанерцепта будут изменяться согласно природе заболевания, которое требует лечения, тяжести болезни и размера (веса) больного (например, взрослый или ребенок) и других факторов, как признается в имеющей отношение к данному вопросу области. В одном варианте способов, предложенных в данном изобретении, ЕНВЮЕЕ' вводится дважды в неделю в виде подкожной инъекции при дозе от 1 до 25 мг. Один вариант дозировки в педиатрии составляет 0,4 мг/кг. Отдельные способы, предложенные в данном изобретении, включают совместное введение антитела или деривата антитела и ЕХВКЕЬ® больному с аутоиммунным лимфопролиферативным синдромом, синдромом Шегрена, где ЕХВКЕЬ® вводится в виде подкожной инъекцией с дозой от 1 до 25 мг.
Для лечения реакции «трансплантат против хозяина» (гомологичная болезнь) (дгай уегкик 11051 άίδеаке, СУНЭ) антитело или дериват антитела по предлагаемому изобретению совместно вводится по меньшей мере с одним из следующих агентов: Т№ антагонистом, ГС-1 антагонистом, стероидами или кортикостероидами. В одном варианте ингибитором ЮТ является ЕХВКЕЬ®. В другом варианте, НС-1 антагонист представляет собой растворимую форму ΙΕ-1 рецептора типа ΙΙ, например, как описано в патенте США И8 Ра1еп1 5350683. В другом варианте СУНЭ ассоциирует (например, обнаруживается впоследствии) с трансплантацией костного мозга. Антитело или дериват антитела по предлагаемому изобретению может применяться вместе по меньшей мере с одним из перечисленных выше агентов в способах для подавления иммунной реакции, направленной против трансплантированных клеток, ткани и/или аллоантигена.
Ряд антагонистов цитокина и других агентов/лекарственных препаратов описываются в данном изобретении, поскольку пригодны для комбинационной терапии (например, совместного введения с антителом или дериватом антитела по предлагаемому изобретению) в лечении отдельных заболеваний. Понятно, что такие антагонисты, агенты или лекарственные препараты также находят применение в качестве одиночных агентов в лечении таких заболеваний. Также понятно, что раскрытие способов, включающих введение антагониста для отдельного цитокина, если не указано особо, включает для лечения болезни введение антагониста одного типа и также включает введение двух или более различных антагонистов для такого цитокина.
Пример 1. Получение моноклональных антител.
Данный пример демонстрирует способ получения моноклональных антител, распознающих человеческий рецептор ΙΕ-4.
Полипептиды ΙΕ-4 рецептора могут применяться в качестве иммуногенов в генерировании моноклональных антител стандартными методиками, например методиками, описанными в патенте США И8 Ра1еп1 5599905, полностью приведенным в данном изобретении в качестве ссылки. Признается, что полипептиды в различных формах могут применяться в качестве иммуногенов, например непроцессированных белков (первичных продуктов трансляции), его фрагментов, слитых белков его, таких как Рс слияния; клеток, экспрессирующих химерный протеин на клеточной поверхности и т. д.
Чтобы резюмировать пример такой методики, ΙΕ-4Κ иммуноген, эмульгированный в полном адъюванте Фрейда, вводится в виде инъекции подкожно крысам Льюиса (Ьетая), в количестве, варьируемом от 10-100 мкл. Тремя неделями позже проводится ревакцинация иммунизированных животных дополнительным иммуногеном, эмульгированным в полном адъюванте Фрейда, и ревакцинация впоследствии проводится каждые три недели. Образцы сыворотки периодически отбираются ретро-орбитальным отбором крови (ге1го-огЬЕа1 ЫееФпд) или иссечением кончика хвоста (ΙαίΙ-Ιίρ ехсыоп) для тестирования с помощью дот-блот анализа, ЕЫ8А (епхуте-кпкеб пптипокогЬегИ аккау, твердофазный иммуноферментный анализ) или ингибированием связывания 125Ι-ΙΕ-4 с экстрактами клеток, экспрессирующих ΙΕ-4Κ. После определения титра соответствующего антитела позитивным животным вводится окончательная внутривенная инъекция антигена в физиологическом растворе. Тремя-четырьмя днями позже животные умерщвляются, собираются спленоциты и сливаются с линией миеломных клеток мышей или крыс АС8653. Полученные линии гибридомных клеток помещаются в многолуночный микротитрационный планшет в ГАТ селективной среде (гипоксантин, аминоптерин, тимидином, ЕурохапШте, аттор!егт, Фупибте (НАТ)) для ингибирования пролиферации неслитых клеток, гибридом и клеточных гибридов селезенки.
Таким образом генерированные гибридомные клоны подвергаются скринингу по реакционной способности с ΙΕ-4Κ. Первоначальный скрининг супернатантов гибридом использует захват (поглощение) антитела и связывание частично очищенного 125Ι-ΙΕ-4 рецептора. Гибридомы, которые являются положи
- 43 011302 тельными в данном методе скрининга, тестируются с помощью захвата (поглощения) модифицированного антитела для детектирования линий гибридомных клеток, которые продуцируют неполное (блокирующее) антитело. Таким образом детектируются гибридомы, которые секретируют моноклональное антитело, способное ингибировать 125Ι-Ι6-4 связывание с клетками, экспрессирующими Ι6-4Κ. Такие гибридомы затем вводятся в виде инъекции в полости брюшины голых мышей для продуцирования асцитов, содержащих высокие концентрации (>1 мг/мл) анти-ШЧК моноклонального антитела. Полученные моноклональные антитела можно очистить осаждением с помощью сульфата аммония с последующей гель-хроматографией исключения и/или аффинной хроматографией, основанной на связывании антитела с протеином 6.
Были описаны способы генерирования человеческих антител у трансгенных мышей и эти способы хорошо известны в данной области техники. См., например, Сбеп е! а1., 1993, Инета!. Iттиηο1. 5:б47-5б; Сбеп е! а1., 1993, ЕМВ0 I. 12:821-30; СЬо1 е! а1., 1993, №пигс Сепебск 4: 117-23; Шкб^бб е! а1., 199б, №!иге В1о!есб. 14: 845-51; Нагбтд е! а1., 1995, Аппа1к №\ν Уогк Асаб. 8с1.; ЬопЬегд е! а1., 1994, №!иге 3б8: 85б-59; ЬопЬегд, 1994, НапбЬоок Ехрегб Рбагтасо1. 113: 49-101; ЬопЬегд е! а1., 1995, Шета! Κον. Ιπιπιπпо1. 13: б5-93; Моткоп, 8, 1994, №!иге 3б8: 812-13; №иЬегдег, 199б, №!иге Вю!есб. 14: 82б; Тау1ог е! а1., 1992, Шс. Ас1бк Кек. 20: б287-95; Тау1ог е! а1.,1994, Шета!. Штипок б: 579-91; Тони/ика е! а1., 1997, №1Ц.1ге Сепебск 1б: 133-43; Тони/ика е! а1., 2000, Ргос. №11. Асаб. 8ск И8А 97: 722-27; ТиаШоп е! а1., 1993, Ргос. №!. Асаб. 8ск И8А 90: 3720-24; ТиаШоп е! а1., 1994, ί. Штипок 152: 2912-20; Кикке1 е! а1., 2000, Шесбоп апб Штипйу Аргб 2000: 1820-2б; Са11о е! а1., 2000, Еиг. ί. Штипок 30: 534-40; Оау1к е! а1., 1999, Сапсег Ме!ак!ак1к Кеу. 18: 421-25; Сгееп, 1999, ί. Штипо1. Ме!бобк 231: 11-23; ^акοЬον^!к, 1998, Абνаηсеб Огид Оебуегу Кех 31:33-42; Сгееп е! а1., 1998, ί. Ехр. Меб. 188: 483-95; ^акοЬον^!к, 1998, Ехр. 0рш. Шек!. Ьгадк 7: б07-14; Ткиба е! а1., 1997, Сепописк 42: 413-21; Мепбех е! а1., 1997, ^Ше Сепебск 15: 14б-5б; ^акοЬον^!к, 199б, Аеб'к НапбЬоок ок Ехрептеп!а1 Штипо1оду, Тбе Шедга!еб Iттиηе 8ук!ет Уо1. ГУ, 194.1-194.7; Мепбех е! а1., 1995, Сепописк 2б: 294-307; ^акοЬον^!к, 1994, Сиггеп! Вю1. 4: 7б1-б3; АгЬопек, 1994, Штипбу 1: 247-б0; Сгееп е! а1., 1994, Шине Сепебск 7: 13-21; ^акοЬον^!к е! а1., 1993, №ιΙιικ 3б2: 255-58; ,1акоЬо\Пк е! а1., 1993, Ргос. №!. Асаб. 8ск И8А 90: 2551-55.
Пример 2. Анализ для оценки блокирующей активности.
Данный пример демонстрирует анализ, который может применяться для определения антител, которые уменьшают зависимую от Ι6-4 и/или Ι6-13 экспрессию СЭ23. Анализ основывается на способности как ΙΕ-4, так и Ι6-13 усиливать экспрессию поверхностного антигена СЬ23, связанного с активацией, на человеческие В-клетки.
Антитела, индуцируемые против человеческого Ι6-4Κ (бШЬ-4К), тестируются или в форме супернатантов гибридомы или очищенного протеина. До прибавления к культурам, антитела обменивают буфер на среду для культивирования (ΚРМI 1б40 плюс 10%-ная фетальная сыворотка теленка, инактивированная нагреванием) с помощью центрифугирования, применяя фильтрующие устройства Сепбксоп Й1!ег беукек (Атюоп) с 10 кЭа отсечением.
Человеческие В-клетки периферической крови очищаются, как описано ранее (Мотк е! а1., 1999, I. Вю1. Сбет. 274:418-23). В-клетки (3х105/ячейка) в среде для культивирования помещаются в 9блуночный круглодонный микротитрационный планшет и предварительно инкубируются при комнатной температуре в течение 30 мин с тестируемыми антителами при указанных конечных концентрациях. Рекомбинантный человеческий Ι6-4 или Ι6-13 далее прибавляется к культурам при указанных концентрациях и клетки культивируются в течение 20-24 ч при 37°С в увлажненной атмосфере с 5% СО2. К концу периода культивирования клетки промываются один раз в РВ8 (рбокрба!е-Ьийегеб кабпе, забуференный фосфатом физиологический раствор) + 0,02% №N3 в 9б-луночном культуральном планшете и повторно суспендируются в блокирующем буфере (2% нормальная сыворотка кролика + 1% нормальная сыворотка козы в РВ8 (рбокрба!е-Ьийегеб кабпе, забуференный фосфатом физиологический раствор) + NаNз). ί.Ό23 моноклональное антитело (тАЬ), меченое фикоэритрином (рбусоегуШпп, РЕ), или РЕ-меченое изотип-контролирующее тАЬ (оба от РбагтШдеп) далее прибавляются к клеткам при конечном разбавлении 1:10. Клетки инкубируются в течение 30 мин при 4°С, промываются три раза в РВ8 (рбокрба!еЬийегеб кабпе, забуференный фосфатом физиологический раствор) + №N3 и анализируются на Еас8сап (Вес!оп Оюкткоп) для экспрессии СЭ23.
Клетки, культивированные со средой роста гибридомы или неблокирующим человеческим антибГЬ-4К антителом, совместимым с изотипом, включаются в качестве негативных контролей. Анти-бШЪ4К тАЬ мыши или крысы (МАВ 230, Κ&Ό 8ук!етк, Мшпеаробк, МЩ, о котором ранее показано, что оно блокирует связывание и функцию как 6Ι6-4, так и 6Ι6-13, применяется в качестве позитивного контроля для нейтрализации СЬ23 индукции с помощью Ι6-4 и Ι6-13.
Пример 3. Анализы для измерения потери функции барьера.
Данный пример предлагает способы оценки способности Ι6-4 антагониста ингибировать вызванное Ι6-4 повреждение эпителиальной ткани и потерю функции эпителиального барьера.
В одном варианте предлагается способ применения Ι6-4 антагониста для ингибирования вызванного Ι6-4 повреждения эпителия, включая эпителий легких или эпителий кишечника, но выбор этим не
- 44 011302 ограничивается. Повреждение эпителия может привести к потере функции барьера. Следующее представляет собой неограничивающие примеры методик, которые могу применяться в оценке способности 1Ь-4 антагониста ингибировать вызванное 1Ь-4 повреждение эпителия и потерю функции эпителиального барьера.
Известны клетки, которые могут применяться в приготовлении моделей эпителия (эпителиальных барьеров) ш νίΐτο. Например, Са1и-3 человеческие эпителиальные клетки легких пригодны для применения в исследованиях функции барьера (АМ1ей е! а1., 2001, Ат. ί. Рйуз1о1. Се11 Рйузю1. 281:С2029-38). Другой пригодной линией клеток является человеческая линия эпителиальных клеток кишечника, названная Т84. Т84 клетки культивируются в условиях, которые приводят к образованию монослоя эпителиальных клеток на проницаемой подложке, как описано у Мабага е! а1., 1985, ί. Се11 Вю1., 101:2124-33, Мабага е! а1., 1989, ί. С1т. 1пуез1. 83:724-27 и Уонакип е! а1., 1999, Ат. ί. Рйузю1. 276 (0аз!гош!ез!. Ькег РЬ.у8ю1. 39):01279-88. Таким образом генерированный эпителиальный монослой имитирует эпителиальный барьер кишечника.
Культивированные монослои проверяются по свойству (например, устойчивость к пассивному (инертному) трансэпителиальному ионному потоку), которое может отличить неповрежденный (здоровый) эпителий от поврежденного эпителия. Один такой анализ определяет способно ли отдельное меченное радиоактивным изотопом соединение пересечь эпителиальный монослой. Утечка меченного радиоактивным изотопом соединения через монослой указывает, что барьер является проницаемым, а не здоровым (интактным). Например, может применяться анализ переноса маннита для детектирования эпителиального повреждения, оценивая перемещение меченного радиоактивным изотопом маннита (например, 3Н маннита) через монослой (см. Мабага и 81аГГогб. зирга (выше)).
Другие примеры способов оценки состояния эпителия включают сцинтиграфические методы (например, такие, которые обсуждались Мабага и 8!аГГогб, зирга (выше)) и измерения трансэпителиального электрического сопротивления (например, такие, которые обсуждались Уоиакт и Айб1ек, зирга (выше)).
Патент США И8 Ра!еп! 6033688 («'688 ра!еп!», «'688 патент»), полностью приведенный в данном изобретении в качестве ссылки, также описывает методики, которые могут применяться в исследованиях проницаемости барьера; см., например, примеры 1 и 4 патента. Человеческие трахеальные эпителиальные клетки культивируются в условиях, которые дают монослой, показывающий трансэпителиальное электрическое сопротивление. Трансэпителиальное сопротивление (указывая интактный (неповрежденный) барьер) определяют с применением вольтметра. Влияние вещества или лечения на эпителиальный монослой оценивается, подвергая монослой действию вещества или лечения и затем измеряя активности ионного транспорта в камерах - Иззтд сйатЬегз (колонка 8, строчки 40-56). Подобные методики могут проводиться с применением монослоев, которые генерируются из других типов клеток, например бронхиальных эпителиальных клеток от людей, больных муковисцидозом (см. '688 патент, пример 4, колонка
11).
Таким образом, способность вещества или лечения ингибировать вызванное 1Ь-4 уменьшение функции барьера эпителиального слоя можно оценить, подвергая эпителиальный слой действию 1Ь-4 и веществу или лечению, анализируя состояние его и сравнивая это состояние эпителиального слоя с состоянием эпителиального слоя, который был подвергнут действию 1Ь-4 в отсутствии вещества или лечения. Улучшение состояния эпителиального слоя, подвергнутого действию вещества или лечению, относительно эпителиального слоя, не подвергнутого действию вещества или лечения, указывает, что вещество или лечение ингибирует вызванное 1Ь-4 повреждение эпителиальной ткани и потерю функции эпителиального барьера.
В одном таком анализе монослой Т84 клеток служил в качестве модели кишечного эпителиального барьера ίπ убго, как обсуждалось выше. Найдено, что 1Ь-4, прибавленный к базолатеральной стороне поляризованных эпителиальных клеток, уменьшает функцию барьера на 70% в течение 48-72 ч лечения. Если полипептид растворимого 1Ь-4 рецептора, содержащего внеклеточную область, прибавляли в то же самое время, что и 1Ь-4, уменьшение функции барьера предотвращалось, и барьер сохранялся на том же уровне, что и необработанные (контрольные) клетки.
Метод анализа также проводился на монослое, полученном из легочных эпителиальных клеток, которые служили в качестве модели легочного эпителиального барьера ш νίΙΐΌ. Найдено, что 1Ь-4, прибавленный к базолатеральной стороне поляризованных легочных эпителиальных клеток, уменьшает функцию барьера на 50% в течение 48-72 ч лечения. Если полипептид 1Ь-4 рецептора прибавляли в то же самое время, что и 1Ь-4, уменьшение функции барьера предотвращалось и барьер сохранялся на том же уровне, что и необработанные (контрольные) клетки.
Пример 4. Анализы по измерению связывающей активности.
Данный пример предлагает способы оценки связывающей активности анти-1Ь-4В антитела.
В анти-йи1Е-4В (или его вариант, дериват или фрагмент) вводят метку радиоактивного изотопа с 1251 с применением твердофазного аналога хлорамина-Т (IΟ^ΟΟЕN®, Р1егсе, 8!. Ьошз, М0) или используют другую пригодную методику для введения радиоактивного изотопа со специфической активностью примерно в 3х1016 срм/ммоль (срм - число импульсов в минуту). Потеря биоактивности оценивается путем
- 45 011302 сравнения связывающего ингибирования или другого анализа биологического ингибирования с соответствующим немеченным протеином. Или же можно измерить ингибирование связывания меченного радиоактивного изотопом II,-4 с помощью анти-НиП,-4Х (или его варианта или фрагмента). Анализы равновесного связывания на клетках, экспрессирующих ΙΕ-4Κ, проводятся в 96-луночных микротитрационных планшетах, по существу, как описано в работе 1б7егба, е! а1., 1990, I. Ехр. Меб. 171:3861-73. Вкратце, серийные разбавления протеина, меченного радиоактивным изотопом, в связывающей среде (ХРМ1 1640, 2,5% В8А, 20 тМ НЕРЕ8, 0,02% азида натрия, рН 7,2), дополненной 0,5 мг/мл человеческого 1дС и 5% сыворотки человека) инкубируются с клетками (2,5х106/в лунке) в течение 2 ч при 4°С в общем объеме, равном 150 мкл. Свободные и связанные зонды, меченные радиоактивным изотопом, отделяются микроцентрифугированием посредством разделительной фталат-масляной смеси и проводится подсчет в гамма-счетчике. Анализы ингибирования применяют протеин, меченный радиоактивным изотопом, при постоянной концентрации 0,5 нМ в присутствии или при отсутствии потенциальных ингибиторов. Неспецифическое связывание определяют в присутствии 100-кратного избытка немеченного протеина. Теоретические кривые, основанные на модели конкурентного ингибирования на одиночном участке, соответствуют данным, как описано у Ооххег е! а1., 1984, I. 1ттиио1. 132:751. Процент ингибирования вычисляется по уравнению 1(%) = [100 К1(1)/[1+Ка(Ь) + Κΐ(Σ)], где Σ - молярная концентрация ингибитора, Е - молярная концентрация протеина, меченного радиоактивным изотопом, и Κι и Ка - аффинные константы ингибитора и протеина соответственно.
Изотермы равновесного связывания и конкурентного ингибирования также можно определить в 96луночных микротитрационных планшетах с покрытием из 1Е-4К/1’е или контрольного Ес протеина, захваченного посредством козлиного противочеловеческого Ес поликлонального антитела (или другого пригодного противочеловеческого Ес антитела). Вкратце, планшеты инкубируются с 5 мкг/мл противочеловеческого Ес в РВ8 (рйо8рйа!е-ЬиГГегеб зайие, забуференный фосфатом физиологический раствор) при 4°С, промываются дважды с РВ8 и затем инкубируются с 1Ь-4К/Ес или контрольным Ес протеином в РВ8/0,01% Тетееи 20 (твин 20) в течение около 12 ч при 4°С и снова дважды промываются с помощью РВ8 (рйозрйа!е-ЬиГГегеб зайие, забуференный фосфатом физиологический раствор). Изотермы равновесного связывания используют серийные разбавления связывающего протеина, меченного Σ, в связывающей среде и анализы ингибирования применяют постоянную концентрацию, равную 0,5 нМ анти-НиП,4Х меченного 125Σ в присутствии или при отсутствии немеченных потенциальных конкурентных ингибиторов, как описано выше. После 2 ч при 4°С планшеты промываются дважды в РВ8 (рйозрйа!е-ЬиГГегеб зайие, забуференный фосфатом физиологический раствор) и специфически связанный протеин высвобождается с помощью 50 мМ цитратного буфера (рН 3,0) или обработкой 8Ώ8 (зобшт бобесу1 зи1Га!е, додецилсульфат натрия) и выделенный анти-Нн1Е-4К, меченный Σ, измеряется с помощью гамма счетчика. Данные обрабатываются, как описано у Ооххег е! а1., зирга (выше).
Связывающую активность можно также оценить с помощью резонанса поверхностного плазмона, используя В1АСОХЕ® биосенсор (В1Асоге 1и!егиа!юиа1 АВ, иррза1а, 8етебеи). Вкратце, козлиныйпротиво-человеческий 1дС, специфическое антитело гамма-цепи (или другое пригодное специфическое антитело гамма-цепи, СНЕС) ковалентно сшиваются с биосенсорными чипами, используя стандартную процедуру сшивания амином и реагенты согласно инструкциям производителей. Лнти-1и|П.-4К или контрольное антитела инъецируется сверху иммобилизованного СНЕС и изменяющиеся количества ΙΕ-4Κ независимо проходят через чип, покрытый СНЕС (негативный контроль), а также через чип, покрытый анти-1и|1Е-41У Регенерация чипа выполняется с помощью одного 10-мкл импульса 100 мМ фосфорной кислоты при 10 мкл/мин. Все связывание проводится в НВ8 (10 мМ НЕРЕ8, 0,15М №С1, 3,4 тМ НОТА, 0,02% №N3, 0,005% поверхностно-активного вещества Р20, рН 7,4).
Пример 5. Антитела, связывающие рецептор ΙΕ-4.
Данный пример относится к аминокислотным последовательностям вариабельных областей тяжелой и легкой цепей антител и дериватов антител, которые связываются с ΙιιιΙ Е-41Х, и нуклеотидным последовательностям, кодирующим их.
Полностью человеческое 1дС4 антитело, включающее вариабельную область легкой цепи Е1 и вариабельную область тяжелой цепи Н1, изолировали, как описано в примере 8 заявки VО 01/92340 (опубликованной 6 декабря 2001 г.), полностью приведенной в данном изобретении в качестве ссылки.
Вариабельную область тяжелой цепи Н1 изолировали кДНК клонированием из линии гибридомных клеток, которые продуцировали антитело Е1Н1 путем полимеразной реакции синтеза цепи (ро1утегазе сйат геасйои, РСХ), используя следующие олигонуклеотиды в качестве праймеров:
ОТСОАССССОССАССАТСОА (А/О)ΊΤ (О/Г) 6СССТОА6СТ6О (8Е0 ГО N0:70) 8αίΙ
Вырожденная; комплементарная с УН3030
СТТОАССАООСАОСССАОООС (8Е(2 ГО N0:71)
Комплементарная с ΗιιΙβΟ, 3' Ара I участка
Продукт амплификации вставляли в виде 8а1 Σ/Ара Σ фрагмента в свободный рСеи-Т (Рготеда,
- 46 011302
МабГо^ ШТ). Для того чтобы улучшить расщепление, нативную Н1 лидерную последовательность заменяли на УН3-30 лидерную последовательность (Ма!киба е! а1., 1993, №!иге беиеНск 3:88-94).
Сайт-направленный мутагенез вариабельной области тяжелой цепи Н1 с использованием олигонуклеотидов применяли для создания последовательностей Н2-Н14 вариабельной области тяжелой цепи, приведенных на фиг. 3. Показано, что каждая из этих последовательностей вариабельной области тяжелой цепи вместе с последовательностью вариабельной области легкой цепи 1.1 связывается с !В-4 рецептором альфа, используя твердофазный иммуноферментный анализ (е11/уте-1п1кес1 ^ттиηоко^Ьеη! аккау, ЕЫ8А).
Наивные гены вариабельной области легкой цепи, относящейся к человеку, генерировались с помощью полимеразной реакции синтеза цепи (ро1утегаке скат геасйо11, РСК) из В-клеток человека и использовались для создания библиотеки генов вариабельной области кДНК. Они подвергались скринингу вместе с вариабельной областью тяжелой цепи Н1 для связывания с человеческим ΣΕ-4 рецептором. Вариабельные области легких цепей 1,2-1.6 идентифицировали с применением данного метода. Их нуклеотидные и аминокислотные последовательности приводятся на фиг. 2 и 3 соответственно, где СЭК области каждой цепи выделяются жирным шрифтом и подчеркиваются в Ь1. Также указываются остовные области (Тгате^огк, РК).
Для клонирования константной области каппа-цепи, относящейся к человеку, РНК выделялась из линии гибридомных клеток мыши или крысы, экспрессирующих константную область легкой каппацепи, относящейся к человеку, с применением комплекта К№аку М1ш Κι! (С)1аде11, \'а1е11с1а, С А). РНК обратно считывали с применением комплекта синтеза одноцепочечной (первой цепи) кДНК (Р1гк!-8!галб сОУА 8у1М11ек1к Κΐί, АтегкЕат РЕагташа Вю!есЕ, Р1кса!а^ау, N1). Легкую каппа-цепь нуклеиновой кислоты, относящейся к человеку, амплифицировали с помощью полимеразной реакции синтеза цепи (ро1утегаке сЕат геасйо11, РСК) из кДНК в виде Вк\о !/У)1 Σ кассеты, используя праймеры
АТСАААООТАСбОТСКЗСТССАССАТСТбТСГГСАТС (8Ер Ю N0:72)
СЛТГАААС6С6баЖ66А10СТААСАС^ (8Β0ΙΟΝΟ:73)
Νοίϊ
Вариабельные области легких цепей 1.1 и 1.2 независимо соединяли с константной областью легкой каппа-цепи, относящейся к человеку, следующим образом: Уке !/Вк1 ШI ДНК фрагмент, кодирующий вариабельную область легкой цепи Ь1, и Вк1 ШЕУд Σ ДНК фрагмент, кодирующий ДНК фрагмент константной области легкой каппа-цепи, относящейся к человеку, одновременно субклонировали в рОС409 экспрессирующий вектор млекопитающего (описанного в Οϊγϊ е! а1., 1994, ЕМВО Σ. 13:2822-30 и патенте США ϋ8 Ра!. № 6642358, приведенными в данном изобретении в качестве ссылок), используя УкШ лидерную последовательность. УкШ лидерную последовательность конструировали в виде 8а1 !/У1е Σ кассеты с помощью амплификации полимеразной реакции синтеза цепи (ро1утегаке сЕат геасйо11, РСК) Козака (Ко/ак, 1989, 1. Се11 Вю1. 108:229-41) и УкШ А27 (8!гаиЬтдег е! а1., 1988, 1. Мо1. Вю1. 199:23-34) лидерные последовательности, используя следующие олигонуклеотиды в качестве праймеров:
(ЛЕСАССАССХСАСЕАгКЮААА(ХХХ;АСЮССАС)СТГСЛи11и1ТССТССГАСГС1'О
8а1\
ССТСССАОАТАССОСТАОСОАА^ (8Е0 ГО N0:74)
ТСЮАОАСТбСОТСААСАСААГГГСССТАбСООТАТСТОСлОАОССАСтАОТАОСАОСгАСОАА ОАОААССТСЮОСГСКХЮтСГАТСаТСКЮССАСТО^ (8ΕΟΙΟΝΟ:75)
8а11
Шесть последних нуклеотидов в природном УкШ А27 лидере заменяли на нуклеотиды, кодирующие участок У1е Σ. Это привело к изменениям в аминокислотах от треонина до глицина и от аланина до серина, но не влияло на участок расщепления.
Каждый вариабельный участок тяжелой цепи Н1, Н4 и Н14 соединялся с константной областью Σ§Ο4 человека следующим образом: 8а1 Σ/Ара Σ ДНК фрагмент, кодирующий вариабельную область тяжелой цепи Н1, и Ара ЕУ)1 Σ ДНК фрагмент, кодирующий константную область !дО4 человека (8ЕО ГО Ν('):77), одновременно вставляли в 8а1 ЕУ)1 Σ гидролизованный экспрессирующий вектор млекопитающего рОС409 (описанного в Οϊγϊ е! а1., 1994, ЕМВО Σ. 13:2822-30), используя УН5а лидерную последовательность, которая модифицирована на ее 3'-конце, чтобы кодировать участок У1е Σ
АТСССОТСААОСХКГАТССТТОС^^ (8ΕρΠ)ΝΟ:76) №е I
В результате такого изменения двумя последними аминокислотами являются аланин и серин, тогда как две последние аминокислоты дикого типа УН5а являются цистеин и аланин. Сайт-направленный
- 47 011302 мутагенез применяли на Н4-1дС4-кодирующей конструкции для получения конструкций, включающих вариабельные участки тяжелых цепей Н12 и Н13. Нуклеотидные и аминокислотные последовательности Н1-Н14 приводятся на фиг. 2 и 3 соответственно, где СОК участки каждой цепи выделяются жирным шрифтом и подчеркиваются в Н1. Также указываются остовные области (Егате^огк, ЕК).
Антитела и/или дериваты антител, включающие комбинации вариабельных областей Ь1Н1, Ь1Н2, Ь1Н3, Ь1Н4, Ь1Н5, Ь1Н6, Ь1Н7, Ь1Н8, Ь1Н9, Б1Н10, Б1Н11, Ь2Н1, Ь2Н2, Ь2Н3, Ь2Н4, Ь2Н5, Ь2Н6, Ь2Н7, Ь2Н8, Ь2Н9, Б2Н10, Б2Н11, Б2Н12, Б2Н13, Б2Н14, Ь3Н1, Ь4Н1, Ь5Н1 и Ь6Н1, тестировались с применением анализа биохимического связывания и/или метода примера 2 и найдено, что связываются с 1Ь-4 рецептором.
Пример 6. Виды и специфичность к последовательностям антител.
Данный пример относится к методу определения вида и специфичности к последовательности антитела, которое связывается с 1Ь-4 рецептором.
Связывающий анализ клеточного сортера с возбуждением флуоресценции (£1иогексепсе-асбуа!еб се11 койег, ЕАС8) может применяться для оценки вида и/или специфичности к последовательности антитела анти-1Ь-4 рецептора. Внеклеточная область 1Ь-4 рецептора включает область рецептора цитокина (область I) и область фибронектина типа III (область II) (Наде е! а1., 1999, СеЬ1 97:271-81). Конструкции, включающие области I и/или II человеческого рецептора (П-4, области I и/или II рецептора К.-4 мыши или крысы, комбинации областей I и II рецептора ^-4 человека и мыши или крысы или фрагменты областей I и/или II рецептора ^-4 человека или мыши или крысы экспрессируются в виде С-концевых слияний в рамке с авидином цыпленка (последовательности рецептора ^-4 мыши или крысы приводятся, например, в 8ски1!е е! а1., 1997, I. Ехр. Меб. 186:1419-29, \Упдк1оп е! а1., 1992, Сго\\1к Еас!огк 6:103-18, Нагаба е! а1., 1990, Ргос. N11. Асаб. 8ск И.8.А. 87:857-61, Мок1еу е! а1., 1989, Се11 59:335-48). Экспрессирующие векторы слитого белка индивидуально быстротечно трансфектируюся в 293Т клетки.
Кондиционированная среда применяется в качестве источника слитого белка без очистки. Авидиновая метка конструкции рецептора ^-4 захватывается из раствора гранулой, покрытой биотином. Антиавидиновое антитело, меченное флуоресцинизотиоцианатом (Диогексет 1ко!кюсуапа!е, ЕГГС), применяется для обнаружения авидиновой части слитой конструкции. Антитело анти-ПН рецептора инкубируется с биотин-захватываемой конструкцией ^-4 рецептора. Флуоресцинизотиоцианатом меченный Е(аЬ)' мыши ЦС против человека применяется в качестве вторичного антитела для детектирования. Смесь гранулы-антитело подвергается анализу клеточного сортера с возбуждением флуоресценции (Диогексеп!асбуа!еб се11 койег апа1ук1к, ЕАС8-анализ) на приборе Вес!оп Оюкткоп Вюкаепсе ЕАС8сап (ВО, ЕгапкИп Ьакек, N1).
Применяя вышеупомянутый метод, найдено, что некоторые антитела анти-кЕМ рецептора, описанные в данном изобретении, хорошо связывались с конструкцией, включающей области I и II рецептора ^-4 человека, но не связывались с конструкцией, включающей области I и II рецептора ^-4 мыши или крысы. Антитела слабо связывались с конструкцией, включающей область I и II рецептора ^-4 человека (но не содержащей область II), и не полностью - с конструкцией, включающей область рецептора ^-4 человека (но не содержащей область I). Далее найдено, что антитела хорошо связывались с конструкцией, включающей область I рецептора ^-4 человека и область II рецептора ^-4 мыши или крысы.
Вышеприведенные примеры как рабочие, так и пророческие не являются ограничивающими и приводятся для иллюстрации отдельных способов осуществления данного изобретения. Все источники, процитированные в данном изобретении, полностью включаются в качестве ссылок.

Claims (47)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Изолированное антитело, включающее или
    а) вариабельную область легкой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, выбираемую из группы, состоящей из
    I) последовательности, по меньшей мере на 80% идентичной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0: 4, 6, 8,10, 12 и 14,
    II) последовательности по меньшей мере 15 соседних аминокислот с последовательностью, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0: 4, 6, 8, 10, 12 и 14,
    III) последовательности, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 80% идентична нуклеотидной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕО ГО N0: 3, 5, 7, 9, 11 и 13, и
    IV) последовательности, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, которая гибридизируется в умеренно точных (жестких) условиях с комплементом нуклеотидной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0: 3, 5, 7, 9, 11 и 13, или
    б) вариабельную область тяжелой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, выбираемую из группы, состоящей из
    I) последовательности по меньшей мере на 80% идентичной последовательности, выбираемой из
    - 48 011302 группы, состоящей из 8ЕО ΣΌ N0: 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 и 62,
    ΣΣ) последовательности по меньшей мере 15 соседних аминокислот с последовательностью, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕЦ ΣΌ N0: 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 и 62,
    ΣΣΣ) последовательности, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 80% идентична нуклеотидной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕО ΣΌ N0: 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59 и 61, и
    Σν) последовательности, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, которая гибридизируется в умеренно точных (жестких) условиях с комплементом нуклеотидной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕЦ ΣΌ N0: 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59 и 61, или
    в) вариабельную область легкой цепи а) и вариабельную область тяжелой цепи б), при условии, что упомянутое антитело подпункта а), б) или в) не содержит как вариабельную область легкой цепи с аминокислотной последовательностью 8ЕЦ ΣΌ N0: 4, 8ЕЦ ΣΌ N0: 63, 8ЕЦ ΣΌ N0: 65, 8ЕЦ ΣΌ N0: 67 или 8ЕЦ ΣΌ N0: 69; так и вариабельную область тяжелой цепи с аминокислотной последовательностью 8ЕЦ ΣΌ N0: 16, 8Е0 ΣΌ N0: 64, 8ЕЦ ΣΌ N0: 66, 8ЕЦ ΣΌ N0: 68; и где антитело связывается с человеческим ΣΕ-4 рецептором.
  2. 2. Антитело по п.1, включающее или
    а) вариабельную область легкой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, выбираемую из группы, состоящей из
    Σ) последовательности, по меньшей мере на 85% идентичной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕЦ ΣΌ N0: 4, 6, 8, 10, 12 и 14,
    ΣΣ) последовательности по меньшей мере 25 соседних аминокислот с последовательностью, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕЦ ΣΌ N0: 4, 6, 8, 10, 12 и 14,
    ΣΣΣ) последовательности, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 85% идентична нуклеотидной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕО ΣΌ N0: 3, 5, 7, 9, 11 и 13, и
    Σν) последовательности, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, которая гибридизируется в умеренно точных (жестких) условиях с комплементом нуклеотидной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕЦ ΣΌ N0: 3, 5, 7, 9, 11 и 13, или
    б) вариабельную область тяжелой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, выбираемую из группы, состоящей из
    Σ) последовательности, по меньшей мере на 85% идентичной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕО ΣΌ N0: 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 и 62,
    ΣΣ) последовательности по меньшей мере 25 соседних аминокислот с последовательностью, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕЦ ΣΌ N0: 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 и 62,
    ΣΣΣ) последовательности, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 85% идентична нуклеотидной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕО ΣΌ N0: 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59 и 61, и
    Σν) последовательности, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, которая гибридизируется в умеренно точных (жестких) условиях с комплементом нуклеотидной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕЦ ΣΌ N0: 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59 и 61, или
    в) вариабельную область легкой цепи а) и вариабельную область тяжелой цепи б).
  3. 3. Антитело по п.2, включающее или
    а) вариабельную область легкой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, выбираемую из группы, состоящей из
    Σ) последовательности, по меньшей мере на 90% идентичной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕЦ ΣΌ N0: 4, 6, 8, 10, 12 и 14,
    ΣΣ) последовательности по меньшей мере 35 соседних аминокислот с последовательностью, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕЦ ΣΌ N0: 4, 6, 8, 10, 12 и 14, и
    ΣΣΣ) последовательности, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 90% идентична нуклеотидной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕО ΣΌ N0: 3, 5, 7, 9, 11 и 13, или
    б) вариабельную область тяжелой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, выбираемую из группы, состоящей из
    Σ) последовательности, по меньшей мере на 90% идентичной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕО ΣΌ N0: 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 и 62,
    - 49 011302
    ΙΙ) последовательности по меньшей мере 35 соседних аминокислот с последовательностью, выбираемой из группы, состоящей из 8Е0 ΙΌ N0: 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 и 62, и
    ΙΙΙ) последовательности, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 90% идентична нуклеотидной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕО ΙΌ N0: 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59 и 61, или
    в) вариабельную область легкой цепи а) и вариабельную область тяжелой цепи б).
  4. 4. Антитело по п.3, включающее или
    а) вариабельную область легкой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, выбираемую из группы, состоящей из
    Ι) последовательности, по меньшей мере на 95% идентичной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8Е0 ΙΌ N0: 4, 6, 8, 10, 12 и 14,
    ΙΙ) последовательности по меньшей мере 50 соседних аминокислот с последовательностью, выбираемой из группы, состоящей из 8Е0 ΙΌ N0: 4, 6, 8, 10, 12 и 14, и
    ΙΙΙ) последовательности, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична нуклеотидной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕО ΙΌ N0: 3, 5, 7, 9, 11 и 13, или
    б) вариабельную область тяжелой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, выбираемую из группы, состоящей из
    Ι) последовательности, по меньшей мере на 95% идентичной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕО ΙΌ N0: 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 и 62,
    ΙΙ) последовательности по меньшей мере 50 соседних аминокислот с последовательностью, выбираемой из группы, состоящей из 8Е0 ΙΌ N0: 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 и 62, и
    ΙΙΙ) последовательности, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична нуклеотидной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕО ΙΌ N0: 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59 и 61, или
    в) вариабельную область легкой цепи а) и вариабельную область тяжелой цепи б).
  5. 5. Антитело по п.4, включающее или
    а) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбираемую из группы, состоящей из
    Ι) последовательности, по меньшей мере на 97% идентичной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8Е0 ΙΌ N0: 4, 6, 8, 10, 12 и 14,
    ΙΙ) последовательности по меньшей мере 70 соседних аминокислот с последовательностью, которую выбирают из группы, состоящей из 8Е0 ΙΌ N0: 4, 6, 8, 10, 12 и 14, и
    ΙΙΙ) последовательности, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 97% идентична нуклеотидной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕО ΙΌ N0: 3, 5, 7, 9, 11 и 13, или
    б) вариабельную область тяжелой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, выбираемую из группы, состоящей из
    Ι) последовательности, по меньшей мере на 97% идентичной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕО ΙΌ N0: 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 и 62,
    ΙΙ) последовательности по меньшей мере 70 соседних аминокислот с последовательностью, выбираемой из группы, состоящей из 8Е0 ΙΌ N0: 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60 и 62, и
    ΙΙΙ) последовательности, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 97% идентична нуклеотидной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕО ΙΌ N0: 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59 и 61, или
    в) вариабельную область легкой цепи а) и вариабельную область тяжелой цепи б).
  6. 6. Антитело по п.5, включающее или
    а) вариабельную область легкой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, выбираемую из группы, состоящей из
    Ι) последовательности, по меньшей мере на 99% идентичной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8Е0 ΙΌ N0: 4, 6, 8, 10, 12 и 14,
    ΙΙ) последовательности по меньшей мере 90 соседних аминокислот с последовательностью, выбираемой из группы, состоящей из 8Е0 ΙΌ N0: 4, 6, 8, 10, 12 и 14, и
    ΙΙΙ) последовательности, которая кодируется нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 99% идентична нуклеотидной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из 8ЕО ΙΌ N0: 3, 5, 7, 9, 11 и 13, или
    б) вариабельную область тяжелой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, выби
    - 50 011302 раемую из группы. состоящей из
    Ι) последовательности. по меньшей мере на 99% идентичной последовательности. выбираемой из группы. состоящей из 81У) ГО Ν0: 16. 18. 20. 22. 24. 26. 28. 30. 32. 34. 36. 38. 40. 42. 44. 46. 48. 50. 52. 54. 56. 58. 60 и 62.
    ΙΙ) последовательности по меньшей мере 90 соседних аминокислот с последовательностью. выбираемой из группы. состоящей из 8ЕО ΙΌ Ν0: 16. 18. 20. 22. 24. 26. 28. 30. 32. 34. 36. 38. 40. 42. 44. 46. 48. 50. 52. 54. 56. 58. 60 и 62. и
    ΙΙΙ) последовательности. которая кодируется нуклеотидной последовательностью. которая по меньшей мере на 99% идентична нуклеотидной последовательности. выбираемой из группы. состоящей из 8ЕС) ГО Ν0: 15. 17. 19. 21. 23. 25. 27. 29. 31. 33. 35. 37. 39. 41. 43. 45. 47. 49. 51. 53. 55. 57. 59 и 61. или
    в) вариабельную область легкой цепи а) и вариабельную область тяжелой цепи б).
  7. 7. Антитело по п.6. включающее или
    а) вариабельную область легкой цепи. содержащей аминокислотную последовательность. выбираемую из группы. состоящей из 8ЕО ΙΌ Ν0: 4. 6. 8. 10. 12 и 14. или
    б) вариабельную область тяжелой цепи. содержащей аминокислотную последовательность. выбираемую из группы. состоящей из 8ЕО ГО Ν0: 16. 18. 20. 22. 24. 26. 28. 30. 32. 34. 36. 38. 40. 42. 44. 46. 48. 50. 52. 54. 56. 58. 60 и 62. или
    в) вариабельную область легкой цепи а) и вариабельную область тяжелой цепи б).
  8. 8. Антитело по п.1. включающее или
    а) вариабельную область легкой цепи. содержащей аминокислотную последовательность. которая отличается от 8ЕО ГО Ν0: 4 по меньшей мере одной заменой аминокислоты. выбираемой из группы. состоящей из 828Т. 830Ν. 8300. 831Ν. 832Ό. 832Ν. А52Т. 828Т. 854Υ. Т57Р. Т578. 093Ό. 894Н. 894К. Р96А. Р970 и Т99М. или
    б) вариабельную область тяжелой цепи. содержащей аминокислотную последовательность. которая отличается от 8ЕО ΙΌ Ν0: 16 по меньшей мере одной заменой аминокислоты. выбираемой из группы. состоящей из Ν588. Υ101ν. Е102Х П103Т. Ό103Ν. П103Р. Υ104^ Υ104Ν. Υ104Α и Υ104Ε. и Т99М. или
    в) вариабельную область легкой цепи а) и вариабельную область тяжелой цепи б).
  9. 9. Антитело по п.1. включающее или
    а) вариабельную область легкой цепи. содержащей аминокислотную последовательность. которая отличается от 8ЕО ГО Ν0: 4 только
    Ι) по меньшей мере одной заменой аминокислоты. выбираемой из группы. состоящей из 828Т. 830Ν. 8300. 831Ν. 832Ό. 832Ν. А52Т. 854Υ. Т57Р. Т578. 093Ό. 894Н. 894К. Р96А. Р970 и Т99М. и
    ΙΙ) по меньшей мере одной заменой аминокислоты. выбираемой из группы. состоящей из ЕГО. Ь4М. 87Т. 09А. К40К. Е50Х 868Е. 877Т. ν86Ι. К105К. У106Ь И Е107П. или
    б) вариабельную область тяжелой цепи. содержащей аминокислотную последовательность. которая отличается от 8Е0 ГО Ν0: 16 только:
    Ι) по меньшей мере одной заменой аминокислоты. выбираемой из группы. состоящей из Ν588. Υ101ν. Ε102Υ. П103Т. Ό103Ν. П103Р. Υ104^ Υ104Ν. Υ104ν И Υ104Ε. и
    ΙΙ) по меньшей мере одной заменой аминокислоты. выбираемой из группы. состоящей из 06Е. Н130. 024А. К868 и М90Т. или
    в) вариабельную область легкой цепи а) и вариабельную область тяжелой цепи б).
  10. 10. Антитело по п.1. в котором
    а) легкая цепь ί.ΌΕ1 включает последовательность. выбираемую из группы. состоящей из остатков 24-35 8Е0 ГО Ν0: 6. остатков 24-35 8Е0 ГО Ν0: 8. остатков 24-35 8Е0 ГО Ν0: 10. остатков 24-35 8Е0 ГО Ν0: 12 и остатков 24-35 8Е0 ГО Ν0: 14. или
    б) легкая цепь ί.ΌΕ2 включает последовательность. выбираемую из группы. состоящей из остатков 51-57 8Е0 ГО Ν0: 4. остатков 51-57 8Е0 ГО Ν0: 6. остатков 51-57 8Е0 ГО Ν0: 10 и остатков 51-57 8Е0 ГО Ν0: 12. или
    в) легкая цепь ί.ΌΕ3 включает последовательность. выбираемую из группы. состоящей из остатков 90-99 8Е0 ГО Ν0: 4. остатков 90-99 8ЕО ГО Ν0: 6. остатков 90-99 8ЕО ГО Ν0: 8 и остатков 90-99 8ЕО ГО Ν0: 14. или
    г) тяжелая цепь ί.ΌΕ1 включает последовательность остатков 31-35 8ЕО ΙΌ Ν0: 16. или
    д) тяжелая цепь ί.ΌΕ2 включает последовательность. выбираемую из группы. состоящей из остатков 50-65 8ЕО ΙΌ Ν0: 16 и остатков 50-65 8ЕО ГО Ν0: 18. или
    е) тяжелая цепь ί.ΌΕ3 включает последовательность. выбираемую из группы. состоящей из остатков 98-104 8ЕО ГО Ν0: 16. остатков 98-104 8ЕО ГО Ν0: 18. остатков 98-104 8ЕО ГО Ν0: 20. остатков 98104 8ЕО ΙΌ Ν0: 22. остатков 98-104 8ЕО ГО Ν0: 24. остатков 98-104 8ЕО ГО Ν0: 26. остатков 98-104 8ЕС) ΙΌ Ν0: 30 и остатков 98-104 8ЕС) ГО Ν0: 34.
  11. 11. Антитело по п.10. в котором
    а) легкая цепь ί.ΌΕ1 включает последовательность. выбираемую из группы. состоящей из остатков 24-35 8ЕО ГО Ν0: 6. остатков 24-35 8ЕО ГО Ν0: 8. остатков 24-35 8ЕО ГО Ν0: 10. остатков 24-35 8ЕО ГО
    - 51 011302
    N0: 12 и остатков 24-35 8Е0 ΙΌ N0: 14, и
    б) легкая цепь СИВ2 включает последовательность, выбираемую из группы, состоящей из остатков 51-57 8Е0 ΙΌ N0: 4, остатков 51-57 8Е0 ΙΌ N0: 6, остатков 51-57 8Е0 ΙΌ N0: 10 и остатков 51-57 8Е0 ΙΌ N0: 12, и
    в) легкая цепь СИВ3 включает последовательность, выбираемую из группы, состоящей из остатков 90-99 8Е0 ΙΌ N0: 4, остатков 90-99 8Е0 ΙΌ N0: 6, остатков 90-99 8Е0 ΙΌ N0: 8 и остатков 90-99 8Е0 ΙΌ N0: 14,
    г) тяжелая цепь СИВ1 включает последовательность остатков 31-35 8Е0 ΙΌ N0: 16; и
    д) тяжелая цепь СИВ2 включает последовательность, выбираемую из группы, состоящей из остатков 50-65 8Е0 ΙΌ N0: 16 и остатков 50-65 8Е0 ΙΌ N0: 18, и
    е) тяжелая цепь СИВ3 включает последовательность, выбираемую из группы, состоящей из остатков 98-104 8Е0 ΙΌ N0: 16, остатков 98-104 8Е0 ΙΌ N0: 18, остатков 98-104 8Е0 ΙΌ N0: 20, остатков 98104 8Е0 ΙΌ N0: 22, остатков 98-104 8Е0 ΙΌ N0: 24, остатков 98-104 8Е0 ΙΌ N0: 26, остатков 98-104 8ЕО ΙΌ N0: 30 и остатков 98-104 8ЕО ΙΌ N0: 34.
  12. 12. Антитело по п.1, в котором
    а) легкая цепь РВ1 включает последовательность, выбираемую из группы, состоящей из остатков 123 8Е0 ΙΌ N0: 4, остатков 1-23 8Е0 ΙΌ N0: 10, остатков 1-23 8Е0 ΙΌ N0: 12 и остатков 1-23 8Е0 ΙΌ N0: 14, или
    б) легкая цепь РВ2 включает последовательность, выбираемую из группы, состоящей из остатков 36-50 8Е0 ΙΌ N0: 4 и остатков 36-50 8Е0 ΙΌ N0: 14, или
    в) легкая цепь РВ3 включает последовательность, выбираемую из группы, состоящей из остатков 58-89 8Е0 ΙΌ N0: 4, остатков 58-89 8Е0 ΙΌ N0: 10 и остатков 58-89 8Е0 ΙΌ N0: 12, или
    г) легкая цепь РВ4 включает последовательность, выбираемую из группы, состоящей из остатков 100-109 8Е0 ΙΌ N0: 4, остатков 100-109 8Е0 ΙΌ N0: 8 и остатков 100-109 8Е0 ΙΌ N0: 12, или
    д) тяжелая цепь РВ1 включает последовательность, выбираемую из группы, состоящей из остатков 1-30 8Е0 ΙΌ N0: 16 и остатков 1-30 8Е0 ΙΌ N0: 42, или
    е) тяжелая цепь РВ2 включает последовательность остатков 36-49 8Е0 ΙΌ N0: 16, или
    ж) тяжелая цепь РВ3 включает последовательность, выбираемую из группы, состоящей из остатков 66-97 8Е0 ΙΌ N0: 16, остатков 66-97 8Е0 ΙΌ N0: 18 и остатков 66-97 8Е0 ΙΌ N0: 42, или
    з) тяжелая цепь РВ4 включает последовательность остатков 105-115 8Е0 ΙΌ N0: 16.
  13. 13. Антитело по п.12, в котором
    а) легкая цепь РВ1 включает последовательность, выбираемую из группы, состоящей из остатков 123 8Е0 ΙΌ N0: 4, остатков 1-23 8Е0 ΙΌ N0: 10, остатков 1-23 8Е0 ΙΌ N0: 12 и остатков 1-23 8Е0 ΙΌ N0: 14, и
    б) легкая цепь РВ2 включает последовательность, выбираемую из группы, состоящей из остатков 36-50 8ЕО ΙΌ N0: 4 и остатков 36-50 8ЕО ΙΌ N0: 14, и
    в) легкая цепь РВ3 включает последовательность, выбираемую из группы, состоящей из остатков 58-89 8ЕО ΙΌ N0: 4, остатков 58-89 8ЕО ΙΌ N0: 10 и остатков 58-89 8ЕО ΙΌ N0: 12, и
    г) легкая цепь РВ4 включает последовательность, выбираемую из группы, состоящей из остатков 100-109 8ЕО ΙΌ N0: 4, остатков 100-109 8ЕО ΙΌ N0: 8 и остатков 100-109 8ЕО ΙΌ N0: 12, и
    д) тяжелая цепь РВ1 включает последовательность, выбираемую из группы, состоящей из остатков 1-30 8ЕО ΙΌ N0: 16 и остатков 1-30 8ЕО ΙΌ N0: 42, и
    е) тяжелая цепь РВ2 включает последовательность остатков 36-49 8Е0 ΙΌ N0: 16, и
    ж) тяжелая цепь РВ3 включает последовательность, выбираемую из группы, состоящей из остатков 66-97 8Е0 ΙΌ N0: 16, остатков 66-97 8Е0 ΙΌ N0: 18 и остатков 66-97 8Е0 ΙΌ N0: 42, и
    з) тяжелая цепь РВ4 включает последовательность остатков 105-115 8Е0 ΙΌ N0: 16.
  14. 14. Антитело по п.1, в котором антитело выбирают из группы, состоящей из Ь1Н1, Ь1Н2, Ь1Н3, Ь1Н4, Ь1Н5, Ь1Н6, Ь1Н7, Ь1Н8, Ь1Н9, Ь1Н10, Ь1Н11, Ь2Н1, Ь2Н2, Ь2Н3, Ь2Н4, Ь2Н5, Ь2Н6, Ь2Н7, Ь2Н8, Ь2Н9, Ь2Н10, Ь2Н11, Ь2Н12, Ь2Н13, Ь2Н14, Ь3Н1, Ь4Н1, Ь5Н1 и Ь6Н1.
  15. 15. Антитело по п.1, в котором антитело является человеческим антителом, гуманизированным или химерным антителом.
  16. 16. Антитело по п.1, в котором антитело является моноклональным антителом.
  17. 17. Антитело по п.1, в котором антитело выбирают из группы, состоящей из !дО, ^Е, ^М, ^С1, !дС2, [дС3, !дС4 и !дС4 по меньшей мере с одной мутацией в шарнирной области, чтобы облегчить стремление к образованию дисульфидной связи внутри Н-цепи антитела.
  18. 18. Изолированный полипептид, включающий [И-4 рецептор-связывающую часть антитела по п.1.
  19. 19. Изолированный полипептид по п.18, в котором полипептид включает РаЬ, Р(аЬ')2, зсРу, диатело, триатело или тетратело.
  20. 20. Изолированная нуклеиновая кислота, включающая или
    а) нуклеотидную последовательность или ее комплемент, кодирующий легкую цепь антитела по п.1(а), или
    б) нуклеотидную последовательность или ее комплемент, кодирующий тяжелую цепь антитела по
    - 52 011302
    п.1(б), или
    в) нуклеотидную последовательность или ее комплемент, кодирующий полипептид, включающий ΙΕ-4 рецептор-связывающую часть антитела по п.1, или
    г) нуклеотидную последовательность а) или нуклеотидную последовательность б).
  21. 21. Изолированная нуклеиновая кислота по п.20, в которой нуклеиновая кислота содержит по меньшей мере одну нуклеотидную последовательность, выбираемую из группы, состоящей из 8Е0 ΙΌ N0: 5, 7, 9, 11, 13, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59 и 61.
  22. 22. Вектор, включающий нуклеиновую кислоту по п.20.
  23. 23. Вектор по п.22, в котором вектор является вектором экспрессии.
  24. 24. Изолированная клетка, включающая нуклеиновую кислоту по п.20.
  25. 25. Изолированная клетка по п.24, в которой клетка является гибридомой.
  26. 26. Изолированная клетка по п.24, в которой клетка является трансгенной клеткой.
  27. 27. Способ получения антитела по п.1, включающий инкубирование клетки, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую легкую цепь антитела, и нуклеиновую кислоту, кодирующую тяжелую цепь антитела, в условиях, которые позволяют клетке экспрессировать легкую цепь и тяжелую цепь и которые позволяют легкой цепи и тяжелой цепи собраться в антитело, и изолирование антитела из клетки.
  28. 28. Способ по п.27, в котором клетка является гибридомой.
  29. 29. Способ по п.27, в котором клетка является трансгенной клеткой.
  30. 30. Способ ингибирования ΙΕ-4 рецептора, включающий контактирование клетки, экспрессирующей ΙΕ-4 рецептор, с антителом по п.1 в условиях, которые позволяют антителу связываться с ΙΕ-4 рецептором, где связывание антитела с ΙΕ-4 рецептором ингибирует сигнальную трансдукцию посредством ΙΕ-4 рецептора.
  31. 31. Способ по п.30, в котором клетка является человеческой клеткой.
  32. 32. Способ по п.31, в котором человеческая клетка находится у человека.
  33. 33. Способ ингибирования ΙΕ-4 рецептора, включающий контактирование клетки, экспрессирующей ΙΕ-4 рецептор альфа, с полипептидом по п.18 в условиях, которые позволяют полипептиду связываться с ΙΕ-4 рецептором альфа, где связывание полипептида с ΙΕ-4 рецептором ингибирует сигнальную трансдукцию посредством ΙΕ-4 рецептора.
  34. 34. Способ по п.33, в котором клетка является человеческой клеткой.
  35. 35. Способ по п.34, в котором человеческая клетка находится у человека.
  36. 36. Способ лечения состояния у субъекта, включающий введение субъекту количества антитела по п.1, эффективного для лечения состояния.
  37. 37. Способ по п.36, в котором состояние является воспалительным или злокачественным состоянием.
  38. 38. Способ по п.37, в котором воспалительное или злокачественное состояние является иммунологическим состоянием.
  39. 39. Способ по п.38, в котором состояние является астмой, септическим артритом, сходным с герпесом дерматитом, хронической идиопатической крапивницей, неспецифическим язвенным колитом, склеродермией, гипертрофическим рубцеванием, болезнью Уиппла, доброкачественной гиперплазией простаты, легочным заболеванием, в котором играет роль ΙΕ-4 рецептор, состоянием, в котором играет роль опосредованное ΙΕ-4 рецептором разрушение эпителиального барьера, расстройством пищеварительной системы, в которой играет роль ΙΕ-4 рецептор, аллергической реакцией к лекарственным препаратам, болезнью Кавасаки, серповидно-клеточной анемией, синдромом Черджа (Черга)-Стросса, болезнью Грейвса, преэклампсией, синдромом Шенгрена, аутоиммунным лимфопролиферативным синдромом, аутоиммунной гемолитической анемией, пищеводом Барретта, аутоиммунным увеитом, туберкулезом, муковисцидозом, аллергическим бронхо-легочным микозом, хронической легочной болезнью непроходимости, пневмопатией и фиброзом, вызванным блеомицином, пневмосклерозом, вызванным радиацией, легочно-альвеолярным протеинозом, респираторным дистресс-синдромом взрослых, саркоидозом, синдромом гипер ЦЕ, идиопатическим гиперэозинофильным синдромом, аутоаллергической болезнью, вызывающей образование пузырей, обыкновенной пузырчаткой, буллезным пемфигоидом, тяжелой миастенией, синдромом хронического утомления или нефрозом.
  40. 40. Способ лечения состояния у субъекта, включающий введение субъекту количества полипептида по п.18, эффективного для лечения данного состояния.
  41. 41. Способ по п.40, в котором состояние является воспалительным или злокачественным состоянием.
  42. 42. Способ по п.41, в котором воспалительное или злокачественное состояние является иммунологическим состоянием.
  43. 43. Способ по п.42, в котором состояние является астмой, септическим артритом, сходным с герпесом дерматитом, хронической идиопатической крапивницей, неспецифическим язвенным колитом, склеродермией, гипертрофическим рубцеванием, болезнью Уиппла, доброкачественной гиперплазией простаты, легочным заболеванием, в котором играет роль ΙΕ-4 рецептор, состоянием, в котором играет роль опосредованное ΙΕ-4 рецептором разрушение эпителиального барьера, расстройством пищеварительной
    - 53 011302 системы, в которой играет роль ΙΙ.-4 рецептор, аллергической реакцией к лекарственным препаратам, болезнью Кавасаки, серповидно-клеточной анемией, синдромом Черджа (Черга)-Стросса, болезнью Грейвса, преэклампсией, синдромом Шенгрена, аутоиммунным лимфопролиферативным синдромом, аутоиммунной гемолитической анемией, пищеводом Барретта, аутоиммунным увеитом, туберкулезом, муковисцидозом, аллергическим бронхо-легочным микозом, хронической легочной болезнью непроходимости, пневмопатией и фиброзом, вызванным блеомицином, пневмосклерозом, вызванным радиацией, легочно-альвеолярным протеинозом, респираторным дистресс-синдромом взрослых, саркоидозом, синдромом гипер Ι§Γ, идиопатическим гиперэозинофильным синдромом, аутоаллергической болезнью, вызывающей образование пузырей, обыкновенной пузырчаткой, буллезным пемфигоидом, тяжелой миастенией, синдромом хронического утомления или нефрозом.
  44. 44. Фармацевтическая композиция, включающая антитело по п.1 и наполнитель, разбавитель или буфер.
  45. 45. Фармацевтическая композиция, включающая полипептид по п.18 и наполнитель, разбавитель или буфер.
  46. 46. Антитело по п.1, в котором антитело не связывается с ΙΓ-4 рецептором мыши или крысы.
  47. 47. Антитело по п.1, в котором антитело связывается с доменом Ι человеческого ΙΓ-4 рецептора.
    АТС ссс ТСС СТТ ТСС тег ссс СТС СТС ТТС ест СТС АСС ТСС СТО -31 МеЕ О1у Тгр Ьеи Суз Зег С1у Ьеи Ьеи РЬе Рго Уа1 Зег Суз Ьеи -11 СТС СТС СТС САС СТС ССА АСС ТСТ ОСО ААС АТС ААС СТС ТТС САЗ 15 Уа1 Ьеи Ьеи С1п ν&1 А1а Зег Зег С1у АЗП МеЕ Ьуз Уа1 Ьеи О1п 5 САС ссс АСС ТСС СТС ТСС САС ТАС АТС АСС АТС ТСТ АСТ ТСС САС 60 С1и Рго ТЬг Суз Уа1 Зег Азр Туг МеЕ Зег Не Зег ТЬг Суз О1и 20 ТСС ДАС АТС ДАТ СОТ ССС АСС ААТ ТСС АСС АСС САС СТС ССС СТС 105 Тгр Ьуз МеЕ Азп С1у Рго ТЬг Азп Суз Зег ТЬг О1и Ьеи Агд Ьеи 35 ттс ТАС САС СТО СТТ ттт СТО СТС тсс ОДА ссс САС АСО ТОТ АТС 150 Ьеи Туг С1п Ьеи Уа1 РЬе Ьеи Ьеи Зег О1и А1а Н1з ТЬг Суз Не 50 ест ОАО ААС ААС ССА ССС ССС ССС ТСС СТС ТСС САС СТС СТС АТС 195 Рго С1и Азп Азп С1у С1у А1а С1у Суз Уа1 Суз Н1в Ьеи Ьеи МеЕ 65 САТ САС СТС СТС АСТ ССС САТ ААС ТАТ АСА СТС САС СТС ТСС сст 240 Аар Азр Уа1 νβΐ Зег А1а Азр Азп Туг ТЬг Ьеи Азр Ьеи Тгр А1а 80 ссс; САС САС сто СТС тсс ААС ССС тсс ттс ААС ССС АСС САС САТ 285 С1у С1п С1п Ьеи Ьеи Тгр Ьув С1у Зег РЬе Ьуз Рго Зег С1и Нхз 95 СТС! АДА ССС АСС ССС ССА ССА ААС СТС АСА СТТ САС АСС ЛАТ СТС 330 Уа1 Ьуз Рго Агд А1а Рго о1у Азп Ьеи ТЬг Уа1 НхЗ ТЬг Аеп Уа1 но ТСС! САС АСТ СТС СТС СТО АСС ТОО АСС ААС ССС ТАТ ССС ест ОАС 375 Зег Αερ ТЬг Ьеи Ьеи Ьеи ТЬг Тгр Зег Азп Рго Туг Рго Рго Азр 125 ААТ ТАС СТС ТАТ ААТ САТ СТС АСС ТАТ ССА СТС ААС АТТ тсс АСТ 420 Азп Туг Ьеи Туг АЗП Μίδ Ьеи ТЬг Туг А1а Уа1 Азп Не Тгр Зег 140 САД ААС САС ССС ССА САТ ТТС АСА АТС ТАТ ААС СТО АСС ТАС СТА 465 <31и. Азп Дер Рго А1а Азр РЬе Агд Не Туг Аеп Уа1 ТЬг Туг Ьеи 155 СМ. ССС ТСС СТС ССС АТС ССА ССС АСС АСС СТС ААС ТСТ сое АТТ 510 С1и Рго Зег Ьеи Агд Не А1а А1а Зег ТЬг Ьеи Ьуз Зег С1у Не 170 ТСС ТАС АСС ССА ССС СТС АСС ССС ТСС ОСТ САС тсс ТАТ ААС АСС 555 8ег Туг Агд А1а Агд Уа1 Агд А1а Тхр А1а С1п Суз Туг Азп ТЬг 185 АСС ТСС АСТ САС ТСС АСС ССС АСС АСС ААС ТСС САС ААС ТСС ТАС 600 ТЬг Тгр Зег С1и Тгр Зег Рго Зег ТЬг Ьуз Тгр Нхз АЗП Зег туг 200 ДОС САС ССС ТТС САС САС САС СТС СТС СТС ССС СТС АСС СТТ ТСС 645 Агд С1и рго РЬе С1и С1п Нхз 11®Й Ьеи Ьеи С1у Уа1 ..... ...Яег 215 ТСС АТТ СТС АТС СТО ССС СТС ТСС СТС ттс тсс ТАТ СТС АСС АТС 690 Не νβΐ Ьеи А1а Уа1 -Ьец. Ьеи Суя Туг Уа1 230 АСС ААС АТТ ААС ААА САД ТСС ТСС САТ САС АТТ ССС ААС ССА ССС 735 ТЬГ Ьу8 Не Ьуз Ьуз С1и Тгр Тхр Азр С1п Не Рго Азп Рго А1а 245
EA200600869A 2003-11-07 2004-11-04 Антитела, которые связывают рецептор интерлейкина-4 EA011302B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US51816603P 2003-11-07 2003-11-07
PCT/US2004/037242 WO2005047331A2 (en) 2003-11-07 2004-11-04 Antibodies that bind interleukin-4 receptor

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200600869A1 EA200600869A1 (ru) 2006-12-29
EA011302B1 true EA011302B1 (ru) 2009-02-27

Family

ID=34590230

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200600869A EA011302B1 (ru) 2003-11-07 2004-11-04 Антитела, которые связывают рецептор интерлейкина-4

Country Status (26)

Country Link
US (4) US7638606B2 (ru)
EP (1) EP1692184B1 (ru)
JP (1) JP4931597B2 (ru)
KR (1) KR101225463B1 (ru)
CN (1) CN1886426A (ru)
AT (1) ATE548388T1 (ru)
AU (1) AU2004290017B2 (ru)
BR (1) BRPI0416603A (ru)
CA (1) CA2543982C (ru)
CR (1) CR8396A (ru)
EA (1) EA011302B1 (ru)
EC (1) ECSP066526A (ru)
ES (1) ES2383809T3 (ru)
GE (1) GEP20104991B (ru)
IL (1) IL175362A (ru)
IS (1) IS8432A (ru)
MA (1) MA28418B1 (ru)
MX (1) MXPA06004853A (ru)
NI (1) NI200600098A (ru)
NO (1) NO20062148L (ru)
NZ (1) NZ547588A (ru)
TN (1) TNSN06128A1 (ru)
TW (1) TWI356064B (ru)
UA (1) UA93653C2 (ru)
WO (1) WO2005047331A2 (ru)
ZA (1) ZA200604605B (ru)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2704999C2 (ru) * 2014-02-28 2019-11-01 Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. Способ лечения кожной инфекции путем введения антагониста il-4r
US11827719B2 (en) 2017-11-07 2023-11-28 Hobit Genomix, Inc. Method for primary prevention of allergic disorders during infancy through IgE-class-specific immunosuppression

Families Citing this family (171)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK2990420T3 (en) 2000-05-26 2017-04-03 Immunex Corp USE OF INTERLEUKIN-4 RECEPTOR ANTIBODIES AND COMPOSITIONS THEREOF
AR045563A1 (es) 2003-09-10 2005-11-02 Warner Lambert Co Anticuerpos dirigidos a m-csf
BRPI0611901A2 (pt) 2005-06-14 2012-08-28 Amgen, Inc composição, liofilizado, kit, e, processo para preparar uma composição
EP1922081B1 (en) * 2005-09-09 2012-08-15 Imperial Innovations Limited Interferon lambda therapy for treatment of respiratory diseases
UA96139C2 (ru) * 2005-11-08 2011-10-10 Дженентек, Інк. Антитело к нейропилину-1 (nrp1)
US7608693B2 (en) * 2006-10-02 2009-10-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. High affinity human antibodies to human IL-4 receptor
CA2664343C (en) 2006-10-02 2016-04-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. High affinity human antibodies to human il-4 receptor
CA3069091C (en) 2006-11-01 2021-09-14 Ventana Medical Systems, Inc. Haptens, hapten conjugates, compositions thereof and method for their preparation and use
US7682789B2 (en) * 2007-05-04 2010-03-23 Ventana Medical Systems, Inc. Method for quantifying biomolecules conjugated to a nanoparticle
JP2010528285A (ja) 2007-05-23 2010-08-19 ベンタナ・メデイカル・システムズ・インコーポレーテツド 免疫組織化学およびｉｎｓｉｔｕハイブリダーゼーションのためのポリマー担体
MX2010002249A (es) * 2007-08-31 2010-03-17 Amgen Inc Formulacion de proteina de estado solido.
MX2010002683A (es) 2007-09-14 2010-03-26 Amgen Inc Poblaciones de anticuerpos homogeneos.
AU2008304111B2 (en) 2007-09-27 2014-04-24 Amgen Inc. Pharmaceutical formulations
EP2050764A1 (en) * 2007-10-15 2009-04-22 sanofi-aventis Novel polyvalent bispecific antibody format and uses thereof
EP3381445B1 (en) 2007-11-15 2023-10-25 Amgen Inc. Aqueous formulation of antibody stablised by antioxidants for parenteral administration
US8092804B2 (en) 2007-12-21 2012-01-10 Medimmune Limited Binding members for interleukin-4 receptor alpha (IL-4Rα)-173
KR101620539B1 (ko) * 2007-12-21 2016-05-13 메디뮨 리미티드 인터루킨-4 수용체 알파(ＩＬ-4Ｒα)에 대한 결합 구성원-173
US20110008326A1 (en) * 2008-04-02 2011-01-13 Oliver Hill Binding agents directed against il-4 receptor for the treatment of tumors, inflammatory and immunological disorders
WO2009149013A2 (en) 2008-06-05 2009-12-10 Ventana Medical Systems, Inc. Compositions comprising nanomaterials and method for using such compositions for histochemical processes
US20130064834A1 (en) 2008-12-15 2013-03-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating hypercholesterolemia using antibodies to pcsk9
MX344382B (es) 2009-10-23 2016-12-14 Amgen Inc * Adaptador de vial y sistema.
USPP22463P3 (en) * 2010-02-16 2012-01-17 Menachem Bornstein Gypsophila plant named ‘Pearl Blossom’
EP2539366B1 (en) * 2010-02-26 2017-11-08 BioArtic Neuroscience AB Protofibril-binding antibodies and their use in therapeutic and diagnostic methods for parkinson's disease, dementia with lewy bodies and other alpha-synucleinopathies
WO2011156373A1 (en) 2010-06-07 2011-12-15 Amgen Inc. Drug delivery device
RU2571226C2 (ru) 2010-07-09 2015-12-20 Дженентек, Инк. Антитела против нейропилина и способы их применения
US9480624B2 (en) 2011-03-31 2016-11-01 Amgen Inc. Vial adapter and system
EP2699293B8 (en) 2011-04-20 2022-07-20 Amgen Inc. Autoinjector apparatus
JP6400470B2 (ja) 2011-05-16 2018-10-03 ジェネロン（シャンハイ）コーポレイション リミテッド 多重特異性Ｆａｂ融合タンパク質および使用法
CN111789944A (zh) 2011-09-16 2020-10-20 瑞泽恩制药公司 用前蛋白转化酶枯草溶菌素-9(PCSK9)抑制剂降低脂蛋白(a)水平的方法
HUE043691T2 (hu) 2011-10-14 2019-09-30 Amgen Inc Befecskendezõ eszköz és összeszerelési eljárás
US20130243775A1 (en) * 2012-03-14 2013-09-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Multispecific antigen-binding molecules and uses thereof
SG11201500889TA (en) 2012-08-21 2015-03-30 Sanofi Sa Methods for treating or preventing asthma by administering an il-4r antagonist
UY35148A (es) 2012-11-21 2014-05-30 Amgen Inc Immunoglobulinas heterodiméricas
EP4234694A3 (en) 2012-11-21 2023-09-06 Amgen Inc. Drug delivery device
EP2970500A1 (en) 2013-03-14 2016-01-20 Bayer HealthCare LLC Monoclonal antibodies against antithrombin beta complexed with heparin
WO2014144817A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Amgen Inc. Inhibitory polypeptides specific to wnt inhibitors
TWI592183B (zh) 2013-03-15 2017-07-21 安美基公司 本體輪廓可調適之自動注射器裝置
TWI639453B (zh) 2013-03-15 2018-11-01 美商安美基公司 用於注射器之匣盒
JP6336564B2 (ja) 2013-03-15 2018-06-06 アムゲン・インコーポレーテッド 薬物カセット、自動注入器、および自動注入器システム
EP2976117B1 (en) 2013-03-22 2020-12-30 Amgen Inc. Injector and method of assembly
US10111953B2 (en) 2013-05-30 2018-10-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for reducing remnant cholesterol and other lipoprotein fractions by administering an inhibitor of proprotein convertase subtilisin kexin-9 (PCSK9)
TWI697334B (zh) 2013-06-04 2020-07-01 美商再生元醫藥公司 藉由投與ｉｌ-４ｒ抑制劑以治療過敏及增強過敏原-特異之免疫療法的方法
TWI709411B (zh) 2013-06-21 2020-11-11 法商賽諾菲生物技術公司 Il-4r拮抗劑用於製備治療鼻息肉症的醫藥品之用途
TWI634900B (zh) 2013-07-11 2018-09-11 再生元醫藥公司 藉由投與ｉｌ－４ｒ抑制劑治療嗜酸性食道炎的方法
AU2014318017B2 (en) 2013-09-05 2020-02-06 Amgen Inc. Fc-containing molecules exhibiting predictable, consistent, and reproducible glycoform profiles
AU2014340171B2 (en) 2013-10-24 2019-05-30 Amgen Inc. Injector and method of assembly
EP3501575B1 (en) 2013-10-24 2021-12-01 Amgen Inc. Drug delivery system with temperature-sensitive-control
US8986691B1 (en) 2014-07-15 2015-03-24 Kymab Limited Method of treating atopic dermatitis or asthma using antibody to IL4RA
US8980273B1 (en) 2014-07-15 2015-03-17 Kymab Limited Method of treating atopic dermatitis or asthma using antibody to IL4RA
DE202014010499U1 (de) 2013-12-17 2015-10-20 Kymab Limited Targeting von humaner PCSK9 zur Cholesterinbehandlung
US10994112B2 (en) 2014-02-05 2021-05-04 Amgen Inc. Drug delivery system with electromagnetic field generator
IL315136A (en) 2014-02-21 2024-10-01 Sanofi Biotechnology Methods for treating or preventing asthma by adding an IL-4R antagonist
MX2016014561A (es) 2014-05-07 2017-06-21 Amgen Inc Autoinyetor con elementos reductores del shock.
AU2015259053B2 (en) 2014-05-16 2020-12-24 Amgen Inc. Assay for detecting Th1 and Th2 cell populations
MX2016015854A (es) 2014-06-03 2017-07-19 Amgen Inc Sistema de suministro de farmacos controlable y metodo de uso.
WO2016023916A1 (en) 2014-08-12 2016-02-18 Kymab Limited Treatment of disease using ligand binding to targets of interest
EP3943135A3 (en) 2014-10-14 2022-06-29 Amgen Inc. Drug injection device with visual and audible indicators
WO2016071701A1 (en) 2014-11-07 2016-05-12 Kymab Limited Treatment of disease using ligand binding to targets of interest
EP3218412A1 (en) 2014-11-14 2017-09-20 Sanofi Biotechnology Methods for treating chronic sinusitis with nasal polyps by administering an il-4r antagonist
EP3233163B1 (en) 2014-12-19 2021-10-13 Amgen Inc. Drug delivery device with proximity sensor
ES2785311T3 (es) 2014-12-19 2020-10-06 Amgen Inc Dispositivo de administración de fármacos con botón móvil o campo de interfaz de usuario
WO2016133947A1 (en) 2015-02-17 2016-08-25 Amgen Inc. Drug delivery device with vacuum assisted securement and/or feedback
JP2018512184A (ja) 2015-02-27 2018-05-17 アムジエン・インコーポレーテツド 針ガードの移動に対する抵抗力の閾値が調整可能な針ガード機構を備えた薬物送達装置
BR112017027582A2 (pt) 2015-07-06 2018-08-28 Regeneron Pharma método para inibição do crescimento de uma célula tumoral ou promoção da eliminação de uma célula tumoral, e, composição farmacêutica.
WO2017027861A1 (en) 2015-08-13 2017-02-16 Amgen Inc. Charged depth filtration of antigen-binding proteins
WO2017039786A1 (en) 2015-09-02 2017-03-09 Amgen Inc. Syringe assembly adapter for a syringe
MA45488A (fr) 2015-10-22 2018-08-29 Juno Therapeutics Gmbh Procédés, kits et appareil de culture de cellules
EP3386573B1 (en) 2015-12-09 2019-10-02 Amgen Inc. Auto-injector with signaling cap
US11154661B2 (en) 2016-01-06 2021-10-26 Amgen Inc. Auto-injector with signaling electronics
WO2017143270A1 (en) 2016-02-19 2017-08-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for enhancing efficacy of a vaccine by administering an il-4r antagonist
AU2017233121B2 (en) 2016-03-15 2023-12-21 Itabmed (Hk) Limited Multispecific Fab fusion proteins and use thereof
WO2017160799A1 (en) 2016-03-15 2017-09-21 Amgen Inc. Reducing probability of glass breakage in drug delivery devices
EP3448891A1 (en) 2016-04-28 2019-03-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of making multispecific antigen-binding molecules
WO2017189089A1 (en) 2016-04-29 2017-11-02 Amgen Inc. Drug delivery device with messaging label
WO2017192287A1 (en) 2016-05-02 2017-11-09 Amgen Inc. Syringe adapter and guide for filling an on-body injector
MX2018013616A (es) 2016-05-13 2019-02-21 Amgen Inc Montaje de cubierta protectora de vial.
EP3458988B1 (en) 2016-05-16 2023-10-18 Amgen Inc. Data encryption in medical devices with limited computational capability
EP3465124A1 (en) 2016-06-03 2019-04-10 Amgen Inc. Impact testing apparatuses and methods for drug delivery devices
CN113372446A (zh) * 2016-06-08 2021-09-10 苏州康乃德生物医药有限公司 用于结合白细胞介素4受体的抗体
WO2018004842A1 (en) 2016-07-01 2018-01-04 Amgen Inc. Drug delivery device having minimized risk of component fracture upon impact events
US20190328965A1 (en) 2016-08-17 2019-10-31 Amgen Inc. Drug delivery device with placement detection
WO2018045130A1 (en) 2016-09-01 2018-03-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for preventing or treating allergy by administering an il-4r antagonist
WO2018057776A1 (en) 2016-09-22 2018-03-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating severe atopic dermatitis by administering an il-4r inhibitor
CN118203659A (zh) 2016-09-22 2024-06-18 瑞泽恩制药公司 用于通过施用il-4r抑制剂治疗严重特应性皮炎的方法
CN114917185B (zh) 2016-10-21 2023-11-14 美国安进公司 药物配制品及其制备方法
US20200261643A1 (en) 2016-10-25 2020-08-20 Amgen Inc. On-body injector
TWI784988B (zh) 2016-12-01 2022-12-01 美商再生元醫藥公司 治療發炎症狀的方法
JP2020503976A (ja) 2017-01-17 2020-02-06 アムジエン・インコーポレーテツド 注入デバイスならびに関連する使用および組立方法
AU2018221351B2 (en) 2017-02-17 2023-02-23 Amgen Inc. Insertion mechanism for drug delivery device
EP3582825A1 (en) 2017-02-17 2019-12-25 Amgen Inc. Drug delivery device with sterile fluid flowpath and related method of assembly
JP2020508803A (ja) 2017-03-06 2020-03-26 アムジエン・インコーポレーテツド 作動防止特徴部を備える薬物送達デバイス
AU2018230546B2 (en) 2017-03-07 2024-03-21 Amgen Inc. Needle insertion by overpressure
US11986624B2 (en) 2017-03-09 2024-05-21 Amgen Inc. Insertion mechanism for drug delivery device
JP2020513813A (ja) 2017-03-14 2020-05-21 アムジエン・インコーポレーテツド 細胞培養において産生される抗体の総非フコシル化グリコフォームの調節
DK3600491T3 (da) 2017-03-28 2023-10-23 Amgen Inc Stempelstang og sprøjtekonstruktionssystem samt fremgangsmåde
SG11201909457XA (en) 2017-04-13 2019-11-28 Regeneron Pharma Treatment and inhibition of inflammatory lung diseases in patients having risk alleles in the genes encoding il33 and il1rl1
EP3634539A1 (en) 2017-06-08 2020-04-15 Amgen Inc. Syringe assembly for a drug delivery device and method of assembly
MX2019014615A (es) 2017-06-08 2020-02-07 Amgen Inc Dispositivo de administracion de farmacos accionado por par de torsion.
WO2018236619A1 (en) 2017-06-22 2018-12-27 Amgen Inc. REDUCING THE IMPACTS / IMPACTS OF ACTIVATION OF A DEVICE
US11395880B2 (en) 2017-06-23 2022-07-26 Amgen Inc. Electronic drug delivery device
EP3651832B1 (en) 2017-07-14 2023-12-13 Amgen Inc. Needle insertion-retraction system having dual torsion spring system
US11672733B2 (en) 2017-07-21 2023-06-13 Amgen Inc. Gas permeable sealing member for drug container and methods of assembly
EP3658206A1 (en) 2017-07-25 2020-06-03 Amgen Inc. Drug delivery device with container access system and related method of assembly
EP4085942A1 (en) 2017-07-25 2022-11-09 Amgen Inc. Drug delivery device with gear module and related method of assembly
WO2019028367A1 (en) 2017-08-04 2019-02-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. METHODS OF TREATING ESOPHAGITIS WITH ACTIVE EOSINOPHILES
WO2019032482A2 (en) 2017-08-09 2019-02-14 Amgen Inc. HYDRAULIC-PNEUMATIC PRESSURE CHAMBER DELIVERY SYSTEM
EP3668567A1 (en) 2017-08-18 2020-06-24 Amgen Inc. Wearable injector with sterile adhesive patch
US11103636B2 (en) 2017-08-22 2021-08-31 Amgen Inc. Needle insertion mechanism for drug delivery device
EP3691717B1 (en) 2017-10-04 2023-02-08 Amgen Inc. Flow adapter for drug delivery device
ES2971450T3 (es) 2017-10-06 2024-06-05 Amgen Inc Dispositivo de administración de fármacos con conjunto de enclavamiento y procedimiento de montaje correspondiente
MA50348A (fr) 2017-10-09 2020-08-19 Amgen Inc Dispositif d'administration de médicament comprenant un ensemble d'entraînement et procédé d'assemblage associé
PL3703818T3 (pl) 2017-10-30 2024-03-25 Sanofi Biotechnology Antagonista IL-4R do zastosowania w sposobie leczenia lub zapobiegania astmie
US11305026B2 (en) 2017-11-03 2022-04-19 Amgen Inc. Systems and approaches for sterilizing a drug delivery device
WO2019090303A1 (en) 2017-11-06 2019-05-09 Amgen Inc. Fill-finish assemblies and related methods
EP3706830B1 (en) 2017-11-06 2024-08-07 Amgen Inc. Drug delivery device with placement and flow sensing
CA3079665A1 (en) 2017-11-10 2019-05-16 Amgen Inc. Plungers for drug delivery devices
MA50903A (fr) 2017-11-16 2021-05-12 Amgen Inc Auto-injecteur avec détection de décrochage et de point d'extrémité
JP7370969B2 (ja) 2017-11-16 2023-10-30 アムジエン・インコーポレーテツド 薬物送達デバイスの扉ラッチ機構
EP3746478A4 (en) * 2018-01-29 2022-01-19 The Regents of The University of California THERAPIES AND METHODS OF TREATMENT OF TLR2-MEDIATED DISEASES AND DISORDERS
RU2758092C1 (ru) * 2018-02-01 2021-10-26 Бэйцзин Кавин Текнолоджи Шеа-Холдинг Ко., Лтд. АНТИТЕЛО К IL-4Rα И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ
CN113150146B (zh) * 2018-02-01 2022-07-12 北京凯因科技股份有限公司 IL-4Rα抗体及其用途
JP2021519068A (ja) 2018-03-26 2021-08-10 アムジェン インコーポレイテッド 細胞培養において産生される抗体の総非フコシル化グリコフォーム
WO2019222055A1 (en) 2018-05-13 2019-11-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating atopic dermatitis by administering an il-4r inhibitor
CN113101364B (zh) * 2018-05-29 2023-12-01 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 一种自免疫抑制剂的开发和应用
US10835685B2 (en) 2018-05-30 2020-11-17 Amgen Inc. Thermal spring release mechanism for a drug delivery device
US11083840B2 (en) 2018-06-01 2021-08-10 Amgen Inc. Modular fluid path assemblies for drug delivery devices
MA53375A (fr) 2018-07-24 2021-06-02 Amgen Inc Dispositifs d'administration pour l'administration de médicaments
US12115360B2 (en) 2018-07-24 2024-10-15 Amgen Inc. Hybrid drug delivery devices with grip portion
US12042645B2 (en) 2018-07-24 2024-07-23 Amgen Inc. Delivery devices for administering drugs
US20210260279A1 (en) 2018-07-24 2021-08-26 Amgen Inc. Hybrid drug delivery devices with optional grip portion and related method of preparation
CA3103105A1 (en) 2018-07-31 2020-02-06 Amgen Inc. Fluid path assembly for a drug delivery device
CN110872349A (zh) * 2018-09-04 2020-03-10 三生国健药业（上海）股份有限公司 结合人il-4r的抗体、其制备方法和用途
JP2022500095A (ja) 2018-09-24 2022-01-04 アムジエン・インコーポレーテツド インターベンション投薬システム及び方法
IL281469B2 (en) 2018-09-28 2024-08-01 Amgen Inc Assembling a memory alloy ejector activation assembly for a drug delivery device
WO2020072577A1 (en) 2018-10-02 2020-04-09 Amgen Inc. Injection systems for drug delivery with internal force transmission
MA53818A (fr) 2018-10-05 2022-01-12 Amgen Inc Dispositif d'administration de médicament ayant un indicateur de dose
AR116704A1 (es) 2018-10-15 2021-06-02 Amgen Inc Dispositivo de administración de fármacos con mecanismo de amortiguación
EA202191038A1 (ru) 2018-10-15 2021-07-06 Эмджен Инк. Способ платформенной сборки для устройства доставки лекарственного средства
US11213620B2 (en) 2018-11-01 2022-01-04 Amgen Inc. Drug delivery devices with partial drug delivery member retraction
TWI831847B (zh) 2018-11-01 2024-02-11 美商安進公司 部分針頭縮回之藥物遞送裝置及其操作方法
AU2019370159A1 (en) 2018-11-01 2021-04-22 Amgen Inc. Drug delivery devices with partial drug delivery member retraction
CN113166259A (zh) * 2018-11-09 2021-07-23 亚洲大学校产学协力团 对人IL-4受体α具有高亲和力的人抗体及其用途
CN111514292B (zh) 2018-12-25 2023-06-20 江苏荃信生物医药股份有限公司 抗人白介素4受体α单克隆抗体的制药用途
MA55204A (fr) 2019-03-06 2022-01-12 Regeneron Pharma Inhibiteurs de la voie il-4/il-13 pour une efficacité améliorée dans le traitement du cancer
CN111686247B (zh) * 2019-03-13 2022-07-29 苏州康乃德生物医药有限公司 包含人白介素-4受体α的抗体的液体组合物
BR112021018627A2 (pt) 2019-03-21 2021-11-23 Regeneron Pharma Combinação de inibidores da via de il-4/il-13 e ablação de células plasmáticas para o tratamento de alergia
MX2021012557A (es) 2019-04-24 2021-11-12 Amgen Inc Conjuntos y metodos de verificacion de esterilizacion de jeringuillas.
CA3147113A1 (en) 2019-08-05 2021-02-11 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating atopic dermatitis by administering an il-4r antagonist
MX2022001030A (es) 2019-08-05 2022-04-26 Regeneron Pharma Metodos para tratar alergia y mejorar la inmunoterapia especifica de alergenos mediante la administracion de un antagonista de il-4r.
WO2021041067A2 (en) 2019-08-23 2021-03-04 Amgen Inc. Drug delivery device with configurable needle shield engagement components and related methods
US20220349898A1 (en) 2019-09-26 2022-11-03 Amgen Inc. Methods of producing antibody compositions
AU2021244266A1 (en) 2020-03-27 2022-12-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating atopic dermatitis by administering an IL-4R antagonist
CN113527485A (zh) * 2020-04-17 2021-10-22 上海麦济生物技术有限公司 抗人白细胞介素-4受体α抗体及其制备方法和应用
BR112022022235A2 (pt) 2020-05-22 2023-03-28 Regeneron Pharma Métodos para tratamento de esofagite eosinofílica através da administração de inibidor de il-4r
US20230273126A1 (en) 2020-06-04 2023-08-31 Amgen Inc. Assessment of cleaning procedures of a biotherapeutic manufacturing process
CN117327181A (zh) * 2020-06-22 2024-01-02 南京融捷康生物科技有限公司 抗IL-4Rα的单域抗体以及应用和药物
MX2023004364A (es) 2020-10-15 2023-05-03 Amgen Inc Glucanos no emparejados relativos en metodos de produccion de anticuerpos.
JP2024502471A (ja) 2021-01-08 2024-01-19 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド ピーナッツアレルギーを治療するための方法およびｉｌ－４ｒアンタゴニストを投与することによってピーナッツアレルゲン特異的免疫療法を増強する方法
US20240208680A1 (en) 2021-05-21 2024-06-27 Amgen Inc. Method of optimizing a filling recipe for a drug container
AU2022289365A1 (en) 2021-06-07 2023-12-14 Amgen Inc. Using fucosidase to control afucosylation level of glycosylated proteins
EP4392450A1 (en) 2021-08-23 2024-07-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating atopic dermatitis by administering an il-4r antagonist
AU2022361382A1 (en) 2021-10-05 2024-03-28 Amgen Inc. Fc-gamma receptor ii binding and glycan content
WO2023085978A1 (en) * 2021-11-11 2023-05-19 Joint Stock Company «Biocad» Monoclonal antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to il-4ra, and use thereof
US20230220089A1 (en) 2021-12-30 2023-07-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for attenuating atopic march by administering an il-4/il-13 antagonist
US20240024472A1 (en) 2022-05-02 2024-01-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-Interleukin-4 Receptor (IL-4R) Antibody Formulations
US20240199688A1 (en) 2022-05-02 2024-06-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for reducing lipase activity
WO2023215725A1 (en) 2022-05-02 2023-11-09 Fred Hutchinson Cancer Center Compositions and methods for cellular immunotherapy
WO2024011251A1 (en) 2022-07-08 2024-01-11 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating eosinophilic esophagitis in pediatric by administering an il-4r antagonist
US20240141051A1 (en) 2022-11-01 2024-05-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating hand and foot dermatitis by administering an il-4r antagonist
WO2024112935A1 (en) 2022-11-23 2024-05-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for improving bone growth by administering an il-4r antagonist
WO2024206341A1 (en) 2023-03-27 2024-10-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating eosinophilic gastroenteritis by administering an il-4r antagonist

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001092340A2 (en) * 2000-05-26 2001-12-06 Immunex Corporation Use of interleukin-4 antagonists and compositions thereof

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1990005183A1 (en) 1988-10-31 1990-05-17 Immunex Corporation Interleukin-4 receptors
PT96230B (pt) 1989-12-20 1998-06-30 Schering Corp Processo para a producao de um polipeptideo e anticorpos antagonistas da interleuquina-4 humana
EP0604693A1 (en) 1992-12-29 1994-07-06 Schering-Plough Monoclonal antibodies against the human interleukin-4 receptor and hybridomas producing the same
JPH08508035A (ja) 1993-03-19 1996-08-27 イミュネックス・コーポレーション 可溶性レセプターと複合化したリガンドを含む医薬組成物
EP1709970A1 (en) 1995-04-27 2006-10-11 Abgenix, Inc. Human antibodies against EGFR, derived from immunized xenomice
AU2466895A (en) 1995-04-28 1996-11-18 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6472179B2 (en) 1998-09-25 2002-10-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Receptor based antagonists and methods of making and using

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001092340A2 (en) * 2000-05-26 2001-12-06 Immunex Corporation Use of interleukin-4 antagonists and compositions thereof

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DATABASE EPO PROTEINS EBI; 13 June 2005 (2005-06-13), XP002331703 Database accession no. AX365126 the whole document *
HOLT L.J. ET AL.: "Domain antibodies: proteins for therapy" November 2003 (2003-11), TRENDS IN BIOTECHNOLOGY, ELSEVIER PUBLICATIONS, CAMBRIDGE, GB, PAGE(S) 484-490, XP004467495 ISSN: 0167-7799 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2704999C2 (ru) * 2014-02-28 2019-11-01 Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. Способ лечения кожной инфекции путем введения антагониста il-4r
US11827719B2 (en) 2017-11-07 2023-11-28 Hobit Genomix, Inc. Method for primary prevention of allergic disorders during infancy through IgE-class-specific immunosuppression

Also Published As

Publication number Publication date
CA2543982C (en) 2013-01-08
MXPA06004853A (es) 2006-07-06
BRPI0416603A (pt) 2007-01-30
US7872113B2 (en) 2011-01-18
KR101225463B1 (ko) 2013-01-24
CA2543982A1 (en) 2005-05-26
CN1886426A (zh) 2006-12-27
ES2383809T3 (es) 2012-06-26
KR20060111464A (ko) 2006-10-27
US7638606B2 (en) 2009-12-29
TNSN06128A1 (en) 2007-11-15
EA200600869A1 (ru) 2006-12-29
IS8432A (is) 2006-04-26
NI200600098A (es) 2006-10-27
US20050112694A1 (en) 2005-05-26
WO2005047331A3 (en) 2005-11-03
ATE548388T1 (de) 2012-03-15
NO20062148L (no) 2006-07-21
TW200528470A (en) 2005-09-01
EP1692184A2 (en) 2006-08-23
US20110081361A1 (en) 2011-04-07
AU2004290017B2 (en) 2012-05-03
WO2005047331A2 (en) 2005-05-26
NZ547588A (en) 2009-05-31
AU2004290017A1 (en) 2005-05-26
IL175362A0 (en) 2006-09-05
UA93653C2 (ru) 2011-03-10
ZA200604605B (en) 2008-01-30
TWI356064B (en) 2012-01-11
JP4931597B2 (ja) 2012-05-16
CR8396A (es) 2006-12-07
IL175362A (en) 2012-02-29
JP2007534306A (ja) 2007-11-29
ECSP066526A (es) 2006-10-10
GEP20104991B (en) 2010-05-25
EP1692184B1 (en) 2012-03-07
US20070274996A1 (en) 2007-11-29
MA28418B1 (fr) 2007-02-01
US20100203590A1 (en) 2010-08-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA011302B1 (ru) Антитела, которые связывают рецептор интерлейкина-4
WO2020020281A1 (zh) 抗tigit抗体及其用途
RU2440134C2 (ru) Гетеродимерные полипептиды il-17 a/f и возможности их лечебного применения
ES2647823T3 (es) Anticuerpos anti-CD100 y métodos de uso de los mismos
US20230218743A1 (en) Peptide Therapeutics Against SARS-COV-2 Spike Protein
IL295310A (en) Human monoclonal antibodies to severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (sars-cov-2)
JP6104897B2 (ja) Ｆｃレセプター結合タンパク質
EA030777B1 (ru) Анти-альфа-синуклеинсвязывающие молекулы
EA015351B1 (ru) Антагонисты il-17a и il-17f и способы их применения
EA022796B1 (ru) Антитело, способное связывать тимусный стромальный лимфопоэтин, нуклеиновая кислота, его кодирующая, экспрессирующий вектор, клетка-хозяин, гибридома, способ получения антитела и его применение
WO2014025828A1 (en) Engineered antibody fragments for targeting and imaging cd8 expression in vivo
JP2012507299A (ja) Ｌｉｇｈｔ標的分子およびその使用
EA016783B1 (ru) Антигенсвязывающие белки для il-18 рецептора и их применение
KR20210005169A (ko) 최적화된 항tl1a 항체
WO2021195326A1 (en) Human monoclonal antibodies to severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (sars-cov-2)
US20220289828A1 (en) Human monoclonal antibodies to enterovirus d68
JPH09501042A (ja) ハウスダストダニからのアレルゲン蛋白質、ペプチド及びそのための使用
WO2023143407A1 (zh) 靶向冠状病毒的抗体在预防、治疗或改善covid-19中的应用
CN114641495A (zh) Gipr抗体及其与glp-1的融合蛋白质，以及其药物组合物和应用
AU2012322445B2 (en) Canine/feline CD20 binding epitope and compositions for binding thereto
EP4282880A1 (en) Fully human broad-spectrum neutralizing antibody 76e1 against coronavirus, and use thereof
JP2002537796A (ja) ヒトグリコシル化酵素
CN115304672A (zh) 冠状病毒抗体及其应用
EP1123317A1 (en) Immunoglobulin variants
US20230063625A1 (en) Human antibodies to rift valley fever virus

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ KG MD TJ TM

MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): BY KZ RU