EA004369B1

EA004369B1 - Производные нафтиридина, способ их получения, их применение и содержащие их фармацевтические композиции

Info

Publication number: EA004369B1
Application number: EA200200122A
Authority: EA
Inventors: Ануширван Пейман; Карл-Хайнц Шойнеманн; Томас Р. Гейдек; Жан-Франсуа Гурве; Жан-Мари Рюксер
Original assignee: Авентис Фарма Дойчланд Гмбх; Генентек Инк.
Priority date: 1999-07-02
Filing date: 2000-06-26
Publication date: 2004-04-29
Also published as: HK1050003B; TR200103856T2; EP1065207A1; NZ516058A; EA200200122A1; YU92201A; HRP20010946A2; DE60022890D1; HK1050003A1; JP2003503496A; NO20016404D0; NO20016404L; CN1372559A; ES2250157T3; KR20020015996A; IL147248A0; EP1210348A1; EP1210348B9; UA73133C2; HUP0203539A3

Abstract

Настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I), где G обозначает - (CRR)-A-(CRR)-(CRR)-(CRR)-R, где А - простая связь; В - (C-C)алкил или гидрокси; X и Y - водород; Z - N; Rи R- водород, (C-C)алкил, RS(O)NHRили ROC(O)NHR; R- водород, (C-C)алкил, (C-C)циклоалкил и др.; R- -C(O)R; R- водород или (С-С)алкил; Rи R' - водород, (С-С)алкил, (С-С)циклоалкил и др.; n=0, 1 или 2; m=0 или 1; i=0 или 1; q=0 или 1; r=0 или 1; s=0, 1 или 2; t=0; его стереоизомерным формам и физиологически приемлемым солям и пролекарствам. Соединения формулы (I) являются антагонистами рецептора витронектина и ингибиторами клеточной адгезии и могут использоваться для лечения и профилактики заболеваний, связанных с взаимодействием рецепторов витронектина и их лигандов в процессах взаимодействия клетка-клетка или клетка-матрикс, или заболеваний, которые могут быть предотвращены, облегчены или излечены воздействием на такие взаимодействия; например, для ингибирования резорбции кости остеокластами и, таким образом, для лечения и предотвращения остеопороза, или для ингибирования нежелательного сосудообразования или пролиферации клеток гладкой мускулатуры сосудов. Изобретение относится также к способам получения соединений формулы (I), их применению, в частности, в качестве активных компонентов в фармацевтических препаратах и фармацевтических композициях.

Description

Настоящее изобретение относится к соединениям формулы I

в которой В, С, X, Υ, Ζ, г, 8 и 1 имеют значения, обозначенные ниже, к их физиологически приемлемым солям и пролекарствам. Соединения формулы I представляют собой ценные фармакологически активные соединения. Они являются антагонистами рецептора витронектина и ингибиторами клеточной адгезии и могут использоваться для лечения и профилактики заболеваний, основанных на взаимодействии между рецепторами витронектина и их лигандами в процессах взаимодействия клетка-клетка или клетка-матрикс, которые могут быть предотвращены, облегчены или излечены воздействием на такие взаимодействия. Например, они могут использоваться для ингибирования резорбции кости остеокластами и, таким образом, для лечения и предотвращения остеопороза, или для ингибирования нежелательного сосудообразования или пролиферации клеток гладкой мускулатуры сосудов. Кроме того, изобретение относится к способам получения соединений формулы I, их применению, в частности, в качестве активных компонентов в фармацевтических препаратах и содержащих их фармацевтических композициях.

Кости человека подвержены постоянному динамическому процессу регенерации, включающему резорбцию кости и образование кости. Эти процессы контролируются типами клеток, специализированных для этих целей. Резорбция кости основана на разрушении остеокластами костного матрикса. Большинство костных заболеваний основано на нарушении равновесия между образованием кости и резобрцией кости. Остеопороз представляет собой заболевание, характеризующееся низкой костной массой и повышенной хрупкостью костей, что приводит к повышенному риску переломов. Эго следует изза недостаточного образования новой костной ткани в сравнении с резорбцией кости в течение постоянного процесса обновления. Обычное лечение остеопороза включает, например, введение бисфосфонатов, эстрогенов, эстроген/прогестерона (заместительная гормональная терапия или НВТ), агонистов/антагонистов эстрогена (селективные модуляторы рецептора эстрогена или §ЕВМз), кальцитонина, аналогов витамина Э. паратиреоидного гормона, препаратов, усиливающих секрецию гормона роста, или фторида натрия НагсНпс с1 а1., Аиииа1 Веройз ίη МесНаа1 Сйепйзйу 31 (1996) 211).

Активированные остеокласты представляют собой многоядерные клетки диаметром до

400 мкм, которые разрушают костный матрикс. Активизированные остеокласты прикрепляются к поверхности костного матрикса и секретируют протеолитические ферменты и кислоты в так называемую «зону уплотнения», область между их клеточной мембраной и костным матриксом. Кислая среда и протеазы вызывают разрушение кости. Соединения формулы I ингибируют резорбцию кости остеокластами.

Исследования показали, что присоединение остеокластов к костям контролируется интегриновыми рецепторами на поверхности клетки остеокластов. Интегрины представляют собой суперсемейство рецепторов, которое включает, среди прочих, рецептор фибриногена (ХиьЗз на тромбоцитах крови и рецептор витронектина ОуЗз. Рецептор витронектина α,β₃ представляет собой мембранный гликопротеин, который экспрессирован на поверхности большого числа клеток, таких как эндотелиальные клетки, клетки гладкой мускулатуры сосудов, остеокласты и опухолевые клетки. Рецептор витронектина ОуЗз, который экспрессирован на мембране остеокласта, контролирует процесс присоединения к костям и резорбцию костей и, таким образом, способствует остеопорозу. В этом случае α,β₃ связывается с белками костного матрикса, такими как остеопонтин, костный сиалопротеин и тромбоспонтин, которые содержат трипептидный мотив Агд-61у-Азр (или ВСЭ).

Хортон (Нойои) и коллеги описали ВСЭпептиды и антитела против рецептора витронектина (23С6), которые ингибируют разрушение зубов остеокластами и миграцию остеокластов (НоПои е! а1., Ехр. Се11. Кез. 195 (1991) 368). В качестве мощного ингибитора резорбции кости в культуре тканей и в качестве ингибитора адгезии остеокластов к костям §а!о с1 а1. в 1. Се11 Ыо1. 111 (1990) 1713 описаны эхистатин, В6Эпептид из яда змеи. Изйег с1 а1. (Епс1осппо1о§у 132 (1993) 1411) и УататоЮ с1 а1. (Εηάοατηοΐоду 139 (1998) 1411) смогли продемонстрировать на крысе, что эхистатин также ингибирует резорбцию кости ίη νίνο.

Кроме того, было показано, что витронектин α,β₃ гладкомышечных клеток аорты человека стимулирует миграцию этих клеток в неонтиму, что в результате приводит к артериосклерозу и рестенозу после ангиопластики (Вго\\ п с1 а1., Сагбюуа8си1аг Вез. 28 (1994) 1815). Уис с1 а1. (Р11аппасо1о§у Βενίεχνδ апс! СопипишсаПоиз 10 (1998) 9) продемонстрировали ингибирование образования неоинтимы при использовании антагониста ОуЗз.

Вгоокз с1 а1. (Се11 79 (1994) 1157) показали, что антитела против антагонистов (ХуЗз или α,β₃могут вызывать уменьшение опухолей, стимулируя апоптоз клеток кровеносных сосудов при сосудообразовании. Рецептор витронектина α,β₃ также сверхэкспрессирован в злокачественных клетках меланомы и вовлечен в разви тие множества других типов рака (Еид1ешап с! а1., Аппиа1 Веройк ίη Месйста1 Сйепйкйу 31 (1996) 191). Инвазивность меланомы коррелирует с этой сверхэкспрессией (§1гаске с! а1., Еису1орей1а о£ Сапсег, уо1ите III, 1855, Асайепйс Ргекк, 1997; НШ18 с! а1., СНшса1 8с1епсе 91 (1996) 639). Саггоп с! а1. (Сапсег Кек. 58 (1998) 1930) описали ингибирование роста опухоли и ингибирование злокачественной гиперкальцемии при использовании антагониста Оу3₃.

ЕпссПапбсг с! а1. (8с1еисе 270 (1995) 1500) описали анти-а, Рз антитела или α, β₃ антагонисты, которые ингибируют ЬРСР-индуцированные процессы сосудообразования в глазе крысы, свойство, которое может использоваться при лечении ретинопатий и при лечении псориаза. 8!огдагй с! а1. (1. С1ш. Ιηνεκΐ. 103 (1999) 47) описали использование антагонистов (Χνβ₃при лечении артритов.

Таким образом, влияние на рецептор витронектина или взаимодействия, в которые он вовлечен, предоставляет возможность влияния на состояния различных заболеваний, для лечения и профилактики которых до сих пор существует потребность в подходящих фармацевтически активных веществах.

В качестве ингибиторов резорбции кости остеокластами в европейском патенте А-528586 и европейском патенте А-528587 описаны аминоалкилзамещенные или гетероциклилзамещенные производные фенилаланина, и в \УО-А95/32710 описаны арильные производные. В качестве ингибиторов резорбции кости, сосудообразования и рестеноза в \УО-А-95/28426 описаны ВСНЗ-пептиды. В международной патентной заявке РСТ/ЕР 98/08051 описаны производные карбаминового эфира, и в международной патентной заявке РСТ/ЕР 99/00242 описаны сульфонамиды, которые являются антагонистами рецептора витронектина. Кроме того, антогонисты рецептора витронектина описаны в \νθ-Α-98/08840 и \УО-А-98/18461. В качестве ингибиторов резорбции кости в ЕР-А-853084 описаны замещенные производные пурина. Дальнейшие исследования показали, что соединения формулы I являются особенно сильными ингибиторами рецептора витронектина и резорбции кости остеокластами.

в которой

С представляет собой остаток формулы II -(СВ¹В²)п-А-(СВ¹В²)п1-(СВ¹В³)1-(СВ¹В²)а-В⁴, II

А представляет собой простую связь;

В представляет собой (С1-С₆)алкил или гидрокси, где все группы В являются независимыми друг от друга и могут быть одинаковыми или различными;

X представляет собой водород;

Υ представляет собой водород;

Ζ представляет собой Ν;

В¹ и В² представляют собой водород, (С1СДалкил, Β⁶8(Ο)₂ΝΗΒ⁷ или Β⁶00(0)ΝΗΒ⁷, где все группы В¹ и В² независимы друг от друга, и могут быть одинаковыми или различными;

В³ представляет собой водород, (С1-С12) алкил, (С3-С14)циклоалкил, (С3-С14)циклоалкил (С1-С6)алкил, (С5-С14)арил, (С5-С14)арил(С1-С6) алкил, (С5-С14)гетероарил, (С5-С14)-гетероарил (СгСУалкил, Β^'Ν-Β⁷, Β⁶8(Ο)2Ν(Β⁵)Β⁷,

Β⁶00(0)Ν(Β⁵)Β⁷ или В⁶С(О)КГ(В⁵)В⁷, где алкил может быть мононенасыщенным или полиненасыщенным, и где алкил, циклоалкил, арил и гетероарил могут быть монозамещены или полизамещены В⁶, фтором, хлором, трифторметилом, В⁶С(О)В⁷ или В⁶-О-В⁷;

В⁴ представляет собой -С(О)В⁸;

В⁵ представляет собой водород или (С]-С₄) алкил;

В⁶ и В⁶’ представляют собой водород, (С1С1₂)алкил, (С₃-С1₄)циклоалкил, (С₃-С1₄)циклоалкил(С1-С₈)алкил, (С₅-С1₄)арил, (С₅-С1₄)арил (С1-С₈)алкил, (С₅-С1₄)гетероарил или (С₅-С1₄) гетероарил(С1-С₈)алкил, где арил, гетероарил, циклоалкил и алкил могут быть замещены один, два или три раза одинаковыми или различными заместителями из ряда, включающего фтор, хлор, бром, циано, трифторметил, (С1-С₆)алкил, (С1-С₆)алкокси, (С1-Сб)алкиламино, ди-((С1-С₆) алкил)амино, (С₅-С1₄)арил и (С₅-С1₄)гетероарил, и где все группы В⁶ и В⁶' независимы друг от друга и могут быть одинаковыми или различными;

В⁷ представляет собой простую связь;

В⁸ представляет собой гидрокси или (С]С₄)алкокси;

и равно нулю, единице или двум;

щ равно нулю или единице; ί равно нулю или единице; с| равно нулю или единице; г равно нулю или единице;

равно нулю, единице или двум;

ΐ равно нулю;

во всех своих стереоизомерных формах и их смесях в любых соотношениях, и его физиологически приемлемые соли, и его пролекарства.

Все группы и числовые значения (или индексы), которые могут несколько раз встречаться в соединениях формулы I, например, группы В, В¹, В², В³, В⁵, В⁶, В⁶', В⁷ или числовые значения р, а также все другие группы и числовые значения, к которым это относится, могут каждые, независимо друг от друга, иметь указанные значения. Они могут быть все одинаковыми или различными. Аналогично, гетероатомы в гетероциклических кольцах или заместители в группах, которые могут встречаться несколько раз, могут в каждом случае независимо друг от друга иметь указанные значения, и могут быть все одинаковыми или различными.

Алкильные группы могут представлять собой прямую или разветвленную цепь и могут быть насыщенными или мононенасыщенными или полиненасыщенными. Это также относится к случаю, когда они содержат заместители или сами являются заместителями в других группах, например, в алкоксигруппах, алкоксикарбонильных группах или арилалкильных группах. Замещенные алкильные группы могут быть замещены в любом подходящем положении. Примерами алкильных групп, содержащих 1-12 атомов углерода, являются метил, этил, пропил, бутил, пентил, гексил, гептил, октил, нонил, децил, ундецил и додецил, н-изомеры всех этих групп, изопропил, изобутил, изопентил, неопентил, изогексил, изодецил, 3-метилпентил, 2,3,4триметилгексил, втор-бутил, трет-бутил или трет-пентил. Предпочтительная группа алкильных радикалов представлена группами метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил и трет-бутил.

Ненасыщенные алкильные группы могут содержать одну или несколько, например, одну, две или три двойные и/или тройные связи. Разумеется, ненасыщенная алкильная группа должна содержать, по крайней мере, два атома углерода. Примерами ненасыщенных алкильных групп являются алкенильные группы, такие как винил, 1-пропенил, аллил, бутенил или 3метил-2-бутенил, или алкинильные группы, такие как этинил, 1-пропинил или пропаргил. Алкильные группы также могут быть ненасыщенными, когда они замещены. Предпочтительно, ненасыщенная алкильная группа является мононенасыщенной и содержит одну двойную или тройную связь.

Вышеуказанные определения, относящиеся к алкильным группам, соответственно, относятся к дивалентным группам, таким как алкандиильные группы, алкендиильные группы, алкиндиильные группы, алкиленовые группы, алкениленовые группы, алкиниленовые группы. Таким образом, алкандиильные группы, алкендиильные группы и алкиндиильные группы могут также быть прямой или разветвленной цепью. Связи, посредством которых дивалентные группы связаны с соседними группами, могут быть в любом желаемом положении. Примерами алкандиильных групп и алкиленовых групп являются метилен (-СН₂), метилметилен (1,1этандиил) (-С(СНз)Н-), диметилметилен (2,2пропандиил) (-С(СН₃)₂-), 1,2-этилен (-СН₂-СН₂-), 1,3-пропилен(-СН₂-СН₂-СН₂-) или 1,4-бутилен (-СН₂-СН₂-СН₂-СН₂-). Примерами алкениленовых групп являются винилен или пропенилен, примерами алкиниленовых групп являются этинилен или пропинилен.

Циклоалкильные группы могут быть моноциклическими, бициклическими или трицик лическими, то есть, они могут быть моноциклоалкильными группами, бициклоалкильными группами и трициклоалкильными группами, если они имеют подходящее число атомов углерода и их исходные углеводороды устойчивы. Бициклическая или трициклическая циклоалкильная группа должна содержать, по крайней мере, 4 атома углерода. Предпочтительно, бициклическая или трициклическая циклоалкильная группа содержит, по крайней мере, 5 атомов углерода, более предпочтительно, по крайней мере, 6 атомов углерода, и вплоть до числа атомов углерода, указанных в соответствующем определении. Таким образом, (С₃-С_!4)циклоалкил включает, но не ограничивается, например, (С₃-С1₄)моноциклоалкил, (С₆-С_!4)бициклоалкил и (С₆-С1₄)трициклоалкил, и (С₃-С_!2)циклоалкил включает, но не ограничивается, например, (С₃-С1₂)моноциклоалкил, (С₆-С1₂)бициклоалкил и (С₆-С1₂)трициклоалкил.

Моноциклоалкильными группами являются, например, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктил, циклононил, циклодецил, циклоундецил, циклододецил или циклотетрадецил, которые могут также быть замещены, например, (С1-С₄) алкилом. Примерами замещенных циклоалкильных групп, которые могут быть упомянуты, являются 4-метилциклогексил и 2,3-диметилциклопентил.

Бициклоалкильные группы и трициклоалкильные группы аналогично могут быть незамещенными или замещенными в любом желаемом подходящем положении, например, одной или несколькими оксогруппами и/или одной или несколькими одинаковыми или различными (С1-С₄)алкильными группами, например, метильными или изопропильными группами, предпочтительно метильными группами. Связь, посредством которой бициклический или трициклический остаток присоединен, может быть расположена в любом желаемом положении молекулы; остаток может таким образом быть связан через головной мостиковый атом или атом в мостике. Связь, посредством которой остаток связан, может также быть расположена в любом желаемом стереохимическом положении, например, в экзоположении или эндоположении.

Примерами исходных структур бициклических кольцевых систем являются норборнан (=бицикло[2.2.1]гептан), бицикло[2.2.2]октан и бицикло[3.2.1]октан. Примером системы, замещенной оксогруппой, является камфора (=1,7,7триметил-2-оксобицикло[2.2.1]гептан). Примерами исходных структур трициклических систем являются твистан (=трицикло[4.4.0.0^3,8] декан), адамантан (=трицикло[3.3.1.1^3,7]декан), норадамантан (=трицикло[3.3.1.0^3,7]нонан), трицикло [2.2.1.0^2,6]гептан, трицикло[5.3.2.0^4,9] додекан, трицикло[5.4.0.0^2,9]ундекан или трицикло[5.5.1.0^3,11]тридекан. Остатком, производным от адамантана, может быть 1-адамантил или 2адамантил.

(С₅-С|.-|)Арил включает гетероциклические (С₅-С₁₄)арильные группы (=(С₅-С₁₄)гетероарильные группы), в которых один или несколько из 5-14 кольцевых атомов углерода замещены гетероатомами, такими как азот, кислород или сера, и карбоциклические (С₆-С₁₄) арильные группы. Примерами карбоциклических (С₆С₁₄)арильных групп являются фенил, нафтил, такой как 1-нафтил или 2-нафтил, бифенилил, такой как 2-бифенилил, 3-бифенилил или 4бифенилил, антрил или флуоренил, где (С₆С₁₂)арильные группы, в частности, 1-нафтил, 2нафтил и фенил, являются предпочтительными. Если не указано иного, арильные группы, в частности, фенильные группы, могут быть незамещены или замещены одним или несколькими, предпочтительно одним, двумя или тремя, одинаковыми или различными заместителями. В частности, замещенные арильные группы могут быть замещены одинаковыми или различными группами, выбранными из ряда, включающего (С1-С₈)алкил, в частности (С₁-С₄) алкил, (С1С₈)алкокси, в частности (С₁-С₄) алкокси, фтор, хлор и бром, нитро, амино, (С4-С4) алкиламино, ди-((С1-С₄)алкил)амино, трифторметил, гидрокси, метилендиокси, циано, гидроксикарбонил-, аминокарбонил-, (С₁-С₄) алкоксикарбонил-, фенил, фенокси, бензил, бензилокси, тетразолил, (В⁹О)2Р(О)- и (В⁹О)2Р (О)-О-, где В⁹ представляет собой водород, (С₁-С₁₀)алкил, (С₆-С₁₄)арил или (С₆-С₁₄)арил(С₁-С₈)алкил. Обычно, в соединениях формулы I могут присутствовать только до двух нитрогрупп, и, аналогично, все другие группы, заместители или гетероатомы, указанные в определении соединений формулы I, могут присутствовать в соединениях формулы I только в таких положениях, и в таком количестве, и в таких комбинациях, чтобы полученная молекула являлась устойчивой и не обладала характеристиками, которые нежелательны для предполагаемого применения.

В монозамещенных фенильных группах заместитель может находиться во 2-ом положении, в 3-ем положении или в 4-ом положении, но 3-е положение и 4-ое положение являются предпочтительными. Если фенил дизамещен, то заместители могут быть в 2, 3-ем положении, 2,

4- ом положении, 2, 5-ом положении, 2, 6-ом положении, 3, 4-ом положении или 3, 5-ом положении.

Предпочтительно, в дизамещенных остатках фенила эти два заместителя расположены в 3, 4-ом положении относительно места связывания. В тризамещенных остатках фенила заместители могут быть в 2, 3, 4-ом положении, 2, 3,

5- ом положении, 2, 3, 6-ом положении, 2, 4, 5ом положении, 2, 4, 6-ом положении или 3, 4, 5ом положении. Аналогично, нафтильные группы и другие арильные группы могут быть замещены в любом желаемом положении, например,

1-нафтильная группа в 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7- и 8-ом положении, 2-нафтильная группа в 1-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7- и 8-ом положении.

Помимо карбоциклических систем, (С₅С₁₄)арильные группы могут также быть моноциклическими или полициклическими, например, моноциклическими, бициклическими или трициклическими, ароматическими кольцевыми системами, в которых 1, 2, 3, 4 или 5 кольцевых атомов углерода заменены гетероатомами, в частности, одинаковыми или различными гетероатомами из ряда, включающего азот, кислород и серу. Примерами гетероциклических (С₅С₁₄)арильных групп и (С₅-С₁₄)гетероарильных групп являются пиридил, такой как 2-пиридил, 3-пиридил и 4-пиридил, пирролил, такой как 2пирролил и 3-пирролил, фурил, такой как 2фурил и 3-фурил, тиенил, такой как 2-тиенил и 3-тиенил, имидазолил, пиразолил, оксазолил, изоксазолил, тиазолил, изотиазолил, тетразолил, пиридазинил, пиразинил, пиримидинил, индолил, изоиндолил, индазолил, фталазинил, хинолил, изохинолил, хиноксалинил, хиназолинил, циннолинил, β-карболинил или бензоконденсированные, циклопентаконденсированные, циклогексаконденсированные или циклогептаконденсированные производные этих групп. Гетероциклические системы могут быть замещены в любом подходящем положении заместителями, перечисленными выше в отношении карбоциклических арильных систем.

В ряде этих гетероарильных групп, предпочтительными являются моноциклические или бициклические ароматические кольцевые системы, которые содержат 1, 2 или 3 кольцевых гетероатома, в частности, 1 или 2 кольцевых гетероатома из ряда, включающего азот, кислород и серу, и которые могут быть незамещены или замещены 1, 2 или 3 заместителями из ряда, включающего (С₁-С₆)алкил, (С₁-С₆)алкокси, фтор, хлор, нитро, амино, трифторметил, гидрокси, (С₁-С₄)алкоксикарбонил-, фенил, фенокси, бензилокси и бензил. В частности, предпочтительными являются моноциклические или бициклические ароматические 5-10-членные кольцевые системы, содержащие 1, 2 или 3 гетероатома, в частности, содержащие 1 или 2 кольцевых гетероатома из ряда, включающего азот, кислород и серу, которые могут быть замещены 1-2 заместителями из ряда, включающего (С₁С₄)алкил, (С₁-С₄)алкокси, фенил, фенокси, бензил и бензилокси. Наиболее предпочтительными, в частности, являются 5-членные или 6членные моноциклические гетероарильные группы и 9-членные или 10-членные бициклические гетероарильные группы, содержащие 1 или 2, в частности 1, кольцевой гетероатом из ряда, включающего азот, кислород и серу, которые незамещены или замещены, как описано выше.

Вышеуказанные определения, относящиеся к арильным группам, соответственно, отно9 сятся к дивалентным ариленовым группам, включая гетероариленовые группы. Ариленовые группы могут быть связаны с соседними группам в любых желаемых подходящих положениех. Если ариленовая группа является производным бензольного кольца, то остатком может быть 1, 2-фенилен, 1, 3-фенилен или 1, 4фенилен, две последние группы предпочтительны, и 1, 4-фенилен является особенно предпочтительным. Если ариленовая или гетероариленовая группа является производным пиридинового кольца, то две связи, посредством которых она присоединяется, может находиться в 1,2-ом положении, 1,3-ем положении или 1,4-ом положении относительно друг друга и в любом желательном положении относительно кольцевого атома азота. Таким образом, пиридиндиильной группой может быть, например, 2,3пиридиндиил, 2,4-пиридиндиил, 2,5пиридиндиил, 2,6-пиридиндиил или 3,5пиридиндиил. Вышеуказанные описания, относящиеся к арильным группам, также, соответственно, относятся к арильной группе в группах, таких как, например, арил-алкил-. Примерами групп арил-алкил-, которые могут также иметь в арильной группе заместители, перечисленными выше, являются бензил, 1-фенилэтил или 2фенилэтил.

Тетрагидро[1,8]нафтиридиновое кольцо, изображенное в формуле I, может быть присоединено к 4-ому положению 6-членного кольца, содержащего группу Ζ, через любое из трех положений ароматического кольца, то есть оно может быть 5,6,7,8-тетрагидро[1,8]нафтиридин2-ильным остатком, 5,6,7,8-тетрагидро[1,8] нафтиридин-3-ильным остатком или 5,6,7,8тетрагидро [1,8]нафтиридин-4-ильным остатком. Предпочтительным является 5,6,7,8-тетрагидро [1,8]нафтиридин-2-ильный остаток или 5,6,7,8тетрагидро [1,8] нафтиридин-3-ильный остаток, особенно предпочтительным является 5,6,7,8тетрагидро [1,8]нафтиридин-2-ильный остаток.

Примерами насыщенных и ненасыщенных колец, в частности, 3-7-членных насыщенных или ненасыщенных колец, которые могут содержать один или два гетероатома, такие как азот, сера или кислород, и которые могут необязательно быть монозамещены или дизамещены группами, выбранными из ряда, включающего =О, =8 и К³, являются циклопропан, циклобутан, циклопентан, циклогексан, циклогептан, циклопентен, циклогексен, циклогептен, тетрагидропиран, 1,4-диоксациклогексан, морфолин, тиоморфолин, пиперазин, пиперидин, пирролидин, дигидроизоксазол, тетрагидроизоксазол, 1,3-диоксолан, 1,2-дитиолан, 2,3-дигидрофуран, 2,5-дигидрофуран, тетрагидрофуран, 2,3дигидротиофен, 2,5-дигидротиофен, 2имидазолин, 3-имидазолин, 4-имидазолин, 2оксазолин, 3-оксазолин, 4-оксазолин, 2тиазолин, 3-тиазолин, 4-тиазолин, тиазолидин, 2Н-тиапиран, 2Н-пиран, 4Н-пиран.

Оптически активные атомы углерода, присутствующие в соединениях формулы I, могут независимо друг от друга иметь К конфигурацию или 8 конфигурацию. Соединения формулы I могут присутствовать в виде чистых энантиомеров или чистых диастереомеров или в виде смесей энантиомеров, например, в виде рацематов или смесей диастереомеров. Настоящее изобретение относится как к чистым энантиомерам, так и к смесям энантиомеров, а также как к чистым диастереомерам и смесям диастереомеров. Изобретение включает смеси двух или более двух стереоизомеров формулы I, и оно включает любые соотношения стереоизомеров в смесях. Соединения формулы I, содержащие соответствующие структурные единицы, могут также присутствовать в виде Е изомеров или Ζ изомеров (или транс-изомеров или цисизомеров). Изобретение относится как к чистым Е изомерам, чистым Ζ изомерам, чистым цисизомерам, чистым транс-изомерам, а также к смесям Е/Ζ и смесям цис/транс в любых соотношениях. Изобретение также включает все таутомерные формы соединений формулы I. Диастереомеры, включая Е/Ζ изомеры, могут быть разделены на отдельные изомеры, например, с помощью хроматографии. Рацематы могут быть разделены на два энантиомера с помощью общепринятых способов, например, с помощью хроматографии на хиральных фазах или с помощью разделения, например, кристаллизацией диастереомерных солей, полученных с помощью оптически активных кислот или оснований. Стереохимические субъединицы соединений формулы I могут также быть получены, используя стереохимические субъединицы исходных веществ или используя стереоселективные реакции.

Физиологически приемлемые соли соединений формулы I представляют собой нетоксичные соли, которые являются физиологически приемлемыми, в частности, фармацевтически пригодные для использования соли. Такие соли соединений формулы I, содержащие кислотные группы, например, карбоксил, представляют собой, например, соли щелочных металлов или соли щелочно-земельных металлов, такие как, например, соли натрия, соли калия, соли магния и соли кальция, а также соли с физиологически приемлемыми четверичными ионами аммония и соли добавления кислот с аммонием и физиологически приемлемыми органическими аминами, такими как, например, триэтиламин, этаноламин или трис-(2-гидроксиэтил)амин. Основные группы в соединениях формулы I могут образовывать соли добавления кислот, например, с неорганическими кислотами, такими как хлористоводородная кислота, серная кислота или фосфорная кислота, или с органическими карбоновыми кислотами и сульфоновыми кислотами, такими как уксусная кислота, лимонная кислота, бензойная кислота, малеиновая кислота, фумаровая кислота, винная кислота, метансульфоновая кислота или п-толуолсульфоновая кислота. Соединения формулы I, которые одновременно содержат основную группу и кислую группу, например, карбоксильную группу помимо основных атомов азота, могут быть в виде цвиттерионов (или бетаинов или внутренних солей), они также включены в настоящее изобретение.

Соли соединений формулы I могут быть получены с помощью обычных способов, известных специалистам в данной области, например, путем взаимодействия соединения формулы I с неорганической или органической кислотой или основанием в растворителе или разбавителе, или с помощью катионного обмена или анионного обмена с другими солями. Объектом настоящего изобретения являются также все соли соединений формулы I, которые из-за своей низкой физиологической приемлемости не являются полностью подходящими для использования в фармацевтических препаратах, но являются подходящими, например, в качестве промежуточных соединений для проведения дополнительных химических модификацией соединений формулы I, или в качестве исходных веществ при получении физиологически приемлемых солей.

Настоящее изобретение, кроме того, включает все сольваты соединений формулы I, например, гидраты или аддукты со спиртами, и производные соединений формулы I, такие как сложные эфиры, пролекарства и другие физиологически приемлемые производные, а также активные метаболиты соединений формулы I. Изобретение относится, в частности, к пролекарствам соединений формулы I, которые могут быть преобразованы в соединения формулы I в физиологических условиях. Подходящие пролекарства соединений формулы I, то есть химически преобразованные производные соединений формулы I, обладающие свойствами, которые улучшены желаемым способом, известны специалистам в данной области. Более подробная информация относительно пролекарств и их получения находится, например, в Некйег с1 а1., Абсапсеб Эгид ОеПуегу Веу1е\\'8 19 (1996) 115; Ос5щп οί Ргобгид8, Н. Випбдаагб (еб)., Е15еу1ег. 1985; или Н. Випбдаагб, Эгид8 οί Би1иге 16 (1991) 443; которые включены здесь в качестве ссылки. Подходящие пролекарства соединений формулы I представляют собой, главным образом, эфирные пролекарства и амидные пролекарства групп карбоновых кислот, в частности, СООН-группы, представленной В⁴, например, алкиловые эфиры, а также ацильные пролекарства и карбаматные пролекарства азотсодержащих групп, способных к ацилированию, таких как аминогрупп или тетрагидронафтиридиновой группы. В ацильных пролекарствах или карбаматных пролекарствах один или несколько, например, один или два атома водорода таких групп замещаются на атомы азота с помощью ацильной группы или карбаматной группы. Подходящие ацильные группы и карбаматные группы ацильных пролекарств и карбаматных пролекарств представляют собой, например, группы В¹⁰-С(О)- и В^ПО-С(О)-, в которых В¹⁰представляет собой водород, (С1-С1₈)алкил, (С₃С1₄)циклоалкил, (С₃-С1₄)циклоалкил(С1 -С₈)алкил-, -(С₅-С1₄)арил, в которых 1-5 атомов углерода могут быть заменены гетероатомами, такими как азот, кислород или сера, или (С₅-С₁₄) арил(С1-С₈)алкил-, в котором от 1 до 5 атомов углерода в группе арила могут быть заменены гетероатомами, такими как азот, кислород или сера, и в которых В¹¹ имеет значения, указанные для В¹⁰, за исключением водорода.

Кольцевые структуры в соединениях формулы I, которые могут нести заместители В, то есть, ароматическое кольцо и неароматическое кольцо в группе тетрагидронафтиридина и 6членное кольцо, содержащее группу Ζ, могут независимо друг от друга быть незамещенными или замещенными, где в замещенных кольцах заместители могут присутствовать в любом желательном положении. Если любое из этих колец является незамещенным, то это означает, что соответствующие числовые значения г, или 8, или 1, определяющие число заместителей В, равны нулю. В таком случае, то есть, если любое из колец является незамещенным и соответствующее числовое значение г, 8 или 1 равно нулю, то все положения на этом кольце, которые не заняты связями, соединяющими его с соседними группами, изображенными в формуле I, несут атомы водорода. Если любое из колец является замещенным, то это означает, что оно несет одну или несколько групп или атомов, отличных от водорода, из группы и атомов, перечисленных при определении В, и, что соответствующее числовое значение г, 8 или 1 отличается от нуля. В таком случае, то есть, если любое из колец является замещенным, и соответствующее числовое значение г, 8 или 1 отлично от нуля, то все положения на этом кольце, которые не заняты заместителями В или связями, соединяющими его с соседними группами, изображенными в формуле I, несут атомы водорода. Например, ароматическое кольцо в группе тетрагидронафтиридина имеет три положения, к которым могут быть присоединены соседние группы или заместители. Одно из этих положений занято связью, соединяющей кольцо с 6членным кольцом, содержащим группу Ζ. Числовое значение г равно нулю или единице, более предпочтительно, нулю. Числовое значение 8, предпочтительно, равно нулю, единице или двум, более предпочтительно, нулю. Числовое значение 1 равно нулю. В предпочтительном воплощении изобретения г, 8 и 1 одновременно равны нулю, то есть, ароматическое кольцо и неароматическое кольцо в группе тетрагидронафтиридина, а также 6-членное кольцо, содер жащее группу Ζ, не несет заместителей В, а все положения, не занятые связями с соседними группами, изображенными в формуле I, несут атомы водорода. Соединения такого предпочтительного воплощения изобретения могут быть, таким образом, представлены формулой 1а. В частности, в предпочтительном воплощении изобретения группа тетрагидронафтиридина связана с 6-членным кольцом, содержащим группу Ζ через его 2-положение, что приводит к образованию соединений формулы 1Ь. В формулах 1а и 1Ь С, X, Υ и Ζ имеют значения, указанные выше для формулы I.

Числовое значение и равно нулю, единице или двум, предпочтительно единице.

Числовое значение ш равно нулю или единице, предпочтительно нулю.

Числовое значение ί равно нулю или единице, предпочтительно единице.

Числовое значение с| равно нулю или единице, предпочтительно нулю.

Предпочтительно в соединениях формулы I по крайней мере одно из числовых значений и, ш, ί и с| отлично от нуля.

Группа А представляет собой прямую связь, то есть группы (СК¹К²)П и (СВ¹ В²)т связаны непосредственно друг с другом.

Группы В предпочтительно представляют собой независимо друг от друга гидрокси или (С1-С₆)алкил, более предпочтительно гидрокси или (С1-С₄)алкил.

Группа X представляет собой водород.

Группа Υ представляет собой водород.

Группа Ζ представляет собой Ν, то есть атом азота.

Остатки В¹ и В² предпочтительно независимо друг от друга представляют собой водород или (С1-С₂)алкил, более предпочтительно водород или метил, наиболее предпочтительно водород.

Остатки В³ предпочтительно независимо друг от друга представляют собой Β⁶Β⁶'Ν-Β⁷, Β⁶00(0)Ν(Β⁵)Β⁷ или Β⁶8(Ο)2Ν(Β⁵)Β⁷, Β⁶0(0)Ν(Β⁵)Β⁷. Более предпочтительно В³представляет собой Β⁶00(0)Ν(Β⁵)Β⁷ или Β⁶8(Ο)2Ν(Β⁵)Β⁷. Как указано выше, обычно соединения по настоящему изобретению, предпочтительно имеют подходящую степень стабильности для предназначенного использования. Поэтому в группах, таких как Β⁶00(0)Ν(Β⁵)Β⁷, Β⁶8(Ο)₂Ν(Β⁵)Β⁷ и

Β⁶8(Ο)2Ν(Β⁵)Β⁷, остаток В⁶ предпочтительно имеет одно из вышеуказанных значений, но не обозначает водород. В предпочтительном воплощении по настоящему изобретению соединения формулы I в группе В³ содержат липофильный остаток. Группа таких предпочтительных соединений образована, например, такими соединениями, в которых В⁶ и/или В⁶', например, в группе Β⁶00(0)Ν(Β⁵)Β⁷ или Β⁶8(Ο)2Ν(Β⁵)Β⁷, представляет собой -(С₄-С1₂) алкил, (С₅-С1₄)арил(С1-С₄)алкил-, например, бензил, (С₅-С1₄)циклоалкил или (С₅-С1₄)циклоалкил(С1 -С₄)алкил-, предпочтительными группами циклоалкила здесь в частности являются остаток 1-адамантила и остаток 2-адамантила, или -(С₅-С1₄)арил, который замещен фтором, хлором или бромом, предпочтительно хлором, трифторметилом, (С1-С₆)алкилом или (С1-С₆) алкокси.

В⁴ представляет собой -С(О)-В⁸. Остаток 48-членного гетероцикла, представленного как В⁴, предпочтительно является одним из группы тетразолила, имидазолила, пиразолила, оксазолила и тиазолила.

Остатки В⁵ предпочтительно независимо друг от друга представляют собой водород или (С1-С₄)алкил, более предпочтительно водород или (С1-С₂)алкил, наиболее предпочтительно водород.

Остатки В⁷ представляют собой прямую связь.

Остатки В⁸ представляют собой гидрокси или (С1-С₄)алкокси.

Объектом настоящего изобретения являются предпочтительные соединения по настоящему изобретению, которые представляют собой такие соединения формулы I, в которых одна или несколько групп имеют предпочтительные определения, или имеют одно или несколько конкретных обозначений из списка обозначений, приведенного в их соответствующих определениях и в общих пояснениях относительно групп, все комбинации таких предпочтительных определений и конкретных обозначений.

Группа предпочтительных соединений образована, например, соединениями формулы I, в которых представляет собой остаток формулы II -(СК.¹К.²)п-А-(СК.¹К.²)т-(СК.¹К.³)1-(СК.¹К.²),-К⁴, II

А представляет собой простую связь;

X представляет собой водород;

Υ представляет собой водород;

Ζ представляет собой Ν;

В¹ и В² представляют собой водород или (С1-С₂)алкил, где все группы В¹ и В² независимы друг от друга и могут быть одинаковыми или различными;

В³ представляет собой Β⁶Β⁶Ν-Β⁷,

Κ⁶8(Ο)₂Ν(Κ⁵)Κ⁷, Κ⁶00(0)Ν(Κ⁵)Κ⁷ или

Κ⁶0(0)Ν(Κ⁵)Κ⁷;

В⁴ представляет собой -С(О)В⁸;

В⁵ представляет собой водород или (С]-С₂) алкил;

В⁶ и В⁶' представляют собой водород, (С]С1₂)алкил, (Сз-С1₄)циклоалкил, (С₃-С1₄)циклоалкил(С1-С₈)алкил, (С₅-С1₄)арил, (С₅-С1₄)арил (С1-С₈)алкил, (С₅-С1₄)гетероарил или (С₅-С1₄) гетероарил(С1-С₈)алкил, где арил, гетероарил, циклоалкил и алкил могут быть замещены один, два или три раза одинаковыми или различными заместителями из ряда, включающего фтор, хлор, бром, циано, трифторметил, (С1-С₆)алкил, (С1-С₆)алкокси, (С1-С₆)алкиламино, ди-((С1-С₆) алкил)амино, (С₅-С1₄)арил и (С₅-С1₄)гетероарил, и где все группы В⁶ и В⁶' независимы друг от друга и могут быть одинаковыми или различными;

В⁷ представляет собой простую связь;

и равно нулю, единице или двум;

щ равно нулю или единице; ί равно нулю или единице; с| равно нулю или единице; г равно нулю;

§ равно нулю;

равно нулю;

во всех своих стереоизомерных формах и их смесях в любых соотношениях, и его физиологически приемлемые соли и его пролекарства.

Группа более предпочтительных соединений образована, например, соединениями формулы I, в которой представляет собой остаток формулы II -(СК.¹К.²)п-А-(СК.¹К.²)т-(СК.¹К.³)₁-(СК.¹К.²),-К⁴ II А представляет собой простую связь;

X представляет собой водород;

Υ представляет собой водород;

Ζ представляет собой Ν;

В¹ и В² представляют собой водород;

В³ представляет собой Β⁶8(Ο)₂Ν(Β⁵)Β⁷ или Β⁶00(0)Ν (В⁵)В⁷;

В⁴ представляет собой -С(О)В⁸;

В⁵ представляет собой водород;

В⁶ представляет собой (С1-С1₂)алкил, (С₃С1₄)циклоалкил, (С₃-С1₄)циклоалкил(С1 -С₈)алкил, (С₅-С1₄)арил, (С₅-С1₄)арил(С1-С₈)алкил, (С₅С1₄)гетероарил или (С₅-С1₄)гетероарил(С1-С₈) алкил, где арил, гетероарил, циклоалкил и алкил могут быть замещены один, два или три раза одинаковыми или различными заместителями из ряда, включающего фтор, хлор, бром, циано, трифторметил, (С1-С₆)алкил, (С1-С₆)алкокси, (С1-С₆)алкиламино, ди-((С1-С₆)алкил)амино, (С₅С1₄)арил и (С₅-С1₄)гетероарил;

В⁷ представляет собой простую связь;

и равно единице;

щ равно нулю;

ί равно единице;

с, равно нулю; г равно нулю;

равно нулю;

I равно нулю;

Настоящее изобретение также относится к способам получения, с помощью которых могут быть получены соединения формулы I, и которые заключаются в осуществлении одной или нескольких стадии(ий) синтеза, описанных ниже. Соединения формулы I главным образом могут быть получены, например, в ходе конвергентного синтеза, при связывании двух или более фрагментов, которые могут быть производными обратного синтеза из формулы I. При получении соединений формулы I в ходе синтеза обычно может быть удобно или необходимо вводить в виде групп-предшественников функциональные группы, которые могут привести в соответствующей стадии синтеза к нежелательным реакциям или побочным реакциям, и которые позднее преобразуются в желаемые функциональные группы, или временно блокируют посредством защитных групп функциональные группы, стратегически подходящие для затруднения синтеза. Такие подходы широко известны специалистам в данной области (смотри, например, Сгееие апб ХУиК Рго1сс1п с бгоирз ίη Огдашс ΞνηΙοδίδ. \УИсу. 1991). В качестве примеров групп - предсшественников могут быть упомянуты нитрогруппы и цианогруппы, которые путем восстановления, например, каталитическим гидрированием, позднее преобразуются в аминогруппы и аминометильные группы, соответственно. Что касается функциональных групп в аминокислотных остатках, присутствующих в соединениях формулы I, в течение синтеза соединений формулы I в качестве защитных групп функциональных групп соответственно могут использоваться защитные группы, упомянутые в качестве примера выше.

Например, при получении соединения формулы I может использоваться защитная группа формулы IV

в которой Ь¹ является обычной замещаемой нуклеофильной удаляемой группой. Подходящие группы Ь¹ известны специалистам данной области и могут быть, например, хлором, бромом, йодом или сульфонилоксигруппой, такой как п-толуолсульфонилокси (-ОТоз), метансульфонилокси (-ОМез) или трифторметансульфонилокси (-ОТГ). предпочтительно хлором или бромом. X и Υ в соединениях формулы IV такие, как определены выше, но функциональные группы могут также необязательно присутствовать в виде групп-предшественников или могут быть защищены обычными защитными группами. Соединение формулы IV взаимодействует с защитной группой формулы V

Ь²-(СК.¹К.²)п-А-(СК.¹К.²)т-(СК¹К.³)₁-(СК.¹К.²),-К.⁴, V где К¹, К², К³, К⁴, А, и, ш, ί и с| такие, как определены выше, но где функциональные группы могут также необязательно присутствовать в виде групп-предшественников или могут быть защищены обычными защитными группами. В частности группа Я⁴ в соединении формулы V может быть группой-предшественником или защитной группой концевой группы Я⁴, которая присутствует в получаемом целевом соединении формулы I. Например, группа Я⁴, представляющая собой соединение формулы I, обозначающая гидроксикарбонил(-СООН), предпочтительно присутствует в соединении формулы V в качестве трет-бутилового эфира или метилового эфира, или этилового эфира. Группа Ь² в соединениях формулы V представляет собой гидрокси или обычную способную к замещению нуклеофильную удаляемую группу. Подходящие удаляемые группы Ь² известны специалистам в данной области и могут быть, например, хлором, бромом, йодом, -ОТО5.

-ОМс5 или -ОТЕ Из соединений формул IV и V может быть получено соединение формулы VI

где 6, X, Υ и Ь¹ такие, как определены выше, но где функциональные группы могут также необязательно быть в виде групп-предшественников или могут быть защищены обычными защитными группами. Взаимодействие соединений формулы IV и V может проводиться в соответствии со способами, известными специалистам в данной области (смотри, например, I. Матей, Асйапссс! Огдашс СйспщЦу. ЕоПй Εάίΐίοη, \νίΙον. 1992 и указанные там литературные источники). Предпочтительно, реакцию проводят в подходящем органическом растворителе или разбавителе, например, в дихлорметане (ДХМ), хлороформе, тетрагидро фуране (ТГФ), диэтиловом эфире, н-гептане, н-гексане, нпентане, циклогексане, диизопропиловом эфире, метил-трет-бутиловом эфире, ацетонитриле, диметилформамиде (ДМФ), диметилсульфоксиде (ϋΜδΟ), диоксане, толуоле, бензоле, этилацетате или смеси этих растворителей, если приемлемо, с добавлением основания, такого как, например, бутиллития, диизопропиламида лития (ЬОА), гидрида натрия, амида натрия, трет-бутоксида калия, карбоната кальция, карбоната цезия, триэтиламина, Ν,Ν-диизопропилэтиламина, или сложного основания (например, амид натрия вместе с алкоголятом Я²⁵СЖа, где

Я²⁵ представляет собой (С₂-С₆)-алкил или СН₃СН₂ОСН₂СН₂-). С соединениями формулы V, в которой Ь² представляет собой гидрокси, взаимодействие проводят после активации гидроксигруппы, например, реакцией с трифенилфосфином и диэтилазодикарбоксилатом (ОЕАЛ) в ТГФ в условиях широко известной реакции Митсунобу (МйяипоЬи).

При получении соединения формулы I, в которой Ζ представляет собой азот, соединение формулы VI далее взаимодействует с соединением формулы VI 1а

где В. г. 5 и I такие, как определены выше, но где функциональные группы могут также необязательно быть в виде групп-предшественников или могут быть защищены обычными защитными группами. Взаимодействие соединений формул VI и VI 1а может проводиться в соответствии со способами, известными специалистам в данной области (смотри, например, I. Магсй, АсКапссс! Огдашс Сйепййгу, Еойй Εάίΐίοη, XV Псу. 1992 и указанные там литературные источники). При взаимодействии соединения формулы VI с соединением формулы VI 1а способная к замещению нуклеофильная удаляемая группа одного взаимодействующего участника замещается нуклеофильным атомом азота другого взаимодействующего участника, как в случае взаимодействия соединений формул IV и V. Вышеприведенные подробности относятся к растворителям или основаниям, подходящим для взаимодействия соединений формулы IV и V, таким образом, соответственно применимым при взаимодействии соединений формул VI и VI 1а. В качестве основания при взаимодействии соединений формул VI и VI 1а также может использоваться избыточное количество соединения формулы VI 1а.

При получении соединения формулы I, в котором Ζ представляет собой СН, соединение формулы VI взаимодействует с соединением формулы VI1Ь

где В. г. 5 и I такие, как определены выше, но где функциональные группы могут также необязательно быть в виде групп-предшественников или могут быть защищены обычными защитными группами. Взаимодействие соединений формул VI и VI1Ь может проводиться в условиях реакции присоединения §й11е, как описано, например, в Ьаидй с! ай, Тс1гайсс1гоп 52 (1996) 5625 или Сипс1сг5сп. Тейийебгои Ьей. 35 (1994) 3153, или в условиях реакции присоединения Неск как описано, например, в Коуаша с!

а1., Ыискк Αοίάδ Кек., 8ушр. 8ег. 11 (1982) 41, которые включены здесь в качестве ссылки.

Взаимодействие соединения формулы VI с соединением УПа или УПЬ, соответственно, приводит к образованию соединения формулы

выше, но где функциональные группы могут также необязательно присутствовать в виде групп-предшественников или могут быть защищены обычными защитными группами. Защитные группы необязательно, кроме того, присутствуют в соединениях формулы VIII и затем удаляются обычными способами. Например, трет-бутиловые эфирные группы, особенно трет-бутиловая эфирная группа, которая представляет группу К⁴ в группе С соединения формулы УШ, и которая является защищенной формой гидроксикарбонильной группы, представленная как К⁴ в целевом соединении формулы I, может быть преобразована в группы карбоновой кислоты при обработке трифторуксусной кислотой. Бензильные группы могут быть удалены гидрированием. Флуоренилметоксикарбонильные группы могут быть удалены вторичными аминами. Если желательно, затем могут проводиться дополнительные реакции с помощью обычных методов, например, реакция ацилирования или реакция сульфонилирования аминогрупп, или реакция этерификации. Кроме того, например, заместитель X в во 2-ом положении пуриновой структуры может также быть введен в конце вышеуказанного синтеза соединений формулы I известными по существу методами, например, как описано в Э. Α. ΝιΐβίοΙ. 1. 0гц. СНет. 62 (1997) 201 или N. 8. бгау, Те1гайсбгоп Ьей. 38 (1997) 1161 и в указанных там ссылках, и заместитель Υ в 8-ом положении может быть введен способами, известными по существу, как описано, например, в Е. 1. Кек! с1 а1., 1. Огд. СНет. 33 (1968) 1600; 1. Ь. Ке11еу е! а1., 1. Мей. СНет. 33 (1990) 196 или Е. УапоШ с1 а1., Еиг. 1. СНет. 29 (1994) 287, которые все приведены здесь в качестве ссылки. Кроме того, если желательно, соединение формулы УШ или соединение, полученное из соединения формулы УШ, может быть преобразовано в физиологически приемлемую соль или пролекарство способами, известными по существу специалистам в данной области.

В синтезе соединения формулы I также возможно сначала взаимодействие соединения формулы IV с соединением формулы УПа или УПЬ, что приводит к замене группы Ь¹ в формуле IV нафтиридинилзамещенным 6-членным кольцом, и затем взаимодействию полученного промежуточного продукта с соединением формулы V.

Исходные вещества формул IV, V, УПа и УПЬ, которые связываются с получением соединений формулы I, являются коммерчески доступными или могут быть получены в соответствии со способами, описанными ниже или в литературе.

Соединения формулы I представляют собой ценные фармакологически активные соединения, которые являются подходящими, например, для терапии и профилактики костных заболеваний, опухолевых заболеваний, сердечнососудистых заболеваний или воспалительных состояний. Соединения формулы I и их физиологически приемлемые соли и их пролекарства могут вводиться животным, предпочтительно млекопитающим, и в частности, людям, в качестве фармацевтических препаратов для лечения или профилактики. Они могут вводиться самостоятельно или в смеси друг с другом или в виде фармацевтической композиции или фармацевтических препаратов, которые допускают энтеральное и парентеральное введение, и где в качестве активного вещества, кроме обычных фармацевтически приемлемых носителей и/или добавок, содержится эффективная доза, по крайней мере, одного соединения формулы I, и/или его физиологически приемлемой соли, и/или его пролекарства.

Настоящее изобретение, таким образом, также относится к соединениям формулы I, и/или их физиологически приемлемым солям, и/или их пролекарствам для использования в качестве фармацевтических препаратов, к использованию соединений формулы I и/или их физиологически приемлемых солей, и/или их пролекарств, для производства фармацевтических препаратов для терапии и профилактики болезней, упомянутых выше или ниже, например, для терапии и профилактики болезней костей, а также к использованию соединений формулы I и/или их физиологически приемлемых солей и/или их пролекарств для терапии и профилактики этих болезней и к способам такой терапии и профилактики. Настоящее изобретение, кроме того, относится к фармацевтическим соединениям (или фармацевтическим препаратам), которые содержат эффективную дозу, по крайней мере, одного соединения формулы I, и/или его физиологически приемлемых солей, и/или его пролекарств и обычный фармацевтически приемлемый носитель.

Фармацевтические препараты могут вводиться перорально, например, в виде пилюль, таблеток, лакированных таблеток, таблеток, покрытых оболочкой, гранул, твердых и мягких желатиновых капсул, растворов, сиропов, эмульсий, суспензий или аэрозольных смесей. Введение, однако, можно также проводить ректально, например, в виде свечей, или паренте рально, например, внутривенно, внутримышечно или подкожно, в виде инъекционных растворов или инфузионных растворов, микрокапсул, имплантантов или штифтов, или чрескожно или местно, например, в виде мазей, эмульсионных растворов или настоек, или другими способами, например, в виде аэрозолей или спреев для носа.

Фармацевтические композиции по изобретению получают способом, по существу, известным и хорошо знакомым специалистам в данной области, путем смешивания одного или нескольких соединения(й) формулы I, и/или его (их) физиологически приемлемых солей, и/или его (их) пролекарств с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми инертными неорганическими и/или органическими веществами носителя и/или добавками и, если желательно, с одним или несколькими дополнительными фармацевтически активными соединениями, и вводят в подходящей для введения форме и дозированной форме, которая может использоваться в терапии человека или в ветеринарии. Для получения пилюль, таблеток, таблеток, покрытых оболочкой, и твердых желатиновых капсул можно использовать, например, лактозу, кукурузный крахмал или его производные, тальк, стеариновую кислоту или ее соли и тому подобное. Носителями для мягких желатиновых капсул и свеч являются, например, жиры, воски, полутвердые и жидкие полиолы, натуральные или затвердевшие масла и тому подобное. Подходящими веществами носителя для получения растворов, например, растворов для инъекций или эмульсий или сиропов являются, например, вода, спирты, глицерин, полиолы, сахароза, инвертированный сахар, глюкоза, растительные масла и тому подобное. Подходящими носителями для микрокапсул, имплантантов или штифтов являются, например, сополимеры гликолевой кислоты и молочной кислоты. Фармацевтические композиции обычно содержат приблизительно 0,5-90% по массе соединений формулы I, и/или их физиологически приемлемых солей, и/или их пролекарств. Количество активного вещества формулы I, и/или его физиологически приемлемых солей, и/или его пролекарств в фармацевтических композициях обычно составляет от приблизительно 0,2 мг до приблизительно 500 мг, предпочтительно от приблизительно 1 мг до приблизительно 200 мг.

Дополнительно к активным веществам формулы I, и/или их физиологически приемлемым солям, и/или их пролекарствам и носителям, фармацевтические композиции могу содержать добавки (или вспомогательные вещества), такие как, например, наполнители, дезинтеграторы, связывающие агенты, смазывающие агенты, смачивающие агенты, стабилизаторы, эмульгаторы, консерванты, подсластители, вкусовые агенты, ароматизаторы, загустители, разбавители, буферные агенты, растворители, солюбилизаторы, агенты для достижения депони рующего эффекта, соли для изменения осмотического давления, покрывающие агенты или антиоксиданты. Они также могут содержать два или более соединений формулы I, и/или их физиологически приемлемых солей, и/или их пролекарства. Кроме того, дополнительно по крайней мере к одному соединению формулы, I и/или его физиологически приемлемым солям, и/или его пролекарствам, они могут также содержать один или несколько дополнительных терапевтических или профилактических активных веществ.

Соединения формулы I являются антагонистами рецептора витронектина и ингибиторами клеточной адгезии. Они обладают, например, способностью ингибировать связывание остеокластов с поверхностью кости и, таким образом, ингибируют резорбцию кости остеокластами. Действие соединений формулы I может быть продемонстрировано, например, в исследовании, определяющем ингибирование связывания изолированного рецептора витронектина или клеток, содержащих рецептор витронектина, с лигандом рецептора витронектина. Детали такого исследования приведены ниже. Соединения формулы I и их физиологически приемлемые соли и их пролекарства обычно используются в качестве антагонистов рецептора витронектина в терапии и профилактике болезней, основанных на взаимодействии между рецепторами витронектина и их лигандами в процессах взаимодействия клетка-клетка или клетка-матрикс, или на которые можно воздействовать путем ингибирования взаимодействий такого типа, или для предотвращения, облегчения или лечения для которых желательно ингибирование взаимодействий такого типа. Как объяснено в начале, такие взаимодействия принимают участие, например, в резорбции кости, в сосудообразовании или пролиферации гладкомышечных клеток сосудов. Соединения формулы I и их физиологически приемлемые соли и их пролекарства, таким образом, используются, например, для предотвращения, облегчения или лечения болезней, вызванных, по крайней мере, отчасти нежелательной степенью резорбции кости, сосудообразования или пролиферации гладкомышечных клеток сосудов.

Заболеваниями кости, для лечения и предотвращения которых могут быть использованы соединения формулы I по изобретению, особенно являются остеопороз, гиперкальцемия, в частности, например, вызванная метастазами, заболеваниями костей, гиперпаратироидизмом, околосуставными эрозиями при ревматоидном артрите и болезни Педжета. Кроме того, соединения формулы I могут использоваться для облегчения, предотвращения или лечения заболеваний кости, которые вызваны глюкокортикоидной, стероидной или кортикостероидной терапией, или дефицитом полового(ых) гормона(ов). Все эти расстройства характеризуются потерей костной массы, основанной на нарушении равновесия между образованием кости и разрушением кости, и на которое может положительно влиять ингибирование костной резорбции остеокластами. Соединения формулы I, и/или их физиологически приемлемые соли, и/или их пролекарства могут также благоприятно использоваться в качестве ингибитора резорбции кости, например, в терапии или профилактике остеопороза, в комбинации с обычным лечением остеопороза, например, в сочетании с такими средствами, как бисфосфонаты, эстрогены, эстроген/прогестерон, агонисты/антагонисты эстрогена, кальцитонин, аналоги витамина Ό, паратгормон, со средствами, усиливающими секрецию гормона роста, или фторидом натрия. Введение соединений формулы I, и/или их физиологически приемлемых солей, и/или их пролекарств и других активных компонентов, эффективных при лечении или профилактике остеопороза, подобно тем, которые перечислены ранее, может иметь место одновременно или последовательно, в любом порядке, совместно или раздельно. При использовании такого комбинированного лечения или профилактики соединения формулы I и/или их физиологически приемлемые соли и/или их пролекарства и один или несколько дополнительных активных веществ, подобно тем, которые перечислены ранее, могут вместе быть в общей фармацевтической композиции, например, в таблетках, капсулах или гранулах, или могут быть в двух или более раздельных фармацевтических композициях, которые могут быть в общем наборе или в двух или нескольких отдельных наборах. Использование соединений формулы I, и/или их физиологически приемлемых солей, и/или их пролекарств в такой комбинированной терапии или профилактике и их использование для получения фармацевтических препаратов для такой комбинированной терапии или профилактики также являются объектами настоящего изобретения. Изобретение, кроме того, относится к фармацевтическим композициям, которые включают эффективные количества, по крайней мере, одного соединения формулы I, и/или его физиологически приемлемых солей, и/или его пролекарств, по крайней мере, вместе с одним дополнительным активным веществом, эффективным при лечении или профилактике остеопороза, или при ингибировании резорбции кости, подобно тем, которые перечислены выше, вместе с обычным фармацевтически приемлемым носителем. Вышеуказанные пояснения относительно фармацевтических композиций, соответственно, относятся к фармацевтическим комбинациями таких композиций.

Кроме применения в качестве ингибиторов резорбции кости остеокластами, соединения формулы I и их физиологически приемлемые соли и их пролекарства могут использоваться, например, в качестве ингибиторов роста опухо ли и опухолевых метастазов, в качестве противовоспалительных агентов в терапии или профилактике ревматоидного артрита, в терапии псориаза, в терапии или профилактике сердечно-сосудистых заболеваний, таких как артериосклероз или рестеноз, в терапии или профилактике нефропатий или ретинопатий, таких как, например, диабетическая ретинопатия. Соединения формулы I, и/или их физиологически приемлемые соли, и/или их пролекарства в качестве ингибиторов роста опухоли или опухолевых метастазов могут также благоприятно применяться в комбинации с обычной терапией рака. Примеры терапии рака приведены в Вегбио (Ебйог), Еисус1ореб1а оГ Сапсег, Лсабетю Рге55. 1997, который включен здесь в качестве ссылки. Все вышеприведенные утверждения, касающиеся применения соединений формулы I в комбинации с обычной терапией остеопороза, такие как, например, возможные способы введения и фармацевтические комбинированные композиции, соответственно, относятся к применению соединений формулы I в комбинации с обычной терапией рака.

При использовании соединений формулы I, доза может изменяться в широких пределах и, как это принято, должна быть подходящей для индивидуального состояния в каждом отдельном случае. Оно зависит, например, от используемого соединения, от природы и тяжести заболевания, которое лечат, или от того, острое или хроническое состояние подвергается лечению, или от того, проводилась ли профилактика. В случае перорального приема суточная доза обычно составляет от около 0,01 до около 100 мг/кг, предпочтительно от около 0,1 до около 50 мг/кг, в частности от около 0,1 до около 5 мг/кг, достигая эффективных результатов у взрослых весом приблизительно 75 кг (в каждом случае мг на кг массы тела). Также в случае внутривенного введения суточная доза обычно составляет от около 0,01 до около 100 мг/кг, предпочтительно от около 0,05 до около 10 мг/кг (в каждом случае мг на кг массы тела). Суточная доза может быть разделена, в частности, в случае введения относительно больших количеств, на несколько, например 2, 3 или 4, вводимых частей. Обычно в зависимости от индивидуальной реакции, может быть необходимо отклониться от суточной дозы в сторону увеличения или уменьшения.

Кроме использования в качестве фармацевтически активных веществ, соединения формулы I могут также использоваться в качестве переносчиков или носителей других активных веществ, для того, чтобы надлежащим образом специфически транспортировать активное вещество к месту действия (= лекарственное прицеливание; смотри, например, Тагде1еб Эгид Оекуегу, В. С. 1и11аио, НаибЬоок οί ЕхребтеиЫ Рйагтасо1оду, Уо1. 100, Еб. Вот, Ο. V. В. Е1 а1., 8ргшдег Vе^1ад, которое включено здесь в каче стве ссылки). Активными веществами для транспортировки в частности являются те, которые могут использоваться для лечения вышеуказанных болезней.

Соединения формулы I и их соли могут, кроме того, использоваться для диагностических целей, например, в диагностике ίη νίίτο, и в качестве вспомогательных веществ в биохимических исследованиях, в которых желательно ингибирование рецептора витронектина или влияние на взаимодействия клетка-клетка или клетка-матрикс. Они могут, кроме того, использоваться в качестве промежуточных соединений для получения других соединений, в частности, других фармацевтически активных веществ, которые можно получить из соединений формулы I, например, при введении заместителей или изменении функциональных групп.

Примеры

Пример 1. (28)-2-Бензилоксикарбониламино-3-(6-(4-(5,6,7,8-тетрагидро-[1,8]нафтиридин-2-ил)-пиперидин-1 -ил)пурин-9-ил)-пропио-

a) трет-Бутиловый эфир 4-([1,8] нафтиридин-2-ил)пиперидин-1 -карбоновой кислоты.

3,14 г 1-трет-бутоксикарбонил-4-ацетилпиперидина и 1,83 г 2-амино-3-формилпиридина кипятили с обратным холодильником вместе с 0,25 г Ь-пролина в н-бутаноле в течение 72

ч. После удаления растворителя под вакуумом остаток объединяли с остатком, полученным в идентичной реакции, и хроматографировали на силикагеле с этилацетатом/н-гептаном (1:1) с получением 1,08 г соединения, указанного в заголовке.

b) Трет-бутиловый эфир 4-(5,6,7,8тетрагидро-[ 1,8] -нафтиридин-2-ил)пиперидин-1 карбоновой кислоты.

0,52 г соединения со стадии а) растворяли в 25 мл этилацетата и добавляли 0,11 г 10% палладия на угле в атмосфере инертного газа. При температуре окружающий среды, перемешивая, проводили гидрирование до тех пор, пока тонкослойная хроматография больше не обнаруживала исходного продукта. Осторожно удаляли катализатор и дважды промывали этилацетатом. Объединенные растворы опять фильтровали и в вакууме удаляли растворители. Выход: 0,46 г.

c) 7-(Пиперидин-4-ил)-1,2,3,4-тетрагидро[1,8] нафтиридин.

0,157 г соединения со стадии Ь) растворяли в 5 мл метиленхлорида и при перемешивании добавляли 1 мл трифторуксусной кислоты. Перемешивание продолжали в течение 2,5 ч при комнатной температуре. После удаления растворителей в вакууме масляный остаток растирали в порошок с диэтиловым эфиром. Выход:

0,145 г бесцветного некристаллического твердого соединения.

ά) Трет-бутиловый эфир (28)-2-бензилоксикарбониламино-3-(6-(4-(5,6,7,8-тетрагидро-[ 1,8]нафтиридин-2-ил)пиперидин-1 -ил) пурин-9-ил)пропионовой кислоты.

0,44 г соединения со стадии с) растворяли в 5 мл безводного диметилформамида. Добавляли 0,7 мл Ν,Ν-диизопропилэтиламина вместе с 0,58 г трет-бутилового эфира (8)-2-бензилоксикарбониламино-3-(6-хлорпурин-9-ил)пропионовой кислоты и смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение ночи. Контрольная тонкослойная хроматография показала только незавершенную реакцию. Перемешивание поэтому продолжали в течение 6 ч при 40°С до тех пор, пока реакция не проходила полностью. Растворитель удаляли в вакууме и остаток растворяли в дихлорметане и дважды промывали водой, органическую фазу сушили над безводным сульфатом магния и после фильтрации концентрировали в вакууме. Сырой продукт хроматографировали на силикагели с этилацетатом/метанолом (1:10). Выход: 224 мг.

Трет-бутиловый эфир (28)-2-бензилоксикарбониламино-3-(6-хлорпурин-9-ил)пропионовой кислоты может быть получен из 6-хлорпурина и трет-бутилового эфира Ν-бензилоксикарбонил-Ь-серина в присутствии трифенилфосфина и диэтилазодикарбоксилата в соответствии со способом, описанным в европейском патенте А-853084, который включен здесь в качестве ссылки.

е) (28)-2 -Бензилоксикарбониламино-3-(6(4-(5,6,7,8-тетрагидро-[1,8]нафтиридин-2-ил)пиперидин-1 -ил)пурин-9-ил)пропионовая кислота.

219 мг соединения со стадии ά) растворяли в 12 мл дихлорметана и при перемешивании добавляли 2 мл трифторуксусной кислоты при температуре окружающей среды. Через 6 ч реакция проходила полностью. Растворители удаляли в вакууме. Остаток смешивали с толуолом и эту смесь снова упаривали. Полученный полимер растирали в порошок с диэтиловым эфиром. После фильтрации выделяли 210 мг бледно-желтого твердого вещества. МС (Е8⁺): ш/е = 557,2 (М+Н)⁺.

Пример 2. (28)-2-Бензолсульфониламино3-(6-(4-(5,6,7,8-тетрагидро-[1,8]нафтиридин-2ил)пиперидин-1 -ил)пурин-9-ил)пропионовая

а) Трет-бутиловый эфир (28)-2-амино-3-(6(4-(5,6,7,8-тетрагидро-[1,8]нафтиридин-2-ил) пиперидин-1 -ил)пурин-9-ил)пропионовой кислоты.

878 мг соединения со стадии ά) примера 1 растворяли в 50 мл метанола и 0,4 мл уксусной кислоты. В атмосфере азота осторожно добавляли 350 мг 10% палладия на угле и проводили гидрирование при взбалтывании реакционного сосуда. Через 5 ч реакция проходила полностью. После фильтрации катализатора удаляли растворители. Выход: 680 мг полимерного вещества. МС (Е8⁺): ш/е = 479,3 (М+Н)⁺.

b) Трет-бутиловый эфир (28)-2-бензолсульфониламино-3-(6-(4-(5,6,7,8-тетрагидро[1,8] нафтиридин-2-ил)пиперидин-1 -ил)пурин-9ил)пропионовой кислоты.

135 мг соединения со стадии а) растворяли в 2,2 мл диметилформамида и добавляли раствор 44,2 мг бензолсульфонилхлорида в 1,5 мл диметилформамида. Реакция проходила полностью после перемешивания в течение ночи. Растворитель удаляли в вакууме, остаток растворяли в дихлорметане и промывали водой, 10% водным раствором бикарбоната натрия и опять водой. После просушки органической фазы над безводным сульфатом магния и фильтрации, растворитель удаляли в вакууме и остаток хроматографировали на силикагеле с этилацетатом. Фракции, содержащие соединение, указанное в заголовке, объединяли и упаривали. Выход: 38 мг. МС (Е8⁺): ш/е = 619,2 (М+Н)⁺.

c) (28)-2-Бензолсульфониламино-3-(6-(4(5,6,7,8-тетрагидро-[1,8]нафтиридин-2-ил)пиперидин-1 -ил)пурин-9-ил)пропионовая кислота.

мг соединения со стадии Ь) растворяли в 1,5 мл дихлорметана и добавляли 1,5 мл трифторуксусной кислоты. После перемешивания в течение 5 ч при температуре окружающей среды добавляли дополнительные 0,1 мл трифторуксусной кислоты и перемешивание продолжали в течение дополнительных 1,5 ч. Растворители удаляли в вакууме, остаток растворяли в уксусной кислоте и растворитель снова удаляли в вакууме. Оставшийся полимер растирали в порошок с диэтиловым эфиром и продукт выделяли фильтрацией. Выход: 29 мг. МС (Е8): ш/е = 563,1 (М+Н)⁺.

Аналогично способу, описанному в примере 2, получали соединения примеров 3-6.

Пример 3. (28)-2-(4-Хлорбензолсульфониламино)-3-(6-(4-(5,6,7,8-тетрагидро-[1,8]нафтиридин-2-ил)пиперидин-1 -ил)пурин-9-ил)про-

Из 135 мг соединения стадии а) примера 2 и 52,8 мг 4-хлорбензолсульфонилхлорида получали 45 мг соединения, указанного в заголовке. МС (Е8⁺): ш/е = 597,1 и 599,1 (М+Н)⁺.

Пример 4. (28)-2-(Нафталин-1-сульфониламино)-3-(6-(4-(5,6,7,8-тетрагидро-[1,8]нафтиридин-2-ил)пиперидин-1 -ил)пурин-9-ил)пропионовая кислота.

Из 135 мг соединения стадии а) примера 2 и 56,7 мг нафталин-1-сульфонилхлорида получали 74 мг соединения, указанного в заголовке. МС (Е8⁺): ш/е = 613,1 (М+Н)⁺.

Пример 5. (28)-3-(6-(4-(5,6,7,8-тетрагидро[ 1,8]нафтиридин-2-ил)пиперидин-1 -ил)пурин-9ил)-2-(4-трифторметилбензолсульфониламино) пропионовая кислота.

Из 135 мг соединения стадии а) примера 2 и 61,2 мг 4-трифторметилбензолсульфонилхлорида получали 11,4 мг соединения, указанного в заголовке. МС (БАВ): ш/е = 631,1 (М+Н)⁺.

Пример 6. (28)-2-(Бутан-1-сульфониламино)-3-(6-(4-(5,6,7,8-тетрагидро-[1,8]нафтиридин-2-ил)пиперидин-1-ил)пурин-9-ил)пропио-

Из 135 мг соединения со стадии а) примера 2 и 21 мг бутан-1-сульфонилхлорида получали 13 мг соединения, указанного в заголовке. МС (Е8⁺): ш/е = 543,2 (М+Н)⁺.

Фармакологическое исследование

1) Исследование связывания кистрина.

Ингибирование связывания кистрина с рецептором витронектина человека (УпК.), описанное ниже, представляет собой способ, в котором может быть определено антагонистическое действие соединений изобретения на рецептор витронектина α,β₃ (а, Рз ЕБ18А исследование; в перечислении результатов исследования способ исследования обозначен аббревиатурой «К/УпК.»).

Очистка кистрина

Кистрин очищали в соответствии со способами Οεηηίδ с1 а1., как описано Ргос. №И. Асаб. 8с1, США 87(1989)2471 и РгсИспъ: 8!шсШгс. Рцисбои апб Сеиебск 15 (1993) 312.

Очистка рецептора витронектина человека (Ονβ₃)

Рецептор витронектина человека получали из плаценты человека в соответствии со способами Ру1е1а с1 а1., Мебюбк ΕηζνιηοΙ. 144(1987)475. Рецептор витронектина человека а, Рз может быть также получен из некоторых клеточных линий (например, из линии клеток 2 93, линии эмбриональных клеток почки человека), которые со-трансфицируют последователь ностью кДНК как так и β₃ субъединиц рецептора витронектина. Субъединицы экстрагируют октилгликозидом и затем хроматографируют на колонке с конканавалином А, гепаринсефарозой и 8-300.

Моноклональные антитела

Мышиные моноклональные антитела, специфичные для β₃ субъединиц рецептора витронектина, получают в соответствии со способом №с\ушап с! а1., В1ооб, 1985, 227 или подобными способами. Кроличьи ЕаЬ 2 анти-мышиные Ес, связанные с пероксидазой хрена (анти-мышь Ес НКР), получили от Ре1 Егссхс (Са!а1од Νο. 715 305-1).

ЕЫ8Л исследование

Способность веществ ингибировать связывание кистрина и рецептора витронектина может быть определена с использованием ЕЫ8Л метода. Для этой цели 96-луночную микроплашку №шс покрывали раствором кистрина (0,002 мг/мл) в соответствии со способом Эспик с! а1., как описано в РгсИспъ: 81гис1игс. Еипсбоп апб бспсбск 15(1993)312. Плашки затем промывали дважды РВ8/0,05% Т\уссп-20 и блокировали инкубацией (60 мин) с альбумином бычьей сыворотки (В8А, 0,5%, ША марка или лучше) в буферном растворе (Тгк-НС1 (50 мМ), №101 (100 мМ), М§С1₂ (1 мМ), СаС1₂ (1 мМ), МпС1₂ (1 мМ), рН 7). Растворы известных ингибиторов и исследуемые вещества получали с концентрацией от 2 х 10^-12 до 2 х 10^-6 моль/л в буфере образцов (В8А (0,5%, ША марка или лучше); Тгк- НС1 (50 мМ), №аС1 (100 мМ), М§С12 (1 мМ) СаС12 (1 мМ), МпС12 (1 мМ), рН 7). Блокированные плашки освобождали и для каждого случая в каждую плашку добавляли 0,025 мл этого раствора, содержащего определенную концентрацию (2 х 10^-12 - 2 х 10^-6 моль/л) либо известного ингибитора, либо исследуемого вещества. В каждую лунку плашки пипетировали 0,025 мл раствора рецептора витронектина в буфере образцов (0,03 мг/мл) и плашки инкубировали при комнатной температуре в течение 60-180 мин на шейкере. Тем временем, готовили раствор (6 мл/плашку) мышиных моноклональных антител, специфических для β3 субъединиц рецептора витронектина в буфере образцов (0,0015 мг/мл). К этому раствору добавляли вторые кроличьи антитела (0,001 мл основного раствора/6 мл раствора мышиных моноклональных анти-в₃ антител), которые представляют собой анти-мышиные Ес антитела, связанные с НКР, и эту смесь мышиных анти-в₃ антител и кроличьих анти-мышиных Ес антител, связанных с НКР, культивировали в течение времени инкубации ингибитор-рецептор. Исследуемую плашку промывали четыре раза раствором РВ8, который содержал 0,05% Т\уссп-20 и пипетировали для каждого случая в каждую лунку 0,05 мл/лунку смеси антител и культивировали в течение 60-180 мин. Плашку промывали четыре раза РВ8/0,05% Т\уссп-20 и затем обрабатывали 0,05 мл/лунку раствором РВ8, содержащим 0,67 мг/мл о-фенилендиамина и 0,012% Н₂О₂. Альтернативно, о-фенилендиамин может использоваться в буфере (рН 5), содержащем №-ьРО₄ и лимонную кислоту. Появление цвета означает прекращение использования 1н. Н₂8О₄ (0,05 мл/плашку). Поглощение каждой лунки измерялось при 492-405 нм и данные оценивались стандартными способами.

2) Исследование витронектин/клетки 293.

В этом исследовании определяется ингибирование связывания клеток 293 и витронектина человека (Уп) соединениями изобретения (метод исследования в перечисляемых результатах исследования имеет аббревеатуру исследование Уп/клеток 293).

Очистка витронектина человека

Человеческий витронектин выделяли из плазмы крови человека и очищали аффинной хроматографией в соответствии со способом Уа1о1що с! а1., Сс11 81гпс1пгс апб Еипсбоп 23 (1988) 281.

Исследование клеток

Клетки 293, линия зародышевых клеток почки человека, со-трансфицированные ДНК последовательностями субъединиц α_ν и β₃ рецептора витронектина α_νβ₃, отбирали по высокому уровню экспрессии (>500000 α_νβ₃ рецепторов/клетку) в соответствии со способом ЕАС8. Отобранные клетки культурировали и снова отбирали с помощью ЕАС8 с целью получения стабильной клеточной линии (15 Ό) с уровнем экспрессии > 1000000 копии α_νβ₃ на клетку.

96-Луночную плашку для тканевой культуры ЬшЬго с плоским дном покрывали витронектином человека в течение ночи при 4°С (0,01 мг/мл, 0,05 мл/лунку) в фосфатно-буферном физиологическом растворе (РВ8) и затем блокировали 0,5% В8А (альбумин бычьей сыворотки). Растворы исследуемых соединений получали в концентрации от 10^-10 моль/л до 2 х 10^-3моль/л в среде ΌΜΞΜ и для каждого случая добавляли в лунку 0,05 мл/лунку. Клетки, экспрессирующие высокие уровни α_νβ₃ (например, 15 Ό), суспендировали в среде ЭМЕМ, содержащей глюкозу, и суспензию разводили средой до содержания 25000 клеток/0,05 мл. 0,05 мл этой клеточной суспензии добавляли к каждой лунке и плашку инкубировали при 37°С в течение 90 мин. Плашку промывали 3 раза теплым РВ8 для удаления несвязавшихся клеток. Связанные клетки лизировали в цитратном буфере (25 мМ, рН 5,0), который содержал 0,25% Тгбоп Х-100. Затем добавляли гексозамидазный субстрат п-нитро фенил-№-ацетил-α-Ό- глюкозаминид и плашку культивировали при 37°С в течение 90 мин. Реакцию останавливали глицином (50 мМ)/буфером ЕЭТА (5 мм, рН 10,4) и поглощение каждой лунки измеряли при 405-650 нм. Данные анализировали в соответствии со стандартными способами.

3) Исследование изъязвлений.

Ингибирование резорбции кости соединениями изобретения может быть определено, например, при помощи исследования резорбции остеокластами («исследование изъязвлений»), например, аналогичный \УО-А-95/32710. который приведен здесь в качестве ссылки.

Были получены следующие результаты исследования (ингибиторные концентрации 1С50).

Соединение	ΚΛ/ηΚ 1С_М (нМ)	Исследование νη/клетка 293 1С₅0 (нМ)	Исследование изъязвлений Юи (нМ)
Пример 1	10	78
Пример 2	4,8	23
Пример 3	5,1	15	0.3
Пример 4	6,4	24	< 10
Пример 5	5	22
Пример 6	18	115

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Claims

1. Соединение формулы I где О представляет собой остаток формулы II

-(СВ¹ К² У,-А-(С И¹ К²)Ш-(СК¹ В’НСВ¹ В²)а-В⁴, II

А представляет собой простую связь;

X представляет собой водород;

Υ представляет собой водород;

Ζ представляет собой Ν;

В¹ и В² представляют водород, (С1-С4) алкил, Β⁶8(Ο)₂ΝΗΒ⁷ или В⁶ОС(О)ИНВ⁷, где все группы В¹ и В² независимы друг от друга и могут быть одинаковыми или различными;

В³ представляет собой водород, (С1-С12) алкил, (С3-С14)циклоалкил, (С3-С14)циклоалкил (С1-С6)алкил, (С5-С14)арил, (С5-С14)арил(С1-С6) алкил, (С5-С14)гетероарил, (С5-С14)гетероарил (С1-Сб)алкил, Β^'Ν-Β⁷, Β⁶8(Ο)2Ν(Β⁵)Β⁷,

Β⁶00(0)Ν(Β⁵)Β⁷ или Β⁶0(0)Ν(Β⁵)Β⁷, где алкил может быть мононенасыщенным или полиненасыщенным и где алкил, циклоалкил, арил и гетероарил могут быть монозамещены или полизамещены В⁶, фтором, хлором, трифторметилом, В⁶С(О)В⁷ или В⁶-О-В⁷;

В⁴ представляет собой -С(О)В⁸;

В⁶ и В⁶’ представляют собой водород, (С1С1₂)алкил, (С₃-С1₄)циклоалкил, (С₃-С1₄)циклоалкил(С1-С₈)алкил, (С₅-С1₄)арил, (С₅-С1₄)арил (С1-С₈)алкил, (С₅-С1₄)гетероарил или (С5-С14) гетероарил(С1-С₈)алкил, где арил, гетероарил, циклоалкил и алкил могут быть замещены один, два или три раза одинаковыми или различными заместителями из ряда, включающего фтор, хлор, бром, циано, трифторметил, (С1-С₆)алкил, (С1-С₆)алкокси, (С1-С₆)алкиламино, ди-((С1-С₆) алкил)амино, (С₅-С1₄)арил и (С₅-С1₄)гетероарил и где все группы В⁶ и В⁶' независимы друг от друга и могут быть одинаковыми или различными;

В⁷ представляет собой простую связь;

В⁸ представляет собой гидрокси или (С1С₄)алкокси;

и равно нулю, единице или двум;

8 равно нулю, единице или двум;

ΐ равно нулю;

2. Соединение формулы I по π. 1, где

С представляет собой остаток формулы II -(ск.¹ к^п-а-сск¹ ιΑμ-ίΟΐι к'^-гск¹ κη,,-κ'. п

А представляет собой простую связь;

X представляет собой водород;

Υ представляет собой водород;

Ζ представляет собой Ν;

В³ представляет собой Κ/Β⁶'Ν-Ε. Β⁶8(Ο)₂Ν(Β⁵)Β⁷, Β⁶00(0)Ν(Β⁵)Β⁷ или

Β⁶0(0)Ν(Β⁵)Β⁷;

В⁴ представляет собой -С(О)В⁸;

В⁶ и В⁶' представляют собой водород, (С1С1₂)алкил, (С₃-С1₄)циклоалкил, (С₃-С1₄) циклоалкил(С1-С₈)алкил, (С₅-С1₄)арил, (С₅-С1₄)арил(С1-С₈)алкил, (С₅-С1₄)гетероарил или (С5-С14) гетероарил(С1-С₈)алкил, где арил, гетероарил, циклоалкил и алкил могут быть замещены один, два или три раза одинаковыми или различными заместителями из ряда, включающего фтор, хлор, бром, циано, трифторметил, (С1-С₆)алкил, (С1-С₆)алкокси, (С1-С₆)алкиламино, ди-((С1-С₆) алкил)амино, (С₅-С1₄)арил и (С₅-С1₄)гетероарил, и где все группы В⁶ и В⁶' независимы друг от друга и могут быть одинаковыми или различными;

В⁷ представляет собой простую связь;

и равно нулю, единице или двум;

8 равно нулю;

1 равно нулю;

3. Соединение формулы I по п.1 или 2, где

С представляет собой остаток формулы II -(СК.¹К.²)п-А-(СК.¹К.²)т-(СК.¹К.³)₁-(СК.¹К.²),-К⁴, II

А представляет собой простую связь;

X представляет собой водород;

Υ представляет собой водород;

Ζ представляет собой Ν;

К¹ и К² представляют собой водород;

К³ представляет собой Κ⁶8(Ο)₂Ν(Κ⁵)Κ⁷ или Я⁶ОС(О)Х(Я⁵)Я⁷;

К⁴ представляет собой -С(О)Я⁸;

К⁵ представляет собой водород;

К⁶ представляет собой (С1-С1₂)алкил, (С₃С1₄)циклоалкил, (С₃-С1₄)циклоалкил(С1 -С₈)алкил, (С₅-С1₄)арил, (С₅-С1₄)арил(С1-С₈)алкил, (С₅С1₄)гетероарил или (С₅-С1₄)гетероарил(С1-С₈) алкил, где арил, гетероарил, циклоалкил и алкил могут быть замещены один, два или три раза одинаковыми или различными заместителями из ряда, включающего фтор, хлор, бром, циано, трифторметил, (С1-С₆)алкил, (С1-С₆)алкокси, (С1-С₆)алкиламино, ди-((С1-С₆)алкил)амино, (С₅С1₄)арил и (С₅-С1₄)гетероарил;

Я⁷ представляет собой простую связь;

Я⁸ представляет собой гидрокси или (С1С₄)алкокси;

и равно единице;

щ равно нулю;

ί равно единице;

с, равно нулю;

г равно нулю;

§ равно нулю;

1 равно нулю;

4. Способ получения соединения по любо му из пи. 1-3, включающий взаимодействие соединений формулы VI с соединением формулы УПа или с соединением формулы УПЬ

УПа

УПЬ где Ь¹ представляет собой удаляемую группу и В, С, X, Υ, г, 8 и 1 такие, как определены в пп.13, но где функциональные группы также могут быть представлены в форме групп-предшественников или в защищенной форме.

5. Фармацевтическая композиция, содержащая по крайней мере одно соединение формулы I по любому из пи. 1-3, и/или его физиологически приемлемые соли, и/или его пролекарства и фармацевтически приемлемый носитель.

6. Применение соединения формулы I по любому из пи. 1-3, и/или его физиологически приемлемой соли, и/или его пролекарства в качестве антагониста рецептора витронектина.

7. Применение соединения формулы I по любому из пи. 1-3, и/или его физиологически приемлемой соли, и/или его пролекарства в качестве ингибитора резорбции кости в терапии или профилактике остеопороза, в качестве ингибитора роста опухоли или метастазов опухоли, в качестве противовоспалительного агента в терапии или профилактике сердечно-сосудистых заболеваний, рестенозов, артериосклероза, нефропатий, ретинопатий, псориаза или ревматоидного артрита.