EA002410B1

EA002410B1 - Фармацевтически активный морфолинол

Info

Publication number: EA002410B1
Application number: EA200000691A
Authority: EA
Inventors: Филлип Фредерик Морган; Дейвид Ли Массо; Джон Джозеф Партридж
Original assignee: Глаксо Груп Лимитед
Priority date: 1998-01-21
Filing date: 1999-01-20
Publication date: 2002-04-25
Also published as: NZ529316A; KR100568063B1; DE69936335T2; US20020019396A1; IS5568A; KR20010034285A; PT1047428E; HUP0100900A3; EP1047428B1; EP1047428A1; YU67102A; AU2328099A; BR9907203A; CN1255389C; EP1047428A4; DK1047428T3; NO20003721D0; TR200002126T2; CY1106828T1; EP1829544A1

Abstract

Описано соединение (+)-(2S,3S)-2-(3-хлорофенил)-3,5,5-триметил-2-морфолинол и его фармацевтически приемлемые соли и сольваты, фармацевтические композиции, содержащие их; также описан способ лечения депрессии, гиперактивности при дефиците внимания (ГАДВ), ожирения, мигрени, боли, половой дисфункции, болезни Паркинсона, болезни Альцгеймера, зависимости от кокаина или никотинсодержащих продуктов (особенно табака) с применением этого соединения, солей сольватов или композиций.

Description

Настоящее изобретение относится к оптически чистому морфолинолу, его солям и сольватам, к содержащим их фармацевтическим препаратам и к способам их получения и применения.

Предпосылки изобретения

Бупропиона гидрохлорид, (±)-1-(3хлорофенил)-2-[( 1,1 -диметилэтил)-амино]-1 пропанона гидрохлорид, является активным ингредиентом Ше11Ьи1пп'\ который имеется в продаже в США для лечения депрессии. Он также является активным ингредиентом 2уЬап®, который имеется в продаже в США как средство, помогающее для прекращения курения. Бупропион является относительно слабым ингибитором нейронального захвата норадреналина (НА), серотонина и дофамина (ДА) и не ингибирует моноаминооксидазу. Хотя механизм действия бупропиона, как и других антидепрессантов, неизвестен, предполагают, что это действие опосредуется норадренергическим и/или дофаминергическим механизмами. Имеющиеся данные свидетельствуют о том, что Ше11Ьи1пп® является селективным ингибитором норадреналина (НА) в дозах, которые предсказуемы для антидепрессантной активности на животных моделях (смотри Азсйег, БА., е! а1., Виргорюп: А Кеу1е^ о£ ΐΐδ Месйашзш о£ АпБбергеззап! АсБуйу. 1оигпа1 о£ СИшса1 Р8усЫа1гу, 56: р. 395-401, 1995).

Бупропион НС1

Бупропион экстенсивно метаболизируется как у человека, так и у лабораторных животных. Метаболиты мочи и плазмы включают в себя продукты биотрансформации, образованные посредством гидроксилирования третбутильной группы и/или восстановления карбонильной группы бупропиона. Были идентифицированы четыре основных метаболита. Они представляют собой эритро- и треоаминоспирты бупропиона, эритроаминодиол бупропиона и морфолинольный метаболит. Эти метаболиты бупропиона являются фармакологически активными, но их действие и токсичность по сравнению с бупропионом еще полностью не охарактеризованы. Поскольку концентрации метаболитов в плазме являются более высокими по сравнению с концентрациями бупропиона, то они могут иметь клиническое значение.

Считают, что морфолинольный метаболит (+/-)-(2К*,3К*)-2-(3-хлорофенил)-3,5,5-триметил-2-морфолинола гидрохлорид образуется посредством гидроксилирования третбутильной группы бупропиона.

Морфолинольный метаболит бупропиона НС1

В Вюшеб. Сйгоша1о§г. (1997), 11(3), 174179 (8иско^, К.Б., е! а1.) описаны как разделение и количественное определение индивидуальных энантиомеров (+/-)-(2К8,3К8) рацемического морфолинольного метаболита, так и тот факт, что образцы плазмы содержат (-)-энантиомер в количестве приблизительно до 96% от совокупного метаболита. Однако информация относительно фармакологических характеристик каждого энантиомера и его дальнейшей клинической значимости отсутствует.

Краткое изложение сущности изобретения

В настоящее время неожиданно было обнаружено, что несмотря на значительное преобладание в образцах плазмы человека (-) формы морфолинольного метаболита, существует (+) энантиомер, (+)-(28,38)-2-(3-хлорофенил)-3,5,5триметил-2-морфолинол, у которого присутствует активность.

Таким образом, настоящее изобретение предлагает в одном аспекте фармацевтически приемлемые соли и сольваты соединения формулы (I), (+)-(28,38)-2-(3-хлорофенил)-3,5,5триметил-2-морфолинола. (+)-энантиомер

Такие фармацевтически приемлемые соли включают в себя соли, полученные из следующих кислот: соляной, бромисто-водородной, серной, азотной, фосфорной, салициловой, птолуолсульфоновой, винной, лимонной, метансульфоновой, малеиновой, муравьиной, малоновой, янтарной, изетионовой, лактобионовой, нафталин-2-сульфоновой, сульфаминовой, этансульфоновой и бензолсульфоновой, но не ограничиваются ими. Особенно предпочтительной является соль гидрохлорид соединения формулы (I).

Другим аспектом настоящего изобретения являются фармацевтические композиции, содержащие соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемые соли и сольваты вместе с одним или более чем одним фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или эксципиентом.

Дополнительным аспектом настоящего изобретения является применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемых солей и сольватов в терапии.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложены способы лечения депрессии, гиперактивности при дефиците внимания (ГАДВ), ожирения, мигрени, боли, сексуальной дисфункции, болезни Паркинсона, болезни Альцгеймера или зависимости от кокаина или никотинсодержащих продуктов (особенно табака) у субъекта - человека или животного, при котором указанному субъекту вводят эффективное количество соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемых солей и сольватов или их фармацевтических композиций.

Еще одним аспектом настоящего изобретения является применение соединения формулы (I), или его фармацевтически приемлемых солей и сольватов, или их фармацевтических композиций в приготовлении лекарства для лечения депрессии, гиперактивности при дефиците внимания (ГАДВ), ожирения, мигрени, боли, сексуальной дисфункции, болезни Паркинсона, болезни Альцгеймера или зависимости от кокаина или никотинсодержащих продуктов (особенно табака).

Описание графических материалов

Фиг. 1. - действие соединений при 25 мг/кг (в.б.) на ТБЗ-индуцированную депрессию;

фиг. 2 - эффект дозы соединения формулы I против ТБЗ-индуцированной депрессии (соединения вводили за 30 мин до ТБЗ самцам С'Б-

I мышей в.б., η = 6);

фиг. 3. - эффект дозы соединения формулы

II против ТБЗ-индуцированной депрессии (соединения вводили за 30 мин до ТБЗ самцам СБ1 мышей в.б., η = 6).

Детальное описание изобретения

Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемые соли и сольваты можно получить сначала синтезом рацемата морфолинольного метаболита бупропиона и затем разделением (+) и (-) энантиомеров рацемата с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Рацемат морфолинольного метаболита гидрохлорида бупропиона ((+/-)-(2К*,3К*)-2-(3хлорофенил) -3,5,5-триметил-2 -морфолинола гидрохлорид) можно синтезировать следующим способом. К З'-хлоропропиофенону (10,0 г, 0,06 моль) в диоксане (50 мл) добавляли раствор диоксана дибромида (14,9 г, 0,06 моль) в диоксане (50 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при температуре окружающей среды и выливали в смесь льда и воды (500 мл). Смесь несколько раз экстрагировали метиленхлоридом. Объединенные экстракты высушивали (Ыа₂§0₄) и концентрировали под вакуумом, получая 14,8 г (85%) 2-бромо-3'-хлоропропиофенона в виде бледно-желтого масла. Его используют без дальнейшей очистки. ЯМР (300 Мгц, СБС1₃); δ 7,99 (т, 1Н), 7,90 (б, 1Н), 7,57 (б, 1Н), 7,44 (ΐ, 1 Н), 5,22 (μ, 1Н), 1,91 (ΐ, 3Н).

К раствору 2-бромо-3'-хлоропропиофенона (19,3 г, 0,08 моль) в МеОН (100 мл) добавляли по каплям раствор 2-амино-2-метил-1 пропанола (27,8 г, 0,31 моль) в метаноле (200 мл) при температуре окружающей среды. Смесь перемешивали в течение 18 ч и концентрировали под вакуумом. Остаток разделяли между водой и диэтиловым эфиром. Объединенную органическую фазу экстрагировали 10%-ным водным хлористым водородом. Объединенные водные кислые экстракты охлаждали в ледяной бане и осуществляли их подщелачивание с помощью 40%-го водного гидроксида натрия. Смесь экстрагировали диэтиловым эфиром, объединенные экстракты в диэтиловом эфире промывали водой и насыщенным раствором хлорида натрия, высушивали (К₂СО₃) и концентрировали под вакуумом, получая 15,0 г (75%) (+/-)-(2К*,3К*)-2-(3-хлорофенил)-3,5,5-триме тил-2-морфолинола в виде беловатого твердого вещества.

(+/-)-(2К*,3К*)-2-(3-хлорофенил)-3,5,5триметил-2-морфолинол можно превратить в (+/-)-(2К*,3К*)-2-(3-хлорофенил)-3,5,5триметил-2-морфолинола гидрохлорид следующим способом. Образец в 6,0 г растворяли в диэтиловом эфире, охлаждали в ледяной бане и добавляли эфирный хлористый водород до тех пор, пока смесь не становится кислой. Полученную твердую фазу отфильтровывали и перекристаллизовывали из смесей этанол/диэтиловый эфир/эфирный хлористый водород, получая 4,93 г (+/-)-(2К*,3К*)-2-(3-хлорофенил)-3,5,5-триметил-2-морфолинола гидрохлорида в виде белого твердого вещества: т.пл. 202-203°С. ЯМР (80 Мгц, ДМСО-б₆); δ 10,9 (шир., 1Н), 8,85 (шир., 1Н), 7,60-7,41 (т, 5Н), 4,04 (б, 1Н), 3,50 (б, 1Н),

3,37 (шир. к, 1Н), 1,58 (к, 3Н), 1,34 (к, 3Н), 1,03 (б, 3Н). Анал. рассчит. для С1₃Н₁₉С1₂Х0₂: С, 53,43; Н, 6,55; Ν, 4,79. Обнаружено: С, 53,54; Н, 6,58; Ν, 4,75.

(+/-)-(2К*,3К*)-2-(3-хлорофенил)-3,5,5триметил-2-морфолинола гидрохлорид можно превратить обратно в его свободное основание следующим способом. Образец в 3,0 г (+/-)(2К*,3К*)-2-(3-хлорофенил)-3,5,5-триметил-2морфолинола гидрохлорида растворяли в воде (100 мл) и добавляли диэтиловый эфир (200 мл). Смесь охлаждали в ледяной бане и доводили рН до значения выше 10 с помощью 1,0 Ν водного гидроксида натрия. После перемешивания в течение 30 мин фазы разделяли и водную фазу экстрагировали диэтиловым эфиром. Объединенные экстракты в диэтиловом эфире высушивали (Ν;·ι₂80.·ι) и концентрировали под вакуумом, получая 2,6 г (+/-)-(2К*,3К*)-2-(3хлорофенил)-3,5,5-триметил-2-морфолинола в виде белого твердого вещества. Его используют без дальнейшей очистки для хиральной хроматографии, описанной ниже.

(+) и (-) энантиомеры (+/-)-(2К*,3К*)-2-(3хлорофенил)-3,5,5-триметил-2-морфолинола можно разделить следующим способом. (+/-)(2К*,3К*)-2-(3-хлорофенил)-3,5,5-триметил-2морфолинол (2,54 г) растворяли в 250 мл смеси

2:8 изопропиловый спирт:гексан (оба ВЭЖХ класса). Ба1се1 С1пгаес1 ОБ колонку (2 х 25 см) уравновешивали в течение 1 ч при 8 мл/мин в элюирующем растворителе, смесь 1:9:0,2 изопропанол:гексан:диэтиламин. Раствор (+/-)(2К*,3К*)-2-(3-хлорофенил)-3,5,5-триметил-2морфолинола вводили аликвотами по 1 мл с помощью автоматизированного \Уа1ег8 Ргер ЬС 2000, используя \Уа1ег8 510 ЕЕ насос для инъекций. Каждый прогон занимал по продолжительности 15 мин при условиях, перечисленных выше. Разделенные оптические изомеры собирали с помощью коллектора фракций (^а1ег8) при 2% выше порога нулевой линии на основании шкалы, развернутой на 2 единицы поглощения, при 240 нм (^а1ег8 490Е ИУ детектор). Раствор каждого оптического изомера выпаривали на роторном испарителе при 40° стоградусной шкалы и под вакуумом, создаваемым насосом. После сушки в течение 6 ч под высоким вакуумом при комнатной температуре оптический изомер 1 имел массу 1,25 г и оптический изомер 2 имел массу 1,26 г.

Энантиомерную чистоту каждого изомера анализировали с помощью аналитической хиральной ВЭЖХ на \Уа1ег8 860 НРЬС с помощью 996 РНоЮбюбе Аггау детектора, используя Ωαίсе1 СЫга1се1 ΘΌ-Н колонку (4,6 х 250 мм), элюируемую смесью 1:9:0,2 изопропиловый спирт:гексан:диэтиламин при 1 мл/мин. Оптический изомер 1 имел 100%-ную чистоту (время удержания 6,117 мин). Оптический изомер 2 имел чистоту 99,19% (время удержания 6,800 мин) и содержал 0,81% оптического изомера 1 (время удержания 6,133 мин).

Соли гидрохлориды разделенных энантиомеров получали следующим способом. 1,25 г (0,005 моль) оптического изомера 1 (время удержания 6,117 мин), ((-)-(2К,3К)-2-(3хлорофенил)-3,5,5-триметил-2-морфолинола), растворили в диэтиловом эфире. Раствор профильтровали и фильтрат охладили в ледяной бане, добавляя эфирный хлористый водород до тех пор, пока раствор не станет кислым. После выдерживания при температуре окружающей среды в течение 24 ч полученную твердую фазу отфильтровали, промыли диэтиловым эфиром и высушили в вакуумном термостате при 60°С в течение 18 часов, получив 1,32 г (90 %) (-)(2К,3К)-2-(3-хлорофенил)-3,5,5-триметил-2 морфолинола гидрохлорида в виде белого твердого вещества: т.пл. 208-209°С. ЯМР (300 Мгц, ДМСО-б₆); δ 9,72 (шир., 1Н); 8,76 (шир., 1Н), 7,54-7,41 (т, 5Н), 3,98 (б, 1Н), 3,52 (б, 1 Н), 3,37 (шир. 8, 1Н), 1,53 (8, 3Н),1,29 (8, ЗН), 0,97 (б, 3Н). Анал. рассчит. для С1зН19С1₂ЫО₂: С, 53,43; Н, 6,55; N,4,79. Обнаружено: С, 53,35; Н, 6,57; Ν, 4,71.

|а| ² ' = -33,2° (0,67, 95% ЕЮН)

1,26 г (0,005 моль) оптического изомера 2 (время удержания 6,800 мин) ((+)-(28,38)-2-(3хлорофенил) -3,5,5-триметил-2 -морфолинола) растворили в диэтиловом эфире. Раствор профильтровали и фильтрат охладили в ледяной бане, добавляя эфирный хлористый водород до тех пор, пока раствор не станет кислым. После выдерживания при температуре окружающей среды в течение 24 ч полученную твердую фазу отфильтровали, промыли диэтиловым эфиром и высушили в вакуумном термостате при 60°С в течение 18 ч, получив 1,36 г (93%) (+)-(28,38)-2(3-хлорофенил) -3,5,5-триметил-2-морфолинола гидрохлорида в виде белого твердого вещества: т.пл. 208-209°С. ЯМР (300 Мгц, ДМСО-б₆); δ 9,87 (шир., 1Н); 8,76 (шир., 1Н), 7,54-7,41 (т, 5Н), 3,99 (б, 1Н), 3,51 (б, 1Н), 3,37 (шир. 8, 1Н), 1,54 (8, 3Н), 1,30 (8, 3Н), 0,98 (б, 3Н). Анал. рассчит. для С1₃Н₁₉С1₂МЭ₂: С, 53,43; Н, 6,55; Ν, 4,79. Обнаружено: С, 53,51; Н, 6,58; Ν, 4,73.

|а| ² ' = +31,9° (0,64, 95% ЕЮН)

Абсолютную конфигурацию (+)-(28,38)-2(3-хлорофенил)-3,5,5-триметил-2-морфолинола определяли следующим рентгено-кристаллографическим методом. Данные о кристалле: С1₃Н1₉С1^О₂, М=291, орторомбический, пространственная группа Р2₁2₁2₁, а = 8,7348 (6), Ь = 14,9824 (10), с = 23,1605 (15) А, V = 3031 (4) Α³, Ζ = 8, 1+ = 1,276 Мг^-3, Е(000) = 1226,95. Из 12224 измеренных отражений 3764 были уникальными и 2318, имеющие 1>3,0σ(Ι), были использованы в последующих вычислениях. Данные получали на 81етеп8 8МАКТ дифрактометре с помощью омега сканера и монохроматического МоКа излучения (λ = 0,71073 А). Положения всех неводородных атомов определяли прямыми методами и уточняли анизотропически. Положения всех атомов водорода были локализованы в различных синтезах и включены в последующие циклы уточнения с использованием модели движения и идеализированной длины связи, равной 0,96 А. Абсолютную конфигурацию определяли с помощью уточнения параметра Роджерса (Кодега¹) и подтверждали анализом 185 лучших различий интенсивности по Вууое!, который показал, что вероятность несовпадения модели равна 0,006. Уточнение методом наименьших квадратов минимизировало Σ^(ΑΕ)² с массами, основанными на статистических расчетах. Окончательные факторы соответствия модели были Кг = 0,064 (0,108 для всех данных), К,,, = 0,068 (0,081 для всех данных), СоЕ = 1,93. Ссылки включают в себя Е.Е СаЬе, Υ. Ье Раде, 1.-Р. Сйайапб, Е.Ь Ьее апб Р.8. ^Ы1е, 1оигпа1 о Г АррНеб Сгу81а11одгарйу, 22, 384-387 (1989) и Ό. Кодег8, Ас1а Сгу81а11одгарЫса, А37, 734-741, 1981.

Количество соединения формулы (I), требуемое для достижения желаемого терапевтического эффекта будет, конечно, зависеть от ряда факторов, например способа введения, реципиента и подлежащего лечению состояния. В общих чертах, суточная доза будет находиться в диапазоне 0,02 -5,0 мг/кг. Более точные диапазо7 ны включают в себя 0,02 - 2,5 мг/кг, 0,02 - 1,0 мг/кг, 0,02 - 0,25 мг/кг, 0,02-0,15 мг/кг и 0,02-0,07 мг/кг.

Соединение формулы (I) можно применять для лечения депрессии, гиперактивности при дефиците внимания (ГАДВ), ожирения, мигрени, боли, половой дисфункции, болезни Паркинсона, болезни Альцгеймера, зависимости от кокаина или никотинсодержащих продуктов (особенно табака) в виде соединения самого по себе, но предпочтительно представленного в форме фармацевтического препарата с одним или более чем одним фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или эксципиентом. Естественно, носители, разбавители и эксципиенты должны быть приемлемыми в смысле совместимости с другими ингредиентами препарата и не должны быть вредными для реципиента. Носитель может быть твердым или жидким, или и тем, и другим, и предпочтительно приготовленным с этим агентом в виде препарата стандартной дозы, например таблетки.

Препараты включают в себя препараты, пригодные для перорального, ректального, местного, трансбукального (то есть подъязычного) и парентерального (то есть подкожного, внутримышечного, внутрикожного или внутривенного) введения.

Препараты, пригодные для трансбукального (подъязычного) введения, включают в себя жевательные таблетки, содержащие соединение формулы (I) в ароматической основе, обычно сахарозе и акации или трагаканте, и пастилки, содержащие этот агент в инертной основе, такой как желатин и глицерин или сахароза и акация.

Препараты по настоящему изобретению, пригодные для парентерального введения, обычно представляют собой стерильные водные препараты соединения формулы (I), предпочтительно изотоничные с кровью предполагаемого реципиента. Эти препараты предпочтительно вводят внутривенно, хотя введение можно также проводить посредством подкожной, внутримышечной или внутрикожной инъекции. Подобные препараты можно удобно приготовить, смешивая этот агент с водой и делая полученный раствор стерильным и изотоничным с кровью.

Препараты, пригодные для ректального введения, предпочтительно представлены в виде суппозиториев стандартной дозы. Их можно приготовить, смешивая соединение формулы (I) с одним или более чем одним общепринятым твердым носителем, например маслом какао, и затем формуя полученную смесь.

Препараты, пригодные для местной аппликации на кожу, предпочтительно имеют форму мази, крема, лосьона, пасты, геля, спрея, трансдермального пластыря, аэрозоля или масла. Носители, которые можно применять, включают в себя вазелин, ланолин, полиэтиленгликоль, спирты и комбинации двух или более из них.

Следует представлять себе, что кроме ингредиентов, особо упомянутых выше, препараты могут включать в себя другие агенты, общепринятые в данной области, имеющие отношение к типу рассматриваемого препарата.

Биологическая активность соединения формулы (I) была продемонстрирована ΐη νΐΐΓΟ на моделях захвата и на модели тетрабеназининдуцированной депрессии. Рацемический морфолинольный метаболит, (+/-)-(2К*,3К*)-2(3-хлорофенил)-3,5,5-триметил-2-морфолинол, здесь именуется как «рацемат». (-) Форма морфолинольного метаболита представляет собой (-)(2К,3К)-2-(3 -хлорофенил)-3,5,5 -триметил-2морфолинол или его фармацевтически приемлемые соли и сольваты и именуется здесь как соединение формулы (II)

Эксперименты по синаптосомальному захвату ΐη νΐΐΓΟ

Был определен захват ΐη νΐΐΓΟ, как было ранее описано, с использованием синаптосом, приготовленных из скорлупы хвостатых ядер крыс (для захвата дофамина) и гипоталамуса (для захвата НА и серотонина), с применением [³Н]-дофамина, [³Н]-НА и [³Н]-серотонина в качестве транспортных субстратов, соответсвенно (смотри ЕскйагФ, З.В., К.А. Мах^е11, апд К.М. Гегг18, А 81гис1иге-Ас1М1у 8Шду о£ Фе ТгапзроЦ ЗИез £ог Фе НуроФа1аш1с апд З1па1а1 Саΐесйо1ат^ηе υрΐаке Зу^ешз. 81шйагШе8 апд дйГегепсез. Мо1еси1аг Рйагшасо1о§у, 21: р. 374-9, 1982).

Синаптосомы, используемые для получения данных по захвату ш ν^ΊΌ, приготовили из гипоталамуса или стриатума осторожным гомогенизированием ткани в буфере 0,3М сахароза/25 мМ трис, рН 7,4, содержащем ипрониазида фосфат для ингибирования моноаминооксидазы. Гомогенат центрифугировали при 1100 х д при 4°С в течение 10 мин, и супернатант использовали для исследования захвата. Супернатант (приблизительно 1 мг тканевого белка) инкубировали с Км концентрациями [³Н]норадреналина, [³Н]-дофамина или [³Н]серотонина при 37°С в течение 5 мин в модифицированном буфере Кребса-Хенселейта (КгеЬзНепзе1ей) (118 мМ КаС1, 5 мМ КС1, 25 мМ ЫаНСОэ, 1,2 мМ №Н2РО4, 1,2 мМ МдЗО4, 11 мМ декстрозы, 2,5 мМ СаС1₂) в отсутствие и в присутствии лекарства. При этих условиях захват был линейным по отношению как к субстрату, так и к ткани ( с <5% общего транспортируемого субстрата). Неспецифический захват определяли как захват при 0°С. [³Н]-субстрат, который был транспортирован в синаптосомы, отделили от свободного [³Н]-субстрата фильт9 рованием через СЕ/В фильтры и отмыли холодным буфером Кребса-Хенселейта (КгсЬкНсп5с1сй). Фильтры подвергли подсчету на содержание трития в жидкостном сцинтилляционном спектрометре.

Данные по синаптосомальному захвату ίη уйго представлены в виде табл. 1. Среди 2 энантиомеров морфолинольного метаболита бупропиона (+) энантиомер, соединение формулы (I), ингибировало захват норадреналина (НА) с 1С₅₀, равной 2,2 мкМ. В противоположность этому, (-) энантиомер был неэффективным при концентрации 30 мкМ. При захвате дофамина (ДА) соединение формулы (I) имело 1С₅₀, приблизительно равную 10 мкМ, в то время как (-) энантиомер был неактивным при 30 мкМ. Ни одно соединение не ингибировало захват серотонина при 30 мкМ.

Для сравнения, Жс11Ьи1г1п®^: одинаково ингибировал захват ДА и норадреналина с величинами 1С₅₀, равными 1,9 и 2,2 мкМ, и не ингибировал захват серотонина при 30 мкМ. Имипрамин (неспецифический трициклический антидепрессант) ингибировал захват НА и серотонина с величинами 1С₅₀, равными 0,072 и 0,24 мкМ, соответственно.

Соединение формулы (I) было приблизительно в два раза более действенно по сравнению с \Ус11ЬШпп^к' как ингибитор НА, но в отличие от последнего, оно было приблизительно в 10 раз менее действенно как ингибитор захвата дофамина. Эти данные согласуются с изученными норадренергическими действиями \Мс11ЬиГпп® и рацемического морфолинольного метаболита бупропиона, (+/-)-(2К*,3К*)-2-(3хлорофенил)-3,5,5-триметил-2-морфолинола гидрохлорида, (306И73) ίη νίνο, при их соответсвующих анти-ТБЗ дозах (Соорсг, В.В., с! а1., №игор8усйорйагтасо1о§у, 11: р. 133-41, 1994). Поведенческие и электрофизиологические данные свидетельствуют о том, что эффекты \Мс11Ьийтп® опосредуются норадренергическим механизмом (там же).

Эксперименты по тетрабеназининдуцированной поведенческой депрессии. Тетрабеназин (ТБЗ)-индуцированную депрессию использовали для оценки антидепрессантной активности ίη νί\Ό. Тест был утвержден для широкого диапазона антидепрессантов, о которых известно, что они действуют посредством норадренергических механизмов (Соорсг В.В. с! а1., «Ап1ша1 тобск иксб ίη 111с ргсбкйоп оГ ап(16сргс55ап1 сГГсс15 ίη тап», 1. С1т. РкусЫайу 44: 63-66, 1983). Более того, этот тест также применялся для идентификации \Ус11ЬШпп^к' как антидепрессанта. Кратко, животным инъецировали агент-кандидат (п.о.(перорально) или в. б. (внутрибрюшинно)) за 30 мин до введения в.б. инъекции тетрабеназина (35 мг/кг в виде НС1 соли свежеприготовленной для каждого применения). Оценки проводили через 30 мин, и они включали в себя локомоторную активность (1-4 шкала); птоз (1-4 шкала) и температуру тела, как было описано ранее (Соорсг, В.В., ЕЬ. Но\\агб, апб Е.Е. Зогоко. Ашта1 тобск иксб ίη ргсбюйоп оГ апббсргс^аЩ сГГсс15 ίη тап (1оигпа1 оГ Сйшса1 РкусЫайу, 44: р. 63-6, 1983). Во всех исследованиях ученый, проводящий оценки, не имел информации об обработках. Все параметры оценивались одинаково для получения «смешанного» показателя (X) посредством следующего алгоритма:

Х = (1+показатель птоза)/(показатель активности [темп., обработанные/темп., контрольные]

Результаты, полученные на модели тетрабеназин-индуцированной депрессии, были следующими. При оценке ίη νί\Ό при 25 мг/кг (в. б.) соединение формулы (I), рацемат, \Ус11ЬШпп^к' и, для сравнения, амитриптилин, все устраняли тетрабеназин-индуцированную поведенческую депрессию. В противоложность этому, (-) энантиомер показал лишь незначительную активность (фиг. 1).

В ТБЗ модели поведенческой депрессии активность присутствовала у соединения формулы (I). При анализе в исследовании дозаэффект с ТБЗ активность показала резкое увеличение по величине между 3 и 6 мг/кг (в.б.) (фиг. 2). Для сравнения, соединение формулы II не обладало доза-зависимой активностью и при 50 мг/кг, как оказалось, ухудшало состояние животного (фиг. 3). На фиг. 2 и 3 АМИТ (5) относится к амитриптилину в дозе при 5 мг/кг, и КОНТ относится к контрольной группе животных, которые не получали никаких лекарств.

Поскольку ТБЗ тест предсказывал антидепрессанты, действующие посредством норадренергических механизмов, и соединение формулы (I) является ингибитором захвата норадреналина, а \Ус11ЬШпп^к' метаболизируется до этого морфолинола ίη νί\Ό. то полученные данные свидетельствуют о том, что антидепрессантная активность ^с11Ьийтп®, вероятно, является результатом эффектов соединения формулы (I) (Жс1сН, В.М., А.А. Ьа1, апб Ό.Η. Зсйгосбсг, Рйагтасо1о§1са1 мщпПсапсс оГ 111с крсстк бйГсгспсск ίη Ьиргорюп тс1:аЬо1кт. ХспоЬюйса, 17: р. 287-98, 1987).

При более широком рассмотрении и другие активности \Ус11ЬШпп^к' могут быть приписаны соединению формулы (I). В частности, норадренергический механизм является общим для агентов, применяемых для лечения ГАВД (то есть метилфенидата и амфетамина). Хотя молекулярный механизм влияния \Ус11ЬШпп^к' на прекращение курения менее понятен, считают, что катехоламинергический метаболический путь участвует в усилении поведенческой зависимости от никотина. \Ус11ЬШпп^к' (и при более широком рассмотрении, соединение формулы (I)), посредством увеличения высвобождения НА в синапсы головного мозга, мог бы имитировать некоторые действия никотина и, таким образом, ослаблять симптомы, ассоциирован ные с синдромом отмены никотина. Дополнительно к этому амфетамины применяются для лечения ожирения. Однако, способность амфетамина вызывать развитие зависимости от него мешает его применению для большинства пациентов с ожирением. ХУеПЬгйгт® вызывает потерю массы и, подобно амфетамину, действует посредством норадренергического механизма (/агпибазк М.К апб Т. НоккешТМа. Лпогесйс апб Ьейауюига1 еППесй оП Ьиргорюп. Сепега1 Р1агтасо1оду. 19: р. 201-4. 1988 и Найо-Тгиах. N.. е! а1.. ЕПссй оП Виргорюп оп Вобу ХУефЫ. 1оита1 оП С11шса1 РкусЫайу. 44: р. 183-6. 1983). Однако. в отличие от амфетамина. \Уе11Ьи1п1Г не вызывает развития зависимости от него (ЬатЬ. КП. апб К.К.СпППййк. 8е1П-абт1пщ1гайоп ш ВаЬоопк апб 1йе Ойсптшабуе 8йти1и5 ЕППесй ш Кай оП Виргорюп. Штйепмпе. ОЫоГепмп апб 1т1ргат1пе. Р8усйорйагтасо1оду. 102: р. 18390. 1990; Вегдтап. 1.. е! а1.. ЕПссй оГ Сосаше апб Ке1а1еб Эгидх т №п1штап Рпта1е5. III. 8е1Пабт1п181гайоп Ьу 8с.|шгге1 Мопкеук. 1оигпа1 оП Р1агтасо1оду & Ехрейтеп1а1 Тйегареийск. 251: р. 150-5. 1989 и 1ойап8оп. С.Е.. апб 1.Е. Ваггей. Т1е Ойспттабуе 8йти1и5 ЕПссй оП Сосаше т Р1деоп8. 1оигпа1 оП Р1агтасо1оду & Ехрейтеп1а1 Тйегареийск. 267: р. 1-8. 1993). При более широком рассмотрении можно ожидать, что соединение формулы (I) также обладает эффективностью при ожирении и кокаиновой зависимости.

Лечение зависимости от никотинсодержащих продуктов включает в себя как частичное, так и полное освобождение от зависимости. Таким образом, по отношению как к табачным продуктам, так и к прекращению активности, например курения, это лечение также будет включать в себя снижение уровня или частоты подобной активности, то есть снижение числа выкуренных сигарет в данный период. По отношению к другим никотинсодержащим продуктам лечение также будет включать в себя и прекращение, и снижение уровня применения подобных продуктов.

Безопасность и токсичность

Были проведены дополнительные исследования дозовых диапазонов для определения диапазона безопасных доз для изомеров и рацемата. Животные наблюдались на наличие серьезных неблагоприятных событий (например припадков и смерти) после введения соединений формулы I. формулы II или рацемата пероральным и внутрибрюшинным (в.б.) путем. Данные представлены в виде табл. 2.

При преоральном введении при 100 мг/кг п.о., припадки наблюдались в случае соединения формулы II и рацемата, но не в случае соединения формулы I. Припадки наблюдались у всех животных в случае всех трех соединений при дозах 300 мг/кг. Кроме того, пероральная доза 300 мг/кг приводила к 100 и 80%-ной летальности для соединения формулы II и рацемата, в то время как в случае соединения формулы I смертей не наблюдалось.

При введении в. б. все соединения вызывали припадки при 100 мг/кг. В случае соединения формулы I смертей не наблюдали, в то время как соединение формулы II и рацемат приводили к 100%-ной и 20%-ной летальности, соответственно. При пероральной дозе 300 мг/кг наблюдали полную летальность для всех соединений.

Таблица 1. Воздействие на захват ίπ νϋΐΌ

Захват [³Н]-дофамина

Соединение	1С50 (мМ)	СОИ
Бупропион	1.9	0.15
Формула (I)	9.3	0.41
Формула (II)	>100
Захват [³Н]-норадреналина
Соединение	Ю50 (мМ)	СОИ
Бупропион	2.2	0.7
Формула (I)	1.1	0.07
Формула (II)	>30
Имипрамин	0.072	0.020
Захват [³Н]-серотонина
Соединение	Ю50 (мМ)	СОИ
Бупропион	>30
Формула (I)	>30
Формула (II)	>100
Имипрамин	0.24	0.03

Таблица 2.

Побочные эффекты, ассоциированные с соединениями формулы I. формулы II и рацематом

Соединение	Путь введения	Доза (мг/кг)	Припадки (%)	Время до припадков (минуты)	% умерших	Время до гибели (минуты)
Формула I	в.б.	100	100	3.93	0	Н/н
Формула I	п.о.	100	0	Н/н	0	Н/н
Формула I	в.б.	300	100	3.95	100	6
Формула I	п.о.	300	100	11.23	0	Н/н
Формула II	в.б.	100	20	5	100	7
Формула II	п.о.	100	100	7.2	0	Н/н
Формула II	в.б.	300	100	1.1	100	6
Формула II	п.о.	300	100	6.8	100	7
Рацемат	в.б.	100	100	3	20	14
Рацемат	п.о.	100	100	9.2	0	Н/н
Рацемат	в.б.	300	100	3	100	3
Рацемат	п.о.	300	100	6.8	80	7

Н/н обозначает, что эффект не наблюдался и, следовательно, проценты не приводятся

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1 Фармацевтически приемлемые соли и сольваты (+)-(28,38)-2-(3-хлорофенил)-3,5,5триметил-2-морфолинола.
2. (+)-(28,38)-2-(3-хлорофенил)-3,5,5-триметил-2-морфолинола гидрохлорид.
3. Фармацевтические композиции, содержащие (+)-(28,38)-2-(3-хлорофенил)-3,5,5-триметил-2-морфолинол или его фармацевтически приемлемые соли и сольваты по п.1 или 2 вместе с одним или более чем одним фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или эксципиентом.
4. Соединение (+)-(28,3 8)-2-(3-хлорофенил)-3,5,5-триметил-2-морфолинол или его фармацевтически приемлемая соль или сольват по п. 1 или 2 для применения в терапии.
5. Применение соединения (+)-(28,38)-2(3-хлорофенил)-3,5,5-триметил-2-морфолинола или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата по п. 1 или 2 или их фармацевтических композиций по п.3 в приготовлении лекарства для лечения депрессии, гиперактивности при дефиците внимания (ГАДВ), ожирения, мигрени, боли, сексуальной дисфункции, болезни Паркинсона, болезни Альцгеймера, зависимости от кокаина или никотинсодержащих продуктов (особенно табака).
6. Способ лечения депрессии, гиперактивности при дефиците внимания (ГАДВ), ожирения, мигрени, боли, сексуальной дисфункции, болезни Паркинсона, болезни Альцгеймера, зависимости от кокаина или никотинсодержащих продуктов (особенно табака) у субъекта - человека или животного, при котором указанному субъекту вводят эффективное количество (+)(28,38)-2-(3-хлорофенил)-3,5,5-триметил-2морфолинола или его фармацевтически приемлемых солей и сольватов по п.1 или 2 или их фармацевтических композиций по п.3.