CZ20002690A3 - Farmaceuticky přijatelné soli a solváty (+)- (2S,3S)-2-(3-chlorfenyl)-3,5,5-trimethyl-2- morfolinolu a farmaceutický prostředek - Google Patents

Abstract

Farmaceuticky přijatelné soli a solváty (+)-(2S, 3 S)-2-(3- chlorfenyl)-3,5,5-trimethyl-2-morfolinolujsou látky, které mají příznivé účinky na centrální nervový systém aje proto možno je použít ve formě farmaceutického prostředku, který rovněž tvoří součást řešení, k léčení deprese, poruch s projevy hyperaktivity a se snížením pozornosti ADHD, obezity, migrény, bolestivých stavů, sexuálních dysfunkcí, Parkonsonovy nebo Alzheimerovy choroby, návyku na kokain nebo návyku na výrobky s obsahem nikotinu, zvláště na tabák.

Description

Farmaceuticky přijatelné soli a solváty (+)-(2S,3S)-2-(3-chiorfenyl)-3,5,5-trimethyl-2-morfolinolu a farmaceutický prostředek

Oblast techniky

Vynález se týká opticky čistého morfolinolu, jeho solí a soivátů a farmaceutického prostředku s obsahem těchto látek.

Dosavadní stav techniky

Bupropionhydrochlorid, chemicky (±)-1-(3-chlorfenyl)-2/(1,1dimethylethyl)amino/-1-propanonhydrochlorid je účinnou složkou prostředku Wellburtin^R, který se užívá ve Spojených státech při léčení deprese. Tato látka je také účinnou složkou prostředku Zyban^R, který se užívá v téže oblasti jako pomocný prostředek při přerušení kouření. Jde o relativně slabý inhibitor příjmu noradrenalinu NA, serotoninu a dopaminu (DA) neurony a nevyvolává inhibici monoaminooxidázy. Mechanismus působení bupropionu stejně jako ostatních antidepresivních látek není znám, avšak předpokládá se, že účinek je vyvoláván přes noradrenergní a/nebo dopaminergní mechanismy. Dostupné znalosti vedou k předpokladu, že účinná látka je selektivním inhibitorem noradrenalinu NA v dávkách, které jsou na živočišném modelu antidepresivní, jak bylo popsáno v souhrnné publikaci Ascher J. A. a další, Bupropion: A Review of its Mechanism of Antidepressant Activity. Journal of Clinical Psychiatry, 56: s. 395-401, 1995.

Cl

Bupropion HCI

0 0 • 0 0 0 • 00000 0 • 00

0 0

0

0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 ·

0 0 0 0 0

000 00 00

Bupropion je metabolizován u člověka i u laboratorních zvířat. Metabolity v moči a v plazmě zahrnují produkty biologické přeměny na základě hydroxylace terč. butylové skupiny a/nebo v důsledku redukce karbonylové skupiny bupropionu. Byly identifikovány čtyři základní metabolity. Jde o erythro- a threoaminoalkoholy bupropionu, erythroaminodiol bupropionu a morfolinol. Tyto metabolity bupropionu jsou farmakologicky účinné, avšak jejich účinnost a toxicita ve srovnání s bupropionem ještě nebyly přesně stanoveny. Vzhledem k tomu, že koncentrace těchto metabolitů v krevní plazmě je vyšší než koncentrace bupropionu, mohou být metabolity důležité z klinického hlediska.

Jeden z metabolitů, morfolinol, chemicky (±)-(2R*,3R*)-2-(3-chlorfenyl)-3,5,5-trimethyl-2-morfolinolhydroehlorid se pravděpodobně tvoří hydroxylací terč. butylové skupiny bupropionu a je možno jej vyjádřit vzorcem

Ci

Morfolinol, metabolit Bupropionhydrochloridu

V publikaci Biomed. Chromatogr. 1997, 11(3), 174-179, (Suckow, R. F. a další) se popisuje izolace a stanovení jednotlivých enanciomerů racemického morfolinolu spolu se skutečností, že vzorky krevní plasmy obsahují (-)-enanciomer až v množství 96 %, vztaženo • · · · ·· ·· · · ··· · · · 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9999 9 9 9 9 9 9 9 9 · • · · 9 9 9 9 9 9 9

9 9 99 9 99 9 9 9 9 / ' ³ :<

na celkové množství všech metabolitů, Publikace však neuvádí žádné farmakologické vlastnosti jednotlivých enanciomerů nebo jejich klinický význam.

Podstata vynálezu

Nyní bylo neočekávaně zjištěno, že přesto že (-)-forma morfolinolu v krevním oběhu člověka podstatným způsobem převažuje, je to právě (+)-enanciomer, tzn. (+)-(2S,3S)-2-(3-chlorfenyl)-3,5,5-trimethyl-2-morfolinol, který je účinnou látkou.

Podstatu vynálezu tvoří farmaceuticky přijatelné soli a solváty uvedené sloučeniny obecného vzorce I, (+)-(2S,3S)-2-(3-chlorfenyl)-3,5,5-trimethyl-2-morfolinolu

(I)

Farmaceuticky přijatelné soli zahrnují např. soli kyselin z následující skupiny: kyselina chlorovodíková, bromovodíková, sírová, dusičná, fosforečná, salicylová, p-toluensulfonová, vinná, citrónová, methansulfonová maleinová, mravenčí, malonová, jantarová, isethionová, laktobionová, naftalen-2-sulfonová, sulfamová, ethansulfonová a benzensulfonová. Zvláště výhodný je hydrochlorid sloučeniny vzorce I.

• •4 · ·· ·· ·« · · 4 4 4 4 4 4 4 ·

4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 • 4 4···· · 4 · · · 4 4 4

4 444 4444

4 44444 44 44

Podstatu vynálezu tvoří také farmaceutický prostředek, který obsahuje sloučeninu vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelné soli a solváty spolu s alespoň jedním farmaceutickým nosičem, ředidlem nebo pomocnou látkou.

Sloučenina obecného vzorce I a její soli a solváty jsou použitelné k léčebným účelům.

Uvedené látky je zejména možno využít při léčení depresí, hyperaktivních poruch se sníženou pozorností (ADHD), obezity, migrény, bolestivých stavů, sexuálních dysfunkcí, Parkínsonovy a Alzheimerovy choroby nebo závislosti na výrobcích s obsahem kokainu nebo nikotinu u lidí nebo u jiných živočichů. V těchto případech se podává účinné množství sloučeniny vzorce I nebo farmaceuticky přijatelné soli nebo solvátu nebo farmaceutického prostředku s obsahem těchto látek.

Součást podstaty vynálezu tvoří také použití sloučeniny vzorce I nebo farmaceuticky přijatelných solí a solvátů této látky pro výrobu farmaceutického prostředku pro léčení depresí, hyperaktivních poruch se sníženou pozorností (ADHD), obezity, migrény, bolestivých stavů, sexuálních dysfunkcí, Parkínsonovy a Alzheimerovy choroby nebo závislosti na výrobcích s obsahem kokainu nebo nikotinu u lidí nebo u jiných živočichů.

Vynález bude dále popsán v souvislosti s přiloženými výkresy.

Přehled obrázků na výkresech

Na obr. 1 je znázorněn vliv účinné látky v dávce 25 mg/kg ip na depresi, vyvolanou TBZ.

• · · • · • · · • · · • · · · • ft · · · · • ftft

Na obr. 2 je znázorněna závislost účinku na dávce sloučeniny vzorce I při léčení deprese, vyvolané TBZ. Sloučeniny byly podávány minut před podáním TBZ, k pokusům byli použiti myší samci kmene

CD-1, účinné látky byly podávány intraperitoneálně, bylo použito vždy myší ve skupině.

Na obr. 3 je znázorněna závislost účinku na dávce sloučeniny vzorce II při léčení deprese, vyvolané TBZ. Sloučeniny byly podávány 30 minut před podáním TBZ, k pokusům byli použiti myší samci kmene CD-1, účinné látky byly podávány intraperitoneálně, bylo použito vždy 6 myší ve skupině.

Sloučeninu vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelné soli a solváty je možno připravit tak, že se nejprve připraví racemát morfolinolu jako metabolitu bupropionu, načež se od sebe oddělí enanciomery (+) a (-) pomocí HPLC.

Racemát bupropionhydrochloridu je možno připravit následujícím způsobem: k 10,0 g, 0,06 mol 3’-chlorpropionfenonu v 50 ml dioxanu se přidá roztok 14,9 g, 0,06 mol dioxandibromidu v 50 ml dioxanu. Reakční směs se míchá 2 hodiny při teplotě místnosti a pak se vlije do 500 ml směsi ledu a vody. Pak se směs několikrát extrahuje methylenchloridem. Extrakty se spojí, vysuší se síranem sodným a odpaří ve vakuu, čímž se ve výtěžku 85 % získá 14,8 g 2-brom-3’-chlorpropiofenonu ve formě bledě žlutého oleje. Tento olej se užije v následujícím stupni bez dalšího čištění. NMR (300 MHz, CDCI₃); delta 7,99 (m, 1H), 7,90 (d, 1H), 7,57 (d, 1H), 7,44 (t, 1H),

5,22 (q, 1H), 1,91 (t, 3H).

K roztoku 19,3 g, 0,08 mol 2-brom-3’-chlorpropiofenonu ve 100 ml methanolu se po kapkách přidá roztok 27,8 g, 0,31 mol,

99 99 • 9 9*9«

9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9

99 99

2-amino-2-methyl-1-propanolu ve 200 ml methanolu při teplotě místnosti. Směs se míchá 18 hodin a pak se odpaří ve vakuu. Odparek se dělí mezi vodu a diethylether. Organické fáze se spojí a extrahují 10% vodným chlorovodíkem. Vodné extrakty se spojí, zchladí se na ledové lázni a alkalizují se přidáním 40% vodného hydroxidu sodného. Výsledná směs se extrahuje diethyletherem, extrakty se spojí, promyjí se vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného, vysuší se uhličitanem draselným a odpaří ve vakuu, čímž se ve výtěžku 75 % získá 15,0 g (±)-(2R*,3R*)-2-(3-chlorfenyl)-3,5,5-trimethyl-2-morfolinolu ve formě špinavě bílé pevné látky.

(±)-(2R*,3R*)-2-(3-chlorfenyl)-3,5,5-trimethyl-2-morfolinol je možno převést na (+)-(2R*,3R*)-2-(3-chlorfenyl)-3,5,5-trimethyl-2-morfolinolhydrochlorid následujícím Způsobem. 6,0 g této látky se rozpustí v diethyletheru, roztok se zchladí na ledové lázni a přidává se etherový roztok chlorovodíku tak dlouho, až má směs kyselou reakci. Výsledná pevná látka se odfiltruje a nechá se překrystalizovat ze směsi ethanolu a diethyletheru s obsahem chlorovodíku, čímž se získá 4,93 g (±)-(2R*,3R*)-2-(3-chlorfenyl)-3,5,5-trimethyl-2-morfolinolhydrochloridu ve formě bílé pevné látky s teplotou tání 202 až 203 °C.

NMR (80 MHz, DMSO-d₆); delta (br, 1H), 8,85 (br, 1H), 7,60-7,41 (m, 5H), 4,04 (d, 1H), 3,50 (d, 1H), 3,37 (br s, 1H), 1,58 (s, 3H), 1,34 (s 3H), 1.93 (d, 3H).

Analýza pro: C13H19CI2NO2 vypočteno C 53,43 % H 6,55 % N 4,79 % nalezeno C 53,54 % H 6,58 % N 4,75 %.

(±)-(2R*,3R*)-2-(3-chlorfenyl)-3,5,5-trimethyl-2-morfolinolhydrochlorid je možno převést zpět na volnou látku následujícím způsobem: 3,0 g (±)-(2R*,3R*)-2-(3-chiorfenyl)-3,5,5. .χ·.

titi ti • ti • ti titi • titi ti ti titi ti • titi ti • titi ti • ti titi

-trimethyl-2-morfolinolhydrochloridu se rozpustí ve 100 ml vody a přidá se 200 ml diethyletheru. Směs se zchladí na ledové lázni a pH se upraví na hodnotu vyšší než 10 přidáním 1N vodného roztoku hydroxidu sodného. Pak se směs míchá ještě 30 minut, fáze se oddělí a vodná fáze se extrahuje diethyletherem. Diethyletherové extrakty se spojí, vysuší se síranem sodným a odpaří ve vakuu, čímž se získá 2,6 g (+)-(2R*,3R*)-2-(3-chlorfenyl)-3,5,5-trimethyl-2-morfolinolu ve formě bílé pevné látky, která se užije pro dále popsanou chirální chromatografií bez dalšího čištění.

Enanciomery (+) a (-)(±)-(2R*,3R*)-2-(3-chlorfenyl)-3,5,5-trimethyl-2-morfolinolu je možno od sebe oddělit následujícím způsobem. 2,54 g (±)-(2R*,3R*)-2-(3-chlorfenyl)-3,5,5-trimethyl-2-morfolinolu se rozpustí ve 250 ml směsi isopropylalkoholu a hexanu 2:8, obě látky se užijí s vysokou čistotou pro HPLC. Sloupec Daicel Chiralcel OD s rozměry 2 x 25 cm se na 1 hodinu nechá uvést do rovnovážného stavu v elučním rozpouštědle, které protéká rychlostí 8 ml/min a je tvořeno směsí isopropanolu, hexanu a diethylaminu v poměru 1:9:0,2. Roztok (±)-(2R*,3R*)-2-(3-chlorfenyl)-3,5,5-trimethyl-2-morfolinolu se vstřikuje po podílech 1 ml automatickým zařízením Waters Prep LC 2000 při použití čerpadla Waters 510 EF. Každá analýza trvá 15 minut při použití svrchu uvedených podmínek. Oddělené optické isomery jsou odebírány pomocí zařízení pro odběr frakcí Waters při koncentraci požadované látky nad 2 %, na základě dvou absorbčních jednotek při detekci při 240 nm (detektor Waters 490 E). Každý roztok optického isomerů se odpaří na rotačním odpařovači při teplotě 40 °C za sníženého tlaku. Po sušení 6 hodin ve vysokém vakuu při teplotě místnosti byl získán optický isomer 1 v množství 1,25 g a optický isomer 2 v množství 1,26 g.

Enanciomerní čistota každého isomerů byla zkoušena pomocí analytické chirální HPLC na detektoru Waters 860 HPLC s fotodiodou ·· « to · · • toto«« to ·

996 při použití sloupce Daicel Chiralcel OD-H s rozměry 4,6 x 250 mm, jako eluční činidlo byla použita směs isopropylalkoholu, hexapu a diethylaminu v objemovém poměru 1:9:0,2 při rychlosti průtoku 1 ml za minutu. Bylo prokázáno, že optický isomer 1 má čistotu 100 %, doba retence 6,117 minut. Optický isomer 2 měl čistotu 99,19 % při době retence 6,800 minut a obsahoval 0,81 % optického isomerů 1 s dobou retence 6,133 minut.

Hydrochloridy oddělených enanciomerů byly připraveny následujícím způsobem. 1,25 g, 0,005 mol optického isomerů 1 s dobou retence 6,117 minut bylo rozpuštěno v diethyletheru. Roztok byl zfiltrován a filtrát byl zchlazen na ledové lázni za současného přidávání etherového roztoku chlorovodíku až do kyselé reakce roztoku. Po stání 24 hodin při teplotě místnosti byla výsledná pevná látka odfiltrována, promyta diethyletherem a sušena ve vakuu 18 hodin při teplotě 60 °C, čímž bylo ve výtěžku 90 % získáno 1,32 g (-)(2R,3R)-2-(3-chlorfenyl)-3,5,5-trimethyl-2-morfolinolhydrochloridu ve formě bílé pevné látky s teplotou tání 208 až 209 °C. NMR (300 MHz, DMSO-d₆); delta 9,72 (br, 1H), 8,76 (br, 1H), 7,54-7,41 (m, 5H), 3,98 (d, 1H), 3,52 (d, 1H), 3,37 (brs, 1H), 1,53 (s, 3H), 1,29 (s, 3H), 0,97 (d, 3H).

Analýza pro C13H19CI2NO2 vypočteno C 53,43 % H 6,55 % N 4,79 % nalezeno C 53,35 % H 6,57 % N 4,71 % /alfa/²⁰ °_CD = -33,2° (0,67, 95% ethanol)

1,26 g, 0,005 mol optického isomerů 2 s dobou retence 6,800 minut, tzn. (+)-(2S,3S)-2-(3-chlorfenyl)-3,5,5-trimethyl-2-morfolinolu se rozpustí v diethyletheru. Roztok se zfiltruje a filtrát se zchladí v ledové lázni za současného přidávání etherového roztoku chlorovodíku až do kyselé reakce roztoku. Směs se nechá stát 24 hodin při teplotě místnosti, pak se zfiltruje, promyje se diethyletherem a suší ve vakuu • ft ft • · · • ftftft • ft · · 9 9 9

9 9

9 » ftft »* ·· ft·* · · ftft ·

9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9

9 99 99 99 při teplotě 60 °C celkem 18 hodin, čímž se ve výtěžku 93 % získá celkem 1,36 g výsledného hydrochloridu ve formě bílé pevné látky s teplotou tání 208 až 209 °C. NMR (300 MHz, DMSO-d₆); delta 9,87 (br, 1H), 8,76 (br, 1H), 7,54-7,41 (m, 5H), 3,99 (d, 1H), 3,52 (d, 1H), 3,37 (br s, 1H), 1,54 (s, 3H), 1,30 (s, 3H), 0,98 (d, 3H).

Analýza pro C13H19CI2NO2 vypočteno C 53,43 % H 6,55 % N 4,79 % nalezeno C 53,51 % H 6,58 % N 4,73 % /alfa/²⁰ °_CD= +31,9° (0,64, 96% ethanol)

Absolutní konfigurace (+)-(2S,3S)-2-(3chlorfenyl)-3,5,5trimethyl-2-morfolinolu byla stanovena následujícím krystalografickým postupem při použití rtg-záření. Údaje o krystalech: CnHjsChNC^,

M = 291, orthorhombická prostorová skupina P2-|2i2-i, a = 8,7348 (6), b = 14,9824 (10), c = 23,1605 (15) A, V = 3031 (4), A³, Z = 8,

Dc = 1,276 Mgm'³, F(000) = 1226,95. Z 12224 naměřených odrazů bylo 3764 jednotlivých odrazů a 2318 odrazů s hodnotou I > 3,0 ro (I), tyto odrazy byly použity pro následující výpočty. Údaje byly odebírány pomocí difraktometru Siemens Smart při použití monochromatického záření MoKalfa s vlnovou délkou lambda = 0,71073 A. Poloha všech atomů, odlišných od atomu vodíku, byla stanovena přímým postupem a hodnoty byly opraveny na anisotropické hodnoty. Polohy vodíkových atomů byly odhadnuty na zbývajících polohách při idealizované vlnové délce 0,96 A. Absolutní konfigurace byla stanovena na bázi Rogersových parametrů a potvrzena analýzou rozdílu intenzity 185 best Bijvoet, v tomto případě je pravděpodobnost pouze 0,006 chybného výsledku. Mimo to byla použita metoda nejmenších čtverců Zw(AF)². Konečné shodné faktory byly Rf = 0,064 (0,108 pro všechny údaje), R_w = 0,068 (0,081 pro všechny údaje) a GoF = 1,93. Postup byl prováděn podle publikací E. J. Gabe, Y. Le Page, J.-P. Charland,

F. L. Lee a P. S. White, Journal of Applied Crystalography, 22, 384387, 1989 a D. Rogers, Acta Crystallographica, A37, 734-741, 1981.

ν» » V 9 9 9 9 9 9

9 9 99 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9999 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 999 99 9999

Dávky sloučeniny vzorce I, jichž je za potřebí použít pro dosažení požadovaného léčebného účinku, budou záviset na řadě faktorů, jako jsou způsob podání, léčené onemocnění a celkový stav nemocného. Obecně se budou denní dávky pohybovat v rozmezí 0,02 až 5,0 mg/kg, výhodnější rozmezí budou 0,02 až 2,5 mg/kg, 0,02 až 1,0 mg/kg, 0,02 až 0,25 mg/kg, 0,02 až 0,15 mg/kg a 0,02 až 0,07 mg/kg.

Sloučeninu vzorce I je možno užít při léčení depresí, hyperaktivních poruch se sníženou pozorností (ADHD), obezity, migrény, bolestivých stavů, sexuálních dysfunkcí, Parkinsonovy a Alzheimerovy choroby nebo závislosti na výrobcích s obsahem kokainu nebo nikotinu. Sloučeninu je možno použít jako takovou, je však výhodnější ji zpracovat spolu s jedním nebo větším počtem farmaceuticky přijatelných nosičů, ředidel nebo pomocných látek na farmaceutický prostředek. Nosiče, ředidla a pomocné látky musí být kompatibilní s ostatními složkami prostředku a nesmí mít nepříznivý účinek na příjemce. Nosič může být pevný nebo kapalný a s výhodou se zpracovává spolu s účinnou látkou na lékovou formu s obsahem jednotlivé dávky účinné látky, např. na tablety.

Farmaceutický prostředek zahrnuje lékové formy, určené pro podání perorální, rektální, místní, pro podání ústní sliznici, např. pod jazyk a pro parenterální podání, zejména podání podkožní, nitrosvalové, nitrokožní nebo nitrožilní.

Lékové formy, vhodné pro podání pod jazyk jsou např. kosočtverečné tablety, obsahující účinnou látku vzorce l v ochuceném základu, obvykle jde o sacharózu a akaciovou nebo tragakanthovou gumu, dále může být o pastilky, které mohou obsahovat účinnou látku v inertním základu, jako je želatina a glycerol nebo sacharoza a akáciová guma.

«μ * « ·· ·· r« • 99 99 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 • 9 9999 9 9 9 9*9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 999 99 99 99

Prostředky pro parenterální podání budou obvykle sterilní vodné prostředky s obsahem sloučeniny vzorce I a s výhodou budou isotonické s krví příjemce. Tyto prostředky se s výhodou podávají nitrožiině, přestože zásadně je možno je podávat také podkožně, nitrosvalově nebo intradermálně. Tyto prostředky je možno snadno připravit tak, že se účinná látka smísí s vodou a roztok se sterilizuje a přidá se látka, upravující osmotický tlak.

Prostředky pro rektální podání jsou s výhodou čípky, obsahující jednotlivou dávku účinné látky. Čípky je možno připravit smísením sloučeniny vzorce I s jedním nebo větším počtem běžných pevných nosičů, jako je kakaové máslo s následujícím zpracováním směsi na požadovaný tvar.

Prostředky pro místní podání na pokožku mají s výhodou formu mazání, krému, suspenze, emulze, pasty, gelu, spreye, náplasti pro transdermální podání aerosolu nebo oleje. Z použitelných nosičů je možno uvést vazelínu, lanolin, polyethylenglykoly, alkoholy a směsi dvou nebo většího počtu těchto látek.

Je zřejmé, že kromě svrchu uvedených účinných látek mohou tyto farmaceutické prostředky obsahovat ještě další složky.

Biologická účinnost sloučenin vzorce I byla prokazována in vitro a na živočišném modelu s depresí, vyvolanou tetrabenazinem. Racemický morfolinol, (±)-(2R*,3R*)-2-(3-chlorfenyl)-3,5,5-trimethyl-2-morfolinol bude dále označován jako racemát. (-)-forma morfolinolu je (-)-(2R,3R)-2-(3-chlorfenyl)-3,5,5-trimethyl-2-morfolinol nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli a solváty, tyto látky budou dále uváděny jako sloučenina vzorce II ··· ···· ···· • φ · * ··· · · · ♦ • · ···· · ·· ··· ·· · ·· · ·· · ·· ·· ··

Cí

Pokusy s příjmem in vitro na synaptosomech

Příjem in vitro byl stanoven při použití synaptosomů, připravených z krysího caudoputamen (pro příjem dopaminu) a hypothalamu (pro příjem NA a serotoninu) při použití ³H-dopaminu, ³H-NA a ³H-serotoninu jako substrátu, postup byl prováděn podle publikace Eckhardt, S. B., R. A. Maxwell a R. M. Ferris, A StructureActivity Study of the Transport Sites for the Hypothalamic and Striatal Catecholamíne Uptake Systems. Similarities and differences. Molecular Pharmacology, 21, p. 374-9, 1982.

Synaptosomy pro průkaz příjmu in vitro byly připraveny z hypothalamu a striatum jemnou homogenizací tkáně ve směsi 0,3 M sacharózy a 25 mM trispufru o pH 7,4 s obsahem iproniazidfosfátu pro inhibici monoaminooxidázy. Homogenát byl odstředěn 10 minut při teplotě 4 °C při 1100 x g a supernatant byl použit k provedení zkoušek. Supernatant s obsahem přibližně 1 mg tkáňové bílkoviny byl inkubován s Km koncentrací ³H-noradrenalinu, ³H-dopaminu nebo ³H-serotoninu při teplotě 37 °C po dobu 5 minut v modifikovaném Krebs-Henseleitově pufru, který obsahuje 118 mM NaCl, 5 mM KCI, mM NaHCO₃, 1,2 mM NaH₂PO₄, 1,2 mM MgSO₄, 11 mM dextrózy a 2,5 mM CaCI₂, inkubace byla prováděna v přítomnosti a nepřítomnosti

účinné látky. Za uvedených podmínek byl příjem lineární jak pro substrát, tak pro tkáň, přičemž transportováno bylo méně než 5 % substrátu. Nespecifický příjem byl definován jako příjem pří teplotě 0 °C. ³H-substrát, který byl transportován do synaptosomů, byl oddělen od volného ³H-substrátu filtrací přes filtry GF/B s promytím chladným Krebs-Henseleitovým pufrem. Pak byl na filtrech zjištěn počet impulsů pro tricium pomocí spektrometru pro kapalinovou scintilaci.

Údaje pro příjem in vitro do synaptosomů jsou uvedeny v tabulce 1. Ze dvou enanciomerů morfolinolu jako metabolitu bupropionu vyvolával (-i-)enanciomer, sloučenina vzorce I inhibici příjmu noradrenalinu NA, přičemž IC₅o byla přibližně 2,2 mikroM. Na druhé straně (-)enanciomer byl neúčinný ještě v koncentraci 30 mikroM. Pokud jde o příjem dopaminu DA, hodnota IC50 pro sloučeninu vzorce I byla přibližně 10 mikroM, kdežto (-)enanciomer byl opět neúčinný ještě při 30 mikroM. Žádná z uvedených látek nevyvolávala inhibici příjmu serotoninu ani při 30 mikroM.

Pro srovnání je možno uvést, že přípravek Wellbutrin^R je stejně účinný při inhibici příjmu DA a noradrenalinu, přičemž hodnoty IC₅₀ pro tento příjem jsou 1,9 a 2,2 mikroM, prostředek nevyvolává inhibici příjmu serotoninu při 30 mikroM. Imipramin, který je nespecifickým tricyklickým antidepresivním prostředkem vyvolává inhibici příjmu NA a serotoninu při hodnotách IC50 přibližně 0,072 a 0,24 mikroM.

Sloučenina vzorce I byla přibližně dvojnásobně účinná než Wellbutrin^R při inhibici příjmu NA, avšak přibližně 10křát méně účinná jako inhibitor příjmu dopaminu. Tyto údaje jsou v souladu s pozorovaným působením prostředku Wellbutrin na příjem noradrenalinu a na účinek racemického morfolinolu (±)-(2R*,3R*)-2-(314

-chlorfenyl)-3,5,5-trimethyl-2-morfolinolhydrochloridu (306U73) in vivo při odpovídajících dávkách, jimiž je možno potlačit účinek TBZ podle publikace Cooper B. R., a další Neuropsychopharmacology, 11, s. 133-41, 1994. Z údajů o chování a elektrofyziologických údajů je možno předpokládat, že účinek prostředku Wellbutrin je zprostředkován přes noradrenergní mechanismus.

Pokusy in vivo na depresi, vyvolanou tetrabenazinem

Tetrabenazin, TBZ vyvolává depresi chování, kterou je možno využít jako model při měření antidepresivního účinku in vivo. Tato zkouška již byla použita k vyhodnocení široké škály antidepresivních látek, o nichž je známo, že působí přes noradrenergní mechanismus, jak je popsáno v publikaci Cooper B. R. a další, Animal models ušed in the prediction of antidepressant effects in man, J. Clin. Psychiatry 44, 63-66, 1983. Mimo to byla tato zkouška použita i k identifikaci Wellbutrinu jako antidepresivního prostředku. Postupuje se tak, že se zvířatům podá účinná látka perorálně nebo intraperitoneálně 30 minut před intraperitoneální injekcí tetrabenazinu v dávce 35 mg/kg ve formě hydrochloridu, připraveného čerstvě před každým použitím. Hodnocení se provádí po 30 minutách, přičemž se hodnotí schopnost pohybu při použití stupnice 1 až 4, pokles víček při použití stupnice 1 až 4 a tělesná teplota podle publikace Cooper B. R. a další, Animal models ušed in the prediction of antidepressant effects in man, J. Clin. Psychiatry 44, 63-66, 1983. Všechny zkoušky byly prováděny jako slepé zkoušky. Všechny parametry byly zpracovány k získání celkového skóre X podle následující rovnice:

X = (1+skóre pro pokles víček)/(skóre pro aktivitu*[teplota ošetřených/teplota kontrolních]) • · · · • · · · · · • · · · · · • ······ · · • · · · ·

Výsledky, získané na živočišném modelu deprese, vyvolané tetrabenazinem jsou následující. Při podání 25 mg/kg sloučeniny vzorce I intraperitoneálně, při podání téhož množství racemátu, Wellbutrinu a pro srovnání amitryptylinu došlo vždy k potlačení deprese, vyvolané tetrabenazinem. Na druhé straně (-)-enanciomer měl pouze malou účinnost, jak je zřejmé z obr. 1.

Při zkouškách na modelu deprese po TBZ bylo možno prokázat, že sloučenina vzorce I je velmi účinná. Při analýze závislosti účinku na dávce došlo k vysokému zvýšení účinnosti mezi dávkami 3 mg/kg a 6 mg/kg intraperitoneálně, jak je zřejmé z obr. 2. V případě sloučeniny vzorce II naopak nebylo možno pozorovat závislost účinku na dávce a při dávce 50 mg/kg bylo naopak možno pozorovat zhoršení stavu zvířete, jak je zřejmé z obr. 3. Na obr. 2 a 3 znamená AMIT (5) amitryptylin v dávce 5 mg/kg a SHAM znamená kontrolní skupinu zvířat, které nebyla podána žádná účinná látka.

Vzhledem k tomu, že zkouška uvedeného typu je zkouška na možnost použití antidepresivních látek, působících přes noradrenergní mechanismus, přičemž sloučenina vzorce I je inhibitorem příjmu noradrenalinu a Wellbutrin je metabolizován in vivo na morfolinol, je pravděpodobné, že antidepresivní účinnost uvedeného prostředku je založena na účincích sloučeniny vzorce I, zejména v závislosti na obsahu publikace Welch, R. M., A. A. Lai, a D. H. Schroeder, Pharmacological significance of the species differences in bupropion metabolism, Xenobiotica, 17, s. 287-98, 1987.

Bylo by pravděpodobně možno uvedené poznatky rozšířit i na další účinky prostředku Wellbutrin. Noradrenergní mechanismus je společný látkám, užívaným k léčení ADHD, jako jsou methylfenidát nebo amfetamin. Molekulární mechanismus účinku Wellbutrinu na přerušení kouření zatím není dobře znám, je však známo, že • · katecholaminergní cestou je možno ovlivnit vlastnosti nikotinu, zejména ve smyslu zesílení jeho účinku na chování. Wellbutrin a také sloučenina vzorce I zvyšují uvolnění NA na mozkových synapsích a mohly by tedy napodobovat některé účinky nikotinu a tím zmírnit nepříjemné pocity po odnětí nikotinu. Naopak amfetaminy jsou užívány k léčení obezity. Vzhledem k tomu, že na tyto léky může vzniknout závislost, nejsou tyto léky často užívány. Wellbutrin způsobuje ztrátu hmotnosti a stejně jako amfetaminy působí přes noradrenergní mechanismus, jak bylo popsáno v publikaci Zarrindast M. R. a T. Hosseini-Nia, Anorectic and behavioural effects of bupropion, General Pharmacology, 19, s. 201-4, 1988 a Harto-Truax, N. et al., Effects of Bupropion on Body Weight, Journal of Clinical Psychiatry, 44, s. 1836, 1983. Avšak na rozdíl od amfetaminu Wellbútrin nevyvolává závislost podle publikace Lamb, R. J. a R. R. Griffiths, Selfadministration in Baboons and the Discriminative Stimulus Effects in Rats of Bupropion, Nomifensine, Diclofensine and Imipramine, Psychopharmacology, 102, s. 183-90, 1990, Bergman, J. et al., Effects of Cocaine and Related Drugs in Nonhuman Primates. III. Selfadministration by Squirrel Monkeys. Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 251, s. 150-5, 1989 and Johanson, C. E., and J. E. Barrett, The Discriminative Stimulus Effects of Cocaine in Pigeons. Journal of Pharmacology ane Experimental Therapeutics,

267, s. 1-8, 1993. Z uvedených důvodů je možno očekávat, že sloučenina vzorce I bude mít obdobný účinek v případě obezity a závislosti na kokainu.

Léčení závislosti na výrobcích s obsahem nikotinu může dosáhnout částečného nebo úplného úspěchu. Účinek uvedených látek byl měl zahrnovat také např. snížení množství cigaret v daném časovém období.

• · 9 • · · • · · ·· ··

Bezpečnost a toxicita

Byly provedeny zkoušky s různými dávkami účinných látek ke stanovení bezpečnosti podávání jednotlivých isomerů racemátu. Byly pozorovány zejména závažné nepříznivé účinky, jako různé záchvaty a uhynutí zvířat po podání sloučeniny vzorce I, vzorce II nebo racemátu při perorálním nebo intraperitoneálním podání. Údaje jsou uvedeny v následující tabulce 2.

Při perorálním podání v dávce 100 mg/kg perorálně bylo možno pozorovat záchvaty po podání sloučeniny vzorce II a racemátu, avšak nikoliv při podání sloučeniny vzorce I. Záchvaty byly pozorovány u všech zvířat při podání všech tří sloučenin od dávky 300 mg/kg. Mimo to dávka 300 mg/kg perorálně vedla k 80% uhynutí v případě racemátu a 100% uhynutí v případě sloučeniny vzorce II, při podání sloučeniny vzorce i v téže dávce však nedošlo k žádnému uhynutí.

Při intraperitoneálním podání došlo k vyvolání záchvatů v dávce 100 mg/kg všech sloučenin. Žádné uhynutí nebylo pozorováno v případě sloučeniny I, u sloučeniny II bylo uhynutí 100 % a v případě racemátu 20 %. Při podání dávky 300 mg/kg vedly všechny sloučeniny k uhynutí zvířat.

Tabulka 1. Účinek na příjem in vitro Příjem ³H-dopaminu

Sloučenina	IC50 (mM)	SEM
Bupropion	1,9	0,15
Vzorec I	9,3	0,41
Vzorec II	> 100

ft· ·· ftft • · · ft · · ftft ftftftft • · · ft · · ·

Příjem ³H-noradrenalinu

Sloučenina	IC50 (mM)	SEM
Bupropion	2,2	0,7
Vzorec I	1,1	0,07
Vzorec II	> 30
Imipramin	0.072	0,020

Příjem ^óH-serotoninu

Sloučenina	IC50 (mM)	SEM
Bupropion	> 30
Vzorec I	> 30
Vzorec II	> 100
Imipramin	0,24	0,03

Tabulka 2. Nepříznivé účinky při podávání sloučenin vzorce I, vzorce II a racemátu

Sloučenina	Způsob podání	Dávka mg/kg	Záchvat %	Doba do záchvatu min.	Uhynutí %	Doba do uhynutí min.
Vzorec I	i.p.	100	100	3,93	0	n/a
Vzorec I	p.o.	100	0	n/a	0	n/a
Vzorec I	i.p.	300	100	3,95	100	6
Vzorec I	p.o.	300	100	11,23	0	n/a
Vzorec II	i.p.	100	20	5	100	7
Vzorec II	p.o.	100	100	7,2	0	n/a
Vzorec II	i.p.	300	100	1,1	100	6
Vzorec II	p.o.	300	100	6,8	100	7
Racemát	i.p.	100	100	3	20	14
Racemát	p.o.	100	100	9,2	0	n/a
Racemát	i.p.	300	100	3	100	3
Racemát	p.o.	300	100	6,8	80	7

n/a = účinek nebyl pozorován

Claims (6)

1. Farmaceuticky přijatelné soli a solváty (+)-(2S,3S)-2-(3-chlorfenyl)-3,5,5-trimethyl-2-morfolinolu.

2. (+)-(2S,3S)-2-(3-chlorfenyl)-3,5,5-trimethyl-2-morfolinolhydrochlorid.

3. Farmaceutický prostředek, vyznačující se t i m, že jako svou účinnou složku obsahuje (+)-(2S,3S)-2-(3-chlorfenyl)-3,5,5-trimethyl-2-morfolinol nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli nebo solváty podle nároku 1 nebo 2 spolu s alespoň jedním farmaceuticky přijatelným nosičem, ředidlem nebo pomocnou látkou.

4. (+)-(2S,3S)-2-(3-chlorfenyl)-3,5,5-trimethyl-2-morfolinol nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát podle nároku 1 nebo 2 pro použití k léčebným účelům.

5. Použití (+)-(2S,3S)-2-(3-chlorfenyl)-3,5,5-trimethyl-2-morfolinolu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli nebo solvátu podle nároku 1 nebo 2 nebo farmaceutického prostředku s jeho obsahem podle nároku 3 pro výrobu farmaceutického prostředku k léčení deprese, poruch s projevy hyperaktivity a se snížením pozornosti ADHD, obezity, migrény, bolestivých stavů, sexuálních dysfunkcí, Parkinsonovy nebo Alzheimerovy choroby, návyku na kokain nebo návyku na výrobky s obsahem nikotinu, zvláště na tabák.

99 9 9 99 99 99

9 9 9 99 9 9 9 9 9 9

9 9 9 · 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9999 9 9 9 9 9 9 9 9 ·

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

20 ·· * ··· ** *· ·*

6. Způsob léčení deprese, poruch s projevy hyperaktivity a se snížením pozornosti ADHD, obezity, migrény, bolestivých stavů, sexuálních dysfunkcí, Parkinsonovy nebo Alzheimerovy choroby, návyku na kokain nebo návyku na výrobky s obsahem nikotinu, zvláště na tabák, vyznačující se tím, že se podává účinné množství (+)-(2S,3S)-2-(3-chlorfenyl)-3,5,5-trimethyl-2-morfolinolu nebo jeho farmaceuticky přijatelných solí nebo solvátů podle nároku 1 nebo 2 nebo farmaceutických prostředků podle nároku 3.