DK173599B1 - Fremgangsmåde til udvinding af pankreatin - Google Patents
Fremgangsmåde til udvinding af pankreatin Download PDFInfo
- Publication number
- DK173599B1 DK173599B1 DK198306055A DK605583A DK173599B1 DK 173599 B1 DK173599 B1 DK 173599B1 DK 198306055 A DK198306055 A DK 198306055A DK 605583 A DK605583 A DK 605583A DK 173599 B1 DK173599 B1 DK 173599B1
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- isopropyl alcohol
- pancreatin
- autolysis
- aqueous
- drying
- Prior art date
Links
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 title claims description 45
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 title claims description 45
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 33
- 238000011084 recovery Methods 0.000 title description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 140
- 208000035404 Autolysis Diseases 0.000 claims description 29
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 claims description 29
- 230000028043 self proteolysis Effects 0.000 claims description 29
- 239000000835 fiber Substances 0.000 claims description 15
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 13
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 12
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 12
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 11
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 claims description 10
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 9
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000005238 degreasing Methods 0.000 claims description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 4
- -1 alkali metal hydrogen carbonate Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 3
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 claims description 3
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 230000005484 gravity Effects 0.000 claims description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 210000004923 pancreatic tissue Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000008961 swelling Effects 0.000 claims description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 claims 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 33
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 33
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 33
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 16
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 14
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 14
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 13
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 13
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 13
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 11
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 10
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 9
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 9
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 9
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 9
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 8
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 8
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 8
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 8
- 108010013369 Enteropeptidase Proteins 0.000 description 6
- 102100029727 Enteropeptidase Human genes 0.000 description 6
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 6
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 6
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 4
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 4
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 3
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 3
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 3
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 3
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 2
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 description 2
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 1
- 102100030074 Dickkopf-related protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710099518 Dickkopf-related protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000010911 Enzyme Precursors Human genes 0.000 description 1
- 108010062466 Enzyme Precursors Proteins 0.000 description 1
- 208000035467 Pancreatic insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229960004494 calcium gluconate Drugs 0.000 description 1
- 235000013927 calcium gluconate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004227 calcium gluconate Substances 0.000 description 1
- NEEHYRZPVYRGPP-UHFFFAOYSA-L calcium;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanoate Chemical compound [Ca+2].OCC(O)C(O)C(O)C(O)C([O-])=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C([O-])=O NEEHYRZPVYRGPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000007872 degassing Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 239000002532 enzyme inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000012065 filter cake Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 230000000762 glandular Effects 0.000 description 1
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 150000005826 halohydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 235000019626 lipase activity Nutrition 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 238000013021 overheating Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 1
- 238000004080 punching Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 239000000344 soap Substances 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-N sodium;hydron;carbonate Chemical compound [Na+].OC(O)=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000010414 supernatant solution Substances 0.000 description 1
- 108010046845 tryptones Proteins 0.000 description 1
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/94—Pancreatin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
i DK 173599 B1
Fremgangsmåde til udvinding af pankreatin
Den ekstraherede blanding af enzymer fra pankreas (bugspytkirtelen) i alt væsentligt bestående af lipaser, amylase og proteaser betegner man 5 pankreatin. Pankreatin anvendes som aktivt stof til behandling af fordøjelses-forstyrrelser, der beror på pankreas insufficiens. Som udgangsmateriale tjener hovedsageligt svinepankreas i frisk eller frossen tilstand, fra hvilke oprindeligt kun vandet og fedtet blev udtrukket. På grund af enzymernes omfindtlighed måtte det dog ske meget forsigtigt.
10
Efter den endnu i dag sædvanlige fremgangsmåde gennemføres tørringen og affedtningen med opløsningsmidler, der samtidig opløser vand og fedt, f.eks. acetone eller højere alkoholer. Ifølge andre kendte fremgangsmåder udføres de to processer efter hinanden, for det meste først tørringen 15 (frysetørringsfremgangsmåde), dernæst affedtningen med et let flygtigt fedtopløsningsmiddel; eller omvendt: affedtning i flydende fase med carbonhydrider eller halogencarbonhydrider og derpå tørringen af den vandige fase.
20 Alle præparater af pankreatin, der blev fremstillet efter denne fremgangsmåde, har den ulempe, at proteaserne, f.eks. trypsin og chymotrypsin, ikke foreligger frit deri, men på deres inaktivt enzymogene form. De kan derfor ikke være aktive netop hos patienter, der ikke selv i legemet producerer enterokinase, og er altså fuldstændig uvirksomme. En 25 yderligere ulempe er fiberindholdet for disse pankreatiner, der stammer fra kirtelens bindevæv, og som er medicinsk værdiløst. Denne fiberandel forstyrrer ved den galeniske tilberedning ikke blot pressetrinnet, men hindrer også det ønskede henfald af det pressede stof på virkestedet, således at enzymet for en stor dels vedkommende forbliver uudnyttet.
30
Ved en nyere fremgangsmåde har man allerede taget hensyn til disse iagttagelser. Fibrene fjernes, og til opnåelse af aktiverede enzymer udføres en autolyse. Under denne autolyse bliver enzymerne dog ikke kun frigjort, DK 173599 B1 2 men også beskadiget. Således opnår man ved denne fremgangmåde ikke det fulde enzymudbytte.
Udførelsen af autolysen håndteres meget forskelligt. Ved fremgangsmåden 5 ifølge US patentskrift nr. 3.223.594 autolyseres f.eks. 2 timer ved stuetemperatur i nærværelse af meget vand. Ved fremgangsmåden ifølge de tyske offentliggørelsesskrifter nr. 26 30 289 og 27 16 719 autolyseres 15 timer ved 15 °C eller 4 timer ved 15 °C i nærværelse af med vand ublandbare fedtopløsningsmidler. Ifølge beskrivelsen til britisk patentskrift nr. l o 1.328.202 udføres autolysen i 1/2 til 2 timer ved 20 - 30 °C under tilsætning af natronlud eller ammoniak. I tysk fremlæggelsesskrift nr. 21 06 706 beskrives en autolyse, der til forbedring af enterokinase-aktiviteten strækker sig over 7 dage ved 4 °C i nærværelse af svineduodenum.
15 Ifølge US patentskrift nr. 3.223.594 opnås et udbytte på 11 vægt-% med enzymenheder på op til 10 x NF ((jf. nedenfor), hvilket svarer til ca. 69% af det mulige enzymudbytte, da 100 g kirtelvæv i almindelighed, tørret og affedtet tabsfrit, giver 20 g pankreatin af en kvalitet på 8 x NF.
20 i britisk patentskrift nr. 1.328.202 findes en kvalitetsangivelse på 6 -10 x NF, ved et vægtudbytte af sterilfiltreret pankreatin på 3,4%, hvilket altså kun svarer til 13 - 21% af det ifølge beregningerne mulige enzymudbytte. I de tyske offentliggørelsesskrifter nr. 26 20 289 og 27 16 719 anføres et fuldt enzymudbytte i henseende til lipase, mens udbytterne af amylase og af 25 proteaser øjensynligt ligger så meget lavere, at der slet ikke længere tales om pankreatin, men om et lipaserigt enzympræparat ("lipasereichen Enzympråparat").
Det ifølge beregninger mulige udbytte af aktive enzymer er altså hidtil 30 øjensynligt ikke blevet opnået. Der er heller ikke angivet noget om størrelsen af proteaseaktiveringen, der kan bestemmes i sammenligning med proteaseaktiviteten med og uden enterokinaseaktivering. Uden aktivering findes herunder 0,5 FIP-E/mg Of. nedenfor).
DK 173599 B1 3 I den foranstående omtale af teknikkens stade er NF en forkortelse for National Formulary, den offentlige amerikanske lægemiddelbog, udgivet af American Pharmaceutical Association. På side 514 af 13. oplag (NF XIII) beskrives pankreatin som et enzymholdigt stof, hvis amytaseaktivitet rækker 5 til i det mindste at overføre den 25-dobbelte vægtmængde af kartoffelstivelse i opløselige kulhydrater og også proteolysere den 25-dobbelte vægtmængde casein. Pankreatiner med større nedbrydningskraft forsynes med en tilsvarende mangedoblingsfaktor.
i o Således betyder f.eks. 4-dobbelt NF (eller 4 x NF) et pankreatin, i hvilket der er indeholdt så meget amylase, proteaser og lipaser, at 1 g af dette pankreatin kan katalysere overføringen af (4 gange sin 25-dobbelte vægt =) 100 g af det tilsvarende substrat (stivelse, casein, olivenolie).
15 Definitionen af FIP-enhederne gives af Commission of Pharmaceutical Enzymes" under "Fédération Internationale Pharmaceutique" (= FIP) i monografien "Pharmaceutical Enzymes" af R. Ruyssen og A. Lauwers, 1978,
Scientific Publishing Company, Gent, Belgien. På side 22 finder man den almene udtalelse, at 1 FIP-E katalyserer omsætningen af 1 mikromol eller 1 20 mikroækvivalent substrat pr. minut under ellers veldefinerede ydre betingelser eller - i tilfælde af at substratet ikke er tilstrækkelig kemisk defineret - giver 1 mikromol eller 1 mikroækvivalent reaktionsprodukt pr. minut. De ydre betingelser, der skal anvendes til bestemmelsen af de enkelte enzymer, er beskrevet på side 21 - 84.
25 FIP-enhederne bestemmes således ved en måling af den katalyserede begyndelsesreaktionshastighed og opnås derfor også hurtigere (og nøjagtigere) end den tidligere almindeligt anvendte NF-multiplicitet.
30 En brugbar omregningstabel fra Fl-E til x-gange NF-kvafitet (ekperimentelt) er givet i det følgende, som også omfatter lipaseenheder, skønt en lipasebestemmelse ikke er beskrevet I NF XIII. Derved er det antaget, at et pankreatinpræparat, der i henseende til amylase f.eks. blev analyseret som 6-dobbelt NF, også i henseende til proteaser og lipase er 6-dobbelt NF, at DK 173599 B1 4 aktivitetsforholdet mellem enzymerne i naturlig svinepankreas og enzymerne i deraf fremstillet pankreatinpræparat altså anses som konstant.
Den praktiske nytte ved angivelsen af NF-faktoren er den med et enkelt tal 5 udtrykkelige pankreatinkvalitet i henseende til aktiviteterne af alle deri indeholdte enzymer.
Erfaringsmæssigt svarer: 1-gange NF =6250 FIP-E/g pankreatin for amylase s 5000 " " lipase = 375 " " trypsin = 1250 " chymotrypsin ίο
Ved fordobling af FIP-værdien når man til 2-gange eller 2-dobbelt NF, osv.
Ved den kendte fremgangsmåde, der går ud fra et autolysat, dannes pankreatin aldrig på en form, der problemløst kan videreforarbejdes. Heller 15 ikke fremgangsmåder, ifølge hvilke man ud fra pankreas umiddelbart kan udvinde pankreatin, og det med høj massefylde efter udhældning, eksisterer strengt taget; man kunne højst regne med fremstillingen af et "lipaserigt enzympræparat" ifølge de i det foregående nævnte tyske offentliggørelsesskrifter, hvor man dog arbejder med betydelige tekniske omkostninger og tre 20 forskellige opløsningsmidler.
Det tilsigtes derfor med den foreliggende opfindelse at tilvejebringe en fremgangsmåde, der er så enkel som mulig og ufarlig, ved hjælp af hvilken fremgangsmåde man uden store tekniske omkostninger og med fuldt 25 enzymudbytte opnår pankreatin med den højeste enzymaktivitet og med frie proteaser, som desuden er kimfattig, risledygtig, med høj massefylde efter udhældning og fiberfri, og som praktisk taget uden tab af enzymer kan forarbejdes og oplagres. De væsentlige trin i autolyseringen af en vandig, eventuelt calciumionholdig pankreasvævsgrød eller en vandig vævs- DK 173599 B1 5 suspension omfatter fjernelse af fiberandele samt eventuel afvanding, affedtning, udfældning og tørring af den opnåede udfældning.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved, at man udfører 5 autolysen under tilsætning af op til 20 vægt-% isopropylalkohol, baseret på suspensionen, ved en pH-værdi på 6,5 - 8,5, fortrinsvis i nærværelse af en puffer, der er indstillet på pH 6,5 - 7,5, f.eks. op til 3% og især 1 - 1,5% alkalimetalhydrogencarbonat, baseret på den mængde væv, der er anvendt, og eventuelt i nærværelse af en lille smule af et calciumsalt, ved en 10 temperatur under 30 °C, og afbryder den, så snart en prøve af autolysesuspensionen i 55 - 65%’s vandig isopropylalkohol når en sedimentationshastighed på 3 - 10 mm på 1 - 3 minutter. Angivelsen er baseret på den frie sedimentation i jordens tyngdefelt, altså uden centrifugering.
15
Afslutningen af autolysen indtræder ved tilsætning af isopropylalkohol til hovedmængden af autolysatet til en koncentration på 30 - 35 vægt-%, baseret på summen af vand og isopropylalkohol; autolysatet, der herved samtidig er blevet tyndtflydende, kan sies fra bindevævsfibrene. Man indfører 20 det ved 15 - 25 °C i isopropylalkohol, således at der dannes en 55 - 65%'s opløsning, atter baseret på summen af vand og isopropylalkohol, fra hvilken pankreatinet udfælder på grov, kornet form og straks sedimenterer. Efter fjernelse af den ovenstående væske kan man vaske det sedimenterede pankreatin fedt- og tryptonfrit ved flere ganges udrøring med isopropylalkohol 25 og sedimentering. Bundfaldet skal endelig have en slutkoncentratlon mellem 50 og 85, fortrinsvis ca. 75 - 76 vægt-%, baseret på isopropylalkohol, og kan efter frasugning eller fracentrifugering tørres under formindsket tryk og behandling med tør luft (f.eks. med et indhold på under 20% relativ fugt ved 20 °C) eller med nitrogen. Den i det foregående beskrevne vask af 30 bundfaldet kan også ske med acetone i stedet for isopropylalkohol.
Ved angivelserne i det foregående i henseende til alkoholindholdet i de vandige opløsninger eller overliggende væsker forudsættes det, for så vidt DK 173599 B1 6 vægten af det anvendte råmateriale indgår i beregningen, at dettes vandindhold er 63 vægt-%.
Frem for alt må man bemærke den sidst angivne slutkoncentration af 5 isopropanol i bundfald, at ligevægtsindstillingen mellem bundfald og overliggende væske kan vare meget længe, da æggehvidestof fastholder vand meget kraftigt og derfor holdes der først en vandrig fase inde i den fældede partikel. Disse slutkoncentrationsangivelser er derfor heller ikke baseret på den analytiske sammensætning af opløsningsfasen, men er - som i o angivet i det foregående - beregnet.
Ved udøvelse af fremgangsmåden ifølge opfindelsen går man i praksis frem som følger: Den hakkede eller ituskårne pankreas tilsættes for bedre omrøring 20 - 80% vand. Autolysen finder skånsomt sted med ca. 1 -1,5% 15 natriumbicarbonat, dvs. uden en beskadigelse af enzymet, reguleret og centrifugeret på ønsket måde; en tilsætning på mere end 3% bicarbonat kunne bringe lagerbestandigheden af pankreatln i fare. Tilsætningen af en meget ringe mængde calciumsalt (f.eks. under 1%) begunstiger autolysen.
Med frigørelsen af proteaser fra deres proenzymer accelereres på den stadig 20 voksende frie protease først fordøjelsen af de medfølgende pankreas-æggehvidestoffer.
Men fordøjelsen overføres nu endeligt på de ømfindtlige enzymer, således at især amylase og også proteaserne selv beskadiges. Specielt for at skåne 25 proteaserne sættes op til 20% isopropylalkohol til blandingen, fortrinsvis ca.
10 - 15%. Denne tilsætning alene rækker dog ikke til at holde enzymaktiviteterne fuldt ud. Det er derfor vigtigt at finde frem til tidspunktet kort før den begyndende enzymbeskadigelse, på hvilket tidspunkt man gunstigst afbryder autolysen. Autolysevarigheden indtil dette tidspunkt 30 svinger nemlig også under ellers helt ens betingelser med op til 600% alt efter oprindelse, alder og opbevaring af bugspytkirtlerne, således at en almen tidsangivelse ikke er mulig.
DK 173599 B1 7
Ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen bestemmer man det gunstigste tidspunkt derved, at man med en enkel hurtig test på en prøve af autolysatet bestemmer den optimale sedimentationshastighed (afsætningshastighed) i 55 - 60%'s isopropylalkohol. Denne afsætningstest er faktisk den på små 5 prøver udførte videre forarbejdning af autolysatet til pankreatinfældning og iagttagelse af de sig stadig ændrende sedimentationsforhold. Hertil kan man f.eks. med tidsmellemrum på 0,5 time - hen imod slutningen også f.eks. for hver 10 eller 15 minutter - udtage 10 g af autolysatsuspensionen, omrøre med 5 mi 84%'s isopropylalkohol og udhælde den dannede opløsning under 10 omrøring i 20 ml 84%'s isopropylalkohol. Man bestemmer sedimentationshastigheden for det udfældede bundfald. Når der efter 3 minutters afsætningstid i 50 ml bægerglas f.eks. kan erkendes mere end 3-5 mm klart overlag, er den optimale sedimentationshastighed i reglen opnået og dermed også det søgte tidspunkt før enzymbeskadigelsen. Den begyndende 15 enzymbeskadigelse kan kendes derpå, at den overliggende væske (overlaget) ikke længere er klart (eller sedimentet er skilt fra den overliggende væske med en uklar zone).
Til opnåelse af ensartede autolyseforhold for forskellige portioner er det 20 gunstigt at tilsætte noget pankreatin fra en tidligere portion.
Autolysen kan udføres ved temperaturer på mellem -2 og 30 °C, fortrinsvis under 25 °C, hvorved det ikke er nødvendigt at holde en konstant temperatur.
Herved opnås en overflod af udnyttelsesmuligheder, såsom energi-25 besparelse, nat- og weekend-autolyse, arbejdsbesparelse. Det gunstige sluttidspunkt erkendes altid på udfældningstesten.
Den samlede portion tilsættes nu yderligere isopropylalkohol for at afbryde autolysen. Efter fremgangsmåden ifølge opfindelsen opnås ved kort omrøring 30 af blandingen ved et indhold på 30 - 35% isopropylalkohol (baseret på vand og alkohol) en fast, klar og tyndtflydende opløsning samt uopløste fibre, at fraskilfelsen af fibrene, også ved store portioner lykkes fuldstændig problemløst ved hjælp af en sigtekurv med en maskevidde på 4 - 5 mm, der bedst er forsynet med en omrører, for til sidst kun at tilbageholde en tør DK 173599 B1 8 fiberrest. Den frasiede opløsning lader man løbe ind i forud ophældt isopropylalkohol til pankreatinudfældning, hvor isopropylalkohol kan have et indhold på 80 - 100%, men foreligger i en mængde, der er tilstrækkeligt til efter blanding med den 30 - 35%'ige opløsning at give en 5 fældningskoncentration på 55 - 65% isopropylalkohol. Den vandige opløsning af tilbagevunden, såkaldt 84%’s isopropylalkohol, der - tilnærmet azeotropen på 88 vægt-% - indeholder ca. 84% alkohol, lader sig med fordel anvende.
Ved koncentrationen på under 55% er fældningen ufuldstændig og ville altså 10 medføre et udbyttetab. Ved over 65% medudfældes formodentlig uønskede enzyminhibitorer, hvorved aktiviteten af proteaserne synes lavere.
Efter fremgangsmåden ifølge opfindelsen opnåedes pankreatinfældning, der er så grovkornet, at den i løbet af 1 time har afsat sig til 10 - 20% af det 15 oprindelige volumen, og man kan fjerne den klare, overstående opløsning på enkel måde ved at hæve den op eller afpumpe den. Det afsatte bundfald kan vaskes på enkel måde ved omrøring med tilbagevunden 84%'s isopropylalkohol, og til sidst med frisk absolut isopropylalkohol med mellemliggende fornyet sedimentering på enkel måde. Denne 20 udfældningsmetodik er ganske vist beskrevet i britisk patentskrift nr. 1.328.202, men kunne ikke tilskrives nogen betydning, fordi sedimenteringen for det meste ikke lykkedes. Endvidere er det først ved den i opfindelsen omhandlede afsætningstest, at man muliggør en sikker fremgangsmåde.
25 På dette sted blev der efter andre sædvanlige fremgangsmåder anvendt en lukket centrifuge med inertgasbeskyttelse, som beskadiger produktet ved opvarmning og kræver en væsentlig længere tid til fraskillelse. En vask af pankreatin var kun mulig efter intensiv findeling i frisk opløsningsmiddel (med fare for tidlige overopvarmninger) og efterfølgende fornyet centrifugering, 30 hvorved der bruges megen energi og arbejdstid.
Fra de overliggende væsker, der hæves op, kan isopropylalkoholen tilbagevindes ved destillation. Destillationsresten skiller sig i et nedre vandigt lag, der opløst indeholder tryptoner og sæbe, og et derpå svømmende DK 173599 B1 9 fedtlag, der størkner efter afkøling. Den tilbagevundne 84%’ige isopropylalkohol kan anvendes igen direkte på ethvert sted i fremgangsmåden ifølge opfindelsen.
5 Indstillingen af isopropylalkoholindholdet på 70 - 87% er gunstigt for den i det følgende beskrevne tørringsproces; i stedet for isopropylalkohol kunne også anvendes acetone i en koncentration på 80 - 95%, hvorved dog opløsningsmidlet måtte udskiftes.
10 Den opnåede pankreatin-udfældningsrest lader sig fremragende filtrere og kan derfor på en enkleste måde frasuges i en Nutsche. Naturligvis kan man også anvende et selvstændigt arbejdende filter eller en automatisk centrifuge. Man kan gøre resten holdbar på sædvanlig måde, f.eks. ved frysetørring; fortrinsvis går man dog frem som følger: 15
Under tørringen af kagen, som indeholder vedhæftende moderlud med et indhold på 70 - 85%, fortrinsvis 75 - 80%, isopropylalkohol, iagttages en stærk volumenkoncentration. Denne skrumpningsproces fører til pankreatin med høj massefylde efter udhældning (0,5 - 0,7 g/ml), som efter 20 grovformaling danner godt risledygtige småkorn. Indeholder pankreatinen, der skal tørres, derimod isopropylalkohol i en mængde på væsentligt over 85 - 86%, sker der en kontraktion, og der dannes et produkt med så lav massefylde efter udhældning (0,2 g/ml), at det let oplades elektrostatisk og således er vanskeligt at håndtere. Indeholder det pankreatin, der skal tørres, 25 på den anden side isopropylalkohol i en mængde på under 70%, sker der ganske vist den ønskede volumenkontraktion, men lipasen udsættes for en vis beskadigelse, selv når tørringen udføres ved 0 °C og formindsket tryk. En enzymbeskadigelse kan også indtræde, hvis man tørrer over 25 °C, eller hvis tørringen - med eller uden anvendelse af formindsket tryk - foretages med 3 o luft, der ved 20 °C har et relativt fugtindhold på mere end 20%. Angivelserne i det foregående afhænger i nogen grad af isopropylalkoholindholdet.
Det ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede pankreatin er kimfattigt. Kimene forbliver for størstedelens vedkommende i fibrene, fra DK 173599 B1 10 hvilke pankreatin-opløsningen frasigtes. Desuden er indvirkningen af isopropylalkohol i den nødvendige koncentration som bekendt en foranstaltning til drab af kim, især fordi i den til at begynde med rent vandige suspension eventuelt tilstedeværende sporer under autolysen går over i 5 deres ømfindtlige, vegetative form.
Den gode bestandighed af pankreatin fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen er tydelig i en belastningstest, der tager en yderligere forarbejdning til drageer i betragtning: Belastningen består deri, at pankreatin 10 først oplagres i fri luft ved 20 °C og 58% relativ fugt i 20 timer og derefter opvarmes 24 timer ved 50 °C i en lukket beholder.
TABEL I
15 Sammenligning mellem amylase- og lipasestabilitet af pankreatiner, der er fremstillet efter en fremgangsmåde hidrørende til teknikkens stade og efter
fremgangsmåden ifølge opfindelsen. Pankreatineme nr. 1, 2 og 3 er I
handelen tilgængelige præparater fra forskellige leverandører. Pankreatin nr.
4 er fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen.
20 _____
Amylase Lipase
Udgangs- Udgangs-
Pankreatin nr. Belastningstab Belastningstab aktivitet aktivitet __i FIP-E/mg___i FIP-E/mg__ 1. __43J__6%___407__7% 2. __572__43%__370__14% 3. __570__41%__48,3%__31% 4. 93,6 3% 90,3 6%
Tabel 1 viser, at for de hidtil kendte pankreatiner stiger tabene ved belastning stærkt med enzymaktiviteten. Overraskende viser det sig dog, at det ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede pankreatin trods væsentligt 25 højere enzymaktivitet har det laveste tab ved belastning.
DK 173599 B1 11
EKSEMPEL
100 kg dybfrosne svinepankreas hakkes eller sønderdeles og omrøres i en 250 liter beholder med en opløsning af 100 g calciumgluconat i 20 liter vand 5 sammen med 200 g silicone-skumdæmpende middel. Alt efter indholdet af fri trypsin i kirtlerne tilsættes op til 1 kg færdigt pankreatin opløst i 5 liter vand som starthjælp for autolysen. Denne pankreatinmængde bestemmes ved den i det følgende beskrevne "37°-hydrolyseprøve". Til dette formål udtages på dette sted 100 g af reaktionsblandingen.
10
Efter tilsætning af 15 liter 84%’s isopropylalkohol indrøres yderligere en opløsning af 1,5 kg natriumhydrogencarbonat i 20 liter vand. Man lader blandingen henstå natten over, hvorved temperaturen stiger fra ca. 2 til ca.
12 °C, opvarmer næste morgen til 20 °C og omrører videre ved denne 15 temperatur.
Sluttidspunktet for hydrolysen ses af afsætningstesten. Dertil udtages under den sidste del af autolysen først hver halve time, senere hvert kvarter, 10 g af suspensionen, som omrøres 1 minut med 5,4 ml 84%'s isopropylalkohol ved 20 hjælp af en glasstav. Den dannede opløsning skilles fra de til glasstaven klæbende fibre og indrøres i 20 ml 84%'s vandig isopropylalkoholopløsning, der er anbragt i et 50 ml bægerglas med magnetomrører. Efter 1 minuts forløb slår man omrøringen fra og lader udfælde i 1 eller 3 minutter.
25 Prøven bedømmes positivt og autolysen som afsluttet, så snart man kan erkende et overlag på 3 mm efter 1 minuts forløb eller 10 mm efter 3 minutters forløb (mere eller mindre klart). Som eksempel gengives en typisk afsætningsrække, der begyndes, så snart autolysatet har nået 20 °C.
DK 173599 B1 12
AFSÆTNINGSTEST
Autolysevarighed mm/0,5min. svarer til svarer til mm/3 ved 20 °C__mm/1 min.__min._ 1.00 time__0__0__0_ 2.00 time__0__0__0_ 2.50 time__0__0__1_ 2.75 time__0__1__4_ 3.00 time__1__3__10_ 3,25 time__3__6__18_ 3.50 time__5__10__20_ 3.75 time__9__18__20_ 4 00 time 14 20 | 20 1 dette eksempel opnår man altså det gunstigste tidspunkt til afslutning af 5 autolysen efter 3 timers forløb. For at opnå i det mindste næsten sammenlignelige forhold ved anvendelse af et andet, ukendt (f.eks. længere eller kortere lagret) svinepankreaspræparat, udføres "37°-hydrolyseprøven”: man udtager 120 g af kirtelgrøden, der er tilsat Ca-gluconat, tilsætter 1,5 g natriumhydrogencarbonat i 25 ml vand og omrører 30 minutter ved 37 °C.
10 Med en prøve af dette hurtige autolysat udføres afsætningstesten. Ved under 2 mm/3 min. tilsættes 2 mio. E frit trypsin, ved op til 12 mm/l min. tilsættes 1 mio. E frit trypsin, og ved endnu højere afsætningshastighed tilsættes intet frit trypsin til hovedmængden (i form af pankreatin). (1 mio. E frit trypsin er f.eks. indeholdt i 250 g pankreatin ved 4000 E/g.) På denne måde kan man 15 standardisere råmaterialer af forskellig oprindelse til driftspraksis.
Efter nu at have fundet det gunstigste tidspunkt bliver autolysen af portionen afsluttet ved indpumpning af 72,5 liter 84%’s (tiibagevunden) isopropylalkohol. Man omrører endnu 0,5 time, hvorved der dannes en klar 20 opløsning ved siden af uopløste fibre, fra hvilke den afsies. Beholderindholdet i en åben 50 liter beholder med indlagt si med maskevidde på ca. 5 mm fraføres, hvilken beholder er forsynet med en ankerrører. Bundafløbet fra beholderen er via en pumpe forbundet med en 500 liter DK 173599 B1 13 polypropylenbeholder. Den er fyldt med 318 liter tilbagevunden 84%'s isopropylalkohol og fyldes igen under langsom omrøring med den fraførte, siede opløsning. De i beholderen med sien tilbageblevne fibre omrøres endnu 10 minutter tørt. Vægten af fibre andrager 7 - 8 kg.
5 I 500 liter beholderen afsætter det udfældede pankreatln sig som groft bundfald på 1 time i et volumen på 80 liter (ved 20 °C; ved 24 °C på 0,5 time). Den overliggende væske fjernes ved hævning, og tilbagedestillationen tilføres. Bundfaldet omrører man med 63 liter tilbagevunden 84%'s 10 isopropylalkohol, og man lader henstå natten over til afsætning endnu en gang. Næste dag gentages denne fremgangsmåde, og det således opnåede bundfald tilsættes ca. 45 liter 84%'s isopropylalkohol, dvs. så meget som nødvendigt til at fremstille en pankreatinsuspension i 76%'s isopropylalkohol.
Denne suspension filtreres ved hjælp af en Nutsch med en diameter på 40 15 cm og suges godt tør.
Filterkagen findeles kort i et sønderdelingsapparat og udbredes på en plade. Tørringen sker natten over ved en opvarmningstemperatur på 55 °C underet vacuum på ca. 5 mbar.
20 DK 173599 B1 14
Pankreatinudbytte 11,6 kg
Amylaseaktivitet 93,6 FIP-E/mg
Lipaseaktivitet 90,3 FIP-E/mg
Proteaseaktivitet aktiveret med enterokinase 5,6 FIP-E/mg uden aktivering 5,6 FIP-E/mg
Trypsinaktivitet aktiveret med enterokinase 4,2 FIP-E/mg uden aktivering 4,1 FIP-E/mg
Chymotrypsinaktivitet aktiveret med enterokinase 28,3 FIP-E/mg uden aktivering 28,3 FIP-E/mg Tørstofindhold 98,7%
Fedtindhold 0,4%
Massefylde efter udhældning 0,65 g/ml
Massefylde efter stampning 0,76 g/ml
Kimtal 200 kim/g
ingen uønskede kim ifølge US XVII
Claims (5)
1. Fremgangsmåde til udvinding af pankreatin ved autolyse af en vandig, 5 eventuelt calciumionholdig pankreasvævssuspension, fjernelse af fiberandelene, eventuelt afvanding, affedtning, samt udfældning og tørring af det udfældede kendetegnet ved, at man foretager autolysen under tilsætning af op til 20 vægt-% isopropylalkohol, baseret på suspensionen, ved en pH-værdi på 6,5 - 8,5 ved en temperatur under 30 °C lo og afbryder den, så snart en prøve i 55 - 65%’s vandig isopropylalkohol når en i jordens tyngdefelt målt sedimentationshastighed på 3 -10 mm/l i op til 3 min.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1,kendetegnet ved, at man foretager 15 indstillingen af pH-værdien med op til 3% alkalimetalhydrogencarbonat, baseret på den mængde væv, der er anvendt.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1,kendetegnet ved, at man foretager autolysen i nærværelse af pankreatin fra en tidligere portion. 20
4. Fremgangsmåde ifølge krav 1,kendetegnet ved, at man afbryder autolysen ved tilsætning af isopropylalkohol til en koncentration på 30 - 35% baseret på summen af vand og isopropylalkohol, sier præparatet, der er blevet tyndtflydende, fra bindevævsfibrene, ved en temperatur på 15 - 25 °C 25 indfører opløsningen i så meget isopropylalkohol, at der dannes en 55 - 65 vægt-%'s vandig opløsning, lader det udfældede pankreatin sedimentere i kornet form, efter fjernelse af den ovenstående væske vasker fedt- og tryptonfrit ved eventuelt flere gange omrøring med isopropylalkohol og sedimentering, og tørrer, fortrinsvis under formindsket tryk. 30
5. Fremgangsmåde ifølge krav 4, kendetegnet ved, at man lader det udfældede pankreatin sedimentere og efter fraførsel af den overliggende væske ved hævning eller frasugning vasker fedt- og tryptonfrit ved eventuelt flere ganges udrøring med isopropylalkohol eller acetone, indtil der er dannet DK 173599 B1 16 et bundfald med en koncentration mellem 70 og 85%, baseret på isopropylalkohol, eller 80 - 95%, baseret på acetone, som man frasuger eller fracentrifugerer, og tørrer under behandling med tør luft eller nitrogen ved under 25 °C fortrinsvis under formindsket tryk. 5
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3248587 | 1982-12-30 | ||
| DE19823248587 DE3248587A1 (de) | 1982-12-30 | 1982-12-30 | Verfahren zur gewinnung von pankreatin |
| DE3248588 | 1982-12-30 | ||
| DE19823248588 DE3248588A1 (de) | 1982-12-30 | 1982-12-30 | Verfahren zur gewinnung von pankreatin von hohem schuettgewicht |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK605583D0 DK605583D0 (da) | 1983-12-29 |
| DK605583A DK605583A (da) | 1984-07-01 |
| DK173599B1 true DK173599B1 (da) | 2001-04-23 |
Family
ID=25807022
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK198306055A DK173599B1 (da) | 1982-12-30 | 1983-12-29 | Fremgangsmåde til udvinding af pankreatin |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4623624A (da) |
| EP (1) | EP0115023B1 (da) |
| AR (1) | AR232000A1 (da) |
| BR (1) | BR8307280A (da) |
| CA (1) | CA1208580A (da) |
| DD (1) | DD212981A5 (da) |
| DE (1) | DE3377506D1 (da) |
| DK (1) | DK173599B1 (da) |
| ES (1) | ES528537A0 (da) |
| HU (1) | HU196435B (da) |
| MD (1) | MD411C2 (da) |
| PL (1) | PL141118B1 (da) |
| SU (1) | SU1644712A3 (da) |
| UA (1) | UA5996A1 (da) |
| YU (1) | YU45584B (da) |
Families Citing this family (47)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2030581C (en) * | 1989-11-24 | 2000-06-27 | Gunther Atzl | Pancreatin preparations |
| CA2198317C (en) * | 1997-02-24 | 2003-01-07 | Mouhsine El Abboudi | Method for preparing pancreatin which contains low amounts of residual organic solvent and product thereof |
| US6632429B1 (en) | 1999-12-17 | 2003-10-14 | Joan M. Fallon | Methods for treating pervasive development disorders |
| KR100367659B1 (ko) * | 2000-05-08 | 2003-01-14 | 주식회사 바이넥스 | 선택적 안정화제의 첨가에 따른 자가분해(autolysis)를 통한 고역가 판크레아틴의 제조방법 |
| US20070053895A1 (en) | 2000-08-14 | 2007-03-08 | Fallon Joan M | Method of treating and diagnosing parkinsons disease and related dysautonomic disorders |
| IT1319655B1 (it) | 2000-11-15 | 2003-10-23 | Eurand Int | Microsfere di enzimi pancreatici con elevata stabilita' e relativometodo di preparazione. |
| US8030002B2 (en) | 2000-11-16 | 2011-10-04 | Curemark Llc | Methods for diagnosing pervasive development disorders, dysautonomia and other neurological conditions |
| CA2419572A1 (en) * | 2003-02-18 | 2004-08-18 | Axcan Pharma Inc. | High dosage protease formulation |
| JP4891766B2 (ja) * | 2003-07-29 | 2012-03-07 | ゾルファイ ファーマスーティカルズ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | パンクレアチン及び比較可能な組成物のための分析法 |
| AU2005227090B2 (en) * | 2004-03-22 | 2010-12-09 | Abbott Laboratories Gmbh | Oral pharmaceutical compositions of lipase-containing products, in particular of pancreatin, containing surfactants |
| US7153504B2 (en) * | 2004-07-30 | 2006-12-26 | Can Technologies, Inc. | Stabilized pancreas product |
| CN101184780B (zh) | 2005-05-05 | 2012-10-03 | 森馨香料公司 | β-葡聚糖和甘露聚糖的制备 |
| AU2006274835B2 (en) | 2005-07-29 | 2012-05-24 | Abbott Laboratories Gmbh | Processes for the manufacture of sterilized pancreatin powder |
| US11266607B2 (en) * | 2005-08-15 | 2022-03-08 | AbbVie Pharmaceuticals GmbH | Process for the manufacture and use of pancreatin micropellet cores |
| US9198871B2 (en) * | 2005-08-15 | 2015-12-01 | Abbott Products Gmbh | Delayed release pancreatin compositions |
| US20080058282A1 (en) | 2005-08-30 | 2008-03-06 | Fallon Joan M | Use of lactulose in the treatment of autism |
| TW200745337A (en) * | 2006-02-24 | 2007-12-16 | Aminotech As | Modified process |
| US10072256B2 (en) * | 2006-05-22 | 2018-09-11 | Abbott Products Gmbh | Process for separating and determining the viral load in a pancreatin sample |
| US8221747B2 (en) | 2007-02-20 | 2012-07-17 | Aptalis Pharma Limited | Stable pancreatic enzyme compositions |
| US20090130063A1 (en) * | 2007-11-15 | 2009-05-21 | Solvay Pharmaceuticals Gmbh | Process for separating and determining the viral load in a pancreatin sample |
| US10087493B2 (en) | 2008-03-07 | 2018-10-02 | Aptalis Pharma Canada Ulc | Method for detecting infectious parvovirus in pharmaceutical preparations |
| US8658163B2 (en) | 2008-03-13 | 2014-02-25 | Curemark Llc | Compositions and use thereof for treating symptoms of preeclampsia |
| US8084025B2 (en) | 2008-04-18 | 2011-12-27 | Curemark Llc | Method for the treatment of the symptoms of drug and alcohol addiction |
| US9320780B2 (en) | 2008-06-26 | 2016-04-26 | Curemark Llc | Methods and compositions for the treatment of symptoms of Williams Syndrome |
| ES2732453T3 (es) * | 2008-07-01 | 2019-11-22 | Curemark Llc | Métodos y composiciones para el tratamiento de síntomas de trastornos neurológicos y de salud mental |
| US10776453B2 (en) | 2008-08-04 | 2020-09-15 | Galenagen, Llc | Systems and methods employing remote data gathering and monitoring for diagnosing, staging, and treatment of Parkinsons disease, movement and neurological disorders, and chronic pain |
| EP2165717A1 (de) * | 2008-08-27 | 2010-03-24 | Nordmark Arzneimittel GmbH & Co.KG | Verfahren zur Verringerung der viralen und mikrobiellen Belastung feststoffhaltiger biologischer Extrakte |
| US20100092447A1 (en) | 2008-10-03 | 2010-04-15 | Fallon Joan M | Methods and compositions for the treatment of symptoms of prion diseases |
| WO2010080835A1 (en) | 2009-01-06 | 2010-07-15 | Curemark Llc | Compositions and methods for the treatment or the prevention oral infections by e. coli |
| AU2010203709B2 (en) | 2009-01-06 | 2014-05-22 | Galenagen, Llc | Compositions and methods for the treatment or prevention of Staphylococcus Aureus infections and for the Eradication or reduction of Staphylococcus Aureus on surfaces |
| US9056050B2 (en) * | 2009-04-13 | 2015-06-16 | Curemark Llc | Enzyme delivery systems and methods of preparation and use |
| US9511125B2 (en) | 2009-10-21 | 2016-12-06 | Curemark Llc | Methods and compositions for the treatment of influenza |
| SI2621476T1 (sl) | 2010-10-01 | 2014-12-31 | Aptalis Pharma Limited | Gastrorezistentne obloĹľene pankrelipazne formulacije z nizko trdnostjo |
| DK2701733T3 (da) | 2011-04-21 | 2019-05-27 | Curemark Llc | Forbindelser til behandling af neuropsykiatriske forstyrrelser |
| ES2558756T3 (es) | 2011-08-08 | 2016-02-08 | Aptalis Pharma Limited | Método para la prueba de disolución de composiciones sólidas que contienen enzimas digestivas |
| US10350278B2 (en) | 2012-05-30 | 2019-07-16 | Curemark, Llc | Methods of treating Celiac disease |
| EP3024479B2 (en) * | 2013-07-22 | 2023-02-08 | Allergan Pharmaceuticals International Limited | Methods of preparing pancreatin |
| ES2784227T3 (es) | 2013-08-09 | 2020-09-23 | Allergan Pharmaceuticals Int Ltd | Composición de enzimas digestivos adecuada para la administración entérica |
| BR112016000658A2 (pt) * | 2013-11-05 | 2018-03-20 | Allergan Pharmaceuticals International Limited | pancreatina de alta atividade, processo para a preparação de pancreatina de aa tendo atividade lipásica específica de pelo menos aproximadamente 120 usp iu/mg e método de tratamento de um paciente sujeito a uma condição patológica associada com a insuficiência enzimática pandreática |
| CA2947998A1 (en) | 2014-06-19 | 2015-12-23 | Aptalis Pharma Ltd. | Methods for removing viral contaminants from pancreatic extracts |
| US20160120964A1 (en) | 2014-11-05 | 2016-05-05 | George Shlieout | Processes for producing compositions with improved safety profile having lipase activity and compositions suitable for pharmaceutical use |
| US11278603B2 (en) | 2016-03-28 | 2022-03-22 | Abbvie Inc. | Enzyme compositions with reduced viral and microbial contamination |
| WO2017172619A1 (en) | 2016-03-28 | 2017-10-05 | Abb Vie Inc. | Enzyme compositions with reduced viral and microbial contamination |
| CN111630164A (zh) | 2017-09-27 | 2020-09-04 | 雅培制药股份有限公司 | 具有减少的病毒和微生物污染的酶组合物 |
| CN108316036A (zh) * | 2018-01-25 | 2018-07-24 | 陕西科技大学 | 一种豆渣制备微纤化纤维素的方法 |
| US11541009B2 (en) | 2020-09-10 | 2023-01-03 | Curemark, Llc | Methods of prophylaxis of coronavirus infection and treatment of coronaviruses |
| WO2024105193A1 (en) * | 2022-11-17 | 2024-05-23 | Koptyug Andrey V | Novel compounds and methods |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB928654A (en) * | 1960-10-25 | 1963-06-12 | Philips Nv | Improvements in or relating to the production of pancreatin |
| GB1328202A (en) | 1969-06-17 | 1973-08-30 | Union International Co Ltd | Manufacture of pancreatin |
| DE2106706B2 (de) * | 1971-02-12 | 1973-05-10 | Wilson Pharmaceutical & Chemical Corp., Chicago, 111. (V.St.A.) | Verfahren zur herstellung von pankreatin als trockenes pulver mit hoher proteolytischer, amylolytischer und lipolytischer aktivitaet |
| MX4738E (es) | 1976-05-07 | 1982-08-25 | Nattermann A & Cie | Procedimiento para fabricar preparados enzimaticos ricos en lipasa |
| DE2620289C2 (de) * | 1976-05-07 | 1982-05-19 | A. Nattermann & Cie GmbH, 5000 Köln | Herstellung eines lipasereichen Enzympräparates |
-
1983
- 1983-12-20 DE DE8383112809T patent/DE3377506D1/de not_active Expired
- 1983-12-20 EP EP83112809A patent/EP0115023B1/de not_active Expired
- 1983-12-23 US US06/565,220 patent/US4623624A/en not_active Expired - Lifetime
- 1983-12-28 PL PL1983245381A patent/PL141118B1/pl unknown
- 1983-12-28 AR AR295280A patent/AR232000A1/es active
- 1983-12-28 CA CA000444332A patent/CA1208580A/en not_active Expired
- 1983-12-28 YU YU252483A patent/YU45584B/sh unknown
- 1983-12-29 HU HU834516A patent/HU196435B/hu not_active IP Right Cessation
- 1983-12-29 BR BR8307280A patent/BR8307280A/pt not_active IP Right Cessation
- 1983-12-29 SU SU833682185A patent/SU1644712A3/ru active
- 1983-12-29 DD DD83258863A patent/DD212981A5/de not_active IP Right Cessation
- 1983-12-29 DK DK198306055A patent/DK173599B1/da not_active IP Right Cessation
- 1983-12-29 ES ES528537A patent/ES528537A0/es active Granted
- 1983-12-29 UA UA3682185A patent/UA5996A1/uk unknown
-
1994
- 1994-12-29 MD MD95-0074A patent/MD411C2/ro unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0115023B1 (de) | 1988-07-27 |
| CA1208580A (en) | 1986-07-29 |
| US4623624A (en) | 1986-11-18 |
| EP0115023A3 (en) | 1986-04-09 |
| YU45584B (sh) | 1992-07-20 |
| DK605583A (da) | 1984-07-01 |
| DK605583D0 (da) | 1983-12-29 |
| DD212981A5 (de) | 1984-08-29 |
| EP0115023A2 (de) | 1984-08-08 |
| HU196435B (en) | 1988-11-28 |
| ES8407516A1 (es) | 1984-09-16 |
| AR232000A1 (es) | 1985-04-30 |
| DE3377506D1 (en) | 1988-09-01 |
| UA5996A1 (uk) | 1994-12-29 |
| ES528537A0 (es) | 1984-09-16 |
| BR8307280A (pt) | 1984-08-07 |
| PL245381A1 (en) | 1984-10-22 |
| SU1644712A3 (ru) | 1991-04-23 |
| YU252483A (en) | 1986-10-31 |
| MD411C2 (ro) | 1996-06-30 |
| PL141118B1 (en) | 1987-06-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK173599B1 (da) | Fremgangsmåde til udvinding af pankreatin | |
| Skeggs Jr et al. | The purification of hypertensin II | |
| CA2193354A1 (en) | Composition containing collagenase and chymopapain for isolating hepatocytes and pancreatic islet cells | |
| CN108623675A (zh) | 鲜螺旋藻中藻蓝蛋白、叶绿素和螺旋藻多糖的提取工艺 | |
| Dudley | The Purification of Insulin and some of its Properties | |
| CA2314608C (en) | Procedure for extraction and use of hatching fluid from atlantic salmon | |
| Hanes | The determination of starch in plant tissue, with particular reference to the apple fruit | |
| CN111748518B (zh) | 心肌细胞的分离试剂和分离方法 | |
| Bawden et al. | Methods for the purification of tomato bushy stunt and tobacco mosaic viruses | |
| Dounce et al. | Action of mitochondrial DNAase I in destroying the capacity of isolated cell nuclei to form gels | |
| Taylor et al. | Isolation and properties of a macromolecular component of normal chick embryo tissue | |
| CN111575236A (zh) | 一种人肝癌组织和肝脏组织活性单细胞悬液的制备方法 | |
| CN112210533A (zh) | 一种小鼠主动脉细胞单细胞悬液制备的方法 | |
| CN104726440A (zh) | 一种蜗牛酶的制备方法 | |
| JPH0559390A (ja) | オリーブ油の抽出法 | |
| US2922749A (en) | Enzymes | |
| Clark Jr et al. | [69] In vitro translation of STNV-RNA | |
| CN109627282B (zh) | 鹿胎盘活性蛋白及其提取方法和应用 | |
| US2703779A (en) | Method of preparing stable watersoluble catalase of high potency | |
| SU899611A1 (ru) | Способ производства жемчужного пата из чешуи рыб | |
| DK166393B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af vandige organekstrakter med et heparinindhold paa mindst 120 ie/ml | |
| US2449076A (en) | Process of extracting antidiabetic substance from pancreas | |
| Kaufmann | Cytochemical Studies of the Action of Trypsin: I. Digestion of Salivary-Gland Chromosomes | |
| Hurst | A rapid method for the large scale preparation of calf thymus deoxyribonucleate | |
| US3622389A (en) | Processing of saponaria vaccaria seed |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| B1 | Patent granted (law 1993) | ||
| PBP | Patent lapsed |
Country of ref document: DK |