DK170421B1 - Pristinamycin IIB-derivater, fremgangsmåde til deres fremstilling og farmaceutiske præparater deraf - Google Patents

Description

DK 170421 B1

Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte pri-stinamycin lig-derivater, en fremgangsmåde til deres fremstilling og farmaceutiske præparater deraf.

Opfindelsen angår nærmere bestemt hidtil ukendte 5 pristinamycin lig-derivater med den almene formel I

rWr-r" o o CH> V° (I> ^ν>-Λν

l, AJ *-T

hvori R betyder 15 a) en alkylthiogruppe, der er substitueret med (i) en eller to alkylamino- eller dialkylamino-grupper, hvis alkyIdele eventuelt sammen med nitrogenatomet, hvortil de er bundet, danner en mættet heterocy-clus valgt blandt 1-pyrrolidinyl, piperidino, 1-azetidinyl, 2 0 l-azepinyl, morpholino, thiomorpholino og 1-piperazinyl (eventuelt substitueret med en alkylgruppe) eller med (ii) 2- eller 3-pyrrolidinyl, 2-, 3- eller 4--piperidyl, 2- eller 3-azetidinyl eller 2-, 3- eller 4--azepinyl,

b) en gruppe med den almene formel II

Het-S- (II) hvori Het betyder 3-pyrrolidinyl, 3- eller 4-piperidyl, 30 3-azetidinyl eller 3- eller 4-azepinyl (eventuelt substitueret med en alkylgruppe ved nitrogenatomet), eller c) en dialkylaminogruppe, hvis alkyldele eventuelt sammen med nitrogenatomet, hvortil de er bundet, danner en mættet heterocyclus valgt blandt 1-pyrrolidinyl, piperidino, 1-azetidinyl, l-azepinyl, morpholino, thiomorpholino og 1-piperazinyl (eventuelt substitueret med en alkylgruppe), 35 2 DK 170421 B1 idet alkylgruppe'rne og alkyldelene, der er nævnt ovenfor eller nævnes i det følgende, er ligekædede eller forgrenede og indeholder 1-5 carbonatomer, eventuelt i deres isomere former og deres blandinger, samt deres additionssalte med * 5 farmaceutisk acceptable syrer.

Opfindelsen angår også en fremgangsmåde til fremstilling af pristinamycin IIB-derivater ifølge opfindelsen, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at en forbindelse med den almene formel III

10 R-H (III) hvori R har den ovenfor angivne betydning, omsættes med pristinamycin 11¾ med formlen IV 15 “ vW’ " hvorefter det fremkomne produkt i påkommende tilfælde adskilles i sine isomere og eventuelt omdannes til additions-25 salt med en farmaceutisk acceptabel syre.

Omsætningen gennemføres sædvanligvis uden opløsningsmiddel eller i et organisk opløsningsmiddel som methanol eller ethanol eller et chloreret opløsningsmiddel som methylenchlorid, 1,2-dichlorethan eller chloroform, eller 30 i en blanding af disse opløsningsmidler (f.eks. methylen-chlorid/methanol) ved en temperatur mellem 0 og 50°C.

Det kan eventuelt være fordelagtigt at arbejde i nærværelse af en tertiær amin, f.eks. triethylamin, eller en ethanolamin, f.eks. dimethylethanolamin.

35 Det vil forstås af en fagmand, at når R betyder en gruppe, der indeholder en sekundær aminfunktion, der kan 0 3 DK 170421 B1 interferere med reaktionen, bør denne funktion være beskyttet i forvejen, før forbindelsen med den almene formel III omsættes med forbindelsen med formlen IV. Der kan til dette formål anvendes enhver gængs metode til at blokere en 5 sekundær aminfunktion i form af en labil gruppe, der kan fjernes efter omsætning af forbindelsen med den almene formel III med forbindelsen med formlen IV. Det er særlig fordelagtigt at anvende en trifluoracetylgruppe som blokerende gruppe. Denne kan derefter fjernes ved hjælp af en vandig 10 opløsning af et alkalimetalhydrogencarbonat, såsom natriumeller kaliumhydrogencarbonat.

De hidtil ukendte forbindelser med den almene formel I kan renses ved sædvanlige metoder, f.eks. krystallisation, chromatografi eller successive ekstraktioner i surt 15 eller basisk medium. På grund af den kendte følsomhed af synergistiner i alkalisk medium forstås der ved "basisk medium" et medium, der netop er tilstrækkelig alkalisk til at frigøre modersubstansen fra dens additionssalt med en syre, dvs. et medium, hvis pH-værdi ikke overskrider 7,5-20 "8·

Det er velkendt, at synergistiner fremstillet ved fermentering er meget efterspurgte af læger til behandling af mange tilstande, som skyldes grampositive bakterier (stafylokokker, streptokokker, pneumokokker, enterokok-25 ker) og gramnegative bakterier (af slægten Haemophilus, gonokokker, meningokokker). Imidlertid har disse forbindelser den ulempe, at de er uopløselige i vandigt medium og derfor kun kan indgives oralt, i almindelighed i form af kapsler, drageér eller tabletter. På grund af denne uop-30 løselighed er det umuligt at anvende de hidtil kendte synergistiner, når patienten ikke er i stand til at sluge dem, hvilket især er tilfældet ved behandling af børn og bevidstløse patienter, hvorimod aktivitetsspektret af disse forbindelser giver dem en særlig værdifuld indikation un-35 der et stort antal omstændigheder, f.eks. når der er tale om komatøs septikæmi.

4 DK 170421 B1

De hidtil ukendte forbindelser ifølge opfindelsen har den primære fordel, at de er opløselige i vand, i almin- * delighed i form af salte, i anvendelige terapeutiske doser. Naturligt pristinamycin, som er en blanding af to grupper 5 af aktive forbindelser, nemlig pristinamycin IA og IB og pristinamycin 1¾ og IIB, har været kendt siden 1965, jf.

J. Preud'homme et al., C.R. Acad. Sci. 260(4), 1309-1312 (1965), og isoleringen af dets bestanddele er beskrevet i Bull. Soc. Chim. France 2., 585 (1968). Imidlertid har dette 10 produkt den væsentlige ulempe, at det ikke kan indgives til bevidstløse patienter eller til meget små børn. For nylig er det nævnt, at der fortsat ikke eksisterer præparater til parenteral indgivelse, jf. La Presse Medicale 13.(29), 1789 (1984) : 15 "Pristinamycin er således ..... et væsentligt middel mod stafylokokker, som ..... kan anvendes som første middel mod alvorlige stafylokokkæmier, i de tilfælde, hvor indgivelse via fordøjelseskanalen ikke er udelukket." jf. også Chemotherapy 29, 218-224 (1983): 20 "Mangelen på tilfredsstillende parenterale præparater har formodentlig begrænset anvendelsen af virginiamyciner."

Efter mere end 20 år er problemet med opløseligheden af pristinamycin således stadig ikke løst, og der er ikke syntetiseret nogen opløselige derivater.

25 Forbindelserne ifølge opfindelsen udviser altså den betydelige terapeutiske fordel, at de gør det muligt at behandle meget alvorlige infektioner med især stafylokokker hos patienter, hvor indgivelse via fordøjelseskanalen er udelukket.

30 Forbindelserne ifølge opfindelsen har endvidere den virkning, at de ved et synergifænomen forhøjer den antibak-terielle virkning af vandopløselige synergistiner.

Opfindelsen angår således endvidere et farmaceutisk præparat, som er ejendommeligt ved, at det indeholder mindst 35 ét derivat ifølge opfindelsen kombineret med et vandopløseligt synergistin med den almene formel V

5 DK 170421 B1 „ιχνΐα·· '” · Jr hvori Y betyder et hydrogenatom eller en dimethylaminogrup-pe, og 15 i)-----betyder en enkeltbinding, Z og R^ betyder et hydro genatom, og

X betyder en gruppe med den almene formel VI

/R2 20 -N^ (VI) R3 hvori B-2 betyder et hydrogenatom, og R^ betyder en hydroxygrup-pe eller en alkylgruppe, der eventuelt er substitueret 25 med en carboxygruppe, en alkyloxycarbonylgruppe, en hydroxy-gruppe, en alkylaminogruppe eller en dialkylaminogruppe, hvori alkyldelene sammen med nitrogenatomet, hvortil de er bundet, eventuelt danner 4-7-leddet heterocyclus valgt blandt azetidinyl, pyrrolidinyl, piperidinyl, piperazinyl, N-alkyl-30 piperazinyl og azepinyl, eller R3 betyder en cycloalkylgruppe med 3-7 carbonatomer eller en mættet 4-7-leddet heterocyclus valgt blandt azetidin, pyrrolidin, piperidin og azepin, idet disse heterocycler eventuelt er substitueret med en alkylgruppe ved nitrogenatomet, eller 35 6 DK 170421 B1 r2 betyder en formyl- eller alkylcarbonylgruppe, og betyder en alkylgruppe substitueret med en carboxylgruppe, en ^ alkylaminogruppe eller en dialkylaminogruppe, hvori alkylde-lene sammen med nitrogenatomet, hvortil de er bundet, eventu-5 elt danner en 4-7-leddet heterocyclus valgt blandt azetidinyl, pyrrolidinyl, piperidinyl, piperazinyl, N-alkylpiperazinyl og azepinyl, eller betyder en 4-7-leddet heterocyclus valgt blandt azetidin, pyrrolidin, piperidin og azepin, idet disse heterocycler eventuelt er substitueret med en 10 alkylgruppe ved nitrogenatomet, eller R2 og R3, der er ens eller forskellige, betyder en alkylgruppe, der eventuelt er substitueret med en carboxy-gruppe, en alkyloxycarbonylgruppe, en hydroxygruppe, en alkylaminogruppe eller en dialkylaminogruppe, hvori alkyl-15 grupperne eventuelt sammen med nitrogenatomet, hvortil de er bundet, danner en 4-7-leddet heterocyclus valgt blandt azetidinyl, pyrrolidinyl, piperidinyl, piperazinyl, N-alkyl-piperazinyl og azepinyl, eller R9 og R_ sammen med nitrogenatomet, hvortil de er bundet,

20 ^ J

danner en 4-7-leddet heterocyclus valgt blandt azetidin, pyrrolidin, piperidin, morpholin og piperazin, der eventuelt er substitueret med en alkylgruppe, eller 2) ----- betyder en dobbeltbinding, X betyder et oxygen atom, og Z betyder en gruppe med den almene formel Vil 25 -CH (VII)

Xr5 30 hvor a) R^ og R^ betyder hver især et hydrogenatom, og R^ be- . tyder en 3-pyrrolidinyl-thio- eller 3- eller 4-piperidyl- -thiogruppe (idet disse grupper eventuelt er substitueret med en alkylgruppe) , eller R, betyder en alkylthiogruppe, 35 44 der er substitueret med en eller to hydroxysulfonyl-, alk- ylamino- eller dialkylaminogrupper (eventuelt substitueret med en mercapto- eller dialkylaminogruppe) eller med en el- 7 DK 170421 B1 ler to heterocycler valgt blandt piperazino (eventuelt substitueret med en alkyl- eller mercaptoalkylgrupe), morpho-lino, thiomorpholino, piperidino, 1-pyrrolidinyl, 2-, 3-eller 4-piperidyl og 2- eller 3-pyrrolidinyl (idet de to 5 sidstnævnte heterocycler eventuelt er substitueret med en alkylgruppe ved nitrogenatomet), eller b) R^ og R^ danner sammen en valensbinding, og R^ betyder 3-pyrrolidinyl-amino, 3- eller 4-piperidyl-amino, 3-pyr-rolidinyl-oxy, 3- eller 4-piperidyl-oxy, 3-pyrrolidinyl-10 -thio, 3- eller 4-piperidyl-thio (idet disse grupper eventuelt er substitueret ved nitrogenatomet i heterocyclen med en alkylgruppe), eller R4 betyder en alkylamino-, alkyloxy-eller alkylthiogruppe, der er substitueret med en eller to hydroxysulfonyl-, alkylamino- eller dialkylamino- (even-15 tuelt substitueret med en dialkylaminogruppe), trialkyl-ammonio- eller 4- eller 5-imidazolylgruppe eller med en eller to heterocycler valgt blandt piperazino (eventuelt substitueret med en alkyl- eller mercaptoalkylgruppe), morpho-lino, thiomorpholino, piperidino, 1-pyrrolidinyl, 2-, 3-20 eller 4-piperidyl og 2- eller 3-pyrrolidinyl (idet de to sidstnævnte cycler eventuelt er substitueret med en alkylgruppe ved nitrogenatomet), idet alkylgrupperne og alk-yldelene, der vedrører symbolerne i den almene formel V, indeholder 1-5 carbonatomer og er ligekædede eller for-25 grenede, i påkommende tilfælde i form af en af de isomere deraf eller blandinger deraf og eventuelt i form af et additionssalt med en syre, et metalsalt eller et additionssalt med en nitrogenholdig base, idet præparatet eventuelt indeholder andre farmaceutisk acceptable hjælpestoffer.

30 De farmaceutiske præparater ifølge opfindelsen kan anvendes parenteralt, oralt, rektalt eller topisk.

Sterile præparater til parenteral indgivelse kan fortrinsvis være vandige eller ikke-vandige opløsninger, suspensioner eller emulsioner. Som opløsningsmiddel eller 35 bærer kan der anvendes vand, propylenglycol, en polyethylen-glycol, vegetabilske olier, især olivenolie, injicerbare 8 DK 170421 B1 organiske estere, f.eks. ethyloleat, eller andre egnede organiske opløsningsmidler. Disse præparater kan ligeledes indeholde hjælpestoffer, især befugtningsmidler, isotonici-tetsmidler, emulgatorer, dispergeringsmidler og stabilisa- 5 5 torer. Sterilisationen kan ske på flere måder, f.eks. ved sterilfiltrering, inkorporering af steriliserende midler, bestråling eller opvarmning. De kan ligeledes fremstilles i form af faste sterile præparater, der kan opløses i et sterilt injicerbart medium på anvendelsestidspunktet.

10 Som faste præparater til oral indgivelse kan der anvendes tabletter, piller, pulvere eller granulater. I disse præparater er den aktive forbindelse ifølge opfindelsen (eventuelt kombineret med et andet farmaceutisk acceptabelt produkt) blandet med et eller flere indifferente fortyndings-15 midler eller hjælpestoffer, såsom saccharose, lactose eller stivelse. Disse præparater kan desuden indeholde andre stoffer end fortyndingsmidler, f.eks. et smøremiddel, såsom magnesiumstearat.

Som flydende præparater til oral indgivelse kan 20 der anvendes farmaceutisk acceptable emulsioner, opløsninger, suspensioner, sirupper og eliksirer indeholdende indifferente fortyndingsmidler, såsom vand eller paraffinolie.

Disse præparater kan ligeledes indeholde andre stoffer end fortyndingsmidler, f.eks. befugtningsmidler, sødestoffer 25 eller aromastoffer.

Præparaterne til rektal indgivelse er suppositorier eller rektale kapsler, der ud over det aktive princip indeholder excipienser, såsom kakaosmør, semisyntetiske glycerider eller polyethylenglycoler.

30 Præparaterne til topisk anvendelse kan f.eks. være cremer, salver, lotioner, øjendråber, mundvand, næsedråber i eller aerosoler.

Inden for humanterapien er forbindelserne ifølge opfindelsen, kombineret med synergistiner med den almene 35 formel V, særlig nyttige ved behandling af infektioner af mikrobiel oprindelse. Doserne afhænger af den ønskede virk- 9 DK 170421 B1 ning og behandlingens varighed. For en voksen er de generelt mellem 500 og 2000 mg pr. dag ved parenteral indgivelse, især ved langsom intravenøs infusion, idet dosen af syner-' gistinet med den almene formel V også er mellem 500 og 2000 5 mg pr. dag.

I almindelighed vil lægen fastlægge den mest hensigtsmæssige dosering under hensyntagen til patientens alder, vægt og andre relevante faktorer.

Forbindelserne med den almene formel V, der er 10 defineret som under 1) ovenfor, med undtagelse af sådanne,

hvori R2 betyder en formyl- eller alkyl carbonylgruppe, kan fremstilles ved indvirkning af en amin med den almene formel VIII

15 /R2 HN (VIII)

Xr3

hvori 1*2 °3 ^3 har 3en ovenfor angivne betydning, på et synergistin med den almene formel IX

20 Ύ |Ha ΥΝ-ΥυΗ>Υ UX> - 0^\λύ^ύκΧ0 °γ\ Λ0 hvori Y betyder et hydrogenatom (virginiamycin S) eller en dimethylaminogruppe (pristinamycin IA) i nærværelse af et alkalimetalcyanoborhydrid.

Der arbejdes i almindelighed med et overskud af aminen med den almene formel VIII i nærværelse af et alk- 10 DK 170421 B1 o alimetalcyanoborhydrid som natriumcyanoborhydrid i et organisk opløsningsmiddel, såsom en alkohol, hvori der er opløst gasformigt hydrogenchlorid (methanolisk eller etha-nolisk saltsyre), ved en temperatur mellem 0°C og reak-5 tionsblandingens tilbagesvalingstemperatur, fortrinsvis ved en temperatur nær 20°C.

Omsætningen kan fordelagtigt gennemføres i nærværelse af et tørringsmiddel, såsom molekylsigter.

Forbindelserne med den almene formel V defineret 10 som ovenfor under 1), hvori R2 betyder en formyl- eller alkylcarbonylgruppe, og betyder en alkylgruppe substitueret med en carboxy-, alkylamino- eller dialkylaminogrup-pe, hvori alkyldelene eventuelt sammen med nitrogenatomet, hvortil de er bundet, danner en 4-7-leddet heterocyclus 15 valgt blandt azetidinyl, pyrrolidinyl, piperidinyl, pipe-razinyl, alkylpiperazinyl og azepinyl, eller betyder en mættet 4-7-leddet heterocyclus valgt blandt azetidin, pyr-rolidin, piperidin og azepin, hvor disse heterocycler kan være substitueret med en alkylgruppe ved nitrogenatomet, 20 og Y har den ovenfor angivne betydning, kan fremstilles

ved indvirkning af en forbindelse med den almene formel X

R6 - CO - Q (X)

25 hvori Rg betyder et hydrogenatom eller en alkylgruppe, og Q betyder et halogenatom eller en alkylcarbonyloxygruppe, på en forbindelse med den almene formel XI

30 · ,χχ, ;σχφα<,

Vhh rV

nA^·0 o 11 DK 170421 B1 hvori Y har den ovenfor angivne betydning, og R'^ har tilsvarende betydning som som angivet ovenfor.

Omsætningen gennemføres i almindelighed i et organisk opløsningsmiddel som pyridin, i et chloreret opløs-5 ningsmiddel (methylenchlorid) eller en ether (tetrahydro-furan) i nærværelse af en syreacceptor, såsom en organisk base som triethylamin eller en uorganisk base, såsom et alkalimetalhydrogencarbonat eller -carbonat som natrium-hydrogencarbonat, idet der arbejdes ved en temperatur mel-10 lem 0 og 80°C.

Det vil forstås af en fagmand, at når R'^ betyder en gruppe indeholdende en sekundær aminfunktion, bør denne funktion være beskyttet i forvejen, før forbindelsen med den almene formel X omsættes med forbindelsen med 15 den almene formel XI. Til dette formål anvendes ethvert gængst anvendt blokeringsmiddel til beskyttelse af en amin-funktion, der kan fjernes bagefter uden påvirkning af resten af molekylet. Som blokerende gruppe anvendes særlig fordelagtigt en trifluoracetylgruppe. Denne kan fjernes bag-20 efter ved hjælp af en vandig opløsning af et alkalimetalhydrogencarbonat, såsom natriumhydrogencarbonat eller ka-liumhydrogencarbonat.

Det vil ligeledes forstås af en fagmand, at når R2 og/eller R^ i den almene formel VIII betyder en gruppe 25 indeholdende en sekundær aminfunktion, bør denne funktion være·beskyttet i forvejen, før forbindelsen med den almene formel VIII omsættes med forbindelsen med den almene formel IX. Blokeringen og deblokeringen gennemføres som o- venfor beskrevet.

30

Forbindelserne med den almene formel V defineret som ovenfor under 2), hvori Y har den ovenfor angivne betydning, og de andre symboler har den ovenfor under 2)a) angivne betydning, kan fremstilles ved indvirkning af en forbindelse med den almene formel XII 35 12 DK 170421 B1 0 R'4-H (XII) hvori R»^ ^θη ovenfor under 2)a) angivne betydning af

C Q

R4' Pa en forbindelse med den almene formel XIII

ch3 /=.

VN_Vh'Y^v/'f 10 0 (XIII) X 6°

KJ

hvori Y har den ovenfor angivne betydning.

Der arbejdes i almindelighed i et organisk opløsningsmiddel, såsom en alkohol som methanol eller et chlore-20 ret opløsningsmiddel som chloroform, eller en blanding af disse opløsningsmidler ved en temperatur mellem 0°C og reaktionsblandingens tilbagesvalingstemperatur, fortrinsvis ved en temperatur nær 20°C.

Forbindelserne med den almene formel XIII kan 25 fremstilles ved indvirkning af et alkalimetalborhydrid, såsom natriumcyanoborhydrid, på en forbindelse med den almene formel XIV

30 γ^"γ~0·γ X* o0 DK 170421 B1 0 13 hvori Y har den ovenfor angivne betydning.

Der arbejdes i almindelighed i et organisk opløsningsmiddel, såsom en ether som tetrahydrofuran eller en alkohol som f.eks. isopropanol, i nærværelse af en syre, 5 såsom trifluoreddikesyre, ved en temperatur mellem 0°C og reaktionsblandingens tilbagesvalingstemperatur, fortrinsvis ved en temperatur nær 20°C.

Forbindelserne med den almene formel XIV kan fremstilles ved indvirkning af en forbindelse med formlen XV

10 CHK /xi N - CIL (XV)

Xx2 15 hvori X1 betyder en alkyloxygruppe, og X2 betyder en alkyl-oxy- eller dimethylaminogruppe, eller X^ og X2 begge betyder en dimethylaminogruppe, på en forbindelse med den almene formel IX.

I praksis er det fordelagtigt at omsætte tert.-20 butoxy-bis-(dimethylamino)-methan med en forbindelse med den almene formel IX, idet der arbejdes i et organisk opløsningsmiddel, såsom et chloreret opløsningsmiddel som 1,2-dichlorethan eller et amid (f.eks. dimethylformamid), ved en temperatur mellem 0 og 80°C, fortrinsvis ved en tem-25 peratur nær 20°C.

Forbindelserne med den almene formel XV kan fremstilles ifølge metoderne, der beskrives af H. Bredereck et al., Chem. Ber. 101, 41 og 3058 (1968) og 106, 3725 (1973).

Forbindelserne med den almene formel V, hvori Y 30 har den ovenfor angivne betydning, og de andre symboler

har den ovenfor under 2)b) angivne betydning, med undtagelse af sådanne, hvori R4 betyder 3-pyrrolidinyl-oxy, 3- eller 4-piperidyl-oxy eller alkyloxy, der eventuelt er substitueret som defineret under 2)b), kan fremstilles ved 35 indvirkning af en forbindelse med den almene formel XVI

DK 170421 B1 0 14 R"4 - Η (XVI) hvori R"4 har den ovenfor angivne betydning af R4, på en 5 forbindelse med den almene formel XIV, hvori Y har den ovenfor angivne betydning.

Omsætningen gennemføres i organisk medium i nærværelse af en syre (f.eks. eddikesyre eller en blanding af eddikesyre og katalytiske mængder trifluoreddikesyre) 1C og eventuelt i nærværelse af et opløsningsmiddel ved en temperatur mellem 0 og 50°C, fortrinsvis ved en temperatur nær 20°C.

I påkommende tilfælde kan opløsningsmidlet vælges blandt organiske opløsningsmidler, såsom ethere (tetra-15 hydrofuran), alkoholer (ethanol) og chlorerede opløsningsmidler f.eks. (methylenchlorid eller chloroform).

Forbindelserne med den almene formel V, hvori Y har den ovenfor angivne betydning, og de andre symboler har den ovenfor under 2)b) angivne betydning, kan fremstil-20 les ved indvirkning af en forbindelse med den almene formel XVII

R"'4-H (XVII)

hvori R'"4 er defineret som R4 under 2)b) , på en forbindel-25 se med den almene formel XVIII

>CH,CHS S 35 15 DK 170421 B1 0 hvori Y har den ovenfor angivne betydning, og Z^ betyder tosyloxy, acetyloxy, trimethylsilyloxy eller dialkyloxy-phosphoryloxy, hvori alkyldelene er ligekædede eller forgrenede og indeholder 1-4 carbonatomer, eller Z^ betyder 5 et chloratom.

Der arbejdes i almindelighed i et organisk opløsningsmiddel, såsom en ether som tetrahydrofuran, en alkohol som ethanol eller et chloreret opløsningsmiddel (f.eks. methylenchlorid eller chloroform) ved en temperatur nær 10 20°C. Omsætningen gennemføres i basisk medium, f.eks. i nærværelse af et alkalimetalhydrid eller en alkalimetal-alkoholat som natriumethylat eller kalium-tert.butylat.

Når R'"4 er forskellig fra substitueret alkyloxy eller heterocyclyloxy, er det ligeledes muligt enten at 15 arbejde i neutralt medium ved en temperatur mellem 0 og 50°C i et af de ovenfor nævnte opløsningsmidler eller i surt medium under betingelser, der er identiske med de ovenfor beskrevne for omsætning af en forbindelse med den almene formel XVI med en forbindelse med den almene formel 20 XIV.

Forbindelserne med den almene formel XVIII kan fremstilles ved sur hydrolyse af en forbindelse med den almene formel XIV til dannelse af en forbindelse med den almene formel XIX

HnAChH=CH= 0 (XIX) - 30 V\ rS0 er° 35 16 DK 170421 B1 0 efterfulgt af

a) indvirkning af en forbindelse med den almene formel XX

Z'-X (XX) 5 * 1 hvori X betyder et halogenatom, og Z'^ er defineret som Z^ ovenfor, men ikke kan betyde et chloratom, eller

3) indvirkning af en forbindelse med formlen XXI

10 (c6h5)3pci2 (XXI) til dannelse af en forbindelse med den almene formel XVIII, hvori Z^ betyder et chloratom.

Hydrolysen af forbindelsen med den almene formel 15 XIV til forbindelsen med den almene formel XVIII gennemføres ved hjælp af en vandig opløsning af en uorganisk syre, såsom 0,1N saltsyre, idet der arbejdes ved en temperatur nær 20°C.

2Q Omsætningen af forbindelsen med den almene formel XX med forbindelsen med den almene formel XIX gennemføres i almindelighed i et organisk opløsningsmiddel, såsom meth-ylenchlorid, i nærværelse af en syreacceptor, såsom en organisk base som triethylamin eller en uorganisk base som 25 et alkalimetalcarbonat eller -hydrogencarbonat, f.eks.

natrium- eller kaliumhydrogencarbonat. Der arbejdes i almindelighed ved en temperatur mellem -20 og +20°C.

Omsætningen af forbindelsen med den almene formel XXI med forbindelsen med den almene formel XIX gennemføres 30 i almindelighed i et chloreret opløsningsmiddel, såsom methylenchlorid, ved en temperatur mellem -20 og +20°C.

Forbindelserne med de almene formler III, VIII, XII, XVI og XVII kan fremstilles ifølge eller analogt med metoderne, der er beskrevet nedenfor i eksemplerne, og 3g især ifølge: i^· i -—-- — ____ 17 DK 170421 B1 0 G. G. Urquart et al., Org. Synth., 21, 36 (1941) A.I. Vogel, J. Chem. Soc., 1822 (1948) J.H. Chapman og L.N. Owen, J. Chem. Soc., 579 (1950) H. R. Snyder et al., J. Am. Chem. Soc., 69, 2672 (1947) 5 D.D. Reynolds et al., j. Org. Chem., 26, 5125 (1961) J.W. Haeffele et al., Proc. Sci. Toilet Goods Assoc., 32, 52 (1959) H. Barrer et al., J. Org. Chem., 21_, 641 (1962) J.H. Biel et al., J. Amer. Chem. Soc., 7_7' 2250 (1955) 10 når der er tale om en forbindelse med den almene formel III, XII, XVI eller XVII, hvori R, R’4, R"4 eller R"· betyder en substitueret alkylthiogruppe eller en hetero-cyclylthiogruppe, eller ifølge: A.J.W. Headlee et al., j. Amer. Chem. Soc., 55, 1066 (1933) 15 B.K. Campbell og K.N. Campbell, J. Amer. Chem. Soc., 60, 1372 (1938) R.C. Elderfield et al., J. Amer. Chem. Soc., 68_, 1579 (1946) når der er tale om en forbindelse med den almene formel 20 XVI eller XVII, hvori R"4 eller R"'4 betyder en substitueret alkyloxygruppe eller en heterocyclyloxygruppe, eller ifølge: J. Amer. Chem. Soc., 54, 1499 (1932) og J. Amer. Chem. Soc., 54, 3441 (1932), 25 når der er tale om en forbindelse med den almene formel VIII eller med den almene formel III, XVI eller XVII, hvori R, R"4 eller R"'4 betyder substituerede alkylamino-grupper, eller ifølge: E.F. Elslager et al., J. Med. Chem., 17, 99 (1974) 30 L.M. Werbel et al., J. Het. Chem., 10, 363 (1973) når der er tale om en forbindelse med den almene formel III, XVI eller XVII, hvori R, R"4 eller R'"4 betyder he-terocyclylaminogrupper.

Det vil ved de ovenfor anførte metoder forstås, at når R2, R3, R'4, R"4 eller R'"4 indeholder en alkyl- 35 18 DK 170421 B1 o aminogruppe, der kan interferere med omsætningen, beskyttes denne i forvejen ved en hvilken som helst kendt metode, der ikke påvirker resten af molekylet.

Ligeledes når grupperne R'4, R"4 og R"'4 i for-_ bindeiserne med de almene formler XII, XVI og XVII inde- 5 holder en sekundær aminfunktion, der kan interferere med omsætningen, bør denne være beskyttet i forvejen, før forbindelserne omsættes med forbindelserne med de almene formler XIII, XIV hhv. XVIII. Beskyttelsesgruppen fjernes ef-ter omsætningen. Til dette formål arbejdes der under de betingelser, der er beskrevet ovenfor for gruppen R i reaktanten med den almene formel III.

I påkommende tilfælde kan isomerene af forbindelserne med den almene formel I og/eller forbindelserne med den almene formel V separeres ved chromatografi eller højydelses-væskechromatografi.

Forbindelserne med den almene formel V kan renses som nævnt ovenfor for forbindelserne med den almene formel I.

20 I laboratoriet har forbindelserne med den almene formel I en synergistisk indflydelse på den antimikrobiel-le virkning af forbindelserne med den almene formel V i doser mellem 5 og 200 mg/kg hos mus ved subcutan indgivelse, især ved septikæmi fremkaldt med Staphylococcus aureus 25 Smith, når de blandes med forbindelser med den almene formel V i forhold mellem 10-90% og 90-10%.

Den akutte giftighed af forbindelserne med den almene formel I, udtrykt ved DL^q, ligger generelt mellem 300 og 900 mg/kg ved subcutan indgivelse til mus.

30 Af særlig interesse på grund af deres gode syner gistiske indflydelse på pristinamycin 1^ er forbindelser med den almene formel I, hvori R betyder en alkylthiogruppe, der er substitueret, med en eller to dialkylaminogrupper, hvori alkyldelene eventuelt 35 sammen med nitrogenatomet, hvortil de er bundet, kan danne en mættet heterocyclus valgt blandt 1-pyrrolidinyl og 19 DK 170421 B1 1-piperazinyl, der eventuelt er substitueret med en alkyl-gruppe, eller R enten betyder en gruppe med den almene formel II, hvori Het betyder en 4-piperidylgruppe, der eventuelt er substi-5 tueret med en alkylgruppe ved nitrogenatomet, eller betyder en dialkylaminogruppe, hvori alkyldelene sammen med nitrogenatomet, hvortil de er bundet, kan danne en 1-pi-perazinyl-ring, der eventuelt er substitueret med en alkylgruppe , 20 idet de ovennævnte alkylgrupper og alkyldele er ligekædede eller forgrenede og indeholder 1-3 carbonatomer.

Mere specielt interessante blandt disse forbindelser er forbindelser med den almene formel I, hvori R betyder en alkylthiogruppe med 1-3 carbonatomer, der er sub-25 stitueret med en dialkylaminogruppe, eller betyder en 4--alkyl-l-piperazinyl-ring, idet alkylgrupperne indeholder 1-2 carbonatomer, medmindre der er angivet andet, og i-sær følgende forbindelser: 26-(l-diethylamino-2-propyl)-thio-pristinamycin 11^ 20 26-(4-methyl-l-piperazinyl)-pristinamycin Hg·

Til terapeutisk anvendelse kan de hidtil ukendte forbindelser ifølge opfindelsen anvendes som de er, dvs. i form af baser, men da den væsentligste fordel ved forbindelserne ifølge opfindelsen er deres mulighed for opløsning 25 i vand, er det særlig fordelagtigt at anvende dem i form af farmaceutiske acceptable salte sammen med synergistiner med den almene formel V, der selv er solubiliserede, enten i form af farmaceutisk acceptable salte eller i påkommende tilfælde i form af baser, når opløseligheden er tilstrækkelig 30 til, at den fremkomne opløsning indeholder en mængde produkt, der mindst er lig med den terapeutisk aktive dosis.

Som farmaceutisk acceptable salte, både af forbindelserne med den almene formel I og forbindelserne med den almene formel V, kan der nævnes additionssalte med u-35 organiske syrer, såsom hydrochlorider, hydrobromider, sul- 20 DK 170421 B1 0 fater, nitrater, phosphater, eller med organiske syrer, såsom acetater, propionater, succinater, maleater, fuma-rater, methansulfonater, p-toluensulfonater, isethionater eller substitutionsderivater af disse forbindelser. Som 5 farmaceutisk acceptable salte kan der endvidere nævnes salte med alkalimetaller, såsom salte af natrium, kalium eller lithium, med jordalkalimetaller, såsom salte af magnesium, ammoniumsalte og additionssalte med nitrogenholdige organiske baser, såsom ethanolamin, diethanolamin, tri-10 methylamin, triethylamin, methylamin, propylamin, diiso- propylamin, Ν,Ν-dimethylethanolamin, benzylamin, dibenzyl-amin, dicyclohexylbenzylamin, N-benzyl-f3-phenethylamin, Ν,Ν'-dibenzylethylendiamin, benzhydrylamin, arginin, leu-cin, lysin eller N-methyl-glucamin.

15 Som farmaceutisk acceptable salte af forbindel serne med den almene formel V, hvori Z betyder en gruppe med den almene formel VII, hvori betyder en trialkyl-ammoniumgruppe, kan der nævnes de kvaternære ammoniumsalte svarende til de ovennævnte anioner.

20 Opfindelsen illustreres ved de følgende eksemp ler. NMR-Spektrene af forbindelserne, der er illustreret i disse eksempler og i referenceeksemplerne, som følger efter, udviser generelle karakteristika, som er fælles for alle forbindelser med den almene formel I eller med 25 den almene formel V, og specielle karakteristika, som er særlige for hver af forbindelserne afhængigt af substi-tuenterne. Således er der i eksempel 1 og i referenceeksempel 1 og 16 angivelser for alle protonerne i molekylet. I de øvrige eksempler nævnes kun de særlige karakteristika, 5 30 der skyldes variable grupper. I forbindelserne med den almene formel I har protonerne den nummerering, der er angivet i den følgende formel: 35 21 DK 170421 B1 0

O

Il £ JDH

røn 5 o O CH’ ^n/oT^nJ^2^7 ch3 r>> I-019 '0 31 ! K 25 I synergistinerne med den almene formel V har protonerne den nummerering, der er angivet i den almene formel XXIII. Denne nummerering er anbefalet af J.O.

15 Anteunis et al., Eur. J. Biochem. 5_8, 259 (1975).

36 /X» CH3

)-V

20 2Q 26 ,2Ύ π 7 J^-CH2CH3 0 (XXIII) 2KHHN^nCH52 0 h° ¥ 5δ ^ υ

LfTCT 6ΝΐΓ^ρ 5α X

n ^NHINH X. 0 * Y « iTj /Y/° γη5 30 * 35 DK 170421 B1 0 22

Alle spektrene er taget ved 250 MHz i deutero-chloroform. De kemiske forskydninger er udtrykt i ppm i .

forhold til signalet af tetramethylsilan. Forkortelserne, der anvendes nedenfor, er følgende: 5 s = singlet d = duplet t = triplet mt = multiplet m = massiv 10 dd = duplet-duplet dt = duplet-triplet ddd = duplet-duplet-duplet dddd = duplet-duplet-duplet-duplet I de følgende eksempler forstås der ved flash-15 chromatografi en rensningsteknik, der er karakteriseret ved, at der anvendes en kort chromatografisøjle og arbejdes under moderat tryk (50 kPa), idet der anvendes et siliciumdioxid med en kornstørrelse på 40-53^um, ifølge W.C. Still, M. Kahn og A. Mitra, J. Org. Chem. £3, 2923 20 (1978).

Eksempel 1

Til en suspension af 13,1 g pristinamycin IIA i 150 ml methanol sættes en opløsning af 3,7 g diethylamino-25 -ethanthiol i 15 ml methylenchlorid. Den fremkomne opløsning omrøres i 18 timer ved en temperatur nær 20°C, hvorefter den hældes i 1500 ml destilleret vand. Den fremkomne blanding ekstraheres 3 gange med i alt 1000 ml methylenchlorid. De organiske faser forenes, tørres over magnesium-30 sulfat, filtreres og koncentreres derefter til tørhed un der formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Den fremkomne remanens renses ved flashchromatografi, idet der som elue-ringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 90:10. Efter koncentrering til tørhed 35 af fraktion 5-23 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 12,4 g 26-(2-diethylamino-ethyl)-thio-pristinamycin lig i form af et gult pulver, der smelter nær 105°C.

DK 170421 B1 0 23 6 (ppm) Form· Tilskrives S,10 s H 20 6,60 s bred NH 8 5 6,55 dd H 5 6,15 d H 11 5,80 dd H 6 5,65 ddd H 10 5,50 d H 13 10 4,95 ddd H 14 4,77 dd H 3 4.75 d H 27 4,27 ddd H 24 4.05 ddd H 9 15 3,87 ddd H 9 3,80 s K 17 3,55 ddd H 24 3,40 ddd H 26 3,10 dd] H 15 20 2,9 dd) ASX-systerr H 15 2.75 s -S-CH2CH2- 2,74 m H 4 2,60 q -N-(CH2CH3)2 2,15 - 1,85 m H 25, H 29 25 1,70 s H 33 1.05 m -N(CH2CH3)2+ H 32 0,95 dd H 30+ H 31 30 Der fås en vandig opløsning med 2% 26-(2-diethyl- amino-ethyl)-thio-pristinamycin II (forbindelse BA) i form af hydrochloridet med: forbindelse BA 0,1 g 0,05N saltsyre 3 ml 35 destilleret vand, op til 5 ml 24 DK 170421 B1 0

Eksempel 2.

Der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 1, men gås ud fra 2,7 g pristinamycin IIA og 0,58 g 2- dimethylamino-ethanthiol. Efter rensning ved flash- 5 chromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 90:10, og koncentrering til tørhed af fraktion 11-17 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 1,1 g 26-(2-di-methylamino-ethyl)-thio-pristinamycin ΙΙβ i form af et gult 10 pulver, der smelter nær 100°C.

NMR-spektrum: 2,35 (s, 6H: -N(CH3)2)

2,80 (m, 4H: -S-CH2CH2-NO

3,40 (ddd, IH: H 26) 15 4,75 (d, IH: H 27) 8,10 (s, IH: H 20)

Der fås en vandig opløsning med 2% 26-(2-dimethyl-amino-ethyl)-thio-pristinamycin ΙΙβ (forbindelse BB) i form af hydrochloridet med: 20 forbindelse BB 0,1 g 0,1N saltsyre 1,6 ml destilleret vand, op til 5 ml

Eksempel 3.

25 Der gås frem på samme måde som beskrevet i eksem pel 1, men gås ud fra 5,25 g pristinamycin IIA og 1,3 g 3- dimethylamino-propanthiol. Efter rensning ved flashchro-matografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 90:10, og 30 koncentrering til tørhed af fraktion 6-29 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 3,3 g 26-(3-dimethyl-amino-propyl)-thio-pristinamycin ΙΙβ i form af et gult pulver, der smelter nær 100°C.

35 DK 170421 B1 0 25 NMR-spektrum: 1,50 (s, 3H x 0,5 : H 33 1. isomer) 1.70 (s, 3H x 0,5 : H 33 2. isomer)

1,80 (m, 2H : -SCH2-CH2-CH2NO

5 2,20 (s, 6H x 0,5 : -N(CH3)2 1. isomer) 2,25 (s, 6H x 0,5 : -N(CH3)2 2. isomer) 2.40 (m, 2H : -SCH2-CH2-CH2NC)

2.70 (m, 2H : -SCH2-CH2-CH2NO

3,351 1Q 3 45J (2m, IH : H 26 af hver isomer) 4,601 4 ^0| (2d, IH : H 27 af hver isomer) 7,801 8 10J ^s' : H 20 af hver isomer) •15 Der fås en vandig opløsning med 3,3% 26-(3-di- methylamino-propyl)-thio-pristinamycin ΙΙβ (forbindelse BC) med: forbindelse BC 0,1 g 0,1N saltsyre 1,55 ml 20 destilleret vand, op til 3 ml

Eksempel 4

Der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 1, men gås ud fra 5,25 g pristinamycin 11^ og 1,7 g 25 2-(1-pyrrolidinyl)-ethanthiol. Efter rensning ved flash- chromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 95:5, og koncentrering til tørhed af fraktion 19-60 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 3,9 g 26—[2—(1— 30 -pyrrolidinyl)-ethyl]-thio-pristinamycin ΙΙη i form af et

SD

gult pulver, der smelter nær 115°C.

NMR-spektrum: y» 1,90 (mt, 4H : -N I ) N_CH, H„C- 35 2,50 - 2,80 (m, 6H : -SCi^CH^N*" 3.40 (d, IH : H 26) ^- 4,75 (d, IH : H 27) 8,10 (s, IH : H 20) DK 170421 B1 0 26

Der fås en vandig opløsning med 5% 26-[2-(1-pyr-rolidinyl)-ethyl]-thio-pristinamycin IIR (forbindelse BD) i form af hydrochloridet med: forbindelse BD 0,1 g 5 0,1N saltsyre 1,5 ml destilleret vand, op til 2 ml 2-(1-Pyrrolidinyl)-ethanthiol kan fremstilles i-følge metoden, der beskrives af J.W. Haeffle og R.W. Broge, Proc. Sci. Toilet Goods Assoc. 32, 52 (1959), Chem. Abstr.

10 54, 17234e (1960).

Eksempel 5.

Der gås frem analogt med eksempel 1, men gås ud fra 3,15 g pristinamycin 11^ og 1,1 g (1-(2-mercaptoethyl)-15 -4-methyl-piperazin. Efter rensning ved flashchromatogra- fi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 95:5, og koncentrering til tørhed af fraktion 14-20 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C, fås der 1,4 g 26-[2-(4-methyl-l-pi-20 peraziny-)-ethyl]-thio-pristinamycin IIR i form af et gult pulver, der smelter nær 115°C.

NMR-spektrum: 2,30 (s, 3H :^N-CH3) cr _cr 2,40 - 2,80 (m, 12H : -S-CH^-CH-N'' ~2 -2NN- ) 25 XCH2-CH/ 3,35 (d, IH : H 26) 4,75 (d, IH : H 27) 8,10 (s, IH : H 20)

Der fås en vandig opløsning med 2% 26-[2-(4-30 -methyl-l-piperazinyl)-ethyl]-thio-pristinamycin IIR (for bindelse BE) i form af hydrochloridet med: forbindelse BE 0,1 g 0,1N saltsyre .1,46 ml destilleret vand, op til 5 ml 35 1-(2-Mercapto-ethyl)-4-methyl-piperazin kan frem stilles ifølge metoden, der beskrives af D.D. Reynolds et al., J. Org. Chem. 2J5, 5125 (1961).

DK 170421 B1 0 27

Eksempel 6.

Der gås frem analogt med eksempel 1, men gås ud fra 3,15 g pristinamycin 11^ og 1,8 g l-diethylamino-2--propanthiol. Efter rensning ved flashchromatografi, idet 5 der som elueringsmiddel anvendes en blanding af methylen- chlorid og methanol i volumenforholdet 90:10, og koncentrering til tørhed af fraktion 3-5 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C, fås der 1,4 g 26-(l-diethylamino-2--propyl)-thio-pristinamycin ΙΙβ i form af et gult pulver, 10 der smelter nær 160°C.

NMR-spektrum: 1 (m, 9H : H 32 + -N(CH2CH3)2) 2,50 (m, 6H : -CH2N(CH2CH3)2) 3,30 (m, IH : H 26) 15 4,70 (d, IH : H 27) 8,12 (s, IH : H 20)

Der fås en vandig opløsning med 5% 26-(1-diethyl-amino-2-propyl)-thio-pristinamycin IID (forbindelse BF) i form af hydrochloridet med: 2o forbindelse BF 20 mg 0,1N saltsyre 0,3 ml destilleret vand, op til 0,4 ml l-Diethylamino-2-propanthiol kan fremstilles ifølge metoden, der beskrives af R.T. Wragg, J. Chem. Soc. (C) 25 16, 2087 (1969).

Eksempel 7.

Der gås frem analogt med eksempel 1, men gås ud fra 3,15 g pristinamycin IIA og 1,6 g l-methyl-4-piperi-30 dinthiol og tilsætning af 0,6 g triethylamin til reaktionsblandingen. Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af methylen-chlorid og methanol i volumenforholdet 92:8, og koncentrering til tørhed af fraktion 4-20 under formindsket tryk 35 (2,7 kPa) ved 30°C, fås der 0,9 g 26-(1-methy1-4-piperi- dinyl)-thio-pristinamycin II^ i form af et gult pulver, O " der smelter nær 180°C.

28 DK 170421 B1 0

NMR-spektrum: CH

2.10 (m, 4H : -S_/ _2~*Νϊ- ) \ch2_^ 5 2,25 (S, 3H : -S —^ Sj-CH3) 2,80 (m, 4H : -S —< N-) \__gh2/ 10 3,55 (m, IH : H 26) 4,62 (m, IH : H 27) 7,70 (m, IH : H 8) 8.10 (s, IH : H 20)

Der fås en vandig opløsning med 5% 26-(1-methyl-15 -4-piperidinyl)-thio-pristinamycin ΙΙβ (forbindelse BG) i form af hydrochloridet med: forbindelse BG 10 mg saltsyre 0,14 ml destilleret vand, op til 0,2 ml 20 l-Methyl-4-piperidinthiol kan fremstilles ifølge metoden, der beskrives af H. Barrer og R.E. Lyle, J. Org. Chem. 27, 641 (1962).

Eksempel 8.

25 Der gås frem analogt med eksempel 1, men gås ud fra 5,25 g pristinamycin IIA og 10 ml 5N ethanolisk di-methylaminopløsning. Efter rensning ved flashchromatogra-fi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 90:10, og kon-30 centrering til tørhed af fraktion 14-24 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C, fås der 0,8 g 26-dimethylamino--pristinamycin ΙΙβ i form af et gult pulver, der smelter nær 230°C.

35 DK 170421 B1 0 29 NMR-spektrum (CDCl^ + 10% CD^OD): 2,35 (s, 6H : -N(CH3)2) 3,25 (d, IH : H 26) 5,05 (d, IH : H 27) 5 8,20 (s, IH : H 20)

Der fås en vandig opløsning med 2% 26-dimethyl-amino-pristinamycin lig (forbindelse BH) i form af hydro-chloridet med: forbindelse BH 0,1 g 10 0,1N saltsyre 1/75 ml destilleret vand, op til 5 ml

Eksempel 9.

Der gås frem analogt med eksempel 1, men gås ud 15 ' fra 5,25 g pristinamycin IIA og 5 g 4-methyl-piperazin. Ef ter rensning ved flashchromatografi, idet der som elue-ringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 90:10, og koncentrering til tørhed af fraktion 20-44 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C, 20 fås der 0,7 g 26-(4-methyl-l-piperazinyl)-pristinamycin lig i form af et gult pulver, der smelter nær 140°C. NMR-spektrum: 2,30 (s, 3H : pN-CH3) ^ch2-ch^ 25 2,40 - 2,65 (m, 8H : -N N-) nCH 2-CH^ 3,40 - 3,70 (m indeholdende H 26) 5,75 (d, IH : Η 27) 8,10 (s, IH : H 20) 30 Der fås en vandig opløsning med 3,3% 26-(4-methyl- -1-piperazinyl)-pristinamycin ΙΙβ (forbindelse BI) i form af hydrochloridet med: forbindelse BI 0,1 g 0,1N saltsyre 1,6 ml 35 destilleret vand, op til 3 ml DK 170421 B1 0 30

Eksempel 10.

En opløsning af 5,2 g pristinamycin II i 20 ml

H

1-methyl-piperazin omrøres i 1 time og 30 minutter ved en temperatur nær 20°C, hvorefter den hældes i 600 ml desti1-5 leret vand. Den fremkomne emulsion ekstraheres 3 gange med i alt 600 ml methylenchlorid. De organiske faser forenes, tørres over magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Den fremkomne remanens renses ved flashchromatografi, idet der 10 som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 90:10. Efter koncentrering til tørhed af fraktion 13-30 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 2,6 g 26-(4-methyl-l-piperazinyl)-pristinamycin lig i form af et beige pulver, der smelter nær 15 140°C.

NMR-spektret af dette produkt er identisk med NMR-spektret af produktet beskrevet i eksempel 9.

Eksempel 11.

20 Der gås frem analogt med eksempel 1, men gås ud fra 12,6 g pristinamycin IIA og 5,2 g 2,3-bis-dimethyl-amino-propanthiol. Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af methylenchlorid og methanol i volumenforholdet 90:10, og koncen-25 trering til tørhed af fraktion 29-42 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C, fås der 0,3 g 26-(2,3-bis-di-methylamino-propyl)-thio-pristinamycin ΙΙβ i form af et gult pulver, der smelter nær 110°C.

NMR-spektrum: i 30 2,30 (m, 12H : -N^ J )

Xch3 2,50 (m, 2H : -CH2-NC) 2,90 (m, IH : -CH-NC) 3,56 (m, IH : H26) 35 4,64 (d, IH : H27) 4,66 (d, IH : H27) 7,81 (s, IH : H20) 31 DK 170421 B1

Der fås en vandig opløsning med 2% 26-(2,3-bis--dimethylamino-propyl)-thio-pristinamycin ΙΙβ (forbindelse BJ) i form af hydrochloridet med: 5 forbindelse BJ 10 mg 0/IN saltsyre 0,14 ml destilleret vand, op til 0,5 ml 2,3-bis-dimethylamino-propanthiol kan fremstilles ifølge metoden, der beskrives af H. Nishimura og H. Taka-10 matsu, Yakugaku Zasshi 84, 944 (1964), Chem. Abstr. 62, 2750b (1965).

Eksempel 12

Der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel '15 1, men gås ud fra 11,8 g pristinaycin 1¾ og 3,58 g 2-piper-idino-ethanthiol, og efter rensning ved flashchromatografi under eluering med en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 85:15 og opsamling af fraktioner på 60 cm3 og koncentrering til tørhed af fraktionerne 21-23 under 20 formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 2,5 g 26-(2-piper-idino-ethylthio)-pristinamycin IIB (en blanding af 60% A og 40% B) i form af et lysegult pulver, der smelter nær 134 °C.

25 NMR-spektrum

Isomer A Isomer B

1,08 (d, -CH3 i 32) 1,14 (d, -CH3 i 32) 1,40-1,60 (mt, CH, i a) 1,40-1,60 (mt, CH2 i a) 30 1,60-1,80 (mt, CH2 i b) 1,60-1,80 (mt, CH2 i b) 1,73 (s, -CH3 i 33) 1,56 (s, -CH3 i 33) CH2 2,45-2,90 (mt, S-CH^-CIU-n'^ 2) 2,45-2,90 (mt, S-CH.-CH.-N^ ) 3,43 (mt, H26) ^n2 3,53 (mt, H26) ^Μ2 3,82 (s, CH2 17) 3,74-3,91 (2d, CH2 17) 35 4,71 (s, H27) 4,61 (d, H2?) 5,50 (d, H13) 6,64 (mt, H5) 6,64 (mt, H5 og NHg) 7,72 (mt, NHg) 8,13 (s, H20) 7,81 (d, H2Q) 0 32 DK 170421 B1

Referenceeksempel 1.

Til en opløsning af 0,41 ml 3-dimethylamino-pro-pylamin i 15 ml methanol indeholdende 2,4'ml 2N methanolisk saltsyre, der holdes ved 55°C, sættes 0,5 g pristinamycin 5 IA og 20 mg natriumcyanoborhydrid. Den fremkomne opløsning får derefter lov at antage en temperatur nær 20°C i ca.

2 timer, hvorefter den koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Den fremkomne remanens udrives med en blanding af 50 ml methylenchlorid og 50 ml 1 mættet vandig natriumhydrogencarbonatopløsning. Den or

ganiske fase dekanteres, og den vandige fase ekstraheres 2 gange med i alt 20 ml methylenchlorid. De organiske faser forenes, tørres over magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres derefter til tørhed under formindsket tryk (2,7 15 O

kPa) ved 30 C. Remanensen renses ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 80:20. Fraktion 15-30 forenes og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Den fremkomne remanens udrives med 5 20 ml ethylether, filtreres og tørres under formindsket tryk (0,027 kPa) ved 20°C. Der fås på denne måde 60 mg 5y-des- oxy-5Y-(3-dimethylamino-propyl)-amino-pristinamycin IA i form af et cremefarvet pulver, der smelter nær 160°C.

Det fuldstændige NMR-spektrum har følgende karak- . 25 teristika: 30 35 33 DK 170421 B1 δ (ppm) Signalform Tilskrives

8.40 d 6 KH

8.25 d 1 KH

7,55 dd ΓΗ6 5 7,05 π 6γ + 6c + 6ε 7 dd l'H^ 6,90 dd l'K5 6,70 d Ί

6.40 d J

10 6,50 d 2 NH

5,75 ddd 16 5.45 d 6a 5.25 dd 4a 5 s (bred) 5a 15 4,75 dd la 4.60 m 2a 4.45 d( bred) 5εχ 4.40 dd 3a 3,4 dd (bred) 36^ 20 3,20 dd (bred) 362 3 s 4 CH3 i 3 ” 5T + 481 og 2 ! 2 5 80 s 4 Is* (CH^)2 2,65 t -NCH - (kæde) j 25 2,35 m 5ε2 + 56: | 2.25 t -NCH-(kæde) j 2,20 s -N(CH3) (kæde) i 1.60 m -CH„- (kæde) j ^26+ 3γ ] 1.25 d 1Ύ !

30 0.90 t ' 2ύ I

0,50 dddd 56„ i I ) I .1 1 34 DK 170421 B1 0

Der fås en vandig opløsning med 10% 5y-desoxy--5γ-(3-dimethylamino-propyl)-amino-pristinamycin I. (for- A * bindelse A) i form af hydrochlorid med: forbindelse A 0,1 g 5 2N saltsyre 0,52 ml destilleret vand, op til 1 ml

Idet der gås frem på samme måde som beskrevet i referenceeksempel 1, fremstilles følgende synergistiner med den almene formel V, der kan kombineres med forbindelser 10 ifølge opfindelsen (symbolerne -----, Z og er defineret som under 1) ved den almene formel V): 15 20 25 30 35 35 DK 170421 B1 u

m O

mm (0 IH O *W

m to m ή ro Ε Η ro

ES H£ S

H O H U O UH ·ε UH

u o 00 O'-Η 00 (OH 00 om m m m om u o om o σ\ σ\ ·η r** m ^ C0 Ή rH H rH i—I ·Η · 1 I ·Η H Cr> am tji · tn 'C · tn £ · tr>

. β (OC (0 m rd C ffl & d C

m ·η om u c om c om u i c w c - -π £ • s as am as. om as am g η ε a ε m K*S £ m ga II) ft ΙΟ o 10 α HH 03 Οι ό cn o o o 3 a o rno' - -> tr> * ao X .C * ΟΌ H dvo Η m Ό H tjifl Ό H OΌ β Cp η m ·η οι m m ο Ό η αι m m 4J tr m <p m m 3 m 0 Ό Η > Ό H !> C H > Ό Η 0) m Η >

an >G0 H CO H (0 O H CO > Ό O HCO

(DO H (OH d (OH d >H d (OH H CH d (0 m m to 3 a >-c a λ a >λ to «c a >a η s a υ u too ο m>u ο (D Η 030 +J 03 Ο ω - Ο +J03O Ο 0 0)030 ε a m - η ό-η σ* λ° η ό - η g οι η ϊτι-η WO rl Op'd -HcNsrd ·Η Γ> ^ -H cAP ^ <D - TJ ·Η <λ° «Ό ^^dO>~t > Ο >1 <D * >1 >0>1 H tfP >1 0)0>1

i—I CM H C C rl C Λ ΙΊ Λ i Η ί D ,QHiO

,-) CM H(N H CN ΗΓΊ HCN HCN

cm fn ^ X ..

(Λ ΡΛ O ^

V /2 \ x nP

X z z ^

/ \ ~ X

\/ Xs1 - u V = «-> ™ X \ / X x 5 u x 27 z Z Z ^

i i i i I X

_ ____L_ N CM CM ™ '"h '"im m m >*5 5 5 5 5

, V y >_✓ Vfc/ 'w' X

=T =T =Γ =f =f _j---- u · C H CD C Η q . cm m <r _ ir\ ' Ώ

m 03 <D M

tn ο)_________ 36 DK 170421 B1 0

Referenceeksempel 8.

Til en opløsning af 2 g pristinamycin 1^ i 25 ml methanol sættes 2,8 ml 5N ethanolisk dimethylamin og derefter 2 ml 5N methanolisk saltsyre. Til den således frem-5 komne opløsning sættes 76 mg natriumcyanoborhydrid, hvorefter der omrøres i 48 timer ved en temperatur nær 20°C. Reaktionsblandingen koncentreres derefter til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Remanensen udrives med en blanding af 25 ml methylenchlorid og 25 ml mæt-10 tet vandig natriumhydrogencarbonatopløsning, den organiske fase dekanteres, og den vandige fase ekstraheres 2 gange med i alt 50 ml methylenchlorid. De organiske faser forenes, tørres over magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C.

15 Remanensen renses ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 92:8. Fraktionerne 5-12 forenes og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Der fås på denne måde 0,7 g 5v-desoxy-20 -5Y-dimethylamino-pristinamycin ΙΛ i form af et beige pul-ver, der smelter nær 170°C.

NMR-spektrum: 0,70 (dt, IH : 5&2) 2,10 - 2,60 (m, 4H : 5^+ 5<*2+ 5βχ+ 5γ) 25 2,15 (s, 3H x 0,8 : -N(CH2)2 1. isomer) 2,20 (s, 3H x 0,2 : -N(CH2)2 2. isomer)

Der fås en vandig opløsning med 2% 5y-desoxy-5Y--dimethylamino-pristinamycin IA (forbindelse B) i form af hydrochloridet med: 30 forbindelse B 0,05 g 0,1N saltsyre 0,56 ml destilleret vand, op til 2,5 ml 35 DK 170421 B1 0 37

Referenceeksempel 9.

Idet der gås frem på samme måde som beskrevet i referenceeksempel 8, fås der 0,35 g 5Y-desoxy-5v-methyl-amino-pristinamycin IA i form af et gult pulver, der smel-5 ter nær 185°C.

Der fås en vandig opløsning med 1% 5Y-desoxy-5Y--methylamino-pristinamycin i form af hydrochloridet.

Referenceeksempel 10.

10 Idet der gås frem på samme måde som beskrevet i referenceeksempel 8, fås der 1,2 g 5Y-desoxy-5Y-[N-(2-di- methylamino-ethyl)-N-methy1amino]-pristinamycin I i _ ** form af et hvidt pulver, der smelter nær 120°C.

Der fås en vandig opløsning med 10% 5Y-desoxy-'15 -5γ-[N-(2-dimethylamino-ethyl)-N-methylamino]-pristinamy- cin IA (forbindelse D) i form af hydrochloridet.

Referenceeksempel 11.

5 g molekylsigte 3 Å sættes til en opløsning af 20 3 g pristinamycin 1^, 3,3 g 4-diethylamino-l-methyl-butyl- amin, 0,11 g natriumcyanoborhydrid og 9 ml 5N methanolisk saltsyre i 75 ml methanol. Den fremkomne suspension omrøres i 4 timer ved en temperatur nær 20°C, hvorefter den filtreres. Filtratet koncentreres til tørhed under for-25. mindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Remanensen udrives med en blanding af 50 ml methylenchlorid og 50 ml mættet vandig natriumhydrogencarbonatopløsning. Den organiske fase dekanteres, og den vandige fase ekstraheres 2 gange med i alt 50 ml methylenchlorid. De organiske faser forenes, 30 tørres over magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Remanensen renses ved flashchromatografi, idet der som elue-ringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 90:10. Der fås på denne måde 0,7 g 5γ-35 -desoxy-5y-(4-diethylamino-l-methyl-butyl)-amino-pristina- mycin I i form af et beige pulver, der smelter nær 160°C.

DK 170421 B1 o r%

J O

o NMR- spektrum: 1,10 (mt, 9H : -N(CH2CH3)2 + -CH-CH3 ca. 1,7 (m, 4H : -CH2-CH2-CH2-N(C2H5)2) 2,90 (m, 6H : -CH2N(CH2CH3) 5 7,70 (mt, IH x 0,45 : l'Hg 1. isomer) 7,77 (mt, IH x 0,55 : l'Hg 2. isomer)

Der fås en vandig opløsning med 10% 5Y-desoxy--5γ-(4-diethylamino-l-methyl-butyl)-amino-pristinamycin IA (forbindelse F) i form af hydrochloridet med: 10 forbindelse F 0,1 g 0,1N saltsyre, op til 1 ml

Referenceeksempel 12.

Til en opløsning af 12,5 g 5y-desoxy-5Y-hydroxy-15 imino-pristinamycin 1^ i 300 ml methanol indeholdende 10 ml 2N methanolisk saltsyre sættes 0,7 g natriumcyanoborhydrid. Den fremkomne opløsning omrøres i 2 dage ved en temperatur nær 20°C, hvorefter den koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Remanensen udrives 20 med en blanding af 200 ml methylenchlorid og 100 ml mættet vandig natriumhydrogencarbonatopløsning. Den organiske fase dekanteres, og den vandige fase ekstraheres med 100 ml methylenchlorid. De organiske faser forenes, tørres o-ver magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres til tørhed 25 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Der fås efter rensning ved flashchromatografi, idet der som eluerings-middel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 95:5, 6,8 g 5Y-desoxy-5y-hydroxyamino--pristinamycin i form af et hvidt pulver, der smelter 30 nær 170°C.

NMR- spektrum: 0,4 (m, IH, 5β2) 2,45 (d, IH, 532) 3,1 (d, 5γ i et komplekst massiv) 35 7,80 (mt, IH x 0,75, l'Hg 1. isomer) 7,95 (mt, IH x 0,25, l'H, 2. isomer) Ό 39 DK 170421 B1 0 5y-Desoxy-5Y“hydroxyimino-pristinamycin 1^ kan fremstilles ved omrøring i 5 timer ved en temperatur nær 20°C af 15 g pristinamycin IA og 7,5 g hydroxylamin-hydro-chlorid opløst i 150 ml methanol indeholdende 8 ml 2N 5 methanolisk saltsyre. Reaktionsblandingen koncentreres derefter til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Remanensen udrives med en blanding af 100 ml chloroform og 100 ml mættet vandig natriumhydrogencarbonatopløs-ning. Den organiske fase dekanteres, og den vandige fase 10 ekstraheres 2 gange med i alt 200 ml chloroform. De organiske faser forenes, tørres over magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Der fås på denne måde 14 g 5Y-desoxy--5Y-hydroxyimino-pristinamycin i form af et beige pul-15 ver med smp. 210°C.

NMR-spektrum: 0,35 (dd, IH : 5β2) 3,25 (m, 2H : 462 + 5βχ) 5,05 (d, IH : 5a) 20 5,5 (m, 2H heraf 56^ 7,80 (dd, IH x 0,40 : l'Hg 1. isomer) 7,90 (dd, IH x 0,60 : l'Hg 2. isomer)

Referenceeksempel 13.

25 Idet der gås frem på samme måde som beskrevet i referenceeksempel 11, fås der 0,8 g 5γ-[N-(carboxymethyl)--methylamino]-5Y-desoxy-pristinamycin i form af et cremefarvet pulver, der smelter nær 140°C.

Der fås en vandig opløsning med 2% 5γ-[N-(carboxy-30 methyl)-methylamino]-5y-desoxy-pristinamycin 1^ (forbindelse K) med: forbindelse K 0,2 g destilleret vand, op til 10 ml 35 40 DK 170421 B1 o

Referenceeksempel 14.

Til en opløsning af 3,2 g 5Y-desoxy-5Y-(2-dimethyl-amino-ethyl)-amino-pristinamycin IA i 50 ml chloroform indeholdende 0,6 ml triethylamin sættes 0,3 ml acetyl-5 chlorid. Reaktionsblandingen omrøres i 30 minutter ved en temperatur nær 20°C, hvorefter den koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Remanensen renses ved flashchromatografi, idet der som elueringsmid-del anvendes en blanding af chloroform og methanol i vo-10 lumenforholdet 90:10, og fraktionerne 10-21 koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Der fås på denne måde 1,8 g 5Y-desoxy-5Y-[N-(2-dimethylamino--ethyl)-acetamido]-pristinamycin i form af et hvidt pulver, der smelter nær 170°C.

15 NMR-spektrum: 0,9 (m, 4H : 2γ + 5&2) 2,05 - 2,15 (m, 3H : 5£ + 5$2 + 5γ) 2,15 (s, 3H : -COCH3) 2,45 (s, 6H : -N(CH3)2) 20 2,35 - 2,60 (m, 5H : ^N-Ci^-Ci^-NC + 5βχ) 7,8 (mt, IH x 0,75 : l'Hg 1. isomer) 8,25 (mt, IH x 0,25 : l'Hg 2. isomer)

Der fås en vandig opløsning med 10% 5Y-desoxy--5γ-[N-(2-dimethylamino-ethyl)-acetamido]-pristinamycin 25 IA (forbindelse L) i form af hydrochloridet med; forbindelse L 0,1 g 0,2N saltsyre 0,51 ml destilleret vand, op til 1 ml 5y-desoxy-5Y- (2-dimethylamino-ethyl) - amino-pri-30 stinamycin I kan fremstilles som beskrevet i eksempel 5.

Referenceeksempel 15.

Idet der gås frem på samme måde som beskrevet i referenceeksempel 14, fås der 1,6 g 5Y-desoxy-5Y-[N-(3-35 -dimethylamino-propyl)-acetamido]-pristinamycin IA i form af et okkerfarvet pulver med smp. 210UC.

41 DK 170421 B1 0

Der fås en vandig opløsning med 10% 5v-desoxy-5Y--[N-(3-dimethylamino-propyl)-acetamido]-pristinamycin IA (forbindelse M) i form af hydrochloridet.

5 Referenceeksempel 16.

Til en opløsning af 3,6 g sÆ-methylen-pristina-mycin 1^ i en blanding af 25 ml methanol og 5 ml chloroform sættes 1,95 g 3-dimethylamino-propanthiol, hvorefter den fremkomne opløsning omrøres i 20 timer ved en tempera-10 tur nær 20°C. Derefter hældes reaktionsblandingen i 250 ml destilleret vand, og den fremkomne emulsion ekstraheres 3 gange med i alt 250 ml methylenchlorid. De organiske faser forenes, tørres over magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 15 30°C. Den fremkomne remanens renses ved flashchromatogra- fi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 95:5. Fraktionerne 10-38 koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Den fremkomne remanens udrives med 20 30 ml ethylether. De fremkomne krystaller fraskilles ved filtrering, hvorefter de tørres under formindsket tryk (27 kPa) ved 20°C. Der fås på denne måde 2,4 g 5<£-(3-di-methylamino-propyl)-thiomethyl-pristinamycin i form af hvide krystaller med smp. 234°C.

25 30 35 42 DK 170421 B1 0 NMR-spektrum: δ (ppm) Form Tilskrives

' 11,65 s (bred) OH

O

3,70 d 6 Fri

8,40 c 1 NK

7,80 cd l'Hg 7,45 m l'H4 + l'H5

10 ”s 27 m I

>6ν + 6δ·ί·6ε /, 17 πι J

d j,AB-system 4c * 4ε 6.60 dj

6,47 d 2 KH

15 5,87 ddd IS

5,83 d 6 ex 5,24 m 5α + 4a 5,03 ddd 5ε., 4,85 cd la 20 4,80 o 2a 4.53 dd 3a 3.53 ns 3c^ 3,35 ad“l 3,15 ååJ ABX-systeir -CH2-S-CH2- 25 3,25 s 4 NCH, 30 35 DK 170421 B1 0 43 δ (ppm) Form Tilskrives 3,25 m _ 3c9 2,90 s 4 N(CH3)9

5 2,90 m AS

2,55 t 2,50 dd 5ε2 2,AO t -CH2SCE2- 2,AO - 2,20 m 55 + 55χ 10 2,25 s -CH2N(CH3)2 2 m 3S^ 1,75 m -SCH2CK CH2~ 1,8 - 1,45 m 2&1 + 2&2 + 3γχ 1,30 d 1γ 15 1,25 - 1,05 m 3γ2 + 3$2 0,9 t 2γ 0,60 dd 582 20 Der fås en vandig opløsning med 10% 5£-(3-dimethyl- amino-propyl)-thiomethyl-pristinamycin (forbindelse AA) med: forbindelse AA 30 mg 0,IN saltsyre, op til 0,3 ml 25 5<S-Methylen-pristinamycin I kan fremstilles på følgende måde:

Til en opløsning af 12 g 5£-dimethylaminomethylen--pristinamycin 1^ i 230 ml tetrahydrofuran indeholdende 1,2 ml trifluoreddikesyre sættes 0,43 g natriumcyanobor-30 hydrid. Den fremkomne opløsning omrøres i 4 timer ved en temperatur nær 20°C, hvorefter den koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Den fremkomne remanens renses ved flashchromatografi., idet der som elue-ringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol 35 i volumenforholdet 95:5. Fraktionerne 4-15 koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Der fås DK 170421 B1 0 44 på denne måde 5,5 g 5£-methylen-pristinamycin i form af hvide krystaller med smp. 245°C.

NMR-spektrum: 0,55 (dd, IH : 5$2) 5 2,40 (d, IH : 5β1) 3,55 (dd, IH : 562) 5,25 (m, 2H : 5α + 5βχ) 5,30 og 6,10 (2s, 2H : =C'| ) 7,85 (dd, IH : l'Hg) 10 56-Dimethylaminomethylen-pristinamycin 1^ kan frem stilles på følgende måde:

Til en opløsning af 46 g pristinamycin 1^ i 460 ml 1,2-dichlorethan sættes 230 ml tert.butoxy-bis-(di-methylamino)-methan. Den fremkomne opløsning omrøres i 18 15 timer ved en temperatur nær 20°C. Reaktionsblandingen fortyndes med 1 liter methylenchlorid, hvorefter den vaskes 3 gange med i alt 3 liter 0,4%'s vandig ammoniumchloridop-løsning. Den organiske fase tørres over magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres til tørhed under formindsket tryk 20 (2,7 kPa) ved 30°C. Den fremkomne remanens udrives med 600 ml destilleret vand. Blandingen filtreres, og det faste produkt tørres under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 20°C. Der fås 41 g råt SÆ-dimetnylaminomethylen-pristinamycin 1^ i form af et beige pulver. Dette produkt har en til-25 strækkelig kvalitet til at kunne anvendes som det er i de efterfølgende trin. Det kan imidlertid renses på følgende måde: 23,5 g råt 5<S-dimethylaminomethylen-pristinamycin IÅ renses ved flashchromatografi, idet der som eluerings-30 middel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 98:2. Fraktionerne 16-25 forenes og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Der fås på denne måde 12 g S^-dimethylaminomethylen--pristinamycin i form af et beige pulver, der smelter 35 nær 195°C.

DK 170421 B1 0 45 NMR-spektrum: 0,9 (t, 3H : 2γ) 1,0 (dd, IH : 5β2) 2.50 (d, IH : 5βχ) 5 3,10 (s, 6H : -N(CH3)2) 3,70 (d, IH : 562) 5.50 (d, IH : 56χ) 7,40 (s, IH : =CHN(CH3)2) 7,75 (dd, IH : l'Hg) 10

Referenceeksempel 17.

Der gås frem på samme måde som beskrevet i referenceeksempel 16, men gås ud fra 0,9 g 5é>-methylen-virginia-mycin S og 0,52 g 3-dimethylamino-propanthiol. Efter rens-15 ning ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 90:10 og koncentrering til tørhed af fraktion 13-25 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 0,3 g 56- (3-dimethylamino-propyl)-thiomethyl-virginiamycin S i 20 form af et hvidt pulver, der smelter nær 142°C.

NMR-spektrum: 0,45 (dd, IH : 502)

1,90 (m, 2H : -SCH2CH2CH2NO

/¾ * · 25 2,40 (s, 6H : -CH9-N^ 4 %

2,60 (m, 4H : -S-CH2-CH2-CH2-NO

3,45 (d, IH : 5S2) 4,85 (m, 3H heraf 56^) 30 5,25 (dd, IH : 5a) 7,78 (dd, IH : l'Hg)

Der fås en vandig opløsning med 10% 5<i-(3-dimethyl-aminopropyl)-thiomethyl-virginiamycin S (forbindelse AB) i form af hydrochloridet med: 35 forbindelse AB 0,1 g saltsyre, op til 1 ml DK 170421 B1 0 46 5<?-Methylen-virginiamycin S kan fremstilles på samme måde som beskrevet i referenceeksempel 16 for 5<S-methy-len-pristinamycin 1^, idet der gås ud fra 2 g 5<5-dimethyl-aminomethylen-virginiamycin S og 74 mg natriumcyanoborhydrid.

5 Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som elue-ringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 98:2, og koncentrering til tørhed af fraktion 2-5 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 1 g 5£-methylen-virginiamycin S i form af et beige pul-10 ver, der smelter nær 190°C.

NMR-spektrum: 0,35 (dd, IH : 532) 2,45 (dd, IH : 53χ) 3,55 (dd, IH : 562) 15 5,25 (dd, IH : 56^ 5,25 (m, lH : 5a) 5,30 og 6,15 (2s, 2H : =C<| ) 7,75 (dd, IH : l'Hg) 55-Dimethylaminomethylen-virginiamycin S kan frem-20 stilles på samme måde som beskrevet i referenceeksempel 16 for S^-dimethylaminomethylen-pristinamycin 1^, ider der gås ud fra 2 g virginiamycin S og 10 ml bis-dimethylamino--tert.butoxy-methan. Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloro-25 form og methanol i volumenforholdet 98:2, og koncentrering· til tørhed af fraktion 9-12 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 0,8 g 5<J-dimethylaminomethylen-virginia-mycin S i form af et gult pulver, der smelter nær 175°C. NMR-spektrum: 30 0,9 (m, 4H : 2γ+5β2) 3,05 (s, 6H : = CH-N(CH3)2) 3,65 (d, IH : 562) 4,85 (d, IH : 5βχ) 5,15 (dd, IH : 5a) 35 7,10 - 7,40 (m : aromatiske + =CH-N<) 7,70 (dd, IH : l'Hj

O

DK 170421 B1 0 47

Referenceeksempel 18.

Der gås frem på samme måde som beskrevet i referenceeksempel 16, men gås ud fra 6 g SÆ-methylen-pristinamy-cin IA og 4 ml 2-(4-methyl-l-piperazinyl)-ethanthiol. Ef-5 ter rensning ved flashchromatografi, idet der som elue- ringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 97:3, og koncentrering til tørhed af fraktion 8-20 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 2,6 g 5<S-[2-(4-methyl-l-piperazinyl)-ethyl]-thiomethyl-10 -pristinamycin IA i form af hvide krystaller, der smelter ved 216°C.

NMR-spektrum: 0,60 (dd, IH : 5β2) 2.27 (s, 3H :>N-CH3) CH^-CH^ 2,40 - 2,80 (m, 11H : -CH0-N^ N- + 5β,) "2 1 5,05 (dd, IH : 56χ) 5.27 (m, 2H : 5a + 4a) 7,85 (mt, IH x 0,8 : l'Hg 1. isomer) 20 7,95 (mt, IH x 0,2 : l'Hg 2. isomer)

Der fås en vandig opløsning med 5% 55-[2-(4-methyl--1-piperazinyl)-ethyl]-thiomethyl-pristinamycin Ia (forbindelse AC) i form af hydrochloridet med: forbindelse AC 0,1 g 25 0,1N saltsyre 0,96 ml destilleret vand, op til 2 ml

Referenceeksempel 19.

Der gås frem på samme måde som beskrevet i referen-30 ceeksempel 16, men gås ud fra 2 g 55-methylen-pristinamycin IA og 3 ml 3-(4-methyl-l-piperazinyl)-propanthiol. Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som eluerings-middel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 90:10, og koncentrering til tørhed af frak-35 tion 10-25 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 1,9 g 55-(3-(4 -methyl-l-piperazinyl)-propyl]-thiomethyl- DK 170421 B1 0 48

-pristinamycin I i form af et hvidt pulver, der smelter A

nær 156°C.

NMR-spektrum: 0,65 (dd, IH : 5β2) 5 2,30 (s, 3H : ^N-CH3) CH -CH^ 2.50 (m, 13H : -CH~N N- + -SCH-- + 5(3,) \ch2-ch/.

5,27 (m, 2H : 5a + 4a) 10 7,85 (dd, IH x 0,8 : l'Hg 1. isomer) 7,95 (dd, IH x 0,2 : l'Hg 2. isomer)

Der fås en vandig opløsning med 10% 56-[3-(4-meth-yl-l-piperazinyl)-propyl]-thiomethyl-pristinamycin 1^ (forbindelse AD) i form af hydrochloridet med: 15 forbindelse AD 0,1 g 0,5N saltsyre 0,38 ml destilleret vand, op til 1 ml

Referenceeksempel 20.

20 Der gås frem på samme måde som beskrevet i referen ceeksempel 16, men gås ud fra 4 g 5<f-methy len-pr is tinamy-cin IA og 4 ml l,3-bis-dimethylamino-2-propanthiol. Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som eluerings-middel anvendes en blanding af chloroform og methanol i 25 volumenforholdet 95:5, og koncentrering til tørhed af fraktion 20-60 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 0,59 g 50-[1,3-bis-(dimethylamino)-2-propyl]-thiomethyl-pristinamycin IA i form af et hvidt pulver, der smelter nær 170°C.

30 NMR-spektrum: 0,63 (dd, IH : 5β2) 2,40 (s, 6H : -N(CH3)2)

ch„nC

2.50 (m, 10H : -CH' + -N(CH-.)~)

35 XcI2NC

4,97 (s, IH : 56.^ DK 170421 B1 0 49 5.30 (m, 2H : 5a + 4a) 7,85 (mt, IH x 0,85 : l'Hg 1. isomer) 7,95 (mt, IH x 0,15 : l'Hg 2. isomer)

Der fås en vandig opløsning med 7,5% 5<S-[1,3-5 -bis-(dimethylamino)-2-propyl]-thiomethyl-pristinamycin.

IA (forbindelse AE) i form af hydrochloridet med: forbindelse AE 0,03 g 0,1N saltsyre 0,3 ml destilleret vand, op til 0,4 ml 10

Referenceeksempel 21.

Der gås frem på samme måde som beskrevet i referenceeksempel 16, men gås ud fra 3 g 5^-methylen-pristina-mycin 1^ og 0,97 g l-methyl-4-mercapto-piperidin. Efter 15 rensning ved flashchromatografi, idet der som eluerings-middel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 95:5, og koncentrering til tørhed af fraktion 10-16 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 1,1 g 56-(l-methyl-4-piperidyl)-thiomethyl-pri-20 stinamycin I i form af et hvidt pulver, der smelter ved 260°C.

NMR-spektrum: 0,6 (dd, IH : 5β2) 25 2 (m, 4H : -S-/ z N-) xch2__^ 2,20 (s, 3H : -S-<^ ’^N-CH-g) 30 2,35 (m, IH : 5βχ) s—ch^v 2,90 (m, 4H : -S-<f * N-) N_ch^ 5.30 (m, 2H : 5a + 4a) 35 7,85 (dd, IH : l'Hg) 50 DK 170421 B1 0

Der fås en vandig opløsning med 5% 5<J- (1-methyl--4-piperidyl)-thiomethyl-pristinamycin 1^ (forbindelse AF) i form af hydrochloridet med: forbindelse AF 0,03 g 5 0,1N saltsyre 0,3 ml destilleret vand, op til 0,6 ml

Referenceeksempel 22.

Der gås frem på samme måde som beskrevet i re-10 ferenceeksempel 16, men gås ud fra 2 g 5<J-methylen-pri-stinamycin 1^ og 0,66 g 2-diethylamino-ethanthiol. Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som eluerings-middel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 95:5, og koncentrering til tørhed af ’15 fraktion 9-18 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C

fås der 0,8 g 5<S- (2-diethylamino-ethyl) -thiomethyl-pristinamycin lA i form af et beige pulver, der smelter ved 230°C.

NMR-spektrum: 20 0,65 (dd, IH : 5β2) 2,38 (d, IH : 5&1) 2,3 - 2,8 (m, 8H : -S CH2CH2 N<^|2~ ) 3,15 (dd, IH : -CH2S-) ~2 3,35 (dd, IH : -CH2S-) 25. 5,01 (dd, IH : 58^ 7,81 (dd, IH x 0,9 : l'Hg 1. isomer) 7,90 (dd, IH x 0,1 : l'Hg 2. isomer)

Der fås en vandig opløsning med 5% 5<S-(2-diethyl-amino-ethyl)thiomethyl-pristinamycin IA (forbindelse AF^) 30 i form af hydrochloridet med; forbindelse AF^ 30 mg 0,1N saltsyre 0,29 ml destilleret vand, op til 0,6 ml 35 51 DK 170421 B1 0

Referenceeksempel 23.

Til en opløsning af 5,5 g 5£-dimethylaminomethy-len-pristinamycin 1^ i 60 ml eddikesyre sættes dråbevis 5,3 g 2-dimethylami'no-ethylamin således, at temperaturen 5 ikke overskrider 25°C. Den fremkomne opløsning omrøres i 20 timer ved en temperatur nær 20°C, hvorefter den langsomt hældes i en mættet vandig natriumhydrogencarbonatop-løsning. Den fremkomne blanding ekstraheres 2 gange med i alt 750 ml methylenchlorid. De organiske faser forenes, 10 tørres over magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Remanensen renses ved flashchromatografi, idet der som eluerings-middel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 90:10, og fraktionerne 10-12 koncentreres 15 til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Der fås på denne måde 3 g 5<S- (2-dimethylamino-ethyl) -amino-methylen-pristinamycin i form af et beige pulver, der smelter nær 180°C.

NMR-spektrum: 20 0,90 (mt, 4H : 2γ + 5β2) 2.25 (mt, 6H : -N(CH3)2) 2.50 (mt, 3H : - CH2N< + 5βχ) 3.25 (mt, 2H : -N-CH2-) 3.50 (mt, 2H : 5S2 + 34i> 25 4,90 (mt, IH : 5βχ) mellem 7,15 og 7,4 (m, IH : =c' )

SH

9,90 (mt, IH (udveksleligt D20): -NH-)

Der fås en vandig opløsning med 1% 5<f-(2-dimethyl-30 amino-ethyl)-aminomethylen-pristinamycin I (forbindelse

A

AG) med: forbindelse AG 0,1 g destilleret vand, op til 10 ml 35 DK 170421 B1 0 52

Referenceeksempel 24.

Der gås frem på samme måde som beskrevet i refer- .

enceeksempel 23, men gås ud fra 13,8 g 55-dimethylamino-methylen-pristinamycin IA og 3,4 g 4-amino-l-methyl-piperi-.

5 din. Efter rensning ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 92,5:7,5, og koncentrering til tørhed af fraktion 15-20 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås der 4,0 g 5$-(l-methyl-4-piperidyl)-amino-10 methylen-pristinamycin i form af et gult pulver, der smelter ved 208°C.

NMR-spektrum: 0,40 (m, 4H : 2γ + 2&2) GR*—.

15 2,0 (m, 4H : —/ XN- ) ch2^ 2,35 (s, 3H : ^N-CH3) 2,45 (d, IH : 5β]_) 20 2,90 ( z N-) 3,20 (i et massiv, IH : -CH^ ^N-) N_^ 25 3,50 (d, IH : 562) 4,85 (i et massiv, IH : 56^) 6,65 (d, IH : =CHNH-) 9,70 (dd, IH x 0,25 : =CH-NH- 1. isomer) 10,03 (dd, IH x 0,85 : =CH-NH- 2. isomer) 30 Der fås en vandig opløsning med 10% 5^-(1-methyl- -4-piperidyl)-aminomethylen-pristinamycin 1^ (forbindelse AT) i form af hydrochloridet med: ' forbindelse AT 0,03 g 0,1N saltsyre 0,3 ml 35 destilleret vand, op til 0,3 ml 53 DK 170421 B1 0 4-Amino-l-methyl-piperidin kan fremstilles ifølge metoden, der beskrives af E.F. Elslager, L.M. Werbel, A. Curry, N. Headen og J. Johnson, J. Med. Chem. 11_, 99 (1974) .

Idet der gås frem som i referenceeksempel 23, 5 fremstilles følgende synergistiner med den almene formel V, der kan kombineres med forbindelserne ifølge opfindelsen.

(Symbolerne-----, X og Z er defineret som under 2b) for den almene formel V, og Y betyder en dimethylamino-gruppe, medmindre der er angivet andet).

10 15 20 25 1 35

Reference- ^ 1) Smeltepunkt eks. nr. 4 2) Opløselighed 54 DK 170421 B1 25 -NH-(CH0)„N(C„Hc)„ 1) gult pulver, smp. ca.

22 252 150°C

2) 5%'s vandig opløsning i 5 form af hydrochlorid

26 -NhKCh^^NH CH^ 1) gult pulver, smp. 174°C

2) 1%'s vandig opløsning i fonn af hydrochlorid 10 27 -NH(Cf-L),N(CH,)0 1) gult pulver, smp. ca.

2 3 '3 2 155°C

2) 6,6%'s vandig opløsning i form af hydrochlorid 28 -NH-CH-CH9N(CH,)7 1) gult pulver, smp. ca.

15 | 2 3 2 160°C

CH

3 2) 1%'s vandig opløsning i form af hydrochlorid 29 -NHCH0CH-N(CI-L)0 1) orange pulver, smp. ca.

21 1 2 3 4 175°C

pu 20 3 2) 10%'s vandig opløsning i form af hydrochlorid 30 -NH-CH-(CH0)7N(C0Hi;)0 1) beige pulver, smp. ca.

I 23 232 160°C

CH

3 2) 1%'s vandig opløsning i 25 form af hydrochlorid

31 . — 1) gult pulver, smp. 183°C

-nh-(ch2)2-n 2) 1%'s vandig opløsning i form af hydrochlorid

32 . . 1) gult pulver, smp. 170°C

2

-NH(CH2)3-fT

3 2) 1%'s vandig opløsning 4 — 1) gult pulver, smp. ca.

-NH(CH2)2-N^ \ ' 162°C

33 2) 1%'s vandig opløsning i form af hydrochlorid

Reference- R^ 1) Smeltepunkt eks. nr. 2) Opløselighed 55 DK 170421 B1 M -NH(CH,),-N'' ^ 1) beige pulvar, Bmp. ca.

2) 1%'s vandig opløsning i 5 form af hydrochlorid 35 ChLChi, 1) beige pulver, smp. ca.

I 2 3 «Λ -NH-CHg-/ \ 2) 1%'s vandig opløsning i form af hydrochlorid

10 36 - 1) beige pulver, smp. 177°C

-NH-/\ 2) 1%'s vandig opløsning i \ y form af hydrochlorid CH3

Reference- Y R 1) Smeltepunkt eks. nr. 4 2) Opløselighed 15 37 H .-. 1) beige pulver, smp. ca.

- - -NH-/ - N-CH3 195°C

^ ^ 2) 5%'s vandig opløsning i form af hydrochlorid

38 -N(CH,)7 _ 1) gult pulver, smp. 150°C

20 ^ 1 -NH(CH2)2-N N-CH3 ^ ^ 2) 10%'s vandig opløsning i form af hydrochlorid.

39 -N(CH,)9 N 1) gult pulver, smp. 138°C

^ z _nh-(ch2)2-/ 25 I , 2) 10%'s vandig opløsning -^ i form af hydrochlorid __ DK 170421 B1 0 56

Referenceeksempel 40.

Til en opløsning af 1,84 g 56-dimethylaminomethy-len-pristinamycin IA i 40 ml eddikesyre sættes 2,1 g 2--dimethylamino-ethanthiol. Den fremkomne opløsning omrøres 5 i 20 timer ved en temperatur nær 20°C, hvorefter den langsomt hældes i en mættet vandig natriumhydrogencarbonatop-løsning. Den fremkomne blanding ekstraheres 3 gange med i alt 400 ml methylenchlorid. De organiske faser forenes, tørres over magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres til 10 tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Den fremkomne remanens renses ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 96:4. Fraktionerne 5 og 6 forenes og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) 15 ved 30°C. Der fås på denne måde 0,8 g 5<J- (2-dimethylamino--ethyl)-thiomethylen-pristinamycin i form af et gult pulver, der smelter nær 150°C.

NMR-spektrum: 0,68 (dd, IH : 5$2) 20 2,32 (s, 6H x 0,85 : -CH2N(CH2)2 1* isomer) 2,35 (s, 6H x 0,15 : -CH2N(CH2)2 2. isomer) 2,45 (d, IH : 5βχ) 2,65 (mt, 2H : -SCH2") 3,05 (t, 2H : -CH2NC) 25 3,43 (dd, IH : 562) 5,15 (i et massiv: 56-^) 7,60 (s bred, IH : =CHS-) 7,83 (mt, IH : l'Hg to isomere)

Der fås en vandig opløsning med 1% 5&(2-dimethyl-30 amino-ethyl)-thiomethylen-pristinamycin IA (forbindelse AX) i form af hydrochloridet med: forbindelse AX 0,1 g 0,IN saltsyre 1 ml destilleret vand, op til 10 ml 35 Idet der gås frem som i referenceeksempel 40, fremstilles følgende synergistiner med den almene formel V, der kan kombineres med forbindelserne ifølge opfindelsen: 57 DK 170421 B1 0

Symbolerne-----, X og Z er defineret som under 2b) for formel V, og Y betyder en dimethylaminogruppe, medmindre der er angivet andet.

5 i " ~

Reference- γ R 1) Smeltepunkt eks. nr. 4 2) Opløselighed 41 -N(CH,)0 -S-CCH-^NiCLH,,)., 1) beige pulver, smp. ca.

32 22232 192oc 2) 1%'s vandig opløsning 10 i form af hydrochlorid 42 -N(CH,)9 -S-(CH9)-,N(CH,)9 1) beige pulver, smp. ca.

i 2 20 02 170oc 2) 1%'s vandig opløsning i form af hydrochlorid 15 43 -H -S(CH9)7N(CH,)7 1) beige pulver, smp. ca.

3 3 2 140°C

2) 10%'s vandig opløsning i form af hydrochlorid 44 -N(CH,)9 -S CH9-CH-CH9N(OU9 1) beige pulver, smp.

32 2 [ 2 32 234°c 20 ^3 2) 1%'s vandig opløsning i form af hydrochlorid 45 -N(CH,)0 -S-CH9-C-N(CH,)9 1) beige pulver, smp. ca.

32 V'N 3 2 200°C

ch3 ch3 200 C

2) 1%'s vandig opløsning . i form af hydrochlorid 46 -N(CH,)9 ^- 1) beige pulver, smp. ca.

3 2 -S(CH2)2-N 180°C

2) 1%'s vandig opløsning i form af hydrochlorid 30 35

Reference- 1) Smeltepunkt eks. nr. 4 2) Opløselighed 58 DK 170421 B1 47 CH, 1) beige pulver, smp. ca.

I 3 215°C

N x ς /ρμ. \ / \ 2) 0,6%'s vandig opløsning 5 - 2~ i form af hydrochlorid 48 _ 1) gult pulver, smp. ca.

-s-/ \j-ch3 ivo°c 2) 1%'s vandig opløsning i form af hydrochlorid 10 49 . 1) beige pulver, smp. ca.

-S-/\ 175°C

2) 1%'s vandig opløsning i form af hydrochlorid CH,CH3 —— 1-1 ' Γ '' ""jf 50 -S-(CH„)„N-(CH„)0N(CH,)„ 1) gult pulver, smp. ca.

15 2 21 2 2 5 2 160oc

CH

3 2) 1%’s vandig opløsning 51 -S-CH[CHoN(CH,)o]0 1) beige pulver, smp. ca.

2 3 2 2 190°C

2) 1%'s vandig opløsning 20 i form af hydrochlorid 52 ^-------- 1) beige pulver, smp. ca.

-S(CH0)0-N N-CH, 170°C

2 2 \ / 3 2) 1%'s vandig opløsning i form af hydrochlorid 25 53 ^ 1) beige pulver, smp. ca.

-S(CH2)3-ff N-CH3 190°C

^ ^ 2) 10%'s vandig opløsning i fonn af hydrochlorid

Reference- R D Smeltepunkt eks. nr. K4 2) Opløselighed 59 DK 170421 B1 0 _ 54 -S-CH,-CH-CH,-N(CH,), 1) okkerfarvet pulver,

5 1 I L @ -5 -5 smp. ca. 150°C

^3 2) 1%'s vandig opløsning i form af hydrochlorid 55 -5(CHo).S0,H 1) gult pulver, smp. over

2 2 3 280°C

10 2) 5%'s vandig opløsning

Referenceeksempel 56.

Til en opløsning af 0,87 g 1-(2-mercapto-propyl)-4-15 -methyl-piperazin i 50 ml ethanol tilsat 0,34 g natrium- ethylat sættes en opløsning af 5,2 g 5£-(4-methyl-phenyl)--sulfonyloxymethylen-pristinamycin 1^ i 50 ml methylenchlo-rid. Reaktionsblandingen omrøres i 16 timer ved en temperatur nær 20°C, hvorefter den fortyndes med 500 ml methylen-20 chlorid og 100 ml destilleret vand. Efter omrøring ekstrahe-res den vandige fase 2 gange med i alt 50 ml methylenchlorid. De organiske faser forenes, tørres over magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Remanensen renses ved flashchromatogra-25 fi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 97,5:2,5. Fraktionerne 33-80 forenes og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Der fås på denne måde 1,25 g 5<J-[3-(4-methyl-l-piperazinyl)-2-propyl]-thiomethy-30 len-pristinamycin i i form af et beige pulver, der smelter nær 195°C.

35 60 DK 170421 B1 0 NMR-spektrum: 0,70 (dd, IH : 532) 1,25 (d, 3H : -CH-CH3) 2,30 (s, 3H : >N-CH3) 5 ^CHCH^ 2,50 (m, 10H : -CH--N N-CH- ) ^ch2ch/ 3,40 (dd, IH : 562) 7,85 (dd bred, IH : l'Hg) 10 Der fås en vandig opløsning med 10% 5<f- [3- (4-methyl- -1-piperazinyl)-2-propyl]-thiomethylen-pristinamycin IA (forbindelse AAN) i form af hydrochloridet med: forbindelse AAN 0,03 g 0,1N saltsyre 0,3 ml 15 1-(2-Mercapto-propyl)-4-methyl-piperazin fremstil les ved opvarmning til 100°C i 16 timer af en blanding af 19 ml propylensulfid og 29 ml N-methylpiperazin. Der fås på denne måde 32 g af en farveløs olie, der destillerer ved 105°C under et tryk på 1,3 kPa.

20 5<S- (4-Methyl-phenyl)-sulfonyloxymethylen-pristina- mycin I kan fremstilles på følgende måde:

Til en opløsning af 2,7 g 5<5-hydroxymethylen-pri-stinamycin 1^ i 30 ml methylenchlorid sættes ved en temperatur nær -30°C 0,42 ml triethylamin og derefter 0,57 g p-25 -toluensulfonsyrechlorid. Reaktionsblandingen omrøres derefter i 2 timer ved en temperatur nær 20°C, hvorpå den koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Den fremkomne remanens renses ved flashchromatografi, idet der som elueringsmiddel anvendes en blanding af methy-30 lenchlorid og methanol i volumenforholdet 96:4. Efter koncentrering til tørhed af fraktion 4-6 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 2,2 g 5&- (4-methyl-phenyl)--sulfonyloxymethylen-pristinamycin IA i form af et hvidt pulver, der smelter nær 265°C.

.35 DK 170421 B1 0 61 NMR-spektrum: 0,50 (dd, IH : 5&2) 2.35 (S, 3H : -S02“<^ ^>-CH3) 5 3.30 (dd, IH : 562) 5,25 (d, IH : 5a) 5.30 (dd, IH : 56·^ 7.35 - 7,90 (AB-system + m, 8H : 4 +46 +

10 SS

S s 7,85 (dd, IH : l'Hg) 15 5<9--Hydroxymethylen-pristinamycin kan fremstil les på følgende måde:

Til 420 ml 0,1N saltsyre sættes under omrøring 10,6 g 5<5-dimethylaminomethylen-pristinamycin I . Den fremkomne opløsning omrøres i 3 timer ved en temperatur nær 20°C.

20 Der tilsættes derefter dråbevis 30 ml mættet vandig natrium-hydrogencarbonatopløsning, således at der fås en pH-værdi nær 4. Der udfældede produkt fraskilles ved filtrering og vaskes 3 gange med i alt 30 ml destilleret vand. Efter tørring under formindsket tryk (2,7 kPa) ved en temperatur nær 25 20°C fås 9,5 g 50-hydroxymethylen-pristinamycin i form af et beige pulver. Dette produkt har tilstrækkelig kvalitet til at kunne anvendes som det er i de efterfølgende trin. Det kan imidlertid renses på følgende måde: 9,5 g råt Si-hydroxymethylen-pristinamycin I op- il 30 løses i 50 ml ethylenacetat. Den fremkomne opløsning hældes på 100 g siliciumdioxid i en søjle med en diameter på 2,8 cm. Der elueres først med 400 ml ethylenacetat, og eluatet bortkastes. Der elueres derefter med 1600 ml ethyl-acetat, og eluatet koncentreres til tørhed under formindsket 35 tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Der fås på denne måde 6,3 g 56- -hydroxymethylen-pristinamycin i form af hvide krystaller med smp. 220°C.

DK 170421 B1 0 62 NMR-spektrum: 0,69 (dd, IH : 5&2) 2,43 (d, IH : 5βχ) 3,40 (d, IH : 562) 5 4,0-4,2 (m, 3H : 4α+56^+5α) 8,15 (s, IH : =CH-OH) 11,63 (s bred, IH : =CH-OH)

Referenceeksempel 57.

10 Idet der gås frem på samme måde som beskrevet i referenceeksempel 56, fås der 1 g 5<£-(3-dimethylamino-2--propyl)-thiomethylen-pristinamycin i form af et gult pulver, der smelter ved 172°C.

Der fås en 5%'s vandig opløsning af 5δ-(3-dimethyl-15 amino-2-propyl)-thiomethylen-pristinamycin 1^ (forbindelse AAO) i form af hydrochloridet.

Referenceeksempel 58.

Idet der gås frem på samme måde som beskrevet i 20 referenceeksempel 56, fås der 1,32 g 56’-(5-diethylamino-2--pentyl)-thiomethylen-pristinamycin 1^ i form af et beige pulver, der smelter ved ca. 185°C.

Der fås en 10%'s vandig opløsning af 5<£- (5-di-ethylamino-2-pentyl)-thiomethylen-pristinamycin I (for-25 bindelse AAP) i form af hydrochloridet.

Referenceeksempel 59.

En opløsning af 7,6 g 5<S-[ (4-methyl-phenyl)-sul-fonyloxymethylen]-pristinamycin IA i 60 ml tetrahydrofuran 30 afkøles til en temperatur nær -10°C. Der tilsættes langsomt under bibeholdelse af denne temperatur en opløsning af 0,65 g 2-dimethylamino-ethanol i 60 ml tetrahydrofuran tilsat 0,35 g af en 50%'s dispersion af natriumhydrid i mineralolie. Efter tilsætningen lader man langsomt temperaturen 35 stige til nær 20°C. Reaktionsblandingen omrøres i 24 timer ved denne temperatur, hvorefter den fortyndes med 500 ml 63 DK 170421 B1 methylenchlorid og vaskes 2 gange med 50 ml af en mættet ammoniumchloridopløsning. Den organiske fase tørres over magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 40°C. Den fremkomne re-g manens renses ved flashchromatografi, idet der som elue-ringsmiddel anvendes en blanding af chloroform og methanol i volumenforholdet 95:5. Fraktionerne 12-17 forenes og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 25°C. Der fås på denne måde 1,5 g 5<f- (2-dimethylamino-1Q -ethoxymethylen)-pristinamycin i form af et beige pulver, der smelter nær 160°C.

NMR-spektrum: 0,65 (dd, IH : 5&2) 2,3 (s, 6H : -N(CH3)2) 15 2,65 (m, 2H : -CH2NC) 3,42 (dd, IH : 5€2) 4.15 (t, 2H : -OCH2~) 5.15 (d, IH : 56^ 7,45 (under de aromatiske, IH : ^C=CHO-) 20 7,80 (dd, IH : l'Hg)

Der fås en vandig opløsning med 1% 5<$- (2-dimethyl-amino-ethoxymethylen)-pristinamycin 1^ (forbindelse AAQ) i form af hydrochloridet med: forbindelse AAQ 0,03 g 25 0,IN saltsyre 0,3 ml destilleret vand, op til 3 ml

De følgende eksempler illustrerer præparater ifølge opfindelsen.

30 35 64 DK 170421 B1 0

Eksempel A.

Der fremstilles ifølge sædvanlige metoder en inji-cerbar opløsning til infusion indeholdende 5 g/liter aktiv 5 blanding med følgende sammensætning: 26-(2-diethylamino-ethyl)-thio-pristinamycin II_ 3 g

O

55-(3-dimethylamino-propyl)-thiomethyl--pristinamycin IA 2 g 0,1N saltsyre 65 ml 10 destilleret vand, op til 1000 ml

Eksempel B.

Der fremstilles en injicerbar opløsning til infusion indeholdende 1 g/liter aktiv blanding med følgende 15 sammensætning: 26-(4-methyl-l-piperazinyl)-pristinamycin II„ 0,6 g

O

5S- [2- (4-methyl-l-piperazinyl)-ethyl] - thiomethyl- * -pristinamycin 1^ 0,4 g 0,IN saltsyre 15,4 ml 20 destilleret vand, op til 1000 ml 25 30 35 65 DK 170421 B1 OPLØSELTGHED OG BIOLOGISK AKTTVTTBT Opløselicrhed 5 Forbindelse ifølge eks. nr. Opløselighed mg/cm3 1 20 2 20 3 33 10 4 50 5 20 6 50 7 50 8 20 15 9 og 10 33 11 20 12 20

Sammenlignings-20 forbindelse: pristinamycin IIA 0,0001

Bakteriostatisk aktivitet in vitro 25 Til en serie af plader indeholdende et kendt volumen (20 cm3) af et passene dyrkningsmedium (Muller-Hinton-agar) sættes 1/10 af dette volumen af en række af geometrisk fremadskridende (forhold = 2) fortyndinger af produktet, der skal undersøges. Pladerne inokuleres med en flerpunkts-ino-30 kulator, som afsætter en plet af 104 kolonidannende enheder af mikroorganismen i tryptisk sojamedium inkuberet i 18 timer ved 37°C og fortyndet 1/100 med det samme medium.

Efter inokuleringen inkuberes pladerne i 24 timer ved 37 °C.

35 Den minimale inhiberende koncentration (MIK) er den laveste koncentration, ved hvilken mikroorganismernes udvik- 66 DK 170421 B1 ling inhiberes.

Aktivitet mod intraoeritoneale infektioner hos mus

Mus injiceres intraperitonealt med 0,5 cm3 af en pas-5 sende, 18 timer gammel rystekultur af den anvendte mikroorganisme i "Brain Heart Infusion"-medium (Difco) passende fortyndet med 5% svinemucin. Denne injektion bevirker, at kontroldyrene dør i løbet af 24 til 48 timer. Den undersøgte forbindelse indgives subcutant to gange med 5 timers mellem-10 rum på dagen for injektionen, idet den første dosis gives 1 time efter injektionen af mikroorganismen. Der anvendes enhedsdoser indeholdt i et volumen på 50 cm3/kg.

Den 50%'s kurative dosis (CD50) er den dosis af den undersøgte forbindelse, som indgivet ved hver indgivelse 15 bevirker, at halvdelen af de behandlede dyr overlever i hele forsøgsperioden (8 dage).

Resultaterne af disse forsøg fremgår af den følgende tabel: 20 25 30 35 67 DK 170421 B1

Aktivitet af forbindelser med den almene formel i sammen med pristinamvcin 1^_____

Eks.nr. Aktivitet in vitro, Aktivitet in vivo

Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus 5 Smith MIK /zg/cm^ Smith CD50 mg/kg s.c.

14 20 2 4 20 3 8 22 10 4 8 27 5 8 50 6 4 7 7 4 22 8 8 70 15 9 og 10 4 15 11 8 26 12 4 12

Sammen-20 ligningsprodukt pristina- mycin !&/!!& 0,12 ca. 15 (*) 25 * På grund af uopløseligheden af den naturlige blanding nødvendiggør indgivelsen af dette produkt anvendelsesmæssige kunstgreb, som bevirker varierende resultater.

Resultaterne, der demonstrerer den synergistiske 30 virkning af forbindelserne ifølge opfindelsen, er bestemt ved kombinationer af de respektive forbindelser og pristi-namycin 1¾ i forholdet 60/40.

For de respektive forbindelser alene er MIK-værdierne fra 60 til over 1000 μg/ml, og CDso-værdierne er fra 150 til 35 over 300 mg/kg.

Aktiviteten af sammenligningsproduktet gælder kun DK 170421 Bl 68 for mus og kan ikke overføres til mennesker på grund af uopløseligheden af sammenligningsproduktet. De nævnte "an- ; vendelsesmæssige kunstgreb” refererer til anvendelsen af opløsningsmidler, som ikke er farmaceutisk acceptable. På 5 grund af opløseligheden af forbindelserne ifølge opfindelsen frembyder disse ikke sådanne problemer.

10 15

Claims (4)

1. Pristinamycin lig-derivater, kendetegnet ved, at de har den almene formel 0 ch, J o 0 chs dl CH, nKy -0 10 hvori R betyder a) en alkylthiogruppe, der er substitueret med (i) en eller to alkylamino- eller dialkylaminogrupper, hvis alkyIdele eventuelt sammen med nitrogenatomet, hvortil 15 de er bundet, danner en mættet heterocyclus valgt blandt 1-pyrrolidinyl, piperidino, 1-azetidinyl, 1-azepinyl, morpho-lino, thiomorpholino og 1-piperazinyl (eventuelt substitueret med en alkylgruppe) eller med (ii) 2- eller 3-pyrrolidinyl, 2-, 3- eller 4-piperidyl, 20 2- eller 3-azetidinyl eller 2-, 3- eller 4-azepinyl, b) en gruppe med den almene formel Het-S- (ID 25 hvori Het betyder 3-pyrrolidinyl, 3- eller 4-piperidyl, 3-azetidinyl eller 3- eller 4-azepinyl (eventuelt substitueret med en alkylgruppe ved nitrogenatomet), eller c) en dialkylaminogruppe, hvis alkyldele eventuelt sammen med nitrogenatomet, hvortil de er bundet, danner 30 en mættet heterocyclus valgt blandt 1-pyrrolidinyl, piperi-dinq, 1-azetidinyl, 1-azepinyl, morpholino, thiomorpholino og 1-piperazinyl (eventuelt substitueret med en alkylgruppe) , idet alkylgrupperne og alkyldelene, der er nævnt ovenfor 35 er ligekædede eller forgrenede og indeholder 1-5 carbonatomer, eventuelt i deres isomere former og deres blandinger, samt deres additionssalte med farmaceutisk acceptable syrer. 70 DK 170421 B1

2. Fremgangsmåde til fremstilling af pristinamycin II -derivater ifølae krav 1, kendetegnet ved, at en forbindelse med den almene formel - 5 R - Ή (III) hvori R har den i krav 1 angivne betydning, omsættes med pristinamycin 11^ med formlen 10 O * hvorefter det fremkomne produkt i påkommende tilfælde adskilles i sine isomere og eventuelt omdannes til additionssalt 20 med en farmaceutisk acceptabel syre.

3. Farmaceutisk præparat, kendetegnet ved, at det indeholder mindst ét derivat ifølge krav 1 kombineret med et vandopløseligt synergistin med den almene formel 25 °^N-1 XTOJqS 0” hvori Y betyder et hydrogenatom eller en dimethylaminogruppe, og 35 71 DK 170421 B1 1. z~IZZ betyder en enkeltbinding, Z og betyder et hydrogenatom, og X betyder en gruppe med den almene formel /R2

5 -N <VI> X hvori betyder et hydrogenatom, og Rg betyder en hydroxygruppe eller en alkylgruppe, der eventuelt er substitueret med en 10 carboxygruppe, en alkyloxycarbonylgruppe, en hydroxygruppe, en alkylaminogruppe eller en dialkylaminogruppe, hvori alkyl-delene sammen med nitrogenatomet, hvortil de er bundet, eventuelt danner en 4-7-leddet heterocyclus valgt blandt azetidinyl, pyrrolidinyl, piperidinyl, piperazinyl, N-alkyl-15 piperazinyl og azepinyl, eller R3 betyder en cycloalkylgruppe med 3-7 carbonatomer eller en mættet 4-7-leddet heterocyclus valgt blandt azetidin, pyrrolidin, piperidin og azepin, idet disse heterocycler eventuelt er substitueret med en alkylgruppe ved nitrogenatomet, eller 20 R2 betyder en formyl- eller alkylcarbonylgruppe, og R3 betyder en alkylgruppe substitueret med en carboxygruppe, en alkylaminogruppe eller en dialkylaminogruppe, hvori alkylde-lene sammen med nitrogenatomet, hvortil de er bundet, eventuelt danner en 4-7-leddet heterocyclus valgt blandt azetidinyl., 25 pyrrolidinyl, piperidinyl, piperazinyl, N-alkylpiperazinyl og azepinyl, eller R^ betyder en 4-7-leddet heterocyclus valgt blandt azetidin, pyrrolidin, piperidin og azepin, idet disse heterocycler eventuelt er substitueret med en alkylgruppe ved nitrogenatomet, eller 30 R2 og Rg, der er ens eller forskellige, betyder en alkylgruppe, der eventuelt er substitueret med en carboxygruppe, en alkyloxycarbonylgruppe, en hydroxygruppe., en alkylaminogruppe eller en dialkylaminogruppe, hvori alkyl-grupperne eventuelt sammen med nitrogenatomet, hvortil de 35 er bundet, danner en 4-7-leddet heterocyclus valgt blandt azetidinyl, pyrrolidinyl, piperidinyl, piperazinyl, N-al-kylpiperazinyl og azepinyl, eller DK 170421 B1 0 72 1*2 og 1*2 sammen med nitrogenatomet, hvortil de er bundet, danner en 4-7-leddet heterocyclus valgt blandt azetidin, t pyrrolidin, piperidin, morpholin og piperazin, der eventuelt er substitueret med en alkylgruppe, eller 5 2) ----- betyder en dobbeltbinding, X betyder et oxygenatom, og Z betyder en gruppe med den almene formel -CH Xr5 10 hvor a) og betyder hver især et hydrogenatom, og R^ betyder en 3-pyrrolidinyl-thio- eller 3- eller 4-piperidyl--thiogruppe (idet disse grupper eventuelt er substitueret 15 med en alkylgruppe), eller R^ betyder en alkylthiogruppe, der er substitueret med en eller to hydroxysulfonyl-, alkyl-amino- eller dialkylaminogrupper (eventuelt substitueret med en mercapto- eller dialkylaminogruppe) eller med en eller to heterocycler valgt blandt piperazino (eventuelt substitue-2o ret med en alkyl- eller mercaptoalkylgruppe), morpholino, thiomorpholino, piperidino, 1-pyrrolidinvl, 2-, 3- eller 4--piperidyl og 2- eller 3-pyrrolidinyl (idet de to sidstnævnte heterocycler eventuelt er substitueret med en alkylgruppe ved nitrogenatomet), eller 25 b) R^ og R^ danner sammen en valensbinding, og R^ betyder 3-pyrrolidinyl-amino, 3- eller 4-piperidyl-amino, 3-pyr-rolidinyl-oxy, 3- eller 4-piperidyl-oxy, 3-pyrrolidinyl--thio, 3- eller 4-piperidyl-thio (idet disse grupper eventuelt er substitueret ved nitrogenatomet i heterocylen med en 30 alkylgruppe), eller R^ betyder en alkylamino-, alkyloxy- eller alkylthiogruppe, der er substitueret med en eller to . hydroxysulfonyl-, alkylamino- eller dialkylamino- (eventuelt substitueret med en dialkylaminogruppe), trialkylam-monio- eller 4- eller 5-imidazolylgrupper eller med en eller 35 to heterocycler valgt blandt piperazino (eventuelt substitueret med en alkyl- eller mercaptoalkylgruppe), morpholino, 0 DK 170421 B1 73 thiomorpholi.no, piperidino, 1-pyrrolidinyl, 2-, 3- eller 4-piperidyl og 2- eller 3-pyrrolidinyl (idet de to sidstnævnte cycler eventuelt er substitueret med en alkylgrup-pe ved nitrogenatomet), idet alkylgrupperne og alkyldelene, 5 der vedrører de ovenfor definerede symboler, indeholder 1-5 carbonatomer og er ligekædede eller forgrenede, i påkommende tilfælde i form af en af de isomere deraf eller blandinger deraf og eventuelt i form af et additionssalt med en syre, et metalsalt eller et additionssalt med en 10 nitrogenholdig base, idet præparatet eventuelt indeholder andre farmaceutisk acceptable hjælpestoffer. 15 20 25 30 35