DK166151B

DK166151B - Pristinamycin iib-derivater, deres fremstilling og farmaceutiske praeparater deraf

Info

Publication number: DK166151B
Application number: DK011286A
Authority: DK
Inventors: Jean-Claude Barriere; Claude Cotrel; Jean-Marc Paris
Original assignee: Rhone Poulenc Sante
Priority date: 1985-01-11
Filing date: 1986-01-10
Publication date: 1993-03-15
Also published as: IE58618B1; LV5269A3; AU577654B2; AU5214286A; EP0191662B1; JPS61165389A; MX9203597A; IL77551A; JPH0662633B2; FR2576022A1; FI860117A0; DK11286A; ZA86152B; CA1315474C; PT81794B; DE3660258D1; ATE34753T1; ES8800254A1; EP0191662A1; FI83326C

Description

i

DK 166151 B

Den foreliggende opfindelse angår pristinaxnycin IIB--derivater, deres fremstilling og farmaceutiske præparater deraf.

Opfindelsen angår hidtil ukendte pristinamycin IIB-5 -derivater, som er ejendommelige ved, at de har den almene formel I

io .

0 0 0)3 y*" (I) X ,υ <°>n 15 hvori R betyder - en 4- til 7-leddet nitrogenholdig heterocyclylgruppe, som eventuelt indeholder 1 eller 2 andre heteroatomer valgt 20 blandt nitrogen, oxygen eller svovl i form af sulfoxid eller sulfon, og som eventuelt er substitueret med en alkylgruppe, eller - en alkylkæde indeholdende 2-4 carbonatomer substitueret med 1 eller 2 grupper valgt blandt phenyl, cycloalkylamino 25 eller N-alkyl-N-cycloalkyl-amino indeholdende 3-6 ringled, alkylamino, dialkylamino eller dialkylcarbamoyloxy (idet alkyldelene af de 2 sidstnævnte grupper eventuelt sammen med nitrogenatomet, hvortil de er bundet, kan danne en 4-til 7-leddet mættet eller umættet heterocyclisk gruppe, som 30 eventuelt indeholder et andet heteroatom valgt blandt nitrogen, oxygen eller svovl i form af sulfoxid eller sulfon, og som eventuelt er substitueret med en alkylgruppe) eller substitueret med én eller to 4- til 7-leddede nitrogenholdige heterocycliske grupper, som eventuelt indeholder 1 eller 2 35 andre heteroatomer valgt blandt nitrogen, oxygen eller svovl i form af sulfoxid eller sulfon, og som eventuelt er sub-

DK 166151B

2 stitueret med en alkylgruppe, idet de nævnte heterocycliske grupper er bundet til den kæde, som bærer dem, via et car-bonatom, og idet mindst én af substituenterne båret af den ovennævnte alkylkæde er en nitrogenholdig substituent, som 5 kan danne salte, eller en [l-methyl-2(S)-pyrrolidinyl]-me-thylgruppe, n er lig med 1 eller 2, og, medmindre andet er anført, de ovennævnte alkylgrupper er ligekædede eller forgrenede og indeholder 1-10 carbonatomer, i deres isomere former eller deres blandinger, samt deres additionssalte 10 med syrer.

Når R betyder en heterocyclylgruppe, kan denne gruppe f.eks. være valgt blandt 3-azetidinyl, 3-pyrroli-dinyl, 3- eller 4-piperidinyl eller 3- eller 4-azepinyl.

Når R betyder en heterocyclylalkylgruppe, kan 15 heterocyclylgruppen f.eks. være valgt blandt de ovennævnte grupper eller 2-azetidinyl, 2-pyrrolidinyl, 2-piperidyl, 2-azepinyl, piperazinyl, 4-alkyl-piperazinyl, quinolyl, isoquinolyl eller imidazolyl.

Når R indeholder en dialkylamino- eller dialkyl-20 carbamoyloxygruppe, hvis alkyldele sammen med nitrogenatomet, hvortil de er bundet, danner en heterocyclisk gruppe, kan denne f.eks. være valgt blandt 1-azetidinyl, 1--pyrrolidinyl, piperidino, 1-azepinyl, morpholino, thio-morpholino i form af sulfoxid eller sulfon, 1-piperazinyl, 25 4-alkyl-l-piperazinyl, N-alkyl-l-homopiperazinyl og 1--imidazolyl.

Opfindelsen angår også en fremgangsmåde til fremstilling af pristinamycin IIB-derivater ifølge opfindelsen, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at et pristinamy-30 cin IIB-derivat (dets salt eller et beskyttet derivat deraf) med den almene formel II

35 3

DK 166151 B

CH_ J Λ CH, k.0 * " hvori R har den ovenfor angivne betydning, idet når R in-10 deholder en svovlholdig heterocyclus, svovlatomet kan være i form af sulfid, sulfoxid eller sulfon, oxideres, hvorpå den fremkomne forbindelse eventuelt adskilles i dens isomere, og, i givet tilfælde, beskyttelsesgruppen fjernes, og den fremkomne forbindelse eventuelt omdannes til et additionssalt 15 med en syre.

Omsætningen gennemføres i almindelighed ved hjælp af et oxidationsmiddel, der eventuelt er fremstillet in situ, i vandigt medium eller i et organisk opløsningsmiddel, fortrinsvis et chloreret opløsningsmiddel (f.eks.

20 methylenchlorid, 1,2-dichlorethan, chloroform) eller en alkohol (f.eks. methanol, tert.butanol) eller en blanding af disse opløsningsmidler. Der arbejdes eventuelt under nitrogen.

Blandt egnede oxidationsmidler til fremstilling af 25 forbindelser med den almene formel I, hvori n = 1, kan der nævnes organiske persyrer, nemlig percarboxylsyrer eller persulfonsyrer (f.eks. pereddikesyre, pertrifluoreddike-syre, permyresyre, perbenzoesyre, m-chlorperbenzoesyre, p-nitro-perbenzoesyre, permaleinsyre, monoperphthalsyre, 30 percamphersyre eller p-toluen-persulfonsyre) eller uorganiske persyrer (f.eks. periodsyre eller persvovlsyre).

Når der ønskes fremstillet en forbindelse med den almene formel I, hvori n = 2, arbejdes der fordelagtigt i nærværelse af selendioxid og hydrogenperoxid med et salt 35 af forbindelsen med den almene formel II, eller i nærværelse af en persyre som de ovenfor nævnte, især pertrifluor-eddikesyre eller m-chlor-perbenzoesyre.

O

4

DK 166151 B

Når pristinamycin II -derivatet med den almene formel II anvendes i form af et salt, anvendes der salte dannet med organiske eller uorganiske syrer, fortrinsvis trifluoreddikesyre, vinsyre, eddikesyre, benzoesyre el-5 ler hydrogenchlorid.

Når forbindelsen med den almene formel II anvendes i form af et salt eller et beskyttet derivat, gennemføres reaktionen fordelagtigt ved en temperatur mellem -40 og 50°C.

10 Når der ønskes fremstillet en forbindelse med den almene formel I, hvori n = 1, er det ligeledes interessant at arbejde ud fra pristinamycin lig-derivatet med den almene formel II i nærværelse af et alkalimetalhydrogencar-bonat (f.eks. natriumhydrogencarbonat) ved en temperatur 15 mellem -60 og -40°C.

Når R indeholder en alkylamino- eller cycloalkyl- aminosubstituent, er det ligeledes muligt at anvende et beskyttet derivat af forbindelsen med den almene formel II, idet sidstnævnte kan være beskyttet med enhver amin-20 -beskyttelsesgruppe, hvis indføring og fjernelse ikke på virker resten af molekylet. Der anvendes fordelagtigt en trifluoracetylgruppe, der efter omsætningen kan fjernes ved behandling med et alkalimetalhydrogencarbonat (natrium- eller kaliumhydrogencarbonat) i vandig opløsning.

25 Forbindelserne med den almene formel II kan frem

stilles ved indvirkning af en forbindelse med den almene formel III

R-H (III) hvori R har den ovenfor angivne betydning,

30 på en forbindelse med formlen IV

o o 5

DK 166151 B

O

dvs. pristinamycin 11^.

Omsætningen gennemføres sædvanligvis i et organisk opløsningsmiddel, såsom en alkohol, f.eks. methanol eller ethanol, eller et chloreret opløsningsmiddel som methylen-_ chlorid, 1,2-dichlorethan eller chloroform, eller i en 5 blanding af disse opløsningsmidler (f.eks. methylenchlo-rid/methanol) ved en temperatur mellem -30 og 50°C.

Det kan eventuelt være fordelagtigt at arbejde i nærværelse af en tertiær amin, f.eks. triethylamin, eller 0 en ethanolamin, f.eks. dimethylethanolamin.

Det vil forstås af en fagmand, at når R betyder en gruppe, der indeholder en sekundær aminfunktion, der kan interferere med reaktionen, bør denne funktion være beskyttet i forvejen, før forbindelsen med den almene formel III

omsættes med forbindelsen med formlen IV. Der kan til det-1 o te formål anvendes enhver gængs metode til at blokere en sekundær aminfunktion i form af en labil gruppe. Det er særlig fordelagtigt at anvende en trifluoracetylgruppe som blokerende gruppe. Denne kan derefter fjernes som beskrevet 20 ovenfor. I et sådant tilfælde er det imidlertid ikke absolut nødvendigt at fjerne beskyttelsesgruppen, idet det beskyttede derivat kan anvendes direkte ved oxidationsreaktionen.

Forbindelserne med den almene formel I, hvori n = 2, kan ligeledes fremstilles ved oxidation af en for-25 bindelse med den almene formel I, hvori n = 1.

Reaktionen gennemføres under betingelser, der er analoge med betingelserne beskrevet ovenfor for fremstilling af en forbindelse med den almene formel I, hvori n = 2, ud fra et pristinamycin lig-derivat med den almene for-30 mel II.

De hidtil ukendte forbindelser med den almene formel I kan renses ved kendte metoder, f.eks. krystallisation, chromatografi eller successive ekstraktioner i surt eller basisk medium. På grund af den kendte følsomhed af syner-35 gistiner i alkalisk medium forstås der ved "basisk medium"

DK 166151B

6 et medium, der netop er tilstrækkelig alkalisk til at frigøre modersubstansen fra dens additionssalt med en syre, dvs. et medium, hvis pH-værdi ikke overskrider 8.

Det er velkendt, at synergistiner fremstillet ved 5 fermentering er meget efterspurgte af læger til behandling af mange tilstande, som skyldes grampositive bakterier (stafylokokker, streptokokker, pneumokokker, enterokokker) og gramnegative bakterier (af slægten Haemophilus, gonokokker, meningokokker). Imidlertid har disse forbindelser 10 den ulempe, at de er uopløselige i vandigt medium og derfor kun kan indgives oralt i almindelighed i form af kapsler, drageer eller tabletter. På grund af denne uopløselighed er det umuligt at anvende de hidtil kendte synergistiner, når patienten ikke er i stand til at sluge dem, 15 hvilket især er tilfældet ved behandling af børn og bevidstløse patienter, hvorimod aktivitetsspektret af disse forbindelser giver dem en særlig værdifuld indikation under et stort antal omstændigheder, f.eks. når der er tale om komatøs septikæmi.

20 De hidtil ukendte forbindelser ifølge opfindelsen har den betydelige fordel, at de kan solubiliseres i vand, i almindelighed i form af salte, i anvendelige terapeutiske doser, og at de ved et synergifænomen forhøjer den antibakterielle virkning af pristinamycin 1^, virginiamy-25 cin S eller opløselige derivater af synergistiner med den nedenfor anførte almene formel V.

Opfindelsen angår således endelig også et farmaceutisk præparat, som er ejendommeligt ved, at det mindst indeholder et pristinamycin lig-derivat ifølge opfindelsen i kombination 30 med et kendt synergistin eller et opløseligt synergistin med den almene formel V

35

DK 166151B

7 0<5*ϋ^"Ν—\ N /Λ g:* 6° 10 hvori Y betyder et hydrogenatom eller en dimethylaminogruppe, og 1)---betyder en enkelt binding, Z og R1 betyder et hydro genat om, og X betyder en gruppe med den almene formel 15 R2 -N^

hvori R

- R2 betyder et hydrogenatom, og R3 betyder en hydroxy-20 eller alkylgruppe, som eventuelt er substitueret med en carboxy-, alkyloxycarbonyl-, hydroxy-, alkylamino- eller dialkylaminogruppe, hvoraf alkylgrupperne sammen med nitrogenatomet, hvortil de er bundet, kan danne en 4- til 7-leddet heterocyclisk gruppe valgt blandt azetidinyl, pyrrolidinyl, 25 piperidinyl, piperazinyl, N-alkylpiperazinyl eller azepinyl, eller R3 betyder en cycloalkylgruppe med 3-7 carbonatomer eller en 4- til 7-leddet mættet heterocyclisk gruppe valgt blandt azetidin, pyrrolidin, piperidin og azepin, idet disse heterocycliske grupper eventuelt kan være substitueret på 30 nitrogenatomet med en alkylgruppe, eller - R2 betyder en formyl- eller alkylcarbonylgruppe, og R3 betyder en alkylgruppe substitueret med en carboxy-, alkylamino- eller dialkylaminogruppe, hvor alkylgrupperne sammen med nitrogenatomet, hvortil de er bundet, kan danne en 4- 35 til 7-leddet heterocyclisk gruppe valgt blandt azetidinyl, pyrrolidinyl, piperidinyl, piperazinyl, N-alkylpiperazinyl 8

DK 166151 B

eller azepinyl, eller R3 betyder en 4- til 7-leddet hetero-cyclisk gruppe valgt blandt azetidin, pyrrolidin, piperidin og azepin, idet disse heterocycliske grupper kan være substitueret på nitrogenatomet med en alkylgruppe, eller 5 - R2 og R3, som er ens eller forskellige, betyder en alkyl gruppe, som eventuelt er substitueret med en carboxy-, al-kyloxycarbonyl-, hydroxy-, alkylamino- eller dialkylamino-gruppe, hvor alkylgrupperne sammen med nitrogenatomet, hvortil de er bundet, eventuelt danner en 4- til 7-leddet hetero-10 cyclisk gruppe valgt blandt azetidinyl, pyrrolidinyl, pipe-ridinyl, piperazinyl, N-alkylpiperazinyl eller azepinyl, eller - R2 og R3 sammen med nitrogenatomet, hvortil de er knyttet, danner en 4- til 7-leddet heterocyclisk gruppe valgt blandt 15 azetidin, pyrrolidin, piperidin, morpholin og piperazin, som eventuelt er substitueret med en alkylgruppe, eller 2) --- betyder en dobbelt binding, X betyder et oxygenatom, og Z betyder en gruppe med den almene formel 4

20 R

-cbC' \r5 hvori a) R1 og R5 hver især betyder et hydrogenatom, og R4 betyder 25 en 3-pyrrolidinyl-thio- eller 3- eller 4-piperidyl-thiogruppe (idet disse grupper eventuelt er substitueret med en alkylgruppe) , eller R4 betyder en alkylthiogruppe substitueret med én eller to hydroxysulfonyl-, alkylamino-, dialkylamino-grupper (eventuelt substitueret med en mercapto- eller dial-30 kylaminogruppe) eller med én eller to cycliske grupper valgt blandt piperazino (eventuelt substitueret med en alkyl-eller mercaptoalkylgruppe), morpholino, thiomorpholino, piperidino, 1-pyrrolidinyl, 2-, 3- eller 4-piperidyl og 2-eller 3-pyrrolidinyl (idet de to sidstnævnte cycliske grupper 35 eventuelt er substitueret på nitrogenatomet med en alkylgruppe) , eller 9

DK 166151 B

b) R^· og R5 tilsammen danner en valensbinding, og R4 betyder en 3-pyrrolidinyl-amino-, 3- eller 4-piperidyl-amino, 3-pyr-rolidinyl-oxy-, 3- eller 4-piperidyl-oxy-, 3-pyrrolidinyl--thio-, 3- eller 4-piperidyl-thio-gruppe (idet disse grupper 5 eventuelt er substitueret på gruppens nitrogenatom med en alkylgruppe), eller R4 betyder en alkylamino-, alkyloxy-eller alkylthiogruppe substitueret med én eller to hydroxy-sulfonyl-, alkylamino-, dialkylamino- (eventuelt substitueret med en dialkylaminogruppe), trialkylammonium- eller 4- eller 10 5-imidazolyl-grupper eller med én eller to grupper valgt blandt piperazino (eventuelt substitueret med en alkylgruppe eller mercaptoalkylgruppe), morpholino, thiomorpholino, piperidino, 1-pyrrolidinyl, 2-, 3- eller 4-piperidyl og 2-eller 3-pyrrolidinyl (idet de to sidstnævnte grupper even-15 tuelt er substitueret på nitrogenatomet med en alkylgruppe), idet alkylgrupperne og alkyldelene, som vedrører de ovenfor definerede symboler, indeholder 1-5 carbonatomer og er lige-kædede eller forgrenede, eventuelt i form af en af deres isomere eller deres blandinger, og eventuelt i form af ad-20 ditionssalt med en syre, metalsalt eller additionssalt med en nitrogenholdig organisk base, idet det nævnte præparat ligeledes kan indeholde andre farmaceutisk acceptable ad-juvanser.

Forbindelserne med den almene formel V, der er 25 defineret som under 1) ovenfor, med undtagelse af sådanne, hvori R2 betyder en formyl- eller alkylcarbonylgruppe, kan fremstilles ved indvirkning af en amin med den almene formel VIII

Λ 30 HN/ (VIII)

Xr3 hvori R2 °9 R3 ^ar den ovenfor angivne betydning, på et synergistin med den almene formel IX 35 10

DK 166151 B

c Y^\^LY~Q~y ,λ^νν^ (IX)

YhK Λ,0 10 hvori Y betyder et hydrogenatom (virginiamycin S) eller en dimethylaminogruppe (pristinamycin I ) i nærværelse af et alkalimetalcyanoborhydrid.

Der arbejdes i almindelighed med et overskud af 15 aminen med den almene formel VIII i nærværelse af et alkalimetalcyanoborhydrid som natriumcyanoborhydrid i et organisk opløsningsmiddel, såsom en alkohol, hvori der er opløst gasformigt hydrogenchlorid (methanolisk eller ethanolisk saltsyre), ved en temperatur mellem 0°C og reaktionsblan-20 dingens tilbagesvalingstemperatur, fortrinsvis ved en temperatur nær 20°C.

Omsætningen kan fordelagtigt gennemføres i nærværelse af et tørringsmiddel, såsom molekylsigter.

Forbindelserne med den almene formel V defineret 25 som ovenfor under 1), hvori betyder en formyl- eller alkylcarbonylgruppe, og R3 betyder en alkylgruppe substitueret med en carboxy-, alkylamino- eller dialkylamino-gruppe, hvori alkyldelene eventuelt sammen med nitrogenatomet, hvortil de er bundet, danner en 4-7-leddet hetero-30 cyclus valgt blandt azetidinyl, pyrrolidinyl, piperidinyl, piperazinyl, alkylpiperazinyl eller azepinyl, eller betyder en mættet 4-7-leddet heterocyclus valgt blandt azeti-din, pyrrolidin, piperidin og azepin, hvor disse hetero-cycler kan være substitueret med en alkylgruppe ved nitro-35 o 11

DK 166151 B

genatomet, og Y har den ovenfor angivne betydning, kan fremstilles ved indvirkning af en forbindelse med den almene formel X

Rg - CO - Q (X) 5

hvori Rg betyder et hydrogenatom eller en alkylgruppe, og Q betyder et halogenatom eller en alkylcarbonyloxygruppe, på en forbindelse med den almene formel XI

O f3 /“Λ 10 —\_y v * X> 0° ’ hvori Y har den ovenfor angivne betydning, og R" 3 har til-20 svarende betydning som R3 som angivet ovenfor.

Omsætningen gennemføres i almindeligl ed i et organisk opløsningsmiddel som pyridin, i et chloreret opløsningsmiddel (methylenchlorid) eller en ether (tetra-hydrofuran) i nærværelse af en syreacceptor, såsom en or-25 ganisk base som triethylamin eller en uorganisk base, såsom et alkalimetalcarbonat eller -hydrogencarbonat scm natriumhydro-gencarbonat, idet der arbejdes ved en temperatur mellem 0 og 80°C.

Det vil forstås af en fagmand, at når R’3 betyder en gruppe indeholdende en sekundær aminfunktion, bør den-30 ne funktion være beskyttet i forvejen, før forbindelsen med den almene formel X omsættes med forbindelsen med den almene formel XI. Beskyttelsen gennemføres under de betingelser, der er beskrevet ovenfor for fremstilling af forbindelser med den almene formel II.

35 Det vil ligeledes forstås af en fagmand, at når R2 og/eller R3 i den almene formel VIII betyder en gruppe o 12

DK 166151 B

indeholdende en sekundær aminfunktion, bør denne funktion være beskyttet i forvejen, før forbindelsen med den almene formel. VIII omsættes med forbindelsen med den almene formel IX. Blokeringen og deblokeringen gennemføres som _ ovenfor beskrevet.

O

Forbindelserne med den almene formel V defineret som ovenfor under 2), hvori Y har den ovenfor angivne betydning, og de andre symboler har den ovenfor under 2)a) angivne betydning, kan fremstilles ved indvirkning af en 10 forbindelse med den almene formel XII

R'4-h (XII)

hvori R'^ har den ovenfor under 2)a) angivne betydning af 15 , på en forbindelse med den almene formel XIII

0λ,χ;^ύΧλ0 25 o hvori Y har den ovenfor angivne betydning.

Der arbejdes i almindelighed i et organisk opløsningsmiddel, såsom en alkohol som methanol eller et chlore-30 ret opløsningsmiddel som chloroform, eller en blanding af disse opløsningsmidler ved en temperatur mellem 0°C og reaktionsblandingens tilbagesvalingstemperatur, fortrinsvis ved en temperatur nær 20°C.

Forbindelserne med den almene formel XIII kan frem- 35 . . o stilles ved indvirkning af et alkalimetalborhydnd, såsom

O

13

DK 166151 B

natriumcyanoborhydrid, på en forbindelse med den almene formel XIV

ΗΝ-^-=η^Η= 0 CH3 <XIV) ,o tv iv hvori Y har den ovenfor angivne betydning.

Der arbejdes i almindelighed i et organisk opløs-15 ningsmiddel, såsom en ether som tetrahydrofuran eller en alkohol som f.eks. isopropanol, i nærværelse af en syre, såsom trifluoreddikesyre, ved en temperatur mellem 0°C og reaktionsblandingens tilbagesvalingstemperatur, fortrins-20 vis ve<^ en temPeratur nær 20°C.

Forbindelserne med den almene formel XIV kan fremstilles ved indvirkning af en forbindelse med formlen XV

CV /xi 25 />’ - CV (XV) a>3 x2 hvori X^ betyder en alkyloxygruppe, og X£ betyder en alkyl-oxy- eller dimethylaminogruppe, eller X^ og X£ begge be-30 tyder en dimethylaminogruppe, på en forbindelse med den almene formel IX.

I praksis er det fordelagtigt at omsætte tert.-butoxy-bis-(dimethylamino)-methan med en forbindelse med den almene formel IX, idet der arbejdes i et organisk op-35 løsningsmiddel, såsom et chloreret opløsningsmiddel som 1,2- 14

DK 166151 B

O

-dichlorethan eller et amid (f.eks. dimethylformamid), ved en temperatur mellem 0 og 80°C, fortrinsvis ved en temperatur nær 20°C.

Forbindelserne med den almene formel XV kan fremstilles ifølge metoderne/ der beskrives af H. Bredereck 5 et al., Chem. Ber. 101, 41 og 3058 (1968) og 106, 3725 (1973) .

Forbindelserne med den almene formel V, hvori Y har den ovenfor angivne betydning, og de andre symboler har den ovenfor under 2)b) angivne betydning, med undtagelse af sådanne, hvori betyder 3-pyrrolidinyl-oxy, 3-eller 4-piperidyl-oxy eller alkyloxy, der eventuelt er substitueret som defineret under 2)b), kan fremstilles ved indvirkning af en forbindelse med den almene formel XVI

15 R"4 - Η (XVI) hvori R"4 har den ovenfor angivne betydning af R^, på en forbindelse med den almene formel XIV, hvori Y har den o-20 venfor angivne betydning.

Omsætningen gennemføres i organisk medium i nærværelse af en syre (f.eks. eddikesyre eller en blanding af eddikesyre og katalytiske mængder trifluoreddikesyre) og eventuelt i nærværelse af et opløsningsmiddel ved en tem-25 peratur mellem 0 og 50°C, fortrinsvis ved en temperatur nær 20°C.

I påkommende tilfælde kan opløsningsmidlet vælges blandt organiske opløsningsmidler, såsom ethere (tetrahydro-furan), alkoholer (ethanol) og chlorerede opløsningsmid-.

30 ler (f.eks. methylenchlorid eller chloroform).

Forbindelserne med den almene formel V, hvori Y har den ovenfor angivne betydning, og de andre symboler har den ovenfor under 2)b) angivne betydning, kan fremstilles ved indvirkning af en forbindelse med den almene for-35 mel XVII

R" '4-H (XVII)

O

15

DK 166151 B

hvori R'"4 er defineret som under 2)b), på en forbindelse med den almene formel XVIII

i*3 /=\ 5 V ΥΝΌ-/ >—c--£η- o .A /v.

H, CH-T η υ r^Z, JL JL s JL .L (XVIII) io V\ rS 0 hvori Y har den ovenfor angivne betydning, og Z^ betyder 15 tosyloxy, acetyloxy, trimethylsilyloxy eller dialkyloxy-phosphoryloxy, hvori alkyldelene er ligekædede eller forgrenede og indeholder 1-4 carbonatomer, eller Z1 betyder et chloratom.

Der arbejdes i almindelighed i et organisk opløs-20 ningsmiddel, såsom en ether som tetrahydrofuran, en alkohol som ethanol eller et chloreret opløsningsmiddel (f.eks. methylenchlorid eller chloroform) ved en temperatur nær 20°C. Omsætningen gennemføres i basisk medium, f.eks. i nærværelse af et alkalimetalhydrid eller en alkalimetal-25 alkoholat som natriumethylat eller kalium-tert.butylat.

Når R"'4 er forskellig fra substitueret alkyloxy eller heterocyclyloxy, er det ligeledes muligt enten at arbejde i neutralt medium ved en temperatur mellem 0 og 50°C i et af de ovenfor nævnte opløsningsmidler eller i 30 surt medium under betingelser, der er identiske med de o-venfor beskrevne for omsætning af en forbindelse med den almene formel XVI med en forbindelse med den almene formel XIV.

Forbindelserne med den almene formel XVIII kan 35 fremstilles ved sur hydrolyse af en forbindelse med den almene formel XIV til dannelse af en forbindelse med den 16

DK 166151 B

almene formel XIX 5 HN^CC£^ 0 || 0 WIX) A 0 (Js efterfulgt af

a) indvirkning af en forbindelse med den almene formel XX

Ζ’,-Χ (XX) 15 1 hvori X betyder et halogenatom, og er defineret som Z^ ovenfor, men ikke kan betyde et chloratom, eller

β) indvirkning af en forbindelse med formlen XXI

20 (c6h5)3pci2 (XXI) til dannelse af en forbindelse med den almene formel XVIII, hvori Z^ betyder et chloratom.

Hydrolysen af forbindelsen med den almene formel XIV til forbindelsen med den almene formel XVIII gennemfør res ved hjælp af en vandig opløsning af en uorganisk syre, såsom 0,1N saltsyre, idet der arbejdes ved en temperatur nær 20°C.

30 Omsætningen af forbindelsen med den almene formel XX med forbindelsen med den almene formel XIX gennemføres i almindelighed i et organisk opløsningsmiddel, såsom methylenchlorid, i nærværelse af en syreacceptor, såsom en organisk base som triethylamin eller en uorganisk base 35 som et alkalimetalcarbonat eller -hydrogencarbonat, f.eks. natrium- eller kaliumhydrogencarbonat. Der arbejdes i al- o 17

DK 166151 B

mindelighed ved en temperatur mellem -20 og +20°C.

Omsætningen af forbindelsen med den almene formel XXI med forbindelsen med den almene formel XIX gennemføres i almindelighed i et chloreret opløsningsmiddel, så-5 som methylenchlorid, ved en temperatur mellem -20 og +20°C.

Forbindelserne med de almene formler III, VIII, XII, XVI og XVII kan fremstilles ifølge eller analogt med metoderne, der er beskrevet nedenfor i eksemplerne, og især ifølge: 1Q - G.G. Urquart et al., Org. Synth., _21, 36 (1941) - A.I. Vogel, J. Chem. Soc., 1822 (1948) - J.H. Chapman og L.N. Owen, J. Chem. Soc., 579 (1950) - H.R. Snyder et al., J. Am. Chem. Soc., 6_9, 2672 (1947) - D.D. Reynolds et al., J. Org. Chem., 2_6, 5125 (1961) 15 - J.w. Haeffele et al., Proc. Sci. Toilet Goods Assoc., 32, 52 (1959) - H. Barrer et al., J. Org. Chem. 2]_, 641 (1962) - J.H. Biel et al., J. Amer. CHem. Soc., T7' 2250 (1955) når der er tale om en forbindelse med den almene formel III, 20 XII, XVI eller XVII, hvori R, R’4, R"4 eller R"'4 betyder en substitueret alkylthiogruppe eller en heterocyclylthio-gruppe, eller ifølge: - A.J.W. Headlee et al., J. Amer. Chem. Soc., ji5, 1066 (1933) 25 - B.K. Campbell og K.N. Campbell, J. Amer. Chem. Soc., 60, 1372 (1938) - R.C. Elderfield et al., J. Amer. Chem. Soc., J58, 1579 (1946) når der er tale om en forbindelse med den almene formel 30 XVI eller XVII, hvori R"4 eller R'"4 betyder en substitueret alkyloxygruppe eller en heterocyclyloxygruppe, eller ifølge: - J. Amer. Chem. Soc., J54, 1499 (1932) - J. Amer. Chem. Soc., 54, 3441 (1932), 35 — når der er tale om en forbindelse med den almene formel VIII eller med den almene formel III, XVI eller XVII,

O

18

DK 166151 B

hvori Rf R"4 eller R"'4 betyder substituerede alkylamino-grupper, eller ifølge - E.F. Elslager et al., J. Med. Chem., 17, 99 (1974) - L.M. Werbel et al., J. Het. Chem., 10^, 363 (1973), når der er tale om en forbindelse med den almene formel 5 III, XVI eller XVII, hvori R, R"4 eller R"'4 betyder hetero-cyclylaminogrupper.

Det vil ved de ovenfor anførte metoder forstås, at når R, R2, R^, **'4' **"4 eHer R,,,4 indeholder en sekundær aminfunktion, der kan interferere med omsætningen, bør 10 denne i forvejen være beskyttet ved enhver kendt metode, der ikke ændrer resten af molekylet. Beskyttelsesgruppen fjernes efter omsætningen under de betingelser, der er beskrevet ovenfor.

I påkommende tilfælde kan isomerene af forbindelserne med den almene formel I og/eller forbindelserne med den almene formel V separeres ved chromatografi eller høj-ydelses-væskechromatografi.

Forbindelserne med den almene formel V kan renses 20 som nævnt ovenfor for forbindelserne med den almene formel I.

De hidtil ukendte pristinamycin Il^-derivater i-følge opfindelsen og deres farmaceutisk acceptable salte udviser særlig interessante antibakterielle egenskaber in 25 vitro og in vivo.

In vitro har forbindelserne med den almene formel I vist sig aktive over for Staphylococcus aureus Smith i doser mellem 4 og 100 pg/ml. Endvidere har de en synergis-tisk indflydelse på den antibakterielle virkning af pris-30 tinamycin I i doser mellem 0,1 og 10 ug/ml.

In vivo har forbindelserne ifølge opfindelsen vist sig virksomme over for eksperimentelt fremkaldte infektioner hos mus med Staphylococcus aureus Smith i doser mellem 40 mg/kg og over 300 mg/kg ved subcutan indgivelse. De har 35 en synergistisk indflydelse på den antimikrobielle virkning i doser mellem 8 og 200 mg/kg ved subcutan indgivelse, 19

DK 166151 B

når de kombineres med pristinamycin 1^ i forhold på mellem 10-90% og 90-10%.

Den akutte giftighed af forbindelserne med den almene formel I, udtrykt ved deres DL^-g, er i almindelighed 5 mellem 300 mg/kg ved subcutan indgivelse til mus og doser på over 1 g/kg.

Den antibakterielle aktivitet in vitro og in vivo er bestemt ved de følgende forsøg.

10 Bakteriostatisk aktivitet in vitro.

Til en række af plader indeholdende et kendt volumen (20 cm3) af et egnet dyrkningsmedium (Muller-Hinton-agar) sættes 1/10 af dette volumen af en række af geometrisk forløbende (forhold = 2) fortyndinger af forbindelsen, der 15 skal undersøges. Pladernes podes med en flerpunkts-podeanord-ning, der giver en plet af 104 kolonidannende enheder af mikroorganismen i tryptisk soja-medium inkuberet ved 37°c i 18 timer og fartyndet 1/100 med det samme medium.

Efter podningen inkuberes pladerne ved 37*C i 24 20 timer. Den minimale inhiberende koncentration (MIC) er den laveste koncentration, ved hvilken væksten af mikroorganismen inhiberes.

Aktivitet mod intraneritoneale infektioner hos mus.

25 Mus modtager en intraperitoneal injektion af 0,5 cm3 af en passende, 18 timer gammel rystekultur af den anvendte mikroorganisme i "Brain Heart Infusion"-medium (Difco) passende fortyndet med svine-mucin. Denne injektion bevirker, at kontroldyrene dør i løbet af 24 til 48 timer. Den under-30 søgte forbindelse indgives subcutant to gange med et mellemrum på 5 timer den dag, hvor injektionen foretages, idet den første dosis gives 1 time efter injektionen af mikroorganismen. Der anvendes enhedsdoser indeholdt i et volumen på 50 cm3/kg.

35 Den 50%'s kurative dosis (CD50) er den dosis af den undersøgte forbindelse, som indgives hver gang, der bevirker, 20

DK 166151 B

at halvdelen af de behandlede dyr overlever i forsøgsperioden (8 dage).

Resultaterne af forsøgene er anført i den følgende tabel.

21

DK 166151 B

Aktivitet in vitro Aktivitet in vivo MIC S. aureus Smith (μg/ml) DC S. aureus Smith (mg/kg)

Eks.nr. ^ kombination med i kombination med __alene pristinamycin Ia alene pristinamycin Ia_

1 4 0,25 55 B

o 0,5 80 10

2 4 0,25 55 B

3 4 0,5 60 10 4 0,25 70 12 4 4 0,25 90 15 5 4 0,12 22 5 6 15 1 140 30 7 4 0,25 44 9 B 0,5 90 10

B 4 0,25 44 S

9 4 0,12 130 12 10 4 0,12 55 10 11 8 0,5 170 25 -----1 12 4 0,25 65 6,5 4 0,12 85 20 13 4 0,12 70 18 2 0,12 70 - 18 14 60 2 120 22 15 15 0,5 200 65 / . . / · .

22

DK 166151 B

% .Aktivitet in vitro Aktivitet in vivo MIC S. aureus Smith (pg/ml) DC5QS. aureus Smith (mg/kg)

Eks. nr. i kombination med =, „ i kombination med i———— P·1-·1·5'1-1115^0111 ___________ Pr:LStinamycin ia

ΊΒ 4 0,25 40 B

4 0,12 1 20 20 17 8 0,5 > 150 44

IB 6 0,25 > 300 BO

8 0,5 > 300 28 19 8 0,5 95 18 20 4 0,25 65 12 21 30 1 > 300 60 60 4 > 300 24 1 2 3 4 4 0,06 70 8,5 4 0,12 90 6,5 2 30 1 > 150 15 3 I 24-8 0,5 120 8,5 4 B 0,25 42 11 »Sammenlig- 'ning: A 0,12 200 10

Pristinamy-cin II

A __J___ 23

O

DK 166151 B

Af særlig interesse er forbindelser med den almene formel I, hvori R betyder - en 5- eller 6-leddet nitrogenholdig heterocyclylgruppe, som eventuelt er substitueret med en alkylgruppe, eller - en alkylkæde indeholdende 2-4 carbonatomer substitueret med 1 eller 2 grupper valgt blandt phenyl, cycloalkylamino eller N-alkyl-N-cycloalkyl-amino indeholdende 3-6 led, alkylamino, dialkylamino eller dialkylcarbamoyloxy (idet alkyldelene af de to sidstnævnte grupper eventuelt sammen med nitrogenatomet, hvortil de er bundet, kan danne en 5- eller 6-leddet mættet eller umættet heterocyclisk gruppe, som eventuelt indeholder et andet heteroatom valgt blandt nitrogen, oxygen eller svovl i form af sulfoxid eller sulfon, og som eventuelt er substitueret med en alkyl- 15 gruppe) eller substitueret med en 5- eller 6-leddet nitrogenholdig heterocyclisk gruppe, som eventuelt indeholder et andet heteroatom valgt blandt nitrogen, oxygen eller svovl i form af sulfoxid eller sulfon, og som eventuelt er substitueret med en alkylgruppe, idet den nævnte hetero-2Q cycliske gruppe er bundet til den kæde, som bærer den, via et carbonatom, og idet mindst én af substituenterne båret af den ovennævnte alkylkæde er en nitrogenholdig substituent, som kan danne salte, og n er lig med 1 eller 2, og særlig aktive blandt disse forbindelser er forbindelser 25 med den almene formel I, hvori R betyder en alkylkæde indeholdende 2-4 carbonatomer substitueret med 1 eller 2 grupper valgt blandt phenyl, cycloalkylamino eller N-alkyl--N-cycloalkyl-amino indeholdende 5 eller 6 led, alkylamino indeholdende 1-4 carbonatomer, dialkylamino (hvori 30 alkyldelene indeholder 1-3 carbonatomer eller sammen med nitrogenatomet, hvortil de er bundet, danner en 5- eller 6- leddet mættet heterocyclisk gruppe), eller betyder en 5- eller 6-leddet nitrogenholdig heterocyclisk gruppe, som eventuelt er substitueret med en alkylgruppe med 1-4 35 carbonatomer, idet mindst én af substituenterne båret af den ovennævnte alkylkæde er en nitrogenholdig substituent, som kan danne salte, og mindst én af grupperne båret af

O

24

DK 166151 B

denne kæde er i 1- eller 2-stilling, og n betyder 1 eller 2.

Af ganske særlig interesse er følgende pristina-mycin lig-derivater med den almene formel I: 26-(2-diethylamino-l-methyl-ethyl)-sulfinyl-pri-

O

stinamycin II^,

•D

26-[(2R) -2-dimethylamino-butyl]-sulfinyl-pristina- mycin ΙΙ„, a 26-(2-diethylamino-propyl)-sulfinyl-pristinamycin 10 JIBf 26-(2-diisopropylamino-ethyl)-sulfony1-pristina-mycin IID.

J3

Til terapeutisk anvendelse kan de hidtil ukendte forbindelser ifølge opfindelsen anvendes som de er, dvs.

15 i form af baser, sammen med allerede kendte synergistiner, men da den væsentligste fordel ved forbindelserne ifølge opfindelsen er deres mulighed for opløsning i vand, er det særlig fordelagtigt at anvende dem i form af farmaceutisk acceptable salte sammen med kendte synergistiner el-20 ler synergistiner med den almene formel V, der selv er solubiliserede, enten i form af farmaceutisk acceptable salte eller i påkommende tilfælde i form af baser, når opløseligheden er tilstrækkelig til, at den fremkomne opløsning indeholder en mængde produkt, der mindst er lig med 25 den terapeutisk aktive dosis.

Som farmaceutisk acceptable salte, både af forbindelserne med den almene formel I og forbindelserne med den almene formel V, kan der nævnes additionssalte med u-organiske syrer, såsom hydrochlorider, hydrobromider, sul-30 fater, nitrater, phosphater, eller med organiske syrer, såsom acetater, propionater, succinater, maleater, fumarater, methansulfonater, p-toluensulfonater, isethionater eller substitutionsderivater af disse forbindelser. Som farmaceutisk acceptable salte kan der endvidere nævnes salte med qc alkalimetaller, såsom salte af natrium og kalium, med jord-

O

25

DK 166151 B

alkalimetaller, såsom salte af magnesium, ammoniumsalte og additionssalte med nitrogenholdige organiske baser, såsom ethanolamin, diethanolamin, trimethylamin, triethyl-amin, methylamin, propylamin, diisopropylamin, N,N-di- methylethanolamin, benzylamin, dibenzylamin, dicyclohexyl-5 benzylamin, N-benzyl-6-phenethylamin, N,N'-dibenzylethylen-diamin, benzhydrylamin, arginin, leucin, lysin eller N--methyl-glucamin.

Som farmaceutisk acceptable salte af forbindelser-ne med den almene formel V, hvori Z betyder en gruppe med den almene formel VII, hvori betyder en trialkylammoni-umgruppe, kan der nævnes de kvaternære ammoniumsalte svarende til de ovennævnte anioner.

Opfindelsen illustreres ved de følgende eksempler.

15 NMR-Spektrene af forbindelserne, der er illustreret i disse eksempler og i referenceeksemplerne, som følger efter, udviser generelle karakteristika, som er fælles for alle forbindelser med den almene formel I eller med den almene formel V, og specielle karakteristika, som er særlige for

20 hver af forbindelserne afhængigt af substituenterne. I

eksemplerne og referenceeksemplerne nævnes kun de særlige karakteristika, der skyldes variable grupper. I forbindelserne med den almene formel I har protonerne den nummerering, der er angivet i den følgende formel: 25

O

Jl JL joh CH3 Js 8 10 CH33 (XXII) 30 r » } zb v? nu ^26 > 2£ 11· Q19 CH, οΛ / * 20 v 31 >5 35

O

26

DK 166151 B

I synergistinerne med den almene formel V har protonerne den nummerering/ der er angivet i den almene formel XXIII. Denne nummerering er anbefalet af J.O. Anteunis et al., Eur. J. Biochem. 5j3, 259 (1975).

36 CHj3 10 2νΗΗΝ-^"^Η^3 °

2NhHN ,vpu * λ u N

1 ? * s H I

_ \ γ (mu) γ IB 0 ηρ 6NnJ| 53 Χ 0<ν^^Η1ΝΗ 0 15 να^° 1’>ϊ 20

Alle spektrene er taget ved 250 MHz i deutero-chloroform, medmindre der er anført andet. De kemiske forskydninger er udtrykt i ppm i forhold til signalet af tetra-methylsilan. Forkortelserne, der anvendes nedenfor, er føl- 25 gende: s = singlet d - duplet t = triplet mt = multiplet 30 m = massiv dd = duplet-duplet dt = duplet-triplet ddd = duplet-duplet-duplet dddd = duplet-duplet-duplet-duplet 35 Der skal bemærkes, at de forskellige isomere er blevet klassificeret arbitrært ifølge de kemiske forskydninger, der observeres i NMR-spektrene.

O

27

DK 166151 B

Betegnelserne isomer A^ og isomer A2 anvendes om forbindelser med den almene formel I, hvori n = 1, og som udviser følgende karakteristika: ca. 1,7 (s, -CH3 i 33); ca. 3,8 (s, >CH2 i 17); <5 (d, 5 -H27) isomer A2 eller >5 (d, -H2?) isomer A^; ca. 5,50 (d bred, “3) ; ca. 6,20 (d, -H^) ; ca. 6,6 (>NH i 8); £8 (s, -H20).

Betegnelserne isomer B-^ og isomer B2 anvendes om forbindelser med den almene formel I, hvori n = 1, og som 10 udviser følgende karakteristika: ca. 1,5 (s, -CH3 i 33); ca. 3,7 og 3,9 (2d, >CH2 i 17); ca. 4,8 (mt, -H.^); <5 (d, -H27) isomer B2 eller >5 (d, “H27) isomer B^; ca. 5,70 (AB limit, -H^ og -H^Q)' ca. 7,7 (>NH i 8); ca. 7,8 (s, -H2Q).

15 Betegnelsen isomer A anvendes om forbindelser med den almene formel II, der udviser NMR-karakteristika, der er identiske med de ovenfor anførte for isomer A^ og isomer A2 af forbindelser med den almene formel I, idet H i 27-stilling er karakteriseret ved: 4,7 (d, J < 1 Hz).

9fi

Betegnelsen isomer B anvendes om forbindelser med den almene formel II, der udviser NMR-karakteristika, der er identiske med de ovenfor anførte for isomer og isomer B2 af forbindelser med den almene formel I, idet H i 27-stilling er karakteriseret ved: 4,6 (d, J < 2,5 Hz).

25 I de følgende eksempler forstås der ved flash- chromatografi en rensningsteknik, der er karakteriseret ved, at der anvendes en kort chromatografisøjle og arbejdes under moderat tryk (50 kPa), idet der anvendes et siliciumdioxid med en kornstørrelse på 40-53 pm, ifølge 00 W.C. Still, M. Kahn og A. Mitra, J. Org. Chem. _43, 2923 (1978).

I de følgende eksempler kan alle forbindelserne, medmindre andet er anført, opløses i en mængde på mindst 2% i form af hydrochloridet.

35

O

28

DK 166151 B

Eksempel 1

Til 3,59 g 26-(2-diisopropylamino-ethyl)-thio-pristi-namycin II- (isomer A) i opløsning i 40 ml dichlormethan sættes ved 0UC under nitrogenatmosfære 0,4 ml trifluored-5 dikesyre og derpå 1,06 g 85%'s metachlorperbenzoesyre, idet temperaturen holdes ved 0°C. Efter 20 timers omrøring ved 25°C sættes reaktionsblandingen til en mættet vandig natriumhydrogencarbonatopløsning. Den organiske fase dekanteres, hvorpå den vandige fase vaskes med 3 x 100 ml 10 methylenchlorid. De organiske faser forenes, tørres over magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres derpå til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C til dannelse af 4,2 g af et gult fast stof, som renses ved flashchromato-grafi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenfor-15 holdet 90:10), idet der opsamles fraktioner på 20 ml. Fraktionerne 22-28 forenes og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C til dannelse af et lysegult fast stof, som omrøres i 10 ml ethylether. Det fremkomne faste stof fraskilles ved filtrering til dannelse 20 af 0,62 g 26-(2-diisopropylamino-ethyl)-sulfinyl-pristina-mycin ΙΙβ (isomer A2) i form af et gult pulver, som smelter nær 155°C.

NMR-Spektrum: CH

0,90-1,15 [mt, -CH3 i 32, 31, 30, >N(CH^ ~3 ) 2] 25 1,76 (s, -CH3 i 33) CS3 CH- 2,75-3,15 (mt, >CH9 i 15, -H og -S-CH -CH ) O C- 3,81 (s,^> CH2 i 17) 30 4,76 (d, ~H27) 5,51 (d, -H13) 6,20 (d, -Hi;l) 6,48 (m, >NH i 8) 8,13 (s, -H20) 35 Fraktionerne 35-45 forenes og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C til dannelse af et lysegult fast stof, som omrøres i 15 ml ethylether. Det

O

29

DK 166151 B

fremkomne faste stof fraskilles ved filtrering til dannelse af 1,07 g 26-(2-diisopropylamino-ethyl)-sulfinyl-pri-stinamycin ΙΙβ (isomer A^ 80%, isomer A2 20%) i form af et lysegult pulver, som smelter nær 145°C.

5 NMR-Spektrum (isomer A^ : 1.72 (s, -CH3 i 33) 2,70-3,15 (mt, >CH0 i 15, -H., -S-CH--CH -N-CH\ ) Δ 4 j, Δ Δ I ^

O CH

A

3,81 (s, ^CH2 i 17) 10 5,26 (d, -H27) 5,46 (d, -H13) 6,15 (d, -Hn) 8,11 (s, -H20) 26-(2-diisopropylamino-ethyl)-thio-pristinamycin 15 ΙΙβ kan fremstilles på den følgende måde.

Til 52 g pristinamycin IIA i opløsning i en blanding af 260 ml dichlormethan og 520 ml methanol sættes dråbevis under nitrogenatmosfære ved -30°C 16 g 2-diisopropylamino--ethanthiol i opløsning i 30 ml dichlormethan. Opløsningen 20 omrøres i 20 timer ved -20°C, hvorpå den koncentreres under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Det fremkomne faste stof omrøres med 2 x 1000 ml ethylether, fraskilles ved filtrering og krystalliseres derpå i 100 ml acetonitril. Krystallerne fraskilles ved filtrering og tørres derpå un-25 der formindsket tryk (90 Pa) ved 40°C. Der fås således 33,6 g 26-(2-diisopropylamino-ethyl)-thio-pristinamycin ΙΙβ (isomer A) i form af hvide krystaller, som smelter nær 122°C.

NMR- Spektrum: 30 1-1,15 (mt, -CH3, isopropyl) 1.72 (s, -CH3 i 33) 1,80-2,20 (mt- H25, -¾) CH< 2,50-3 (mt, -SCH2CH2-N^ ) 35 CH' 3,40 (d bred, -H26) 4,74 (s bred, -Η2?) 30

DK 166151 B

o 6/32 (m, -NHg) 8/15 (s, H20) 2-Diisopropylamino-ethanthiol kan fremstilles ifølge metoden beskrevet af D.D. Reynolds, D.L. Fields og 5 D.L. Johnson i J. Org. Chem. 2£, 5125 (1961).

Eksempel 2

Til 10 g 26-(2-diisopropylamino-ethyl)-thio-pristi-namycin II_ (isomer A) i opløsning i 300 ml chloroform

JD

10 sættes 1/22 g natriumhydrogencarbonat. Der afkøles til -50°C, og der tilsættes dråbevis 2,98 g 98%'s metachlor-perbenzoesyre i opløsning i 100 ml chloroform. Blandingen omrøres i 2 timer og 15 minutter ved -50°C, hvorpå der tilsættes en mættet vandig natriumhydrogencarbonatopløsning.

15 Efter 15 minutters omrøring ved 25°C dekanteres blandingen, hvorpå den vandige fase vaskes med 3 x 200 mi dichlorme-than. De organiske faser forenes, tørres over magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres derpå til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C til dannelse af 10,62 20 g af et hvidligt marengsagtigt stof. Dette opløses i 400 ml ethyl-acetat og behandles derpå med 140 ml 0,1N saltsyre. pH-Værdien af den vandige opløsning indstilles derpå til 4,2 ved tilsætning af 400 ml puffer med en pH-værdi på 4,2. Den vandige fase dekanteres, hvorpå den organiske fase vaskes 25 med 400 ml puffer med en pH-værdi på 4,2. De vandige faser forenes og vaskes med 2 x 150 ml ethylacetat. Efter dekantering indstilles den vandige fase til en pH-værdi på 7-8 ved tilsætning af natriumhydrogencarbonat og vaskes derpå med 3 x 300 ml dichlormethan. De organiske faser farenes og 30 vaskes derpå med 2 x 200 ml puffer med en pH-værdi på 7,5.

Den vandige fase vaskes med 50 ml dichlormethan, hvorpå de organiske faser forenes, tørres over magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C til dannelse af 8,04 g af et lysegult 35 fast stof, som omrøres i 100 ml ethylether, fraskilles ved filtrering og derpå tørres under formindsket tryk (90 Pa) ved 40°C. Der fås således 7,5 g 26-(2-diisopropylamino-ethyl)-

O

31

DK 166151 B

-sulfinyl-pristinamycin II (isomer A„) i form af et gult

Bo Δ pulver, som smelter nær 158 C, og hvis NMR-karakteristika er identiske med dem i eksempel 1.

5 Eksempel 3

Der gås frem på den samme måde som beskrevet i eksempel 1, men gås ud fra 53,2 g 26-(2-diethylamino-ethyl)-thio--pristinamycin ΙΙβ/ 6,25 ml trifluoreddikesyre og 16,4 g metachlorperbenzoesyre. Der foretages 3 successive rens-10 ninger ved flashchromatografi (elueringsmiddel: chloroform--methanol i volumenforholdet 90:10), idet der opsamles fraktioner på 40 ml, ifølge det følgende skema: 15 Rensnings skema Andel A (68 g)

Flashchromatografi i

Andel B, 55 g (fraktion 21-60) 20 / Flashchromatografi | tr ~

Andel C. tadel C2 (fraktion 36-60) 25 (iraktion 25-35) 18/8 g 10 g i_ _L_____ jFlashchromatografi | F-lashchromatografil

i- X

Andel D Andel E

30 (5,58 g) (11,5 g) (fraktion 18-30) (fraktion 18-45) 35

O

32

DK 166151 B

I alle tilfældene koncentreres de genvundne fraktioner til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C.

Andel D omrøres i 60 ml ethylether. Det fremkomne faste stof fraskilles ved filtrering. Der fås 5 g 26-(2-diethyl-5 amino-ethyl)-sulfinyl-pristinamycin ΙΙβ (isomer A2) i form af et gult pulver, som smelter nær 172°C.

NMR-Spektrum: 1.00- 1,14 (mt,-CH3 i 32 + CH3 af kæden) 1.75 (s, -CH3 i 33) CH _ 10 2,55-3,20 (mt, >CH9 i 15, -H-, -SCH„CH9N^ 2 ) O CH2 3,82 (s, > CH2 i 17) 4.81 (d, -H27) 5.51 (d, “Hl3) 15 6,19 (d, -Ηχι) 6,46 (dd, >NH i 8) 8,13 (s, -H20).

Andel E omrøres i 10 ml ethylether. Det fremkomne faste stof fraskilles, ved filtrering. Der fås 10,9 g 26-20 -(2-diethylamino-ethyl)-sulfinyl-pristinamycin II (isomer 13 A3 60%, isomer A-^ 15%, isomer B^ 12%, isomer B2 13%) . NMR-Spektrum: 1.00- 1,14 (mt, -CH3 i 32 og -N(CH2CH3)2 af A± og A2) 1,54 (s, -CH3 i 33 af Βχ og B2) 25 1,68 (s, -CH3 i 33 af Αχ) 1.75 (s, -CH3 i 33 af A2) 2,65-2,95 (mt, -S (OJCH^NC og -H4 af Αχ) 2,55-3,20 (mt, > CH2 i 15, -H4 og -S (O) CH2CH2N^ af A2) 3,77 (AB limit, CH2 i 17 af A^) 30 3,82 (s, > CH2 i 17 af A2) 4.81 (d, -H27 af A2) 5,24 og 5,25 (2d, -H2? af Αχ og B^ 5,41 (d, -H13 af A1) 5.51 (d, -H13 af A2) 35 5,99 og 6 (2d, -Hg af Βχ og ~Hg af B2) 6,11 (d, -H11 af A^) 6,19 (d, -H]l1 af A2)

O

33

DK 166151 B

6/46 (dd, > NH i 8 af A2) 6/79 (dd, >NH i 8 af Αχ) 7,82 (s, -H20 af Βχ og B2) 8,12 (s, -H20 af Αχ) 5 8,13 (s, “H2q af A2) 26-(2-diethylamino-ethyl)-thio-pristinamycin ΙΙβ kan fremstilles på den følgende måde:

Til en suspension af 13,1 g pristinamycin II i 150 ml methanol sættes en opløsning af 3,7 g diethylamino-ethanthiol 10 i 15 ml methylenchlorid. Den fremkomne opløsning omrøres i 18 timer ved en temperatur nær 20°C og hældes derpå i 1500 destilleret vand. Den fremkomne blanding ekstraheres 3 gange med i alt 1000 ml methylenchlorid. De organiske faser forenes, tørres over magnesiumsulfat, filtreres og koncentre-15 res derpå til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Den fremkomne remanens renses ved flashchroraatografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 90:10). Efter koncentrering til tørhed af fraktionerne 5-23 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 12,4 g 26-20 - (2-diethylamino-ethyl)-thio-pristinamycin IID i form af et gult pulver, som smelter nær 105°C.

NMR-Spektrum: 1,05 (m, -N(CH2CH3)2 + -H32) 1,70 (s, -H33) 25 1,85-2,15 (m, -H25, -¾) 2,60 (q, -N(CH2CH3)2) 2.75 (s, -S-CH2CH2-) 2.9 (dd, ABX-system, -H,_)

ID

3.10 (dd, ABX-system, -H^) 30 3,40 (ddd, -KL-) l b 3,80 (s, -H17) 4.75 (d, -H27) 5,50 (d, -H13) 6,15 (d, -Hi;l) 35 6,60 (s bred, NH i 8) 8.10 (s, -H20).

O

34

DK 166151 B

Eksempel 4

Idet der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 1, men gås ud fra 5,5 g 26-(2-dimethylamino-ethyl)-thio--pristinamycin Hg/ 0,67 ml trifluoreddikesyre og 1,8 g 5 metachlorperbenzoesyre og efter rensning ved flashchroma-tografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 90:10), idet der opsamles fraktioner på 30 ml, og koncentrering til tørhed af fraktionerne 23-40 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 0,4 g 26-(2-dimethyI-10 amino-ethyl)-sulfinyl-pristinamycin ΙΙβ (isomer A2 70%, isomer 15%, isomer 7%, isomer B2 8%) i form af et gult pulver, som smelter nær 150°C.

NMR-Spektrum (isomer A2): 1,77 (s, -CH3 i 33) 15 2,41 (s, -N(CH3)2) 2,70-3,20 (mt, -SCH2CH2N< , >CH2 i 15 og -H4) 0 3,82 (s, :>CH2 i 17) 4,84 (mt, -H3 og -H2?) 20 5,52 (d, -H13) 6,19 (d, -Hu) 6,42 (m, >NH i 8) 8,14 (s, -H2Q) 26-(2-dimethylamino-ethyl)-thio-pristinamycin II kan

B

25 fremstilles på den følgende måde:

Idet der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 3, men gås ud fra 2,7 g pristinamycin II og 0,58 g

A

2-dimethylamino-ethanthiol og efter rensning ved flashchro-matografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenfor-30 holdet 90:10) og koncentrering til tørhed af fraktionerne 11-17 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 1,1 g 26-(2-dimethylamino-ethyl)-thio-pristinamycin ΙΙβ i form af et gult pulver, som smelter nær 100°C.

NMR-Spektrum: 35 2,35 (s, 6H : -H<CH3)2) 2,80 (m, 4H : -S-CH2CH2-N=C) 3,40 (ddd, IH : -H26)

O

35

DK 166151 B

4.75 (d, IH : -Έί η) 8,10 (s, IH : -H20).

Eksempel 5 5 Idet der gås frem på den samme måde som beskrevet i eksempel 2, men gås ud fra 4,7 g 26-(2-(N-methyl-N-ethyl--amino) -ethyl) -thio-pristinamycin II_, (isomer A 90%, B 10%),

Jd 1,22 g natriumhydrogencarbonat og 1,41 g 98%'s metachlorper-benzoesyre, og efter rensning ved flashchromatografi (eluerings-10 middel: dichlormethan-methanol i volumenforholdet 90:10), idet der opsamles fraktioner på 20 ml, og koncentrering til tørhed af fraktionerne 44-52 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C, fås 2,47 g af et gult fast stof, som omrøres i 50 ml ethylether, fraskilles ved filtrering og derpå tør-15 res under formindsket tryk (90 Pa) ved 40°C. Der fås således 2,3 g 26-(2-(N-methyl-N-ethyl-amino)-ethyl)-sulfinyl-pristi-namycin II (isomer A0) i form af et gult pulver, som smel- D d.

ter nær 145 C.

NMR-Spektrum: 20 1,09 (t, >N-CH2-CH3) 1.76 (S, -CH3 i 33) 2,31 (s, >N-CH3) 2,54 (mt, >N-CH2CH3) 2,80 (mt, -H4)

25 2,70-3,10 (mt, -S-CH2-CH2NO

O

2,92-3,12 (2dd, >CK2 i 15) 3,24 (mt, “H2g) 3,82 (s, > CH2 i 17) 30 4,82 (s, —H2y) 5,51 (d, -H13) 6,40 (dd, >NH i 8) 8,13 (s, —H2q)· 26-(2-(N-methyl-N-ethyl-amino)-ethyl)-thio-pristina-35 mycin ΙΙβ (isomer A 90%, B 10%) kan fremstilles ved at gå frem på samme måde'som beskrevet i eksempel 1, men ved at gå ud fra 14,11 g pristinamycin IIA og 3,2 g 2- (N-methyl-N-

O

36

DK 166151 B

-ethyl-amino)-ethan thiol. Efter 4 dages omrøring ved -20°C og rensning ved flashchromatografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 90:10), idet der opsamles fraktioner på 80 ml, og derpå koncentrering til tørhed af 5 fraktionerne 25-48 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 4,75 g af et gult fast stof, som tørres under formindsket tryk (90 kPa) ved 40°C. Der fås således 4,7 g 26-(2- (N-methyl-N-ethyl-amino) -ethyl) -thio-pristinamycin ΙΙβ (isomer A 90%, B 10%) i form af et gult pulver, som smelter 10 nær 140°C.

NMR-Spektrum: 1,1 (rot, CH2CH3) 1,73 (s, CH3 i 33) 2,30 (s, >N-CH3) 15 2,45-2,6 (mt, >N-CH2CH3)

2,68-2,78 (2mt, -S-CH2-CH2NO

2,78 (mt, -H4) 2,90 og 3,12 (2dd, -CH2~ i 15) 3,40 (d, -H26) 20 3,83 (s, -CH2“ i 17) 4,76 (s, -H27) 5,48 (d, -H13) 6,14 (d, -Hn) 6,34 (mf, >NH i 8) 25 8,11 (s, -H2q) · 2- (N-Methyl-N-ethyl-amino) -ethanthiol kan fås i analogi med metoden beskrevet af D.D. Reynolds et al., J. Org.

Chem. 2£, 5125 (1961) , ud fra 25 g N-methyl-N-ethylamin og 43,7 g ethylenthiocarbonat. Efter destillation fås 1,3 g 30 2-(N-methyl-N-ethyl-amino)-ethanthiol i form af en farveløs væske.

[Kp. (6,7 kPa) = 52°C] .

35

DK 166151B

37 . O

Eksempel 6

Idet der gås frem på den samme måde som beskrevet i eksempel 1, men gås ud fra 9,8 g 26-(3-dimethylamino-propyl)- -thio-pristinamycin ΙΙβ (isomer A/B 50:50), 1,18 ml tri- fluoreddikesyre og 3,1 g metachlorperbenzoesyre, og efter 5 rensning ved flashchromatografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 80:20), idet der opsamles fraktioner på 15 ml, og koncentrering til tørhed af fraktionerne 53-75 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 1,6 g 26-(3-dimethylamino-propyl)-sulfinyl-pristinamycin II_ (blanding af isomere) i form af et gult pulver, som a smelter nær 165 C.

NMR-Spektrum (blanding af isomere af type A2 - 45%), B2 - 35% og Βχ - 15%): 1,53 (s, -CH, i 33 af B~ og Βη) 15 3 2 1 1.75 (s, -CH3 i 33 af A2) 2,26, 2,28 og 2,32 (3s, NCH^ af de 3 isomere) 3.82 (s, ^CH2 i 17 af A2) 3,70 og 3,88 (2d, >CH2 i 17 af Βχ) 3,69 og 3,91 (2d, ^CH„ i 17 af B„) 20 2 2 4.76 (d, -H27 af B2) 5,25 (d, -H27 af Βχ) 5,50 (d, -H13 af A2) 7,63 (mt, > NH i 8 af B2) 7,74 (mt, >NH i 8 af Bj 25 1 7.82 (s, -H20 af B2 og Βχ) 8,14 (s, -H20 af A2).

26-(3-dimethylamino-propyl)-thio-pristinamycin ΙΙβ kan fås på den følgende måde:

Idet der gås frem på den samme måde som beskrevet i 30 eksempel 3, men gås ud fra 5,25 g pristinamycin 11^ og 1,3 g 3-dimethylamino-propanthiol, og efter rensning ved flash-chromatografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 90:10) og koncentrering til tørhed af fraktionerne 6-29 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 3,3 g 35 26-(3-dimethylamino-propyl)-thio-pristinamycin IID i form af o et gult pulver, som smelter nær 100 C.

O

38

DK 166151 B

NMR- Spektrum: 1,50 (s, 3H x 0,5 : -H33 1. isomer) 1.70 (s, 3H x 0,5 : -H33 2. isomer) 1.80 (m, 2H : -SCH2-CH2-CH2N<) 5 2,20 (s, 6H x 0,5 : -N(CH3)2 1. isomer) 2,25 (s, 6H x 0,5 : -N(CH3)2 2. isomer) 2,40 (m, 2H : -SCH2-CH2-CH2N<)

2.70 (m, 2H : -SCH2-CH2-CH2NO

3,35 }(2m, IH : -H2g af hver isomer) 10 3,45 4,60 y (2d, IH : -H_7 af hver isomer) 4.70 7.80 } (2Sr ih : -h2Q af hver isomer) 8,10 15

Eksempel 7

Idet der gås frem på den samme måde som beskrevet i eksempel 1, men gås ud fra 6,3 g 26-(2-diethylamino-propyl)--thio-pristinamycin ΙΙβ, 0,72 ml trifluoreddikesyre og 1,91 20 g metachlorperbenzoesyre, og efter rensning ved flashchroma-tografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 90:10), idet der opsamles fraktioner på 60 ml, og koncentrering til tørhed af fraktionerne 7-9 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 0,99 g 26-(2-diethylamino-25 -propyl)-sulfinyl-pristinamycin II_, (isomer A_) i form af et gult pulver, som smelter nær 150°C.

NMR-Spektrum: 1,03-1,20 (mt, -CH2-CH(CH3)N(CH2CH3)2 og CH3 i 32) 1,76 (s, -CH3 i 33) 30 3,82 (s, ^CH2 i 17) 4,79 (m, -H27) 5,53 (d, -H13) 6,20 (d, -Hi;l) 6,42 (m, >NH i 8) 35 8,13 (s, “H2q) .

Efter koncentrering til tørhed af fraktionerne 23-35 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 0,64 g 26--(2-diethylamino-propyl)-sulfinyl-pristinamycin II_ (isomer

B

O

39

DK 166151 B

A^) i form af et beige-gult pulver, som smelter nær 160-170°C. NMR-Spektrum: 1.14 (mt, -N(CH2CH3)2) 1,24 (d bred, CH^H-N^) 5 1,73 (s, -CH2 i 33) 3,81 (AB limit, >CH2 i 17) 5,28 (d, -H27) 5,43 (d, -H13) 6.15 (d, -Hi;l) 10 6,88 (m, >NH i 8) 8,10 (s, -H2q).

26-(2-Diethylamino-propyl)-thio-pristinamycin ΙΙβ kan fremstilles på den følgende måde.

Idet der gås frem på den samme måde som beskrevet i 15 eksempel 3, men gås ud fra 3,15 g pristinamycin IIA og 1,8 g 2-diethylamino-propanthiol, og efter rensning ved flash-chromatografi (elueringsmiddel: methylenchlorid-methanol i volumenforholdet 90:10), idet der opsamles fraktioner på 20 ml, og koncentrering til tørhed af fraktionerne 3-5 under 20 formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 1,4 g 26-(2-diethyl-amino-propyl)-thio-pristinamycin ΙΙβ i form af et gult pulver, som smelter nær 160°C.

NMR-Spektrum: 1 (m, 9H : ”H32 +-N(CH2CH3)2) 25 2,50 (m, 6H : -S-CH2-CH-N(C^CE^ 2) 3,30 (m, IH : -¾) 4,70 (d, IH : -H27) 8,12 (s, IH : -H20).

2-Diethylamino-propanthiol kan fremstilles på den 30 følgende måde:

Til en opløsning af 29,5 g 3-S-isothioureido-2-diethyl-amino-propan-dihydrochlorid i 150 ml destilleret vand sættes 25 ml af en vandig 10N natriumhydroxidopløsning. Blandingen opvarmes til 100°C i 1 time og afkøles til 20°C, og 35 der indstilles til en pH-værdi på 9 ved tilsætning af 8 ml 12N saltsyre, hvorpå der ekstraheres med 3 x 100 ml ethyl-ether. Etherfaserne forenes, tørres over kaliumcarbonat, fil- o 40

DK 166151 B

treres og koncentreres derpå til tørhed under formindsket tryk (2,-7 kPa) ved 30°C. Blandingen renses ved destillation.

Der fås 5,8 g 2-diethylamino-l-propanthiol i form af en farveløs væske.

5 [%>. (2,7 kPa) = 78°C] l-S-isothioureido-2-diethylamino-propan-dihydrochlorid kan fremstilles på den følgende måde:

Til en opløsning af 41 g l-chlor-2-diethylamino-propan--hydrochlorid i 200 ml dimethylformamid sættes 16,7 g thiourinstof. Blan-10 dingen opvarmes til 100°C i 30 minutter, hvorpå den afkøles til 20°C. Det dannede hvide bundfald opsamles ved filtrering, vaskes med 3 x 20 ml dimethylformamid og derpå med 3 x 20 ml ethylether.

Der fås 29,6 g l-S-isothioureido-2-diethylamino-propan-di-hydrochlorid i form af hvide krystaller, som smelter ved 15 247-249°C.

l-Chlor-2-diethylamino-propan-hydrochlorid kan fremstilles på den følgende måde:

Til 100 ml thionylchlorid sættes i løbet af 15 minutter 45,2 g 2-diethylamino-propanol-hydrochlorid, hvorpå der op-20 varmes til 80°C. Efter 2 timers omrøring destilleres det overskydende thionylchlorid, og remanensen optages med 200 ml ethylether. l-Chlor-2-diethylamino-propan-hydrochloridet krystalliserer. Der fås efter filtrering 48,2 g hvide krystaller, som smelter ved 112°C.

25 2 -Diethylamino-propanol-hydrochlorid kan fremstilles på den følgende måde;

Til en suspension holdt under nitrogen af 10,6 g lithiumaluminiumhydrid i 1 liter ethylether sættes langsomt ved 20°C en opløsning af 66 g ethyl-2-diethylamino-pro-30 pionat i 330 ml ethylether. Reaktionsblandingen holdes ved en temperatur på 35°C i 5 timer, hvorpå temperaturen sænkes til 0°C. Der tilsættes derpå dråbevis ved 0°C 12,4 ml vand, 9,1 ml af en vandig 5N natriumhydroxidopløsning og derpå 41,3 ml vand, der omrøres i 30 minutter, hvorpå blandingen filtreres 35 over frittet glas og derpå vaskes med ethylether. Etherfasen tørres over kaliumcarbonat, filtreres og koncentreres derpå til tørhed vinder formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Der fås o 41

DK 166151 B

43,8 g af en gul væske, som opløses i 200 ml acetone, hvorpå der tilsættes 78 ml af en 4,5N opløsning af hydrogenchlo-rid i ethylether. 2-Diethylamino-propanol-hydrochloridet krystalliserer. Der fås efter filtrering 45,2 g hvide krystal-5 ler, som smelter ved 97-100°C.

Ethyl-2-diethylamino-propionat kan fås ifølge Braun et al., Beilstein, 61, 1425 (1928).

Eksempel 8 10 Der gås frem på den samme måde som beskrevet i eksempel 2, men gås ud fra 4 g 26- (2-diethylamino-propyl)-thio-pri-stinamycin II_ (isomer A), 1,16 g 98%'s metachlorperbenzoe-syre og 1 g fast natriumhydrogencarbonat. Efter rensning ved flashchromatografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol 15 i volumenforholdet 93:7) og koncentrering til tørhed af fraktionerne 21-48 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C, idet der opsamles fraktioner på 25 ml, fås 2,69 g 26-(2--diethylamino-propyl)-sulfinyl-pristinamycin II_ (isomer A ) & ώ i form af et gult pulver, som har samme karakteristika som 20 forbindelsen fremstillet i eksempel 7.

26-(2-diethylamino-propyl)-thio-pristinamycin ΙΙβ (isomer A) kan fås ved at gå frem på samme måde som beskrevet i eksempel 1, men ved at gå ud fra 15 g pristinamycin IIÅ og 4,62 g 2-diethylamino-propanthiol. Efter rensning ved flash-25 chromatografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 90:10) og koncentrering til tørhed af fraktionerne 27-52 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C, idet der opsamles fraktioner på 40 ml, fås 12 g af et gult fast stof, som omrøres i 60 ml ethylether, filtreres og derpå tørres.

30 Der fås 8,2 g 26-(2-diethylamino-propyl)-thio-pristinamycin II_ (isomer A) i form af et lysegult pulver, som smelter nær 122 C.

NMR-Spektrum: 1-1,15 (mt, -CHL ethyl + CH -CH-N(C0Hc)„) J —J I z O Δ 35 1,70 (s, -CH3 i 33)

CH -CH

2,35-2,60 (mt, -N-'" ) XCH2-CH3

O

42

DK 166151 B

2,50-3,10 (mt, -SCI^CH-) 2,75 (mt, -H4) 2,89 og 3,05 (2dd 2,92 og 3,08 (2dd }'CE2 1 15) 5 3,30 (mt 3--H ) 3,37 (mt 3,80 (s, >CH2 i 17) 4'69 (d>-H27) 4.71 (d 10 5,45 (d, -H13) 6.13 (d 6.14 (d 6.4- 6,60 (mt, >NH i 8) 6,51 (ddj. j 15 6,53 (dd 8,09 (s, -H20).

2-Diethylamino-propanthiol kan fås som beskrevet ovenfor i eksempel 7.

20 Eksempel 9

Der gås frem på den samme måde som beskrevet i eksempel 2, men gås ud fra 4,58 g 26-(l-diethylamino-2-propyl)--thio-pristinamycin ΙΙβ (isomer A), 1,29 g 98%'s metachlor-perbenzoesyre og 1,14 g fast natriumhydrogencarbonat. Efter 25 rensning ved flashchromatografi (elueringsmiddel: chloroform--methanol i volumenforholdet 97:3), idet der opsamles fraktioner på 20 ml, og koncentrering til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°c af hhv. fraktion 59-77 og fraktion 79-97 fås ud fra fraktion 79-97 1,47 g 26-(1-30 -diethylamino-2-propyl)-sulfinyl-pristinamycin ΙΙβ (første isomer) i form af et lysegult fast stof, som smelter nær 132°C.

NMR-Spektrum: 1,02 (t, -CH3 ethyl) 35 1,34 (d, CH3-CH-CH2N(C2H5)2) 1.72 (s, -CH3 i 33) CH - 2.5- 2,7 (mt, -CH2-N^ * ) ch2-

O

43

DK 166151 B

2,77 (mt, -H4) 2,87 og 3,09 (2dd, ^ CH i 15) 2,97 (mt, -S-CH< )

O

5 3,72 (mt, -H2g) 3,80 (s, >CH i 17) 4,92 (mt, -H27) 5,43 (d, -H13) 6,15 (d, -H1!L) 10 6,72 (dd, >NH i 8) 8,06 (s, -H20) og ud fra fraktion 59-77 1,07 g 26-(l-diethylamino-2-propyl)--sulfinyl-pristinamycin lig (anden isomer) i form af et lysegult fast stof, som smelter nær 128°C.

15 NMR-Spektrum: 1,72 (s, CH3 i 33) 3,4 (mt, -H26) 3.79 (s, CH2 i 17) 4,74 (mt, -H27) 20 5,48 (d, -H13) 6,18 (d, -Hn) 6.80 (mt, >NH i 8) 8,09 (s, -H20).

26-(l-Diethylamino-2-propyl)-thio-pristinamycin ΙΙβ 25 (isomer A) kan fås ved at gå frem på samme måde som beskrevet i eksempel 1, men ved at gå ud fra 13 g pristinamycin IIA og 4 g l-diethylamino-2-propan-thiol. Efter rensning ved flashchromatografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 90:10) og koncentrering til tørhed af 30 fraktionerne 46-55 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C, idet der opsamles fraktioner på 50 ml, fås 8 g af et bleggult fast stof, som krystalliseres i 30 ml acetonitril.

Efter filtrering og tørring fås 5,91 g 26-(l-diethylamino--2-propyl)-thio-pristinamycin IID (isomer A) i form af hvide 35 krystaller, som smelter nær 136°C.

O

44

DK 166151 B

NMR-Spektr um: 0. 9-1/10 (mt, -N(CH2CH3)2)

1, 33-1/37 (2d, CH3-CH-CH2NO

1,7 (s, -CH3 i 33) 5 CH2~ 2,4-2,65 (mt, -C^N^ ) ch2- 2,76 (mt, -H4) 3 (mt, -S-CHC) 10 2,9 og 3,1 (2dd, ^ CH2 i 15) 3,52 (mt, -H26) 3,81 (s, >CH2 i 17) 4.78 (mt, -H27) 5,46 (d, -H13) 15 6,14 (d, -Ή1Ί) 6,40 (mf,>NH i 8) 8,09 og 8,10 (2s, -H2Q).

l-Diethylamino-2-propan-thiol kan fås ifølge metoden beskrevet af R.T. Wragg i J. Chem. Soc. (C), 2087 (1969).

20

Eksempel 10

Der gås frem på den samme måde som beskrevet i eksempel 2, men gås ud fra 1,7 g 26- [2 (R) -2-dimethylamino-butyl] --thio-pristinamycin ΙΙβ (isomer A), 0,50 g natriumhydrogen- 25 carbonat og 0,45 g 98%'s metachlorperbenzoesyre. Efter rensning ved flashchromatografi (elueringsmiddel: ethylace-tat-methanol i volumenforholdet 85:15) og koncentrering til tørhed af fraktionerne 35-58 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°c fås 1,1 g af et hvidt fast stof, som om- 30 røres i 30 ml ethylether. Efter filtrering og tørring fås 0,95 g 26-[2 (R)-2-dimethylamino-butyl]-sulfinyl-pristina-mycin 11^ (isomer A2) i form af et hvidt fast stof, som smelter nær 126°C.

NMR-Spektrum: 35 1 (mt, ^N-CH-CH2CH3) 1,45-1,75 (mt, >N-CH-CH2CH3) 1.78 (s, -CH3 i 33)

O

45

DK 166151 B

2,50-3,05 (mt, -S-CH2“CHC og -H4)

O

2.93 og 3,14 (2dd, ^CH2 i 15) 3,31 (mt, -H26) 5 3,84 (s, > CH2 i 17) 4,84 (d, -H27) 5,51 (d, -H13) 6,19 (d, -Hi;l) 6.30 (dd, J^NH i 8) 10 8,15 (s, —H2q).

26-[2(R)-2-dimethylamino-butyl]-thio-pristinamycin Hg (isomer A) kan fås ved at gå frem på samme måde som beskrevet i eksempel 1, men ved at gå ud fra 8 g pristina-mycin 11^ og 2,3 g 2(R)-2-dimethylamino-butanthiol. Efter 15 rensning ved flashchromatografi (elueringsmiddel: dichlor-methan-methanol i volumenforholdet 90:10) og koncentrering til tørhed af fraktionerne 36-55 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 3 g 26-[2 (R)-2-dimethylamino-butyl]--thio-pristinamycin ΙΙβ (isomer A) i form af et lysegult 20 fast stof, som smelter nær 120°C.

Krystallisation af 0,9 g af denne forbindelse i 5 ml acetonitril giver efter fraskillelse ved filtrering 0,2 g 26-[2 (R)-2-dimethylamino-butyl]-thio-pristinamycin II0 (isomer A) i form af hvide krystaller, som smelter nær 122°c.

25 NMR-Spektrum: 1 (mt, ^ N-CH-CH2CH3) 1,4-1,7 (mt, ^N-CH-CH2CH3) 1,72 (S, -CH3 i 33) 2.30 (s, -N(CH3)2) 30 2,5-2,85 (mt, -S-CH2-CH< og -Hj) 2.93 og 3,10 (2dd, .>CH2 i 15) 3,34 (d bred, -H2g) 3,83 (s, ^CH2 i 17) 4,76 (s bred, -H27) 35 5,48 (d, -H13) 6,14 (d, -Hu) 6,26 (dd, >NH i 8) 8,13 (s, -H2q)· 46

DK 166151 B

O

(R)-2-Dimethylamino-butanthiol kan fås ved at gå frem på den samme måde som beskrevet nedenfor i eksempel 11 ud fra 52,4 g triphenylphosphin, 40 ml diisopropylazo-dicarboxylat, 12 g (R)-2-dimethylamino-butanol og 15,2 5 ml thioleddikesyre (i dette tilfælde hydrolyseres thio-ester-mellemproduktet direkte ved chromatograferingen på silicagel).

Efter rensning ved flashchromatografi (elueringsmid-del: dichlormethan (1000 ml), derpå dichlormethan-methanol 10 i volumenforholdet 85:15 (2000 ml), derpå dichlormethan- -methanol i volumenforholdet 80:20 (4000 ml)) med opsamling af fraktioner på 100 ml og koncentrering til tørhed under formindsket tryk af fraktionerne 42-60 fås 14 g af en gul olie, som renses ved destillation. Der fås således 2,4 g 15 (R)-2-dimethylamino-butanthiol i fom af en farveløs væske.

!&>. (4 kPa) » 70-75°C] .

(R)-2-Dimethylamino-l-butanol kan fås på den samme måde som den, der er beskrevet af M. Wenghoefer et al. i J. Heterocycl. Chem., 7(6), 1407 (1970).

20

Eksempel 11

Idet der gås frem på den samme måde som beskrevet i eksempel 2, men gås ud fra 2,67 g 26-[ (2S)-2-dimethylamino--3-phenyl-propyl]-thio-pristinamycin ΙΙβ (isomer A), 0,7 25 g natriumhydrogencarbonat og 0,7 g 98%'s metachlorperben-zoesyre, og efter rensning ved flashchromatografi (elue-ringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 90:10), idet der opsamles fraktioner på 20 ml, og koncentrering til tørhed af fraktionerne 19-23 under fomindsket tryk (2,7 30 kPa) ved 30°C fås 1,3 g af et lysegult fast stof, som omrøres i 50 ml ethylether og fraskilles ved filtrering til dannelse af 1,18 g 26-[(2S)-2-dimethylamino-3-phenyl-propyl] -sulfinyl-pristinamycin lig (isomer A2) i form af et lysegult fast stof, som smelter nær 150°C.

35 47

DK 166151 B

O

NMR-Spektruxn (400 MHz, CDCl^) : 1,73 (s, -CH3 i 33)

2,4-2,6 (mt,x H

f -S-CH0-C^ ) J 2 i \ 2,8-3,15 (mt, O 1 CH2 5 2,44 (s, -N(CH3)2) 2,77 (mt, -H4) 2,89 og 3,1 (2dd, ^ CH2 i 15) 3.18 (mt, -H26) 3,82 (s, i 17) 10 1 4,68 (d, -H27) 5,51 (d, -H13) 6.19 (d, -Hu) 6,50 (dd, i 8) 7,18 (d, -H i ortho af phenylet) 15 7,23 (t, -H i para af phenylet) 7,31 (t, -H i meta af phenylet) 8,13 (s, -H20)

Der fås en vandig 1%'s opløsning af 26-[(2S)-2-dime- thylamino-3-phenyl-propyl]-sulfinyl-pristinamycin II 20 a (isomer A2) med: - forbindelse ................. 30 mg - 0,1N saltsyre ............... 0,45 ml - destilleret vand ............ ad 3 ml 25 26- [ (2S)-2-Dimethylamino-3-phenyl-propyl]-thio-pri- stinamycin ΙΙβ (isomer A) kan fremstilles på den samme måde som beskrevet i eksempel 1 til fremstilling af udgangsmaterialet, men ud fra 7,13 g pristinamycin 11^ og 2,65 g (S)-2-dimethylamino-3-phenyl-propanthiol, og 30 efter rensning ved flashchromatografi (elueringsmiddel: ethylacetat-methanol i volumenforholdet 80:20), idet der opsamles fraktioner på 60 ml, og koncentrering til tørhed af fraktionerne 33-43 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 4,6 g af et lysegult fast stof, som omrøres i 50 ml ethylether, filtreres og tørres under formindsket tryk (90 Pa) ved 45°C. Der fås således 3,6 g 26-[(2S)-2-dimethyl- 35

O

48

DK 166151 B

amino-3-phenyl-propan]-thio-pristinaraycin IIB (isomer A) i form af et bleggult pulver, som smelter nær 110°C. NMR-Spektrum: 1,69 (s, -CH3 i 33) 5 2,38 (s, -N(CH3)2) 2,35-3,05 (mt, -SCH0-CT ) 2 l'^CH,- N Z ✓ \ 2,73 (mt, -H4) 10 2,89 og 3,10 (2dd, >CH2 i 15) 3.26 (d bred, -H3g) 3,81 (s, ^CH2 i 17) 4,68 (s bred, -j^^) 5,47 (d, -H13) 15 6,12 (d, -H11) 6.27 (mf, >NH i 8) 7,18 (d, -H i ortho af phenylet) 7,21 (t, -H i para af phenylet) 7,30 (t, -H i meta af phenylet) 20 8,11 (s, -H20).

(S)-2-Dimethylamino-3-phenyl-propanthiol kan fremstilles på den følgende måde:

Til 20 g (S)-2-dimethylamino-3-phenyl-propanthiol-acetat (råt) i opløsning i 50 ml methanol sættes under nitro-25 genatmosfære 0,2 g natriummethylat, og der opvarmes til tilbagesvaling i 2 timer. Blandingen koncentreres dernæst til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C til dannelse af en væske, som renses ved destillation. Der fås 2,4 g (S)-2-dimethylamino-3-phenyl-propanthiol i form af 30 en farveløs væske DKp. (14 Pa) = 95°C] , som anvendes som sådan i den følgende reaktion.

(S)-2-Dimethylamino-3-phenyl-propanthiolacetat kan fremstilles på den følgende måde:

Der tilsættes ved 0°C under nitrogenatmosfære 41,97

OC

g triphenylphosphin og 310 ml tetrahydrofuran, hvorpå der dråbevis tilsættes 31,5 ml diisopropylazodicarboxylat, og der omrøres 1/2 time ved 0°C. Til den fremkomne hvide sus- 49

DK 166151 B

O

pension sættes dråbevis en blanding af 15 g (S)-2-dimethyl-amino-3-phenyl-propanol og 11,44 ml thioleddikesyre i opløsning i 160 ml tetrahydrofuran. Efter 1 times omrøring ved 0°C og derpå 1 time og 30 minutter ved 25°C koncen-5 treres blandingen til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Til den fremkomne olie sættes 190 ml methanol, det hvide faste stof, som udfældes, fjernes ved filtrering, og filtratet koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Remanensen omrøres derpå 10 med 20° isopropylether, det udfældede hvide faste stof fjernes igen ved filtrering, og filtratet koncentreres til dannelse af 45 g af en gul olie, som renses ved flashchro-matografi (elueringsmiddel: dichlormethan-methanol i volumenforholdet 90:10), idet der opsamles fraktioner på 100 ml.

15 Efter koncentrering til tørhed af fraktionerne 37-55 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 10,4 g (S)-2-dime-thylamino-3-phenyl-propanthiolacetat i form af en orangegul olie (indeholdende triphenylphosphinoxid) .

(S)-2-Dimethylamino-3-phenyl-propanol kan fremstilles 20 i analogi med metoden beskrevet af T. Hayashi et al. i J. Org. Chem., £8, 2195 (1983).

Eksempel 12

Idet der gås frem på den samme måde som beskrevet i 25 eksempel 1, men gås ud fra 12,5 g 26-[2-(1-pyrrolidinyl)--ethyl]-thio-pristinamycin ΙΙβ (isomer A 90%), 1,47 ml tri fluoreddikesyre og 3,86 g metachlorperbenzoesyre, og efter rensning ved flashchromatografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 85:15) , idet der 30 opsamles fraktioner på 30 ml, og koncentrering til tørhed af fraktionerne 18-25 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 3,9 g 26-[2-(1-pyrrolidinyl)-ethyl]-sulfinyl--pristinamycin ΙΙβ (isomer 60%, 25%, 15%) i form af et gult pulver, som smelter nær 175°C.

35 o 50

DK 166151 B

NMR-Spektrum (isomer A^): 1,74 (s, -CH3 i 33) CH - 2.62 (mt, -N·^ ) 5 CH2-

2,70-3,20 (mt, =CH2 i 15, -S-CH2CH2N^ , -HJ

Ί Ο 3.81 (s, ^CH2 i 17) 5,28 (s bred, -H27) 10 5,45 (d, -H13) 6,14 (d, -Hu) 6,58 (mt,>NH i 8) 8,12 (s, -H20).

Efter koncentrering til tørhed af fraktionerne 26-43 15 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 4,36 g 26-- [2 - (1-pyrrolidinyl) -ethyl] -sulfinyl-pristinamycin II

B

(isomer A2 75%, isomer Aj^ 5%, isomer 10%, isomer B2 10%) i form af et gult pulver, som smelter nær 145°C. NMR-Spektrum (isomer A2) : 20 1,76 (s, -CH3 i 33) 1.82 (m, ^ CH2 i -3 og -4 af pyrrolidinyl) 2.63 (mt, -N-CH0-) I 2 ch2- 2,85-3,20 (mt -S-C^-CHjC og CH2 i 15) 25 3,82 (s, CH2 i 17) 4,84 (dd, -H3 + d, -H2?) 5,51 (d, -Hl3) 6,18 (d, -Ηχ1) 6,47 (mt, ^ NH i 8) 30 8,13 (s, -H2Q) · 26- [2- (1-Pyrrolidinyl) -ethyl] -thio-pristinamycin ΙΙβ kan fremstilles på den følgende måde:

Idet der gås frem på den samme måde som beskrevet i eksempel 3, men gås ud fra 5,25 g pristinamycin 11^ og 1,7 35 g 2-(1-pyrrolidinyl)-ethanthiol og efter rensning ved flash-chromatografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 95:5) og koncentrering til tørhed af fraktio-

O

51

DK 166151 B

nerne 19-60 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 3,9 g 26-[2-(1-pyrrolidinyl)-ethyl]-thio-pristinamycin ΙΙβ i form af et gult pulver, som smelter ved 115°C.

NMR-Spektrum: 5 _ 1,90 (mt, 4H : -N^~ f2 ) \_CH, '-2C1 ^ 2,50-2,80 (m, 6H : -S-CH2CH2N^ ) 10 3,40 (d, IH : -H2g) 4,75 (d, IH : -H27) 8,10 (s, IH, -H20).

2-(1-Pyrrolidinyl)-ethanthiol kan fremstilles ifølge metoden beskrevet af J.W. Haeffele og R.W. Broge, Proc. Sci.

15 Toilet Goods Assoc. 32, 52 (1959) (Chem. Abstr. 5£, 17234e (1960)) .

Eksempel 13

Idet der gås frem på den samme måde som beskrevet i 20 eksempel 1, men gås ud fra 6 g 26-(2-piperidino-ethyl)-thio--pristinamycin ΙΙβ (isomer A), 0,69 ml trifluoreddikesyre og 1,82 g 85%'s metachlorperbenzoesyre, og efter rensning ved flashchromatografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 85:15), idet der opsamles fraktioner 25 på 20 ml, og koncentrering til tørhed af fraktionerne 52-105 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 4,7 g af et gult fast stof, som igen renses ved flashchromatografi (elue-ringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 85:15), idet der opsamles fraktioner på 5 ml. Efter koncentrering 30 af fraktionerne 92-99 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 1,83 g af et gult fast stof, som omrøres i 20 ml ethylether, fraskilles ved filtrering og derpå tørres under formindsket tryk (90 Pa) ved 30°C. Der fås således 1,51 g 26-(2-piperidino-ethyl)-thio-pristinamycin ΙΙβ (isomer A2 35 90%, A·^ 10%) i form af et gult pulver, som smelter nær 162°C.

o 52

DK 166151 B

NMR-Spektrum (400 MHz, CDClg): 1.52 (af, -N^ ) N_/-1 s-cå2 1.70 (mf, -H y ) N_CH, 5 ~2 1,78 (s, -CH3 i 33) 2,64 (mf, -N \ ) 10 2,80 (mt, —H^) 2,85-3,25 (mt, -J-CH2-CH2-NC)

S

2,94 og 3,15 (2dd, ^CH2 i 15) 3.20 (mt, -H26) 15 3,83 (s, ^ CH2 i 17) 4,92 (d, -H2?) 5,54 (d, -H13) 6,24 (d, -Ηχι) 6.70 (mf,NH i 8) 20 8,14 (s, -H2q) ·

Efter koncentrering til tørhed af fraktionerne 100-140 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 2,11 g af et gult fast stof, som omrøres i 20 ml ethylether, fraskilles ved filtrering og derpå tørres under formindsket tryk (90 25 Pa) ved 30°C. Der fås 1,75 g 26-(2-piperidino-ethyl)-thio--pristinamycin ΙΙβ (isomer A^ 50%, A2 50%) i form af et gult pulver, som smelter nær 152°C.

NMR-Spektrum (400 MHz, CDC13): 1,74 (s, -CH3 i 33 isomer A1) 30 1,78 (s, -CH3 i 33 isomer A2) 3.20 (mt, "H2g isomer A2) 3,46 (mt, ~H2g isomer A^) 3.82 (AB limit, CH2 i 17 isomer A^) 3.83 (s, ^ CH2 i 17 isomer A2) 35 4,90 (d, —H2^ isomer A2) 5,30 (s, —H2^ isomer A^) 5.52 (d, ~H^3 isomer A·^) 53

DK 166151 B

O

5,54 (d, -H^2 isomer A2) 6,60 (dd, -H5 isomer A2) 6.70 (dd, -H5 isomer A^) 8,14 (s, -H2q af isomer A2 og Αχ) .

5 26-(2-Piperidino-ethyl)-thio-pristinamycin ΙΙβ (iso mer A) kan fås på den følgende måde:

Idet der gås frem på den samme måde som beskrevet i eksempel 1, men gås ud fra 11,8 g pristinamycin 11^ og 3,58 g 2-piperidino-ethanthiol, og efter rensning ved flash- 10 chromatografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 85:15), idet der opsamles fraktioner på 60 ml, og koncentrering til tørhed af fraktionerne 24-31 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C, fås 8,3 g 26-(2-pipe-ridino-ethyl)-thio-pristinamycin ΙΙβ (isomer A) i form af 15 et lysegult pulver, som smelter ved 120°C.

NMR-Spektrum: 1,08 (d, -CH3 i 32) 1,40-1,60 to, ^CH2 ) 20 /- 1,60-1,80 to, -N > ) \_CH2 1,73 (s, -CH3 i 33) ch7- 2,45-2,90 (mt, -S-CH,-CH7-N^ ) CH2- 3,43 (mt, -H26) 3,82 (s, >CH2 i 17) 4.71 (s bred, “**27) 5,50 (d, -H13) 30 8,13 (s, -H20).

2-Piperidino-ethanthiol kan fås på den samme måde som den, der er beskrevet af D.D. Reynolds, D.L. Fields og D.J. Johnson i J. Org. Chem., 26, 5125 (1961).

35 o 54

DK 166151 B

Eksempel 14

Idet der gås frem på den samme måde som beskrevet i eksempel 2, men gås ud fra 3,2 g 26-[2-(l-imidazolyl)-ethyl]--thio-pristinamycin II„ (isomer A 85%, B 15%), 1 g natrium-5 hydrogencarbonat og 0,93 g 98%'s metachlorperbenzoesyre, og efter rensning ved flashchromatografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 90:10), idet der opsamles fraktioner på 25 ml, og koncentrering af fraktionerne 29-49 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C , 10 fås 1,4 g gult fast stof. Det fremkomne faste stof renses igen ved flashchromatografi (elueringsmiddel: chloroform--methanol i volumenforholdet 90:10), idet der opsamles fraktioner på 10 ml. Efter koncentrering til tørhed af fraktionerne 47-55 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 15 30°C fås 0,62 g af et lysegult fast stof, som omrøres i 20 ml ethylether, fraskilles ved filtrering og derpå tørres under formindsket tryk (90 Pa) ved 40°C. Der fås således 0,6 g 26-[2-(l-imidazolyl)-ethyl]-sulfinyl-pristinamycin lig (isomer A2) i form af et gult fast stof, som smelter 20 nær 170°C.

NMR-Spektrum (400 MHz, CDCl^): 1,80 (s, -CH3 i 33) 2,72 (mt, -H4) 2,97-3,09 (2dd, CH2 i 15) 25 3,0 (mt, -H_, og et H af -S-CH--) 2 b φ 2 0 3,48 (mt, det andet H af -S-CH,-) 1 z o 3,82 (AB limit, ^CH2 i 17) 30 4,53 (dd, ^ N-CH2~) 4,77 (d, -H27) 5,52 (d, -H13) 6.16 (d, -H-q) 6,46 (dd,^ NH i 8) 35 7,12 (s, -N-CH=CH-N=) 7,69 (s, ^rN-CH=N-) 8.16 (s, “H20).

o 55

DK 166151 B

26-[2-(1-imidazolyl)-ethyl]-thio-pristinamycin II„ kan fremstilles ved at gå frem på den samme måde som beskrevet i eksempel 3, men ved at gå ud fra 14,35 g pristi-namycin 11^ og 3,5 g 2-(1-imidazolyl)-ethanthiol. Efter 5 18 timers omrøring ved 20°C og derpå rensning ved flash- chromatografi (elueringsmiddel: ethylacetat-methanol i volumenforholdet 80:20) og koncentrering til tørhed af fraktionerne 34-59 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås et gult fast stof, som omrøres i 60 ml ethylether og 10 derpå fraskilles ved filtrering til dannelse af 10,9 g 26-[2-(1-imidazolyl)-ethyl]-thio-pristinamycin 11^ (isomer A 85%, B 15%) i form af et gult fast stof, som smelter nær 160°C.

NMR-Spektrum: 15 1,53 (s, -CH3 i 33 af B) 1.73 (s, -CH3 i 33 af A) 2.74 (mt, -H4 af A) 2,86 og 3,14 (2dd, >C&2 i 15 af A) 2,85-3,05 (mt, -SCH2-) 20 3,11 (mt, -H^g af A) 3,32 (mt, -H26 af B) 3.82 (AB limit, CH2 i 17 af A) 4,15-4,30 (mt, -CH^C ) 4,58 (d, -H27 af B) 25 4,68 fin' “H27 af A) 5,44 (d, -H13 af A) 6,16 (d, -H^ af A) 6.83 (dd, ^NH i 8 af A) 6,97 og 7,08 (2s, ^ N-CH=CHNC af B) 30 7,01 og 7,10 (2s, J^N-CH=CHNC af A) 7,54 (s, ^N-CH=N- af B) 7,61 (s, ^ N-CH=N- af A) 7,64 (mt, ^NH i 8 af B) 7,82 (s, -H20 af B) 35 8,09 (s, -H2q af A)

O

56

DK 166151 B

2-(1-Imidazolyl)-ethanthiol kan fremstilles på den samme måde som beskrevet i eksempel 11 til fremstilling af udgangsmaterialet, men ud fra 21 g 2-(1-imidazolyl)-ethan-thiolacetat og 0,5 g natriummethylat. Efter rensning ved 5 destillation fås 2,3 g 2-(1-iraidazolyl)-ethanthiol i form af en olie [Kp. (20 Pa) = 99,5°C].

2-(1-Imidazolyl)-ethanthiolacetat kan fremstilles på den samme måde som beskrevet i eksempel 11 til fremstilling af udgangsmaterialet, men ud fra 15 g 2-(1-imidazolyl)-10 -ethanol, 70,2 g triphenylphosphin, 55,8 ml diisopropyl-azodicarboxylat og 21 ml thioleddikesyre. Efter rensning ved flashchromatografi (elueringsmiddel: methylenchlorid 1500 ml, derpå ethylacetat-methanol i volumenforholdet 80:20), idet der opsamles fraktioner på 100 ml, og kon-15 centrering til tørhed under formindsket tryk(2,7 kPa) ved 30°C af fraktionerne 21-35 fås 21,14 g 2-(1-imidazolyl)--ethylthiolacetat i form af en orange-gul olie, som anvendes uden yderligere rensning.

2-(1-Imidazolyl)-ethanol kan fremstilles på den samme 2o måde som beskrevet af J. Geibel et al. i J. Am. Chem. Soc., 100, 3575 (1978).

Eksempel 15

Idet der gås frem på den samme måde som beskrevet i 25 eksempel 2, men gås ud fra 5,5 g 26-(2-morpholino-ethyl)--thio-pristinamycin ΙΙβ (isomer A), 1,3 g natriumhydrogen-carbonat og 1,4 g 98%1 s metachlorperbenzoesyre, fås efter ekstraktion af reaktionsblandingen, tørring af den organiske fase over magnesiumsulfat, filtrering og koncentrering til 30 tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C et lysegult fast stof, som omrøres i 100 ml isopropylether, fraskilles ved filtrering og derpå tørres under formindsket tryk (90 Pa) ved 35°C. Der fås således 4,8 g 26-(2-mor-pholino-ethyl)-sulfinyl-pristinamycin ΙΙβ (isomer A2) i 35 form af et lysegult fast stof, som smelter nær 126°C.

O

57

DK 166151 B

NMR-Spektruxn: 1.77 (s, -CH3 i 33) CH0- 2.6- 3,1 (mt, -SCH2-CH2N. og -H4) 5 O CH2- 2,95 og 3,13 (2dd, ^CH2 i 15) 3.20 (mt, -H26) 3.78 (mt, -CH2-0-CH2-) 10 3,81 (s, ^CH2 i 17) 4,85 (mt, ~H27) 5.53 (d, -H13) 6.20 (d, -Hu) 6.53 (mf, >NH i 8) 15 8,14 (s, -H2o)· 26-(2-morpholino-ethyl)-thio-pristinamycin ΙΙβ (isomer A) kan fås på den samme måde som beskrevet i eksempel 1, men ud fra 15 g pristinamycin 11^ og 6,3 g 2-morpholino--ethanthiol. Efter rensning ved flashchromatografi (elue-20 ringsmiddel: ethylacetat-methanol i volumenforholdet 75:25), idet der opsamles fraktioner på 30 ml, og koncentrering til tørhed af fraktionerne 35-49 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 11 g af et beige fast stof, som krystalliseres i 120 ml acetonitril. Der fås således 5,7 g 26-25 -(2-morpholino-ethyl)-thio-pristinamycin ΙΙβ (isomer A) i form af hvide krystaller, som smelter ved 132°C.

NMR-Spektrum: 1,73 (s, -CH3 i 33) CKL-/ 2 30 2,50 (mf, -N ) ^CH2- 2.6- 2,9 (mt, -H4) 2,64 (mt, ^ N-CH2~) 2.79 (mt, -SCH2-) 35 2,91 og 3,11 (2dd, ^ CH2 i 15) 3,37 (d bred, -H2g)

O

58

DK 166151 B

CH2~ 3/74 (mf, )

Xch2- 5 3/83 (s, j>CH2 i 17) 4/74 (s bred/ -H27) ' 5/45 (d, -H13) 6,13 (d, -Hn) 6,28 (mf, >NH i 8) 10 8/13 (s/ -H2q)* 2-Morpholino-ethanthiol kan fremstilles på den samme måde som beskrevet af D.D. Reynolds et al. i J. Org. Chem., 26, 5125 (1961).

15 Eksempel 16

Idet der gås frem på den samme måde som beskrevet i eksempel 1, men gås ud fra 5,8 g 26-(2-butylamino-ethyl)--thio-pristinamycin ΙΙβ (isomer A 80%, isomer B 20%), 0,68 ml trifluoreddikesyre og 1,8 g metachlorperbenzoesyre, og 2o efter rensning ved flashchroma tograf i (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 90:10), idet der opsamles fraktioner på 15 ml, og koncentrering til tørhed af fraktionerne 9-15 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved· 30°C, fås 1,7 g 26- (2-butylamino-ethyl)-sulfinyl-pristina-25 mycin ΙΙβ (isomer A2 70%, isomer 15%, isomer B2 15%) i form af et gult pulver, som smelter nær 140°C.

NMR-Spektrum (isomer A2): 0,85-1,00 (mt, -CH3 i 31 og 30 + -CH3 af kæden) 1,34 (mt, -CH2CH3) 30 1,48 (mt, -CH2CH2CH2CH3) 1,75 (s, -CH3 i 33) 2,50-3,30 .(mt, -H26, ^CH2 i 2, -S-CH2-CH2-N-CH2\, -Hj)

O

3,80 (s, ^ CH2 i 17) 35 4,80 (d, -H27) 5,50 (d, -H13) 6,17 (d, —Hu)

O

59

DK 166151 B

6,40 (dd, >NH i 8) 8.12 (s, -H20).

Efter koncentrering til tørhed af fraktionerne 18-24 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 0,5 g 26-5 -(2-butylamino-ethyl)-sulfinyl-pristinamycin ΙΙβ (isomer 85%, isomer B^ 15%) i form af et gult pulver, som smelter nar 170°C.

NMR-Spektrum (isomer A-^) : 0,85-1,00 (mt, “CHg i 31, 30 og -CH3 af kæden) 10 1,33 (mt, -CH2CH3) 1,47 (mt, -CH2CH2CH2CH3) 1,71 (s, -CH3 i 33) 2,50-3,25 (mt, -S-CH2CH2NC og -H4)

O

15 3,79 (AB limit,> CH2 i 17) 5,26 (d, -H27) 5,44 (d, -H13) 6.13 (d, -H1;l) 6,62 (mt, > NH i 8) 20 8,10 (s, -H2Q) .

26-(2-Butylamino-ethyl)-thio-pristinamycin ΙΙβ (isomer A 80%, isomer B 20%) kan fremstilles som beskrevet nedenfor i eksempel 17.

25 Eksempel 17

Idet der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 1, men gås ud fra 3,15 g 26-(2-butylamino-ethyl)--thio-pristinamycin ΙΙβ (isomer B), 0,37 ml trifluoreddike-syre og 0,97 g metachlorperbenzoesyre, og efter rensning ved 30 flashchromatografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 90:10), idet der opsamles fraktioner på 15 ml, og koncentrering til tørhed af fraktionerne 18-35 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C, fås 1,18 g 26-- (2-butylamino-ethyl)-sulfinyl-pristinamycin II-, (isomer

D

35 B·^ 65%, isomer B2 35%) i form af et gult pulver, som smelter nær 140°C.

0 60

DK 166151 B

NMR-Spektrum: 0/90-1/05 (mt, -CH3 i 30 og 31 og -CH3 af kæden af B± og b2) 1/40 (mt/ -CH2CH3 af og B2) 5 1/50 (mt/ -CH2CH2CH2CH3 af Βχ og B2) 1/57 (S/ -CH3 i 33 af B^ og B2) 2/63 (t/ >NCH2CH2CH2CH3 af Βχ og B2) 2/65-3/30 (mt, -^-CH2CH2N^ , ^CH2 i 15, -H4 af B1 O og B2) 10 3,74 og 3,92 (2d, ^ CH2 i 17 af B^ 3,73 og 3,94 (2d, ^ CH2 i 17 af B2) 4.78 (d, -H27 af B2) 4,75-4,90 (mt, -H13 og -H14 af B1 og B2) 5,27 (d, -H27 af Βχ) 15 5/70 (2d, —3-f B^ o? B2) 7,69 (dd, ^NH i 8 af B'2) 7.79 (dd, >NH i 8 af Βχ) 7.84 (s, -H20 af B2) 7.85 (s, -H20 af B1) 20 Idet der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 3, men gås ud fra 25 g pristinamycin II og 6,34 g 2-butylamino-ethanthiol, og efter rensning ved flashchro-matografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 90:10), idet der opsamles fraktioner på 60 ml, 25 og koncentrering til tørhed af fraktionerne 12-15 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C, fås 3,15 g 26-(2-butyl-amino-ethyl) -ifchio-pristinamycin ΙΙβ (isomer B) i form af et gult pulver, som smelter nær 110°C. Efter koncentrering til tørhed af fraktionerne 15-25 under formindsket tryk 30 (2,7 kPa) ved 30°C fås 5,89 g 26-(2-butylamino-ethyl)-thio- -pristinamycin ΙΙβ (isomer A 80%, isomer B 20%) .

35

O

61

DK 166151 B

Eksempel 18

Idet der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 1, men gås ud fra 8,6 g 26-(2-decylamino-ethyl)-thio--pristinamycin Hg, 0,9 ml trifluoreddikesyre og 2,35 g 5 metachlorperbenzoesyre, og efter rensning ved flashchroma-tografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 90:10), idet der opsamles fraktioner på 40 ml, og koncentrering til tørhed af fraktionerne 12-15 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C, fås 1,5 g 26-(2-decyl-10 amino-ethyl)-sulfinyl-pristinamycin ΙΙβ (isomer A2 80%) i form af et gult pulver, som smelter nær 128°C.

NMR-Spektrum: 0,88 (t, -(CH2)9 - CH3) 1,30 [m, (>CH2)81 15 1/50 [m, (^CH2)8] 1.77 (s, -CH3 i 33) 4,81 (d, -H27) 5,51 (d, -H13) 6,19 (d, -Hu) 20 6,53 (mt, > NH i 8) 8,13 (s, -H20).

Efter koncentrering til tørhed af fraktionerne 15-19 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 2,51 g 26--(2-decylamino-ethyl)-sulfinyl-pristinamycin ΙΙβ (blanding 25 af isomere) i form af et gult pulver, som smelter nær 124°C. NMR-Spektrum (blanding af isomere af type A2 50%, Αχ 15%, B1 20% og B2 15%) 1,54 (s, -CH3 i 33 af og B2) 3,72 og 3,88 (2d, ^ CH2 i 17 af Βχ) 30 3,70 og 3,92 (2d, ^CH2 i 17 af B2) 4,75 (d, -H27 af B2) 5,25 (d, -H27 af Βχ) 7,67 (dd, ^NH i 8 af B2) 7.77 (dd, j^NH i 8 af Βχ) 35 7,81 (s, “H2q af og B2)

Karakteristiske toppe af isomerene Α·2 og A^ er identiske med dem, der hhv. er nævnt ovenfor og nedenfor) .

O

62

DK 166151 B

Der gås en vandig 1%’s opløsning af 26-(2-decylamino--ethyl)-sulfinyl-pristinamycin ΙΙβ i form af hydrochloridet med 26- (2-decylamiiK>-ethyl) -sulfinyl-pristinamycin 11^....... 15 mg 5 0,1N saltsyre............................................ 0,20 ml destilleret vand.......................................ad 1,5 ml

Efter koncentrering til tørhed af fraktionerne 20-24 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 1,12 g 26-- (2-decylamino-ethyl)-sulfinyl-pristinamycin II_ (isomer 10 A-^ 60%, A2 20%, 20%) i form af et gult pulver, som smelter nær 136°C.

NMR-Spektrum (isomer A^): 2,50-3,20 (mt, ^:CH2 i 15, -H4 og-S-CH2CH2-N-CH2-)

O

15 3,82 (AB limit, >CH2 i 17) 5,27 (d, -H27) 5,46 (d, -H13) 6,15 (d, -Hn) 6,62 (mt, > NH i 8) 20 8,12 (s, -H2q) .

26-(2-Decylamino-ethyl)-thio-pristinamycin II_ kan fremstilles på den følgende måde:

Idet der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 3, men gås ud fra 5,25 g pristinamycin 11^ og 3,26 25 g 2-decylamino-ethanthiol, og efter rensning ved flashchro-matografi (elueringsmiddel: methylenchlor id-methanol i volumenforholdet 95:5) og koncentrering til tørhed af fraktionerne 20-43 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C, fås 1,2 g 26-(2-decylamino-ethyl)-thio-pristinamycin ΙΙβ 30 i form af et gult pulver, som smelter nær 80 C.

NMR-Spektrum (blanding af isomere 70-30 af A og B) : 0,88 (t, -CH3) 1/30 1 mt, -(CH„)r-) 1,53 35 1,54 (s, -CH3 i 33 af B) 1,72 (s, -CH3 i 33 af A) 2,6-3 (mt, -SCH2-CH2-N-CH2-)

DK 166151 B

63 o 3/38 (d bred, -H2g af A) 3/50 (mt/ -H26 af B) 4/64 (d, J = 3/5, -H27 af B) 4,72 (s bred, ~H27 af A) 5 7,80 (s, -H20 af B) 8,12 (s, -H20 af A).

Eksempel 19

Idet der gås frem på samme måde som beskrevet i ek~ 10 sempel 1, men gås ud fra 4,4 g 26-(2-cyclohexylamino-ethyl)--sulfinyl-pristinamycin Ι1β (isomer A 80%, B 20%), 0,5 ml trifluoreddikesyre og 1,15 g metachlorperbenzoesyre, og efter rensning ved flashchromatografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 90:10), idet der op- 15 samles fraktioner på 40 ml, og koncentrering til tørhed af fraktionerne 24-29 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C, fås 0,38 g 26-(2-cyclohexylamino-ethyl)-sulfinyl-pri-stinamycin ΙΙβ (isomer A2 90%) i form af et lysegult pulver, som smelter nær 166°C.

20 NMR- Spektrum: 1,05-1,35 [mt,CH2 af cyclohexyl (delvis)] 1,77 (s, -CH3 i 33) 1,55-2,25 [mt,^ CH2 i 25, -H2g og CH2 af cyclohexyl (delvis) 25 2,45-3,35 (mt, -H26, ^CH2 i 15, -H4 og -S-CH2CH2N-CH<) 6 3.82 (s, ^ CH2 i 17) 4.82 (d, -H27) 5,52 (d, -H13) 30 6r 19 (d, -Ηη) 6,38 (dd, >NH i 8) 8,14 (s, -H20).

26-(2-Cyclohexylamino-ethyl)-thio-pristinamycin 11^ kan fås på den følgende måde: 35 Idet der gås frem på samme måde som beskrevet i ek sempel 3, men gås ud fra 5,25 g pristinamycin IIA og 3,6 g 2-cyclohexylamino-ethanthiol, og efter rensning ved flash-

DK 166151B

64

O

chromatografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 93:7) og koncentrering til tørhed af fraktionerne 7-18 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°Cffås 1,7 g 26-(2-cyclohexylamino-ethyl)-thio-pristinamycin ΙΙβ 5 i form af et beige pulver, som smelter nær 120°C.

NMR-Spektrum: 1- 1,4 (mt, ^ CH2 af cyclohexyl (delvis)) 1,54 (s, -CH3 i 33 isomer B) 1,73 (s, -CH^ i 33 isomer A) 10 1,6-2 (mt, ^CH2 af cyclohexyl (delvis)) 2.80 (mt, ^NCH2-) 2,93 (t, -SCH2-) 3,36 (d bred, -H2g isomer A) 3.50 (mt, -H2g isomer B) 15 4,64 (d, J = 3, -H27 isomer B) 4,72 (s bred, -H27 isomer A) 6.50 (mt, -NHg isomer A) 7,75 (mt, -NHg isomer B) 7.80 (s, “H2q isomer B) 20 8,12 (s, -H20 isomer A).

2- Cyclohexylamino-ethanthiol kan fremstilles ifølge metoden beskrevet af D.D. Reynolds, M.K. Massad, D,L.

Fields og D.L. Johnson, J. Org. Chem., 26, 5109 (1961).

25 Eksempel 20 .

Idet der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 2, men gås ud fra 5 g 26-(2-(N-cyclohexyl-N-methyl--aminc)-ethyl)-thio-pristinamycin ΙΙβ (isomer A 80%, B 20%), 1,17 g natriumhydrogencarbonat og 1,2 g 98%’s metachlorper-30 benzoesyre, og efter rensning ved flashchromatografi (elueringsmiddel: dichlormethan-methanol i volumenforholdet 80:20), idet der opsamles fraktioner på 30 ml, og koncentrering til tørhed af fraktionerne 40-60 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C, fås 3,5 g af et gult fast stof, 35 som igen renses ved flashchromatografi (elueringsmiddel: ethylacetat-methanol i volumenforholdet 80:20), idet der opsamles fraktioner på 25 ml. Efter koncentrering til tør- 65

DK 166151 B

o hed af fraktionerne 11-18 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 1,2 g af et gult fast stof, som omrøres i 30 ml ethylether, fraskilles ved filtrering og derpå tørres under formindsket tryk (90 Pa) ved 35°C. Der fås således 5 1,1 g 26-(2-(N-cyclohexyl-N-methyl-amino)-ethyl)-sulfinyl- -pristinamycin ΙΙβ (isomer A2) i form af et gult pulver, som smelter nær 126°C.

NMR-Spektrum: 1,10-2 (mt, CH2 af cyclohexyl) 10 1,76 (s, -CH3 i 33) 2,34 (s,^N-CH3)

2,45 (mt, ^N-CHO

2,7-3,15 (mt, -|-CH2-CH2nC og -H4)

O

15 2,93 og 3,14 (2dd, > CH2 i 15) 3,25 (ddd, -E^g) 3.82 (s,> CH2 i 17) 4.82 (d, -H27) 5,52 (d, -H13) 20 6,18 (d, —^11^ 6,43 (dd, i 8) 8,13 (s, -H20).

26- (2- (N-Cyclohexyl-N-methyl-amino) -ethyl) -thio-pri-stinamycin ΙΙβ (isomer A 80%, B 20%) kan fås på den samme 25 måde som beskrevet i eksempel 3 til fremstilling af udgangsmaterialet, men ud fra 10,5 g pristinamycin IIA og 4 g 2-(N--cyclohexyl-N-methyl-amino)-ethanthiol. Efter rensning ved flashchromatografi (elueringsmiddel: ethylacetat-methanol i volumenforholdet 80:20), idet der opsamles fraktioner på 30 30 ml, og koncentrering til tørhed af fraktionerne 42-96 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C, fås et gult fast stof, som omrøres i 80 ml isopropylether, fraskilles ved filtrering og derpå tørres under formindsket tryk (90 Pa) ved 35°C. Der fås således 7,9 g 26-(2-(N-cyclohexyl-N-methyl-35 -amins)-ethyl)-thio-pristinamycin ΙΙβ (isomer A 80% og B 20%) i form af et gult pulver, som smelter nær 116°C.

O

66

DK 166151 B

NMR-Spektrum (80:20-blanding af to isomere A og B).: 1,25 og 1,6-1,9 (mt,CH2 af cyclohexyl for A og B) 1,56 (s, -CH3 i 33 af B) 1.73 (s, -CH3 i 33 af A) 2,25-2,5 (mt, CH- af cyclohexyl for A og B) 2,32 (s, J^N-CH3 af B) 2.35 (s, ^:N-CH3 af A) 2,6-2,8 (mt, -H4 af A og B) 2,78 (AB limit, -SCH2CH2Ncr af A og B) 2,9 og 3,14 (2dd, ^ CH2 i 15 af A) 3,41 (d bred, ~H26 af A) 3.73 og 3,91 (2d,> CH2 i 17 af B) 3,83 (s,CH2 i 17 af A) 4,65 (d, -Η2η af B) 4,76 (s bred, -H27 af A) 5,49 (d, ”H^3 af A) 6,16 (d, A) 6.36 (mf, ^ NH i 8 af A) 7.73 (mf, ^NH i 8 af B) 20 7,82 (s, -H20 af B) 8,13 (s, -H2q af A).

2-(N-Cyclohexyl-N-methyl-amino)-ethanthiol kan fås på den følgende måde:

Til 20 g S- (2-(N-cyclohexyl-N-methyl-amino) -ethyl) -iso-25 thiouronium-dihydrochlorid sættes under nitrogenatmosfære 23 ml af en vandig 6N natriumhydroxidopløsning. Efter 2 timers omrøring ved 100°C afkøles blandingen til 25°C, hvorpå der tilsættes koncentreret saltsyre indtil en pH-værdi på 9. Opløsningen vaskes med 3 x 50 ml dichlormethan, hvorpå de 3Q organiske faser forenes, tørres over magnesiumsulfat, filtreres og derpå koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C til dannelse af en olie, som renses ved destillation under formindsket tryk (130 Pa). Der fås 4,3 g 2- (N-cyclohexyl-N-methyl-amino) -ethanthiol i form af en 35 farveløs væske [Bp. (130 Pa) = 68°C3 .

2- (N-Cyclohexyl-N-methyl-amino) -ethan-thiouronium-dihydro-chlorid kan fås på den følgende måde: 67

DK 166151 B

O

Til 30 g 2-(N-cyclohexyl-N-methyl-aminol-l-chlor-ethan--hydrochlorid i 300 ml ethanol sættes 10,7 g thiourinstof. Den fremkomne opløsning opvarmes til 78°C i 18 timer. Efter afkøling filtreres det fremkomne hvide faste stof, hvorpå 5 det skylles med ethanol. Der fås således 21,5 g 2-(N-cyclo-hexyl-N-methyl-amino)-ethan-thiouronium-dihydrochlorid i form af et hvidt fast stof, som smelter ved 248°C.

2-(N-Cyclohexyl-N-methyl-amino)-1-chlor-ethan-hydro-chlorid kan fås på den følgende måde: 10 Til 120 ml thionylchlorid sættes dråbevis 25 g 2-(N- -cyclohexyl-N-methyl-amino)-ethanol, hvorpå blandingen opvarmes til 70°C i 24 timer. Efter destillation af det overskydende thionylchlorid omrøres den fremkomne orange olie i 200 ml ethylether til dannelse af et hvidt fast stof, 15 som fraskilles ved filtrering og derpå vaskes med ether.

Der fås 30 g 2-(N-cyclohexyl-N-methyl-amino)-1-chlor-ethan--hydrochlorid i form af et hvidt fast stof, som smelter ved 154°C.

20 Eksempel 21

Idet der gås frem på den samme måde som beskrevet i eksempel 1, men gås ud fra 4,3 g 26-[2-(4-methyl-l-pipera-zinyl)-carbonyloxy-ethyl]-thio-pristinamycin ΙΙβ (isomer A), 0,45 ml trifluoreddikesyre og 1,2 g metachlorperbenzoe-25 syre, og efter rensning ved flashchromatografi (eluerings-middel: chloroform-methanol i volumenforholdet 90:10), idet der opsamles fraktioner på 30 ml, og koncentrering til tørhed af fraktionerne 42-56 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C,fås 1,2 g 26-[2-(4-methyl-l-piperazinyl)-carbonyl-30 oxy-ethyl]-sulfinyl-pristinamycin ΙΙβ (isomer A2) i form af et lysegult pulver, som smelter nær 135°C.

NMR-Spektrum: 1,78 (s, -CH3 i 33) 2,32 (s, >N-CH3) 35 68

DK 166151 B

0 ^—CH

2,42 (m, -CO-N ^ N- ) \_CH/ 2,95-3,28 (2mt, -S-CH--)

O

/¾-^ 5 2,54 Cm, -CO-K ) >cή2-^ 3.82 (s, ^ CH2 i 17) 4,58 (mt, -CH9-0-C-N<)

O

10 4,82 (d, -H27) 5,50 (d, —H^3) 6,20 (d, —H-^) 6,39 (dd, >NH i 8) 8.14 (s, -H2q).

15 Efter koncentrering til tørhed af fraktionerne 65-95 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 0,65 g 26- -[2-(4-methyl-l-piperazinyl)-carbonyloxy-ethyl]-sulfinyl--pristinamycin lig (isomer A^) i form af et lysegult pulver, som smelter nær 140°C.

20 NMR-Spektrum: 1,75 (s, -CH3 i 33) 2,34 (s, >N-CH3) CH2 3-44 (m. -CO-KT ^ N- ) \—CH/ 25 2,90-3,15 (mt, -S-CBL·-)

O

/CH -v 3.55 (m, -CO-K N- ) 30 3.83 (s,CH2 i 17) 4,51-4,65 (2ddd, -CH--0-C-N/) ^ 11 o 5,28 (d, -H27) 35 6,19 (d, “H-^2^) 6.55 (dd, >NH i 8) 8.14 (s, -H2q)* 69

DK 166151 B

O

26-[2-(4-Methyl-l-piperazinyl)-carbonyloxy-ethyl]--thio-pristinamycin II_ kan fremstilles på den følgende

D

måde:

Idet der gås frem på den samme måde som beskrevet i 5 eksempel 1, men ud fra 5/25 g pristinamycin IIA og 3/76 g 2-(4-methyl-l-piperazinyl)-carbonyloxy-ethanthiol, og efter rensning ved flashchromatografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 90:10) og koncentrering til tørhed af fraktionerne 10-18 under formindsket tryk 10 (2/7 kPa) ved 30°C/fås 2,55 g 26-[2-(4-methyl-l-piperazinyl)- -carbonyloxy-ethyl]-thio-pristinamycin il i form af et beige pulver, som smelter nær 100°C.

NMR-Spektrum: 1.54 (s, -CH3 i 33 af isomer B) 15 1/73 (s, -CH3 i 33 af isomer A) 2.3 (s, >N-CH3) -CH2\ 2.4 (m, N-) -ch/ 20 CH2- 3.55 (m, -OOC-N<^ ) ch2- 3,98 (mt, -CH2-OCO-) 4,59 (d, J = 4, ~H2y af isomer B) 25 4,69 (s bred, -H^ af isomer A) 7.05 (t, ^NH i 8 af isomer A) 7,7 (m, i 8 af isomer B) 7,80 (s, “H20 af isomer B) 8,10 (s, -H20 af isomer A) 30 2-(4-Methyl-l-piperazinyl) -carbonyloxy-ethanthiol kan fremstilles ifølge metoden beskrevet af D.D. Reynolds, D.L. Fields og D.L. Johnson i J. Org. Chem. 26, 5111 (1961).

35 0 70

DK 166151 B

Eksempel 22

Idet der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel lf men gås ud fra 7,8 g 26-[l-methyl-2(S)-pyr-rolidinyl]-methylthio-pristinamycin ΙΙβ (isomer A), 0,91 5 ml trifluoreddikesyre og 2,4 g metachlorperbenzoesyre, og efter rensning ved flashchroma tograf i (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 90:10), idet der opsamles fraktioner på 60 ml, og koncentrering til tørhed af fraktionerne 26-36 under formindsket tryk (2,7 kPa) 10 ved 30°C, fås 2,3 g 26-[l-methyl-2 (S)-pyrrolidinyl]-me-thylsulfinyl-pristinamycin ΙΙβ (isomer A2) i form af et lysegult pulver, som smelter nær 140°C.

NMR-Spektrum: 1,76 (s, -CH3 i 33) | 15 2,48 (s, >NCH3) 1.70- 2,60 (mt, -H29 og ^CH2 i 25 og ^ <jH2) ch2— ch2 2,75-3,25 (mt -S-CH,-CH<;)

i' Δ O

20 3,82 (s, ^CH2 i 17) 4,81 (d, -H27) 5,52 (d, -H13) 6,20 (d, -H1]L) 6,42 (dd, >NH i 8) 25 8,14 (s, ""^20^ *

Efter koncentrering til tørhed af fraktionerne 46-59 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 1,1 g 26-- (l-methyl-2 (S) -pyrrolidinyll-methylsulfinyl-pristinamycin ΙΙβ (isomer A·^) i form af et lysegult pulver, som smelter 30 ved 148°C.

NMR-Spektrum: 1,73 (s, -CH3 i 33) 1.70- 2,50 (mt, i , -w ) 35 ^ CH2-CH2

O

71

DK 166151 B

2.41 (s, >N-CH3)

2,65-3,25 (mt, >CE2 i 15, -H i 4, -S-CH2-CHO

O

3,82 (AB limit, ^CH2 i 17) 5 5,45 (d, -H13) 6,17 (d, -H1]L) 8,11 (s, -H20).

26-(l-Methyl-2-pyrrolidinyl)-methylthio-pristina-xnycin Ι1β kan fremstilles på den følgende måde: 10 Idet der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 3, men gås ud fra 10,5 g pristinamycin 11^ og 3,14 g [l-methyl-2(S)-pyrrolidinyl]-methanthiol, og efter rensning ved flashchromatografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 90:10) og koncentrering 15 til tørhed af fraktionerne 20-35 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C,fås 7,8 g af isomer A i form af et gult pulver, som smelter ved ca. 120°C.

NMR-Spek trum: 1,70 (s, -CH3 i 33) 20 2,38 (s, ^:N-CH3) j 1,70-2,50 (mt, -H29, > CH2 i 25 og ) < ?> CH2—ch9 2,6-3,20 (mt, -S-CH2-CH^) 25 3,82 (s, IT:CH2 i 17) 4,73 (d, -H27) 5,45 (d, -H13) 6,15 (d, -Hi;l) 6.41 (dd, 5NH i 8) 30 8,11 (s, -H20)

Til 25 g råtS-Il-methyl-2(S)-pyrrolidinyl-methyl]--isothiouronium-dihydrochlorid i opløsning i 100 ml destilleret vand sættes 100 ml af en vandig 4N natriumhydroxidopløsning, hvorpå blandingen omrøres ved 90°C under 35 nitrogenatmosfære i 2 timer. Reaktionsblandingen afkøles til 0°C, der tilsættes 25 ml 12N saltsyre, hvorpå der ek-straheres med 2 x 200 ml methylenchlorid. Den organiske fase

O

72

DK 166151 B

tørres over natriumsulfat, filtreres og koncentreres derpå til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Der fås således 5,9 g [l-methyl-2 (S)-pyrrolidinyl] -me than thiol i form af en lysegul olie, som anvendes ved den fortsatte 5 omsætning uden yderligere rensning.

Rf = 0,15i chromatografi på silicagel; eluerings-middel: chloroform-methanol i volumenforholdst 90:10.

Til 11,9 g [l-methyl-2 (S)-pyrrolidinyl]-chlormethan i opløsning i 50 ml ethanol sættes 10,7 g thiourinstof, 10 hvorpå der omrøres ved tilbagesvaling i 48 timer. Blandingen koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 40°C. Remanensen optages med 100 ml varm ethanol og filtreres derpå på aktivt kul. Efter koncentrering til tørhed af filtratet under formindsket tryk 15 (2,7 kPa) ved 40°C fås 25 g af en lysegul olie sammensat af S-[l-methyl-2(S)-pyrrolidinyl-methyl]-isothiouronium-dihydrochlorid og overskydende thiourinstof.

Rf = 0,1; chromatografi på silicagel; eluerings-middel: chloroform-methanol i volumenforholdet 90:10).

20 [l-Methyl-2(S)-pyrrolidinyl]-chlormethan-hydrochlorid kan fremstilles ifølge metoden beskrevet af T. Hayashi et al. i J. Org. Chem., j48, 2195 (1983).

Eksempel 23 25 Idet der gås frem på samme måde som beskrevet i eksempel 1, men gås ud fra 2,6 g 26-(l-methyl-4-piperidinyl)--thio-pristinamycin ΙΙβ/ 0,3 ml trifluoreddikesyre og 0,8 g metachlorperbenzoesyre, og efter rensning ved flashchro-matografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumen-30 forholdet 90:10), idet der opsamles fraktioner på 40 ml, og koncentrering til tørhed af fraktionerne 20-35 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C, fås 0,33 g 26-(1--methyl-4-piperidinyl)-sulfinyl-pristinamycin ΙΙβ (isomer A2) i form af et gult pulver, som smelter nær 170°C.

35 NMR-Spektrum: 1,76 (s, -CH3 i 33) 2,2-3,00 (mtj _ch 'n- ) 73

DK 166151 B

O

2,32 (s, ^ N-CH3) 3,82 (s, ^CH2 i 17) 4,85 (d, -H27) 5,50 (d, -H13) 5 6,19 (d, -Hu) 6,37 (dd, ^NH i 8) 8,15 (s, -H20).

26- (l-methyl-4-piperidinyl) -thio-pristinamycin ΙΙβ kan fås på den følgende måde: 10 Idet der gås frem på den samme måde som beskrevet i eksempel 3, men gås ud fra 3,15 g pristinamycin 11^ og 1,6 g 2-methyl-4-piperidinthiol, og idet der sættes 0,6 g triethylamin til reaktionsblandingen, og efter rensning ved flashchromatografi (elueringsmiddel: methylenchlorid-15 -methanol i volumenforholdet 92:8) og koncentrering til tørhed af fraktionerne 4-20 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C,fås 0,9 g 26-(l-methyl-4-piperidinyl)-thio--pristinamycin ΙΙβ i form af et gult pulver, som smelter ved 180°C.

20 NMR-Spektrum:

/¾—V

2.10 (η, 4H : -sV )

ch2_X

2,25 (s, 3H : -S-^ > 25 /—C—2v 2,80 (m, 4H : -S-/^ N- ) >_CH^ 3,55 (m, IH : -H26) 4,62 (m, IH : -¾) 30 7,70 (m, IH : -H27 8.10 (s, IH : -H20).

2-Methyl-4-piperidinthiol kan fremstilles ved metoden beskrevet af H. Barrer og R.E. Lyle i J. Org. chem., 27, 641 (1962).

35

O

74

DK 166151 B

Eksempel 24

Til 7,8 g 26-(2-diethylamino-ethyl)-thio-pristina-mycin ΙΙβ i opløsning i 60 ml methanol sættes ved 0°C under nitrogenatmosfære 0,92 ml trifluoreddikesyre. Efter 5 15 minutter ved 0°C hæves temperaturen til 15°C, hvorpå der tilsættes 1,37 g selendioxid. Når alt selendioxidet er opløst, tilsættes langsomt ved en temperatur under 25°C 7 ml af en vandig 30%'s hydrogenperoxidopløsning.

Efter 1 times omrøring ved 25°C afkøles reaktionsblandin-10 gen til 10°C, der tilsættes 50 ml af en mættet vandig natriumhydrogencarbonatopløsning, hvorpå der ekstraheres med 4 x 50 ml methylenchlorid. De organiske faser forenes, tørres over magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres derpå til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 15 30°C. Det fremkomne gule faste stof renses ved flashchro- matografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 90:10), idet der opsamles fraktioner på 40 ml.

Efter koncentrering til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C af fraktionerne 31-38 fås et gult fast 20 stof, som renses ved flashchromatografi (elueringsmiddel: ethylacetat-methanol i volumenforholdet 80:20), idet der opsamles fraktioner på 40 ml. Efter koncentrering til tørhed under formindsket tryk af fraktionerne 27-33 fås et hvidt fast stof, som omrøres i 50 ml ethylether, fraskilles 25 ved filtrering og derpå tørres under formindsket tryk (90 Pa) ved 30°C. Der fås således 0,5 g 26-(2-diethylamino--ethyl)-sulfonyl-pristinamycin ΙΙβ (isomer A) i form af et hvidt fast stof, som smelter nær 150°C.

NMR-Spektrum: 30 0,97 (d, -CH-j i 30 og 31 og -CH3 af ethyl) 1,75 (s, -CH3 i 33) CH-- / 2 2,62 (g, -N<^ )

XcH2“ 35 3,00-3,40 (mt, -S02CH2CH2N<) 3,82 (s, ^CH2 i 17) 5,34 (d, -H13) o 75

DK 1661οι B

5,43 (d, -H13) 6.16 (d, -Hu) 6,54 (dd, ^NH i 8) 8,10 (s, “H20^’ 5

Eksempel 25

Der gås frem på den samme måde som beskrevet i eksempel 24, men gås ud fra 6,86 g 26-(2-diisopropylamino--ethyl)-thio-pristinamycin ΙΙβ (isomer A) , 0,77 ml tri-10 fluoreddikesyre, 1,15 g selendioxid og 6,33 ml af en vandig 30%'s hydrogenperoxidopløsning. Efter rensning ved flashchromatografi (elueringsmiddel: ethylacetat-methanol i volumenforholdet 80:20), idet der opsamles fraktioner på 40 ml, og koncentrering til tørhed af fraktionerne 15 28-31 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 0,7 g af et gult fast stof, som igen renses ved flashchromatografi (elueringsmiddel: ethylacetat-methanol i volumenforholdet 85:15), idet der opsamles fraktioner på 30 ral.

Efter koncentrering til tørhed under formindsket tryk af 20 fraktionerne 26-33 fås et gult fast stof, som omrøres i 30 ml ethylether, fraskilles ved filtrering og derpå tørres under formindsket tryk (90 Pa) ved 30°C. Der fås 0,6 g 26-(2-diisopropylamino-ethyl)-sulfonyl-pristinamycin ΙΙβ (isomer A) i form af et lysegult fast stof, som smelter nær 25 140°C.

NMR-Spektrum: 1,06 (d,-CH3 isopropyl) 1,75 (s, -CH3 i 33) 2,79 (mt, -H4) 30 2,92 og 3,10 (2dd, .> CH2 i 15) 2,7-3,30 (mt, -S-CH.,CH0N(CHC ) ,) 0 0 3,52 (d bred, -H2{.) 3,82 (s, ^CH2 i 17) 35 5,27 (d fin, -H2?) 5,47 (d, -H13) 6.17 (d, -Hn)

O

76

DK 166151 B

6,42 (mt, ^NH i 8) 8,12 (s, -H2q).

Eksempel 26 5 Der gås frem på den samme måde som beskrevet i ek sempel 2, men gås ud fra 2,9 g 26-(2-cyclopentylamino--ethyl)-thio-pristinamycin ΙΙβ (isomer A), 0,72 g natrium-hydrogencarbonat og 0,75 g 98%'s metachlorperbenzoesyre, ved -30°C. Efter rensning ved flashchromatografi (elue-10 ringsmiddel: methylenchlorid-methanol i volumenforholdet 90:10), idet der opsamles fraktioner på 30 ml, og koncentrering til tørhed af fraktionerne 25-31 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 0,7 g af et gult fast stof, som igen renses ved flashchromatografi (elueringsmiddel: 15 methylenchlorid-methanol i volumenforholdet 95:5), idet der opsamles fraktioner på 20 ml. Efter koncentrering til tørhed af fraktionerne 78-95 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 0,4 g 26-(2-cyclopentylamino-ethyl)--sulfinyl-pristinamycin ΙΙβ (isomer A2) i form af et lyse-20 gult fast stof, som smelter ved 114°C.

NMR-Spektrum: 1,76 (s, CH3 i 33) 1,30-2,25 (mt, ^CH2 af cyclopentyl) 2.80 (mt, -H4) 25 2,85-3,25 (mt, -SO-CH2-CH2-N-CH^ ; >CH2 i 15; -¾) 3,82 (s, ^:CH2 i 17) 4.81 (d, -H27) 5,53 (d, -H13) 6,19 (d, -Ηη) 30 6,30 (mt, Z^NH i 8) 8,15 (s, -H2q).

26- (2-Cyclopentylamino-ethyl) -thio-pristinamycin Hg (isomer A) kan fås ved at gå frem på samme måde som beskrevet i eksempel 1 til fremstilling af udgangsforbin-35 delsen, men ved at gå ud fra 15 g pristinamycin ΙΙβ og 4,3 g 2-cyclopentylamino-ethanthiol. Efter 3 dage ved -20°C og derpå rensning ved flashchromatografi (elueringsmiddel:

O

77

DK 166151 B

methylenchlorid-methanol i volumenforholdet 90:10), idet der opsamles fraktioner på 30 ml, og koncentrering til tørhed af fraktionerne 69-92 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 5,2 g af et gult fast stof, som opløses 5 i en blanding af 45 ml acetone og 90 ml ethylether. Det fremkomne bundfald fraskilles ved filtrering og tørres derpå under formindsket tryk (90 Pa) ved 35°C til dannelse af 2,9 g 26-(2-cyclopentylamino-ethyl)-thio-pristina- mycin II_ (isomer A) i form af et lysegult fast stof, & 10 som smelter nær 144°C.

NMR-Spektrum: 1,73 (s, -CH3 i 33) 1,50-2 (mt, ^CH2 af cyclopentyl) 2,78 (mt, -H4) 15 2,88 og 3,18 (2d, ^CH2 i 15) 2,85-3,05 (mt, -S-CH2~CH2-NC) 3,26 (mt, ^ N-CHcT ) 3,42 (mt, -H26) 3.82 (s, r=CH2 i 17) 20 4,70 (d, -H27) 5,48 (d, -H13) 6,18 (d, -Hu) 6.82 (mt, ΓΞ=ΝΗ i 8) 8,15 (s, -H2q).

25 2-Cyclopentylamino-ethanthiol kan fremstilles i analogi med metoden beskrevet af D.D. Reynolds et al. i J. Org. Chem. 26, 5109 (1961).

Referenceeksempel 1 30 Til en opløsning af 0,41 ml 3-dimethylamino-propyl- amin i 15 ml methanol indeholdende 2,4 ml af en 2N me-thanolisk hydrogenchloridopløsning holdt ved 55°C sættes 0,5 g pristinamycin 1^ og 20 mg natriumcyanoborhydrid.

Den fremkomne opløsning henstilles dernæst ved en tempera-35 tur nær 20°C i ca. 2 timer, hvorpå den koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Den fremkomne remanens tritureres med en blanding af 50 ml 78

DK 166151 B

O

methylenchlorid og 50 ml mættet vandig natriumhydrogen-carbonatopløsning. Den organiske fase dekanteres, og den vandige fase ekstraheres 2 gange med i alt 20 ml methylenchlorid. De organiske faser forenes, tørres over magnesi-5 umsulfat, filtreres og koncentreres derpå til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Den fremkomne remanens renses ved flashchromatografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 80:20). Fraktionerne 15-30 forenes og koncentreres til tørhed under for-10 mindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Den fremkomne remanens tritureres med 5 ml ethylether, filtreres og tørres under formindsket tryk (0,027 kPa) ved 20°C. Der fås således 60 mg 5Y-desoxy-5y-(3-dimethylamino-propyl)-amino-pri-stinamycin i form af et cremefarvet pulver, som smelter 15 nær. 160°C.

Det komplette NMR-spektrum udviser de følgende karakteristika: 20 25 30 35 79

DK 166151 B

O

6 (ppm) Signalform Tilskrives

, 8,40 d 6 KH

o

8.25 d 1 KH

7,55 dd ΓΗ6 7,05 æ 6γ + 66 + 6 ε 7 dd 1 Ή, 10 6,90 dd l'H5 6,70 d 1 6.40 ' d i 45 + 4e

6,50 d 2 NH

5.75 ddd 16 5.45 d 6a 15 5.25 dd 4a 5 s (bred) 5a 4.75 dd la 4.60 m 2a 4.45 (d (bred) 5ε 20 1 i 4.40 dd 3a | 3,4 dd (bred) 36^ i 3.20 dd (bred) 362 3 s 4 CH3

3 m 5Υ + 4^1 nrr O

25 1 og 2 2,80 s 4 N(CH3), 2,65 t -NCH2- (kæde) 2,35 m 5ε2 + 5øj 2.25 t -NCH2- (kæde) 2.20 s -N(CH,)„ (kæde) 30 J z 1.60 m -CH2- (kæde) 20 + 3γ 1.25 d 1γ 0,90 t 2γ 0,50 dddd 502 35 ~ “ o 80

DK 166151 B

Der fås en vandig 10%'s opløsning af 5Y-desoxy-57- -(3-dimethylamino-propvl)-amino-pristinamycin (forbindelse A) i form af hydrochloridet med: forbindelse A............................ 0,1 g 5 2N saltsyre .............................. 0,52 ml destilleret vand ......................... ad 1 ml

Idet der gås frem på den samme måde som beskrevet i referenceeksempel 1 fremstilles de følgende synergistiner med den almene formel (V), som kan kombineres med de her 10 omhandlede forbindelser: (Symbolerne ~---, Z og har den i 1) angivne betydning i den almene formel (V)) .

Reference- y χ 1) Smeltepunkt 15 eksempel 2) cpløselighed

1) Gult pulver Snp. ca. 180°C

2 -N(CH.)2 -NH(CH„)-N(CH_)„ 2) Vandig 10%'s opløsning i.

“ form af hydrochloridet 2Q / \ 1) Hvidt pulver

-K N-CH- Smp. ca, 195°C

3 -N(CH.)2 N.. / 2) Vandig 10%'s opløsning i form af hydrochloridet 1) Beige pulver

O Snp. ca. 195°C

N-CH- 2) Vandig 3,7%'s opløsning i form af hydrochloridet

1) Hvidt pulver Sip. ca. 170°C

5 —K(CH^)2 -ΝΗ0Η 2) Vandig 10%'s opløsning i form af hydrochloridet 30 1) Cremefarvet pulver

Snp. ca. 160°C

6 -N(CH^)2 -NH(CH2)3OH 2) Vandig 2%'s opløsning i form af hydrochloridet

1) Beige pulver Snp. ca. 140 C

7 -H -KH(CHJJKCHJ, 2) Vandig 10%'s opløsning i 35 2 3 3 2 form af hydrochloridet

DK 166151B

81

O

Referenceeksempel 8

Til en opløsning af 2 g pristinamycin IA i 25 ml methanol sættes 2,8 ml af en 5N ethanolisk dimethylaminop-løsning og derpå 2 ml af en 5N methanolisk hydrogenchlorid-5 opløsning. Til den fremkomne opløsning sættes 76 mg na-triumcyanoborhydrid, hvorpå der omrøres i 48 timer ved en temperatur nær 20°C. Reaktionsblandingen koncentreres dernæst til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Remanensen tritureres med en blanding af 25 ml methylen-10 chlorid og 25 ml af et mættet vandig natriumhydrogencarbo-natopløsning, den organiske fase dekanteres, og den vandige fase ekstraheres to gange med i alt 50 ml methylen-chlorid. De organiske faser forenes, tørres over magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres derpå til tørhed under 15 formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Remanensen renses ved flashchromatografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 92:8). Fraktionerne 5-12 forenes og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Der fås således 0,7 g 5Y-desoxy-5Y-diraethylamino-20 -pristinamycin i form af et beige pulver, som smelter nrær 170°C.

NMR-Spektrum: 0,70 (dt, IH : 5β2) 2,10-2,60 (m, 4H : 5£χ + 5s2 + 5βχ + 5γ) 25 2,15 (s, 3H X 0,8 : -N(CHg)2 1. isomer) 2,20 (s, 3H X 0,2 : -NiCH^^ 2. isomer)

Der fås en vandig 2%'s opløsning af 5Y-desoxy-5Y--dimethylamino-pristinamycin 1^ (forbindelse B) i form af hydrochloridet med: 30 forbindelse B .............................. 0,05 g 0,1N saltsyre .............................. 0,56 ml destilleret vand ........................... ad 2,5 ml 35

DK 166151B

82

O

Referenceeksempel 9

Idet der gås frem på den samme måde som beskrevet i referenceeksempel 8 fås 0,35 g 5Y-desoxy-5Y-methylamino--pristinamycin i form af et gult pulver, som smelter 5 nær 185°C.

Der fås en vandig 1%'s opløsning af 5Y-desoxy-5--methylamino-pristinamycin i fona af hydrochloridet.

Referenceeksempel 10 1Q Idet der gås frem på den samme måde som beskrevet i referenceeksempel 8, fås 1,2 g 5Y-desoxy-5Y-[N-(2-dimethyl-amino-ethyl)-N-methylamino]-pristinamycin 1^ i form af et hvidt pulver, som smelter nær 120°C.

Der fås en vandig 10%'s opløsning af 5Y-desoxy-5Y~ ·)5 - [N- (2-dimethylamino-ethyl) -N-methylamino] -pristinamycin IA (forbindelse D) i form af hydrochloridet.

Referenceeksempel 11 5 g Molekylsigte (3 Å) sættes til en opløsning af 20 3 g pristinamycin 1^, 3,3 g 4-diethylamino-2-methyl-butyl- amin, 0,11 g natriumcyanoborhydrid og 9 ml 5N methanolisk hydrogenchloridopløsning i 75 ml methanol. Den fremkomne suspension omrøres i 4 dage ved en temperatur nær 20°C, hvorpå den filtreres. Filtratet koncentreres til 25 tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Remanensen tritureres med en blanding af 50 ml methylenchlorid og 50 ml af en mættet vandig natriumhydrogencarbonatopløsning.

Den organiske fase dekanteres, og den vandige fase ekstra-heres 2 gange med i alt 50 ml methylenchlorid. De organiske 30 faser forenes, tørres over magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres derpå til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Remanensen renses ved flashchromatografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 90:10). Der fås således 0,7 g 5Y-desoxy-5Y-(4-diethylamino-35 -2-methyl-butyl)-amino-pristinamycin 1^ i form af et beige pulver, somsaelter nær 160°C.

o 83

DK Ί66Ί5Ί B

NMR-Spektrum: 1,10 (mt, 9H : -N(CH2CH3)2 + CH-CH3) nær 1,7 (m, 4H : -CH2-CH2“CH2-N(C^) 2) 2,90 (m, 6H : -CH2N(CH2CH3)2) 5 7,70 (mt, IH X 0,45 : l'Hg 1. isomer) 7,77 (mt, IH X 0,55 : l'Hg 2. isomer).

Der fås en vandig 10%'s opløsning af 5Y-desoxy-5Y-- (4-diethylamino-2-methyl-butyl) -amino-pristinamycin IA (forbindelse F) i form af hydrochloridet med: 10 forbindelse F ........................... 0,1 g 0, IN saltsyre ........................... ad 1 ml

Referenceeksempel 12

Til en opløsning af 12,5 g 5Y-desoxy-5Y-hydroxyimine-15 -pristinamycin IA i 300 ml methanol indeholdende 10 ml af en 2N methanolisk hydrogenchloridopl'øsning sættes 0,7 -g natriumcyanoborhydrid. Den fremkomne opløsning omrøres 2 dage ved en temperatur nær 20°C, hvorpå den koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Re-20 manensen tritureres i en blanding af 200 ml methylenchlo-rid og 100 ml af en mættet vandig natriumhydrogencarbonat-opløsning. Den organiske fase dekanteres, og den vandige fase ekstraheres med 100 ml methylenchlorid. De organiske faser forenes, tørres over magnesiumsulfat, filtreres og 25 koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Efter rensning ved flashchromatografi (eluerings-middel: chloroform-methanol i volumenforholdet 95:5) fås 6,8 g 5Y-desoxy-5Y-hydroxyamino-pristinamycin IA i form af et hvidt pulver, som smelter nær 170°C.

30 NMR-Spektrum: 0,4 (m, IH : 5β2) 2,45 (d, IH : 3,1 (d : 5γ i et komplekst massiv) 7,80 (mt, IH X 0,75 : l'Hg 1. isomer) 35 7,95 (mt, IH X 0,25 : l'Hg 2. isomer) 5Y-Desoxy-5Y-hydroxyimino-pristinamycin IA kan fås ved omrøring i 5 timer ved en temperatur nær 20°C af 15 g o 84

DK 166151 B

pristinamycin 1^ og 7,5 g hydroxylamin-hydrochlorid i opløsning i 150 ml methanol indeholdende 8 ml af en 2N methanolisk hydrogenchloridopløsning. Reaktionsblandingen koncentreres dernæst til tørhed under formindsket tryk 5 (2,7 kPa) ved 30°C. Remanensen tritureres med en blanding af 100 ml chloroform og 100 ml af en mættet vandig natri-umhydrogencarbonatopløsning. Den organiske fase dekanteres, og den vandige fase ekstraheres 2 gange med i alt 200 ml chloroform. De organiske faser forenes, tørres over magne-10 siumsulfat, filtreres og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Der fås således 14 g 5Y-desoxy-5Y~hydroxyimino-pristinamycin i form af et beige pulver, som smelter ved 210°C.

NMR-Spektrum: 15 0,35 (dd, IH : 5&2) 3,25 (m, 2H : 4e2 + 5^) 5.05 (d, IH : 5a) 5.5 (m, 2H, heraf 5g^) 7,80 (dd, IH X 0,40 : l'Hg 1. isomer) 20 7,90 (dd, IH X 0,60 : l’Hg 2. isomer)

Referenceeksempel 13

Idet der gås frem på samme måde som beskrevet i referenceeksempel 11 fås 0,8 g 5γ-[N-(carboxymethyl)-me-25 thylamino]-5Y-desoxy-pristinamycin i form af cremefarvet pulver, som smelter nær 140°C.

Der fås en vandig 2%'s opløsning af 5γ-[Ν-(carboxymethyl) -methylamino]-5Y-desoxy-pristinamycin 1^ (forbindelse K) med: 30 forbindelse K ................................ 0,2 g destilleret vand ............................. ad 10 ml 35

DK 166151 B

o 85

Referenceeksempel 14

Til en opløsning af 3,2 g 5Y-desoxy-5Y-(2-dimethyl-amino-ethyl) -amino-pristinamycin IA i 50 ml chloroform indeholdende 0,6 ml triethylamin sættes 0,3 ml acetylchlo-5 rid. Reaktionsblandingen omrøres i 30 minutter ved en temperatur nær 20°C og koncentreres derpå til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Remanensen renses ved flashchromatografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 90:10). Ved koncentrering til tørhed af 10 fraktionerne 10-21 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 1,8 g 5Y-desoxy-5Y-[N-(2-dimethylamino-ethyl) --acetamido]-pristinamycin i form af et hvidt pulver, som smelter nær 170°C.

NMR-Spektrum: 15 0,9 (m, 4H : 2γ + 5β2) 2,05-2,15 (m, 3H : 5£χ + S$2 + 5γ) 2,15 (s, 3H i -C0CH3) 2,45 (s, 6H : -N(CH3)2) 2,35-2,60 (m, 5H : ^:N-CH2-CH2-NC + 5βχ) 20 7,8 (mt, IH X 0,75 : l'Hg 1. isomer) 8,25 (mt, IH X 0,25 : l’Hg 2. isomer)

Der fås en vandig 10%'s opløsning af 5Y-desoxy~5Y-- [N-(2-dimethylamino-ethyl)-acetamido]-pristinamycin IA (forbindelse L) i form af hydrochloridet med: 25 forbindelse L ............................... 0,1 g 0,2N saltsyre ............................... 0,51 ml destilleret vand ..........................ad 1 ml 5Y-desoxy-5Y- (2-dimethylamino-ethyl) -amino-pristinamycin Ia kan fremstilles som beskrevet i referenceeksempel 30 2.

Referenceeksempel 15

Idet der gås frem på samme måde som beskrevet i referenceeksempel 14, fås 1,6 g 5Y-deso2^-5Y-[N-(3-dimethylamino-35 -propyl)-acetamido]-pristinamycin i form af et okkerfarvet pulver, som smelter ved 210°C.

Der fås en vandig 10%'s opløsning af 5Y-desoxy-5Y- 86

DK 166151 B

O

-[N-(3-dimethylamino-propyl)-acetamido]-pristinamycin 1^ (forbindelse M) i form af hydrochloridet.

Referenceeksempel 16 5 Til en opløsning af 3,6 g 5 S -me thy len-pr is tinamycin IA i en blanding af 25 ml methanol og 5 ml chloroform sættes 1,95 g 3-dimethylamino-propanthiol, hvorpå den fremkomne opløsning omrøres i 20 timer ved en temperatur nær 20°C. Reaktionsblandingen hældes dernæst i 250 ml destil-10 leret vand. Den fremkomne emulsion ekstraheres 3 gange med i alt 250 ml methylenchlorid. De organiske faser forenes, tørres over magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres derpå til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C.

Den fremkomne remanens renses ved flashchromatografi (elue-15 ringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 95:5), og fraktionerne 10-38 koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Den fremkomne remanens tritureres i 30 ml ethylether. De fremkomne krystaller fraskilles ved filtrering og tørres derpå under formindsket 20 tryk (27 Pa) ved 20°C. Der fås således 2,4 g 55 -(3-di-methylamino-propyl)-thiomethyl-pristinamycin i form af hvide krystaller, som smelter ved 234°C.

25 30 35 87

DK 166151 B

O

NMR-Spektrum: 6 (ppm) Form Tilskrives

5 11,65 s (bred) OH

8,70 d 6 NH

8.40 d 1 NH

7.80 dd ΓΗ6

7,45 m ΓΗ, + l'H

10 7,27 m Ί 7,17 m ] 6γ + 6δ + 6ε 7,05 d , ,} system AB 4δ + 4ε o, ου d

6,47 d 2_>NH

15 5,87 ddd 18

5,83 d 6 OL

5.24 m 5α + 4a 5,03 ddd 5Cj 4,85 dd la 20 4.80 m 2a 4.53 dd 3a 3.53 m 36j 3,35 dd _ ,c system ABX -CH0-S-SCH_“ 3,15 da —Z z 25 3,25 s 4^NCH3 3.25 τη 3δ2 2.90 s 4 -N(CH3)2 2.90 m 4β 2,55 t -CH N^CH3 30 N CH3 2,50 dd 5ε2 2.40 t -CH2SCH2- 2,40 - 2,20 n 56 + 58j 2.25 s -CH2N(CH ) 35

O

88

DK 166151 B

δ (ppm) Form Tilskrives 2 m 3β^ 5 1,75 m -SCH2CK2CH2- 1,8 —1,45 m + 2β£ + 3γχ 1,30 d 1γ 1,25 - 1,05 m 3γ2 + 3β2 0,9 t 2γ 10 0,60 dd 5β2 j

___I

Der fås en vandig 10%'s opløsning af 5£- (3-diméthylamino-15 -propyl)-thiomethyl-pristinamycin 1^ (forbindelse AA) med: forbindelse AA .................................... 30 mg 0,1N saltsyre ..................................... ad 0,3 ml 5£ -Methylen-pristinamycin 1^ kan fremstilles på den 20 følgende måde:

Til en opløsning af 12 g 5S-dimethylaminomethylen--pristinamycin Ia i 230 ml tetrahydrofuran indeholdende 1,2 ml trifluoreddikesyre sættes 0,43 g natriumcyanoborhy-drid. Den fremkomne opløsning omrøres i 4 timer ved en tem-25 peratur nær 20°C, hvorpå den koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Den fremkomne remanens renses ved flashchromatografi (elueringsmiddel: chloroform--methanol i volumenforholdet 95:5). Fraktionerne 4-15 koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30 30°C. Der fås således 5,5 g 5£-methylen-pristinamycin IA

i form af hvide krystaller, som smelter ved 245°C.

NMR-Spektrum: 0,55 (dd, IH : 5&2) 2,40 (d, IH : 5βχ) 35 3,55 (dd, IH : 5f2) 5,25 (m, 2H : 5α + 5£±) DK 166151 d 89

O

H

5/30 og 6,10 (2s, 2H : )

H

7,85 (dd, IH : l'Hg) 5 5£-Dimethylaminomethylen-pristinamycin IA kan frem stilles på den følgende måde:

Til en opløsning af 46 g pristinamycin IA i 460 ml 1,2-dichlor-ethan sættes 230 ml tert.butoxy-bis-(dimethyl-amino)-methan, og den fremkomne opløsning omrøres i 18 timer 10 ved en temperatur nær 20°C. Reaktionsblandingen fortyndes med 1 liter methylenchlorid, hvorpå den vaskes 3 gange med i alt 3 liter af en vandig 0,4%'s ammoniumchloridopløsning.

Den organiske fase tørres over magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres derpå til tørhed under formindsket tryk 15 (2,7 kPa) ved 30°C. Den fremkomne remanens tritureres med 600 ml destilleret vand, blandingen filtreres, og det faste produkt tørres under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 20°C.

Der fås 41 g råt 5$-dimethylaminomethylen-pristinamycin IA i form af et beige pulver. Dette produkt er af en tilstræk-20 kelig kvalitet til at anvendes som sådan i de videre faser.

Det kan dog renses på den følgende måde: 23,5 g råt 5£-dimethylaminomethylen-pristinamycin IA renses ved flashchromatografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 98:2). Fraktionerne 16-25 forenes og 25 koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Der fås således 12 g 5S-dimethylaminomethylen-pristina-mycin i form af et beige pulver, som smelter nær 195°C.

NMR-Spektrum: 0,9 (t, 3H : 2γ) 30 1,0 (dd, IH : 5β2) 2.50 (d, IH, 5β1) 3,10 (s, 6H : -N(CH3)2) 3,70 (d, IH : 5^2) 5.50 (d, IH : 56χ) 35 7,40 (S, IH : =CHN(CH3)2) 7,75 (dd, IH : l'Hg)

O

90

DK 166151 B

Referenceeksempel 17

Idet der gås frem på den samme måde som beskrevet i referenceeksempel 16, men gås ud fra 0,9 g 5^-methylen--virginiamycin S og 0,52 g 3-diraethylamino-propanthiol, og 5 efter rensning ved flashchromatografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 90:10) og koncentrering til tørhed af fraktionerne 13-25 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C, fås 0,3 g 5£-(3-dimethylamino--propyl)-thiomethyl-virginiamycin S i form af et hvidt 10 pulver, som smelter nær 142°C.

NMR-Spektrum: 0,45 (dd, IH : 532) 1,90 (m, 2H : -SCH2CH2CH2N^) ch3 15 2,40 (s, 6H : -CH9-N^ ) ch3

2,60 (m, 4H : -S-CHj-CHj-CHj-NO

3,45 (d, IH : 5£2) 4,85 (m, 3H, heraf 5£^) 20 5,25 (dd, IH : 5a) 7,78 (dd, IH : l’Hg).

Der fås en vandig 10%'s opløsning af 58-(3-dimethy1-amino-propyl)-thiomethyl-virginiamycin S (forbindelse AB) i form af hydrochloridet med: 25 forbindelse AB .................................. 0,1 g saltsyre........................................ad i mi 5&-Methylen-virginiamycin S kan fremstilles på den samme måde som beskrevet i referenceeksempel 16 for 5£--methylen-pristinamycin 1^, men ud fra 2 g 58-dimethylamino-30 methylen-virginiamycin S og 74 mg natriumcyanoborhydrid.

Efter rensning ved flashchromatografi (elueringsmiddel; chloroform-methanol i volumenforholdet 98:2) og koncentrering til tørhed af fraktionerne 2-5 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 1 g 5£-methylen-virginiamycin S i 35 form af et beige pulver, som smelter nær 190°C.

O

91

DK 166151 B

NMR-Spektrum: 0,35 (dd, IH : 5β2) 2,45 (dd, IH : 5βχ) 3,55 (dd, IH : 5c 2) 5 5,25 (dd, IH : 5εχ)

5,25 (ra, IH : 5a) H

5,30 og 6,15 (2s, 2H : =C^“ ) 7,75 (dd, 1 : l'Hg).

10 5£-Dimethylaminomethylen-virginiamycin S kan fås ved at gå frem på den samme måde som beskrevet i referenceeksempel 16 for 55-dimethylaminomethylen-pristinamycin 1^, men ved at gå ud fra 2 g virginiamycin S og 10 ml bis--dimethylamino-tert.butoxymethan, og efter rensning ved 15 flashchromatografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 98:2) og koncentrering til tørhed af fraktionerne 9-12 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 0,8 g 5£-dimethylaminomethylen-virginiamycin S i form af et gult pulver, som smelter nær 175°C.

20 NMR-Spektrum: 0,9 (m, 4H : 2γ + 5β2) 3,05 (s, 6H : =CH-N(CH3)2) 3,65 (d, IH : 5é2) 4,85 (d, IH : 5ί,χ) 25 5,15 (dd, IH : 5a) 7,10-7,40 (m : aromatiske + =CH-N<^) 7,70 (dd, IH : l'Hg).

Referenceeksempel 18 30 Idet der gås frem på'den samme måde som beskrevet i referenceeksempel 16, men gås ud fra 6 g 55-methylen-pristi-namycin IA og 4 ml 2-(4-methyl-l-piperazinyl)-ethanthiol, og efter rensning ved flashchromatografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 97:3) og koncentre-35 ring til tørhed af fraktionerne 8-20 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C,fås 2,6 g 55-[2-(4-methyl-l-piperazinyl)--ethyl]-thiomethyl-pristinamycin IA i form af hvide krystaller, som smelter ved 216°C.

O

92

DK 166151 B

NMR-Spektrum: 0,60 (dd, IH : 5β2) 2.27 (s, 3H :>N-CH3) ch?-ch.

5 2,40-2,80 (m, 11H : -CH9-N^ Δ . N- + 5β·,) ch2-ch/ 5,05 (dd, IH : 5€χ) 5.27 (m, 2H : 5a + 4a) 7.85 (mt, IH X 0,8 : l'Hg 1. isomer) 10 7,95 (mt, IH X 0,2 : l'Hg 2. isomer)

Der fås en vandig 5%'s opløsning af 55-[2-(4-methyl--1-piperazinyl)-ethyl]-thiomethyl-pristinamycin 1^ (forbindelse AC) i form af hydrochloridet med: forbindelse AC ................................. 0,1 g 15 0,1N saltsyre .................................. 0,96 ml destilleret vand............................... ad 2 ml

Referenceeksempel 19

Idet der gås frem på den samme måde som beskrevet i 20 referenceeksempel 16, men gås ud fra 2 g 55 -methylen-pristi-namycin 1^ og 3 ml 3-(4-methyl-l-piperazinyl)-propanthiol, og efter rensning ved flashchromatografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 90:10) og koncentrering til tørhed af fraktionerne 10-25 under formindsket tryk 25 (2,7 kPa) ved 30°C, fås 1,9 g 55-[3-(4-methyl-l-piperazinyl)- -propyl]-thiomethyl-pristinamycin i form af et hvidt pulver, som smelter nær 156°C.

NMR-Spektrum: 0,65 (dd, IH : 5&2) 30 2,30 (s, 3H : ^N-CH3)

CHA

2,50 tø, 13H = -qyK + -SCH,- + 53.) ch2cb2^ 5.27 (m, 2H i 5a + 4a)

oO

7.85 (dd, IH X 0,8 : l'Hg 1. isomer) 7,95 (dd, IH X 0,2 : l'Hg 2. isomer).

O

93

DK 166151 B

Der fås en vandig 10%'s opløsning af 5£·-[3-(4-ιηβΐ1ιγ1--1-piperazinyl)-propyl]-thiomethyl-pristinamycin IA (forbindelse AD) i form af hydrochloridet med forbindelse AD ................................ 0,1 g 5 0,5N saltsyre ................................. 0,38 ml destilleret vand .............................. ad 1 ml

Referenceeksempel 20

Idet der gås frem på den samme måde som beskrevet i 10 referenceeksempel 16, men gås ud fra 4 g 55-methylen-pristi-namycin IA og 4 ml l,3-bis-dimethylamino-2-propanthiol, og efter rensning ved flashchromatografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 95:5) og koncentrering til tørhed af fraktionerne 20-60 under formindsket tryk 15 (2,7 kPa) ved 30°C, fås 0,59 g 58-[1,3-bis-(dimethylamino)- -2-propyl]-thiomethyl-pristinamycin IA i form af et hvidt pulver, som smelter nær 170°C.

NMR-Spektrum: 0,63 (dd, IH : 502) 20 2,40 (s, 6H : -N(CH3)2) CH_N< 2,50 (m, 10H : -CE^ + -N(CH-),) ch2n< 4,97 (s, IH : 5^) 25 5,30 (m, 2H : 5a + 4a) 7,85 (mt, IH X 0,85 : l'Hg 1. isomer) 7,95 (mt, IH X 0,15 ; l'Hg 2. isomer)

Der fås en vandig 7,5%'s opløsning af 5F-[1,3-bis-- (dime thylamino)-2-propyl]-·thiomethyl-pristinamycin (for- 30 bindelse AE) i form af hydrochloridet med: forbindelse AE ................................. 0,03 g 0,1N saltsyre .................................. 0,3 ml destilleret vand ............................... ad 0,4 ml 35 94

DK 166151 B

O

Referenceeksempel 21

Idet der gås frem på den samme måde som beskrevet i referenceeksempel 16/ men gås ud fra 3 g 55-methylen-pri-stinamycin 1^ og 0,97 g 2-methyl-4-mercapto-piperidin, og 5 efter rensning ved flashchromatografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 95:5) og koncentrering til tørhed af fraktionerne 10-16 under formindsket tryk (2/7 kPa) ved 30°C,fås 1,1 g 5S-(l-methyl-4-piperidyl)--thiomethyl-pristinamycin i form af et hvidt pulver, 10 som smelter ved 260°C.

NMR-Spektrum: 0,6 (dd, IH : 5β2)

CH

2, (m. 4H : -S-/ ~2 '"'n- ) 2,20 (s, 3H : -S-</ ) 20 2,35 (m, IH : 5^) /— QiL2\ 2,90 (lDf 4H : -S-/ ) \_ch2^ 25 5,30 (m, 2H : 5a + 4a) 7,85 (dd, IH : l'Hg)

Der fås en vandig 5%'s opløsning af 55 -(l-methyl-4--piperidyD-thiomethyl-pristinamycin 1^ (forbindelse AF) i form af hydrochloridet med: 30 forbindelse AF 0,03 g 0/1N saltsyre 0,3 ml destilleret vand................................. ad 0,6 ml 35

O

95

DK 166151 B

Referenceeksempel 22

Idet der gås frem på samme måde som beskrevet i referenceeksempel 16, men gås ud fra 2 g 5S-methylamino-pristina-mycin IA og 0,66 g 2-diethylamino-ethanthiol fås efter rens-5 ning ved flashchromatografi (elueringsmiddel: chloroform--methanol i volumenforholdet 95:5) og koncentrering til tørhed af fraktionerne 9-18 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C 0,8 g 5£- (2-diethylamino-ethyl)-thiomethyl-pristi-namycin IA i form af et beige pulver, som smelter ved 230°C.

10 NMR-Spektrum: 0,65 (dd, IH : 5&2) 2,38 (d, IH : 5βχ) ch2- 2,3-2,8 (m, 8H : -S CH2CH2 ) %- 3,15 (dd, IH : -CH2S-) 3,35 (dd, IH : -CH2S-) 5,01 (dd, IH : 5^) 7,81 (dd, IH X 0,9 : l'Hg 1. isomer) 20 7,90 (dd, IH X 0,1 : l'Hg 2. isomer).

Der fås en vandig 5%'s opløsning af 5S-(2-ctiethylamino--ethyl)-thiomethyl-pristinamycin IA (forbindelse AF1) i form af hydrochloridet med: forbindelse AF^ ................................. 30 mg 25 0,1N saltsyre ................................... 0,29 ml destilleret vand ................................ ad 0,6 ml

Referenceeksempel 23

Til en opløsning af 5,5 g 5s-dimethylaminomethylen-30 -pristinamycin IA i 60 ml eddikesyre sættes dråbevis 5,3 g 2-dimethylamino-ethylamin, således at temperaturen kke overskrider 25°C. Den fremkomne opløsning omrøres i 20 timer ved en temperatur nær 20°C, hvorpå den langsomt hældes i en mættet vandig natriumhydrogencarbonatopløsning. Den frem-35 komne blanding ekstraheres 2 gange med i alt 750 ml methylen-chlorid. De organiske faser forenes, tørres over magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres til tørhed under formind-

O

96

DK 166151 B

sket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Remanensen renses ved flash-chromatografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 90:10), og fraktionerne 10-12 koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Der 5 fås således 3 g 5£-(2-dimethylamino-ethyl)-aminomethylen--pristinamycin IA i form af et beige pulver, som smelter nær 180°C.

NMR-Spektrum: 0,90 (mt, 4H : 2γ + 5β2) 10 2,25 (mt, 6H : -N(CH3)2) 2.50 (mt, 3H : -CH2N< + 50^ 3,25 (mt, 2H : >N-CH2") 3.50 (mt, 2H : 582 + 3Sj) 4.90 (mt, IH : 5εχ) NH_ 15 mellem 7,15 og 7,4 (m, IH : =C^ )

H

9.90 (mt, IH (udvekslelig D20) : -NH-)

Der fås en vandig 1%'s opløsning af 5S -(2-dimethylamino-ethyl) -aminomethylen-pristinamycin 1^ (forbindelse 20 (AG) med: forbindelse AG ................................... 0,1 g destilleret vand................................. ad 10 ml

Referenceeksempel 24 25 Idet der gås frem på samme måde som beskrevet i referenceeksempel 23, men gås ud fra 13,8 g 55-dimethyl-aminomethylen-pristinamycin 1^ og 3,4 g 4-amino-2-methyl--piperidin, og efter rensning ved flashchromatografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 92,5:-30 7,5) og koncentrering til tørhed af fraktionerne 15-20 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C,fås 4,0 g 5S-(1-methyl--4-piperidyl)-aminomethylen-pristinamycin IA i form af et gult pulver, som smelter ved 208°C.

NMR-Spektrum: 35 0,40 (m) 4H : 2γ + 2&2)

CH

2/0 (m, 4H : -/ ~2~^N- ) cH2_y

O

97

DK 166151 B

2,35 (S, 3H : >N-CH3) 2,45 (d, IH : 5β1)

Cch<j ~2V ) CH ^ 3,20 (under et massiv, IH : Cti'^ ) 10 3,50 (d, IH : 5^) 6,65 (d, IH : =CHNH-) 9,70 (dd, IH X 0,15 : =CH-NH 1. isomer) 10,03 (dd, IH X 0,85 : =CH-NH 2. isomer) 15 Der fås en vandig 10%'s opløsning af 55 -(1-methyl- -4-piperidyl)-aminomethylen-pristinamycin 1^ (forbindelse AT) i form af hydrochloridet med forbindelse AT ................................. 0,03 g 0,1N saltsyre .................................. 0,3 ml 20 destilleret vand ............................... ad 0,3 ml 4-Amino-2-methyl-piperidin kan fremstilles ved metoden beskrevet af E.F. Elslager, L.M. Werbel, A. Curry, N.

Headen og J. Johnson i J. Med. Chem. 17, 99 (1974).

Idet der gås frem som i referenceeksempel 23, frem-25 stilles de følgende synergistiner med den almene formel (V), som kan kombineres med de her omhandlede forbindelser. (Symbolerne , X og Z har den i 2b) angivne betydning i den almene formel (V), og, medmindre andet er anført, betyder Y en dimethylaminogruppe).

30 35

O

98

DK 166151 B

Reference- . 1). Smeltepunkt g eksempel R 2) Cpløselighed 1) Gult pulver,

Smp. ca. 150°C

25 -^-(^2)2^(^2^)2 2) Vandig 5%'s opløsning i form af hydrochloridet 10 1) Gult pulver,

smp. = 174°C

26 —NH.(CH^)2^^ CH3 2) Vandig 1%'s opløsning i form af hydrochloridet 1) Gult pulver,

15 snp. ca. 155°C

27 -NH(¢^2)^(013)2 2) Vandig 6,6%'s opløsning i j form af hydrochloridet __[___

1) Gult pulver, snp. ca. 160°C

28 -NH-CH-C^N(CH^)2 2) Vandig 1%‘s opløsning i 20 ' form af hydrochloridet __^3______ 1) Orange pulver, -NHCH2CH-N(CH3)2 snp. ca. 175°c 29 I 2) Vandig 10%'s opløsning i CH3 form af hydrochloridet 25__________ 1) Beige pulver,

-NH-CH-(CH2)3N(C2H5)2 snp. ca. 16CTC

20 J 2) Vandig 1%'s opløsning i CH3 form af hydrochloridet 30 1) Gult pulver,

^- smp. = 183°C

31 -NH-(CH2)2"K 2) Vandig 1%’s opløsning i ^----- form af hydrochloridet

1) Gult pulver, smp. = 170°C

35 32 -NH(CH2)3-N^ 2) Vandig 1%'s opløsning --------- ------ — - ...... - - - - - ——--

O

99

DK 166151 B

Reference- . 1) Smeltepunkt eksempel R 2) Opløselighed 5 1) Gult pulver,

O snp. = 162°C

2) Vandig 1%'s opløsning i form af hydrochloridet 1) Beige pulver,

>-v. sitp. ca. 172°C

10 3^ / 2) Vandig 1%'s opløsning i

Xv—^ form af hydrochloridet CH CH 2) Beige pulver,

I snp. ca. 1606C

35 2) Vandig 1%'s opløsning i 15 -NH-CH^-/ \ form af hydrochloridet jK. 1) Beige pulver,

"NH'(I srap. = 177°C

36 2) Vandig 1%'s opløsning i 2Q \ / form af hydrochloridet CH3 __

Reference- 1) Smeltepunkt 25 eksempel Y R 2) Opløselighed

Ol) Beige pulver,

~CH3 snp. ca. 195°C

2) Vandig 5%'s opløsning i form af hydrochloridet 30--—--

1) Gult pulver, snp. = 150°C

38 -N(CHJ0 -NH(CHJ,-N^ N-CH 2) Vandig 10%'s opløsning 32 11 V_/ i form af hydrochlo ridet 35 , . /Nv\ 1) Gult pulver, 39 -N(CH2>2 -NH-(CH2)2-|j smp. = i38°c I * 2) Vandig 10%'s opløs- — ning i form af hydro chloridet o 100

DK 166151 B

Referenceeksempel 40

Til en opløsning af 1,84 g 5S-dimethylaminomethylen--pristinamycin 1^ i 40 ml eddikesyre sættes 2,1 g 2-dime-thylamino-ethanthiol. Den fremkomne opløsning omrøres i 5 20 timer ved en temperatur nær 20°C, hvorpå den langsomt hældes i en mættet vandig natriurahydrogencarbonatopløsning.

Den fremkomne blanding ekstraheres 3 gange med i alt 400 ml methylenchlorid. De organiske faser forenes, tørres over magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres til tørhed 10 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Den fremkomne remanens renses ved flashchromatografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 96:4), og fraktionerne 5 og 6 forenes og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Der fås således 0,8 15 g 5S- (2-dimethylamino-ethyl)-thiomethylen-pristinamycin IA i form af et gult pulver, som smelter ved 150°C. NMR-Spektrum: 0,68 (dd, IH : 5β2) 2,32 (s, 6H X 0,85.: -CH2N(CH3)2 1. isomer) 20 2,35 (s, 6H X 0,15 : -CH2N(CH3)2 2. isomer) 2,45 (d, IH : 53^ 2,65 (mt, 2H : -SCH2-) 3,05 (t, 2H : -CH2N<) 3,43 (dd, IH : 5£2) 25 5,15 (i et massiv : 5£^) 7,60 (s bred, IH : =CHS-) 7,83 (mt, IH : l'Hg to isomere)

Der fås en vandig 1%'s opløsning af 5S-(2-dimethyl-amino-ethyl)-thiomethylen-pristinamycin 1^ (forbindelse 30 AX) i form af h.ydrochloridet med forbindelse AX................................ 0,1 g 0,1N saltsyre .................................. 1 ml destilleret vand.............................. ad 10 ml

Idet der gås frem som i referenceeksempel 40 frem-35 stilles de følgende synergistiner med den almene formel (V) , som kan kombineres med de her omhandlede forbindelser.

(Symbolerne , X og Z har den i 2b) angivne be- o 101

DK 1661οι B

tydning i den almene formel (V), og, medmindre andet er anført, betyder Y en dimethylaminogruppe) .

5

Reference- . U Smeltepunkt eksempel Y R 2) Opløselighed 10______

1) Beige pulver, smp. ca. 192°C

Al “N(CH.)_ -S-(CH_)_Ν(0οΗς)_ 2) Vandig 1%'s opløsning 3 2 2 2 2 3 z j_ form ^ hydrochlo- ____det___ 1) Beige pulver,

15 smp. ca. 170°C

A2 “S-CCH^^NCCH^j 2) Vandig 1%'s opløsning i _ form af hydrochloridet 1) Beige pulver,

smp. ca. 140°C

-H j -S(CH2)3N(CH3)2 2) Vandig 10%'s opløsning 2Q i form af hydrochloriffet.

1) Beige pulver,

AA -N(CH_) _ -S CH0-CH-CH0N(CH_) _ Slip. 234 C

32 2 I 2 3 2 2) Vandig 10%*s opløsningj CP-3 form af hydrochloridet 1) Beige pulver,

25 45 -N (CII_) 0 -S-CH.-C-K(CH,), smp. ca. 200°C

32 y \ 3 2 2) Vandig 1%'s opløsning i CH^ CH^ form af hydrochloridet 1) Beige pulver,

- sitp. ca. 180°C

A6 -N(CH3)2 -S(CH2)2-N^ 2) Vandig 1%'s opløsning i 2Q X—1 form af hydrochloridet 35

O

102

DK 166151 B

Reference- 4 1) Smeltepunkt eksenpel R 2) Opløselighed CH 1) Beige pulver,

5 I 3 smp. 215°C

Nv 2) Vandig 0,6%'s opløsning ^ 2~ i i i form af hydrochloridet 1) Gult pulver,

10 /——N. T snp. ca. 170°C

~S_<C /N-CH3 2) Vandig 1%'s opløsning i ^-S form af hydrochloridet _S~1) Beige pulver,

snp. ca. 175°C

^ \ T/ 2) Vandig 1%'s opløsning i 15 |T form af hydrochloridet ch2ch3 -S-(CH-).K-(CHJ_N(CH,)9 1) Gult pulver, 50 22 2 2 3 2 snp. ca. 2.go q CH^ 2) Vandig 1%’s opløsning 1) Beige pulver,

51 -S-CR[CH N(CH )„]„ srtp- ca. 190°C

1 J 1 1 2) Vandig 1%'s opløsning i form af hydrochloridet _1) Beige pulver,

25 52 -SCCHJ.-N N-CH- snp. ca. 170°C

1 1 \ / J 2) Vandig 1%’s opløsning i form af hydrochloridet „ ς/ru ϊ -Nj pu 1} Beige pulver,

j3 -S(CE2)3-h 'N-CHy snp. ca. 190°C

^ ' 2) Vandig 10%'s opløsning i 30_____form af hydrochloridet ~s“CH2“?H~CH2"^CH3^ 3 1) Gkkerfarvet pulver,

I snp. ca. 150°C

CH3 2) Vandig 1%'s opløsning i __form af hydrochloridet 1) Gult pulver,

35 55 -S(CH9)„S0.H smp. > 280°C

11 J 2) Vandig 5%'s opløsning 103

DK 166151 B

ο

Referenceeksempel 56

Til en opløsning af 0,87 g 1-(2-mercapto-propyl)-4--methyl-piperazin i 50 ml ethanol tilsat 0,34 g natrium-ethylat sættes en opløsning af 5,2 g 55 -(4-methyl-phenyl)-5 -sulfonyloxymethylen-pristinamycin 1^ i 50 ml methylen-chlorid. Reaktionsblandingen omrøres i 16 timer ved en temperatur nær 20°C, hvorpå den fortyndes med 500 ml methy-lenchlorid og 100 ml destilleret vand. Efter omrøring ek-straheres den vandige fase 2 gange med i alt 50 ml methylen-10 chlorid. De organiske faser forenes, tørres over magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres derpå til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Remanensen renses ved flashchromatografi (elueringsmiddel: chloroform-methanol i volumenforholdet 97,5:2,5). Fraktionerne 33-80 for-15 enes og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Der fås således 1,25 g 55-[3-(4-methyl--1-piperazinyl)-2-propyl]-thiomethylen-pristinamycin IA i form af et beige pulver, som smelter nær 195°C.

NMR-Spektrum: 20 0,70 (dd, IH : 5β2) 1,25 (d, 3H : -CH-CH3) 2,30 (s, 3H : N-CH3)

CH CH

2,50 (m, 10H : -CH,~N^ * ^N-CH,) CH0CH,^ 25 3,40 (dd, IH : 5g2) 7,85 (dd bred, IH : l'Hg).

Der fås en vandig 10%'s opløsning af 56 -[3-(4-methyl--1-piperazinyl)-2-propyl]-thiomethylen-pristinamycin IA 30 (forbindelse AAN) i form af hydrochloridet med forbindelse AAN ................................. 0,03 g 0,1N saltsyre ................................... 0,3 ml 1-(2-mercapto-propyl)-4-methyl-piperazin fremstilles ved opvarmning ved 100°C i 16 timer af en blanding af 19 35 ml propylensulfid og 29 ml N-methylpiperazin. Der fås således 32 g af en farveløs olie, som destillerer ved 105°C under 1,3 kPa.

O

104

DK 166151 B

5 S - (4-methyl-phenyl) -sulfonyloxymethylen-pristinamycin Ij^ kan fås på den følgende måde;

Til en opløsning af 2,7 g 5£-hydroxymethylen-pristina-mycin 1^ i 30 ml methylenchlorid sættes ved en temperatur 5 nær -30°C 0,42 ml triethylamin og derpå 0,57 g p-toluensul-fonsyre-chlorid. Reaktionsblandingen omrøres dernæst i 2 timer ved en temperatur nær 20°C og koncentreres derpå til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Den fremkomne remanens renses ved flashchromatografi (eluerings-10 middel; methylenchlorid-methanol i volumenforholdet 96;4).

Efter koncentrering til tørhed af fraktionerne 4-6 under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C fås 2,2 g 5£-(4-methyl--phenyl)-sulfonyloxymethylen-pristinamycin i form af et hvidt pulver, som smelter ved 265°C.

15 NMR-Spektrum; 0,50 (dd, LH ; 5β2) 2,35 (s, 3H : -S02“<^~ > 20 3,30 (dd, IH : 5£2) 5,25 (d, IH : 5a) 5,30 (dd, IH ; 5£χ) 7,35-7,90 (system AB + m, 8H; 4£+4g +

Η H

25 -so2-yS·^ > 7,85 (dd, IH : l'Hg). - - 5S'-Hydroxymethylen-pristinamycin kan fremstilles på den følgende måde; 30 Til 420 ml 0,1N saltsyre sættes under omrøring 10,6 g 5S-dimethylaminomethylen-pristinamycin I . Den fremkomne opløsning omrøres dernæst i 3 timer ved en temperatur nær 20°C. Der tilsættes derpå dråbevis 30 ml af en mættet vandig natriumhydrogencarbonatopløsning, således at der opnås en 35 pH-værdi nær 4. Produktet, som udfældes, fraskilles ved filtrering og vaskes derpå 3 gange med i alt 30 ml destilleret vand. Efter tørring under formindsket tryk (2,7 kPa) 0 105

DK 166151 B

ved en temperatur nær 20°C fås 9,5 g 5F-hydroxymethylen--pristinamycin IA i form af et beige pulver. Denne forbindelse er af en tilstrækkelig kvalitet til at anvendes som sådan i de videre faser. Den kan dog renses på den følgende 5 måde: 9,5 g råt 5 S — hydroxymethylen-pristinamycin IA opløses i 50 ml ethylacetat. Den fremkomne opløsning hældes på 100 g silicagel indeholdt i en kolonne med en diameter på 2,8 cm. Der elueres først med 400 ml ethylacetat, og det til-10 svarende eluat fjernes. Der elueres dernæst med 1600 ml ethylacetat, og det tilsvarende eluat koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 30°C. Der fås således 6,3 g 5 S-hydroxymethylen-pristinamycin IA i form af hvide krystaller, som smelter ved 220°C.

15 NMR-Spektrum: 0,69 (dd, IH : 5β2) 2,43 (d, IH : 5β1) 3,40 (d, IH : 5ε 2) 4,0-4,2 (m, 3H : 4a + 5e1 + 5a) 20 8,15 (s, IH : =CH-0H) 11,63 (s bred, IH : =CH-0H).

Referenceeksempel 57

Idet der gås frem på samme måde som beskrevet i 25 referenceeksempel 56, fås 1 g 5 S - (3-dimethylamino-2-propyl)--thiomethylen-pristinamycin I i form af et gult pulver, som r\ ** smelter ved 172°C.

Der fås en vandig 5%'s opløsning af 5 S -(3-dimethyl-amino-2-propyl)-thiomethylen-pristinamycin IA i form af 30 hydrochloridet.

Referenceeksempel 58

Idet der gås frem på samme måde som beskrevet i referenceeksempel 56, fås 1,32 g 5 S-(5-diethylamino-2-35 -pentyl)-thiomethylen-pristinamycin IA i form af et beige pulver, som smelter nær 185°C.

Der fås en vandig 10%'s opløsning af 5 S -(5-diethyl-

O

106

DK 166151 B

amino-2-pentyl)-thiomethylen-pristinamycin i form af hydrochloridet.

Referenceeksempel 59 5 En opløsning af 7,6 g 5s'-[ (4-methyl-phenyl)-sulfonyl- oxy-methylen]-pristinamycin 1^ i 60 ml tetrahydrofuran afkøles til en temperatur nær -10°C. Hertil sættes langsomt, idet denne temperatur holdes, en opløsning af 0,65 2-dimethylamino-ethanol i 60 ml tetrahydrofuran tilsat 10 0,35 g af en 50%'s dispersion af natriumhydrid i mineral olie. Ved tilsætningens ophør får temperaturen lov til langsomt at stige til nær 20°C. Reaktionsblandingen omrøres i 24 timer ved denne temperatur, hvorpå den fortyndes med 500 ml methylenchlorid og vaskes 2 gange med 50 ml af en 15 mættet ammoniumchloridopløsning. Den organiske fase tørres over magnesiumsulfat, filtreres og koncentreres derpå til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 40°C. Den fremkomne remanens renses ved flashchromatografi (eluerings-middel: chloroform-methanol i volumenforholdet 95:5).

2o Fraktionerne 12-17 forenes og koncentreres til tørhed under formindsket tryk (2,7 kPa) ved 25°C. Der fås således 1,5 g 5S-(2-dimethylaraino-ethoxymethylen)-pristinamycin 1^ i form af et beige pulver, som smelter ved 160°C.

NMR-Spektrum: 25 0/65 (dd, IH : 5β2) 2,3 (s, 6H : -N(CH3)2) 2,65 (m, 2H : -CH2NC) 3,42 (dd, IH : 5ε2> 4,15 (t, 2H : -OCH2~) 30 5,15 (d, IH : 5£χ) 7,45 (under de aromatiske, IH : _>C=CHO-) 7,80 (dd, IH : l'H6).

Der fås en vandig 1%'s opløsning af 5S -(2-dimethyl-amino-ethoxymethylen)-pristinamycin 1^ (forbindelse AAQ) 35 i form af hydrochloridet med: forbindelse AAQ.............................. 0,03 g 0,IN saltsyre ................................0,3 ml destilleret vand..........................ad 3 ml 107

DK 166151 B

Den foreliggende opfindelse angår som nævnt ligeledes farmaceutiske præparater indeholdende en forbindelse med den almene formel (I) i fri form eller fortrinsvis i form af syreadditionssalt med en farmaceutisk acceptabel syre i 5 form af en kombination med kendte synergistiner eller fortrinsvis synergistiner med den almene formel (V). Denne kombination kan desuden indeholde enhver anden farmaceutisk forenelig forbindelse, som er indifferent eller fysiologisk aktiv. De her omhandlede præparater kan anvendes parenteralt, 10 oralt, rektalt eller topisk.

De sterile præparater til parenteral indgivelse kan fortrinsvis være vandige eller ikke-vandige opløsninger; suspensioner eller emulsioner. Som opløsningsmiddel eller bæremateriale kan der anvendes vand, propylenglycol, en 15 polyethylenglycol, vegetabilske olier, især olivenolie, injicerbare organiske estere, f.eks. ethyloleat eller andre passende organiske opløsningsmidler. Disse præparater kan ligeledes indeholde adjuvanser, især befugtningsmidler, isotoniseringsmidler, emulgeringsmidler, dispergeringsmid-20 ler og stabiliseringsmidler. Steriliseringen kan ske på forskellige måder, f.eks. ved aseptisk filtrering, under inkorporering i præparatet af steriliserende midler, ved bestråling eller ved opvarmning. De kan ligeledes fremstilles i form af sterile faste præparater, som kan opløses 25 på anvendelsestidspunktet i et injicerbart sterilt medium.

Som faste præparater til oral indgivelse kan der anvendes tabletter, piller, pulver eller granulat. I disse præparater blandes den her omhandlede, aktive forbindelse (eventuelt kombineret med en anden farmaceutisk forenelig 30 forbindelse) med ét eller flere indifferente fortyndingsmidler eller adjuvanser, såsom saccharose, lactose eller stivelse. Disse præparater kan ligeledes omfatte andre stoffer end fortyndingsmidler, f.eks. et smøremiddel, såsom magnesiurnstearat.

35 Som flydende præparater til oral indgivelse kan der anvendes farmaceutisk acceptable emulsioner; opløsninger, suspensioner, sirupper og eliksirer indeholdende indifferente

O

108

DK 166151 B

fortyndingsmidler, såsom vand eller paraffinolie. Disse præparater kan ligeledes omfatte andre stoffer end fortyndingsmidler, f.eks. befugtningsmidler, sødemidler eller aromastoffer.

5 Præparater til rektal indgivelse er suppositorier eller rektalkapsler, som foruden den aktive grundbestanddel indeholder strækkemidler, såsom kakaosmør, halvsyntetiske glycerider eller polyethylenglycoler.

Præparater til topisk indgivelse kan f.eks. være 10 cremer, salver, lotioner, øjenmidler, mundvand, næsedråber eller sprøjtevæsker.

Inden for humanterapi anvendes de her omhandlede forbindelser kombineret med kendte synergistiner eller fortrinsvis med synergistiner med den almene formel (V) især 15 ved behandling af infektioner, som stammer fra bakterier. Doserne afhænger af den ønskede virkning og af behandlingens varighed. For en voksen er de sædvanligvis på 500-2000 mg pr. dag ved parenteral indgivelse især ved intravenøs indgivelse med langsom infusion, idet dosisen af 20 synergistinet med den almene formel (V) selv er på 500-2000 mg pr. dag.

Lægen vil på sædvanlig måde bestemme den dosis, som han anser for den mest passende afhængigt af alder, vægt og alle de andre faktorer, som er særegne for individet, 25 som skal behandles.

Det følgende eksempel illustrerer de her omhandlede præparater.

Eksempel 30 Der fremstilles en injicerbar opløsning til infusion indeholdende 1 g/liter aktiv blanding med den følgende sammensætning: 26-(2-diethylamino-ethyl)-sulfinyl-pristinamycin II_. 0,6 g 5S-[2-(4-methyl-l-piperazinyl)-ethyl]-thiomethyl- 35 -pristinamycin ................................ 0,4 g 0,1N saltsyre ................................... 12,7 ml destilleret vand................................ad 1000 ml

Claims

1. Pristinamycin lig-derivater, kendetegnet véd, at de har den almene formel I O

5 JL -OH f 'di o o “· V° CH3 A JL ’Ύ T CH> . SAA —“

10 R“5 (0)n * n hvori R betyder - en 4- til 7-leddet nitrogenholdig heterocyclylgruppe, 15 som eventuelt indeholder 1 eller 2 andre heteroatomer valgt blandt nitrogen, oxygen eller svovl i form af sul-foxid eller sulfon, og som eventuelt er substitueret med en alkylgruppe, eller - en alkylkæde indeholdende 2-4 carbonatomer substitueret 20 med 1 eller 2 grupper valgt blandt phenyl, cycloalkyla- mino eller N-alkyl-N-cycloalkyl-amino indeholdende 3-6 ringled, alkylamino, dialkylamino eller dialkylcarbamoyl-oxy (idet alkyldelene af de 2 sidstnævnte grupper eventuelt sammen med nitrogenatomet, hvortil de er bundet, kan danne 25 en 4- til 7-leddet mættet eller umættet heterocyclisk gruppe, som eventuelt indeholder et andet heteroatom valgt blandt nitrogen, oxygen eller svovl i form af sulfoxid eller sulfon, og som eventuelt er substitueret med en alkylgruppe) eller substitueret med én eller to 4- til 7-30 -leddede nitrogenholdige heterocycliske grupper, som eventuelt indeholder 1 eller 2 andre heteroatomer valgt blandt nitrogen, oxygen eller svovl i form af sulfoxid eller sulfon, og som eventuelt er substitueret med en alkylgruppe, idet de nævnte heterocycliske grupper er bundet til den kæde, 35 som bærer dem, via et carbonatom, og idet mindst én af substituenterne båret af den ovennævnte alkylkæde er en nitrogenholdig substituent, som kan danne salte, eller en [l-methyl-2(S)-pyrrolidinyl]-methylgruppe, n er lig med 1 DK 166151 B o eller 2, og, medmindre andet er anført, de ovennævnte alkyl-grupper er ligekædede eller forgrenede og indeholder 1-10 carbonatomer, i deres isomere former eller deres blandinger, samt deres additionssalte med syrer.

2. Pristinamycin Ilg-derivater ifølge krav 1, ken detegnet ved, at R betyder - en 5- eller 6-leddet nitrogenholdig heterocycly1gruppe, som eventuelt er substitueret med en alkylgruppe, eller - en alkylkæde indeholdende 2-4 carbonatomer substitueret 10 med 1 eller 2 grupper valgt blandt phenyl, cycloalkylamino eller N-alkyl-N-cycloalkyl-amino indeholdende 3-6 ringled, alkylamino, dialkylamino eller dialkylcarbamoyloxy (idet alkyldelene af de to sidstnævnte grupper eventuelt sammen med nitrogenatomet, hvortil de er bundet, kan danne en -15 5- eller 6-leddet mættet eller umættet heterocyclisk gruppe, som eventuelt indeholder et andet heteroatom valgt blandt nitrogen, oxygen eller svovl i form af sulfoxid eller sulfon, og som eventuelt er substitueret med en alkylgruppe) eller substitueret med en 5- eller 6-leddet nitrogenholdig 20 heterocyclisk gruppe, som eventuelt indeholder et andet heteroatom valgt blandt nitrogen, oxygen eller svovl i form af sulfoxid eller sulfon, og som eventuelt er substitueret med en alkylgruppe, idet den nævnte heterocycliske gruppe er bundet til den kæde, som bærer den, via et carbonatom, 25 og idet mindst én af substituenterne båret af den ovennævnte alkylkæde er en nitrogenholdig substituent, som kan danne salte, n er lig med 1 eller 2, og, medmindre andet er anført, de ovennævnte alkylgrupper er ligekædede eller forgrenede og indeholder 1-10 carbonatomer, i deres isomere former eller 30 deres blandinger samt deres additionssalte med syrer.

3. Pristinamycin lig-derivater ifølge krav ^kendetegnet ved, at R betyder en alkylkæde indeholdende 2-4 carbonatomer substitueret med 1 eller 2 grupper valgt blandt phenyl, cycloalkylamino eller N-alkyl-N-cycloalkyl-35 -amino indeholdende 5 eller 6 ringled, alkylamino indeholdende 1-4 carbonatomer, dialkylamino (hvori alkyldelene indeholder 1-3 carbonatomer eller sammen med nitrogenatomet, o DK 166151 B hvortil de er bundet, danner en 5- eller 6-leddet mættet heterocyclisk gruppe), eller betyder en 5- eller 6-leddet nitrogenholdig heterocyclisk gruppe, som eventuelt er substitueret med en alkylgruppe med 1-4 carbonatomer, idet 5 mindst én af substituenterne båret af den ovennævnte alkyl- kæde er en nitrogenholdig substituent, som kan danne salte, oy mindst én af grupperne båret af denne kæde er i 1- eller 2-stilling, i deres isomere former eller deres blandinger samt deres additionssalte med syrer. 10 4. 26-(2-diethylamino-l-methyl-ethyl)-sulfinyl-pri- stinamycin ΙΙβ, dens isomere former og deres blandinger samt dens additionssalte med syrer ifølge krav 1. 5. 26-[(2R)-2-dimethylamino-butyl]-sulfinyl-pristina-mycin Hg/ dens isomere former og deres blandinger samt 15 dens additionssalte med syrer ifølge krav 1. 6. 26-(2-diethylamino-propyl)-sulfonyl-pristinamycin lig, dens isomere former og deres blandinger samt dens additionssalte med syrer ifølge krav 1. 7. 26- (2-diisopropylamino-ethyl)-sulfonyl-pristina- 20 mycin II_,, dens isomere former og deres blandinger samt £5 dens additionsalte med syrer ifølge krav 1.

8. Fremgangsmåde til fremstilling af pristinamycin Ilg-derivater ifølge krav 1, kendetegnet ved, at et pristinamycin lig-derivat (dets salt eller et beskyttet 25 derivat) med den almene formel II */r~xc „„ hvori R har den i krav 1 angivne betydning, idet når R indeholder 35 en svovlholdig heterocyclus, svovlatomet kan være i form af sulfid, sulfoxid eller sulfon, oxideres, hvorpå den fremkomne forbindelse eventuelt adskilles i dens isomere, og, i givet tilfælde, beskyttelsesgruppen fjernes, og den fremkomne for O DK 166151 B bindelse eventuelt omdannes til et additionssalt med en syre.

9. Fremgangsmåde ifølge krav 8,kendeteg-n e t ved, at der, når der ønskes dannet en forbindelse 5 ifølge krav 1, hvori n = 1, anvendes et oxidationsmiddel valgt blandt percarboxylsyrer eller persulfonsyrer eller uorganiske persyrer.

10. Fremgangsmåde ifølge krav 8, kendetegne t ved, at der, når der ønskes dannet en forbindelse 10 ifølge krav 1, hvori n = 2, anvendes et oxidationsmiddel valgt blandt selendioxid i nærværelse af hydrogenperoxid eller en persyre.

11. Fremgangsmåde til fremstilling af pristinamycin II -derivater ifølge krav 1, hvori n=2,kendeteg- 15 net ved, at et pristinamycin lig-derivat ifølge krav 1, hvori n = 1, oxideres, hvorpå den fremkomne forbindelse eventuelt adskilles i dens isomere, og den fremkomne forbindelse eventuelt omdannes til et additionssalt med en syre. 2Q 12. Farmaceutisk præparat, kendetegnet ved, at det mindst indeholder et derivat ifølge krav 1 i kombination med et kendt synergistin eller et opløseligt synergistin med den almene formel V ir 35 hvori Y betyder et hydrogenatom eller en dimethylaminogrup-pe, og 1)---betyder en enkelt binding, Z og betyder et hydro- O DK 166151 B genatom, og X betyder en gruppe med den almene formel R2 -N^ 5 hvori 2 3 - R betyder et hydrogenatom, og R betyder en hydroxy- eller alkylgruppe, som eventuelt er substitueret med en 10 carboxy-, alkyloxycarbonyl-, hydroxy-, alkylamino- eller dialkylaminogruppe, hvoraf alkylgrupperne sammen med nitrogenatomet, hvortil de er bundet, kan danne en 4- til 7-leddet heterocyclisk gruppe valgt blandt azetidinyl, pyrrolidinyl, piperidinyl, piperazinyl, N-alkylpiperazi- 3 15 nyl eller azepinyl, eller R betyder en cycloalkylgruppe med 3-7 carbonatomer eller en 4- til 7-leddet mættet heterocyclisk gruppe valgt blandt azetidin, pyrrolidin, piperidin og azepin, idet disse heterocycliske grupper eventuelt kan være substitueret på nitrogenatomet med en 20 alkylgruppe, eller 2 3 - R betyder en formyl- eller alkylcarbonylgruppe, og R betyder en alkylgruppe substitueret med en carboxy-, alkylamino- eller dialkylaminogruppe, hvor alkylgrupperne sammen med nitrogenatomet, hvortil de er bundet, kan danne 25 en 4- til 7-leddet heterocyclisk gruppe valgt blandt azetidinyl, pyrrolidinyl, piperidinyl, piperazinyl, N-alkyl- 3 . piperazinyl eller azepinyl, eller R betyder en 4- til 7-leddet heterocyclisk gruppe valgt blandt azetidin, pyrrolidin, piperidin og azepin, idet disse heterocycliske 30 grupper kan være substitueret på nitrogenatomet med en alkylgruppe, eller 2 3 - R og R , som er ens eller forskellige, betyder en alkylgruppe, som eventuelt er substitueret med en carboxy-, alkyloxycarbonyl-, hydroxy-, alkylamino- eller dialkyla- 35 minogruppe, hvor alkylgrupperne sammen med nitrogenatomet, hvortil de er bundet, eventuelt danner en 4- til 7-leddet heterocyclisk gruppe valgt blandt azetidinyl, pyrrolidinyl, O DK 166151 B piperidinyl, piperazinyl, N-alkylpiperazinyl eller aze- pinyl, eller 2 3 - R og R sammen med nitrogenatomet, hvortil de er knyttet, danner en 4- til 7-leddet heterocyclisk gruppe valgt blandt 5 azetidin, pyrrolidin, piperidin, morpholin og piperazin, som eventuelt er substitueret med en alkylgruppe, eller 2) --- betyder en dobbelt binding, X betyder et oxygen atom, og Z betyder en gruppe med den almene formel 4

10 R -CH^ XR5 hvori 15 4 15 a) R og R hver især betyder et hydrogenatom, og R betyder en 3-pyrrolidinyl-thio- eller 3- eller 4-piperidyl-thio- gruppe (idet disse grupper eventuelt er substitueret med 4 en alkylgruppe), eller R betyder en alkylthiogruppe substitueret med én eller to hydroxysulfonyl-, alkylamino-, 20 dialkylaminogrupper (eventuelt substitueret med en mercapto- eller dialkylaminogruppe) eller med én eller to cycliske grupper valgt blandt piperazino (eventuelt substitueret med en alkyl- eller raercaptoalkylgruppe), morpholino, thiomor-pholino, piperidino, 1-pyrrolidinyl, 2-, 3- eller 4-piperi-25 dyl og 2- eller 3-pyrrolidinyl (idet de to sidstnævnte cycliske grupper eventuelt er substitueret på nitrogenatomet med en alkylgruppe), eller b) R^ og R^ tilsammen danner en valensbinding, og betyder en 3-pyrrolidinyl-amino-, 3- eller 4-piperidyl-amino-, 3-30 -pyrrolidinyl-oxy-, 3- eller 4-piperidyl-oxy-, 3-pyrrolidinyl-thio-, 3- eller 4-piperidyl-thio-gruppe (idet disse grupper eventuelt er substitueret på gruppens nitrogenatom med en alkylgruppe), eller betyder en alkylamino-, alkyl-oxy- eller alkylthiogruppe substitueret med én eller to 35 hydroxysulfonyl-, alkylamino-, dialkylamino- (eventuelt substitueret med en dialkylaminogruppe), trialkylammonium-eller 4- eller 5-imidazolyl-grupper eller med én eller to grupper valgt blandt piperazino (eventuelt substitueret med DK 166151 B O en alkylgruppe eller mercaptoalkylgruppe) , morpholi.no, thio-morpholino, piperidino, 1-pyrrolidinyl, 2-, 3- eller 4-pi-peridyl og 2- eller 3-pyrrolidinyl (idet de to sidstnævnte grupper eventuelt er substitueret på nitrogenatornet med 5 en alkylgruppe), idet alkylgrupperne og alkyldelene, som vedrører de ovenfor definerede symboler, indeholder 1-5 carbonatomer og er ligekædede eller forgrenede, eventuelt i form af en af deres isomere eller deres blandinger, og eventuelt i form af additionssalt med en syre, metalsalt 10 eller additionssalt med en nitrogenholdig organisk base, idet det nævnte præparat ligeledes kan indeholde andre farmaceutisk acceptable adjuvanser. 15 20 25 30 35