FI83326C - Foerfarande foer framstaellning av nya s-o-oxider av terapeutiskt anvaendbara pristinamysin iib. - Google Patents

Description

1 83326

Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten pristinamysii-ni IIB:n uusien S-O-oksidien valmistamiseksi

Keksinnön kohteena on menetelmä terapeuttisesti 5 käyttökelpoisten pristinamysiini IIB:n uusien S-O-oksidien valmistamiseksi, joiden yleinen kaava on, 0 CH3. .

10 \ 0 CH7 \ S,0

AA .A 1 Y

'h3 (°>n 15 jossa R on alkyylillä substituoitu 4-piperidinyyliradi-kaali, suoraketjuinen tai haarautunut, 2-4 hiiliatomia sisältävä alkyyliradikaali, joka on substituoitu yhdellä tai kahdella sykloalkyyliaminoryhmällä, jonka sykloalkyy-liosa on 5- tai 6-jäseninen, N-alkyyli-N-sykloalkyyliami-20 noryhmällä, alkyyliamonoryhmällä tai dialkyyliamonoryh- mällä, jonka alkyyliosat voivat muodostaa yhdessä sen typpiatomin kanssa, johon ne ovat sitoutuneet, heterosyk-lisen ryhmän, joka on valittu seuraavien joukosta: 1-pyr-rolidinyyli, piperidino, morfolino tai imidatsolyyli, tai 25 R on 1-(4-metyylipiperatsinyyli)-2-karbonyylioksietyyli- tai l-metyyli-2(S)-pyrrodinyylimetyyliradikaali tai R on substituoitu yhdellä fenyyliryhmällä ja yhdellä radikaalilla, joka on valittu yllä lueteltujen radikaalien joukosta, ja n on 1 tai 2, jolloin alkyyliosat, ellei toi-30 sin mainita, ovat suoraketjuisia tai haarautuneita ja sisältävät 1-10 hiiliatomia, isomeerien tai isomeerien seoksen muodossa, sekä niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien happoadditio-suolojen valmistamiseksi.

35 Julkaisussa J. PEUD'HOMME et Coll., Bull.Soc.Chim.,

Fr., 2, 585 (1968) on kuvattu luonnon pristinamysiinin komponenttien eristäminen ja karakterisointi.

2 83326

Keksinnön mukaan yleisen kaavan (I) mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa hapettamalla yleisen kaavan (II)

5 I

CH3 A^^fY0H

ch3 r-sr\y^ 1-° mukainen pristinamysiini IIB:n johdannainen, sen suola tai suojattu johdannainen, jossa kaavassa R on aiemmin 15 määritelty ryhmä, jolloin kun R sisältää rikkipitoisen heterosyklisen renkaan, rikkiatomi voi olla sulfidi-, sulfoksidi- tai sulfonimuodossa.

Reaktio tapahtuu yleensä hapetusreagenssin avulla, joka mahdollisesti on valmistettu in situ, vedessä tai 20 orgaanisessa liuottimessa, edullisesti klooratussa liuot- timessa (esimerkiksi metyleenikloridissa 1,2-dikloori-etaanissa, kloroformissa) tai alkoholissa (esimerkiksi metanolissa, t-butanolissa) tai näiden liuottimien seoksessa. Reaktion annetaan mahdollisesti tapahtua typpiat-25 mosfäärissä.

Yleisen kaavan (I) mukaisen yhdisteen valmistamiseen, jossa yhdisteessä n = 1, soveltuvien hapetusrea-genssien joukosta voidaan mainita orgaaniset perhapot: perkarboksyyli- tai persulfonihapot (esimerkiksi peretik-30 ka-, pertrifluorietikka-, permuurahais-, perbentsoe-, m-klooriperbentsoe-, p-nitrobentsoe-, permaleiini-, mono-perftaali-, perkamferi-, tai p-tolueenipersulfonihappo) tai epäorgaaniset perhapot (esimerkiksi perjodi- tai per-rikkihappo).

35 Kun halutaan valmistaa yleisen kaavan (I) mukainen 3 83326 yhdiste, jossa n * 2, on edullista antaa yleisen kaavan (II) mukaisen yhdisteen suolan reagoida seleenioksidin ja vetyperoksidin tai perhapon, esimerkiksi jonkin yllämainituista, varsinkin pertrifluorietikka- tai m-klooriper- 5 bentsoehapon läsnäollessa.

Kun käytetään yleisen kaavan (II) mukaisen pristi-namysiini II„:n johdannaista suolamuodossaan, käytetään orgaanisten tai epäorgaanisten happojen, edullisesti tri-fluorietikka-, viini-, etikka-, bentsoetia kloorivetyha-10 pon kanssa muodostettuja suoloja.

Kun yleisen kaavan (II) mukaista yhdistettä käytetään suolamuodossaan tai suojattuna johdannaisena, edullinen reaktiolämpötila on välillä -40 ja 50 "C.

Kun halutaan valmistaa yleisen kaavan (I) mukainen 15 yhdiste, jossa n * 1, on samoin edullista käyttää lähtöaineena yleisen kaavan (II) mukaista pristinamysiini IIB:n johdannaista alkalisen bikarbonaatin (esimerkiksi natriumbikarbonaatin) läsnäollessa -60 ja -40 °C:n välillä olevassa lämpötilassa.

20 Kun R sisältää alkyyliamino- tai sykloalkyyliami- nosubstituentin, on samoin mahdollista käyttää yleisen kaavan (II) mukaisen yhdisteen suojattua johdannaista, joka voi olla suojattu millä tahansa amiinisuojaryhmällä, jonka liittäminen ja poistaminen eivät vaikuta molekyylin 25 muuhun osaan; on edullista käyttää trifluoriasetyyliryh-mää, joka voidaan poistaa reaktion jälkeen käsittelemällä johdannaista alkaalisen bikarbonaatin (natrium- tai ka-liumbikarbonaatin) vesiluoksella.

Yleisen kaavan (II) mukaisia yhdisteitä voidaan 30 valmistaa saattamalla yhdiste, jonka yleinen kaava on (III) R-SH (III) jossa R tarkoittaa samaa kuin edellä, reagoimaan pristinamysiini ΙΙΛ:η kanssa, jonka kaava on (IV) 35 4 83326 o CH, ...... l'·' f'" CH3 Il-o 10

Reaktio suoritetaan yleensä orgaanisessa liuot-timessa esimerkiksi alkoholissa, kuten metanolissa tai etanolissa tai klooratussa liuottimessa, kuten metyleeni-kloridissa, 1,2-dikloorietaanissa tai kloroformissa, tai 15 näiden liuottimien seoksessa (esimerkiksi seoksessa mety-leenikloridi-metanoli) lämpötilan ollessa välillä -30 ja 50 °C.

Joskus saattaa olla edullista suorittaa reaktio tertiäärisen amiinin, esimerkiksi trietyyliamiinin tai 20 etanoliamiinin (esimerkiksi dimetyylietanoliamiinin) läsnäollessa.

Asiantuntijalle on selvää, että silloin kun R tarkoittaa radikaalia, joka sisältää sekundäärisen amiini-ryhmän, joka voi häiritä reaktiota, tämä ryhmä täytyy 25 suojata ennakolta, ennen kuin yleisen kaavan (III) mukaisen yhdisteen annetaan reagoida kaavan (IV) mukaisen yhdisteen kanssa. Tähän tarkoitukseen voidaan käyttää mitä tahansa tavanomaista menetelmää, jolla sekundäärinen amiiniryhmä saadaan suljetyksi labiiliksi radikaaliksi.

30 On erityisen edullista käyttää sulkevana radikaalina tri-fluoriasetyyliradikaalia, joka voidaan poistaa edellä kuvattuun tapaan. Tällöin ei kuitenkaan ole aivan välttämätöntä poistaa suojaryhmää, vaan suojattua johdannaista voidaan käyttää välittömästi hapetusreaktiossa.

35 Keksinnön mukaan yleisen kaavan (I) mukaiset yh-

II

disteet, joissa n on 2, voidaan valmistaa samoin hapet tamalla yleisen kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa n on 1.

5 83326

Reaktio suoritetaan edellä kuvattua vastaavissa 5 olosuhteissa, jolloin saadaan yleisen kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa n = 2, lähtöaineena olleesta yleisen kaavan (II) mukaisesta pristinamysiini IIB:n johdannaisesta.

Uudet yleisen kaavan (I) mukaiset yhdisteet voidaan puhdistaa tunnetuin menetelmin, esimerkiksi kiteytit) tämällä, kromatografisesti tai peräkkäisin happamessa ja emäksisessä liuoksessa suoritetuin uutoin. Asiantuntijalle, joka tuntee synergistisesti vaikuttavien aineiden herkkyyden alkalisessa liuoksessa, on selvää, että "emäksisellä liuoksella" tarkoitetaan kantayhdisteen vapautta-15 miseen hapon kanssa muodostamastaan suolasta juuri riittävän alkalista liuosta, toisin sanoen liuosta, jonka pH ei ole yli 8.

On tunnettua, että fermentaatioteitse valmistetut synergistisesti vaikuttavat aineet ovat tuotteita, joita 20 lääkärit erityisesti tavoittelevat monien gram-positii-visten (stafylokokit, streptokokit, pneumokokit, entero-kokit) ja gram-negatiivisten (Hemofilus-suvun lajit, gonokokit, meningokokit) bakteerien aiheuttamien sairauksien hoitoon. Nämä tuotteet ovat kuitenkin sikäli hanka-25 lia, että ne ovat veteen liukenemattomia eikä niitä voida siten antaa muuten kuin suun kautta, yleensä lääkehelmi-nä, -rakeina tai tabletteina. Tämän liukenemattomuuden takia on mahdotonta käyttää tähän asti tunnettuja synergistisesti vaikuttavia aineita silloin, kun potilas ei 30 pysty nielemään; näin on asian laita varsinkin lapsipotilaita hoidettaessa ja potilaita elvytettäessä, vaikka näiden tuotteiden aktiivisuusspektrin ansiosta saataisiin arvokas vaikutus useissa tapauksissa, esimerkiksi tajuttomuuteen johtaneissa verenmyrkytystiloissa.

35 Keksinnön mukaisilla uusilla yhdisteillä on se 6 83326 merkittävä etu, että niitä voidaan liuottaa veteen, tavallisesti suoloina, terapeuttisesti käyttökelpoisina annoksina ja voimistaa yhteisvaikutuksen avulla bakteerien vastaista vaikutusta, joka on pristinamysiini IA:lla, 5 virginiamysiini S:llä tai liukoisilla synergistisesti vaikuttavilla aineilla, joiden yleinen kaava on: 0^/N- y - £>6' jossa Y tarkoittaa vetyatomia tai dimetyyliaminoradikaa-lia ja 20 1)----- tarkoittaa yksinkertaista sidosta, Z ja Rj tar koittavat vetyatomia ja X on radikaali, jonka kaava on .r2 -N (VI) R3 25 jossa: joko R2 on vetyatomi ja R3 on hydroksi- tai alkyy-liradikaali, joka on mahdollisesti substituoitu karbok-si-, alkyylioksikarbonyyli-, hydroksi-, alkyyliamino- tai dialkyyliaminoradikaalilla, joista alkyyliradikaalit voi- 30 vat muodostaa typpiatomin kanssa, johon ne ovat liittyneet, 4-7 rengasatomia sisältävän heterosyklisen renkaan, joka on valittu seuraavasta joukosta: atsetidinyy-li, pyrrolidinyyli, piperidinyyli, piperatsinyyli, N-al-kyylipiperatsinyyli tai atsepinyyli, tai R3 on sykloal- 35 kyyliradikaali, jossa on 3 - 7 hiiliatomia tai tyydytet- 7 83326 tyä heterosyklistä rengasta, jossa on 4 - 7 rengasatomia ja joka on valittu seuraavien rangasrakenteiden joukosta: atsetidiini, pyrrolidiini, piperidiini ja atsepiini, samalla kun näiden heterosyklisten renkaiden typpiatomiin 5 voi mahdollisesti olla liittynyt alkyyliradikaalisubsti-tuentti, tai R2 on formyyli- tai alkyylikarbonyyliradikaali ja R3 on alkyyliradikaali, joka on substituoitu karboksi-alkyyliamino- tai dialkyyliaminoradikaalilla, joista al-10 kyyliradikaalit voivat muodostaa typpiatomin kanssa, johon ne ovat liittyneet, 4-7 rengasatomia sisältävän he-terosyklisen renkaan, joka on valittu seuraaviasta joukosta: atsetidinyyli, pyrrolidinyyli, piperidinyyli, pi-peratsinyyli, N-alkoyylipiperatsinyyli tai atsepinyyli, 15 tai R3 on heterosyklinen rengas, jossa on 4 - 7 rengas-atomia ja joka on valittu seuraavien rengasrakenteiden joukosta: atsetidiini, pyrrolidiini, piperidiini ja atsepiini, samalla kun näiden heterosyklisten renkaiden typpiatomiin voi olla liittynyt alkyyliradikaalisubsti-20 tuentti, tai R2 ja R3, jotka voivat olla samoja tai erilaisia, tarkoittavat alkoyyliradikaalia, joka on mahdollisesti substituoitu karboksi-, alkyylioksikarbonyyli-, hydroksialkyyliamino- tai dialkyyliaminoradikaalilla, 25 joista alkyyliradikaalit muodostavat mahdollisesti typpi atomin kanssa, johon ne ovat liittyneet, 4-7 rengasatomia sisältävän heterosyklisen renkaan, joka on valittu seuraavasta joukosta: atsetidinyyli, pyrrolidinyyli, piperidinyyli, piperatsinyyli, N-alkoyylipiperatsinyyli tai 30 atsepinyyli, tai R2 tai R3 muodostavat yhdessä typpiatomin kanssa, johon ne ovat liittyneet, 4-7 rengasatomia sisältävän heterosyklisen renkaan, joka on valittu seuraavien rengasrakenteiden joukosta: atsetidiini, pyrrolidii-35 ni, piperidiini, morfoliini ja piperatsiini ja joka on e 83326 mahdollisesti substituoitu alkyyliradikaalilla, 2) tai ----- on kaksoissidos, X on happiatomi ja Z on ra dikaali, jonka kaava on ^R4

c -CM

\r5 (VII) joka on määritelty seuraavasti: a) R5 on vetyatomi ja R4 on 3-tiopyrrolidinyyli tai 3- tai 4-tiopiperidyyli (näihin radikaaleihin voi 10 mahdollisesti olla liittynyt alkyyliradikaalisubstituent-ti) tai R4 on tioalkyyliradikaali, joka on substituoitu yhdellä tai kahdella hydroksisulfonyyli-, alkyyliamino-, dialkoyyliaminoradikaalilla (mahdollisesti substituoitu merkapto- tai dialkyyllaminoradikaalilla) tai yhdellä tai 15 kahdella seuraavasta joukosta: piperatsino (mahdollisesti substituoitu alkyyli- tai merkaptoalkyyliradikaalilla), morfolino, tiomorfolino, piperidino, pyrrolidino, 1-pyr-rolidinyyli, 2-, 3- tai 4-piperidyyli ja 2- tai 3-pyr-rolidinyyli (näiden kahden viimeksimainitun renkaan typ-20 piatomiin on mahdollisesti liitetty alkyyliradikaalisubs-tituentti) valitulla renkaalla, b) tai R: tai R5 muodostavat yhdessä valensisidok-sen ja R4 on 3-aminopyrrolidinyyli-, 3- tai 4-aminopipe-ridyyli-, 3-oksipyrrolidinyyli-, 3- tai 4-oksipiperidyy- 25 li-, 3-tiopyrrolidinyyli, 3- tai 4-tiopiperidyyliradikaa-li (näiden radikaalien typpiatomiin on mahdollisesti liittynyt alkyyliradikaali), tai R4 on alkyyliamino-, al-kyylioksi- tai alkyylitioradikaali, jotka on substituoitu yhdellä tai kahdella hydroksisulfonyyli-, alkyyliamino-, 30 dialkyyliamino- (mahdollisesti substituoitu dialkyyliami- noradikaalilla), trialkyyliammonium- tai 4- tai 5-imidat-solyyliradikaalilla tai yhdellä tai kahdella renkaalla, jotka on valittu seuraavasta joukosta: piperatsino (mahdollisesti substituoitu alkyyli- tai merkaptoalkyyliradi-35 kaalilla), morfolino, tiomorfolino, piperidino, 1-pyr- 9 83326 rolidinyyli, 2-, 3- tai 4-piperidyyli ja 2- tai 3-pyr-rolidinyyli (näiden kahden viimeksimainitun renkaan typ-piatomiin on mahdollisesti liittynyt alkyyliradikaali-substituentti), samalla kun on selvää, että alkyyliradi-5 kaalit ja alkyyliosat, jotka vastaavat yleisen kaavan (V) symboleita, sisältävät 1-5 hiiliatomia ja ovat suora-ketjuisia tai haaroittuneita.

Eräillä yleisen kaavan (V) mukaisilla synergis-tisesti vaikuttavien aineiden johdannaisilla voi olla 10 isomeerimuotoja. On selvää, että nämä isomeerimuodot samoin kuin niiden seokset voidaan edullisesti yhdistää yleisen kaavan (I) mukaisiin tuotteisiin.

Yleisen kaavan (I) ja/tai yleisen kaavan (V) mukaisten yhdisteiden isomeerit voidaan tarvittaessa erot-15 taa kromatograafista tai suurtehonestekromatograafista menetemää käyttäen.

Keksinnön mukaisilla pristinamysiini IIB:n uusilla johdannaisilla ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävillä suoloilla on erityisen mielenkiintoisia bakteerienvas-20 täisiä ominaisuuksia in vitro ja in vivo.

In vitro, yleisen kaavan (I) mukaiset yhdisteet ovat osoittautuneet aktiivisiksi lajia Staphylococcus aureus Smith vastaan 4 - 100 pg/cm3 olevina annoksina; lisäksi niillä on synergistinen vaikutus pristinamysiini 25 lA:n bakteerienvastaiseen toimintaan 0,1 - 10 pg/cm3 ole vina annoksina.

In vivo, keksinnön mukaiset yhdisteet ovat osoittautuneet aktiivisiksi lajilla Staphylococcus aureus Smith hiiren aiheutettuja kokelliisia infektioita vastaan 30 välillä 40 mg/kg - yli 300 mg/kg olevina ihonalaisesti annettuina annoksina. Niillä on synergistinen bakteerien-vastainen vaikutus ihonalaisesti annettuina, 8 - 200 mg/kg olevina annoksina, kun ne yhdistetään pristinamysiini IA:han 10 - 90 % - 90 - 10 % vaihtelevissa suhteis-35 sa.

10 83326

Yleisen kaavan (I) mukaisten yhdisteiden akuutti toksisuus, ilmaistuna niiden LD50-arvon avulla, on yleensä 300 mg/kg - yli 1 g/kg, kun koe-eläimenä on hiiri ja antotapa on ihonalainen.

5 Terapeuttiset vertailukokeet

Bakteerien kasvua ehkäisevä aktiviteetti in vitro Petrin maljoihin, jotka sisälsivät tunnetun määrän (20 cm3) sopivaa kasvualustaa (Muller-Hinton-agar), lisättiin tutkittavaa ainetta 1/10 tästä tilavuudesta geo-10 metrisen sarjan laimennuksena (suhde = 2). Maljat siir-rostettiin monipisteinokulaattorilla, jolloin saatiin täplä mikro-organismin 104 pesäkkeen muodostavia yksiköitä sen jälkeen kun oli inkuboitu 18 tuntia 37 °C:ssa ja laimennettu 1/100 samalla väliaineella. Siirrostuksen 15 jälkeen maljoja inkuboitiin 24 tuntia 37 °C:ssa. Tulokset esitetään pienimpänä pitoisuutena (CMI), jolla mikro-organismin kehittyminen estyy.

Aktiviteetti vatsaontelonsisäisiä tulehduksia vastaan hiirellä.

20 Hiirelle annettiin 0,5 cm3:n vatsaontelonsisäinen ruiske tutkittavan mikro-organismin 18 tuntia vanhalla sopivasti sekoitetulla viljelmällä, joka oli "Brain Heart Infusion" elatusalustalla (Difco), joka oli sopivasti laimennettu 5 %:lla sian musiinia. Siirrostus aiheutti 25 kontrollieläimien kuoleman 24 - 48 tunnissa. Tutkittavaa yhdistettä annettiin hiirille siirrostuspäivänä subkutaa-nisesti kaksi kertaa 5 tunnin väliajoin, jolloin ensimmäinen annos annettiin yksi tunti sen jälkeen kun oli siirrostettu mikro-organismilla. Yksittäisannos oli 50 30 cm3/kg. Tulokset esitetään arvona CD50, joka on annos, jolla 50 % koe-eläimistä pysyy elossa kokeen ajan (8 vuorokautta). Edellä kuvattujen kokeiden tulokset on esitetty seuraavassa taulukossa.

35 li 11 83326

Esimerkin Aktiviteetti in Aktiviteetti in vitro vivo nrc! CNI S. aureus Smith DC50 S. aureus Smith ____(me/kg)_ 1 4 65 8 80 2 4 85 3 4 60 4 70 4 4 90 5 4 22 6 15 140 7 4 44 8 90 8 4 44 9 4 130 10 4 85 11 8 170 12 4 65 4 85 13 4 70 2 70 14 60 120 15 15 200 16 4 40 4 120 17 8 >150 18 6 >300 8 > 300 19 8 95 20 4 65 12 83326

Esimerkin Aktiviteetti in Aktiviteetti in vitro vivo nro CMI S. aureus Smith DCcjo S. aureus Smith __(f1 g Ani)__(mg/kg)_ 21 30 >300 60 >300 22 4 70 4 90 23 30 > 150 24 8 120 25 8 42

Vertailu: 4 200

Pristina- mysiini 11^

Liukoisuuden vertailu

Esimerkin nro Liukoisuus 1-10 20 11 10 12 - 24 20 25 10 26 20 |

Vertailuyhdiste ! j Pristinamysiini 11^_ 0,0001 ;

Lsimerkkien 1-26 yhdisteiden liukoisuus määritettiin hydroklorideista *3 83326

Allamainitut yleisen kaavan (I) mukaiset pristina-mysiini IIB:n johdannaiset ovat aivan erityisen kiinnostavia:

(2-dietyyliamino-l-metyylietyyli)-26-sulfinyylipristina-5 mysiini IIB

[2-dimetyyliamino(2R)butyyli]-26-sulfinyylipristinamy-siini IIB

(2-dietyyliaminopropyyli)-26-sulfinyylipristinamysiini II.

10 (2-di-isopropyyliaminoetyyli)-26-sulfinyylipristinamysii ni IIB.

Terapeuttisiin tarkoituksiin keksinnön mukaisia uusia yhdisteitä voidaan käyttää sellaisinaan toisin sanoen perusmuodossa yhdessä jo tunnettujen synergistisesti 15 vaikuttavien aineiden kanssa, mutta koska keksinnön mu kaisten yhdisteiden pääasiallinen etu on se, että ne on mahdollista liuottaa veteen, on erityisen edullista käyttää niitä farmaseuttisesti hyväksyttävinä suoloina yhdessä tunnettujen tai yleisen kaavan (V) mukaisten syner-20 gistisesti vaikuttavien aineiden kanssa, jotka on liuotettu farmaseuttisesti hyväksyttävinä suoloina tai mahdollisesti perusmuodossa silloin, kun yhdisteen liukoisuus on riittävän suuri, jotta saatu liuos sisältää ainakin terapeuttisesti vaikuttavan annoksen yhdistettä.

25 Sekä yleisen kaavan (I) että yleisen kaavan (V) mukaisten tuotteiden farmaseuttisesti hyväksyttävinä suoloina voidaan mainita epäorgaanisten happojen kanssa muodostetut additiosuolat, kuten esimerkiksi hydrokloridit, hydrobromidit, sulfaatit, nitraatit, fosfaatit tai orgaa-30 nisten happojen kanssa muodostetut happoadditiosuolat, kuten esimerkiksi astaatit, propionaatit, sukkinaatit, maleinaatit, fumaraatit, metaanisulfonaatit, p-tolueeni-sulfonaatit, isetionaatit tai näiden yhdisteiden substituutio johdannaiset . Farmaseuttisesti hyväksyttävinä suo- 14 83326 loina voidaan vielä mainita alkaalimetallien kanssa muodostetut suolat (kuten esimerkiksi natrium- ja kaliumsuo-lat), maa-alkaalimetallien kanssa muodostetut suolat (kuten esimerkiksi magnesiumsuola), ammoniumsuola ja typpeä 5 sisältävien orgaanisten emästen (etanoliamiini, dietano- liamiini, trimetyyliamiini, trietyyliamiini, metyyliamii-ni, metyyliamiini, propyyliamiini, di-isopropyyliamiini, NN-dimetyylietanoliamiini, bentsyyliamiini, dibentsyyli-amiini, disykloheksyylibentsyyliamiini, N-bentsyyli-fi-fe-10 netyyliamiini, NN'-dibentsyylietylenidiamiini, bentshyd- ryyliamiini, arginiini, leusiini, lysiini tai N-metyyli-glukamiini) kanssa muodostetut additiosuolat.

Yleisen kaavan (V) mukaisten tuotteiden, joissa Z edustaa yleisen kaavan (VII) mukaista radikaalia, jossa 15 R4 edustaa trialkyyliammoniumradikaalia, farmaseuttisesti hyväksyttävinä suoloina voidaan mainita yllälueteltuja anioneja vastaavat kvartääriset ammoniumsuolat.

Seuraavat ei-rajoittavina esitetyt esimerkit osoittavat, miten keksintö voidaan toteuttaa käytännössä. 20 Näissä esimerkeissä ja niitä seuraavissa viite-esimer keissä selitetyt tuotteiden NMR-spektrit esittävät ne yleiset ominaisuudet, jotka ovat yhteisiä kaikille yleisen kaavan (I) tai yleisen kaavan (V) mukaisille tuotteille ja erityisominaisuudet, jotka ovat ominaisia kul-25 lekin tuotteelle substituenteista riippuen. Esimerkeissä tai niitä seuraavissa viite-esimerkeissä ei ole mainittu kuin vaihtuvista radikaaleista johtuvat erityisominaisuudet. Yleisen kaavan (I) mukaisten tuotteiden kaikki protonit on merkitty seuraavassa kaavassa esitetyn numeroin-30 nin mukaisesti: 35 15 83326 o 5 J‘CH, Js A CH33 ^0 (mi) r 0 h - r-6 | 29 O2 1 y "'' N22 — |J ηΓΐ8 CH, Ojz° y 24 £;-015 31s K ^ ” 10 -i

Yleisen kaavan (V) mukaisten synergistisesti vaikuttavien aineiden kaikki protonit on merkitty yleisessä kaavassa (XXIII) esitetyn numeroinnin mukaisesti; tämä numerointi 15 on J.O. Anteunisin et ai. suosittelema [Eur. J. Biochem., 58, 259 (1975)].

3v 4CH3 35 r >3£ CH. 2S=Jf 20 \ Γ 1 3 ,R /\ /Τ'* (Γ [ία \ ff :»hhn «ch,' o H V ><B1 25 (XXIII) Λ NH1NH 0

itN

H

30 :”h6 l’H5 35 16 83326

Ellei erikseen ole mainittu, kaikki spektrit on ajettu 250 MHz:n taajuudella deuteroklorofonnissa; kemialliset siirtymät on ilmaistu tetrametyylisilaanin signaaliin verrattuina ppm-arvoina. Tässä yhteydessä on 5 käytetty seuraavia lyhenteitä: s = singletti d = dupletti t = tripletti mt = multipletti 10 m = massiivinen piikki dd = kaksoisdupletti dt = kaksoistripletti ddd - kolmoisdupletti dddd = nelinkertainen dupletti 15 On selvää, että eri isomeerit on luokiteltu mieli valtaisesti NMRrssä havaittujen kemiallisten siirtymien mukaisesti.

Yleisen kaavan I mukaisten tuotteiden, joissa n=1, isomeeri A^:ksi ja isomeeri Akiksi nimitetään iso-20 meerejä, joilla on seuraavat ominaispiirteet: noin 1,7 (s, -CH ^ 33:ssa); noin 3,8 (s, 17:ssä); <5 (d, -H2j) , isomeeri A^ tai >5 (d, -1^7) isomeeri A1 ; noin 5,50 (suuri d, -H^); noin 6,20 (d, -H^); noin 6,6 ( ^NH 8:ssa); >8 (s, -I^q) · Yleisen kaavan 25 (I) mukaisten tuotteiden, joissa n=1, isomeeri B^:ksi ja isomeeri B2:ksi nimitetään isomeerejä, joilla on seuraavat ominaispiirteet: noin 1,5 (s, -CH^ 33:ssa); noin 3,7 ja 3,9 (2d,^CH2 17:ssä); noin 4,8 (mt, -H^); <5 (d, — 1127) , ison,ccri 132 tai >5 (d, “1127)» isomeeri 50 B^ ; noin 5,70 (AB rajoittaa, ja -H^); noin 7,7 ( ✓NH 8:ssa); noin 7,8 (s, -H2q).

Yleisen kaavan (II) mukaisen tuotteen isomeeri A:ksi nimitetään isomeeriä, jolla on yleisen kaavan (1) mukaisLen tuotteiden isomeerien A^ ja Ä2 yllä esi-55 tettyjen NMR ominaispiirteiden kanssa identtiset ominais-

II

17 83326 piirteet, samalla kun on selvää, että asemassa 27 olevan vetyatomin ominaispiirteenä on: 4,7 (d, J < 1 Hz).

Yleisen kaavan (II) mukaisen tuotteen isomeeri B:ksi kutsutaan isomeeriä, jolla on yleisen kaavan (I) 5 mukaisten tuotteiden isomeerien ja B2 yllä esitetty jen NMR-ominaispiirteiden kanssa identtiset ominaispiirteet, samalla kun on selvää, että asemassa 27 olevan vetyatomin ominaispiirteenä on: 4,6 (d, J _> 2,5 Hz).

Seuraavissa esimerkeissä nimitetään "flash"-kro-10 matografiäksi puhdistustekniikkaa, jolle on ominaista se, että käytetään lyhyttä kromatografiakolonnia ja keskinkertaista painetta (50 kPa) silikan ollessa jyväs-kooltaan välillä 40-53 yum W.C. Stillin, M. Kahnin ja A. Mitran mukaan /j. Org. Chem. , 43, 2923, 1973).7.

15 Alla esitettyjen esimerkkien kaikista tuotteista voidaan, ellei erikseen mainita, tehdä vähintään 2 %:nen hydroklorLdimuodossa oleva liuos.

Esimerkki_1_

Liuokseen, jossa on 3,59 g (2-di-isopropyyliami-20 noetyyli)-26-tiopristinamysiini IID:tä (isomeeri A:ta)

O

40 emissä dikloor imetaania, lisätään 0 C:ssa typpi-atmosfäärissä 0,4 cm^ trifluorietikkahappoa ja sen jälkeen 1,06 g 85 %:sta metaklooriperbentsoehappoa samalla kun lämpötila pidetään 0°C:ssa. Sen jälkeen kun 25 reaktioseosta on sekoitettu 20 tunnin ajan 25°C:ssa, se lisätään kyllästettyyn natriumbikarbonaatin vesiliuokseen. Orgaaninen faasi dekantoidaan ja vesifaasi pestään 3 sen jälkeen kolme kertaa 100 cm :llä metyleenikloridia. Orgaaniset faasit yhdistetään, kuivataan magnesiumsul-30 faatin pinnalla, suodatetaan ja konsentroidaan sitten kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, jolloin saadaan 4,2 g keltaista kiinteää ainetta, joka puhdistetaan "flash"-kromatografiän avulla /eluentti:kloroformi-me-tanoli (tilavuussuhde 90-10)^7 20 cm^ fraktiota keräten. 35 Fraktiot 22-28 yhdistetään ja konsentroidaan kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, jolloin saadaan kirk- ie 83326 kaankeltäinen kiinteä aine, joka sekoitetaan 10 cm^:iin etyylieetteriä. Saatu kiinteä aine erotetaan suodattamalla, jolloin saadaan 0,62 g (2-di-isopropyyliamino- etyyli)-26-sulfinyylipristinamysiini IIB:_tä (isomeeri 5 A2:_t_a) keltaisena jauheena, jonka sulamispiste on noin 155°C.

NMR-spektri: 0,90 - 1,15 /rat, -CH3 32:ssa, 31:ssä,

CK

/ -3 10 30:ssa,^N(CH ) ] \ 2 ch3 1,76 (s, ~CH3 33:ssa) 2.75 - 3,15 (mt, /CH2 15:ssä, -H4 ja 15 CH-/ - -S-CH -CH7N ) 4, -2 -- \ 0 CH- 20 3 ,81 (Sj^CH^ 17:ssä) 4.76 (d, -H27) 5,51 (d, -H13) 6,20 (d, -Hn) 6,48 (m, ^)NH 8:ssa) 25 8,13 (s, -H20)

Fraktiot 35-45 yhdistetään ja konsentroidaan kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, jolloin saadaan kirkkaankeltainen kiinteä aine, joka sekoitetaan 3 15 cm :iin etyylieetteriä. Saatu kiinteä aine erotetaan 30 suodattamalla, jolloin saadaan 1,07 g (2-di-isopropyy- liaminoetyyli)-26-sulfinyylipristinamysiini II :tä

O

(80 % isomeeri A^:tä, 20 % isomeeri A2:ta) keltaisena jauheena, jonka sulamispiste on noin 145°C.

i9 83326 NMR-spektri (isomeeri ): 1,72 ( s, -CH^ 33:ssa) 2,70 - 3,15 (mt^CH2 15:ssä, -H4 , -S-CH„-CH,,-N-CH) j, L * \ ^

5 o CH

^ s 3,81 (s, ^CH2 17: ssä) 5,26 (d, -H27) 5,46 (d, -ll13) 10 6,15 (d, -H11) 8,11 (s, -H20) (2-di-isopropyyliaminoetyyli)-26-tiopristinamysiini IID voidaan valmistaa seuraavalla tavalla: “ 3 3

Dikloorimetaanin (260 cm ) ja metanolin (520 cm ) seok- 15 seen, johon on liuotettu 52 g pristinamysiini Il^.-ta, lisätään tipoittain typpiatmosfäärissä -30°C:ssa 16 g 30 g:aan dikloorimetaania liuotettua 2-di-isopropyyli- aminoetaanitiolia. Liuosta sekoitetaan 20 tunnin ajan -20°C:ssa ja se konsentroidaan sitten alipaineessa 20 (2,7 kPa) 30°C:ssa. Saatu kiinteä aine sekoitetaan kah- 3 teen kertaan 1000 cm :iin etyylieetteriä, erotetaan suodattamalla ja kiteytetään sitten 100 cm :ssä asetonit-riiliä. Kiteet erotetaan suodattamalla ja kuivataan sen jälkeen alipaineessa (90 Pa) 40°C:ssa. Näin saadaan 25 33,6 g (2-di-isopropyyliaminoetyyli)-26-tiopristinamy siini Ilgrtä (isomeeri A:ta) valkoisina kiteinä, joiden sulamispiste on noin 122°C.

NMR-spektri: 1 - 1,15 (mt, isopropyylin -CH3) 30 1,72 (s, -CH3 33:ssa) 1,80 - 2,20 (mt, -H25, -H2g)

^chC

2,50-3 (mt,-SCH2CH2-N^^ ) 20 83326 3,40 (suuri d, -H»,) 2. o 4,74 (suuri s, —H27^ 6,32 (m, -NHg) 8,15 (s, -H20) 5 2-di-isopropyyliaminoetaanitioli voidaan valmistaa D.D. Reynoldsin, D.L. Fieldsin ja D.L. Johnsonin artikkelissa Org. Chem. 26, 5125 (1961) kuvaaman menetelmän mukaan.

Esimerkki 2 10 Liuokseen, jossa on 10 g (2-di-isopropyyliamino- etyyli)-26-tiopristinamysiini IID:tä (isomeeri A:ta)

3 B

300 cm :ssä kloroformia, lisätään 1,22 g natriumbikarbonaattia. Jäähdytetään -50°C:seen ja lisätään tipoit-tain 2,98 g 98 %:sta metaklooriperbentsoehappoa, joka 3 15 on liuotettu 100 cm :iin kloroformia. Seosta sekoitetaan 2 tunnin 15 minuutin ajan -50°C:ssa ja lisätään siihen sitten kyllästettyä natriumbikarbonaatin vesiliuosta.

Sen jälkeen kun seosta on sekoitettu 15 minuuttia 25°C:ssa, se dekantoidaan ja vesifaasi pestään kolmeen kertaan 3 20 200 cm :llä dikloorimetaania. Orgaaniset faasit kootaan yhteen, kuivataan magnesiumsulfaatin pinnalla, suodatetaan ja konsentroidaan sitten kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, jolloin saadaan 10,62 g vaaleaa ma- 3 renkimaista ainetta. Tämä liuotetaan 400 cm :iin etyy- 3

25 liasetaattia ja käsitellään sitten 140 cm :llä 0,1-N

kloorivetyhapon vesiliuosta. Vesiliuoksen pH säädetään sen jälkeen 4,2:een lisäämällä 400 cm^ puskuria, jonka pH on 4,2. Vesifaasi dekantoidaan ja orgaaninen faasi 3 pestään sitten 400 cm :llä puskuria (pH 4,2). Vesifaa-30 sit kootaan yhteen ja pestään kaksi kertaa 150 cmB:llä etyyliasetaattia. Dekantoinnin jälkeen vesifaasin pH säädetään välille 7-8 lisäämällä natriumbikarbonaattia 3 ja faasi pestään sen jälkeen kolmeen kertaan 300 cm :llä dikloorimetaania. Orgaaniset faasit kootaan yhteen ja pes- 3 35 tään kahteen kertaan 200 cm :llä puskuria, jonka pH on 3 7,5. Vesifaasi pestään 50 cm :llä dikloorimetaania ja li 21 83326 sen jälkeen orgaaniset faasit kootaan yhteen, kuivataan magnesiumsulfaatin pinnalla, suodatetaan ja konsentroidaan kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, jolloin saadaan 8,04 g kirkkaankeltaista kiinteää ainetta, joka 5 sekoitetaan 100 cm"*: iin etyylieetteriä, erotetaan suodat tamalla ja kuivataan alipaineessa (90 Pa) 40°C:ssa. Näin saadaan 7,5 g (2-di-isopropyyliaminoetyyli)-26-sulfinvv-lipristinamysiini Il^stä (isomeeri A2?ta) keltaisena jauheena, jonka sulamispiste on noin 158°C, ja jonka NMR-10 ominaispiirteet ovat identtiset esimerkissä 1 esitetty jen kanssa.

Esimerkki 3

Toimitaan esimerkissä 1 kuvattua vastaavalla tavalla, mutta käyttäen lähtöaineina 53,2 g:aa (2-dietyy- 3 15 liaminoetyyli)-26-tiopristinamysiini II_,:tä, 6,25 cm :ä

O

trifluorietikkahappoa, 16,4 g:aa metaklooriperbentsoe-happoa. Tuote puhdistetaan kolmella peräkkäisellä "flash"-kromatografia-ajolla /eluentti:kloroformi-metanoli (tilavuussuhde 90-10V7 40 cm3:n fraktioita keräten, seuraa-20 van kaavion mukaisesti: ! Puhdistuskaavio: .

--Erä A (68 g) ''FLASH "-krorratograt ia j - 25 Erä B 55 g ( fraktiot 21 - 60) "FLASH "-krorratograf ia

Erä Cj Erä C2 (fraktiot 25 - 35) (fraktiot 36 - 60) 10 g 18,8 g "FLASH"—krrtmt-nrjraf i a I 1 "gASH/'-kr^atOgraf ja |

3 ^ Erä D Erä E

(5,58 g) 01,5 g) (fraktiot 16-30) (fraktiot 18“ 45) 22 83326

Kaikki talteen kerätyt fraktiot konsentroidaan kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa.

Erä D sekoitetaan 60 cm:iin etyylieetteriä. Saatu kiinteä aine erotetaan suodattamalla. Saadaan 5 g 5 (2-dietyyliaminoetyyli)-26-sulfinyylipristinamysiini IIn:tä (isomeeri A_:ta) keltaisena jauheena, jonka su-lamispiste on noin 172UC.

NMR-spektri: 1.00 - 1,14 (mt, -CH^ 32:ssa + ketjun CH^) 10 1,75 (s, -CH^ 33:ssa) 2.55 - 3,20 (mt,^CH2 15:ssä, -H4, /ch2- -SCH.CH.N ) i 2 2 \ 15 O CH2- 3,82 (s, ^CH2 17:ssä) 4,81 (d, -H27) 5,51 (d, -H13) 6,19 (d, -Hn) 20 6,46 (dd, ^NH 8:ssa) 8,13 (s, -H20)

Erä E sekoitetaan 10 cm3;iin etyylieetteriä. Saatu kiinteä aine erotetaan suodattamalla. Saadaan 10,9 g ( 2-dietyyliaminoetyyli) -26-sulf inyylipristinamysiini 11^.: tä 25 (isomeeri A2:ta 60 %, isomeeri A^rtä 15 %, isomeeri B^itä 12 %, isomeeri B2:ta 13 %).

NRM-spektri: 1.00 - 1,14 (mt, -CH^ 32:ssa ja A^:n ja A2:n -n(ch2ch3) 2) 30 1 ,54 (s, -CH^ B^:n ja B2:n 33:ssa) 1,68 (s, -CH^ A^:n 33:ssa) 1,75 (s, -CH-. A :n 33:ssa) 3 2 2,65 - 2,95 (mt, A1:n -S(O)CH2CH2N^ ja -H4) 2.55 - 3,20 (mt,^)CH2 15:ssä, A2:n -H^ ja 35 -S(0)CH2CH2N<.) 23 83326 3,77 (AB rajoittaa, ^CH2 A^n 17:ssä) 3,82 (s, >CH2 A2:n 17:ssä) 4.81 (d, A2 : n -H^) 5,24 - 5,25 (2d, A1 :n ja B^n -H27) 5 5,41 (d, A1:n -H13) 5,51 (d, A2:n -H13) 5,99 ja 6 (2d, B^n -Hg ja B2:n -Hg) 6.11 (d, A1:n -H11) 6,19 (d, A2:n -1^ .,) 10 6,46 (dd, ^NH A2:n 8:ssa) 6,79 (dd, )NH A^:n 8:ssa) 7.82 (s, B.j :n ja B2:n -H2Q) 8.12 (s, A1 :n -H2(J) 8.13 (s, A2:n -H20) 15 (2-dietyyliaminoetyyli)-26-tiopristinamysiini IID voi-

D

daan valmistaa seuraavalla tavalla:

Suspensioon, jossa on 13,1 g pristinamysiini II :ta

3 A

150 cm :ssä metanolia, lisätään liuos, jossa on 3,7 g

O

dietyyliaminoetaanitiolia 15 cmJ:ssä metyleenikloridia.

20 Saatua liuosta sekoitetaan 18 tunnin ajan lähellä 20°C:tta 3 olevassa lämpötilassa ja kaadetaan se sitten 1500 cm :iin tislattua vettä; saatua seosta uutetaan kolme kertaa yh- 3 teensä 1000 cm :llä metyleenikloridia. Orgaaniset faasit yhdistetään, kuivataan magnesiumsulfaatin pinnalla, suoda-25 tetaan ja konsentroidaan sitten kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa. Saatu jäännös puhdistetaan "flash"-kromatografiaa käyttäen /eluentti:kloroformi-metanoli (tilavuussuhde 90-10}_7; kun fraktiot 5-23 on konsentroitu kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 30 12,4 g (2-dietyyliaminoetyyli)-26-tiopristinamysiini

Ilgitä keltaisena jauheena, jonka sulamispiste on noin 105°C.

24 83326 NMR-spektri: 1,05 (m, -N(CH2CH3)2 + -¾) 1,70 (s, -H33) 1,85 - 2,15 (m, -H25, -H29) 5 2,60 (q, -N(CH2CH3)2) 2.75 (s, -S-CH-CH -) ^ 2 2.9 (dd, ABX-järjestelmä, 3.10 (dd, ABX-järjestelmä, 3,40 (ddd, -H26) 10 3,80 (s, -H1?) 4.75 (d, -H27) 5,50 (d, -H13) 6,15 (d, -H11) 6,60 (suuri s, ,)NH 8:ssa) 15 8,10 (s, -H20)

Esimerkki 4

Toimien esimerkissä 1 kuvattua vastaavalla tavalla, mutta käyttäen lähtöaineina 5,5 g:aa (2-dimetyy-liaminoetyyli)-26-tiopristinamysiini II :tä 0,67 cm^:ä

O

20 trifluorietikkahappoa, 1,8 g:aa metaklooriperbentsoe- happoa, ja sen jälkeen kun tuote on puhdistettu "flash”-. . kromatografiän avulla Zeluentti:kloroformi-metanoli (ti- lavuussuhde 90-10Γ7 30 cm :n fraktioita keräten, ja fraktiot 23-40 konsentroitu kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 25 30°C:ssa, saadaan 0,4 g (2-dimetyyliaminoetyyli)-26-sul- finyylipristinamysiini IIp:tä (isomeeri A2:ta 70 %, isomeeri A^itä 15 %, isomeeri B^:tä 7 %, isomeeri B2:ta 8 %) keltaisena jauheena, jonka sulamispiste on noin 150°C.

30 NMR-spektri (isomeeri A2): 1,77 (s, -CH3 33:ssa) 2,41 (s, -N(CH3)2) 2,70 - 3,20 (mt,-SCH2CH9N ^ , /CH2 15:ssä ja -H4) 0 35 3,82 (s, ^CH2 17:ssä) 4,84 (mt, -H3 ja -H2?)

II

,, 83326 2 Ρ 5,52 (d, -Η13) 6,19 (d, -Η^) 6,42 (m, ^ΝΗ 8 : ssa) 8,14 (s, -Η20) 5 (2-dimetyyliaminoetyyli)-26-tiopristinamysiini II voi- daan valmistaa seuraavalla tavalla:

Toimien esimerkissä 1 kuvattua vastaavalla tavalla, mutta käyttäen lähtöaineina 2,7 g:aa pristinamysii-ni llA:ta ja 0,58 g:aa 2-dimetyyliaminoetaanitiolia, ja 10 sen jälkeen kun tuote on puhdistettu "flash"-kromatogra- fian avulla ^cluenttirkloroformi-mctanoli (tilavuussuhde 90-10L7 ja fraktiot 11-17 konsentroitu kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 1,1 g (2-dimetyy-15 liaminoetyyli)-26-tiopristinamysiini Ilgitä keltaise na jauheena, jonka sulamispiste on noin 100UC. NMR-spektri: 2,35 (s, 6H: -N(CH3)2) 2,80 (m, 4H: -S-CH2CH2-nO 20 3,40 (ddd, 1H: -¾) 4,75 (d, 1H: -Η2?) 8,10 (s, 1H: -H20)

Esimerkki 5

Toimien esimerkissä 2 kuvattua vastaavalla ta- 25 valla, mutta käyttäen lähtöaineina 4,7 g:aa (N-metyyli- N-etyyli-2-aminoetyyli)-26-tiopristinamysiini IIn:tä

B

(isomeeri A:ta 90 %, B:tä 10 %), 1,22 g:aa natriumbikarbonaattia, 1,41 g:aa 98 %:sta metaklooriperbentsoe-happoa, sen jälkeen kun tuote on puhdistettu "flash"-30 kromatografiän avulla /eluentti:dikloorimetaani-metano- li (tilavuussuhde 90-10)_7 20 cm :n fraktioita keräten ja fraktiot 44-52 konsentroitu kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 2,47 g keltaista kiinteätä ainetta, joka sekoitetaan 50 cm :iin etyylieette-35 riä, erotetaan suodattamalla ja kuivataan alipainees- 26 83326 sa (90 Pa) 40°C:ssa. Näin saadaan 2,3 g (N-metyyli- N-etyyli-2-aminoetyyli)-26-sulfinyylipristinamvsiini II„:tä (isomeeri A_:ta) keltaisena jauheena, jonka suti 2 lamispiste on noin 145 C.

5 NMR-spektri: 1,09 (t,>N-CH2-CH3) 1,76 (s, -CH^ 33:ssa) 2,31 (s,>N-CH3) 2,54 (mt, >N-CH2CH3) 10 2,80 (mt, -H^) 2,70 - 3,10 (mt, -S-CH.,-CH,N ^ ) o 2,92 - 3,12 (2dd,>CH2 15:ssä) 3,24 (mt, -H26) 15 3,82 (s, ,>CH2 1 7 : ssä) 4,82 (s, -Π27) 5,51 (d, -il13) 6,40 (dd, ^NH 8:ssa) 8,13 (s, -H20) 20 (N-metyyli-N-etyyli-2-aminoetyyli)-26-tiopristinamysiinä IID (isomeeri A:ta 90 %, B:tä 10 %) voidaan valmistaa

D

toimimalla esimerkissä 1 kuvattua vastaavalla tavalla, mutta käyttäen lähtöaineina 14,11 g:aa pristinamysiini Il^rta ja 3,2 g:aa N-metyyli-N-etyyli-2-aminoetaanitio-25 lia. Sen jälkeen kun seosta on sekoitettu 4 päivän ajan -20°C:ssa ja tuote puhdistettu "flash"-kroroatografiän avulla /eluentti:kloroformi-metanoli (tilavuussuhde 90-101Γ7 keräämällä 80 cm^:n fraktioita keräten ja konsentroitu sen jälkeen fraktiot 25-48 kuiviin alipainees-30 sa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 4,75 g keltaista kiinteää ainetta, joka kuivataan alipaineessa (90 Pa) 40°C:ssa. Näin saadaan 4,7 g (N-metyyxi-N-etyyli-2-aminoetyyli)- 26-tiopristinamysiini IIn:tä (isomeeri A:ta 90 %, B:tä

O

10 %) keltaisena jauheena, jonka sulamispiste on noin 35 140°C.

27 8 3 3 2 6 NRM-spektri 1,1 (rat, CH2CH3) 1,73 (s, CH^ 33:ssa) 2,30 (s, >J-CH3) 5 2,45-2,6 (mt, ^N-CH2CH3) 2,68 - 2,78 (2mt, -S-CH2-CH2nC) 2,78 (mt, -H4) 2,90 ja 3,12 (2dd, -CH2~ 15:ssä) 3,40 (d, -H26) 10 3,83 (s, -CH2~ 17:ssä) 4,76 (s, -H27) 5,48 (d, -H13) 6,14 (d, -H1,) 6,34 (raf, ^NH 8:ssa) 15 8,11 (s, -H20) N-metyyli-N-etyyli-2-aminoetaanitioli voidaan valmistaa D.D. Reynoldsin et ai. kuvaamaa menetelmää J. Org. Chem. 26, 5125 (1961), vastaavalla tavalla, käyttäen lähtöaineina 25 g:aa N-metyyli-N-etyyliamiinia ja 43,7 g:aa 20 etyleenitiokarbonaattia. Tislauksen jälkeen saadaan 1,3 g N-metyyli-N-etyyli-2-aminoetaanitiolia värittömänä nesteenä.

/Kp. (6,7 kPa) = 52 °cj.

Esimerkki 6 25 Toimien esimerkissä 1 kuvattua vastaavalla taval la, mutta käyttäen lähtöaineina 9,8 g:aa (3-dimetyyli- aminopropyyli)-26-tiopristinamysiini II_:tä (isomeeri-

3 B

en A ja B suhde 50:50), 1,18 cm :ä trifluorietikka-happoa, 3,1 g:aa metaklooriperbentsoehappoa, ja sen jäl-30 keen kun tuote on puhdistettu "flash"-kromatografiän avulla Zeluentti:kloroformi-metanoli (tilavuussuhde 80-20),7 15 cm^:n fraktioita keräten, ja fraktiot 53-75 konsentroitu kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 1,6 g (3-dimetvvliaminoproPvyli)-26-sulfinyyli-35 pristinamvsiini II_:tä (isomeerien seosta) keltaisena

D

jauheena, jonka sulamispiste on noin 165 C.

28 83326 NMR-spektri (tyyppiä A2~ 45 %, B2 - 35 % ja - 15 % olevien isomeerien seos): 1,53 (s, -CH^ 33:ssa A2:ssa) 1.75 (s, -CH^ 33:ssa A2:ssa) 5 2,26, 2,28, 2,32 (3s, kolmen isomeerin ^NCH^) 3.82 (s, ^CH2 17:ssä A2:ssa) 3,70 ja 3,88 (2d, ^CH2 17:ssä B^:ssä) 3.69 ja 3,91 (2d,^CH2 17:ssä B2:ssä) 4.76 (d, B2:n -H^) 10 5,25 (d, B^ :n -H^) 5.50 (d, A1 :n -H^) 7,63 (mt, ^NH 8:ssa B2:ssa) 7,74 (mt,^NH 8 : ssa B^:ssä) 7.82 (s, B2: n ja B1 :n -H2Q) 15 8,14 (s, A2:n -H2Q) (3-dimetyyliaminopropyyli) -26-tiopristinamysiini II_.

D

voidaan valmistaa seuraavalla tavalla:

Toimien esimerkissä 3 kuvattua vastaavalla tavalla, mutta käyttäen lähtöaineina 5,25 g:aa pristinamysii-20 ni II :ta ja 1,3 g:aa 3-dimetyyliaminopropaanitiolia, ja n sen jälkeen kun tuote on puhdistettu "flash"-kromatogra-fian avulla /eluentti:kloroformi-metanoli (tilavuussuhde 90-10)7 ja fraktiot 6-29 konsentroitu alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 3,3 g (3-dimetyyliaminopro-25 pyyli)-26-tiopristinamysiini IIg:tä keltaisena jauheena, jonka sulamispiste on noin 100°C.

NMR-spektri: 1.50 (s, 3H x 0,5: 1. isomeerin -Ηββ) 1.70 (s, 3H X 0,5: 2. isomeerin -Ηββ) 30 1,80 (m, 2H x 0,5: -SCH2-CH2-CH2N<, ) 2,20 (s, 6H x 0,5: 1. isomeerin -Ν(0Ηβ)2 2,25 (s, 6H x 0,5: 2. isomeerin -Ν(<2Ηβ)2 2,40 (m, 2H: -SCH2-CH2-CH2N<j

2.70 (m, 2H: -SCH2-CH2-CH2NO

29 8 3 3 2 6 3,35Λ » (2m, 1H: kummankin isomeerin -H2g)

3,45J

5 4,60*' ’ (2d, 1H; kummankin isomeerin -H27)

4,70 J

7,80T

10 Γ (2s, 1H: kummankin isomeerin -H2q) 8,10j

Esimerkki 7

Toimien esimerkissä 1 kuvattua vastaavalla tavalla, mutta käyttäen lähtöaineina 6,3 g:aa (2-dietyyli- 15 aminopropyyli)-26-tiopristinamysiini II :tä, 0,72 cm^;ä

B

trifluorietikkahappoa, 1,91 g:aa metaklooriperbentsoe- happoa, ja sen jälkeen kun tuote on puhdistettu "flash"- kromatografiän avulla /eluenttirkloroformi-metanoli (ti- 2 lavuussuhde 90-1 o)7 60 cm Ln fraktioita keräten ja frak-20 tiot 7-9 konsentroitu kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 0,99 g (2-dietyyliaminopropyyli)-26-sulfinyylipristinamysiini IID:tä (A^-isomeeriä) keltaisena jauheena, jonka sulamispiste on noin 150°C. NMR-spektri: 25 1 ,03 - 1,20 (mt, -CH2~CH (CH3> N (CH^H^) ja CH3 32:ssa) 1,76 (s, -CH3 33:ssa) 3,82 (s, ^>CH2 1 7 : ssä) 4,79 (m, -H27) 30 5,53 (d, -H13) 6,20 (d, -H11) 6,42 (m, ^NH 8:ssa) 8,13 (s, -II20) 30 83326

Sen jälkeen kun fraktiot 23-35 on konsentroitu kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 0,64 g (2-dietyyliaminopropyyli)-26-sulfinvvlipristinamvsiini IIp:ta (A.j-isomeerejä) beigenkeltaisena jauheena, jonka 5 sulamispiste on noin 160-170°C.

NMR-spektri: 1.14 (mt, -N(CH2CH3)2 1,24 (suuri d, CH^-CH-nO 1,73 (s, “CH^ 33:ssa) 10 3,81 (AB rajoittaa, ^CH2 17:ssä) 5,28 (d, -H27) 5,43 (d, -H13) 6.15 (d, -Hn) 6,88 (m, ^NH 8:ssa) 15 8,10 (s, -H20) (2-dietyyliaminopropyyli)-26-tiopristinamysiini ΙΙβ voidaan valmistaa seuraavalla tavalla:

Toimien esimerkissä 3 kuvattua vastaavalla tavalla, mutta käyttäen lähtöaineina 3,15 g:aa pristinamysii-20 ni IIA:ta ja 1,8 g:aa 2-dietyyliaminopropaanitiolia, ja sen jälkeen kun tuote on puhdistettu "flash"-kromato-grafian avulla /eluentti:metyleenikloridi-metanoli (tilavuussuhde 90-10)^7 20 cm^:n fraktioita keräten ja fraktiot 3-5 konsentroitu alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, 25 saadaan 1,4 g (2-dietyyliaminopropyyli)-26-tiopristina- mysiini. II^:tä keltaisena jauheena, jonka sulamispiste on noin 160°C.

NMR-spektri: 1 (m, 9H: -H32+ -N(CH2CH3)2) 30 2,50 (m, 6H: -S-CH2-CH-N(CH2CH3)2) 3,30 (m, 1H: -¾) 4,70 (d, 1H: -H2?) 8,12 (s, 1H: -H2Q) 2-dictyyliaminopropaanitioli voidaan valmistaa seuraa-35 valla tavalla: si 83326

Liuokseen, jossa on 29,5 g 3-S-isotioureido-2-dietyyliaminopropaanidihydrokloridia 150 cm :ssä tislat- 3 tua vettä, lisätään 25 cm 10-N natriumkarbonaatin vesi-liuosta. Seosta pidetään 100°C:ssa yhden tunnin ajan, 5 se jäähdytetään 20°C:seen, sen pH säädetään 9:ään lisää- 3 mällä 8 cm 12-N kloorivetyhapon vesiliuosta, 3a sitä uu- 3 tetaan sitten kolme kertaa 100 cm :llä etyylieetteriä.

Eetteriä sisältävät faasit kootaan yhteen, kuivataan kaliumkarbonaatin pinnalla, suodatetaan ja konsentroi- 10 daan alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa. Seos puhdistetaan tislaamalla. Saadaan 5,8 g 2-dietyyliaminopropantiolia värittömänä nesteenä. /¾p. (2,7 kPa) = 18°Cj.

1-S-isotioureido-2-dietyyliaminopropaanidihydro- kloridi voidaan valmistaa seuraavalla tavalla: 15 Liuokseen, jossa on 41 g 1-kloori-2-dietyyliamino- 3 propaanihydrokloridia 200 cm :ssä dimetyyliformamidia, lisätään 16,7 g tioureaa. Seosta pidetään 100°C:ssa 30 minuutin ajan ja se jäähdytetään sitten 20°C:seen.

Muodostunut valkoinen saostuma kerätään suodattamalla, 3 20 pestään kolme kertaa 20 cm :llä dimetyyliformamidia ja sen jälkeen kolme kertaa 20 cm^:llä etyylieetteriä. Saadaan 29,6 g 1-S-isotioureido-2-dietyyliaminopropaania valkeina kiteinä, joiden sulamispiste on 247-249°C.

1- kloori-2-dietyyliaminopropaanihydrokloridi 25 voidaan valmistaa seuraavalla tavalla: 100 cm :iin tionyylikloridia lisätään 15 minuutissa 45,2 g 2-dietyyliaminopropanolihydrokloridia ja seos kuumennetaan sitten 80°C:seen. Sen jälkeen kun seosta on sekoitettu kahden tunnin ajan, ylimääräinen 3 30 tionyylikloridi tislataan ja jäännös liuotetaan 200 cm :iin etyylieetteriä. 1-kloori-2-dietyyliaminopropaanihydroklo-ridi kiteytyy. Suodatuksen jälkeen saadaan 48,2 g valkeita kiteitä, joiden sulamispiste on 112°C.

2- dietyyliaminopropanolihydrokloridi voidaan val- 35 mistaa seuraavalla tavalla: 32 83326

Suspensioon, jossa on 10,6 g litium- ja alumiini-hydridiä yhdessä litrassa etyylieetteriä, lisätään hitaasti 20°C:ssa liuos, jossa on 66 g etyyli-2-dietyyli- 3 aminopropionaattia 330 cm :ssä etyylieetteriä. Reaktion 5 annetaan jatkua 35°C:een lämpötilassa viiden tunnin ajan, sen jälkeen lämpötila lasketaan 0°C:seen. Sitten lisätään tipoittain 0°C:ssa 12,4 cm^ vettä, 9,1 cm^ 5-N natriumkarbonaatin vesiliuosta ja sen jälkeen 41,3 cm"* vettä, sekoitetaan 30 minuutin ajan, suodatetaan seos lasisintterin 10 läpi ja pestään etyylieetterillä. Eetteriä sisältävä faasi kuivataan kaliumkarbonaatin pinnalla, suodatetaan ja konsentroidaan alipaineessa (2,7 kPa) 30°c:ssa. Saadaan 3 43,8 g keltaista nestettä, joka liuotetaan 200 cm :iin asetonia ja tähän liuokseen lisätään sitten 78 cm^ 4,5-N 15 kaasumaisen kloorivetyhapon etyylieetteriliuosta. 2-dietyy- liaminopropanolihydrokloridi kiteytyy. Suodatuksen jälkeen saadaan 45,2 g valkeita kiteitä, joiden sulamispiste on 97-100°C.

Etyyli-2-dietyyliaminopropionaatti voidaan valmis-20 taa Braunin et ai., Beilstein, 61, 1425 (1928), menetel män mukaan.

Esimerkki 8

Toimitaan esimerkissä 2 kuvattua vastaavalla tavalla, mutta käyttäen lähtöaineina 4 g:aa (2-dietyyliamino-25 propyyli)-26-tiopristinamysiini II_:tä (A-isomeeriä),

O

1,16 g:aa 98 %:sta metaklooriperbentsoehappoa ja 1 g:aa kiinteää natriumbikarbonaattia. Sen jälkeen kun tuote on puhdistettu "flash"-kromatografiän avulla /eluentti:klo-

O

roformi-metanoli (tilavuussuhde 93-7 >7 25 cm :n fraktioi-30 ta keräten ja fraktiot 21-48 konsentroitu alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa saadaan 2,69 g (2-dietyyliaminopropyy-li)-26-sulfinyylipristinamysiini IIp:tä (A^-isomeeriä) keltaisena jauheena, jolla on täysin samanlaiset ominaisuudet kuin esimerkin 7 tuotteella.

35 (2-dietyyliaminopropyyli)-26-tiopristinamysiini IIB (A-isomeeri) voidaan valmistaa esimerkissä 1 kuvattua vastaavalla tavalla, mutta käyttäen lähtöaineina

II

33 83326 15 g:aa pristinamysiini IIA:ta ja 4,62 g:aa 2-dietyyli-aminopropaanitiolia. Sen jälkeen kun tuote on puhdistettu "flash"-kromatografian avulla Zeluenttiikloroformi- 2 metanoli (tilavuussuhde 90-10^7 40 cm :n fraktioita ke-5 räten ja fraktiot 27-52 konsentroitu kuiviin alipainees sa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 12 g keltaista kiinteää 3 ainetta, joka sekoitetaan 60 cm :iin etyylieetteriä, suodatetaan ja kuivataan. Saadaan 8,2 g (2-dietyyliaminopro-pyyli-26-tiopristinamysiini limitä (isomeeri Aita) kirk-10 kaankeltaisena jauheena, jonka sulamispiste on noin 122°C.

NMR-spektri: 1 - 1,15 (mt, etyyli-CH3 + CH3-CH-N(C2H5)2) 1.70 (s, -CH3 33:ssa) ch,-ch3 15 2,35 - 2,60 (mt, -N > \CH,-CH3 2,50 - 3,10 (mt, -SCI^CH-) 2,75 (mt, ~H4) 2,89 ja 3,05 (2dd0 L ^CH- 1 5 : ssä) 20 \ ' 2 2,92 ja 3,08 (2ddj • 3,30 (ratj ! -*26' 3.3 7 (mt „ 3,80 (s, ^CH- 17 : ssä) 4,69 (d ’-h27) 4.71 (d/ 5,45 (d, -H13)

,n 6,13 (dO

JU )

Hir 6,14 (d 6.4 - 6,60 (mt,^NH 8: ssa) 83326 34 6,51 (ddl -κ5) 6,53 (ddj 8,09 (s, -H20) 5 2-dietyyliaminopropaanitioli voidaan valmistaa edellä esimerkissä 7 kuvatulla tavalla.

Esimerkki 9

Toimitaan esimerkissä 2 kuvattua vastaavalla tavalla, mutta käyttäen lähtöaineina 4,58 g:aa (1-dietyyli-10 amino-2-propyyli)-26-tiopristinamysiini Ilgitä (A-iso- meeriä), 1,29 g:aa 98 %:sta metaklooriperbentsoehappoa ja 1,14 g:aa kiinteää natriumbikarbonaattia. Sen jälkeen kun tuote on puhdistettu "flash"-kromatografiän avulla /eluentti:kloroformi-metanoli (tilavuussuhde 97-3^ 3 15 20 cm :n fraktioita keräten ja vastaavasti fraktiot 59-77 j fraktiot 79-97 konsentroitu kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan: fraktioista 79-97 1,47 g (1-dietyyliamino-2-propyyli)-26-sulfinyylipristinamysii-ni_Ilgitä (ensimmäistä isomeeriä) kirkkaankeltaisena kiin-20 teänä aineena, jonak sulamispiste on noin 132°C.

NRM-spektri: 1,02 (t, etyyli-CH^) 1,34 (d, CH3-CH-CH2N(C2H5)2) 1.72 (s, -CH3*33:ss-) 25 ^CH2" 2,5-2,7 (mt,-CH_-N ) 1 ^ CH2- 2,77 (mt, -H.) 2,87 ja 3,09 (2dd,^CH2 15:ssä) 30 2,97 (mt,

O

3.72 (mt, -H26) 3,80 (s,^CH2 17:ssä) 4,92 (mt, -H27) .35 5,43 (d, -H13) li 35 83326 6,15 (d, -Ηη) 6,72 (dd, ^NH 8:ssa) 8,06 (s, -H20) ja fraktioista 59-77 1,07 g (l-dietyyliamino-2-propvvli)-5 26-sulfinyylipristinamysiini IIp:tä (toista isomeeriä) kirkkaankeltaisena kiinteänä aineena, jonka sulamispiste on noin 128°C.

NRM-spektri: 1,72 (s, CH3 33:ssa) 10 3,4 (mt, -H26) 3.79 (s, CH2 17:ssä) 4,74 (mt, ~H27) 5,48 (d, -H13) 6,18 (d, -Ηί1) 6.80 (mt, ^NH 8:ssa) 8,09 (s, -H20) (1-dietyyliamino-2-propyyli) -26-tiopristinamysiini II_.

D

(A-isomeeri) voidaan valmistaa toimien esimerkisssä 1 kuvattua vastaavalla tavalla, mutta käytetään lähtöainei-20 na 13 g:aa pristinamysiini II :ta ja 4 g:aa 1-dietyyli-

A

amino-2-propaanitiolia. Sen jälkeen kun tuote σι puhdistettu "flash"-kromatografiän avulla /eluenttiikloroformi- • 3 metanoli (tilavuussuhde 90 — 10)_7 50 cm :n fraktioita keräten ja fraktiot 46-55 konsentroitu kuiviin alipai-25 neessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 8 g vaaleankeltaista kiinteää ainetta, joka kiteytetään 30 cm :ssä asetonit-riiliä. Sen jälkeen kun tuote on suodatettu ja kuivattu, saadaan 5,91 g (1-dietyyliamino-2-propyyli)-26-tiopristinamysiini IIfi:tä (A-isomeeriä) valkoisina ki-30 teinä, joiden sulamispiste on 136°C.

NMR-spektri: 0,9 - 1,10 (mt, -N(CH2CH3)2)

1,3 - 1,37 (2d, CH_-CH-CH0NO

3 I 2 1,7 (s, -CH3 33:ssa) 36 83326 /CH2* , 2,4 - 2,65 (mt, -CH„N ) - \ CH - 2,76 (mt, -H4) 2 3 (mt, -S-CHC) 2.9 - 3,1 (2dd, ^CH2 15:ssä) 5 3,52 (mt, -H ) 26 3,81 (s,/CH2 17:ssä) 4,78 (mt, -H27) 5,46 (d, -H13) 6,14 (d, -H11) 10 6,40 (mt, 'NH 8:ssa) 8.09 ja 8,10 (2s, -H2Q) 1-dietyyliamino-2-propaanitioli voidaan valmistaa R.T. Wraggin, J. Chem. Soc. (C), 2087 (1969), esittämän mene telmän mukaan.

15 Esimerkki 10

Toimitaan esimerkissä 2 kuvattua vastaavalla tavalla, mutta käyttäen lähtöaineina 1,7 g:aa Z^-dimetyyli- amino-2(R)-butyyli/-26-tiopristinamysiini II_:tä (A-iso-

B

meeriä, 0,50 g:aa natriumbikarbonaattia, 0,45 g:aa 20 98 %:sta metaklooriperbentsoehappoa. Sen jälkeen kun tuo te on puhdistettu "flash"-kromatografiän avulla Zeluentti: etyyliasetaatti-metanoli (tilavuussuhde 85-15),7 ja fraktiot 35-58 konsentroitu kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 1,1 g valkoista kiinteää ainetta, joka 3 25 sekoitetaan 30 cm :iin etyylieetteriä. Suodatuksen ja kuivauksen jälkeen saadaan 0,95 g Z^-dimetyyliaminobutyyli-2 (RL7- 2 6 -sulfinvvlipristinamysiini 11 :tä (isomeeriä A„) ' - B ~ valkoisena kiinteänä aineena, jonka sulamispiste on noin 126°C.

30 NMR-spektri: 1 (mt, >N-CII-CH0CH,)

l 1 J

1,45 - 1,75 (mt, 7N-CH-CH0CH0) / 2 3 1,78 (s, -CH3 33:ssa)

2,50 - 3,05 (mt, -S-CH.-CHC ja -HJ

* 2 4

35 O

II

37 83326 2.93 ja 3,14 (2dd, )CH2 15:ssä) 3,31 (mt, -H26) 3.84 (s, ^CH2 1 7: ssä) 4.84 (d, -H27) 5 5,51 (d, -H13) 6,19 (d, -Hn) 6,30 (dd, }NH 8:ssa) 8,15 (s, -H20) /2-dimetyyliamino-2 (R) -butyyli7’-26-tiopristinamysiini 10 II (isomeeri A) voidaan valmistaa toimien esimerkissä 1

D

kuvattua vastaavalla tavalla, mutta käyttäen lähtöaineina 8 g:aa pristinamysiini IIA:ta ja 2,3 g:aa 2-dimetyyli-amino-2(R)butaanitiolia. Sen jälkeen kun tuote on puhdistettu "flash"-kromatografiän avulla /eluentti:dikloo-15 rimetaani-metanoli (tilavuussuhden 90-10).7 ja fraktiot 36-55 konsentroitu kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 3 g /2-dimetyyliamino-2 (R) butyyli^- 26-tiopristinamysiini II :tä (isomeeri A:ta) kirkkaan-

B

keltaisena kiinteänä aineena, jonka sulamispiste on 20 noin 120°C.

3

Kiteyttämällä 0,9 g tätä tuotetta 5 cm :ssä ase-tonitriiliä ja erottamalla kiteytynyt tuote suodattamalla , saadaan 0,2 g & -dimetyyliamino-2(R)butyyli7~26- tiopristinamysiini II :tä (isomeeri A:ta) valkeina ki-

B

25 teinä, joiden sulamispiste on 122°C.

NMR-spektri: 1 (mt, >N-CH-CH_CH0) | Z o 1.4 - 1,7 (mt,^N-CH-CH2CH3) 1,72 (s, -CH3 33:ssa) 30 2,30 (s, -N(CH3)2) 2.5 - 2,85 (mt, -S-Cf^-CH^ ja -H4) 2.93 ja 3,10 (2dd, ^CH2 15:ssä) 3,34 (suuri d, -H2g) 3,83 (s,)CH2 17:ssä) 35 4,76 (suuri s, -H27) 38 83326 5,48 (d, -H13) 6,14 (d, -H11) 6,26 (dd, } NH 8:ssa) 8,13 (s, -H20) 5 2-dimetyylianiino(R)butaanitioli voidaan valmistaa alla esimerkissä 11 kuvattua vastaavalla tavalla, käyttäen 3 lähtöaineina 52,4 g:aa trifenyylifosfiinia, 40 cm :ä di-isopropyyliatsodikarboksylaattia, 12 g:aa 2-dimetyy- 3 liamino(R)butanolia ja 15,2 cm :ä tiolietikkahappoa 10 (tässä tapauksessa välituotteena oleva tioesteri hydrolysoituu välittömästi silikageelikromatografiässä).

Sen jälkeen kun tuote on puhdistettu "flash"-kro-matografian avulla /eluentti:dikloorimetaani:1000 cm , sitten dikloorimetaani-metanoli (tilavuussuhde 85-15): 15 2000 cm^, sitten dikloorimetaani-metanoli (tilavuus- suhde 80-20): 4000 cmJ 100 cm :n fraktioita keräten ja fraktiot 42-60 konsentroitu kuiviin alipaineessa, saadaan 14 g keltaista öljymäistä ainetta, joka puhdistetaan tislaamalla. Näin saadaan 2,4 g 2-dimetyyliami-20 no(R)butaanitiolia värittömänä nesteenä ZKp. (4 kPa) = 70-75°c7· 2-dimetyyliaminobutan-1(R)-oli voidaan valmistaa M. Wenghoeferin et ai. artikkelissa J. Hetero-cycl. Chem., 7(6), 1407 (1970) kuvaamaa menetelmää 25 täysin vastaavalla tavalla.

Esimerkki 11

Toimien esimerkissä 2 kuvattua vastaavalla tavalla, mutta käyttäen lähtöaineina 2,67 g:aa /2-dimetyy-liamino-3-fenyyli-2(S)-propyyli7-26-tiopristinamysiini 30 II :tä (isomeeri A:ta), 0,7 g:aa natriumbikarbonaattia J3 ja 0,7 g:aa 98 %:sta metaklooriperbentsoehappoa, sen jälkeen kun tuote on puhdistettu "flash"-kromatografiän avulla Zeluentti:kloroformi-metanoli (tilavuussuhde 90-10)_7 20 cm^:n fraktioita keräten ja fraktiot 19-23 35 konsentroitu kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C;ssa, 39 83326 saadaan 1,3 g kirkkaankeltaista kiinteää ainetta, joka 3 sekoitetaan 50 cm :iin etyylieetteriä ja erotetaan suodattamalla, jolloin saadaan 1,18 g /2-dimetyyliamino- 3-fenyyli-(2S)-propyyli7-26-sulfinyylipristinamysiini 5 II„:tä (A^-isomeeriä) kirkkaankeltaisena kiinteänä ai- ·*""· D - —------ neena, jonka sulamispiste on noin 150°C.

NMR-spektri: (400 MHz, CDC13) 1,73 (s, -CH3 33:ssa)

2,4 - 2,6 (mt, 0 H

10 f -S-CH -C ^ ) * 2 '^CK„- o

2,8 - 3,15 (mt,J

2,44 (s, -N(CH3)2 2,77 (mt, -II ) 15 2, H 9 ja 3,1 (2dd, >CII2 15:ssä) 3.18 (mt, -H2g) 3,82 (s, ^CH2 17:ssä) 4,68 (d, -H27) 5,51 (d, -H^ 3) 20 6,1 9 (d, -Hn) r‘·. 6,50 (dd,^NH 8:ssa) 7.18 (d, -H fenyylin orto-asemassa) .. . 7,23 (t, -H fenyylin para-asemassa) 7,31 (t, -H fenyylin rneta-asemassa) . 25 8,13 (s, -H20) /2-dimetyyliamino-3-fenyyli(2S)propyvli7-26-suifinyylipristinamysiini II :n (isomeeri A2:n) 1 %:nen vesi-liuos saadaan sekoittamalla: tuotetta 30 g 3 30 0,1-N-kloorivetyhappoa 0,45 cm 3 tislattua vettä qsp 3 cm /3-dimetyyliamino-3-fenyyli(2 S)propyyli7“26-tiopristina-mysiini II (isomeeri A) voidaan valmistaa toimien esimerkissä 1 kuvattua lähtöaineen valmistusta vastaaval-35 la tavalla, mutta käyttäen lähtöaineina 7,13 g:aa pris- 4o 83326 tinamysiini IIA:ta ja 2,65 g:aa 2-dimetyyliamino-3-fenyyli(2S)propaanitiolia ja sen jälkeen kun tuote on puhdistettu "flash"-kromatografiän avulla /eluent-ti retyyliasetaatti-metanoli (tilavuussuhde 80-20)_/ 5 60 cm^:n fraktioita keräten ja fraktiot 33-43 kon sentroitu alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 4,6 g kirkkaankeltaista kiinteää ainetta, joka sekoi- 3 tetaan 50 cm :iin etyylieetteriä, suodatetaan ja kuivataan alipaineessa (90 Pa) 45°C:ssa. Näin saadaan 10 3,6 g /"2-dimetyyliamino-3-fenyyli (2S)propaani7-26-tio- pristinamysiini II_.:tä (A-isomeeriä) vaaleankeltäitä 0 sena jauheena, jonka sulamispiste on noin 110 C. NMR-spektri: 1,69 (s, -CH-j 33:ssa) 15 2,38 (s, -N(CH3)2)

H

2,35 - 3,05 (mt,-SCH0-C )

* I ^CH0-N

/ N

20 2,73 (mt, -H4> 2,89 ja 3,10 (2dd, ) CH2 15:ssä) 3.26 (suuri d, -H^) 3,81 (s, >CH2 17:ssä) 4,68 (suuri s, -H27) 25 5,47 (d, -H 3) 6,12 (d, -Hn) 6.27 (mf, >NH 8:ssa) 7,18 (d, -H fenyylin orto-asemassa) 7,21 (t, -H fenyylin para-asemassa) 30 7,30 (t, -H fenyylin meta-asemassa) 8,11 (s, -II20) 2-dimetyyliamino-3-fenyyli(S)propaanitioli voidaan valmistaa seuraavalla tavalla: h 41 83326

Liuokseen, jossa on 20 g epäpuhdasta 2-dimetyy- 3 liamino-3-fenyyli(S)propaanitioliasetaattia 50 cm :ssä metanolia, lisätään typpiatmosfäärissä 0,2 g natrium-metylaattia ja seosta kuumennetaan palautusjäähdyt-5 täen 2 tunnin ajan. Seos konsentroidaan sitten kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, jolloin saadaan neste, joka puhdistetaan tislaamalla. Saadaan 2,4 g 2-dimetyyliamino-3-fenyyli(S)propaanitiolia värittömänä nesteenä /Kp. (14 Pa) = 95°Cj jota käytetään sellai-10 senaan seuraavassa reaktiossa.

2-dimetyyliamino-3-fenyyli(S)propaanitioliase-taatti voidaan valmistaa seuraavalla tavalla:

Typpiatmosfäärissä, 0°C:ssa, sekoitetaan 41,97 g trifenyylifosfiinia ja 310 cm^ tetrahydrofuraania ja 3 15 lisätään tipoittain 31,5 cm di-isopropyyliatsodikarbok- sylaattia ja annetaan sekoittua puolen tunnin ajan 0°C:ssa. Saatuun valkoiseen suspensioon lisätään tipoittain liuosta, jossa on 15 g 2-dimetyyliamino-3- 3 fenyylipropanolia (S) ja 11,44 cm tiolietikkahappoa 3 20 160 cm :ssä tetrahydrofuraania. Sen jälkeen kun seos ta on sekoitettu yhden tunnin ajan 0°C:ssa ja yhden tunnin ja 30 minuutin ajan 25°C:ssa, se konsentroidaan kuiviin alipaineessa 30°C:ssa. Saatu öljymäinen 3 tuote sekoitetaan 190 cm :iin metanolia, saostuva 25 valkoinen kiinteä aine poistetaan suodattamalla ja suodos konsentroidaan kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 3 30°C:ssa. Jäännös sekoitetaan sitten 200 cm :iin isopropyylioksidia, saostunut valkoinen kiinteä aine poistetaan uudelleen suodattamalla ja suodos konsent-30 roidaan, jolloin saadaan 45 g keltaista öljymäistä ainetta, joka puhdistetaan "flash"-kromatografiän avulla /eluenttirdikloorimetaani-metanoli (tilavuus-suhde 90-10)_J 100 cm"*: in fraktioita keräten. Sen jälkeen kun fraktiot 37-55 on konsentroitu kuiviin ali-35 paineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 10,4 g 2—dinetyy- 42 83326 liamino-3-fenyyli(S)propaanitioliasetaattia oranssinvärisenä öljymäisenä aineena (joka sisältää trifenyy-lifosfiinioksidia).

2-dimetvyliamino-3-fenyyli(S)propanoli voidaan 5 valmistaa T.Hayashin et ai., J. Org. Chem., 48, 2195 (1983), kuvaamaa menetelmää vastaavalla tavalla.

Esimerkki 12

Toimien esimerkissä 1 kuvattua vastaavalla tavalla, mutta käyttäen lähtöaineina 12,5 g:aa £2-(1 -pyrro- 10 lidinyyli)etyyli7-26-tiopristinamysiini Il^rtä (90 %

3 B

isomeeri A:ta), 1,47 cm :ä trifluorietikkahappoa, 3,86 g:aa metaklooriperbentsoehappoa, ja sen jälkeen kun tuote on puhdistettu "flash"-kromatografiän avulla /eluentti : klorof ormi-metanoli (tilavuussuhde 85—15 15 30 cm :n fraktioita keräten ja fraktiot 18-25 konsent roitu kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 3,9 g Q.-(1-pyrrolidinyyli)etyyli7-26-sulfinyylipristina-mysiini II^:tä (A i -isomeeriä 60 % , A 2 :.ta 25 B^:tä 15 o) keltaisena jauheena, jonka sulamispiste on noin 20 175°C.

NMR-spektri: (isomeeri ): 1,74 (s, -CH3 33:ssa) CH - 2,62 (mt, -N^ 2 ) 25 ^CH2- 2,70 - 3,20 (mt, ^CH2 15:ssä, -S-CH2CH2N<, -H4)

O

3,81 (s,;cil2 1 7 : ssä) 5,28 (suuri s, -H^) 30 5,45 (d, -H13) 6,14 (d, -Hn) 6,58 (mt, 'NH 8:ssa) 8,12 (s, -H20) 43 83326

Sen jälkeen kun fraktiot 26-43 on konsentroitu kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 4,36 g {2-(1-pyrrolidinyyli)etyyli7-26-sulfinyylipristinamy-siini II :tä (isomeeri A»:ta 75 %, isomeeri A.:tä 5 %, ö Z 1 5 isomeeri B^:tä 10 %, isomeeri B2: ta 10 %) keltaisena jauheena, jonka sulamispiste on noin 145°C.

NMR-spektri (isomeeri A2): 1,76 (s, “CII^ 33:ssa) 1.82 (m, ^CII2 pyrrolidinyylin -3:ssa ja -4:ssä) 10 2,63 (mt, -N-CH~-) l z ch2- 2,85 - 3,20 (mt, -S-CH2~CH2^ ja ^CH2 15:ssä) 3.82 (s,^CH2 17:ssä) 4,84 (dd, -H3 + d, -H27) 15 5,51 (d, -H13) 6,18 (d, -H^) 6,47 (mt, ^NH 8:ssa) 8,13 (s, -H2q) [2-(1-pyrrolidinyyli)etyyli7~26-tiopristinamysiini ΙΙβ 20 voidaan valmistaa souraavalla tavalla:

Toimien esimerkissä 3 kuvattua vastaavalla tavalla, mutta käyttäen lähtöaineina 5,25 g:aa pristinamysii-ni II :ta ja 1,7 g:aa 2-(1-pyrrolidinyyli)etaanitiolia

A

ja sen jälkeen kun 2-(1-pyrrolidinyyli)etaanitioli on 25 puhdistettu "flash”-kromatografiän avulla /eluentti: kloroformi-metanoli (tilavuussuhde 95—5)_7 ja sen jälkeen kun tuote on puhdistettu "flash"-kromatografiän avulla /eluentti :kloroformi-metanoli (tilavuussuhde 95-5).7 ja fraktiot 19-60 konsentroitu kuiviin alipaineessa 30 (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 3,9 g /2-(1-pyrrolidinyy- li) etyyli7-26-tiopristinamysiini II_.:tä keltaisena jau- £3 heena, jonka sulamispiste on noin 115°C.

44 83326 NMR-spektri: _CH2 1 ,90 (mt, 4H: -ii I ) X_ck2 /-2C Ί v 5 2,50 - 2,80 (m, 6H: -S-CH2CH2N I ) 3,40 (d, 1H: -H26) 4,75 (d, 1H: -¾) 8,10 (s, 11I: -H2g) 2-(1-pyrrol idinyyli)etaanitioli voidaan valmistaa J.W.

10 Haeffelen ja R.W. Brogen, Proc. Sci. Toilet Goods Assoc.

32, 52 ( 1959) /them. Abst. 54 , 17234e (1 960)7, kuvaaman menetelmän mukaan.

Esimerkki 13

Toimien esimerkissä 1 kuvattua vastaavalla taval- 15 la, mutta käyttäen lähtöaineina 6 g:aa (2-piperidinoetyy- li)-26-tiopristinamysiini IIR:tä (isomeeri A:ta), 0,69 3 ö cm :ä trifluorieti-kahappoa ja 1,82 g:aa 85 %:sta metakloo-riperbentsoehappoa, sen jälkeen kun tuote on puhdistettu "flash"-kromatografiän avulla /eluenttirkloroformi-meta- 3 20 noli (tilavuussuhde 85-15)7 20 cm :n fraktioita keräten ja fraktiot 52-105 konsentroitu kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 4,7 g keltaista kiinteää ainetta, joka puhdistetaan uudelleen "flash"-kromatogra- fian avulla /eluentti: kloroformi-metanoli (tilavuus- 25 suhde 85-15)7 5 cm :n fraktioita keräten. Sen jälkeen kun fraktiot 92-99 on konsentroitu alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 1,83 g keltaista kiinteää 3 ainetta, joka sekoitetaan 20 cm :iin etyylieetteriä, erotetaan suodattamalla ja kuivataan sitten alipainees-30 sa (2,7 kPa) 30°C:ssa. Näin saadaan 1,51 g (2-piperidino- etyyli)-26-tiopristinamysiini IIp:tä (isomeeri A^:ta 90.%, A^:tä 10 %) keltaisena jauheena, jonka sulamispiste on noin 162°C.

Il 45 8 3 326 NMR-spektri (4UO MHz, CDC13> : 1,52 (mf, -N^* ^-2 ) „-CH, 5 1.20 (mf, -N ) N-% 1,78 (s, -CH^ 33:ssa) 2.64 (mf, ) io "ar^ 2,80 (mt, -H.)

H

2,85 - 3,25 (mt, -S-CH,-CHn-N^) 0 2.94 ja 3,15 (2dd, ^ CH, 15:ssa) 15 3,20 (mt, -H0fe) 3,83 (s, ^ CH0 17:ssä) *.92 (d, -H27) 5,54 (d, -K^) 6,24 (d, -Kn) 20 6,70 (mf, ^ NH 8:ssa) 8'U (s· -H20>

Sen jälkeen kun fraktiot 100-140 on konsentroitu kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 2,11 g keltaista kiinteää ainetta, joka sekoitetaan 20 cm^:iin 25 etyylieetteriä, erotetaan suodattamalla ja kuivataan alipaineessa (90 Pa) 30°C:ssa. Saadaan 1,75 g (2-piperi-dinoetyyli)-26-tiopristinamvsiini IID:tä (isomeeri A^:tä 50 ηό, A^:ta 50 ö) keltaisena jauheena, jonka sulamispiste on noin 152°C.

30 NMR-spektri: 1,74 (s, -CH^ 33:ssa isomeeri A^rssä) 1,78 (s, -CH3 33:ssa isomeeri A9:ssa) 3,20 (mt, ~H26 isomeeri A2*.ssa) 3,46 (mt, -H_, isomeeri A1:ssä)

26 I

... 35 3,82 (AB rajoittaa, ^CH2 17:ssä isomeeri A^ssä) 46 83326 3,83 (s, ZCH2 17:ssä isomeeri A2:ssa) 4,90 (d, -H27~isomeeri A2:ssa) 5,30 (s, “H27 isomeeri A^rssä) 5,52 (d, -H isomeeri A„:ssä) 13 1 5 5,54 (d, -H 2 isomeeri A2:ssa) 6,60 (dd, -H isomeeri A :ssa) 5 2 6,70 (dd, -H5 isomeeri Akissa) 8,14 (s, isomeerien A2 ja A^ -H^) (2-piperidinoetyyli)-26-tiopristinamysiini II (isomee-

O

10 ri A) voidaan valmistaa seuraavalla tavalla:

Toimien esimerkissä 1 kuvattua vastaavalla tavalla, mutta käyttäen lähtöaineina 11,8 g:aa pristinamysii-ni II^:ta ja 3,58 g:aa 2-piperidinoetaanitiolia ja sen jälkeen kun tuote on puhdistettu "flash"-kromatografiän 15 avulla Zeluontti:kloroformi-metanoli (tilavuussuhde 85-15).7 60 cm3:n fraktioita keräten ja fraktiot 24-31 konsentroitu kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 8,3 g (2-piperidinoetyyli)-26-tiopristinamysii-ni II :tä (isomeeri A:ta) kirkkaankeltaisena jauheena, g 20 jonka sulamispiste on noin 120°C.

NMR-spektri: 1,08 (d, -CH3 32:ssa) 1,40- 1,60 (r.t, ) ✓- 25 1,60 „ 1,80 (nt, -N J ) \_CH? 1,73 (s, -CH^ 33:ssa) 2,'.:.- 2,90 (mt, -S-CH0-CH,-N " “ ) 30 3,43 (nt, -H?6) Cf'2 3,82 (s, 17:ssä) 4,71 (suuri s, -H^) 5,30 (d, -H ) 8,13 (s, -H ) " 35 47 83326 2-piperidinoetaanitioli voidaan valmistaa D.D.

Reynoldsin, D.L. Fieldsin ja D.L. Johnsonin, J. Org.

Chem., 26, 5125 (1961), kuvaamaa menetelmää täysin vastaavalla tavalla.

5 Esimerkki 14

Toimien esimerkissä 2 kuvattua vastaavalla tavalla, mutta käyttäen lähtöaineina 3,2 g:aa /2-(1-imidat- solyyli)etyyli7-26-tiopristinamysiini II_:tä (A-isomee-

B

riä 85 %, B-isomeeriä 15 %), 1 g:aa natriumbikarbonaat-10 tia ja 0,93 g:aa 98 l:sta metaklooripcrbentsoehappoa, sen jälkeen kun tuote on puhdistettu "flash"-kromato-grafian avulla /eluentti:kloroformi-metanoli (tilavuus-suhde 90-1Q)J 25 cm :n fraktioita keräten ja fraktiot 29-49 konsentroitu kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 15 30°C:ssa, saadaan 1,4 g keltaista kiinteää ainetta.

Saatu kiinteä aine puhdistetaan uudelleen "flash"-kroma-tografian avulla /eluentti:klorformi-metanoli (tilavuus-suhde 90-10)J7 10 cm :n fraktioita keräten. Sen jälkeen kun fraktiot 47-55 on konsentroitu kuiviin alipainees-20 sa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 0,62 g kirkaankeltais- ta kiinteää ainetta, joka sekoitetaan 20 emaliin etyy-lieetteriä, erotetaan suodattamalla ja kuivataan alipaineessa (90 Pa) 40°C:ssa. Näin saadaan 0,6 g /2-(1-imidatsolyyli)etyylj7-26-sulfinyylipristinamvsiini II :tä 25 (A2~isomeeriä) keltaisena kiinteänä aineena, jonka sula mispiste on noin 170°C.

NMR-spektri (400 MHz- CDCl^): 1,80 (s, -CH3 33:ssa) 2,72 (mt, -H4) 30 2,97 - 3,09 (2dd, ^CH2 15:ssä) 3,0 (mt, ~H~, ja ryhmän -S-CH~- toinen H) 26 4 2

O

3,48 (mt, ryhmän -S-CH-- toinen H) k 2 0 35 48 83326 3.82 (AB rajoittaa ^CH2 17:ssä) 4,53 (dd, ^N-CH2-) 4,77 (d, —H27) 5,52 (d, -H13) 5 6,16 (d, -H1t) 6,46 (dd, ^NH 8:ssa) 7,12 (s, -N-CH=CH-N= ) 7,69 (s,/jN-CH=N-) 8,16 (s, -H20) 10 Z.2- (1-imidatsolyyli)etyyli/-26-tiopristinamysiini ΙΙβ voidaan valmistaa esimerkissä 3 kuvattua vastaavalla tavalla, mutta käyttäen lähtöaineina 14,35 g:aa pristi-namysiini II^:ta ja 3,5 g:aa 2-(1-imidatsolyyli)etaani-tiolia, ja sen jälkeen kun seosta on sekoitettu 18 tun-15 nin ajan 20°C:ssa, tuote puhdistettu "flash"-kromatogra- fian avulla /eluentti:etyyliasetaatti-metanoli (tilavuus-suhde 80-20L7 ja fraktiot 34-59 konsentroitu kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan keltaista kiin- 3 teaä ainetta, joka sekoitetaan 60 cm :iin etyylieette-20 riä, erotetaan suodattamalla ,jolloin saadaan 10,9 g /2-(1-iroidatsolyylietyyli/—26—tiopristinamysiini ΙΙβ:tä (A-isomeeriä 85 «, B-isomeeriä 15 <,) keltaisena kiinteänä aineena, jonka sulamispiste on noin 160°C.

NMR-spektri: 25 1,53 (s, -CH^ B:n 33:ssa) 1.73 (s, -CH^ A:n 33:ssa) 2.74 (mt, A:n -H4> 2,86 ja 3,14 (2dd, ^CH2 A:n 15:ssä) 2,85 - 3,05 (mt, -SCH2~) 30 3,11 (mt, A:n -H„c)

λ O

3,32 (mt, B:n -¾) 3.82 (AB rajoittaa, ^CH2 A:n 17:ssä) 4,15 - 4,30 (mt, -CH2N') 4,58 (d, B:n -H2?) 35 4,68 (ohut d, A:n -H27) 49 83326 5,44 (d, A:n “H^) 6,16 (d, A:n -H1 ) 6,83 (dd, >NH A:n 8:ssa) 6,97 ja 7,08 (2s, B:n iN-CH=CHN<)

5 7,01 ja 7,10 (2s, A:n JN-CH=CHN<J

7,54 (s, B:n >N-CH=N-) 7,61 (s, A:n >N-CH=N-) 7,64 imt, 'NH B:n 8:ssa) 7,82 is, B:n -H2q) 10 8,09 is, A:n -H2Q) 2-(1-imidatsolyyli)etaanitioli voidaan valmistaa esimerkissä 11 kuvattua vastaavalla tavalla lähtöaineen valmistuksen osalta, mutta käyttäen lähtöaineina 21 g:aa 2-(1-imidatsolyyli)etaanitioliasetaattia ja 0,5 g:aa natrium-15 metylaattia. Sen jälkeen kun tuote on puhdistettu tis laamalla, saadaan 2,3 g 2-(1-imidatsolyyli)etaanitiolia öljymäisenä aineena /kp. (20 Pa) = 99,5°q7.

2-(1-imidatsolyyli)etaanitioliasetaatti voidaan valmistaa esimerkissä 11 kuvattua vastaavalla tavalla 20 lähtöaineen valmistuksen osalta, mutta käyttäen lähtö aineina 15 g:aa 2-(1-imidatsolyyli)etanolia, 70,2 g:aa 3 trifenyylifosfiinia, 55,8 cm :ä di-isopropyyliatsodikar- 3 boksylaattia ja 21 cm :ä tiolietikkahappoa. Sen jälkeen kun tuote on puhdistettu "flash"-kromatografiän avulla 25 /eluentti:metyleenikloridia 1500 cm , sen jälkeen seos ta etyyliasetaatti-metanoli (tilavuussuhde 80-200 3 100 cm :n fraktioita keräten ja fraktiot 21-35 konsentroitu kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 21,14 g 2-(1-imidatsolyyli)etyylitioliasetaattia orans-30 sinkeltaisena öljymäisenä aineena, jota käytetään ilman lisäpuhdistusta.

2-(1-imidatsolyyli)etanoli voidaan valmistaa J. Geibelin et ai., J. Am. Chem. Soc., 100, 3575 (1978), kuvaamaa menetelmää vastaavalla tavalla.

50 83326

Esimerkki 15

Toimien esimerkissä 2 kuvattua vastaavalla tavalla, mutta käyttäen lähtöaineina 5,5 g:aa (2-morfolino-etyyli)-26-tiopristinamysiini II :tä (isomeeri A:ta), o 5 1,3 g:aa natriumbikarbonaattia, 1,4 g:aa 98 %:sta meta- klooriperbentsoehappoa, saadaan sen jälkeen kun reaktio-seos on uutettu, orgaaninen faasi kuivattu magnesium-sulfaatin pinnalla, suodatettu ja konsentroitu kuiviin alipaineessa t2,7 kPa) 30°C:ssa, Kirkkaankeltaista kiin-10 teää ainetta, joka sekoitetaan 100 cm :iin isopropyyli- oksidia, erotetaan suodattamalla ja kuivataan sen jälkeen alipaineessa (90 Pa) 35°C:ssa. Näin saadaan 4,8 g .(2-morfolinoetvvli)-26-sulfinvvlipristinamvsiini IIβ:tä £A2~isomeeriä) kirkkaankeltaisena kiinteänä aineena, 15 jonka sulamispiste on noin 126°C.

NMR-spoktri: 1,77 (s, —CU2 33:ssa) ^CH - 2,6 - 3,1 (mt, -SCH„-CH.N “ -ia -H ) 20 i ‘ 2 V CH„- 3 0 2,95 ja 3,13 (2dd, *CH2 15:ssä 3.20 (mt, -H ) 3,81 ( s , ^CH2 1 7 : ssä) 4,85 (mt, -H27) 25 5,53 (d, -H13) 6.20 (d, -H11) 6,53 (mf, ✓NH 8:ssa) 8,14 (s, -H20) (2-morfolinoetyyli)-26-tiopristinamysiini ΙΙβ (isomee-30 ri A) voidaan valmistaa esimerkissä 1 kuvattua vastaa valla tavalla, mutta äyttäen lähtöaineina 15 g:aa pris-. . tinamysiini II :ta ja 6,3 g:aa 2-morfolinoetaanitiolia.

Sen jälkeen kun tuote on puhdistettu "flash"-kromatogra-fian avulla /cluentti:etyyliasetaatti-mctanoli (tila-35 vuussuhdo /5-251730 cm :ssa, saadaan 11 g boigenväris- tä kiinteää ainetta, joka kiteytetään 120 cm^:ssä aseto- li 5i 83326 nitriiliä. Näin saadaan 5,7 g (2-morfolinoetyyli)- 26-tiopristinamysiini II :tä (isomeeri A:ta) valkoisi-

B

na kiteinä, joiden sulamispiste on 132°C.

NMR-spektri: 5 1,73 (s, -CH3 33:ssa) ^CH2" 2,50 (mf , -N ) ch2- 2,6 - 2,9 (mt, -H4) 10 2,64 (mt, ^N-CH2-) 2,79 (mt, -SCH2~) 2,91 ja 3,11 (2dd, >CH2 15:ssä) 3,37 (suuri d, -H2(-) ^ch2- 15 3,74 (mf, 0 ) ^CH,- 3,83 (s, )CII2 1 7 : ssa) 4,74 (suuri s, -H^) 5,45 (d, -H13) 20 6,13 (d, -H11) 6,28 (mf, >NH 8:ssa) 8,13 (s, -H2q) 2-morfolinoetaanitioli voidaan valmistaa D.D. Reynoldsin et ai., J. Org. Chem., 26, 5125 (1961), kuvaamaa mene-23 telmää vastaavalla tavalla.

Esimerkki 16

Toimien esimerkissä 1 kuvattua vastaavalla tavalla, mutta käyttäen lähtöaineina 5,8 g:aa (2-butyyliaminoetyy- 1i)-26-tiopristinamysiini II :tä (A-isomeeriä 80 %,

3 B

3q B-isomeeriä 20 %), 0,68 cm :ä trifluorietikkahappoa, 1,8 g:aa metaklooriperbentsoehappoa ja sen jälkeen kun tuote on puhdistettu "flash"-kromatografiän avulla /eluent- 3 ti:kloroformi-metanoli (tilavuussuhde 90-10L7 15 cm :n fraktioita keräten ja fraktiot 9-15 konsentroitu kuiviin 3^ alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 1,7 g (2-butyy- 1 iami noetyy 1 i)-26-sulf inyyl ipr Lstinamysiin i limitä (A.,-isomeeriä 70 V,, B^-isomeeriä 15 %, B2-isomceriä 15 %) kel- 52 83326 täisenä jauheena, jonka sulamispiste on noin 140°C. NMR-spektri (A^-isomeeri): 0,85 - 1,00 (mt, _CH^ 31:ssä ja 30:ssa + ketjun -ch3) 5 1,34 (mt, -CH2CH3) 1,48 (mt, -CH2CH2CH2CH3 1,75 (s, -CH3 33:ssa) 2.50 - 3,30 (mt, -H^, ^CH2 2:ssa, -s-ch2-ch2-n-ch2-, -h4) 10 ö 3.80 (s,^CH2 17:ssä) 4.80 (d, -H27) 5.50 (d, -H13) 6,17 (d, -H11) 15 6,40 (dd, ^NH 8:ssa) 8.12 (s, -H20)

Sen jälkeen kun fraktiot 18-24 on konsentroitu alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 0,5 g (2-butyy-liaminoetyyli)-26-sulfinyylipristinamysiini limitä 20 (A^-isomeeriä 85 %, B.j-isomeeriä 15 %) keltaisena jauheena, jonka sulamispiste on noin 170°C.

NMR-spektri (A^-isomeeri): 0,85 - 1,00 (mt, -CH3 31:ssä, 30:ssa ja ketjun -ch3) 25 1,33 (mt, -CH2CH3) 1,47 (mt, -CH2CH2CH2CH3) 1,71 (s, -CH3 33:ssa) 2.50 - 3,25 (mt, -S-CH„CH nC ja -Hj

^ Δ 2. H

o 30 3,79 (AB rajoittaa, 17:ssä) 5,26 (d, -H2?) 5,44 (d, -H13) 6.13 (d, -Hn)

II

53 83326 6,62 (mt, ^NH 8:ssa) 8,10 (s, -H20) (2-butyyliaminoetyyli)-26-tiopristinamysiini II_. (A-iso-

D

meeriä 80 %, B-isomeeriä 20 %) voidaan valmistaa alla 5 esimerkissä 17 kuvatulla tavalla.

Esimerkki 17

Toimien esimerkissä 1 kuvattua vastaavalla tavalla, mutta käyttäen lähtöaineina 3,15 g:aa (2-butyyli-aminoctyyli)-26-tiopristinamysiini limitä (B-isomeeriä), 10 0,37 cm3;ä trifluorietikkahappoa, 0,97 g:aa metakloo- riperbentsoehappoa ja sen jälkeen kun tuote on puhdistettu "flash"-kromatografiän avulla ^eluenttirklorofor- 3 mi-metanoli (tilavuussuhde 90-10J_7 15 cm :n fraktioita keräten ja fraktiot 18-35 konsentroitu kuiviin alipai-15 neessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 1,18 g (2-butyyli- aminoetyyli)-26-sulfinvvlipristinamysiini IIp;tä (B^-isomeeriä 65 %. B2-isomeeriä 35 %) keltaisena jauheena, jonka sulamispiste on noin 140°C.

NMR-spektri: 20 0,90 - 1 ,05 (mt, —CII^ 30:ssa ja 31:ssä ja B^ :n ja B2:n ketjun -CH3) 1,40 (mt, B^:n ja B2:n -CI^CH^) 1,50 (mt, Bi:n ja B2:n -CH2CH2CH2CH3) 1,57 (s, -CH3 B^:n ja B2:n 33:ssa) 25 2,63 (t, B^:n ja B2:n ^NCH2CH2CH2CH3) 2,65 - 3,30 (mt, -S-Ct^C^NC , 7CH2 15:ssä, 0 B.j :n ja B2 :n -H^) 3.74 ja 3,92 (2d, ^CH2 B^n 17:ssä) 30 3,73 ja 3,94 (2d, 'CH2B2:n 17:ssä) 4.78 (d, B2:n -H2?) 4.75 - 4,90 (mt, B^:n ja B2:n “H^3 ja -H^) 5,27 (d, B1:n -H2?) 5,70 (2d, B^ :n ja B2:n -H^) 35 7,69 (dd, ;NH B2:n 8:ssa) 7.79 (dd, 2NH B^:n 8:ssa) 54 83 326 7.84 (s, B2:n -H2Q) 7.85 (s, B1:n -H2Q)

Toimien esimerkissä 3 kuvattua vastaavalla tavalla, mutta käyttäen lähtöaineina 25 g:aa pristinamysiini IIn:tä 5 ja 6,34 g:aa 2.butyyliaminoetaanitiolia ja sen jälkeen kun tuote on puhdistettu "flash"-kromatografiän avulla ^eluentti:kloroformi-metanoli (tilavuussuhde 90-10)7 60 cm^:n fraktioita keräten ja fraktiot 12-15 konsentroitu kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 10 3,15 g (2-butyyliaminoetyyli)-26-tiopristinamysiini II_:tä ti (B-isomeeriä) keltaisena jauheena, jonka sulamispiste on noin 110°C. Sen jälkeen kun fraktiot 15-25 on konsentroitu kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 5,89 g (2-butyyliaminoetyyli)-26-tiopristinamysiini 15 Il^rtä (A-isomeeriä 80 %, B-isomeeriä 20 %).

Esimerkki 18

Toimien esimerkissä 1 kuvattua vastaavalla tavalla, mutta käyttäen lähtöaineina 8,6 g:aa (2-dekyyli-aminoetyyli)-26-tiopristinamysiini IID:tä 0,9 cm^:ä 13 20 trifluorietikkahappoa, 2,35 g:aa metaklooriperbentsoe- happoa ja sen jälkeen kun tuote on puhdistettu "flash"-kromatografiän avulla /eluenttirkloroformi-metanoli (tilavuussuhde 90-10)J7 4 0 cm^:n fraktioita keräten ja fraktiot 12-15 konsentroitu kuiviin alipaineessa (2,7 25 kPa) 30°C:ssa, saadaan 1,5 g (2-dekvvliaminoetyvli)- 26-sulfinvvlipristinamvsiini II :tä (80 % A -isomee-

B Z

riä) keltaisena jauheena, jonka sulamispiste on noin 128°C.

NMR-spektri: 30 0,88 /t, ~(CH2)9 “CH37 1 ,30 fm, ( ;CH2) g7 1,50 /m, ( ^CH2)&7 1,77 (s, -CH^ 33:ssa) 4,81 (d, -II2?) 35 5,51 (d, -H13) 6,19 (d, -H11) 55 83326 6,53 (mt, ^NH 8:ssa) 8,13 (s, -H2q)

Sen jälkeen kun fraktiot 5-19 on konsentroitu kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 2,51 g 5 (2-dekvvliaminoetyyli)-26-sulfinyylipristinamysiini IID:tä (isomeerien seosta) keltaisena jauheena, jonka sulamispiste on noin 124°C.

NMR-spektri (isomeerityyppien A2 50 %, 15 %, 20 % ja B2 15 % seos): 10 1,54 (s, “CH3 B^:n ja B2:n 33:ssa) 3,72 ja 3,88 (2d, >CH2 B1:n 17:ssä) 3,70 ja 3,92 (2d, ^CH2 B2:n 17:ssä) 4,75 (d, B2:n -H2?) 5,25 (d, Βί:n -H27> 15 7,(>7 (dd, 5NII B2:n 8:ssa) 7,77 (dd, ;NII B^rn 8:ssa 7,81 (s, B^:n ja B2:n -H^) (isomeerien A2 ja A^ karakteristiset piikit ovat täysin samoja kuin ne, jotka on vastaavasti esitetty edellä ja 20 jäljempänä).

(2-dekyyliaminoetyyli)-26-sulfinyylipristinamysiini Ilgistä saadaan 1 %:nen hydrokloridimuodossa oleva vesiliuos sekoittamalla: (2-dekyyliaminoetyyli)-26-sulfinyylipristinamysiini 25 IID:tä 15 mg B 3 0,1-N kloorivetyhappoa 0,20 cm 3 tislattua vettä qsp 1,5 cm

Sen jälkeen kun fraktiot 20-24 on konsentroitu kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 30 1,12 g (2-dekyyliaminoetyyli)-26-sulfinyylipristina mysiini Ilgitä (isomeeriä 60 %, A2 20 %, B^ 20 %) keltaisena jauheena, jonka sulamispiste on noin 136°C.

., 83326 56 NMR-spektri : 2.50 - 3,20 (mt, >CH2 15:ssä, -H^ ja -S-CH„CH_-N-CH_-) ψ 2 2 2 0 5 3,82 (AB rajoittaa, £CH2 17:ssä) 5,27 (d, -H27) 5,46 (d, -H13) 6,15 (d, -Hn) 6,62 (mt, iNH 8:ssa) 10 8,12 (s, -II ) 20 (2-dekyyliaminoetyyli)-26-tiopristinamysiini II voi-

B

daan valmistaa seuraavalla tavalla:

Toimien esimerkissä 3 kuvattua vastaavalla tavalla, mutta käyttäen lähtöaineina 5,25 g:aa pristinamysii-15 ni IIA:ta ja 3,26 g:aa 2-dekyyliaminoetaanitiolia ja sen jälkeen kun tuote on puhdistettu "flash"-kromatogra-fian avulla /eluentti:metyleenikloridi-metanoli (tilavuussuhde 95-5)_/ ja fraktiot 20-43 konsentroitu kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 1,2 g (2-dekyy-20 liaminoetyyli)-26-tiopristinamysiini IIB:tä keltaisena jauheena, jonka sulamispiste on noin 80°C.

NMR-spektri (A- ja B-isomeerin seos 70-30): 0,88 (t, -CH3) 1 ,30 7 25 ’ (mt, -(CH2)8)-) 1.53 1.54 (s, -CH^ B:n 33:ssa) 1.72 (s, -CH3 A:n 33:ssa) 2,6-3 (mt, -SCH2-CH2-N-CH2-) 30 3,38 (suuri d, A:n ~H26) 3.50 (mt, B:n -H2g) 4,64 (d, J=3,5, B:n ~H27) 4.72 (suuri s, A:n “H27) 7,80 (s, B:n -H2q) 35 8,12 (s, A:n -H2Q)

II

57 83326

Esimerkki 19

Toimien esimerkissä 1 kuvattua vastaavalla tavalla, mutta käyttäen lähtöaineina 4,4 g:aa (2-syklo·4· heksyyliaminoetyyli)-26-tiopristinamysiini II_:tä (A-

3 B

5 isomeerejä 80 %, B-isomeerejä 20 %), 0,5 cm :ä trifluo- rietikkahappoa, 1,15 g:aa metaklooriperbentsoehappoa, ja sen jälkeen kun tuote on puhdistettu "flash"-kromato-grafian avulla /eluenttirkloroformi-metanoli (tilavuus-suhde 90-10)_7 40 cm :n fraktioita keräten ja fraktiot 10 24-29 konsentroitu kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 0,38 g (2-sykloheksyyliaminoetyyli)-26-sulfinyylipristinamysiini Ilgttä (A^-isomeeriä 90 %) kirkkaankeltaisena jauheena, jonka sulamispiste on noin 166°C.

15 NMR-spektri: 1 ,05 - 1,35 /mt, sykloheksyyIin ;CH2 (osittain)J7 1,77 (s, -CH^ 33:ssa) 1,55 - 2,25 /mt, ^CH2 25:ssä, sykloheksyylin -H2g ja^CH2 (osittain)_7 20 2,45 - 3,35 (mt, -H2g, ^CH2 15:ssä, -H4 ja -S-CH0CH0N-CH£) * 2 2

O

3,82 (s, 'CH2 17:ssä) 25 4,82 (d, -H27) 5,52 (d, -H13) 6,19 (d, -Hn) 6,38 (dd, ^NH 8:ssa) 8,14 (s, -H20)

30 (2-sykloheksyyliaminoetyyli)-26-tiopristinamysiini II

n voidaan valmistaa seuraavalla tavalla:

Toimien esimerkissä 3 kuvattua vastaavalla tavalla, mutta käyttäen lähtöaineina 5,25 g:aa pristinamysii-ni IIA:ta ja 3,6 g:aa 2-sykloheksyyliaminoetaanitiolia, 35 ja sen jälkeen kun tuote on puhdistettu "flash"-kromato- grafian avulla /eluentti:kloroformi-metanoli (tilavuus- 58 8 3 3 2 6 suhde 93-7L7 ja fraktiot 7-18 konsentroituu kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 1,7 g (2-syk-loheksyyliaminoetyyli)-26-tiopristinamysiini ΙΙβ:tä beigenvärisenä jauheena, jonka sulamispiste on 5 noin 120°C.

NMR-spektri: 1, 1,14 /iht, sykloheksyylin ^CH2 (osittain)_7 1,54 (s, -CH^ isomeeri B:n 33:ssa) 1,73 (s, -CH^ isomeeri A:n 33:ssa) 10 1,6-2 /mt, sykloheksyylin *CH2 (osittain)^ 2.80 (mt, ^NCH2-) 2,93 (t, -SCH2-) 3,36 (suuri d, isomeeri A:n -H„,)

Zb 3.50 (mt, isomeeri B:n -H ,) 2b 15 4,64 (d, J=3, isomeeri B:n -H27) 4,72 (suuri s, isomeeri A:n -H27) 6.50 (mt, isomeeri A:n -NHg) 7,75 (mt, isomeeri B:n -NHg) 7.80 (s, isomeeri B:n -H2Q) 20 8,12 (s, isomeeri A:n -H2q) 2-sykloheksyyliaminoetaanitioli voidaan valmistaa D.D. Reynoldsin, M.K. Massadin, D.L. Fieldsin ja D.L. Johnsonin, J. Org. Chem., 26, 5109 (1961), kuvaaman menetelmän mukaan. Esimerkki 20 25 Toimien esimerkissä 2 kuvattua vastaavalla taval la, mutta käyttäen lähtöaineina 5 g:aa (N-sykloheksyyli-N-metyyli-2-aminoetyyli) -26-tiopristinamysiini II_,: tä (A-isomeeriä 80 %, B-isomeeriä 20 %), 1,17 g:aa natriumbikarbonaattia, 1,2 g:aa 98 %:sta metaklooriperbentsoe-30 happoa, sen jälkeen kun tuote on puhdistettu "flash"- kromatografiän avulla /eluenttiidikloorimetaani-metanoli (tilavuussuhde 80-20)^7 30 cm :n fraktioita keräten ja fraktiot 40-60 on kosentroitu kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 3,5 g keltaista kiinteätä 35 ainetta, joka puhdistetaan uudelleen "flash"-kromatogra- fian avulla /eluentti:etyyliasetaatti-metanoli (tila- li 3 59 83326 vuussuhde 80—20)J7 25 cm :n fraktioita keräten. Sen jälkeen kun fraktiot 11-18 on konsentroitu kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 1,2 g keltaista 3 kiinteää ainetta, joka sekoitetaan 30 cm :iin etyyli-5 eetteriin, erotetaan suodattamalla ja kuivataan alipai neessa (90 Pa) 35°C:ssa. Näin saadaan 1,1 g (N-svklo-heksyyli-N-metyyli-2-aminoetvvli)-26-sulfinvvlipristina-mysiini IIp:tä (A^-isomeeriä) keltaisena jauheena, jonka sulamispiste on noin 126°C.

10 NMR-spektri: 1,10 - 2 (mt, sykloheksyylin ^CH2) 1,76 (s, -CH3 33:ssa) 2,34 (s, >N-CH3) 2,45 (mt, ^N-CHl ) 15 2,7 - 3,15 (mt, -S-CH2-CH2N4 ja -H4)

O

2,93 ja 3,14 (2dd, ^CH2 15:ssä) 3,25 (ddd, -H26) 3,82 (s, ;CH2 1 7 : ssä) 20 4,82 (d, -H2?) 5,52 (d, -H13) 6,18 (d, -H11) 6,43 (dd, λΐΗ 8:ssa) 8,13 (s, -H20) 25 (N-sykloheksyyli-N-metyyli-2-aminoetyyli)-26-tiopristina- mysiini IID (isomeeri A:ta 80 %, B:tä 20 %) voidaan vai-

D

mistaa esimerkissä 3 kuvattua vastaavalla tavalla lähtöaineen valmistuksen osalta, mutta käyttäen lähtöaineina 10,5 g:aa pristinamysiini IIA:ta ja 4 g:aa N-syklo-30 heksyyli-N-metyyli-2-aminoetaanitiolia. Sen jälkeen kun tuote on puhdistettu "flash"-kromatografiän avulla Zeluentti:etyyliasetaatti-metanoli (tilavuussuhde 80-20)J 30 cm :n fraktioita keräten ja fraktiot 42-96 konsentroitu kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, 35 saadaan keltaista kiinteää ainetta, joka sekoitetaan 80 cm :iin isopropyylioksidia, erotetaan suodattamal- 6o 83326 la ja kuivataan alipaineessa (90Pa) 35°C;Ssa. Näin saadaan 7,9 g (N-sykloheksyyli-N-metyyli-2-aminoetyy-li)-26-tiopristinamysiini limitä (A-isomeeriä 80 % ja B-isomeeriä 20 %) keltaisena jauheena, jonka sula-5 mispiste on noin 116°C.

NMR-spektri (A- ja B_isomeerin seos 80/20): 1.25 ja 1,6 - 1,9 (mt, A:n ja B:n syklohek-syylin ^CH2) 1,56 (s, -CH^ B:n 33:ssa) 10 1,73 (s, -CH^ A:n 33:ssa) 2.25 - 2,5 (mt, A:n ja B:n sykloheksyylin , CH-) 2,32 (s, B:n >N-CH3) 2.35 (s, A:n ^N-CH3) 2,6 - 2,8 (mt, A:n ja B:n -H4) 15 2,78 (AB rajoittaa, A:n ja B:n -SCH2CH2N') 2,9 ja 3,14 (2dd, 'CH2 A:n 15:ssä) 3,41 (suuri d, A:n -H_,)

Z O

3,73 ja 3,91 (2d, -CII2 B:n 17:ssä) 3,83 (s, ^CH2 A:n 17:ssä) 20 4,65 (d, B:n -H2?) 4,76 (suuri s, A:n -H^) 5,49 (d, A:n -H.^) 6,16(d,A:n-H^) 6.36 (mf, ^NH A:n 8:ssa) 25 7,73 (mf, 'NH B:n 8:ssa) 7,82 (s, B:n -¾) 8,13 (s, A:n -¾) N-sykloheksyyli-N-metyyli-2-aminoetaanitioli voidaan valmistaa seuraavalla tavalla: 30 20 g:aan S-(N-sykloheksyyli-N-metyyli-2-amino- etyyli)isotiouroniumdihydrokloridia lisätään typpiat- 3 mosfnärissä 23 cm 6-N natriumkarbonaatin vesiliuosta. Seosta sekoitetaan kahden tunnin ajan 100°C:ssa ja jäähdytetään sen jälkeen 25°C:seen ja lisätään siihen 35 väkevää kloorivetyhappoliuosta, kunnes pH on 9. Liuos ta pestään kolme kertaa 50 cm :llä dikloorimetaania ja

II

6i 83326 sen jälkeen orgaaniset faasit yhdistetään, kuivataan magnesiumsulfaatin pinnalla, suodatetaan ja konsentroidaan kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, jolloin saadaan öljymäistä ainetta, joka puhdiste-5 taan alipainetislauksella (130 Pa). Saadaan 4,3 g N-sykloheksyyli-N-metyyli-2-aminoetaanitiolia värittömänä nesteenä ^Kp. (130 Pa)=68°Q7.

N-sykloheksyyli-N-metyyli-2-aminoetaanitiouro-niumdihydrokloridi voidaan valmistaa seuraavalla 10 tavalla:

Liuokseen, jossa on 30 g 2-(N-sykloheksyyli- 3 N-metyyliamino)1-kloorietaanihydrokloridia 300 cm :ssä etanolia, lisätään 10,7 g tioureaa. Saatua liuosta pidetään 78°C:ssa 18 tunnin ajan. Jäähdytyksen jälkeen 15 saatu valkoinen kiinteä aine suodatetaan ja huuhdel laan etanolilla. Näin saadaan 21,5 g N-sykloheksyyli-N-metyyli-2-aminoetaanitiouroniumdihydrokloridia valkoisena kiinteänä aineena, jonka sulamispiste on 248°C.

2-(N-sykloheksyyli-N-metyyliamino)-1-kloorietaa-20 nihydrokloridi voidaan valmistaa seuraavalla tavalla: 3 120 cm :iin tionyylikloridia lisätään tipoit- tain 25 g N-sykloheksyyli-N-metyyli-2-aminoetanolia ja sen jälkeen seosta pidetään 70°C:ssa 24 tunnin ajan. Kun ylimääräinen tionyylikloridi on tislattu 25 pois, saadaan oranssinväristä öljynäistä ainetta, 3 joka sekoitetaan 200 cm :iin etyylieetteriä, jolloin saadaan valkeaa kiinteää ainetta, joka erotetaan suodattamalla ja pesätän sen jälkeen eetterillä. Saadaan 30 g 2-(N-sykloheksyyli-N-metyyliamino)-1-kloorietaa-30 nihydrokloridia valkeana kiinteänä aineena, jonka su lamispiste on 154°C.

62 8 3 3 2 6

Esimerkki 21

Toimien esimerkissä 1 kuvattua vastaavalla tavalla, mutta käyttäen lähtöaineina 4,3 g:aa £"(4-metyyli-1-piperatsinyyli)-2-karbonyylioksietyyli7-26-tiopristina- 3 5 mysiini II_,:tä (isomeeri A:ta), 0,45 cm :ä trifluori-

O

etikkahappoa, 1,2 g:aa metaklooriperbentsoehappoa, ja sen jälkeen kun tuote on puhdistettu "flash"-kromatogra-fian avulla /eluentti: kloroformi-metanoli (tilavuus-suhde 90-10)_7 30 cm^:n fraktioita keräten ja fraktiot 10 42-56 konsentroitu alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 1 ,2 g/~(4-metyyli-1 -piperatsinvvli) -2-karbonyy-lioksietyyli7-26-sulfinyylipristinamysiini IIβ;tä (A^-iso-meeriä) kirkkaankeltaisena jauheena, jonka sulamispiste on noin 135°C.

15 NMR-spektri: 1 ,78 (s, -CH3 33:ssa) 2,32 (s, iN-CH3) 2,42 (m, -C0-N ‘ N- ) 20 2,95 - 3,28 (2mt, -S-CH -) o 3,54 (e, -CO-N ~ N- ) ^ CH,_/ 25 3,82 (s,/ CH2 1 7 : ssä) 4,58 (nt -CHo-0-C-N\ ) 0 4,82 (d, -H,.) L· / 5,50 (d. -Hj3) 30 6,20 (d, -Hn) 6,39 (dd,) KH 8 : ssa) 8,14 (s, -H2q) 63 8 3 3 2 6

Sen jälkeen kun fraktiot 65-95 on konsentroitu kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa saadaan 0,65 g /"(4-metyyli-1-piperatsinyyli)-2-karbonyy1ioksi-etyyliJ-26-sulfinyylipristinamysiini IIB:tä (A^-isomee-5 riä) kirkkaankeltaisena jauheena, jonka sulamispiste on noin 140°C.

NMR-spektri: 1,75 (s, -CH^ 33:ssa) 2,34 (s, >N-CH3) 10 ^_CH,^ 2,44 (m, -CO-N ) \_Ch2y 2,90 -3,15 (rat, -S-CH^,-) >1 0 ^CH,-^ 15 3,55 (m, -CO-N “ N- ) xch2_/ 3,83 (s.icH, - 17) L· 4,51- 4,65 Cddd, -CH.-O-C-NC')

2 l| N

O

.. 20 3,28 (d, -H27) : ' 6,19 (d, —Hj j) 6,55 (dd.^NH 8:ssa) 8,14 (s, -H2q) 25 /’(4-metyyli-1-piperatsinyyli)-2-karbonyylioksietyyliy~ 26-tiopristinamysiini ΙΙβ voidaan valmistaa seuraavalla tavalla:

Toimien esimerkissä 3 kuvattua vastaavalla tavalla, mutta käyttäen lähtöaineina 5,25 g:aa pristinamysiini 30 IIa:ta ja 3,76 g:aa (4-metyyli-1-piperatsinyyli)-2-kar- bonyylioksietaanitiolia, ja sen jälkeen kun tuote on puhdistettu "flash"-kromatografiän avulla Zeluentti:kloro-formi-metanoli (tilavuussuhde 90-10),7 ja fraktiot 10-18 konsentroitu kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, 35 saadaan 2,55 g /(4-metyyli-1-piperatsinyyli)-2-karbonyy- 1ioksietyyLi/-26-tiopristinnmysiini liettä beigenvärise-nä jauheena, jonka sulamispiste on noin 100°C.

64 83326 NMR-spektri: 1.54 (s, -CH3 isomeeri B:n 33:ssa) 1,73 (s, “CH3 isomeeri A:n 33:ssa) 2.3 (s, iN-CH,) 5 -CH2^ 2.4 (m, N-) -CH^ ‘ /CH - 3.55 (m, -OOC-N L ) ^ ch2- 10 3,98 (mt, -CH2-OCO-) 4,59 (d, J=4, isomeeri B:n -H27) 4,69 (suuri s, isomeeri A:n -H.^) 7.05 (t, ^NH isomeeri A:n 8:ssa) 7,7 (m, ,>NH isomeeri B:n 8:ssa) 15 7,80 (s, isomeeri B:n -H2Q) 8,10 (isomeeri A:n -H ) 20 (4-metyyli-1-piperatsinyyli-2-karbonyylioksietaanitioli voidaan valmistaa D.D. Reynoldsin D.L. Fieldsin ja D.L. Johnsonin, J. Org. Chem. 26, 5111 (1961), kuvaa-20 man menetelmän mukaan.

Esimerkki 22

Toimien esimerkissä 1 kuvattua vastaavalla tavalla, mutta käyttäen lähtöaineina 7,8 g:aa /ί-metyyli-2(S)- pyrrolidinyyli7~26-metyylitiopristinamysiini IIn:tä

3 B

25 (A-isomeeriä), 0,91 cm :ä trifluorietikkahappoa, 2,4 g:aa metaklooriperbentsoehappoa, ja sen jälkeen kun tuote on puhdistettu "flash"-kromatografiän avulla /eluentti;kloroformi-metanoli (tilavuussuhde 90-10)^7 3 60 cm :n fraktioita keräten ja fraktiot 26-36 konsent-30 roitu kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saa daan 2,3 g /1-metyyli-2(S)pvrrolidinvvli7-26-metYYli-sulfinyylipristinamysiini II :tä (A?-isomeeriä) kirk-kaankeltaisena jauheena, jonka sulamispiste on noin 140°C.

li 65 83326 NMR-spektri: 1,76 (s, -CH3 33:ssa) 2,43 (s, 2NCH-,) 3 i 1.70 - 2,60 (mc, -H ja^CR 25:ssä ja ) * ^ ( CH, I Γ CH,-CH„ 2,75 - 3,25 (mt -S-CH^-CH^) ~ 0 3,82 (s,/CH2 17:ssä 10 ^,81 (d, -H27) 5,52 (d, -HJ3) 6,20 (d, -Hn) 6,42 (dd , ^ NH 8 : ssa) 8,14 (s, -H20) 15 Sen jälkeen kun fraktiot 46-59 on konsentroitu kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 1,1 g /1-metyyli-2(S)pyrrolidinyyli/^e-metyylisulf inyyli- pristinamysiinilimitä (A^-isomeeriä) kirkkaankeltaisena jauheena, jonka sulamispiste on noin 148°C.

20 NMR-spektri: 1,73 t s, -CH, 33 : ssa\

3 I

1.70 “ 2,50 (mt, Νχ , -Hoq) r 1¾ " CH2—ch2 25 2,41 (s, ^N-CH3) 2,65 - 3,25 (mt, CH^ 15:ssä, -H 4:ssä. -S-CH--CH)

O

30 3,82 (AB rajoittaa, ^CH2 17:ssä) 5,45 (d, -H13) 6,17 (d, -Η1Ί) 8,11 (s, -H20) 66 83326 (1-metyyli-2-pyrrolidinyyli)-26-metyylitiopristinamy- siini II voidaan valmistaa seuraavalla tavalla: 13

Toimien esimerkissä 3 kuvattua vastaavalla tavalla, mutta käyttäen lähtöaineina 10,5 g:aa pristinamysii-5 ni IIA:taja3,14 g:aa /1 -metyyli-2 (S) pyrrol id inyyli_7me-taanitiolia, ja sen jälkeen kun tuote on puhdistettu "flash"-kromatografiän avulla /eluentti:kloroformi-meta-noli (tilavuussuhde 90-10)_7 ja fraktiot 20-35 konsentroitu alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 7,8 g A-iso-10 meeriä keltaisena jauheena, jonka sulamispiste on noin 120°C.

NMR-spektri: 1,70 (s, -CH3 33:ssa) 2,38 (s, ;n-CH3) | 15 ) 1 ,70 - 2,50 (mt, _H29' 'CH2 2^:ssä 3a ^ ^—2

CH0—CH

—L —/ 2,6 - 3,20 (mt, -S-d^-CHi) 3,82 (s, ):CH2 1 7 : ssä) 20 4,73 (d, -H27) 5,45 (d, -Hl3) 6,15 (d, -Hn) 6,41 (dd, ^NH 8:ssa) 8,11 (s, -H ) y e ^ υ

Liuokseen, jossa on 25 g epäpuhdasta S-£l-metyyli- 2 (S)pyrrolidinyylimetyyli_7isotiouroniuradihydroklori- 3 3

dia 100 cm :ssä tislattua vettä, lisätään 100 cm 4-N

natriumkarbonaatin vesiliuosta ja seosta sekoitetaan 90°C:ssa typpiatmosfäärissä kahden tunnin ajan. Reaktio- seos jäähdytetään 0°C:seen, siihen lisätään 25 cm2 12—N kloorivetyhapon vesiliuosta ja uutetaan sen jälkeen 3 kaksi kertaa 200 cm ;llä metyleenikloridia. Orgaaninen faasi kuivataan natriumsulfaatin pinnalla, suodatetaan ja konsentroidaan kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa. Näin saadaan 5,9 g £S -metyyli-2(S)pyrroli-

II

67 8 3 3 2 6 dinyyli7metaanitiolia kirkkaankeltaisena öljymäisenä aineena, jota käytetään jatkoreaktiossa ilman lisä-puhdistusta .

Rf=0,15; silikageelilevykromatografia; eluentti: 5 kloroformi-metanoli (tilavuussuhde 90-10).

Liuokseen, jossa on 11,9 g /l-metyyli-2(S)pyrro- o lidinyyli7kloorimetaania hydrokloridia 50 cm :ssä etanolia, lisätään 10,7 g tioureaa ja sekoitetaan palautus-jäähdyttäen 48 tunnin ajan. Seos konsentroidaan kuiviin 10 alipaineessa (2,7 kPa) 40°C. Jäännös liuotetaan uudel- 3 leen 100 cm :iin kuumaa etanolia ja suodatetaan kasviperäisen aktiivihiilen läpi. Sen jälkeen kun suodos on konsentroitu kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 40°C:ssa, saadaan 25 g kirkkaankeltaista öljymäistä ainetta, jo-15 ka koostuu S-/1 -metyyli- 2(S)pyrrolidinyylimetyyli7isotio- uroniumdihydrokloridista ja ylimääräisestiä tioureasta.

Rf=0,1; silikageelilevykromatografia; eluentti: kloroformi-metanoli (tilavuussuhde 90-10).

^fi-metyyli-2 (S) pyrrolidinyyl ijkloorimetaanihyd-20 rokloridi voidaan valmistaa Hayashin et ai., J. Org.

Chem., 48, 2195 (1983), kuvaaman menetelmän mukaan. Esimerkki 23

Toimien esimerkissä 1 kuvattua vastaavalla tavalla, mutta käyttäen lähtöaineina 2,6 g:aa (1-metyy- 25 li-4-piperidinyyli)-26-tiopristinamysiini II_:tä,

3 B

0,3 cm :ä trifluorietikkahappoa, 0,8 g:aa metakloori- perbentsoehappoa, ja sen jälkeen kun tuote on puhdistettu "flash"-kromatografiän avulla /eluentti:kloro- 3 formi-metanoli (tilavuussuhde 90-10)^7 4 0 cm :n frak-30 tioita keräten ja fraktiot 20-35 konsentroitu kui viin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 0,33 g (1-metyyli-4-piperidinvvli)-26-sulfinvvlipristinamv-siini IIp:tä (A^-isomeeriä) keltaisena jauheena, jonka sulamispiste on noin 170°C.

68 83326 NMR-spektri : 1,76 (s, -CH^ 33:ssa) CH--CH.

/ - ~L N

2,2 - 3,00 (mt, -CH N- ) 5 ^CH.-CH^ — 2 2,32 (s, ^ N-CH3) 3,82 (s, s CH^ 1 7 : ssä) 4,85 (d, -H27) 5,50 (d, -H13) 10 6,19 (d, -H^) 6,37 (dd,^NH 8:ssa) 8,15 (s, -H20) (1-metyyli-4-piperidinyyli)-26-tiopristinamysiini II_

B

voidaan valmistaa seuraavalla tavalla: ^ Toimien esimerkissä 3 kuvattua vastaavalla taval la, mutta käyttäen lähtöaineina 3,15 g:aa pristinamysii-ni IIA'.ta ja 1,6 g:aa 2-metyyli-4-piperidiinitiolia ja lisäämällä 0,6 g:aa trietyyliamiinia reaktioseokseen, ja sen jälkeen kun tuote on puhdistettu "flash"-kroma- 2 0 tografian avulla /eluentti:metyleenikloridi-metanoli (tilavuussuhde 92-8)J ja fraktiot 4-20 konsentroitu kui- ____ viin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 0,9 g ____ (1-metyyli-4-piperidinyyli)-26-tiopristinamysiini Ilgitä keltaisena jauheena, jonka sulamispiste on noin 180°C.

2 5 NMR-spektri: CH,—.

2,10 (m, AH : -SV N- ) CH ,_^ 2,25 (s, 3H : -S-X" ^N-CH, )

\_/ ~J

30 y— 2,80 (n, AH : -S-ζ N- ) \_CH,*' 3,55 (m, 1H : -H,.) zo 4,62 (m, 1H : -H,,) 7,70 (m, 1H : -Hg) ... 35 8,10 (s, 1H : -H20) 69 83 326 2-metyyli-4-piperidiinitioli voidaan valmistaa H. Barrerin ja R.E. Lylen, J. Org. Chem., 27, 641 (1962), kuvaamalla menetelmällä.

Esimerkki 24 5 Liuokseen, jossa on 7,8 g (2-dietyyliaminoetyyli)- 3 26- tiopristinamysiini II_,:ta 60 cm :ssä metanolia, lisä- o ^ 3 tään 0 C:ssa typpiatmosfäärissä 0,92 cni trifluorietik- kahappoa. Kun seos on ollut 15 minuuttia 0°C:ssa, lämpötila nostetaan 15°C:seen, ja lisätään sitten 1,37 g 10 seleenidioksidia. Kun seleenidioksidi on täysin liuen nut, lisätään hitaasti, alle 25°C:een lämpötilassa, 3 7 cm 30 %:sti hapetettua vettä. Sen jälkeen kun reak-tioseosta on sekoitettu yhden tunnin ajan 25°C:ssa, se jäähdytetään 10°C:seen, siihen lisätään 50 cm^ natriumbi-15 karbonaatin kylläistä vesiliuosta ja uutetaan sitä sit- 3 ten neljä kertaa 50 cm :llä metyleenikloridia.

Orgaaniset faasit yhdistetään, kuivataan magnesiumsulfaatin pinnalla, suodatetaan ja konsentroidaan kuiviin alipaineessa,(2,7 kPa) 30°C:ssa. Saatu keltai-20 nen kiinteä aine puhdistetaan "flash"-kromatografiän avulla /eluentti:kloroformi-metanoli (tilavuussuhde ' - 3 90-10).7 40 cm :n fraktioita keräten. Sen jälkeen kun fraktiot 31-38 on kosentroitu kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan keltaista kiinteää ainet-25 ta, joka puhdistetaan "flash"-kromatografiän avulla

/eluentti:etyyliasetaatti-metanoli (tilavuussuhde 80-20)J

3 40 cm :n fraktioita keräten. Sen jälkeen kun fraktiot 27- 33 on konsentroitu kuiviin alipaineessa, saadaan 3 valkoista kiinteää ainetta, joka sekoitetaan 50 cm :iin 30 etyylieetteriä, erotetaan suodattamalla ja kuivataan alipaineessa (90 Pa) 30°C:ssa. Näin saadaan 0,5 g (2-dietyyliaminoetyyli)-26-sulfonyylipristinamysiini IID:tä (A-isomeeriä) valkoisena kiinteänä aineena, jonka sulamispiste on noin 150°C.

7, 83526 NMR-spektri: 0,97 (d, -CH3 30:ssa ja 31:ssä ja etyylin -CH3) 1,75 (s, -CH3 33:ssa) /CH - 5 2,62 (q, -N ) vch2- 3,00 - 3,40 (mt, -S02CH2CH2nC) 3,82 (s, ^CH2 17:ssä) 5,34 (d, -H13) 10 5,43 (d, -H13) 6,16 (d, -H^) 6,54 (dd, sNH 8:ssa) 8,10 (s, -H2q)

Esimerkki 25 15 Toimitaan esimerkissä 24 kuvattua vastaavalla ta valla, mutta käyttäen lähtöaineina 6,86 g:aa (2-di-iso- propyyliaminoetyyli)-26-tiopristinamysiini II :tä (A-iso-

... 3 B

meeriä), 0,77 cm :ä trifluorietikkahappoa, 1,15 g:aa seleenidioksidia, 6,33 cm3:ä 30 %:sti hapetettua vettä.

20 Sen jälkeen kun tuote on puhdistettu "flash"-kromatogra- fian avulla /eluentti:etyy1iasetaatti-metanoli (tilavuus- suhde 80-20)_7 40 cm :n fraktioita keräten ja fraktiot 28-31 konsentroitu kuiviin alipaineessa (2,7 kPa) 30°C:ssa, saadaan 0,7 g keltaista kiinteää ainetta, joka puhdiste- : 25 taan uudelleen "flash"-kromatografiän avulla /eluentti: etyyliasetaatti-metanoli (tilavuussuhde 85-15)7 30 cm3:n fraktioita keräten. Sen jälkeen kun fraktiot 26-33 on konsentroitu kuiviin alipaineessa, saadaan keltaista 3 kiinteää ainetta, joka sekoitetaan 30 cm :iin etyyli-30 eetteriä, erotetaan suodattamalla ja kuivataan alipai neessa (90 Pa) 30°C:ssa. Saadaan 0,6 g (2-di-isopropyy-liaminoetyyli)-26-sulfonyylipristinamysiini II_;tä

O

(A-isomeeriä) kirkkaankeltaisena kiinteänä aineena, jonka sulamispiste on noin 140°C.

35 NMR-spektri: 1,06 (d, isopropyylin -CH3) 1,75 (s, -CH3 33:ssa ) 2,79 (mt -H4)

II

71 83326 2,92 ja 3,10 (2dd, >CH2 15:ssä) 2,7 - 3,30 (mt, -S-CH-CH-N(CH<)„ 0* ^D 2 2 2 3.52 (suuri d, -H26) 3.82 (s, >CH_ 17:ssä) 5 2 5,27 (ohut d, -H27) 5,47 (d, -H13) 6,17 (d, -Hn) 6,42 (mt, >NH 8:ssa) 8,12 (s, -H-.) 10 20

Esimerkki 26

Toimitaan kuten esimerkissä 2, mutta lähtöaineina käytetään 2,9 g (2-syklopentyyliaminoetyyli)-26-tiopristin-amysiiniä ΙΙβ (isomeeri A), 0,72 g natriumbikarbonaattia ja 15 0,75 g 98-%:ista metaklooribentsoehappoa lämpötilassa -30°C.

"Flash"-kromatografointipuhdistuksen jälkeen (eluointiaine metyleenikloridi/metanoli, 90-10 til.) otetaan talteen 30 3 cm :n Rakeita ja jakeet 25-31 haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa (2,7 kPa) lämpötilassa 30°C, jolloin saadaan 20 0,7 g keltaista kiinteää ainetta, joka puhdistetaan uudel leen "flashMkromatografoimalla (eluointiaine metyleenikloridi/metanoli 95-5 til.) ja otetaan talteen 20 cm^:n fraktiot. Fraktiot 78-95 haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa (2,7 kPa) lämpötilassa 30°C, jolloin saadaan 0,4 g (2-syklo-25 pentyyliamino)-26-sulfinyylipristamysiiniä 11^ (isomeeri A^) vaaleankeltaisena kiinteänä aineena, joka sulaa noin 114°C:ssa. NMR-spektri: 1,76 (s, CH3 33:ssa) 1.30 ä 2,25 (mt, syklopentyylin >CH2) 30 2,80 (mt, -H4) 2,85-3,25 (mt, -SO-CH2-CH2-N-CH<;>CH2 15:ssa; -H26) 3.82 (s, >CH 17:ssa) 4,81 (d, -H27) 5.53 (d, -H13) 35 6,19 (d, -Hn) 6.30 (mt, >NH 8:ssa) 8,15 (s, -H2Q) 83326 72 (2-syklopentyylietyyli)-26-tiopristinamysiini IID (isomeeri A) voidaan valmistaa kuten esimerkin I lähtöainetta, mutta käyttämällä lähtöaineina 15 g pristanamysiiniä IID ja 4,3 g 2-

O

syklopentyyliaminoetaanitiolia. Annetaan seistä 3 d lämpö-5 tilassa -20°C, sitten puhdistetaan "flash"-kromatografoi- malla (eluointiaine metyleenikloridi/metanoli 90-10 til.), 3 otetaan talteen 30 cm :n jakeita ja jakeet 69-92 haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa (2,7 kPa) lämpötilassa 30°C, jolloin saadaan 5,2 g keltaista kiinteää ainetta, joka liuo- 3 3 10 tetaan seokseen, jossa on 45 cm asetonia ja 90 cm etyyli- eetteriä. Muodostunut saostuma suodatetaan ja kuivataan alennetussa paineessa (90 Pa) lämpötilassa 35°C, jolloin saadaan 2,9 g (2-syklopentyyliaminoetyyli)-26-tiopristinamysii-niä II (isomeeri A) vaaleankeltaisena kiinteänä aineena,

O

15 joka sulaa noin 144°C:ssa.

NMR-spektri: 1,73 (s, -CH^ 33:ssa) 1,50 ä 2 (mt, syklopentyylin >CH2) 2,78 (mt, -H4) 20 2,88 ja 3,18 (2d, >CH2 15:ssa) 2,85 ä 3,05 (mt, -S-CH2-CH2-N<) 3,26 (mt, >N-CH<) 3,42 (mt, -H26) 3.82 (s, >CH2 17:ssa) 25 4,70 (d, -H27) 5,48 (d, -H13) 6,18 (d, -Hu) 6.82 (mt, >NH 8:ssa) 8,15 (s, -H20) 30 2-syklopentyyliaminoetaanitioli voidaan valmistaa menetel mällä, joka on kuvattu julkaisussa D.D. Reynolds et ai., J. Org. Chem. 26, 5109 (1961).

Il 73 83326

Ihmisten hoidossa keksinnön mukaiset, tunnettuihin tai edullisesti yleisen kaavan (V) mukaisiin syner-gistisesti vaikuttaviin aineisiin yhdistetyt yhdisteet ovat erityisen käyttökelpoisia hoidettaessa mikrobiperäi-5 siä infektioita. Annokset riippuvat halutusta vaikutuk sesta ja hoidon kestosta; ne ovat aikuista hoidettaessa yleensä 500 - 2 000 mq päivässä parenteraalises-ti, erityisesti suonensisäisesti hitaassa perfuusiossa annettuna, yleisen kaavan (V) mukaisen synergistisesti 10 vaikuttavan aineen annoksen ollessa myös välillä 500 - 2000 mg päivässä.

Yleensä lääkäri määrää annostuksen, jonka hän arvioi sopivimmaksi ottaen huomioon hoidettavan iän, painon ja kaikki muut tälle ominaiset tekijät.

15 Seuraava esimerkki, joka ei ole rajoittava, ku vaa keksinnön mukaisia tuotteita.

Esimerkki

Valmistetaan injektoitava perfuusioliuos, jossa on koostumukseltaan seuraavaa aktiivia seosta 1 g/1: 20 (2-dietyyliaminoetyyli)-26-sulfinyylipristina- mysiini II 0,6 g ^2-(4-metyyli-1-piperatsinyyli)etyyli7~5 tio- metyylipristinamysiini I:ta 0,4 g 0,1-N kloorivetyhapon vesiliuosta 12,7 cm3 3 25 tislattua vettä qsp 1000 cm

Claims (2)

1. 74 83326 Patenttivaatimus Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten pris-tinamysiini IIB:n uusien S-O-oksidien valmistamiseksi, 5 joiden yleinen kaava on: 0 o. ' T 0 CH
2. 10 CHT LA if (I) (0)n 15 jossa R on alkyylillä substituoitu 4-piperidinyyliradi- kaali, suoraketjuinen tai haarautunut, 2-4 hiiliatomia sisältävä alkyyliradikaali, joka on substituoitu yhdellä tai kahdella sykloalkyyliaminoryhmällä, jonka sykloalkyy-liosa on 5- tai 6-jäseninen, N-alkyyli-N-sykloalkyyliami-20 noryhmällä, alkyyliaminoryhmällä tai dialkyyliaminoryh- mällä, jonka alkyyliosat voivat muodostaa yhdessä sen typpiatomin kanssa, johon ne ovat sitoutuneet, heterosyk-lisen ryhmän, joka on valittu seuraavien joukosta: 1-pyr-rolidinyyli, piperidino, morfolino tai imidatsolyyli, tai 25 R on l-(4-metyylipiperatsinyyli)-2-karbonyylioksietyyli- tai l-metyyli-2(S)-pyrrodinyylimetyyliradikaali tai R on substituoitu yhdellä fenyyliryhmällä ja yhdellä radikaalilla, joka on valittu yllä lueteltujen radikaalien joukosta, ja n on 1 tai 2, jolloin alkyyliosat, ellei toi-30 sin mainita, ovat suoraketjuisia tai haarautuneita ja sisältävät 1-10 hiiliatomia, isomeerien tai isomeerien seoksen muodossa, sekä niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien happoadditio-suolojen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että 35 hapetetaan yleisen kaavan 75 83326 O !l • ™'"’"/7 jr·· Ύ f °Vc\V CH3 R·^/ '-O 10 mukainen pristinamysiini IIB:n johdannainen (tai sen suola tai suojattu johdannainen), jossa kaavassa R tarkoittaa samaa kuin edellä, jolloin kun R sisältää rikkipitoi-15 sen heterosyklisen renkaan, rikkiatomi voi olla sulfidi-, sulfoksi- tai sulfonimuodossa, tai pristinamysiini IlB:n johdannaisen valmistamiseksi, jossa n = 2, hapetetaan pristinamysiini IIB:n johdannainen, jossa n = 1, 2. ja että näin saatu yhdiste tarvittaessa erotetaan isomeereikseen ja suojaryhmä poistetaan tarvittaessa ja saatu yhdiste mahdollisesti muutetaan happoadditiosuolak-si. 76 83326 Förfarande för framställning av nya S-O-oxider av pristinamysin llB, vilka är terapeutiskt användbara och 5 vilka har den allmänna formeln: 0 CH Λη^Λ^Υ0" io - 3''i i iT3 r CH3 y I]_{5, 15 väri R är en med alkyl substituerad 4-piperidinylradikal, en 2 - 4 kolatomer innehällande alkylradikal med rak el-ler förgrenad kedja och substituerad med en eller tvä cy-kloalkylaminogrupper, vilka cykloalkyldel är 5- eller 6-20 ledad, med en N-alkyl-N-cykloalkylaminogrupp, en alkyl-aminogrupp eller en dialkylaminogrupp, vars alkyldelar kan bilda tillsammans med den kväveatom, som de är bundna vid, en heterocyklisk grupp, vilken är vald bland följan-de: 1-pyrrolidinyl, piperidino, morfolino eller imidazol-25 yl, eller R är en l-(4-metylpiperazinyl)-2-karbonyloxi-etyl -eller l-metyl-2(S)-pyrrodinylmetylradikal eller R är substituerad med en fenylgrupp och en radikal vald bland de ovan uppräknade radikalerna, och n är 1 eller 2, varvid alkyldelarna, om inte annat anges, har en rak 30 eller förgrenad kedja och innehäller 1-10 kolatomer, i form av isomerer eller en blandning av isomererna, samt deras farmaceutiskt godtagbara syraadditionssalter, kännetecknat därav, att man oxiderar ett de-rivat av pristinamysin IIB med den allmänna formeln 35 II 77 83326 O II CH3-. / Il ch3^ X^a_ach»Otso Jh, «rU ^ 10 (eller ett sait eller skyddat derivat därav), i vilken formel R har ovan angivna betydelse, varvid, dä R inne-häller en svavelhaltig heterocyklisk ring, svavelatomen 15 kan vara i sulfid-, sulfoxi- eller sulfonform, eller för framställning av ett derivat av pristinamysin IIB, väri n = 2, oxiderar man ett derivat av pristinamysin IIB, väri n * 1, och att man vid behov separerar den sälunda er-20 hälinä föreningen tili sinä isomerer och avlägsnar skyddsgruppen vid behov och eventuellt omvandlar den er-hällna föreningen tili ett syraadditionssalt.