DK168742B1 - 24R-Scymnolsulfat, fremgangsmåde til fremstilling heraf samt farmaceutiske og kosmetiske sammensætninger omfattende samme - Google Patents

24R-Scymnolsulfat, fremgangsmåde til fremstilling heraf samt farmaceutiske og kosmetiske sammensætninger omfattende samme Download PDF

Info

Publication number
DK168742B1
DK168742B1 DK218388A DK218388A DK168742B1 DK 168742 B1 DK168742 B1 DK 168742B1 DK 218388 A DK218388 A DK 218388A DK 218388 A DK218388 A DK 218388A DK 168742 B1 DK168742 B1 DK 168742B1
Authority
DK
Denmark
Prior art keywords
compound
active compound
liver
general formula
sodium
Prior art date
Application number
DK218388A
Other languages
English (en)
Other versions
DK218388D0 (da
DK218388A (da
Inventor
Takuo Kosuge
Kuniro Tsuji
Hitoshi Ishida
Yoshiki Kosuge
Original Assignee
Broadbent J W Nominees Pty Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Broadbent J W Nominees Pty Ltd filed Critical Broadbent J W Nominees Pty Ltd
Publication of DK218388D0 publication Critical patent/DK218388D0/da
Publication of DK218388A publication Critical patent/DK218388A/da
Application granted granted Critical
Publication of DK168742B1 publication Critical patent/DK168742B1/da

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J51/00—Normal steroids with unmodified cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton not provided for in groups C07J1/00 - C07J43/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J31/00—Normal steroids containing one or more sulfur atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J31/006—Normal steroids containing one or more sulfur atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J31/003

Description

i DK 168742 B1
Den foreliggende opfindelse angår en aktiv forbindelse 24R-scymnol-sulfat, en fremgangsmåde til fremstilling af denne forbindelse ved ekstraktion af bestemte hajvæv samt farmaceutiske og kosmetiske sammensætninger omfattende forbindelsen.
5 I Japan er et præparat, der er kendt som "dybhavshajleverolie", længe blevet anvendt som folkemedicin. Det er en olie fremstillet af hajlever og er almindeligvis indkapslet i bløde kapsler. Leverolien siges at være effektiv ved behandling af mange sygdomstyper, navnlig 10 som har forbindelse med leveren, såsom hepatitis, nephritis, diabetes osv. Når det anvendes udvortes, er det også velkendt, at leverolie er effektivt til behandling af skoldninger, brandsår eller andre typer hudproblemer, og det er også idéelt som en bestanddel i kosmetik.
15
Opfinderne af den foreliggende opfindelse har undersøgt dette materiale i flere år og har for nylig opdaget det uventede faktum, at der snarere findes et aktivt stof i den vandige komponent af hajlever end i den olieopløselige komponent. Dette faktum blev 20 erkendt ved sammenligning af den praktiske anvendelse af leverolier og et pulver, der var fremstillet ud fra den vandige komponent af leveren ved afdampning af vandet. I sammenligningsforsøg med en dosis på 900 mg leverolie pr. dag og 60 mg pulver pr. dag gav sidstnævnte, et bedre klinisk resultat end førstnævnte. Hvis lever-25 olien desuden blev vasket omhyggeligt med vand, udviste den resulterende olie næsten ingen virkning. Disse fakta indikerer, at det aktive stof i dybhavshajlever ikke er olieopløseligt som tidligere antaget, men er vandopløseligt.
30 I Chem. Abs., Vol. 56, nr. 15573 a-f er omtalt Na-saltet af scymnol-sulfonsyre med formlen: OH CHMeCHzC(z»Hi-R* 35 DK 168742 B1 2 hvor R2 betegner -C^HiOHJC^gjHiCHgOI-OCHgOSO^ Den stereokemi ske konfiguration af OH-gruppen i 24-sti11 ingen fremgår imidlertid ikke af denne reference. Ifølge den foreliggende opfindelse er OH-gruppen i stilling 24 i R-konfiguration.
5
Ifølge den foreliggende opfindelse tilvejebringes der således en aktiv forbindelse 24R-scymnolsulfat med den almene formel I i tilnærmelsesvis ren form, 10
15 OH
i . X Ch2oso3 ^ 20 || ^
25 K
30 hvor A betegner en kation.
A betegner fortrinsvis en natrium-, kalium-, calcium- eller ammoniumion, eller en organisk amin.
35 Ved at anvende aktivitetsanalyser, som er beskrevet detaljeret nedenfor, er det blevet vist, at den aktive forbindelse er vandopløselig og ikke eksisterer i den olieopløselige komponent af hajlever. Disse analyser er blevet anvendt ved en række forsøg for at konstatere om den aktive forbindelse kun eksisterer i leveren. Alle dele DK 168742 B1 3 af hajens legeme, såsom ben, kød, galleblærer, ovarier, fordøjelseskanal osv. er blevet undersøgt, og det har vist sig, at galleblæren udviste de samme aktiviteter som lever ved analyserne. Dette resultat indikerer, at den aktive forbindelse kun eksisterer i lever og 5 galdeblære.
De to bioanalyser, som er omtalt heri, og som anvendes til at identificere kilder for den aktive forbindelse og til at bedømme renhedsgraden af et ekstrakt, er generelt set udformet til at 10 identificere karakteristiske farmakologiske aktiviteter af forbindelsen. Især er bioanalyserne, som benævnes (A) og (B), baseret på følgende aktiviteter: (A) Den aktive forbindelse forhindrer leverproblemer hos mus 15 forårsaget af carbontetrachlorid.
(B) Den aktive forbindelse øger respirationshastigheden hos mus, når der indgives en toksisk forbindelse, såsom nicotin.
20 Ifølge den foreliggende opfindelse tilvejebringes der også en fremgangsmåde til fremstilling af den aktive forbindelse 24R-scym-nolsulfat, som beskrevet ovenfor, hvilken fremgangsmåde omfatter, at der fremstilles et vandigt ekstrakt af lever og/eller galleblære fra en haj, og at forbindelsen med formlen I, hvor A er en natrium-25 eller ammoniumion isoleres fra det vandige ekstrakt, hvorefter man om ønsket erstatter natrium- eller ammoniumionen med en anden kati on.
Den efterfølgende beskrivelse angiver generelle procedurer til 30 isolering af den aktive forbindelse fra det vandige ekstrakt af hajlever og/eller -galleblære, hvilke procedurer involverer ekstraktion med polære, organiske opløsningsmidler, adsorption på egnede adsorbenter og/eller kromatografiske metoder.
35 For at fastlægge hvorvidt den aktive forbindelse er opløseligt i polære, organiske opløsningsmidler, såsom methanol, ethanol, acetone osv., blev det pulver, der var opnået ved frysetørring af hajgalde, ekstraheret med polært organisk opløsningsmiddel, og dernæst blev (A)- og (B)-analyserne udført på både den opløselige del og den DK 168742 B1 4 uopløselige del. Aktiviteten blev kun iagttaget ved analyse af den opløselige del, hvilket viser, at den aktive forbindelse er opløselig i polære, organiske opløsningsmidler.
5 Ved undersøgelse af hvorvidt den aktive forbindelse kan isoleres under anvendelse af adsorbenter, blev der undersøgt mange adsorben-ter, og det viste sig, at den aktive forbindelse kan adsorberes med ionbytterharpikser af basisk anionbyttertype eller med syntetiske adsorbenter, såsom XAD, HP-20, Sep-pak cl8 osv. eller trækul. Dette 10 absorptionsforsøg blev udført ved at ekstrahere hajlever og/eller -galdeblære med vand. Hver adsorbent, som ønskedes afprøvet, blev sat til ekstraktet og fik lov til at henstå natten over. Blandingen blev derpå filtreret, og hvert filtrat blev undersøgt for aktivitet med (A)- og (B)-analyserne. Resultaterne indikerer, at den aktive 15 forbindelse adsorberes på ovennævnte adsorbenter. Den aktive forbindelse kan udvindes fra adsorbentharpikserne ved ekstraktion med syre, base eller salte og fra de syntetiske adsorbenter og trækul ved ekstraktion med polære, organiske opløsningsmidler.
20 Yderligere oprensning af den aktive forbindelse opnås ved kromatografi, f.eks. på en silicasøjle, Sephadex® LH-20-søjle eller ved præparativ TLC (tyndtlagskromatografi) eller HPLC (højydelsesvæskekromatografi ) , osv. Hver fremgangsmåde gav tilfredsstillende resultater, men HPLC gav den bedste oprensning. Den aktive forbindelse 25 var efter HPLC-i solering forholdsvis rent, idet det gav en meget skarp enkel top og også en enkel plet med en omtrentlig repræsentativ Rf-værdi på 0,36 ved TLC. Na-saltet af den aktive forbindelse er i dets rene form et hvidt pulver med et smeltepunkt på 140°C. 1 2 3 4 5 6
Afprøvning af den oprensede aktive forbindelse med vanillinsvovl syre 2 gav en lilla farve, hvilket indikerer, at det indeholder galdesyre 3 eller galdealkohol i sin struktur. Det er allerede blevet vist, at 4 galde fra hajer indeholder en galdealkohol, der benævnes scymnol.
5
Efter delvis acetylering af den aktive forbindelse med eddikesyrean- 6 hydrid efterfulgt af behandling af råproduktet med tør dioxan-tri-chloreddikesyre i flere dage blev scymnol identificeret i reaktionsblandingen. Resultatet viste, at den aktive forbindelse er et scymnolderi vat. Det var den første isolering af det rene scymnolderivat, som den aktive forbindelse, indeholdt i hajgalde.
5 DK 168742 B1 5
En foretrukken procedure ved isolering af den aktive forbindelse fra frysetørret galde af Rhizoprinodon acutus (opnået ved homogenisering og frysetørring af galdeblære) er vist i nedenstående skema:
Frysetørret galde fra Rhizoprionoden acutus ekstraheret med 1. n-Hexan (100mlx3) 2. MeOH (100mlx3) 10 Fraktion I (MeOH-ekstrakt) 1. opløst i H«0 ^ 3 2. Amberlite® XAD-2 cm , eluering med i. H20 (400ml) ii. MeOH (400ml) 15
Fraktion II (MeOH-eluat) 1. opløst i CHCl,-MeOH(l:l) 3 3 2. Sephadex® LH-20 cm , eluering med i. CHCl3-MeOH(l:l) (300ml) 20 ii. MeOH (500ml)
Fraktion III
HPLC: YMC-Pack A-324 (ODS) 25 Farveløst pulver (forbindelse I)
Ved den nævnte procedure behandles det frysetørrede materiale som ovenfor nævnt med n-hexan og ekstraheres dernæst med methanol. Det således opnåede koncentrat sættes i portioner på en Amberlite® 30 XAD-2-søjle under anvendelse af H20 og ethanol som elueringsmidler.
Da ethanol eluatet indeholder den aktive forbindelse (som bestemmes med farvereagens) udsættes denne fraktion successivt for gelfiltrering på Sephadex® LH-20 med chloroform-methanol og methanol. Den aktive forbindelse er så effektivt indeholdt i methanol eluatet, at 35 dets endelige oprensning opnås ved successiv anvendelse af HPLC med en omendt fasesøjle.
Det er blevet antydet, at scymnol kunne foreligge i form af en sulfatester, men der er ikke blevet publiceret direkte oplysning DK 168742 B1 6 vedrørende den stereokemiske konfiguration af OH-gruppen i stilling 24. Ifølge den foreliggende opfindelse er OH-gruppen i stilling 24 i R-konfiguration. Det foreliggende scymnolderivat er aldrig blevet isoleret som en ren forbindelse. Det aktive pulver blev efter 5 oprensning med HPLC underkastet grundstofanalyse. Resultaterne blev analyseret/beregnet for C27H5jOgNS; C, 57,34; H, 9,02; N, 2,47; S, 5,66. Fundet: C, 57,23; H, 8,92; N, 2,45; S, 5,30. Disse resultater tyder på, at den aktive forbindelse indeholder ammoniumsul fatester i strukturen. Kernemagnetisk resonansspektroskopi af det aktive pulver 10 viste følgende egenskaber, 1H-NMR(i d4-MeOH) δ(ρριη): 4,22(dd, IH, J=4,5 og 10,0Hz) 4,11(dd, IH, J=10,0 og 16,7Hz), 4,00(bs, IH), 3,80(d, IH, J=l,2Hz) 15 3,60-3,80(m, 4H), 3,30-3,45(m, IH), 0,72(s, 3H).
13C-NMR(i d4-MeOH) δ(ppm): 74,1(d), 72,9(d), 71.3(d), 69.1(d), 66,7(t), 61,2(t), 48.4(d), 47.8(d), 47,5(s), 43.1(d), 43.0(d), 41.0(d), 20 40,4(t), 37.0(d), 36,5(t), 35,9(s), 35,8(t), 33,3(t), 32,1(t), 31,2(t), 29,6(t), 28,8(t), 27.9(d), 24,3(t), 23,2(q), 18,l(q), 13,l(q), 13 C-NMR-spektrum viser, at den aktive forbindelse indeholder 27 25 carbonatomer sammensat af tre methyl-, 11 methylen-, 11 methin- og to tertiære carbonatomer. Signalerne i et lavt område (0,72-2,35) i *H-NMR-spektret antyder, at den tilsyneladende er et coprostan-derivat. I det højere område i C-NMR-spektret kan signalerne 74.1(d), 72,9(d), 71.3(d) og 69,1(d) tilskrives methionincarbon med 30 hydroxyl gruppe, og de to signaler ved 66,7 (t) og 61,2 (t) kan tilskrives O-substitueret methylencarbon. 2DOCOSYONMR-spektre og C-H-shift-COSY-forhold indikerer, at disse to carbonatomer er bundet til et methionincarbonatom og et af et med lav kemisk skifte (66,7) har to uækvivalente protoner ved 4,22(dd) og 4,14(dd)ppm i *H-NMR-35 spektret, hvilket tyder på, at den aktive forbindelse indeholder en del af H0CH2-CH-CH20R i molekylet. Ud fra resultaterne fra grundstofanalyserne er R -S03NH4>
Ud fra disse NMR-spektre og grundstofanalyser, karakteriseres DK 168742 B1 7 pul veret som 3α,7a,12a,24£,26-pentahydroxycoprostan-27-ammoni um-sulfatester. Ammoniumionen i strukturen stammer muligvis fra phos-phatammoniumpufferen, der anvendes som mobil fase i HPLC, ved erstatning af en natriumion. For at bekræfte dette blev et aktivt 5 pulver, der var oprenset med XAD-2 og derpå med søjlekromatografi på Sepadex® LH-20 underkastet atomabsorptionsspektrofotometri med hensyn til natriumindhold og grundstofanalyse med hensyn til nitrogenindhold. Resultaterne var: Beregnet for C27^47°9SNa’ Na, 4,03; N, 0,00, fundet Na, 3,57; N, 0,02. Stereokemien ved C-24-stillingen i 10 strukturen blev bestemt som 24R ved røntgenkrystallografisk analyse af scymnol, og den specifikke drejning af natriumscymnolsul fat er positiv. Det konkluderes følgeligt, at den aktive forbindelse isoleret fra haj er 24R-(+)-3a,7a,12a,24,26-pentahydroxycoprostan-27-natriumsulfatester.
15
Natrium- eller ammoniumionen i sulfatesteren erstattes let med andre metalioner, såsom kalium, calcium osv. eller med organiske amminkat-ioner, såsom aminosyrer osv., ved velkendte procedurer.
20 Nedenstående tabeller illustrerer aktiviteten af de vandige ekstrakter indeholdende forbindelsen ifølge opfindelsen:
Tabel I 25
Dosis Bioanalyse(A) Bioanalyse(B) (enheder) (sekunder)
Olieopløselig del 30 af hajlever 500 mg 13.800 21
Vandopløselig del af hajlever indeholdende forbindelsen 35 ifølge opfindelsen 50 mg 9.500 15
Kontrol (ingen forsøgsforbindelse) 13.000 22 DK 168742 B1 8
Tabel II
Vandig ekstrakt af hajgaldeblære Bioanalyse(A) Bioanalyse(B) 5 oprenset ved: Dosis (enheder) (sekunder)
Trækul adsorption 5 mg 15 XAD-2-adsorption 1 mg 16 10
Adsorption med anionbytterharpiks 0,5 mg 8.200 14
Oprenset aktiv 15 forbindelse, Na+-saltet (ifølge opfindelsen) 0,15 mg 9.600 15
Kontrol 14.000 22 (ingen forsøgsfor-20 bi ndel se)
De standardbi oanalyser, som er omtalt ovenfor, blev udført som følger: 25 Bi oanal vse (Al
Biologisk bestemmelse af beskyttende aktivitet mod carbontetra-chlorid (CCl^)-inducerede leverlæsioner hos mus. 1 2 3 4 5 6 $td:ddy-hanmus (vægt 30-35 g) blev anvendt i grupper af 5 dyr.
2
Prøver af forsøgsmateriale blev indgivet oralt i syv dage i en 3 passende daglig dosis, og 0,1 ml 5% CC14 i olivenolie blev indgivet 4 oralt 24 timer efter sidste prøveindgivelse. Blod blev udtaget fra 5 øjehulen 24 timer efter CCl^-indgivel sen. Serum opnåedes ved centri- 6 fugering (3000 omdrejninger pr. minut, 10 minutter), og glutamin-syrepyrodruesyretransaminase (GPT)-aktivitet blev målt ved Reitman-Frankel-Momose-metoden. Aktiviteten blev udtrykt på basis af en sammenligning af GPT-værdi er mellem grupper indgivet prøve og kontrolgrupper.
DK 168742 B1 9
Bi oanalvse IB)
Virkning på respiration ved indgivelse af nicotin til mus.
5 Std:ddy-hanmus (vægt 20-22 g) blev anvendt i grupper af 5 dyr. Nikotintartrat (3 mg) blev injiceret subkutant. Prøver af forsøgsstoffer blev indgivet oralt tre timer før nicotinindgivelsen. Tidsrummet for 30 respirationer blev talt 5 minutter efter nicotinindgivelsen. Aktiviteten blev udtrykt en sammenligning af den talte 10 tid mellem grupper indgivet prøven og kontrolgrupper.
Det fremgår af ovenstående Tabel I, at aktiviteten af den vandopløselige del af hajlever indeholdende forbindelsen ifølge den foreliggende opfindelse i en dosis på kun 50 mg er næsten lige så høj som 15 aktiviteten af den olieopløselige del af hajlever i en dosis på 500 mg.
I ovenstående Tabel II sammenlignes aktiviteten af det vandige ekstrakt af hajgaldeblære opnået ved forskellige oprensningsmetoder.
20 Det fremgår af resultaterne, at den aktive forbindelse ifølge den foreliggende opfindelse ved en dosis på kun 0,15 mg har en væsentlig aktivitet i begge bioanalyser i sammenligning med det vandige ekstrakt i en dosis på 0,5 mg oprenset ved adsorption med anionbyt-terharpiks.
25
Det fremgår således af resultaterne i Tabel I og II, at den aktive forbindelse med formlen I i tilnærmelsesvis ren form ifølge den foreliggende opfindelse besidder væsentlig biologisk aktivitet. Ovennævnte bioanalyser viser desuden, at den aktive forbindelse 30 ifølge opfindelsen kan anvendes til behandling af sygdomme eller lidelser, der har ramt leveren.
Ifølge den foreliggende opfindelse tilvejebringes der også en farmaceutisk sammensætning omfattende den aktive forbindelse med 35 formlen I, som beskrevet ovenfor, sammen med en farmaceutisk acceptabel bærer eller fortyndingsmiddel for forbindelsen. Eksempelvis kan den aktive forbindelse formuleres som stabile tabletter efter som et pulver at være blevet blandet med en kendt bærer eller et volumendannende middel. Den aktive forbindelse kan alternativt DK 168742 B1 10 inkorporeres i en lotion eller et cremegrundlag til topisk påføring. Sådanne farmaceutiske sammensætninger kan f.eks. anvendes til beskyttelse af leveren eller aktivering af leverfunktionen ved behandling af sygdomme eller tilstande, som påvirker leveren, såsom 5 hepatitis, nephritis, diabetes osv. Sådanne sammensætninger kan også anvendes til aktivering af hudvævsregeneration, f.eks. ved behandling af dermatitis, trauma eller acne.
Kliniske forsøg, som er blevet udført under anvendelse af sammen-10 sætninger indeholdende den aktive forbindelse med formlen I, har specifikt vist dens aktivitet med hensyn til genoprettelse af leverfunktionen og behandling af seborré.
Ifølge endnu et aspekt tilvejebringes den foreliggende opfindelse en 15 kosmetisk sammensætning indeholdende det ovenfor beskrevne aktive princip sammen med et kosmetisk basismateriale.
Sammensætningerne ifølge den foreliggende opfindelse kan også indeholde kendte farmaceutiske produkter eller andre aktive bestand-20 dele, f.eks. antibiotika eller andre antibakterielle forbindelser.
Yderligere detaljer ved den foreliggende opfindelse vil fremgå af de efterfølgnde eksempler som illustrerer opfindelsen.
25 Eksempel 1
Fremstilling af en rå aktiv forbindelse.
280 g af en blanding af lever og galdeblære isoleret fra 4 kg hajkød 30 blev homogeniseret i 300 ml vand, og blandingen blev centrifugeret ved 12.000 omdrejninger pr. minut i 30 minutter til opnåelse af et klart vandigt lag. 50 g ionbytterharpiks af basisk ani onbyttertype blev sat til det vandige lag, og blandingen fik lov til at henstå natten over. Harpiksen blev fjernet ved filtrering og vasket med 35 vand. Harpiksen blev derpå ekstraheret med 200 ml 0,5% natrium-chl ori dopi øsning. 100 g XAD2 blev sat til den ekstraherede opløsning. XAD2 blev fjernet ved frafiltrering og vasket med vand. XAD2 blev ekstraheret med 200 ml ethanol. Fra ekstraktet blev ethanol fjernet ved destillering til opnåelse af 45 mg råt aktivt pulver.
DK 168742 B1 11
Eksempel ?
Si 1 i cagelsøjlekromatografi.
5 100 g rå aktiv forbindelse, som var opnået ved adsorption på en XAD-2-søjle, blev underkastet kromatografi på en silicagelsøjle under anvendelse af Me0H-CHCl3-H20 (30:70:6) som opløsningsmiddel til opnåelse af et hvidt Na+salt (40 g).
10 Eksempel 3
Tyndt!agskromatografi (TLC).
Rå aktiv forbindelse blev underkastet TLC på en præbelagt sil icagel 15 60 tyndtlagsplade (Merck) under anvendelse af systemet (volumendele) n-BuOH(85)-AcOH(10)-H20(5) og MeOH(40)-CHCl3(60)-H20(10). Den aktive forbindelse i form af dets Na+-salt viste sig som en enkel plet på TLC og blev visualiseret ved påsprøjtning af vani11 i nsvovl syrereagens.
20
Eksempel 4 Højyde!sesvæskekromatografi (HPLC).
25 En endelig oprensning af et råt aktivt pulver blev opnået ved successiv anvendelse af præparativ HPLC med en omvendt fasesøjle.
Der blev opnået 31 g af den aktive forbindelse i form af et hvidt Na+-salt, smeltepunkt 140°, ud fra 100 g XAD-2-oprenset prøve. Den omtrentlige repræsentative tilbageholdelsestid for den aktive 30 forbindelse var 16 minutter. Betingelserne for HPLC var som følger: søjle: YMC-Pack A-324 (ODS), strømningshastighed: 20 ml/min, mobil fase: CH3CN-0,02N phosphatammoniumpuffer (pH 7,45) (8:2), detektor: brydningsforhold.
35 Eksempel 5 Søjlekromatografi på Sephadex LH-20 Rå aktiv forbindelse (100 g), som var opnået ved adsorption på en DK 168742 B1 12 XAD-2-søjle, blev underkastet gelfiltrering på Sephadex® LH-20-søjle under anvendelse af MeOH-CHCl3(l:l) og derpå MeOH som eluerings-midler til opnåelse af et hvidt pulver (45 g) fra MeOH-fraktionen.
Rekromatografi på den samme søjle gav 30 g næsten rent, hvidt 5 Na+-salt.
Eksempel 6
Galdeblære (65 g), som var opnået fra 5 hajer af arten Rhizooriono- 10 don acutus (vægt ca. 8 kg), blev homogeniseret og derpå frysetørret.
Dette materiale (10,25 g) blev anvendt som en kilde for den aktive forbindelse, natrium-24R-scymnolsul fat. Efter affedtning af materialet med til bagesval ende n-hexan (100 ml x 3), blev det ekstraheret med methanol (100 ml x 3) under tilbagesvaling i en time. Koncen-15 tratet (3,67 g) blev opløst i HgO (80 ml) og sat på en Amberlite® XAD-2-søjle (3,0 x 16,0 cm). Søjlen blev elueret med HgO (400 ml) og derpå med ethanol (400 ml). Dernæst blev ethanol eluatet (1,95 g) sat på en Sephadex® LH-20-søjle (3,0 x 32,0 cm), chloroform og methanol (1:1). Efter eluering med chloroform og methanol (200 ml) blev 20 søjlen fremkaldt med methanol i portioner på 50 ml. Koncentrering af methanol eluatet indeholdende natriumsaltet gav en hvid gummi (1,06 g). Oprensning af dette materiale (120 mg) med HPLC gav 85,6 mg natriumscymnolsul fat som et hvidt pulver. Betingelserne for HPLC var som følger: søjle, YMC-Pack A-324 (ODS) 10x300 mm; strømningsha-25 stighed, 2 ml/min; mobil fase, 35% CH3CN-0,1N natriumphosphatpuffer (pH 6,43); detektor, brydningsforhold; natrium-24R-scymnolsul fat har følgende fysiske data: hvidt pulver, [a:]^ = 21,75 (0,5c, i MeOH); Analyse: Beregnet for CgyH^OgSNa: C, 56,82; H, 8,30; S, 5,62; Na, 4,03. Fundet: C, 56,99; H, 8,79; S, 5,62; Na, 4,23. SIMS-masse 30 (m/e): 654[C27H47S0g.HN(C2H60)2], 574[C27H470g.HN(C2HgO)2. IR v ^ cm'1 : 3420, 2950, 1470, 1380, 1230, 1070, 980, 910, 810. ^-NMR (i CD30D); δ(ppm): 4,22(lH,dd,J= 4,5, 10,0Hz), 4,ll(lH,dd,J=6,6, 10,0Hz), 4,00(1H, bred), 3,80(1H, m), 3,80-3,62(3H, m), 3,45-3,30(lH, m), 2,35-2,15(2H, m), 2,05-1,02(23H, m), 1,02(3H, d, 35 J=6,2Hz), 0,92(3H, s), 0,72(3H, s). 13C-NMR (i CD30D), 5(ppm): 74,1(d), 72,9(d), 71,4(d), 69,1(d), 66,7(t), 61,2(t), 48,3(d), 47,8(d), 47,5(s), 43,1(d), 43,0(d), 41,0(d), 40,3(t), 37,9(d), 36,5(t), 35,9(s), 35,8(t), 33,3(t), 32,l(t), 31,2(t), DK 168742 B1 13 29,5(t), 28,8(t), 27,9(t), 24,3(t), 23,2(q), 18,l(q), 13,l(q).
Eksempel 7 5
Der blev udført forsøg under anvendelse af den aktive forbindelse ifølge opfindelsen i form af dets Na-salt i en anti-seborré-lotion, som blev anvendet topisk af 40 mandlige og kvindelige patienter, som i mange år (72) havde været angrebet af hyperseborré i ansigtet.
10 Forsøgene blev udført som dobbelte blindforsøg, hvor 20 patienter påførte et placebo og 20 patienter lotionen indeholdende den aktive forbindelse.
I disse forsøg blev behandlingen udført tre gange daglig (morgen, 15 middag og aften) i en periode på 20 dage, og en vurdering af seborré (Seborré-indeks) blev udført på dag 0 (før behandling), dag 10 og 21 (slutningen af behandlingen).
Resultaterne viste en væsentlig større forbedring af seborré hos 20 patienter, der anvendte lotionen indeholdende den aktive forbindelse, end hos patienter, der anvendte placeboet. Det blev også observeret, at denne forbedring kunne ses hos både mandlige og kvindelige patienter.
25 Eksempel 8
Sammensætninger 1. Koldcreme 30 Spermacet 6,0 g
Bivoks 6,0 g
Carbopol 934 10,0 g
Natriumcarbonat 4,75 g
Rosenvand 5,0 ml 35 Rosenolie 0,02 ml
Udpresset mandel olie 56,0 g
Aktive forbindelse 0,05 g
Destilleret vand 20,0 g DK 168742 Bl 14 2. Tonic
Ethanol 30 ml
Aktive forbindelse 20 mg
Duft q.s.
5 Destilleret vand - op til 100 ml 10 15 20 25 30 35

Claims (10)

  1. 2. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at kationen er en natrium-, kalium-, calcium- eller ammoniumion, eller 25 en organisk amin.
  2. 3. Fremgangsmåde til fremstilling af 24R-scymnolsulfat i tilnærmelsesvis ren form og med den almene formel I ifølge krav 1, kendetegnet ved, at der fremstilles et vandigt ekstrakt af 30 lever og/eller galdeblære fra haj, og at forbindelsen med formlen I, hvor A er en natrium- eller ammoniumion, isoleres fra det vandige ekstrakt, hvorefter man om ønsket erstatter natrium- eller ammoniumionen med en anden kation.
  3. 4. Fremgangsmåde ifølge krav 3, kendetegnet ved, at isoleringen fra det vandige ekstrakt, omfatter mindst et trin, som er udvalgt blandt opløsningsmiddel ekstrakt!on, adsorption og kromatografi . DK 168742 B1
  4. 5. Farmaceutisk sammensætning, kendetegnet ved, at den omfatter en forbindelse med den almene formel I ifølge krav 1 sammen med en farmaceutisk acceptabel bærer eller fortyndingsmiddel herfor.
  5. 6. Farmaceutisk sammensætning ifølge krav 5, kendetegnet ved, at den er i form af en tablet, kapsel, lotion eller creme.
  6. 7. Anvendelse af en forbindelse med den almene formel I ifølge krav 1, til fremstilling af en farmaceutisk sammensætning til 10 beskyttelse af leveren eller aktivering af leverfunktionen ved behandling af sygdomme eller tilstande, som har ramt leveren.
  7. 8. Sammensætning til behandling af huden, kendetegnet ved, at den omfatter en forbindelse med den almene formel I ifølge 15 krav 1 sammen med en topisk acceptabel bærer eller fortyndingsmiddel herfor.
  8. 9. Sammensætning ifølge krav 8, kendetegnet ved, at den yderligere indeholder et antibiotika eller et andet antibakterielt 20 stof.
  9. 10. Kosmetisk sammensætning, kendetegnet ved, at den omfatter en forbindelse med den almene formel I ifølge krav 1 sammen med et kosmetisk basismateriale. 25
  10. 11. Anvendelse af forbindelsen med den almene formel I ifølge krav 1 til fremstilling af et farmaceutisk præparat til behandling af huden. 30 35
DK218388A 1986-08-21 1988-04-21 24R-Scymnolsulfat, fremgangsmåde til fremstilling heraf samt farmaceutiske og kosmetiske sammensætninger omfattende samme DK168742B1 (da)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AUPH761486 1986-08-21
AUPH761486 1986-08-21
PCT/AU1987/000281 WO1988001274A1 (en) 1986-08-21 1987-08-21 Active principle isolated from shark tissues
AU8700281 1987-08-21

Publications (3)

Publication Number Publication Date
DK218388D0 DK218388D0 (da) 1988-04-21
DK218388A DK218388A (da) 1988-04-21
DK168742B1 true DK168742B1 (da) 1994-05-30

Family

ID=3771781

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DK218388A DK168742B1 (da) 1986-08-21 1988-04-21 24R-Scymnolsulfat, fremgangsmåde til fremstilling heraf samt farmaceutiske og kosmetiske sammensætninger omfattende samme

Country Status (13)

Country Link
US (3) US5026883A (da)
EP (1) EP0329656B1 (da)
JP (1) JP2647882B2 (da)
CA (1) CA1296322C (da)
DE (1) DE3787971T2 (da)
DK (1) DK168742B1 (da)
ES (1) ES2007401A6 (da)
GR (1) GR871312B (da)
HK (1) HK149394A (da)
NZ (1) NZ221527A (da)
PT (1) PT85573B (da)
WO (1) WO1988001274A1 (da)
ZA (1) ZA876171B (da)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1296322C (en) * 1986-08-21 1992-02-25 Takuo Kosuge Active principle isolated from shark tissue
US5451575A (en) * 1988-02-19 1995-09-19 J. W. Broadbent Nominees Pty., Ltd. Method of treating liver dysfunction with 24-R scymnol
WO1992000316A1 (en) * 1990-06-30 1992-01-09 Tsumura & Co., Ltd. Bile alcohol and drug containing the same as active ingredient
ZA947912B (en) * 1993-10-12 1995-05-24 Broadbent J W Nominees Pty Ltd Treatment of medical disorders associated with free radical formation
DE19642872C1 (de) * 1996-10-17 1998-02-12 Henkel Kgaa Verwendung von Sterolsulfaten als Wirkstoffe in kosmetischen und/oder pharmazeutischen Mitteln zur Inhibierung von Serinproteasen
US6043202A (en) * 1998-03-06 2000-03-28 Eriksen; Karla S. Shampoo compositions and oil compositions and methods for treatment of cradle cap
DE102009007501B4 (de) * 2009-02-05 2017-10-19 Osram Gmbh Verfahren zum Betreiben einer Beleuchtungsanlage
ES2632591T3 (es) * 2011-12-20 2017-09-14 Mcfarlane Marketing (Aust.) Pty. Ltd. Tratamiento de la seborrea

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2136453A (en) * 1933-05-22 1938-11-15 Parke Davis & Co Process for obtaining a vitamin preparation
US3994878A (en) * 1975-10-10 1976-11-30 Hoffmann-La Roche Inc. Syntheses of 24R,25- and 24S,25-dihydroxycholesterol and alkanoyl derivatives thereof
JPS5334912A (en) * 1976-09-10 1978-03-31 Yasuhisa Kitamura Skin ointment of extract from deep sea shark
JPS5379012A (en) * 1976-12-21 1978-07-13 Nissei Sogyo Kk Antiicancer agent
JPS5381610A (en) * 1976-12-28 1978-07-19 Nissei Sogyo Kk Antiicancer medical composition
JPS5444011A (en) * 1977-09-14 1979-04-07 Nissei Sogyo Kk Cancer transfer preventing agent
SU818489A3 (ru) * 1978-10-04 1981-03-30 Шеринг Аг (Фирма) Способ получени кортикоид -21- СульфОпРОпиОНАТОВ или иХ СОлЕй
JPS5731619A (en) * 1980-08-01 1982-02-20 Tetsuo Ikegawa Improver for liver function
JPS58170718A (ja) * 1982-03-31 1983-10-07 Nissei Marine Kogyo Kk 抗眞菌作用を有する薬剤
JPS5920231A (ja) * 1982-07-23 1984-02-01 Towa Kasei Kogyo Kk 化粧品又は医薬品の基剤
JPS5920201A (ja) * 1982-07-23 1984-02-01 Sumitomo Chem Co Ltd 畜舎の飛翔害虫またはダニ類の駆除方法
JPS6133121A (ja) * 1984-07-25 1986-02-17 Nissei Marine Kogyo Kk 制癌剤
CA1296322C (en) * 1986-08-21 1992-02-25 Takuo Kosuge Active principle isolated from shark tissue

Also Published As

Publication number Publication date
EP0329656B1 (en) 1993-10-27
US5632997A (en) 1997-05-27
PT85573A (en) 1987-09-01
DK218388D0 (da) 1988-04-21
GR871312B (en) 1988-01-12
EP0329656A4 (en) 1990-02-06
DE3787971T2 (de) 1994-04-07
WO1988001274A1 (en) 1988-02-25
PT85573B (pt) 1990-05-31
DK218388A (da) 1988-04-21
EP0329656A1 (en) 1989-08-30
DE3787971D1 (de) 1993-12-02
ES2007401A6 (es) 1989-06-16
ZA876171B (en) 1988-10-26
CA1296322C (en) 1992-02-25
HK149394A (en) 1995-01-06
NZ221527A (en) 1991-03-26
US5026883A (en) 1991-06-25
JPH02503554A (ja) 1990-10-25
JP2647882B2 (ja) 1997-08-27
US5470574A (en) 1995-11-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Ortiz de Montellano et al. N-Methylprotoporphyrin IX: chemical synthesis and identification as the green pigment produced by 3, 5-diethoxycarbonyl-1, 4-dihydrocollidine treatment.
JP4709203B2 (ja) アルギンオリゴ糖及びその誘導体、並びにそれらの調製と用途
EP1800685A1 (en) Steroidal saponin pharmaceutical composition, its preparation method and use
DE3015363C2 (da)
DE2858802C2 (de) Arzneimittel zur unterdrueckung von tumorzellwachstum
DK168742B1 (da) 24R-Scymnolsulfat, fremgangsmåde til fremstilling heraf samt farmaceutiske og kosmetiske sammensætninger omfattende samme
NO160206B (no) Fremgangsmaate ved fremstilling av isosilybinfri silibinin.
Breschi et al. Vasoconstrictor activity of 8-O-acetylharpagide from Ajuga reptans
Mütsch-Eckner et al. A novel amino acid glycoside and three amino acids from Allium sativum
DE3031788C2 (da)
AU3006995A (en) Use of gabapentin in the treatment of anxiety and panic
AU2006319748B2 (en) Biologically active compounds
AU597723B2 (en) Sodium scymnol sulphate isolated form shark tissues
CN112592328A (zh) 草豆蔻中二芳基庚烷-查尔酮聚合物及其药物组合物与应用
DE19600301C2 (de) Durch Cyclooligomerisierung des einfachen Kohlensuboxids C¶3¶O¶2¶ aufgebaute makrocyclische Verbindungen, Verfahren zu deren Herstellung und Gewinnung sowie deren Verwendung
US3873699A (en) Pharmacologically active substances isolated from {8 cadia ellisiana {b
CN107365316B (zh) 石松生物碱lycoplanineA及其药物组合物与其制备方法和应用
KR20000059468A (ko) 녹용으로부터 추출된 항진균제
DE4208923C2 (de) Antirheumatischer und antiphlogistischer Wirkstoff, Verfahren zu seiner Herstellung sowie dessen Verwendung
CN116947944A (zh) 马铃薯花色苷衍生物norpetanin及其应用
JPH0469127B2 (da)
AU2010230805A1 (en) Novel sodium channel blocking compounds tetrodotoxin galactopyranosides
JPH0261443B2 (da)
JPS5980696A (ja) 新規ギノサポニンおよびその製造法
伏谷眞二 et al. (2R),(1'R) and (2R),(1'S)-2-Amino-3-(1, 2-dicarboxyethylthio) propanoic Acids from Amanita pantherina. Antagonists of N-Methyl-D-aspartic Acid (NMDA) Receptors.

Legal Events

Date Code Title Description
B1 Patent granted (law 1993)
PBP Patent lapsed

Country of ref document: DK