JPS5980696A - 新規ギノサポニンおよびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 こめ発明はアマチャヅル（Ｇｙｎｏ肚ｅｒｍ＞ａ　ｐｅ
ｎｔａｐ取１１ｕｍＭａｋｉｎｏ　）のサポニンの構成
成分であるイノサポニン類およびその製造法に関する。

この発明の発明者らはアマチャヅルの含有成分を研究し
た結果、下記の新規なイノサポニン類を見出した。　す
なわち、式（Ｔ）： 〔式中Ｒ１が〔β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−
α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→６）〕−β−Ｄ−グル
コピラノシル基であるときは、Ｒｏが水素原子、β−Ｄ
−グルコピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノ
シル基、α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→６）−β−Ｄ
−グルコピラノシル基もしくはβ−Ｄ−グルコピラノシ
ル基であって、Ｒｏが水素原子もしくはヒドロキシ基で
あり、Ｒ＋カβ−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β
−Ｄ−グルコピラノシル基であるときは　Ｒ’がα−Ｌ
−ラムノピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノ
ンル基であって、ＲＭが水素原子であり、Ｒ１がα−Ｌ
−ラムノピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノ
シル基であるときは　Ｒ２がβ−Ｄ−グルコピラノシル
（１→６）−β−Ｄ−グＲ゛が水素原子であり、 Ｒ１がβ−Ｄ−グルコピラノシル基であるときはＲ２が
β−Ｄ−キシロピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グルコ
ピラノシル基もしくはα−Ｌ−ラムノピラノシル（１→
６）−β−Ｄ−グルコピラノシル基であって、Ｒ”が水
素原子であシ、まだＲｏが水素原子であるときは、Ｒｔ
がβ−Ｄ−グルコピラノシル基、β−Ｄ−キシロピラノ
シル（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシル基もしくは
α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グルコ
ピラノシル基であって、Ｒｓが水素原子もしくはヒドロ
キシ基である〕 で表わされる化合物である。

これらのイノサポニン類（Ｉ）の具体名を列挙すると次
の通りである。

２０Ｓ−プロトパナキサジオール−３−０−（（β−Ｄ
−グルコピラノシル（１→２）−α−Ｌ−ラムノピラノ
シル（１→６））−β−Ｄ−グルコピラノシド）−２０
−０−［β−Ｄ−グルコピラノシル（１→６）−β−Ｄ
−グルコピラノシド〕−以下「ギノサボニンＡ」と称す
る一 ２０Ｓ−プロトパナキサジオール−３−０−（（β−Ｄ
−グルコピラノシル（１→２）−α−Ｌ−ラムノピラノ
シル（１→６））−β−Ｄ−／ルコビラノシド）−２０
−０−（α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→６）−β−Ｄ
−グルコピラノシト〕−以下「ギノザポニンＢ」と称ス
ルー ２０Ｓ−プロトパナキサジオール−３−０−（［：β−
Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−α−Ｌ−ラムノピラ
ノシル（１→６））−β−Ｄ−グルコピラノシド）−２
０−０−β−Ｄ−グルコピラノシドー以下「ギノサポニ
ンＦ」と称する−２０８−プロトパナキサジオールー３
−０−Ｉ：β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β−
Ｄ−グルコピラノシド：］−２０−０−［α−Ｌ−ラム
ノピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシド〕
−以下「ギノサポニンＥ」と称する一２Ｏ８−プロトハ
ナキサジオール−３，２０−ビス−〇−〔α−Ｌ−ラム
ノピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシド〕
−以下「ギノサポニンＧ」と称する− ２０Ｓ−プロトパナキサジオール−３−０−［：α−Ｌ
−ラムノピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノ
シド）−２０−０−β−Ｄ−グルコピラノシドー以下「
ギノサポニンＫ」と称スルー２Ｏ８−プロトパナキサジ
オール−３−〇−β−Ｄ−グルコピラノシドー２０−０
−［β−Ｄ−キシロピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グ
ルコピラノシド〕−以下「ギノサボニンＩ」と称スる−
２０Ｓ−プロトパナキサジオール−３−０−β−Ｄ−グ
ルコピラノシド−２０−０−［α−Ｌ−ラムノピラノシ
ル（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノンド〕−以下「ギ
ノサポニンＪ」と称する一２Ｏ８−プロトパナキサジオ
ール−２０−０−（β−Ｄ−キシロピラノシル（１−６
）−β−Ｄ−グルコピラノシド〕−以下「ギノサポニン
Ｍ」と称する− ２Ｏ８−プロトパナキサジオール−２０−’Ｏ−１：α
−Ｌ−ラムノピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グルコピ
ラノシド〕−以下「ギノサポニンＮ」と称するー ２０Ｓ　、　　２６−ヒトロキシグロトパナキサジオー
ルー３−０−（［β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）
−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→６）〕−β−Ｄ−グ
ルコピラノシド）　−２０−０−Ｃα−Ｌ−ラムノピラ
ノシル（１→６）−β−Ｄ−グルコヒラノシド〕−以下
「ギノサポニン０」と称する− ２０Ｓ−プロトパナキサジオール−３−０−（：α−Ｌ
−ラムノピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノ
シド）−２０−０−４β−Ｄ−グルコピラノシル（１→
６）−β−Ｄ−グルコピラノシド〕−以下「プロギノザ
ポゲニンＡ２」と称する一プロトパナキサジオールー３
−０−（（β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−α−
Ｌ−ラムノピラノシル（１→６））−β−Ｄ−グルコピ
ラノシド）−以下［プロギノサポゲニンＡ−ＡＨＪと称
する− ２０Ｓ　、　　２６−ヒトロキシプロトパナキサジオー
ルー２０−〇−β−Ｄ−グルコピラノシドー以下［プロ
ギノサポゲニン０．　Ｊと称する−かくしてこの発明は
、前記式（１）で表され、式中Ｒ１がα−Ｄ　−グルコ
ピラノシル（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシル基　
Ｒ２がα−Ｌ−ラムノピラノシル（１−６）−β−Ｄ−
グルコピラノフル基、Ｒ８が水素原子の化合物、具体的
にはギノザポニンＥ並びにその製造法を提供するもので
ある。

（以下余白、次頁に続く） ギノサポニンＭ　（Ｉ）のうち、ギノサポニンＡ、Ｂ。

Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、ＪＸＫ、Ｍ、ＮおよびＯはいずれもア
マチャヅルのサポニンの構成成分であシ、例えば次の方
法に゛よってアマチャヅルから抽出。

分離される。

先ず初めに、アマチャヅルを水まだは含水低級アルコー
ルで抽出する。　含水低級アルコールとしては５０／係
程度以下の含水メタノール、含■ 水エタノール等が例示される。　この抽出は加温または
加熱下に行うのが好ましい。　なお、原料のアマチャヅ
ルは、抽出に先立って予め細切し、あるいは常法により
脱脂したものを用いてもよい。

また抽出溶媒として含水低級アルコールを用いた場合に
は抽出液を濃縮してアルコール分を除去したのち、適量
の水を加えて次の非イオン性吸着樹脂での処理に付すの
が好ましい。

非イオン性吸着樹脂としては、スチレン−ジビニルベン
ゼン共重合体からなるハイポーラスなものが好ましく、
具体的にはアンバーライ）ＸＡＤ−２（米国ロームアン
ドハース社製）、セファデックスＬＨ２０（ファーマシ
ャファインケミカルズ社製）などが繁用される。　この
処理は、吸着樹脂を充填したカラムに上記で得られた抽
出液を通液して行うのが便利である。　この操作により
サポニンが樹脂に吸着される。

次いで樹脂に吸着されたサポニンを低級アルコールで溶
出する。　溶出溶媒として用いられる低級アルコールと
してはメタノール、エタノール等が好ましい。　なお、
溶出に先立って予めカラムを水あるいは２０Ｖ／Ｓ程度
の含水低級アルコール■ で洗浄するのが好ましい。

上記で得られた低級アルコール溶出液を次いでアルミナ
で処理する。　この処理も、アルミナを充填したカラム
を用いて行えば簡便である。　この処理により、サポニ
ンはアルミナに吸着される。

なお、このアルミナでの処理に先立って上記の低級アル
コール溶出液を予め適宜濃縮しておいてもよい。

アルミナに吸着されたサポニンを次いで低級アルコール
まだは含水低級アルコールで、好ましくは５０／係程度
の含水低級アルコールで溶出す■ る。　この溶出液を濃縮することにより、粗ギノサボニ
ン類が得られる。

上記のようにして得られる粗ギノザポニン類はギノザボ
ニンＡ、Ｂ、Ｅ、、、Ｆ、、Ｇ、Ｉ、Ｊ、Ｋ。

Ｍ、ＮおよびＯ等からなり、これらの各゛成分は例えば
次の方法により分離、精製される。

すなわち、粗ギノザポニン類を水に溶解し、この水溶液
をスチレン系吸着樹脂、例えばサーバクロム（Ｓｅｒｖ
ａｃｈｒｏｍ　）　ＸＡＤ　−２Ｃサーバ（５ｅｒｖａ
　）社製〕で処理し、被吸着物質を４５−１００％メタ
ノール水溶液で溶出し、溶出液を濃縮後シリカゲルカラ
ムで処理する○ シリカゲルに吸着されたサポニンを次いでクロロホルム
・低級アルコール−水で好ましくはクロロホルム・メタ
ノフル・水（６５：３５：１０下層）で溶出し、薄層ク
ロマトグラフィー（ＴＬＣ）を指標とし、溶出液をフラ
クション１〜６に分画する。

フラクション１〜３をそれぞれシリカゲルカラムで処理
し、次いでシリカゲルに吸着されたサポニンヲクロロホ
ルム・低級アルコール”酢酸エチル・水で好ましくはク
ロロホルム中メタノールｅ酢酸エチル・水（２：２：４
：１下層）で分画溶出する。

まだ、フラクション４および５もそれぞれシリカゲルカ
ラムで処理し、次いで、シリカゲルに吸着されたり一ボ
ニンを低級アルコール・酢酸エチル・水で好ましくはｎ
−ブタノール・酢酸エチル・水（４：１：２上層）で分
画溶出する。

寸だ、フラクション６もシリカゲルカラムで処理し、次
いで、シリカゲルに吸着されたサポニンをクロロホルム
・低級アルコール※水で、好ましくはクロロホルム・メ
タ７−ル・水（６５：３５：１０下層）で分画溶出する
。

上記で得られだ各分画溶出液を濃縮し、さらにＴＬＣの
結果を指標にして前記のシリカゲルカラムクロマトグラ
フィーを繰返し、これらのイノサポニン類を各個別に分
離、精製すると、フラクション１からギノサポニンＭお
よびＮが、フラクション２からギノサボニンＩ、Ｊおよ
びＫが、フラクション３からギノサボニンＧが、フラク
ション４からギノサボニンＥおよびＦが、フラクション
５からギノザボニンＢが、またフラクション６からギノ
ザボニンＡがそれぞれ得られる０ また、ギノザボニンＯは、粗ギノサポニン類をスチレン
系吸着樹脂で処理し、被吸着物質を３０〜４０％メタノ
ールで溶出し、溶出液を濃縮後シリカゲルカラムで処理
し、次いで吸着されたサポニンをクロロホルム・低級ア
ルコールΦ水で、好まシくハクロロホルム・メタノール
・水（６５：３５：１０下層）で分画溶出することによ
り、分離、精製できる。

さらにグロギノザボゲニンＡ、およびプロギノサポゲニ
ン０１はそれぞれギノサポニンＡおよびギノサポニンＯ
を酸素加水分解することにより得られ、まだグロギノサ
ポニンＡ−ＡＨはギノサポニンＡを５０係酢酸で処理す
ることにより製造できる。

また、ギノサポニンＦ、Ｇ、Ｉ、Ｊ、に、ＭおよびＮは
他のイノサポニン類（Ｉ）を酵素加水分解することによ
っても製造できる。

このようにして得られるイノサポニン類（Ｉ）は、すべ
て新規であり、脂質分解抑制お上び脂質合成抑制作用を
有し、医薬として有用である。　そして、イノサポニン
類（Ｉ）を医薬として用いる場合には、個々のサポニン
を有効成分として使用することができる。

次にこの発明を実施例により説明する。

実施例１ 乾燥したアマチャヅル全草２　Ｋｑを水３０ｔで熱時２
回抽出した。　両袖出液を合し、非イオン性吸着樹脂、
アンバーライ）　ＸＡＤ　−２４ｔを充填したカラムに
通導した。　吸着部を水１０ｔ１次いで２０％メタノー
ル６ｔで洗浄したのち、メタノール５ｔで溶出し、溶出
液を減圧下に蒸発乾固し、黄褐色粉末３７７を得た。　
これをメタノール１ｔに溶解し、アルミナ３００グを充
填したカラムに通導したのち、５０％メタノール約２０
ｔで溶出した。　溶出液を減圧下に濃縮し、淡黄色粉末
として粗ギノサポニン２５７を得だ。

粗ギノサボ；ン２０１を水１ｔに溶解し、スチレン系吸
着樹脂サーバクロムＸＡＤ−２（４−バ社製）　６００
　ｍ１２を充填したカラムに通導した。

吸着部を２０係メタノールより順次メタノール含量を増
しながら溶出し、４５〜１００係メタノール溶出液を合
し、減圧下に蒸発乾固して淡黄色粉末１６１ｉ’を得た
。　これをシリカゲル（３００ｆ）カラムクロマトグラ
フィーに付し、ＴＬＣを指標として、クロロホルム−メ
タノール骨水（６５：３５：１０下層）で１００　ｒｎ
ｌ！ずつ分画溶出してフラクション１〜６を得、それぞ
れ蒸発乾固した。　これらフラクション１〜３をそれぞ
れシリカゲル（１００ｇ）カラムクロマトグラフィーに
付し、クロロホルム・メタノール・酢酸エチル・水（２
：２：４：１下層）で分画溶出し、さらにこの操作を２
回繰返し、フラクション（１，１Ｆ）からギノサポニン
Ｍ　（６０ｒｑ　）およびギノサポニンＮ（１６０ｙｖ
ｆ　）を、フラクションｚ（ｔ、１ｒ）からギノサポニ
ンＩ　（６０ｍｙ　）およびギノサポニンＪ（１２０ｍ
Ｖ　）ならびにギノサポ＝ンＫ（１１０１１＋ｆ）を、
まだフラクション３（１，０！Ｆ）からギノサポニンＧ
　（＝１５０　ＭＹ　）をそれぞれ得た。

まだフラクション４および５をそれぞれシリカゲル（２
０Ｏｆ）カラムクロマトグラフィーに付し、ｎ−ブタノ
ール・酢酸エチル・水（４：　１　：２ｆ層）で分画溶
出し、さらにこの操作を２回繰返しフラクション４（３
，４ｉｉＪ）からギノサポニンＤ　（３５０ｍＷ　）、
ギノサポーンＥ（１５００ｍｇ）およびギノサポニンＦ
　（Ｂ　Ｏｒｑ　）を、またフラクション５　（２，’
５グ）からギノサポニンＢ（２２０ｍｒｙ　）およびギ
ノサポニンｃ　（２４０ｍｙ　）をそれぞれ得た。

さらに、フラクション６（０，９ｆ）をシリカゲル（１
００！ｉ’）カラムクロマトグラフィーに付し、クロロ
ホルム・メタノール・水（６５：３５：１０下層）で分
画溶出し、さらにこの操作を１回繰返してギノサポニン
Ａ（５１０ｍｇ）を得た。

各ギノサポニンの物性は後記の表１および表２に示す通
りである。

実施例２ ギノサボニンＡ２５’（ｌｙを０．００５　Ｍ＝燐酸２
水素ナトリウム水溶液（ｐＨ４，０）　５０ｍｌに溶解
し、これに粗へスペリジナーゼ（田辺製薬株式会社製）
　５００　ｍｆｔを加え、３７〜３８℃で６時間攪拌し
た。　反応液をスチレン系吸着樹脂、サーバクロムＸＡ
Ｄ−２（サーバ社製）５０−を充填しだカラムに通導し
、水１を次いで２０係メタノール２ｔで洗浄したのち、
メタノール３００　ｍｅで溶出した。

溶出液を減圧下に濃縮し、濃縮物をシリカゲル・カラム
・クロマトグラフィーに付し、クロロホルム・メタノー
ル・水（６５：３５：１０下層）で分＃Ｊ溶出して、ギ
ノサポニンＦ　（２ｏ　ｍｙ　）　、ギノザポニンＫ　
（１５ｍｙ　）およびプロギノサポゲニンＡ。

（３５ｒｎｔｉ　）を得た。　ギノサポニンＦおよびＫ
はＩＲおよびＮＭＲにより、実施例１で得られた標品と
同定した。

まだ、プロギノサポゲニン２Ａ２の物性は後記の表１お
よび表２に示す通りである。

実施例３ ギノザポニンＡ　Ｉ　５０　ｍｆを５０％酢酸１０ｒｎ
１．に溶解し、７０℃で６時間攪拌した。　反応液をス
チレン系吸着樹脂、サーバクロム　ＸＡＤ　−２５０−
を充填したカラムに付して、プロサポゲニン画分約１０
０　ｍ’；／を得た。　これをシリカゲルカラムクロマ
トグラフィーに付し、クロロホルム慟メタノール・酢酸
エチル・水（２：２：４：１下層）で分画溶出して、プ
ロギノサポゲニンＡ−ＡＨ３５ｍ’ｊを得た。　本品の
物性は後記の表１および表２に示す通りである。

実施例４ ギノサポニンＡ　４００　ｍＶを０．００５Ｍ−燐酸２
水素ナトリウム水溶液（ｐＨ４，０）　５０ｍｌに溶解
した。　これにセルラーゼ（シグマ社製）３００ｍｇを
加え、３７〜３８℃で２４時間攪拌した０反応液を実施
例２と同様に処理して、ギノサポニンＫ（１１０ｍ２）
を得だ。　本品はＩＲおよびＮＭＲにより、実施例１で
得だ標品と同定した。

実施例５ ギノサポニンＢおよびＣの混合物１．４ｇを０．００５
Ｍ−燐酸２水素ナトリウム水溶液（ｐＨ４，０１）２０
）Ｏｄに溶解した。　これにセルラーゼ（シグマ社製）
６００７７１７を加え、３７〜３８℃で７時間攪拌した
。

反応液をサーバクロム　ＸＡＤ−２（８０ｍｌ　）のカ
ラムで処理して約１．１１の加水分解物を得た。

これをシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付シ、ク
ロロホルム９メタノール嗜酢酸エチル。水（２：２：４
：１下層）で分画溶出してギノサポニンＫ　（１４０ｍ
ｇ）ならびにギノサポニンＦおよびＧを含む混合物（５
５０ｍｙ）を得た。　この混合物を再びシリカゲルカラ
ムクロマトグラフィーに付し、クロロホルム・メタノー
ル・水（６５：３５　：　１０下層）で分画溶出して、
ギノサポニンＦ（５０’ｍｇ）およびギノサボーンＧ（
１５ｏｍｙ）を得だ。　これらのギノサボニンＦ、Ｇお
よびＫはＩＲおよびＮＭＲによシ実施例１で得られた標
品と同定した。

実施例６ ギノサボニンＢおよびＣの混合物ａ　ｏ　ｏ　ｍｙを５
０係酢酸１０　ｍｌに溶解し、７０℃で６時間攪拌した
。

反応液をサーバクロム　ＸＡＤ−２（５０ｙｄ）のカラ
ムに付して分画し、プロサボゲニン両分をシリカゲルカ
ラムクロマトグラフィーに付し、クロロホルム・メタノ
ール・水（６５：３５：１０下層）で分画溶出してプロ
ギノサポゲニンＡ−Ａ）Ｉ（３０ｍｇ）を得だ。　本市
はＩＲおよびＮＭＲにより、実施例３で得られた標品と
同定した。

実施例７ ギノサポニンＤおよびＥの混合物２グを０．００５Ｍ−
燐酸２水素ナトリウム水溶液（ｐＨ４，０）に溶解した
。　これにセルラーゼ（シグマ社製）１２を加え、３７
〜３８℃で２０時間攪拌した。

反応液をサーバクロム　ＸＡＤ−２（８０ｙｄ）のカラ
ムで処理して約１．６２の加水分解物を得だ。

これをシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ク
ロロホルム・メタノール俸酢酸エチル争水（２：２：４
：１下層）で分画溶出してギノサポ＝７Ｉ（３５５ｍｇ
）、Ｊ　（２５０７ｎｆ　）、Ｍ（８０ｍｙ　）および
Ｎ　（９０ｍｒｔｔ　）を得だ。　これらの各ギノサボ
ニンはＩＲおよびＮＭＲにより、実施例１で得られだ標
品とそれぞれ同定した。

実施例８ ギノサポニンＥ５■を０．００５Ｍ−燐酸２水素ナトリ
ウム水溶液（ｐＨ４，０）　１−に溶解し、これにセル
ラーゼ１ｏｒｑｔを加え、３７〜３８℃で４時間攪拌し
た。　反応液中にギノサポニンＪおよびＮが生成してい
ることを薄層りＵマドグラフィーにより確認した。

実施例９ 実施例１で得た粗ギノサポニンをスチレン系吸着樹脂、
サーバクロム　ＸＡＤ−２で処理し、３０〜４０％メタ
ノールで溶出した。　溶出液を減圧上蒸発乾固し、淡黄
色粉末２グを得た。　これをシリカゲル（２０Ｏｆ）カ
ラムクロマトグラフィーに伺し、クロロホルム−メタノ
ール・水（６５：３５：１０下層）で分画溶出し、さら
にこの操作を２回繰返し、ギノサポニン０　（１５０ｍ
ｙ　）を得た。　本市の物性は後記の第１表および第２
表に示す通りである。

ギノサポニン０１５（ｌｌｒを０．００５Ｍ−燐酸２水
素ナトリウム水溶液（１）Ｈ４，０）　３０ｍｌに溶解
し、これにセルラーゼ（シグマ社製）１５０ｒｎｇを加
え、３７〜３８°Ｃで２４時間攪拌した。　反応液を実
施例２と同様に処理して、グロギノサボゲニンＱ、　（
２０ｒｎｇ）を得た。　本市の物性は後記の表１および
表２に示す通りである。

なお、実施例５および６において原料として使用したギ
ノサポニンＣの化学名は２０３−プロトパナキサジオー
ル−３−”０−［β−Ｄ−グルコヒ。

ラノシル（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド）−２
０−０−Ｃβ−Ｄ−グルコピラノシル（１→６）−β−
Ｄ　−クルコピラノシド〕であって、ギンセノシドーＲ
ｂ、　　と同定された。　まだ、実施例７において原料
として使用したギノサボニ／Ｄの化学名は２０Ｓ−プロ
トパナキサジオール−３−０−［β−Ｄ−グルコピラノ
シル（１→２）−′β−Ｄ−グルコピラノシド：）−２
０−０−［β−Ｄ−キシロピラノシル（１→６）−β−
Ｄ−グルコピラノシド〕であって、ギンセノシドーＲｂ
。

と同定された。

第　　１　　表 元素分析 ザボニン名　　ｍｐ（’Ｃ）　　　分子式　　　理論値
　　実験イ「Ｃチ　Ｈ係　Ｃ饅　Ｈ ギノサボニンＡ　　２０１−２０３　　Ｃ６ｏＨ，ｏ２
０２□・３Ｈ２０５５，０３８，３１５４，７８８，５
ギノサボニンＢ　　１９６−１９８　　Ｃ６，Ｈ，。２
０２６φ３Ｈ２０５５，７１８，４２５５，６３８５ギ
ノザボニンＥ１９９−２０１Ｃ５４Ｈ９２０２□−３Ｈ
２０５６，５２８，６１５６，３３８，８ギノサポニン
Ｆ　　１９１−１９３　　Ｃ５４Ｈ９□０２２・３Ｈ２
０５６，５２８，６１５６３１８，８ギノザボニンＧ１
９２−１９４Ｃ５４Ｈ１２０゜ビ３　Ｈ２Ｏ５７，３３
８，７３５７，１１８，７ギノサボニンＩ　　１８３−
１８５　　ｃ４７Ｈ８ｏｏ、７−ａＨ２ｏ　　５８．１
３８．９３５７．７７８．７ギノサポ＝７Ｊ　　１８９
−１９１　　Ｃ４８Ｈ８□Ｏ，□−４馬０　５７．４７
９．０４５７．５８８．９ギノザボ＝ンＫ　　１８７−
１８９　　Ｃ４８Ｈ８２０，７−３Ｈ２０５８，５２９
，００５８，４１８，８ギノザポニンＭ　　１５８＝１
６０　　Ｃ４，Ｈ７ｏＯ，□・３／２Ｈ２０６２，９７
９，４０６３，２０９，６ギノザポニンＮ　　１６５−
１６７　　Ｃ４□Ｈ７２０１２・２Ｈ２０６２，６６９
，５２６２，８９９，８ギノサポニン０２０２−２０５
Ｃ６ｏＨ１ｏ２０２□・４Ｈ２０５４，２８８，３５５
４，２８８，３グロギハボゲニンＡ２　１８８−１９０
　Ｃ５４Ｈ９２０□２−Ｈ２Ｏ５８，３６８，５３５８
，３２８，，６プロギノサポゲニン０．　　１６７−１
６９　　Ｃ３６Ｈ６２０９争Ｈ２０６５，８２９，８２
６６，０５９，８旋光度 逅 ■ 第　　２　１ ＰＭＲスペクトルラ ザボニン名　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
Ｃ−２４Ｆメチル １．２５ｓ、１．（ｊｌｓ、１．’／ｕｓ、１ｙｚｓゞ
−タ ■　　　　　・アメメリック　グロト／（Ｊ＝７）　　
（Ｊ＝７Ｊ　　（Ｊ−ｔ〕サポニン名　　　　　　　　
メチル ギノサボニンＪ　　　ｉｌ　）　　０．７８ｓ　、　０
．９４ｓ　、　０．９４ｓ　、　０．９４ｓ１．２２ｓ
　、　１．５１ｓ　、　１．６９ｓ　、　１．６９ｓ１
．１９ｓ　、　１．５３ｓ　、　１．６４ｓ　、　１．
６８ｓ１．１９ｓ　、　１．５８ｓ　、　１．６７ｓ　
、　１．７１　ｓｌ、２２ｓ　、　１．５５ｓ　、　１
．８７ｓ１．２７ｓ　、　１．６７ｓ　、　］、、７１
ｓ　、　１．７１ｓ第２表続き 界■スペクトルデータ Ｃ−２４Ｈアノメリック　プロトン サポニン名　　　　　　　　メチル 注１）：ｐｙ　−ｄ５ ＩＩ）：ｐｙ　−ｄ５／Ｄ２０ ＊：：化学シフトはシグナル重複 第２表続き ＰＭＲスペクトルデータ Ｃ−２４Ｈアノメリック　プロトン により不明瞭 次に本発明のイノサポニン類の薬理効果について述べる
。

人間を含めた１１ｍ乳動物は、外より取入れた脂肪とか
糖質の過剰分を脂肪細胞に変換して貯え、外からの補給
がない場合これを脂肪分解して脂肪酸やグルコースに変
えてエネルギー源として利用する。　この脂肪細胞の脂
肪分解には、脳下垂体ホルモンである副腎皮質刺戟ホル
モン（ＡＣＴＨ）や副腎皮質ホルモンであるアドレナリ
ンが大きく作用し、分解を促進する。　逆に、脂肪細胞
の脂肪分解を抑制し、血液中の血糖量が増大しないよう
にする働きを持つものが、糖尿病薬として有名な膵臓ホ
ルモンのインシュリンである。　この発明によるイノサ
ポニン類は脂肪細胞に対して、インシュリン様の作用を
もちＡＣＴＨの脂肪分解促進を抑制する。　その効果は
ギノサポニンＢの抑制率１８％からギノサポニンＮの３
８係抑制率まで、ＡＣＴＨの脂肪分解促進作用を、平均
２８゜％抑制する効力をもつ。

脂肪細胞におけるアドレナリンの脂肪分解促進作用に対
してのイノサポニン類の抑制力は全体的にＡＣＴＨに対
する場合に比べて弱いが、ギノサポニンＢおよびＥのみ
は３０係以上のアドレナリン脂肪分解抑制効力をもつ。

また脂肪細胞は、グルコースを中性脂肪に変換して貯え
る作用を有するが、脂肪細胞のグルコ−・。

スから中性脂肪を合成する能力を上記イノサポニン類は
いずれも抑制する作用を有し平均約５０チの抑制力をも
つ。

従って本発明のイノサポニン類は、脂肪細胞における脂
肪分解抑制剤および脂肪合成抑制剤としての新しい脂質
代謝剤としての医薬品の用途が期待される。　次に本発
明のイノサポニン類の薬理試験結果を示す。

薬理試験結果 ■、試験用脂肪細胞の調整 使用動物は体重１５０〜１８０２のｗｉｓｔｅｒ系雄ラ
ットを使用し、このラットから副卑丸脂肪組織をとシ出
し、Ｒｏｄｂｅｌｌの方法［Ｍ−Ｒｏｄｂｅｌｌ：　Ｊ
、Ｂｉｏｌ。

Ｃｈｅｍ、２３９，３７５　　（１９６４）：］により
脂肪細胞を得た。　この脂肪組織４ｆを小切片にし、Ｋ
ｒｅｂｏ　Ｒｉｎｇｅｒ　Ｂｉｃａｒｂａｎａｔｅ　Ｂ
ｕｆｆｅｒ　　１０　ｍｌ　（アルブミン０１４７．コ
ラゲナーゼ１０　ｍｇ　、グ＃　ニア　−ス５ｍｇを含
む。ｐＨ７，４）に入れ３７℃で５０分間加温し、３０
０　ｒ、ｐｏｍ−で遠心分離し浮上する脂肪細胞層を分
取する。　この脂肪細胞に前記緩衝液１０ｍｅ（ｐＨ７
，４）を加えよくふりまぜて洗い３００　ｒ−ｐｏｍ、
で３０秒間遠心分離する。　この操作を２回繰返し、脂
肪細胞を完全に洗い、この脂肪細胞を試験に用いた。　
検体液はギノサポニンＡ、Ｂ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｊ、に
、ＭＱ　Ｎ、０およびグロギノザポゲニンＡ２．　Ａ　
−、ＡＨ１０，のそれぞれを水溶液とし、ｐＨ７，４に
調整したものを用いた。

■、試験方法および結果 １）　　ＡＣＴＨによる脂肪細胞の脂肪分解に及ぼすイ
ノサポニン類の影響 ａ、試験方法 コラゲナーゼ処理して得た脂肪細胞をＫｒｅｂｓＲｉｎ
ｇｅｒ　Ｂ　１ｃａｒｂｏｎａｔｅ　Ｂｕｆｆｅｒ　（
ＫＲＢ　＋　ｐＨ７，４）中に懸濁し、その溶液０．３
７！（脂肪細胞１０ｏｒｎｇ相当）。

ＡＣＴＨ溶液０．１ｍ１（ｔμ２のＡＣＴＨを含む）、
各ツーポ＝７溶液０．１ｒｄ（５００μグのサポニンを
含む）および５％アルブミン溶液０．３　ｍｇ　（ＫＲ
Ｂにとカニし、ｐ！４７．４に調整した溶液）を共栓試
験管に入れ、３７℃で２時間加温し、Ｄｏｌｅの方法〔
ｖ、　ｐ　。

Ｄｏｌｅ：Ｊ、Ｂｉｏｌ−Ｃｈｅｍ、、３５　、１５０
　（１９５８）　〕に従って遊離する脂肪酸を測定した
。

すなわち、反応系にＤｏｌｅの抽出液３ｍｌを分取し、
チモールブルー溶液１ｍ７！を加える。　この溶液に窒
素ガスを吹込んで攪拌しながらｏ、ｏｏｓ規定水酸化す
）　ＩＪウム水溶液で滴定し、検量線より遊離脂肪酸量
を測定する。

なお、脂肪分解抑制率は次式により求めらｉする。

−Ｂ 脂肪分解抑制率（係）　＝　−Ｘ　１００Ａ　：　ＡＣ
ＴＨ（１μｍ／−）のみの添加により生じた遊離脂肪酸
量 Ｂ　：　ＡＣＴＨ（１μｆ／−）＋サポニン（２０μ秒
官）の添加により生じた遊離脂肪酸量 ｂ、試験結果 ＡＣＴＨによる脂肪細胞の脂肪分解に対するイノサポニ
ン類の抑制率の測定結果を第３表に示しだ。

第　　３　　表 無添加　　　　　　Ｏ− ＡＣＴＨ（１μ７廁）　　　　　８・４０（〃）」−ギ
ノザポニンＡ　（２０μｌｉ’／ｒｎｌ）　　６．１　
　　２　７（＋７）＋　ｎ　　Ｂ（ｒｒ　　）６．９１
８（〃）＋　ｎ　　Ｅ（ｔ、　　）５．９３０（〃）＋
　ｐ　　Ｆ（ｐ　　）６．３２５（〃）＋　／Ｉ　　Ｇ
（ｔｒ　　）　５．８．３１（”）＋　Ｎ　　Ｉ（Ｚｒ
　　）６．６２１（＃）＋　ｔｒ　　Ｊ（ｐ　　）５，
３３７（＃）＋　ｒｒ　　Ｋ（／ｒ　　）６．１２７（
ｔｒ）−４−〃Ｍ（ｓ　　）　６．４２４（＃）＋　／
Ｊ　　Ｎ（＃　　）５．２３８ＡＣｒＨ（１ｐ　ｆ／ｍ
ｅ）＋イノサポニン０（２０μ９／ｄ）　　　５．６　
　３　３〃（〃）　　　十ブロギノツ力セへ二ンＡ２（
〃　　　）　　　　６．２　　　２６ｔｒ　　　（Ｎ）
　　＋　　　ｔｒ　　Ａ−ＡＨ（ｒｒ　　）　　　６．
３　．２５〃（ｎ）　十ｔｔ　　Ｑ、（ｔｒ　）　５．
９’　３０以上のどと＜　ＡＣＴＨ１μｍ／コを脂肪細
胞に作用させ３７℃で２時間保つとき脂肪を分解して８
．４μＥｑ／グの遊離脂肪酸を生成するが、イノサポニ
ン類をそれぞれ２０μｆ　７ｍｌ添加すると上記のごと
く明らかにＡＣＴＨの脂肪分解作用を抑制し、遊離脂肪
酸の生成量が減少する。　その平均抑制率は２８係であ
る。

２）アドレナリンによる脂肪細胞の脂肪分解に対するイ
ノサポニン類の影響 ａ・　試験方法 コラゲナーゼ処理して得た脂肪細胞をＫｒｅｂｓＲｉｎ
ｇｅｒ　Ｐｈｏｓｈａｔｅ　Ｂｕｆｆｅｔ　（ＫＲＰ　
、　ｐＨ７，４）に懸濁し、その溶液０．３　ｄ　（脂
肪細胞１００π？相当）、アドレナリン溶液０．１ｙｉ
（１μグのアドレナリンを含む）各サポニン溶液０．１
７！（２０μｍのサポニンを含む）および５多アルブミ
ン溶液ｏ、５ｉ（ＫＲＰに溶解しｐＨ７，４に調整した
溶液）を共栓試験管に入れ、３７℃で２時間加温し、Ｄ
ｏｌｅの方法（前記１）と同様）に従って遊離する脂肪
酸量を測定した。　すなわち反応系にＤｏｌｅの抽出液
３ｍ７！を加え５分間振とう後、ヘプタン３−を分取し
、チモールブルー溶液１ｒｎｅを加える。　この溶液を
窒素ガスで攪拌しなからｏ、ｏｏｓ規定水酸化ナトＩＪ
ウム水溶液で滴定し検量線より遊離脂肪酸量を求める。

なお、上記抑制率は前記１）に用いた式と同じ式を用い
た。

ｂ、試験結果 アドレナリンによる脂肪細胞の脂肪分解に対するイノサ
ポニン類の抑制率の測定結果を第４表に示した。

（以下余白次頁につづく） 第　　４　　表 無添加　　　　　　　Ｏ− アドレナリン（ＡＤ）　　（１μ２廁）　　　　　　　
　１４．１　　　　　０ＡＤ（１μシ讐）＋ギノサポニ
ンＡ（２０μ２々Ｚ）１３．４　　　　　５ｔｒ（ｓ　
　）十ｓ　　　Ｂ（”　　）　　９．１　　３５〃（１
，）−１−ｔｔ　　Ｅ（／７　）　　９．４　３３ｔｔ
（ｔｔ　）−１−ｔＪ　　Ｆ（＃　）　１３．４　　５
＃（〃）十’　　ｔｒ　　　Ｇ（ｙ　　）　１３．８　
　　２＃（ｒｔ　）−１−’　ｔｔ　　Ｉ（〃）　１２
．７　１０／７（ｔｒ　）＋　　ｔｔ　　Ｊ（１）　１
３．１　　７ｔｒ（ｔｔ　）−４−ｔｒ　　Ｋ（＃　）
　１３，８　　２７（ｒＬ　　）十ｎ　　　Ｍ（ｔｒ　
　）１３．５　　　４／７（ｔｒ　）＋　　Ｉ　　Ｎ（
〃）　１３．３　　６ｔｒｃ　　ｔｒ　　）＋ｔｒ　　
　Ｏ（＃　　）　１３．９１〃（〃）＋フｂギノツ力ｚ
ｙ−ンＡ２（ｔｒ　　　）　　１３．０　　　　　　　
８／７（〃）十、　＃　　Ａ−ＡＩ（（ｔｒ　　）　１
２．４　　１２＃（ｔｒ　　）＝ｌ−ｔｔ　　　　Ｑｌ
（〃）　　１２．６　　　１１以上のごとくアドレナリ
ン１μ２／−を脂肪細胞に作用させ３７℃で２時間保つ
とき、脂肪を分解して１４，１μＥｑ／ｒの遊離脂肪酸
を生じる。　このときキノサポニン類をそれぞれ２０μ
Ｓ’／ｙｄ共存させるといずれの場合も脂肪分解を抑制
し、遊離脂肪酸の生成は減少する。　しかしＡＣＴＨに
よる脂肪分解に対するキノサポニン類の抑制率と比べる
と小さい。　ただギノサポニンＢおよびＥのみはＡＣＴ
Ｈに対するときより強い効果を示す。

３）脂肪細胞におけるグルコースからの脂肪合成におよ
ぼすキノサポニン類の影響 ａ・　試験方法 拳法はカーボンに放射能マークしだ１４Ｃ−グルコース
を脂肪細胞に作用させ、脂肪合成にくりこまれ、中性脂
肪として脂肪細胞にとりこまれだグルコース量を放射能
カウント量により測定、その脂肪合成能に及ぼすキノサ
ポニン類の影響を試験する。

すなわち、コラゲナーゼ処理して得た脂肪細胞をＫＲＢ
中に懸濁し、その溶液０．３５ｍＡ（脂肪細胞ｉ　ｏ　
ｏ　ｍｙ相当）、各サポニン溶液０．１ｍ１（２０μｍ
のサポニンを含む）、５条アルブミン溶液０．５ｍ１（
ＫＲＢＩ液１０ｍＭグルコースを含む、ｐＨ７，４）、
　１４Ｃ−り／ｌ／ニア　−，１，溶ｉ　０．０５ｍ１
（０，５μＣｉ　、ＫＲＰ溶液、ｐＨ７，４，１０ｍＭ
グルコースを含む）を共栓試験管に入れ、３７℃で３０
分加温し、Ｄｏｌｅ　の抽出液５　ｍｌを加え５分間様
とぅ後、ヘプタン３　ｍｌおよび水２−を加え５分間様
とぅする。　ヘプタン層３−を分取し、アルカリ性エタ
ノール溶液（０，５規定水酸化ナトリウム溶液、５０係
エタノール溶液）を３ｍｌ加え５分間様とつする。

エタノール層を１−分取し、トルエンシンチレーション
溶液１０ｔｎｌを加え、５ｋｉｐｓｋｉ　ｅｔ　ａｌの
方法〔Ｂｉｏｃｈｅｍ−Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ａｃｔａ、　
１０６．３８６（１９６５）〕により測定した。

ｂ）試験結果 脂肪細胞におけるグルコースからの脂肪合成におよぼす
キノサポニン類の促進率を測定し第５表に示しだ。

第　　５　　表 な　　し　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
２１５００　　　　１００ギノサポニンＡ　（２０ｐＩ
／／ｒｎｅ）　　　　　８０１３　　　　３７１３（ｐ
　　　）　　　　１２３０８　　　５７Ｅ（ｔｒ　）　
　１０２４８　４８ Ｆ（／７　）　　１１６２０　５４ Ｇ（、ｔｔ　）　　８９２５　４２ Ｉ（〃）　　１０５６４　４９ Ｊ（ｒｒ　）　　１１６５０　５４ Ｋ（ｒｒ　）　　１３６００　６３ Ｍ（ｎ　）　　１２６５０　５９ Ｎ（／７　）　　９８７０　４６ ０（ｒｒ　）　　８２６３　３８ フｂギノサポゲ三ンＡ２（〃　　　　）　　　　　　　
１２６５０　　　　　５９Ｌｒ　Ａ−ＡＩ（（〃）　　
１０５５０　４９０１（〃）１１２００５２ 以上のごとくキノサポニン類の共存しない場合に比べ、
脂肪細胞におけるグルコースの中性脂肪としてのとり込
みは、はとんどが半分以下となり、キノサポニン類がそ
れぞれ脂肪細胞におけるグルコースからの脂肪合成を抑
制する作用のあることは明らかである。

特許出願人　竹本常松 日本商事株式会社

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　式（１）： 〔式中Ｒ１カβ−Ｄ−グルコピラノシル（１−２）−β
   −Ｄ−グルコピラノシル基、Ｒ２がα−Ｌ−ラムノピラ
   ノシル（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシル基　ｕ８
   が水素原子〕で表される。化合物。 ２、アマチャヅルを水または含水低級アルコールで抽出
   し、抽出液を非イオン性吸着樹脂で処理したのち被吸着
   物質を低級アルコールで溶出し、この溶出液をアルミナ
   で処理したのち被吸着物質を低級アルコールまたは含水
   低級アルコールで溶出して粗ギノサポニン類を得、これ
   を次いでスチレン系吸着樹脂およびシリカゲルでそれぞ
   れ処理して分離、精製して 〔式中Ｒ１がβ−Ｄ−グルコピラノシル（１−２）−β
   −Ｄ−グルコピラノシル基、Ｒがα−Ｌ−ラムノピラノ
   シル（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシル基　Ｒ８が
   水素原子〕で表わされるギノサボニンを得ることを特徴
   とするギノサポニンの製造法。 （以下余白、次頁に続く。、）