JPS6140675B2 - - Google Patents
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Description
この発明はアマチヤヅル(Gynostemma
pentaphyllum Makino)のサポニンの構成成分
であずギノサポニン類およびその製造法に関す
る。 この発明の発明者らはアマチヤヅルの含有成分
を研究した結果、下記の新規なギノサポニン類を
見出した。すなわち、式(): 〔式中R1が〔β―D―グルコピラノシル(1
→2)―α―L―ラムノピラノシル(1→6)〕
―β―D―グルコピラノシル基であるときは、
R2が水素原子、β―D―グルコピラノシル(1
→6)―β―D―グルコピラノシル基、α―L―
ラムノピラノシル(1→6)―β―D―グルコピ
ラノシル基もしくはβ―D―グルコピラノシル基
であつて、R3が水素原子もしくはヒドロキシ基
であり、 R1がβ―D―グルコピラノシル(1→2)―
β―D―グルコピラノシル基であるときは、R2
がα―L―ラムノピラノシル(1→6)―β―D
―グルコピラノシル基であつて、R3が水素原子
であり、 R1がα―L―ラムノピラノシル(1→6)―
β―D―グルコピラノシル基であるときは、R2
がβ―D―グルコピラノシル(1→6)―β―D
―グルコピラノシル基、α―L―ラムノピラノシ
ル(1→6)―β―D―グルコピラノシル基、も
しくはβ―D―グルコピラノシルであつて、R3
が水素原子であり、 R1がβ―D―グルコピラノシル基であるとき
はR2がβ―D―キシロピラノシル(1→6)―
β―D―グルコピラノシル基もしくはα―L―ラ
ムノピラノシル(1→6)―β―D―グルコピラ
ノシル基であつて、R3が水素原子であり、また R1が水素原子であるときは、R2がβ―D―グ
ルコピラノシル基、β―D―キシロピラノシル
(1→6)―β―D―グルコピラノシル基もしく
はα―L―ラムノピラノシル(1→6)―β―D
―グルコピラノシル基であつて、R3が水素原子
もしくはヒドロキシ基である〕 で表わされる化合物である。 これらのギノサポニン類()の具体名を列挙
すると次の通りである。 20S―プロトパナキサジオール―3―0―
{〔β―D―グルコピラノシル(1→2)―α―L
―ラムノピラノシル(1→6)〕―β―D―グル
コピラノシド}―20―0―〔β―D―グルコピラ
ノシル(1→6)―β―D―グルコピラノシド〕
―以下「ギノサポニンA」と称する― 20S―プロトパナキサジオール―3―0―
{〔β―D―グルコピラノシル(1→2)―α―L
―ラムノピラノシル(1→6)〕―β―D―グル
コピラノシド}―20―0―〔α―L―ラムノピラ
ノシル(1→6)―β―D―グルコピラノシド〕
―以下「ギノサポニンB」と称する― 20S―プロトパナキサジオール―3―0―
{〔β―D―グルコピラノシル(1→2)―α―L
―ラムノピラノシル(1→6)〕―β―D―グル
コピラノシド}―20―0―β―D―グルコピラノ
シド―以下「ギノサポニンF」と称する― 20S―プロトパナキサジオール―3―0―〔β
―D―グルコピラノシル(1→2)―β―D―グ
ルコピラノシド〕―20―0―〔α―L―ラムノピ
ラノシル(1→6)―β―D―グルコピラノシ
ド〕―以下「ギノサポニンE」と称する― 20S―プロナパナキサジオール―3,20―ビス
―0―〔α―L―ラムノピラノシル(1→6)―
β―D―グルコピラノシド〕―以下「ギノサポニ
ンG」と称する― 20S―プロトパナキサジオール―3―0―〔α
―L―ラムノピラノシル(1→6)―β―D―グ
ルコピラノシド〕―20―0―β―D―グルコピラ
ノシド―以下「ギノサポニンK」と称する― 20S―プロトパナキサジオール―3―0―β―
D―グルコピラシド―20―0―〔β―D―キシロ
ピラノシル(1→6)―β―D―グルコピラノシ
ド〕―以下「ギノサポニン」と称する― 20S―プロトパナキサジオール―3―0―β―
D―グルコピラノシド―20―0―〔α―L―ラム
ノピラノシル(1→6)―β―D―グルコピラノ
シド〕―以下「ギノサポニンJ」と称する― 20S―プロトパナキサジオール―20―0―〔β
―D―キシロピラノシル(1―6)―β―D―グ
ルコピラノシド〕―以下「ギノサポニンM」と称
する― 20S―プロトパナキサジオール―20―0―〔α
―L―ラムノピラノシル(1→6)―β―D―グ
ルコピラノシド〕―以下「ギノサポニンN」と称
する― 20S,26―ヒドロキシプロトパナキサジオール
―3―0―{〔β―D―グルコピラノシル(1→
2)―α―L―ラムノピラノシル(1→6)〕―
β―D―グルコピラノシド)―20―0―〔α―L
―ラムピラノシル(1→6)―β―D―グルコピ
ラノシド〕―以下「ギノサポニン0」と称する― 20S―プロトパナキサジオール―3―0―〔α
―L―ラムノピラノシル(1→6)―β―D―グ
ルコピラノシド〕―20―0―〔β―D―グルコピ
ラノシル(1→6)―β―D―グルコピラノシ
ド〕―以下「プロギノサポゲニンA2」と称する
― プロトパナキサジオール―3―0―{〔β―D
―グルコピラノシル(1→2)―α―L―ラムノ
ピラノシル(1→6)〕―β―D―グルコピラノ
シド}―以下「プロギノサポゲニンA―AH」と
称する― 20S,26―ヒドロキシプロトパナキサジオール
―20―0―β―D―グルコピラノシド―以下「プ
ロギノサポゲニンO1」と称する― かくしてこの発明は、前記式()で表され、
式中R1がβ―D―グルコピラノシル(1→2)
―β―D―グルコピラノシル基、R2がα―L―
ラムノピラノシル(1→6)―β―D―グルコピ
ラノシル基、R3が水素原子の化合物、具体的に
はギノサポニンE並びにその製造法を提供するも
のである。 ギノサポニン類()のうち、ギノサポニン
A、B、E、F、G、I、J、K、M、Nおよび
Oはいずれもアマチヤヅルのサポニンの構成成分
であり、例えば次の方法によつてアマチヤヅルか
ら抽出、分離される。 先ず初めに、アマチヤヅルを水または含水低級
アルコールで抽出する。含水低級アルコールとし
ては50v/v%程度以下の含水メタノール、含水
エタノール等が例示される。この抽出は加温また
は加熱下に行うのが好ましい。なお、原料のアマ
チヤヅルは、抽出に先立つて予め細切し、あるい
は常法により脱脂したものを用いてもよい。また
抽出溶媒として含水低級アルコールを用いた場合
には抽出液を濃縮してアルコール分を除去したの
ち、適量の水を加えて次の非イオン性吸着樹脂で
の処理に付すのが好ましい。 非イオン性吸着樹脂としては、スチレン―ジビ
ニルベンゼン共重合体からなるハイポーラスなも
のが好ましく、具体的にはアンバーライトXAD
―2(米国ロームアンドハース社製)、セフアデ
ツクスLH20(フアーマシヤフアインケミカルズ
社製)などが繁用される。この処理は、吸着樹脂
を充填したカラムに上記で得られた抽出液を通液
して行うのが便利である。この操作によりサポニ
ンが樹脂に吸着される。 次いで樹脂に吸着されたサポニンを低級アルコ
ールで溶出する。溶出溶媒として用いられる低級
アルコールとしてはメタノール、エタノール等が
好ましい。なお、溶出に先立つて予めカラムを水
あるいは20v/v%程度の含水低級アルコールで
洗浄するのが好ましい。 上記で得られた低級アルコール溶出液を次いで
アルミナで処理する。この処理も、アルミナを充
填したカラムを用いて行えば簡便である。この処
理により、サポニンはアルミナに吸着される。な
お、このアルミナでの処理に先立つて上記の低級
アルコール溶出液を予め適宜濃縮しておいてもよ
い。 アルミナに吸着されたサポニンを次いで低級ア
ルコールまたは含水低級アルコールで、好ましく
は50v/v%程度の含水低級アルコールで溶出す
る。この溶出液を濃縮することにより、粗ギノサ
ポニン類が得られる。 上記のようにして得られる粗ギノサポニン類
は、ギノサポニンA、B、E、F、G、I、J、
K、M、NおよびO等からなり、これらの各成分
は例えば次の方法により分離、精製される。 すなわち、粗ギノサポニン類を水に溶解し、こ
の水溶液をスチレン系吸着樹脂、例えばサーバク
ロム(Servachrom)XAD―2〔サーバ
(Serva)社製〕で処理し、被吸着物質を45−100
%メタノール水溶液で溶出し、溶出液を濃縮後シ
リカゲルカラムで処理する。 シリカゲルに吸着されたサポニンを次いでクロ
ロホルム・低級アルコール・水で好ましくはクロ
ロホルム・メタノール・水(65:35:10下層)で
溶出し、薄層クロマトグラフイー(TLC)を指
標とし、溶出液をフラクシヨン1〜6に分画す
る。 フラクシヨン1〜3をそれぞれシリカゲルカラ
ムで処理し、次いでシリカゲルに吸着されたサポ
ニンをクロロホルム・低級アルコール・酢酸エチ
ル・水で好ましくはクロロホルム・メタノール・
酢酸エチル・水(2:2:4:1下層)で分画溶
出する。 また、フラクシヨン4および5もそれぞれシリ
カゲルカラムで処理し、次いで、シリカゲルに吸
着されたサポニンを低級アルコール・酢酸エチ
ル・水で好ましくはn―ブタノール・酢酸エチ
ル・水(4:1:2上層)で分画溶出する。 また、フラクシヨン6もシリカゲルカラムで処
理し、次いで、シリカゲルに吸着されたサポニン
をクロロホルム・低級アルコール・水で、好まし
くはクロロホルム・メタノール・水(65:35:10
下層)で分画溶出する。 上記で得られた各分画溶出液を濃縮し、さらに
TLCの結果を指標にして前記のシリカゲルカラ
ムクロマトグラフイーを繰返し、これらのギノサ
ポニン類を各個別に分離、精製すると、フラクシ
ヨン1からギノサポニンMおよびNが、フラクシ
ヨン2からギノサポニンI、JおよびKがフラク
シヨン3からギノサポニンGが、フラクシヨン4
からギノサポニンEおよびFが、フラクシヨン5
からギノサポニンBが、またフラクシヨン6から
ギノサポニンAがそれぞれ得られる。 また、ギノサポニンOは、粗ギノサポニン類を
スチレン系吸着樹脂で処理し、被吸着物質を30〜
40%メタノールで溶出し、溶出液を濃縮後シリカ
ゲルカラムで処理し、次いで吸着されたサポニン
をクロロホルム・低級アルコール・水で、好まし
くはクロロホルム・メタノール・水(65:35:10
下層)で分画溶出することにより、分離、精製で
きる。 さらにプロギノサポゲニンA2およびプロギノ
サポゲニンO1はそれぞれギノサポニンAおよび
ギノサポニンOを酸素加水分解することにより得
られ、またプロギノサポニンA―AHはギノサポ
ニンAを50%酢酸で処理することにより製造でき
る。 また、ギノサポニンF、G、I、J、K、Mお
よびNは他のギノサポニン類()を酵素加水分
解することによつても製造できる。 このようにして得られるギノサポニン類()
は、すべて新規であり、脂質分解抑制および脂質
合成抑制作用を有し、医薬として有用である。そ
して、ギノサポニン類()を医薬として用いる
場合には、個々のサポニンを有効成分として使用
することができる。 次にこの発明を実施例により説明する。 実施例 1 乾燥したアマチヤヅル全草2Kgを水30で熱時
2回抽出した。両抽出液を合し、非イオン性吸着
樹脂、アンバーライトXAD―2 4を充填し
たカラムに通導した。吸着部を水10、次いで20
%メタノール6で洗浄したのち、メタノール5
で溶出し、溶出液を減圧下に蒸発乾固し、黄褐
色粉末37gを得た。これをメタノール1に溶解
し、アルミナ300gを充填したカラムに通導した
のち、50%メタノール約20で溶出した。溶出液
を減圧下に濃縮し、淡黄色粉末として粗ギノサポ
ニン25gを得た。 粗ギノサポニン20gを水1に溶解し、スチレ
ン系吸着樹脂サーバクロムXAD―2(サーバ社
製)600mlを充填したカラムに通導した。吸着部
を20%メタノールより順次メタノール含量を増し
ながら溶出し、45〜100%メタノール溶出液を合
し、減圧下に蒸発乾固して淡黄色粉末16gを得
た。これをシリカゲル(300g)カラムクロマト
グラフイーに付し、TLCを指標として、クロロ
ホルム・メタノール・水(65:35:10下層)で
100mlずつ分画溶出してフラクシヨン1〜6を
得、それぞれ蒸発乾固した。これらフラクシヨン
1〜3をそれぞれシリカゲル(100g)カラムク
ロマトグラフイーに付し、クロロホルム・メタノ
ール・酢酸エチル・水(2:2:4:1下層)で
分画溶出し、さらにこの操作を2回繰返し、フラ
クシヨン(1.1g)からギノサポニンM(60mg)お
よびギノサポニンN(160mg)を、フラクシヨン
2(1.1g)からギノサポニンI(60mg)およびギ
ノサポニンJ(120mg)ならびにギノサポニンK
(110mg)を、またフラクシヨン3(1.0g)からギ
ノサポニンG(450mg)をそれぞれ得た。 またフラクシヨン4および5をそれぞれシリカ
ゲル(200g)カラムクロマトグラフイーに付
し、n―ブタノール・酢酸エチル・水(4:1:
2上層)で分画溶出し、さらにこの操作を2回繰
返しフラクシヨン4(3.4g)からギノサポニンD
(350mg)、ギノサポニンE(1500mg)およびギノ
サポニンF(80mg)を、またフラクシヨン5
(2.5g)からギノサポニンB(220mg)およびギノ
サポニンC(240mg)をそれぞれ得た。 さらに、フラクシヨン6(0.9g)をシリカゲル
(100g)カラムクロマトグラフイーに付し、クロ
ロホルム・メタノール・水(65:35:10下層)で
分画溶出し、さらにこの操作を1回繰返してギノ
サポニンA(510mg)を得た。 各ギノサポニンのうち特にギノサポニンEの物
性は後記の表1および表2に示す通りである。 参考例 1 ギノサポニンA250mgを0.005M―燐酸2水素ナ
トリウム水溶液(PH4.0)50mlに溶解し、これに
粗ヘスペリジナーゼ(田辺製薬株式会社製)500
mgを加え、37〜38℃で6時間撹拌した。反応液を
スチレン系吸着樹脂、サーバクロムXAD―2
(サーバ社製)50mlを充填したカラムに通導し、
水1次いで20%メタノール2で洗浄したの
ち、メタノール300mlで溶出した。溶出液を減圧
下に濃縮し、濃縮物をシリカゲル・カラム・クロ
マトグラフイーに付し、クロロホルム・メタノー
ル・水(65:35:10下層)で分画溶出して、ギノ
サポニンF(20mg)、ギノサポニンK(15mg)お
よびプロギノサポニンA2(35mg)を得た。ギノ
サポニンFおよびKはIRおよびNMRにより、実
施例1で得られた標品と同定した。 参考例 2 ギノサポニンA150mgを50%酢酸10mlに溶解
し、70℃で6時間撹拌した。反応液をスチレン系
吸着樹脂、サーバクロム XAD―2 50mlを充
填したカラムに付して、プロサポゲニン画分約
100mgを得た。これをシリカゲルカラムクロマト
グラフイーに付し、クロロホルム・メタノール・
酢酸エチル・水(2:2:4:1下層)で分画溶
出して、プロギノサポゲニンA―AH35mgを得
た。 参考例 3 ギノサポニンA400mgを0.005M―燐酸2水素ナ
トリウム水溶液(PH4.0)50mlに溶解した。これ
にセルラーゼ(シグマ社製)300mgを加え、37〜
38℃で24時間撹拌した。反応液を参考例1と同様
に処理して、ギノサポニンK(110mg)を得た。
本品はIRおよびNMRにより、実施例1で得た標
品と同定した。 参考例 4 ギノサポニンBおよびCの混合物1.4gを
0.005M―燐酸2水溶液(PH4.0)200mlに溶解し
た。これにセルラーゼ(シグマ社製)600mgを加
え、37〜38℃で7時間撹拌した。反応液をサーバ
クロムXAD―2(80ml)のカラムで処理して約
1.1gの加水分解物を得た。これをシリカゲルカラ
ムクロマトグラフイーに付し、クロロホルム・メ
タノール・酢酸エチル・水(2:2:4:1下
層)で分画溶出してギノサポニンK(140mg)な
らびにギノサポニンFおよびGを含む混合物
(550mg)を得た。この混合物を再びシリカゲルカ
ラムクロマトグラフイーに付し、クロロホルム・
メタノール・水(65:35:10下層)で分画溶出し
て、ギノサポニンF(50mg)およびギノサポニン
G(150mg)を得た。これらのギノサポニンF、
GおよびKはIRおよびNMRにより実施例1で得
られた標品と同定した。 参考例 5 ギノサポニンBおよびCの混合物300mgを50%
酢酸10mlに溶解し、70℃で6時間撹拌した。反応
液をサーバクロムXAD―2(50ml)のカラムに
付して分画し、プロサポゲニン画分をシリカゲル
カラムクロマトグラフイーに付し、クロロホル
ム・メタノール・水(65:35:10下層)で分画溶
出してプロギノサポゲニンA―AH(30mg)を得
た。本品はIRおよびNMRにより、参考例2で得
られた標品と同定した。 参考例 6 ギノサポニンDおよびEの混合物2gを0.005M
―燐酸2水素ナトリウム水溶液(PH4.0)に溶解
した。これにセルラーゼ(シグマ社製)1gを加
え、37〜38℃で20時間撹拌した。反応液をサーバ
クロムXAD―2(80ml)のカラムで処理して約
1.6gの加水分解物を得た。これをシリカゲルカラ
ムクロマトグラフイーに付し、クロロホルム・メ
タノール・酢酸エチル・水(2:2:4:1下
層)で分画溶出してギノサポニンI(355mg)、J
(250mg)、M(80mg)およびN(90mg)を得た。
これらの各ギノサポニンはIRおよびNMRによ
り、実施例1で得られた標品とそれぞれ同定し
た。 参考例 7 ギノサポニンE5mgを0.005M―燐酸2水素ナト
リウム水溶液(PH4.0)1mlに溶解し、これにセ
ルラーゼ10mgを加え、37〜38℃で4時間撹拌し
た。反応液中にギノサポニンJおよびNが生成し
ていることを薄層クロマトグラフイーにより確認
した。 参考例 8 実施例1で得た粗ギノサポニンをスチレン系吸
着樹脂、サーバクロムXAD―2で処理し、30〜
40%メタノールで溶出した。溶出液を減圧下蒸発
乾固し、淡黄色粉末2gを得た。これをシリカゲ
ル(200g)カラムクロマトグラフイーに付し、
クロロホルム・メタノール・水(65:35:10下
層)で分画溶出し、さらにこの操作を2回繰返
し、ギノサポニンO(150mg)を得た。 参考例 9 ギノサポニンO 150mgを0.005M―燐酸2水素
ナトリウム水溶液(PH4.0)30mlに溶解し、これ
にセルラーゼ(シグマ社製)150mgを加え、37〜
38℃で24時間撹拌した。反応液を参考例1と同様
に処理して、プロギノサポゲニンO1(20mg)を
得た。 なお、参考例4および5において原料として使
用したギノサポニンCの化学名は20S―プロトパ
ナキサジオール―3―O―〔β―D―グルコピラ
ノシル(1→2)―β―D―グルコピラノシド〕
―20―O―〔β―D―グルコピラノシル(1→
6)―β―D―グルコピラノシド〕であつて、ギ
ンセノシド―Rb1と同定された。また、参考例6
において原料として使用したギノサポニンDの化
学名は20S―プロトパナキサジオール―3―O―
〔β―D―グルコピラノシル(1→2)―β―D
―グルコピラノシド〕―20―O―〔β―D―キシ
ロピラノシル(1→6)―β―D―グルコピラノ
シド〕であつて、ギンセノシド―Rb3と同定され
た。
pentaphyllum Makino)のサポニンの構成成分
であずギノサポニン類およびその製造法に関す
る。 この発明の発明者らはアマチヤヅルの含有成分
を研究した結果、下記の新規なギノサポニン類を
見出した。すなわち、式(): 〔式中R1が〔β―D―グルコピラノシル(1
→2)―α―L―ラムノピラノシル(1→6)〕
―β―D―グルコピラノシル基であるときは、
R2が水素原子、β―D―グルコピラノシル(1
→6)―β―D―グルコピラノシル基、α―L―
ラムノピラノシル(1→6)―β―D―グルコピ
ラノシル基もしくはβ―D―グルコピラノシル基
であつて、R3が水素原子もしくはヒドロキシ基
であり、 R1がβ―D―グルコピラノシル(1→2)―
β―D―グルコピラノシル基であるときは、R2
がα―L―ラムノピラノシル(1→6)―β―D
―グルコピラノシル基であつて、R3が水素原子
であり、 R1がα―L―ラムノピラノシル(1→6)―
β―D―グルコピラノシル基であるときは、R2
がβ―D―グルコピラノシル(1→6)―β―D
―グルコピラノシル基、α―L―ラムノピラノシ
ル(1→6)―β―D―グルコピラノシル基、も
しくはβ―D―グルコピラノシルであつて、R3
が水素原子であり、 R1がβ―D―グルコピラノシル基であるとき
はR2がβ―D―キシロピラノシル(1→6)―
β―D―グルコピラノシル基もしくはα―L―ラ
ムノピラノシル(1→6)―β―D―グルコピラ
ノシル基であつて、R3が水素原子であり、また R1が水素原子であるときは、R2がβ―D―グ
ルコピラノシル基、β―D―キシロピラノシル
(1→6)―β―D―グルコピラノシル基もしく
はα―L―ラムノピラノシル(1→6)―β―D
―グルコピラノシル基であつて、R3が水素原子
もしくはヒドロキシ基である〕 で表わされる化合物である。 これらのギノサポニン類()の具体名を列挙
すると次の通りである。 20S―プロトパナキサジオール―3―0―
{〔β―D―グルコピラノシル(1→2)―α―L
―ラムノピラノシル(1→6)〕―β―D―グル
コピラノシド}―20―0―〔β―D―グルコピラ
ノシル(1→6)―β―D―グルコピラノシド〕
―以下「ギノサポニンA」と称する― 20S―プロトパナキサジオール―3―0―
{〔β―D―グルコピラノシル(1→2)―α―L
―ラムノピラノシル(1→6)〕―β―D―グル
コピラノシド}―20―0―〔α―L―ラムノピラ
ノシル(1→6)―β―D―グルコピラノシド〕
―以下「ギノサポニンB」と称する― 20S―プロトパナキサジオール―3―0―
{〔β―D―グルコピラノシル(1→2)―α―L
―ラムノピラノシル(1→6)〕―β―D―グル
コピラノシド}―20―0―β―D―グルコピラノ
シド―以下「ギノサポニンF」と称する― 20S―プロトパナキサジオール―3―0―〔β
―D―グルコピラノシル(1→2)―β―D―グ
ルコピラノシド〕―20―0―〔α―L―ラムノピ
ラノシル(1→6)―β―D―グルコピラノシ
ド〕―以下「ギノサポニンE」と称する― 20S―プロナパナキサジオール―3,20―ビス
―0―〔α―L―ラムノピラノシル(1→6)―
β―D―グルコピラノシド〕―以下「ギノサポニ
ンG」と称する― 20S―プロトパナキサジオール―3―0―〔α
―L―ラムノピラノシル(1→6)―β―D―グ
ルコピラノシド〕―20―0―β―D―グルコピラ
ノシド―以下「ギノサポニンK」と称する― 20S―プロトパナキサジオール―3―0―β―
D―グルコピラシド―20―0―〔β―D―キシロ
ピラノシル(1→6)―β―D―グルコピラノシ
ド〕―以下「ギノサポニン」と称する― 20S―プロトパナキサジオール―3―0―β―
D―グルコピラノシド―20―0―〔α―L―ラム
ノピラノシル(1→6)―β―D―グルコピラノ
シド〕―以下「ギノサポニンJ」と称する― 20S―プロトパナキサジオール―20―0―〔β
―D―キシロピラノシル(1―6)―β―D―グ
ルコピラノシド〕―以下「ギノサポニンM」と称
する― 20S―プロトパナキサジオール―20―0―〔α
―L―ラムノピラノシル(1→6)―β―D―グ
ルコピラノシド〕―以下「ギノサポニンN」と称
する― 20S,26―ヒドロキシプロトパナキサジオール
―3―0―{〔β―D―グルコピラノシル(1→
2)―α―L―ラムノピラノシル(1→6)〕―
β―D―グルコピラノシド)―20―0―〔α―L
―ラムピラノシル(1→6)―β―D―グルコピ
ラノシド〕―以下「ギノサポニン0」と称する― 20S―プロトパナキサジオール―3―0―〔α
―L―ラムノピラノシル(1→6)―β―D―グ
ルコピラノシド〕―20―0―〔β―D―グルコピ
ラノシル(1→6)―β―D―グルコピラノシ
ド〕―以下「プロギノサポゲニンA2」と称する
― プロトパナキサジオール―3―0―{〔β―D
―グルコピラノシル(1→2)―α―L―ラムノ
ピラノシル(1→6)〕―β―D―グルコピラノ
シド}―以下「プロギノサポゲニンA―AH」と
称する― 20S,26―ヒドロキシプロトパナキサジオール
―20―0―β―D―グルコピラノシド―以下「プ
ロギノサポゲニンO1」と称する― かくしてこの発明は、前記式()で表され、
式中R1がβ―D―グルコピラノシル(1→2)
―β―D―グルコピラノシル基、R2がα―L―
ラムノピラノシル(1→6)―β―D―グルコピ
ラノシル基、R3が水素原子の化合物、具体的に
はギノサポニンE並びにその製造法を提供するも
のである。 ギノサポニン類()のうち、ギノサポニン
A、B、E、F、G、I、J、K、M、Nおよび
Oはいずれもアマチヤヅルのサポニンの構成成分
であり、例えば次の方法によつてアマチヤヅルか
ら抽出、分離される。 先ず初めに、アマチヤヅルを水または含水低級
アルコールで抽出する。含水低級アルコールとし
ては50v/v%程度以下の含水メタノール、含水
エタノール等が例示される。この抽出は加温また
は加熱下に行うのが好ましい。なお、原料のアマ
チヤヅルは、抽出に先立つて予め細切し、あるい
は常法により脱脂したものを用いてもよい。また
抽出溶媒として含水低級アルコールを用いた場合
には抽出液を濃縮してアルコール分を除去したの
ち、適量の水を加えて次の非イオン性吸着樹脂で
の処理に付すのが好ましい。 非イオン性吸着樹脂としては、スチレン―ジビ
ニルベンゼン共重合体からなるハイポーラスなも
のが好ましく、具体的にはアンバーライトXAD
―2(米国ロームアンドハース社製)、セフアデ
ツクスLH20(フアーマシヤフアインケミカルズ
社製)などが繁用される。この処理は、吸着樹脂
を充填したカラムに上記で得られた抽出液を通液
して行うのが便利である。この操作によりサポニ
ンが樹脂に吸着される。 次いで樹脂に吸着されたサポニンを低級アルコ
ールで溶出する。溶出溶媒として用いられる低級
アルコールとしてはメタノール、エタノール等が
好ましい。なお、溶出に先立つて予めカラムを水
あるいは20v/v%程度の含水低級アルコールで
洗浄するのが好ましい。 上記で得られた低級アルコール溶出液を次いで
アルミナで処理する。この処理も、アルミナを充
填したカラムを用いて行えば簡便である。この処
理により、サポニンはアルミナに吸着される。な
お、このアルミナでの処理に先立つて上記の低級
アルコール溶出液を予め適宜濃縮しておいてもよ
い。 アルミナに吸着されたサポニンを次いで低級ア
ルコールまたは含水低級アルコールで、好ましく
は50v/v%程度の含水低級アルコールで溶出す
る。この溶出液を濃縮することにより、粗ギノサ
ポニン類が得られる。 上記のようにして得られる粗ギノサポニン類
は、ギノサポニンA、B、E、F、G、I、J、
K、M、NおよびO等からなり、これらの各成分
は例えば次の方法により分離、精製される。 すなわち、粗ギノサポニン類を水に溶解し、こ
の水溶液をスチレン系吸着樹脂、例えばサーバク
ロム(Servachrom)XAD―2〔サーバ
(Serva)社製〕で処理し、被吸着物質を45−100
%メタノール水溶液で溶出し、溶出液を濃縮後シ
リカゲルカラムで処理する。 シリカゲルに吸着されたサポニンを次いでクロ
ロホルム・低級アルコール・水で好ましくはクロ
ロホルム・メタノール・水(65:35:10下層)で
溶出し、薄層クロマトグラフイー(TLC)を指
標とし、溶出液をフラクシヨン1〜6に分画す
る。 フラクシヨン1〜3をそれぞれシリカゲルカラ
ムで処理し、次いでシリカゲルに吸着されたサポ
ニンをクロロホルム・低級アルコール・酢酸エチ
ル・水で好ましくはクロロホルム・メタノール・
酢酸エチル・水(2:2:4:1下層)で分画溶
出する。 また、フラクシヨン4および5もそれぞれシリ
カゲルカラムで処理し、次いで、シリカゲルに吸
着されたサポニンを低級アルコール・酢酸エチ
ル・水で好ましくはn―ブタノール・酢酸エチ
ル・水(4:1:2上層)で分画溶出する。 また、フラクシヨン6もシリカゲルカラムで処
理し、次いで、シリカゲルに吸着されたサポニン
をクロロホルム・低級アルコール・水で、好まし
くはクロロホルム・メタノール・水(65:35:10
下層)で分画溶出する。 上記で得られた各分画溶出液を濃縮し、さらに
TLCの結果を指標にして前記のシリカゲルカラ
ムクロマトグラフイーを繰返し、これらのギノサ
ポニン類を各個別に分離、精製すると、フラクシ
ヨン1からギノサポニンMおよびNが、フラクシ
ヨン2からギノサポニンI、JおよびKがフラク
シヨン3からギノサポニンGが、フラクシヨン4
からギノサポニンEおよびFが、フラクシヨン5
からギノサポニンBが、またフラクシヨン6から
ギノサポニンAがそれぞれ得られる。 また、ギノサポニンOは、粗ギノサポニン類を
スチレン系吸着樹脂で処理し、被吸着物質を30〜
40%メタノールで溶出し、溶出液を濃縮後シリカ
ゲルカラムで処理し、次いで吸着されたサポニン
をクロロホルム・低級アルコール・水で、好まし
くはクロロホルム・メタノール・水(65:35:10
下層)で分画溶出することにより、分離、精製で
きる。 さらにプロギノサポゲニンA2およびプロギノ
サポゲニンO1はそれぞれギノサポニンAおよび
ギノサポニンOを酸素加水分解することにより得
られ、またプロギノサポニンA―AHはギノサポ
ニンAを50%酢酸で処理することにより製造でき
る。 また、ギノサポニンF、G、I、J、K、Mお
よびNは他のギノサポニン類()を酵素加水分
解することによつても製造できる。 このようにして得られるギノサポニン類()
は、すべて新規であり、脂質分解抑制および脂質
合成抑制作用を有し、医薬として有用である。そ
して、ギノサポニン類()を医薬として用いる
場合には、個々のサポニンを有効成分として使用
することができる。 次にこの発明を実施例により説明する。 実施例 1 乾燥したアマチヤヅル全草2Kgを水30で熱時
2回抽出した。両抽出液を合し、非イオン性吸着
樹脂、アンバーライトXAD―2 4を充填し
たカラムに通導した。吸着部を水10、次いで20
%メタノール6で洗浄したのち、メタノール5
で溶出し、溶出液を減圧下に蒸発乾固し、黄褐
色粉末37gを得た。これをメタノール1に溶解
し、アルミナ300gを充填したカラムに通導した
のち、50%メタノール約20で溶出した。溶出液
を減圧下に濃縮し、淡黄色粉末として粗ギノサポ
ニン25gを得た。 粗ギノサポニン20gを水1に溶解し、スチレ
ン系吸着樹脂サーバクロムXAD―2(サーバ社
製)600mlを充填したカラムに通導した。吸着部
を20%メタノールより順次メタノール含量を増し
ながら溶出し、45〜100%メタノール溶出液を合
し、減圧下に蒸発乾固して淡黄色粉末16gを得
た。これをシリカゲル(300g)カラムクロマト
グラフイーに付し、TLCを指標として、クロロ
ホルム・メタノール・水(65:35:10下層)で
100mlずつ分画溶出してフラクシヨン1〜6を
得、それぞれ蒸発乾固した。これらフラクシヨン
1〜3をそれぞれシリカゲル(100g)カラムク
ロマトグラフイーに付し、クロロホルム・メタノ
ール・酢酸エチル・水(2:2:4:1下層)で
分画溶出し、さらにこの操作を2回繰返し、フラ
クシヨン(1.1g)からギノサポニンM(60mg)お
よびギノサポニンN(160mg)を、フラクシヨン
2(1.1g)からギノサポニンI(60mg)およびギ
ノサポニンJ(120mg)ならびにギノサポニンK
(110mg)を、またフラクシヨン3(1.0g)からギ
ノサポニンG(450mg)をそれぞれ得た。 またフラクシヨン4および5をそれぞれシリカ
ゲル(200g)カラムクロマトグラフイーに付
し、n―ブタノール・酢酸エチル・水(4:1:
2上層)で分画溶出し、さらにこの操作を2回繰
返しフラクシヨン4(3.4g)からギノサポニンD
(350mg)、ギノサポニンE(1500mg)およびギノ
サポニンF(80mg)を、またフラクシヨン5
(2.5g)からギノサポニンB(220mg)およびギノ
サポニンC(240mg)をそれぞれ得た。 さらに、フラクシヨン6(0.9g)をシリカゲル
(100g)カラムクロマトグラフイーに付し、クロ
ロホルム・メタノール・水(65:35:10下層)で
分画溶出し、さらにこの操作を1回繰返してギノ
サポニンA(510mg)を得た。 各ギノサポニンのうち特にギノサポニンEの物
性は後記の表1および表2に示す通りである。 参考例 1 ギノサポニンA250mgを0.005M―燐酸2水素ナ
トリウム水溶液(PH4.0)50mlに溶解し、これに
粗ヘスペリジナーゼ(田辺製薬株式会社製)500
mgを加え、37〜38℃で6時間撹拌した。反応液を
スチレン系吸着樹脂、サーバクロムXAD―2
(サーバ社製)50mlを充填したカラムに通導し、
水1次いで20%メタノール2で洗浄したの
ち、メタノール300mlで溶出した。溶出液を減圧
下に濃縮し、濃縮物をシリカゲル・カラム・クロ
マトグラフイーに付し、クロロホルム・メタノー
ル・水(65:35:10下層)で分画溶出して、ギノ
サポニンF(20mg)、ギノサポニンK(15mg)お
よびプロギノサポニンA2(35mg)を得た。ギノ
サポニンFおよびKはIRおよびNMRにより、実
施例1で得られた標品と同定した。 参考例 2 ギノサポニンA150mgを50%酢酸10mlに溶解
し、70℃で6時間撹拌した。反応液をスチレン系
吸着樹脂、サーバクロム XAD―2 50mlを充
填したカラムに付して、プロサポゲニン画分約
100mgを得た。これをシリカゲルカラムクロマト
グラフイーに付し、クロロホルム・メタノール・
酢酸エチル・水(2:2:4:1下層)で分画溶
出して、プロギノサポゲニンA―AH35mgを得
た。 参考例 3 ギノサポニンA400mgを0.005M―燐酸2水素ナ
トリウム水溶液(PH4.0)50mlに溶解した。これ
にセルラーゼ(シグマ社製)300mgを加え、37〜
38℃で24時間撹拌した。反応液を参考例1と同様
に処理して、ギノサポニンK(110mg)を得た。
本品はIRおよびNMRにより、実施例1で得た標
品と同定した。 参考例 4 ギノサポニンBおよびCの混合物1.4gを
0.005M―燐酸2水溶液(PH4.0)200mlに溶解し
た。これにセルラーゼ(シグマ社製)600mgを加
え、37〜38℃で7時間撹拌した。反応液をサーバ
クロムXAD―2(80ml)のカラムで処理して約
1.1gの加水分解物を得た。これをシリカゲルカラ
ムクロマトグラフイーに付し、クロロホルム・メ
タノール・酢酸エチル・水(2:2:4:1下
層)で分画溶出してギノサポニンK(140mg)な
らびにギノサポニンFおよびGを含む混合物
(550mg)を得た。この混合物を再びシリカゲルカ
ラムクロマトグラフイーに付し、クロロホルム・
メタノール・水(65:35:10下層)で分画溶出し
て、ギノサポニンF(50mg)およびギノサポニン
G(150mg)を得た。これらのギノサポニンF、
GおよびKはIRおよびNMRにより実施例1で得
られた標品と同定した。 参考例 5 ギノサポニンBおよびCの混合物300mgを50%
酢酸10mlに溶解し、70℃で6時間撹拌した。反応
液をサーバクロムXAD―2(50ml)のカラムに
付して分画し、プロサポゲニン画分をシリカゲル
カラムクロマトグラフイーに付し、クロロホル
ム・メタノール・水(65:35:10下層)で分画溶
出してプロギノサポゲニンA―AH(30mg)を得
た。本品はIRおよびNMRにより、参考例2で得
られた標品と同定した。 参考例 6 ギノサポニンDおよびEの混合物2gを0.005M
―燐酸2水素ナトリウム水溶液(PH4.0)に溶解
した。これにセルラーゼ(シグマ社製)1gを加
え、37〜38℃で20時間撹拌した。反応液をサーバ
クロムXAD―2(80ml)のカラムで処理して約
1.6gの加水分解物を得た。これをシリカゲルカラ
ムクロマトグラフイーに付し、クロロホルム・メ
タノール・酢酸エチル・水(2:2:4:1下
層)で分画溶出してギノサポニンI(355mg)、J
(250mg)、M(80mg)およびN(90mg)を得た。
これらの各ギノサポニンはIRおよびNMRによ
り、実施例1で得られた標品とそれぞれ同定し
た。 参考例 7 ギノサポニンE5mgを0.005M―燐酸2水素ナト
リウム水溶液(PH4.0)1mlに溶解し、これにセ
ルラーゼ10mgを加え、37〜38℃で4時間撹拌し
た。反応液中にギノサポニンJおよびNが生成し
ていることを薄層クロマトグラフイーにより確認
した。 参考例 8 実施例1で得た粗ギノサポニンをスチレン系吸
着樹脂、サーバクロムXAD―2で処理し、30〜
40%メタノールで溶出した。溶出液を減圧下蒸発
乾固し、淡黄色粉末2gを得た。これをシリカゲ
ル(200g)カラムクロマトグラフイーに付し、
クロロホルム・メタノール・水(65:35:10下
層)で分画溶出し、さらにこの操作を2回繰返
し、ギノサポニンO(150mg)を得た。 参考例 9 ギノサポニンO 150mgを0.005M―燐酸2水素
ナトリウム水溶液(PH4.0)30mlに溶解し、これ
にセルラーゼ(シグマ社製)150mgを加え、37〜
38℃で24時間撹拌した。反応液を参考例1と同様
に処理して、プロギノサポゲニンO1(20mg)を
得た。 なお、参考例4および5において原料として使
用したギノサポニンCの化学名は20S―プロトパ
ナキサジオール―3―O―〔β―D―グルコピラ
ノシル(1→2)―β―D―グルコピラノシド〕
―20―O―〔β―D―グルコピラノシル(1→
6)―β―D―グルコピラノシド〕であつて、ギ
ンセノシド―Rb1と同定された。また、参考例6
において原料として使用したギノサポニンDの化
学名は20S―プロトパナキサジオール―3―O―
〔β―D―グルコピラノシル(1→2)―β―D
―グルコピラノシド〕―20―O―〔β―D―キシ
ロピラノシル(1→6)―β―D―グルコピラノ
シド〕であつて、ギンセノシド―Rb3と同定され
た。
【表】
【表】
【表】
次に本発明のギノサポニン類の薬理効果につい
て述べる。 人間を含めた哺乳動物は、外より取入れた脂肪
とか糖質の過剰分を脂肪細胞に変換して貯え、外
からの補給がない場合これを脂肪分解して脂肪酸
やグルコースに変えてエネルギー源として利用す
る。この脂肪細胞の脂肪分解には、脳下垂体ホル
モンである福腎皮質刺戟ホルモン(ACTH)や
副腎皮質ホルモンであるアドレナリンが大きく作
用し、分解を促進する。逆に、脂肪細胞の脂肪分
解を抑制し、血液中の血糖量が増大しないように
する働きを持つものが、糖尿病薬として有名な膵
臓ホルモンのインシユリンである。この発明によ
るギノサポニン類は脂肪細胞に対して、インシユ
リン様の作用をもちACTHの脂肪分解促進を抑
制する。その効果はギノサポニンBの抑制率18%
からギノサポニンNの38%抑制率まで、ACTH
の脂肪分解促進作用を、平均28%抑制する効力を
もつ。 脂肪細胞におけるアドレナリンの脂肪分解促進
作用に対してのギノサポニン類の抑制力は全体的
にACTHに対する場合に比べて弱いが、ギノサ
ポニンBおよびEのみは30%以上のアドレナリン
脂肪分解抑制効力をもつ。 また脂肪細胞は、グルコースを中性脂肪に変換
して貯える作用を有するが、脂肪細胞のグルコー
ルから中性脂肪を合成する能力を上記ギノサポニ
ン類はいずれも抑制する作用を有し平均約50%の
抑制力をもつ。 従つて本発明のギノサポニン類は、脂肪細胞に
おける脂肪分解抑制剤および脂肪合成抑制剤とし
ての新しい脂質代謝剤としての医薬品の用途が期
待される。次に本発明のギノサポニン類の薬理試
験結果を示す。 薬理試験結果 試験用脂肪細胞の調整 使用動物は体重150〜180gのwister系雄ラツト
を使用し、このラツトから副睾丸脂肪組織をとり
出し、Rodbellの方法〔M.Rodbell:J.Biol,
Chem,239,375(1964)〕により脂肪細胞を得
た。この脂肪組織4gを小切片にし、Krebo
Ringer Bicarbanate Buffer10ml(アルブミン
0.4g、コラゲナーゼ10mg、グルコース5mgを含
む。PH7.4)に入れ37℃で50分間加温し、300r.p.
m.で遠心分離し浮上する脂肪細胞層を分取す
る。この脂肪細胞に前記緩衝液10ml(PH7.4)を
加えよくふりまぜて洗い300r.p.m.で30秒間遠心
分離する。この操作を2回繰返し、脂肪細胞を完
全に洗い、この脂肪細胞を試験に用いた。検体液
はギノサポニンのそれぞれを水溶液とし、PH7.4
に調整したものを用いた。 試験方法および結果 1 ACTHによる脂肪細胞の脂肪分解に及ぼす
ギノサポニン類の影響 a 試験方法 コラゲナーゼ処理して得た脂肪細胞をKrebs
Ringer Bicarbonate Buffer(KRB.PH7.4)中に
懸濁し、その溶液0.3ml(脂肪細胞100mg相当)、
ACTH溶液0.1ml(1μgのACTHを含む),各サ
ポニン溶液0.1ml(500μgのサポニンを含む)お
よび5%アルブミン溶液0.3ml(KRBにとかし、
PH7.4に調整した溶液)を共栓試験管に入れ、37
℃で2時間加温し、Doleの方法〔V.P.Dole:J.
Biol.Chem.,35,150(1958)〕に従つて遊離す
る脂肪酸を測定した。 すなわち、反応系にDoleの抽出液3mlを分取
し、チモールブル―溶液1mlを加える。この溶液
に窒素ガスを吹込んで撹拌しながら0.008規定水
酸化ナトリウム水溶液で滴定し、検量線より遊離
脂肪酸量を測定する。 なお、脂肪分解抑制率は次式により求められ
る。 脂肪分解抑制率(%)=A−B/A×100 A:ACTH(1μg/ml)のみの添加により生
じた遊離脂肪酸量 B:ACTH(1μg/ml)+サポニン(20μg/
ml)の添加により生じた遊離脂肪酸量 b 試験結果 ACTHによる脂肪細胞の脂肪分解に対するギ
ノサポニンEの抑制率の測定結果を第3表に示し
た。
て述べる。 人間を含めた哺乳動物は、外より取入れた脂肪
とか糖質の過剰分を脂肪細胞に変換して貯え、外
からの補給がない場合これを脂肪分解して脂肪酸
やグルコースに変えてエネルギー源として利用す
る。この脂肪細胞の脂肪分解には、脳下垂体ホル
モンである福腎皮質刺戟ホルモン(ACTH)や
副腎皮質ホルモンであるアドレナリンが大きく作
用し、分解を促進する。逆に、脂肪細胞の脂肪分
解を抑制し、血液中の血糖量が増大しないように
する働きを持つものが、糖尿病薬として有名な膵
臓ホルモンのインシユリンである。この発明によ
るギノサポニン類は脂肪細胞に対して、インシユ
リン様の作用をもちACTHの脂肪分解促進を抑
制する。その効果はギノサポニンBの抑制率18%
からギノサポニンNの38%抑制率まで、ACTH
の脂肪分解促進作用を、平均28%抑制する効力を
もつ。 脂肪細胞におけるアドレナリンの脂肪分解促進
作用に対してのギノサポニン類の抑制力は全体的
にACTHに対する場合に比べて弱いが、ギノサ
ポニンBおよびEのみは30%以上のアドレナリン
脂肪分解抑制効力をもつ。 また脂肪細胞は、グルコースを中性脂肪に変換
して貯える作用を有するが、脂肪細胞のグルコー
ルから中性脂肪を合成する能力を上記ギノサポニ
ン類はいずれも抑制する作用を有し平均約50%の
抑制力をもつ。 従つて本発明のギノサポニン類は、脂肪細胞に
おける脂肪分解抑制剤および脂肪合成抑制剤とし
ての新しい脂質代謝剤としての医薬品の用途が期
待される。次に本発明のギノサポニン類の薬理試
験結果を示す。 薬理試験結果 試験用脂肪細胞の調整 使用動物は体重150〜180gのwister系雄ラツト
を使用し、このラツトから副睾丸脂肪組織をとり
出し、Rodbellの方法〔M.Rodbell:J.Biol,
Chem,239,375(1964)〕により脂肪細胞を得
た。この脂肪組織4gを小切片にし、Krebo
Ringer Bicarbanate Buffer10ml(アルブミン
0.4g、コラゲナーゼ10mg、グルコース5mgを含
む。PH7.4)に入れ37℃で50分間加温し、300r.p.
m.で遠心分離し浮上する脂肪細胞層を分取す
る。この脂肪細胞に前記緩衝液10ml(PH7.4)を
加えよくふりまぜて洗い300r.p.m.で30秒間遠心
分離する。この操作を2回繰返し、脂肪細胞を完
全に洗い、この脂肪細胞を試験に用いた。検体液
はギノサポニンのそれぞれを水溶液とし、PH7.4
に調整したものを用いた。 試験方法および結果 1 ACTHによる脂肪細胞の脂肪分解に及ぼす
ギノサポニン類の影響 a 試験方法 コラゲナーゼ処理して得た脂肪細胞をKrebs
Ringer Bicarbonate Buffer(KRB.PH7.4)中に
懸濁し、その溶液0.3ml(脂肪細胞100mg相当)、
ACTH溶液0.1ml(1μgのACTHを含む),各サ
ポニン溶液0.1ml(500μgのサポニンを含む)お
よび5%アルブミン溶液0.3ml(KRBにとかし、
PH7.4に調整した溶液)を共栓試験管に入れ、37
℃で2時間加温し、Doleの方法〔V.P.Dole:J.
Biol.Chem.,35,150(1958)〕に従つて遊離す
る脂肪酸を測定した。 すなわち、反応系にDoleの抽出液3mlを分取
し、チモールブル―溶液1mlを加える。この溶液
に窒素ガスを吹込んで撹拌しながら0.008規定水
酸化ナトリウム水溶液で滴定し、検量線より遊離
脂肪酸量を測定する。 なお、脂肪分解抑制率は次式により求められ
る。 脂肪分解抑制率(%)=A−B/A×100 A:ACTH(1μg/ml)のみの添加により生
じた遊離脂肪酸量 B:ACTH(1μg/ml)+サポニン(20μg/
ml)の添加により生じた遊離脂肪酸量 b 試験結果 ACTHによる脂肪細胞の脂肪分解に対するギ
ノサポニンEの抑制率の測定結果を第3表に示し
た。
【表】
以上のごとくACTH1μg/mlを脂肪細胞に作
用させ37℃で2時間保つとき脂肪を分解して8.4
μEg/gの遊離脂肪酸を生成するが、ギノサポ
ニン類をそれぞれ20μg/ml添加すると上記のご
とく明らかにACTHの脂肪分解作用を抑制し、
遊離脂肪酸の生成量が減少する。その平均抑制率
は28%である。 2 アドレナリンによる脂肪細胞の脂肪分解に対
するギノサポニン類の影響 a 試験方法 コラゲナーゼ処理して得た脂肪細胞をKrebs
Ringer Phoshate Buffer(KRP,PH7.4)に懸濁
し、その溶液0.3ml(脂肪細胞100mg相当)、アド
レナリン溶液0.1ml(1μgのアドレナリンを含
む)各サポニン溶液0.1ml(20μgのサポニンを
含む)および5%アルブミン溶液0.5ml(KRPに
溶解しPH7.4に調整した溶液)を共栓試験管に入
れ、37℃で2時間加温し、Doleの方法(前記
1)と同様)に従つて遊離する脂肪酸量を測定し
た。すなわち反応系にDoleの抽出液3mlを加え
5分間振とう後、ヘプタン3mlを分取し、チモー
ルブル―溶液1mlを加える。この溶液を窒素ガス
で撹拌しながら0.008規定水酸化ナトリウム水溶
液で滴定し検量線より遊離脂肪酸量を求める。 なお、上記抑制率は前記1に用いた式と同じ式
を用いた。 b 試験結果 アドレナリンによる脂肪細胞の脂肪分解に対す
るギノサポニンEの抑制率の測定結果を第4表に
示した。
用させ37℃で2時間保つとき脂肪を分解して8.4
μEg/gの遊離脂肪酸を生成するが、ギノサポ
ニン類をそれぞれ20μg/ml添加すると上記のご
とく明らかにACTHの脂肪分解作用を抑制し、
遊離脂肪酸の生成量が減少する。その平均抑制率
は28%である。 2 アドレナリンによる脂肪細胞の脂肪分解に対
するギノサポニン類の影響 a 試験方法 コラゲナーゼ処理して得た脂肪細胞をKrebs
Ringer Phoshate Buffer(KRP,PH7.4)に懸濁
し、その溶液0.3ml(脂肪細胞100mg相当)、アド
レナリン溶液0.1ml(1μgのアドレナリンを含
む)各サポニン溶液0.1ml(20μgのサポニンを
含む)および5%アルブミン溶液0.5ml(KRPに
溶解しPH7.4に調整した溶液)を共栓試験管に入
れ、37℃で2時間加温し、Doleの方法(前記
1)と同様)に従つて遊離する脂肪酸量を測定し
た。すなわち反応系にDoleの抽出液3mlを加え
5分間振とう後、ヘプタン3mlを分取し、チモー
ルブル―溶液1mlを加える。この溶液を窒素ガス
で撹拌しながら0.008規定水酸化ナトリウム水溶
液で滴定し検量線より遊離脂肪酸量を求める。 なお、上記抑制率は前記1に用いた式と同じ式
を用いた。 b 試験結果 アドレナリンによる脂肪細胞の脂肪分解に対す
るギノサポニンEの抑制率の測定結果を第4表に
示した。
【表】
以上のごとくアドレナリン1μg/mlを脂肪細
胞に作用させ37℃で2時間保つとき、脂肪を分解
して14.1μEq/gの遊離脂肪酸を生じる。この
ときギノサポニン類をそれぞれ20μg/ml共存さ
せるといずれの場合も脂肪分解を抑制し、遊離脂
肪酸の生成は減少する。しかしACTHによる脂
肪分解に対するギノサポニン類の抑制率と比べる
と小さい。ただギノサポニンBおよびEのみは
ACTHに対するときより強い効果を示す。 3 脂肪細胞におけるグルコールからの脂肪合成
におよぼすギノサポニン類の影響 a 試験方法 本法はカーボンに放射能マークした14C―グル
コースを脂肪細胞に作用させ、脂肪合成にくりこ
まれ、中性脂肪として脂肪細胞にとりこまれたグ
ルコース量を放射能カウント量により測定、その
脂肪合成能に及ぼすギノサポニン類の影響を試験
する。 すなわち、コラゲナーゼ処理して得た脂肪細胞
をKRB中に懸濁し、その溶液0.35ml(脂肪細胞
100mg相当)、各サポニン溶液0.1ml(20μgのサ
ポニンを含む)、5%アルブミン溶液0.5ml(KRB
溶液10mMグルコースを含む、PH7.4)、14C―グル
コース溶液0.05ml(0.5μCi,KRP溶液、PH7.4,
10mMグルコースを含む)を共栓試験管に入れ、
37℃で30分加温し、Doleの抽出液5mlを加え5
分間振とう後、ヘプタン3mlおよび水2mlを加え
5分間振とうする。ヘプタン層3mlを分取し、ア
ルカル性エタノール溶液(0.5規定水酸化ナトリ
ウム溶液,50%エタノール溶液)を3ml加え5分
間振とうする。エタノール層を1ml分取し、トル
エンシンチレーシヨン溶液10mlを加え、Skipski
et alの方法〔Biochem.Biophys,Acta,106,
386(1965)により測定した。 b 試験結果 脂肪細胞におけるグルコースからの脂肪合成に
およぼすギノサポニンEの促進率を測定し第5表
に示した。
胞に作用させ37℃で2時間保つとき、脂肪を分解
して14.1μEq/gの遊離脂肪酸を生じる。この
ときギノサポニン類をそれぞれ20μg/ml共存さ
せるといずれの場合も脂肪分解を抑制し、遊離脂
肪酸の生成は減少する。しかしACTHによる脂
肪分解に対するギノサポニン類の抑制率と比べる
と小さい。ただギノサポニンBおよびEのみは
ACTHに対するときより強い効果を示す。 3 脂肪細胞におけるグルコールからの脂肪合成
におよぼすギノサポニン類の影響 a 試験方法 本法はカーボンに放射能マークした14C―グル
コースを脂肪細胞に作用させ、脂肪合成にくりこ
まれ、中性脂肪として脂肪細胞にとりこまれたグ
ルコース量を放射能カウント量により測定、その
脂肪合成能に及ぼすギノサポニン類の影響を試験
する。 すなわち、コラゲナーゼ処理して得た脂肪細胞
をKRB中に懸濁し、その溶液0.35ml(脂肪細胞
100mg相当)、各サポニン溶液0.1ml(20μgのサ
ポニンを含む)、5%アルブミン溶液0.5ml(KRB
溶液10mMグルコースを含む、PH7.4)、14C―グル
コース溶液0.05ml(0.5μCi,KRP溶液、PH7.4,
10mMグルコースを含む)を共栓試験管に入れ、
37℃で30分加温し、Doleの抽出液5mlを加え5
分間振とう後、ヘプタン3mlおよび水2mlを加え
5分間振とうする。ヘプタン層3mlを分取し、ア
ルカル性エタノール溶液(0.5規定水酸化ナトリ
ウム溶液,50%エタノール溶液)を3ml加え5分
間振とうする。エタノール層を1ml分取し、トル
エンシンチレーシヨン溶液10mlを加え、Skipski
et alの方法〔Biochem.Biophys,Acta,106,
386(1965)により測定した。 b 試験結果 脂肪細胞におけるグルコースからの脂肪合成に
およぼすギノサポニンEの促進率を測定し第5表
に示した。
【表】
以上のごとくギノサポニンEの共存しない場合
に比べ、脂肪細胞におけるグルコースの中性脂肪
としてのとり込みは、ほとんどが半分以下とな
り、ギノサポニン類がそれぞれ脂肪細胞における
グルコースからの脂肪合成を抑制する作用のある
ことは明らかである。
に比べ、脂肪細胞におけるグルコースの中性脂肪
としてのとり込みは、ほとんどが半分以下とな
り、ギノサポニン類がそれぞれ脂肪細胞における
グルコースからの脂肪合成を抑制する作用のある
ことは明らかである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1 式(): 〔式中R1がβ―D―グルコピラノシル(1→
2)―β―D―グルコピラノシル基、R2がα―
L―ラムノピラノシル(1→6)―β―D―グル
コピラノシル基、R3が水素原子〕で表される化
合物。 2 アマチヤヅルを水または含水低級アルコール
で抽出し、抽出液を非イオン性吸着樹脂で処理し
たのち被吸着物質を低級アルコールで溶出し、こ
の溶出液をアルミナで処理したのち被吸着物質を
低級アルコールまたは含水低級アルコールで溶出
して粗ギノサポニン類を得、これを次いでスチレ
ン系吸着樹脂およびシリカゲルでそれぞれ処理し
て分離、精製して、 式(): 〔式中R1がβ―D―グルコピラノシル(1→
2)―β―D―グルコピラノシル基、R2がα―
L―ラムノピラノシル(1→6)―β―D―グル
コピラノシル基、R3が水素原子〕で表わされる
ギノサポニンを得ることを特徴とするギノサポニ
ンの製造法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP17042283A JPS5980696A (ja) | 1983-09-14 | 1983-09-14 | 新規ギノサポニンおよびその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP17042283A JPS5980696A (ja) | 1983-09-14 | 1983-09-14 | 新規ギノサポニンおよびその製造法 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP55030636A Division JPS6043359B2 (ja) | 1980-03-11 | 1980-03-11 | ギノサポニン類およびその製造法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS5980696A JPS5980696A (ja) | 1984-05-10 |
JPS6140675B2 true JPS6140675B2 (ja) | 1986-09-10 |
Family
ID=15904625
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP17042283A Granted JPS5980696A (ja) | 1983-09-14 | 1983-09-14 | 新規ギノサポニンおよびその製造法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS5980696A (ja) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR101128920B1 (ko) | 2009-12-15 | 2012-04-23 | 충남대학교산학협력단 | 지페노사이드, 이의 제조방법 및 용도 |
CN111153955A (zh) * | 2020-01-19 | 2020-05-15 | 天津中医药大学 | 一种具有降脂作用的绞股蓝提取物及其制备方法和应用 |
-
1983
- 1983-09-14 JP JP17042283A patent/JPS5980696A/ja active Granted
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPS5980696A (ja) | 1984-05-10 |
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