DK164940B - Polypeptid med human-gamma-interferonaktivitet, genteknologisk fremgangsmaade til fremstilling deraf,hybrid-plasmider indeholdende en dna-sekvens, der koder for peptidet, vaertsorganismer indeholdende hybridplasmiderne, samt laegemidler, som indeholder polypeptidet - Google Patents
Polypeptid med human-gamma-interferonaktivitet, genteknologisk fremgangsmaade til fremstilling deraf,hybrid-plasmider indeholdende en dna-sekvens, der koder for peptidet, vaertsorganismer indeholdende hybridplasmiderne, samt laegemidler, som indeholder polypeptidet Download PDFInfo
- Publication number
- DK164940B DK164940B DK176285A DK176285A DK164940B DK 164940 B DK164940 B DK 164940B DK 176285 A DK176285 A DK 176285A DK 176285 A DK176285 A DK 176285A DK 164940 B DK164940 B DK 164940B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- ifn
- dna sequence
- interferon
- sequence
- polypeptide
- Prior art date
Links
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 title claims abstract description 56
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 title claims abstract description 41
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 22
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 18
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 18
- 229940044627 gamma-interferon Drugs 0.000 title abstract description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 title description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 title description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 title description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 30
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 26
- 108010054576 Deoxyribonuclease EcoRI Proteins 0.000 claims description 19
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 claims description 13
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 claims description 13
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 8
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 claims description 7
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 claims description 7
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 claims description 7
- 238000007792 addition Methods 0.000 claims description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 3
- 230000000118 anti-neoplastic effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 claims 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 claims 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 abstract description 18
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 abstract description 10
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 abstract description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 30
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 19
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 16
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 13
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 13
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 5
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 5
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 4
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 4
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 4
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HXNNRBHASOSVPG-GUBZILKMSA-N Ala-Glu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HXNNRBHASOSVPG-GUBZILKMSA-N 0.000 description 3
- 0 CN(CC1CC1)C1=C*1 Chemical compound CN(CC1CC1)C1=C*1 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IQACOVZVOMVILH-FXQIFTODSA-N Glu-Glu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O IQACOVZVOMVILH-FXQIFTODSA-N 0.000 description 3
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- MEQLGHAMAUPOSJ-DCAQKATOSA-N Lys-Ser-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O MEQLGHAMAUPOSJ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 3
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 3
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 3
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 3
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 3
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 3
- -1 monomethyl ester Chemical class 0.000 description 3
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 3
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 1-beta-D-Xylofuranosyl-NH-Cytosine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OISVCGZHLKNMSJ-UHFFFAOYSA-N 2,6-dimethylpyridine Chemical compound CC1=CC=CC(C)=N1 OISVCGZHLKNMSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FJVAQLJNTSUQPY-CIUDSAMLSA-N Ala-Ala-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN FJVAQLJNTSUQPY-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- NTAZNGWBXRVEDJ-FXQIFTODSA-N Arg-Asp-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O NTAZNGWBXRVEDJ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- YVTHEZNOKSAWRW-DCAQKATOSA-N Arg-Lys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O YVTHEZNOKSAWRW-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- FSNVAJOPUDVQAR-AVGNSLFASA-N Arg-Lys-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O FSNVAJOPUDVQAR-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- HZPSDHRYYIORKR-WHFBIAKZSA-N Asn-Ala-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O HZPSDHRYYIORKR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- REQUGIWGOGSOEZ-ZLUOBGJFSA-N Asn-Ser-Asn Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N)C(=O)N REQUGIWGOGSOEZ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- KWBQPGIYEZKDEG-FSPLSTOPSA-N Asn-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O KWBQPGIYEZKDEG-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108091033380 Coding strand Proteins 0.000 description 2
- UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N Cytidine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 2
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 2
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- ZOXBSICWUDAOHX-GUBZILKMSA-N Glu-Asn-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O ZOXBSICWUDAOHX-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- FYYSIASRLDJUNP-WHFBIAKZSA-N Glu-Asp Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O FYYSIASRLDJUNP-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- STGQSBKUYSPPIG-CIUDSAMLSA-N His-Ser-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 STGQSBKUYSPPIG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- YKLOMBNBQUTJDT-HVTMNAMFSA-N Ile-His-Glu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N YKLOMBNBQUTJDT-HVTMNAMFSA-N 0.000 description 2
- JZBVBOKASHNXAD-NAKRPEOUSA-N Ile-Val-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N JZBVBOKASHNXAD-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 2
- 102000003996 Interferon-beta Human genes 0.000 description 2
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 2
- AZLASBBHHSLQDB-GUBZILKMSA-N Leu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C AZLASBBHHSLQDB-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- PJWOOBTYQNNRBF-BZSNNMDCSA-N Leu-Phe-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N PJWOOBTYQNNRBF-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- GJJQCBVRWDGLMQ-GUBZILKMSA-N Lys-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O GJJQCBVRWDGLMQ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- FIDNSJUXESUDOV-JYJNAYRXSA-N Pro-Tyr-Val Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O FIDNSJUXESUDOV-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 2
- BXLYSRPHVMCOPS-ACZMJKKPSA-N Ser-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO BXLYSRPHVMCOPS-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical group O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 2
- MPUMPERGHHJGRP-WEDXCCLWSA-N Thr-Gly-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O MPUMPERGHHJGRP-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 2
- PSALWJCUIAQKFW-ACRUOGEOSA-N Tyr-Phe-Lys Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N PSALWJCUIAQKFW-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N cytidine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N 0.000 description 2
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 108010063718 gamma-glutamylaspartic acid Proteins 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 2
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 2
- 210000003041 ligament Anatomy 0.000 description 2
- 108010003700 lysyl aspartic acid Proteins 0.000 description 2
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 2
- 108700023046 methionyl-leucyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- LYGJENNIWJXYER-UHFFFAOYSA-N nitromethane Chemical compound C[N+]([O-])=O LYGJENNIWJXYER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 2
- OJMIONKXNSYLSR-UHFFFAOYSA-N phosphorous acid Chemical compound OP(O)O OJMIONKXNSYLSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 2
- WYTZZXDRDKSJID-UHFFFAOYSA-N (3-aminopropyl)triethoxysilane Chemical compound CCO[Si](OCC)(OCC)CCCN WYTZZXDRDKSJID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BWZVCCNYKMEVEX-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-Trimethylpyridine Chemical compound CC1=CC(C)=NC(C)=C1 BWZVCCNYKMEVEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTWJRLJHJPIABL-UHFFFAOYSA-N 2-methylphenol;3-methylphenol;4-methylphenol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1.CC1=CC=CC(O)=C1.CC1=CC=CC=C1O QTWJRLJHJPIABL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940082584 3-(triethoxysilyl)propylamine Drugs 0.000 description 1
- WLHCBQAPPJAULW-UHFFFAOYSA-N 4-methylbenzenethiol Chemical compound CC1=CC=C(S)C=C1 WLHCBQAPPJAULW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J ATP(4-) Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N Adenosine triphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- GSCLWXDNIMNIJE-ZLUOBGJFSA-N Ala-Asp-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O GSCLWXDNIMNIJE-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- NJPMYXWVWQWCSR-ACZMJKKPSA-N Ala-Glu-Asn Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O NJPMYXWVWQWCSR-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- GIVATXIGCXFQQA-FXQIFTODSA-N Arg-Ala-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N GIVATXIGCXFQQA-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- HQIZDMIGUJOSNI-IUCAKERBSA-N Arg-Gly-Arg Chemical compound N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O HQIZDMIGUJOSNI-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- RVHGJNGNKGDCPX-KKUMJFAQSA-N Asn-Phe-Lys Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N RVHGJNGNKGDCPX-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- ATHZHGQSAIJHQU-XIRDDKMYSA-N Asn-Trp-Lys Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N ATHZHGQSAIJHQU-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- DPWDPEVGACCWTC-SRVKXCTJSA-N Asn-Tyr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DPWDPEVGACCWTC-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- LMIWYCWRJVMAIQ-NHCYSSNCSA-N Asn-Val-Lys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N LMIWYCWRJVMAIQ-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- IPBXLJFBVNLKFE-UHFFFAOYSA-N CCCC(C)NC Chemical compound CCCC(C)NC IPBXLJFBVNLKFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DSTWKJOBKSMVCV-UWVGGRQHSA-N Cys-Tyr Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 DSTWKJOBKSMVCV-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 1
- 108010076804 DNA Restriction Enzymes Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FFVXLVGUJBCKRX-UKJIMTQDSA-N Gln-Ile-Val Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N FFVXLVGUJBCKRX-UKJIMTQDSA-N 0.000 description 1
- ILWHFUZZCFYSKT-AVGNSLFASA-N Glu-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ILWHFUZZCFYSKT-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- UPOJUWHGMDJUQZ-IUCAKERBSA-N Gly-Arg-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O UPOJUWHGMDJUQZ-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- LPCKHUXOGVNZRS-YUMQZZPRSA-N Gly-His-Ser Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O LPCKHUXOGVNZRS-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- ZZWUYQXMIFTIIY-WEDXCCLWSA-N Gly-Thr-Leu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ZZWUYQXMIFTIIY-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- 102000005744 Glycoside Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108010031186 Glycoside Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- TVYWVSJGSHQWMT-AJNGGQMLSA-N Ile-Leu-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N TVYWVSJGSHQWMT-AJNGGQMLSA-N 0.000 description 1
- FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N L-Phenylalanyl-L-lysin Natural products NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- KFKWRHQBZQICHA-STQMWFEESA-N L-leucyl-L-phenylalanine Natural products CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 KFKWRHQBZQICHA-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 1
- TWQIYNGNYNJUFM-NHCYSSNCSA-N Leu-Asn-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O TWQIYNGNYNJUFM-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- WXUOJXIGOPMDJM-SRVKXCTJSA-N Leu-Lys-Asn Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O WXUOJXIGOPMDJM-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- DRWMRVFCKKXHCH-BZSNNMDCSA-N Leu-Phe-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C([O-])=O)CC1=CC=CC=C1 DRWMRVFCKKXHCH-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- AEDWWMMHUGYIFD-HJGDQZAQSA-N Leu-Thr-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O AEDWWMMHUGYIFD-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- GQUDMNDPQTXZRV-DCAQKATOSA-N Lys-Arg-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O GQUDMNDPQTXZRV-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- SJNZALDHDUYDBU-IHRRRGAJSA-N Lys-Arg-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O SJNZALDHDUYDBU-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- YVSHZSUKQHNDHD-KKUMJFAQSA-N Lys-Asn-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCCCN)N YVSHZSUKQHNDHD-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- CIOWSLJGLSUOME-BQBZGAKWSA-N Lys-Asp Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O CIOWSLJGLSUOME-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- MYTOTTSMVMWVJN-STQMWFEESA-N Lys-Tyr Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 MYTOTTSMVMWVJN-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- LMMBAXJRYSXCOQ-ACRUOGEOSA-N Lys-Tyr-Phe Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1ccc(O)cc1)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(O)=O LMMBAXJRYSXCOQ-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- XBYKTPZCWQQSGB-IHRRRGAJSA-N Met-Cys-Tyr Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBYKTPZCWQQSGB-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- CHDYFPCQVUOJEB-ULQDDVLXSA-N Met-Leu-Phe Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 CHDYFPCQVUOJEB-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N Morpholine Chemical group C1COCCN1 YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091081548 Palindromic sequence Proteins 0.000 description 1
- SMFGCTXUBWEPKM-KBPBESRZSA-N Phe-Leu-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 SMFGCTXUBWEPKM-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- GKZIWHRNKRBEOH-HOTGVXAUSA-N Phe-Phe Chemical compound C([C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C([O-])=O)C1=CC=CC=C1 GKZIWHRNKRBEOH-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- 108010021757 Polynucleotide 5'-Hydroxyl-Kinase Proteins 0.000 description 1
- 102000008422 Polynucleotide 5'-hydroxyl-kinase Human genes 0.000 description 1
- 229910002808 Si–O–Si Inorganic materials 0.000 description 1
- 101150046432 Tril gene Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- TYFLVOUZHQUBGM-IHRRRGAJSA-N Tyr-Ser-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 TYFLVOUZHQUBGM-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- DLRZGNXCXUGIDG-KKHAAJSZSA-N Val-Thr-Asp Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O DLRZGNXCXUGIDG-KKHAAJSZSA-N 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 101100323865 Xenopus laevis arg1 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 108010056243 alanylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010041407 alanylaspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010005233 alanylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 108010040443 aspartyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000000211 autoradiogram Methods 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 229930003836 cresol Natural products 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 108010069495 cysteinyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 238000006642 detritylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- HPYNZHMRTTWQTB-UHFFFAOYSA-N dimethylpyridine Natural products CC1=CC=CN=C1C HPYNZHMRTTWQTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 108010028188 glycyl-histidyl-serine Proteins 0.000 description 1
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000035987 intoxication Effects 0.000 description 1
- 231100000566 intoxication Toxicity 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 239000010985 leather Substances 0.000 description 1
- 108010044056 leucyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 108010044348 lysyl-glutamyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010009298 lysylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 125000002073 methionyl group Chemical group 0.000 description 1
- CAAULPUQFIIOTL-UHFFFAOYSA-N methyl dihydrogen phosphate Chemical group COP(O)(O)=O CAAULPUQFIIOTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylpyridin-2-amine Chemical compound CN(C)C1=CC=CC=N1 PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N neutral red Chemical compound Cl.C1=C(C)C(N)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 108010073025 phenylalanylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000063 preceeding effect Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000012958 reprocessing Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 208000003265 stomatitis Diseases 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 125000002730 succinyl group Chemical group C(CCC(=O)*)(=O)* 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 125000001302 tertiary amino group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003536 tetrazoles Chemical class 0.000 description 1
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010087967 type I signal peptidase Proteins 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 1
- 208000005925 vesicular stomatitis Diseases 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 238000010626 work up procedure Methods 0.000 description 1
- VNDYJBBGRKZCSX-UHFFFAOYSA-L zinc bromide Chemical class Br[Zn]Br VNDYJBBGRKZCSX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
- C07K14/57—IFN-gamma
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/811—Interferon
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/14—Lymphokine; related peptides
- Y10S930/142—Interferon
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
i
DK 164940 B
Den foreliggende opfindelse angår et polypeptid med biologisk og immunologisk aktivitet som human-?-interferon, en genteknologisk fremgangsmåde til fremstilling af dette polypeptid, hybridplasmider indeholdende en DNA-sekvens, 5 som koder for polypeptidet, værtsorganismer indeholdende disse hybridplasmider, samt lægemidler indeholdende polypeptidet. Polypeptidet ifølge opfindelsen har i forhold til -r-interferon en forøget stabilitet eller opløselighed og er forskellig med hensyn til antiviral aktivitetsspecificitet, 10 men er lige som -r-interferon anvendeligt som antiviralt, antirumoralt, antineoplastisk eller immunmodulerende middel.
?-Interferonet (tidligere immuninterferon eller type Il-interferon, her kort betegnet IFN-ύ) blev opdaget i året 1965 af F. Wheelock [Wheelock, Science 149, 310 (1965)], 15 som viste, at IFN-ύ kan beskytte bestemte celler mod en virusinfektion. Humant IFN—r [basisviden, jf. W.E. Stewart, II, The Interferon System, Springer Verlag (2. udg.) (1981)] er et polypeptid bestående af 146 aminosyrer [Gray m.fl.,
Nature 295, 503 (1982)], som af naturen er glycosyleret.
20 Glycoproteinet har en molekylvægt på ca. 63.000-73.000 [Pestkam.fi., J. Biol. Chem. 258, 9706 (1983)] og foreligger i sin funktionelle fora sandsynligvis som tetramer. Glycosy-leringen af IFN-ύ er ikke nødvendig for dets funktionalitet; således reducerer glycosidasebehandlingen af IFN-ύ ikke den 25 antivirale aktivitet i humane fibroplast-cellekulturer [Kelker m.fl., J. Biol. Chem. 258, 8010 (1983)].
Endvidere er IFN-ύ i modsætning til a-interferonerne og jø-interferon ustabilt ved pH 2 og deaktiveres også ved varme (60'C).
30 Udvindingen af human-IFN—r ud fra cellekulturer af menneskelige cellelinier eller ud fra leucocyter (konserveret blod) er kun mulig i dårligt udbytte og med lav produktren-hed.
Fra NO-patentskrift nr. 164.177 kendes en genteknolo-35 gisk fremgangsmåde til fremstilling af humant ύ-interferon med antiviral aktivitet.
DK 164940 B
2 med antiviral aktivitet.
Human-'r - interferon har følgende peptidsekvens [Devos m.fl., Nucl. Acids Research 10, 2487 (1982)].
Cysl - Tyr - Cys - Gin - Asp - Pro - Tyr - Val - Lys - GlulO-5
Ala - Glu - Asn - Leu - Lys - Lys - Tyr - Phe - Asn - Ala20-
Gly - His - Ser - Asp - Val - Ala - Asp - Asn - Gly - Thr30-
Leu - Phe - Leu - Gly - Ile - Leu - Lys - Asn - Trp - Lys^O-
Glu - Glu - Ser - Asp - Arg - Lys - Ile - Met - Gin - Ser50-
Gln - Ile - Val - Ser - Phe - lyr - Phe - Lys - Leu - Phe60-
Lys - Asn - Phe - Lys - Asp - Asp - Gin - Ser - Ile - Gln70-
Lys - Ser - Val - Glu - Tnr - Ile - Lys - Glu - Asp - Met^O-
Asn - Val - Lys - Phe - Phe - Asn - Ser - Asn - Lys - Lys90-
Lys - Arg - Asp - Asp - Phe - Glu - Lys - Leu - Thr - AsnlOO- 15 Tyr - Ser --Val - Ihr - Asp - Leu - Asn - Val - Gin - ArgllO-Lys - Ala - Ile - His - Glu - Leu - Ile - Gin - Val - Metl20-
Ala - Glu - Leu - Ser - Pro - Ala - Ala - Lys - Ihr - Glyl30-
Lys - Arg - Lys - Arg - Ser - Gin - Met - Leu - Phe - Argl^O-
Gly - Arg - Arg - Ala - Ser - Glnl46.
20
Den genetiske kode er som bekendt "udartet", dvs. at der kun er 2 aminosyrer, der kodes med. en enkelt nucleo-tidsekvens, medens de øvrige 18 genetisk indkodelige amino-i syrer er tilforordnet 2-6 tripletter. Af de herved givne i variationsmuligheder udnytter desuden værtscellerne af 25
forskellige arter ikke altid de samme. Til syntese af gener findes derfor en uoverskuelig mangfoldighed af co-donmuligheder. Det har nu vist sig, at nedenstående DNA-sekvens IB afledt af DNA-sekvensen I
30 35
DK 164940 B
3 DNA-Sekvens I1
Triplet' nr · 0 12 3 4 5
Aminosyre Met Cys Tyr Cys Gin Asp
Nucleotid nr. 1 10 20
Kod. streng 5’ AA TTC ATG TGC TAC TGC CAG GAC
Ikke-kod. streng 3' G TAC ACG ATG ACG GTC CTG
6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
Pro Tyr Val Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys 30 35 40 50
C CG TAC GTT AAA GAA GCT GAA AAC CTG AAA
GGC ATG CAA ΊΤΓ CTT CGA CTT TTG GAC ΤΓΓ 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25
Lys Tyr Phe Asn Ala Gly His Ser Asp Val
60 70 80 AAA TAC TTC AAC GCT GGT CAT TCT GAC GTT
ΤΓΓ ATG AAG TEG CGA CCA GTA AGA CTG CAA
26 27 28 29 30 31 32 33 34 35
Ala Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu Gly Ile 90 100 110
GCT GAC AAT GGT ACT CTG TTC CTG GGG ATC
CGA CTG ΊΤΑ CCA TGA GAC AAG GAC CCC TAG
36 37 38 39 40 41 42 43 44 45
Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg 120 130 140
CTG AAA AAC TGG AAA GAA GAA TCT GAC CGT
GAC ΤΓΓ TTG ACC TIT CTT CTT AGA CTG GCA
Her vist med sekvensen svarende til Eco RI og."triplet nr. 0" i aminoendestillingen og to stop-tripletter.og sekvensen for Sal I ved carboxyendestillingen.
* e
DK 164940 B
4 46 47 48 49 ' 50 51 52 53 54 55
Lys Ile Met Gin Ser Gin Ile Val Ser - Phe 150 160 170
AM ATC ATG CM TCT CAG ATC GTT TCT TIG
TIT TAG TAC GTT AGA GTC TAG CM AGA MG
56 57 58 59 60 6l 62 63 64 65
Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Phe Lys Asp 180 190 200
TAC TTC AM CTG TTC AM MC ΤΤΓ AM GAC
ATG MG TIT GAC MG ΤΓΤ TTG AM TIT CTG
66 67 68 69 70 ' 71 72 73 74 75
Asp Gin Ser Ile Gin Lys Ser Val Glu Thr 210 . 220 230
GAC CAG TCT ATC CAG AM TCT GTT GM ACT
CTG GTC AGA TAG GTC ΤΓΓ AGA CM CTT TGA
76 77 78 79 80 81 82 83 84 85
Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys Phe Fne 240 250 260
ATC MG GM GAC ATG MC GTT AM TIT TTC
TAG TTC CTT CTG TAC TIG CM W AM AAG
86 87 88 89 90 91 92 93 94 95
Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe 270 280 290
MC TCT' MC AM AM AM CGT GAC GAC TTC
TTG AGA TTG TIT TIT TIT GCA CTG CTG MG
96 97 98 99 100 101 102 103 104 105
Glu Lys Leu Tnr Asn Tyr Ser Val Thr Asp 300 310 320
GM MG CTT ACT MC TAC TCT GTT ACT GAT
CTT TIC GM TGA TTG ATG AGA CM TGA CIA
DK 164940 B
5 106 107 108 109 HO 111 112 113 114 115
Leu Asn Val Gin . Arg Lys Ala Ile His Glu 330 340 350
TTA AAC GTT CAA CG'T AAA GCT ATC CAC GAG
AAT TIG CAA GTT GCA ΊΤΓ CGA TAG GIG CTC
116 117 118 119 120 121 122 123 124 125
Leu Ile Gin Val Met Ala Glu Leu Ser Pro 360 370 380
CTC ATC CAG GTT ΑΊΌ GCT GAA CIG TOT CCT
GAG TAG GTC CAA TAC CGA CIT GAC AGA GGA
126 127 128 129 130 131 132 133 134 135
Ala Ala Lys Thr Gly Lys Arg Lys Arg Ser 390 400 410
GCA GCT AAA ACT GGT AAA CGT AAA CGT ICC
CGT CGA TIT TCA CCA ΊΊΤ GCA TIT GCA AGG
136 137 138 139 140 141 142 143 144 145
Gin Met Leu Phe Arg Gly Arg Arg Ala Ser 420 430 440
CAG ATC CTC TTC OGC GGT CGT CGT GCT TOT
GTC TAC GAC AAG GCG CCA GCA GCA CGA AGA
146
Gin 450 CAG TAA TAG 3’ GTC ATT ATC AGC T 5'
DK 164940 B
6 som koder for hele amlnosyresekvensen 1-146, DNA-sekvens IB* 5 0
Met (aminosyrer 5-146) Stp Stp 5' AA TTC ATG (nucleotider 21-446) TAA TAG 3' G ATT ATC AGC T 5' 10 * her fremstillet med sekvensen for Eco RI og "triplet ten nr. 0" ved aminoendestillingen og 2 stopcodoner og sekvenserne for Sma I og Sal I ved carbocyende-stillingen 15 er særlig fordelagtig til genteknologisk syntese af et poly-peptid med IFN-nr-aktivitet.
I overensstemmelse er popeptidet ifølge opfindelsen ejendommeligt ved, at det består af aminosyresekvensen 5-146 i human—r-interferon (IFN-ύ) .
20 Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved, at der i en værtsorganisme, fortrinsvis E.coli, bringes et gen med DNA med den almene formel
Pr-R-Z
25 til ekspression, hvor Pr og R er nucleotidsekvenser, som koder for følgende aminosyrer eller aminosyresekvenser:
Pr for et præpeptid, der fraspaltes i værtsorganismen 30 eller in vitro, eller Met R for aminosyrerne 5-146 eller modifikationer af denne aminosyresekvens, og Z betyder en eller fortrinsvis to stop-codoner.
Ved 5'-enden af den indkodende streng i DNA-sekvensen 35 I sidder codonet for methionin (triplet nr. 0) og foran en "overhængende" DNA-sekvens svarende til en restriktionsen-
DK 164940 B
7 donuclease , f.eks. Eco RI. Ved 3'-enden i den indkodende streng sidder derimod i tilslutning til et stop-codon eller fortrinsvis 2 stop-codoner - umiddelbart eller over en mellemliggende DNA-sekvens - den sekvens, der svarer til et 5 restriktionsenzym, f.eks. Sal I. Ved indsættelse af DNA i plasmider fås den ønskede orientering ved hjælp af genkendelsessekvenser.
Ved den indkodende strengs 5'-ende kan der alternativt til codonet for aminosyren methionin findes en 10 præsekvens (også kaldet signal- eller ledersekvens) for et bakterielt eller på anden måde for værten særegnet protein [oversigtsartikel: Perlman og Halvorson, J. Mol. Biol.
167, 391 (1983)], som forårsager sekretion af det ønskede polypeptid ud fra cytoplasmaen og ved denne ekskre-15 tionsproces fraspaltes fra en i værtscellen naturligt forekommende signal-peptidase.
To interne særegne snitsteder for restriktionsenzymerne Barn HI og Hind III (i codon 34 og 94 i den indkodende streng eller i codon 35 og 98 i den ikke-indkoden-20 de streng) tillader subkloning af tre genfragmenter IFN-I, IFN-II og IFN-III (jfr. DNA-sekvens II)j 0
DK 164940 B
8 DNA-Sekvens II : Ia ^ IFN_I; Met Cys Tyr* Cys Gin Asp
5' AA TTC ATG TGC TAG TGC CAG GAC
3' G TAC ACG ATG ACG GTC CTG
5
Eco RI *=*-Ib- •a-Ic--► -*a-
Pro Tyr Val * Lys Glu Ala Glu Asn Leu Lys
CCG TAG GTT AAA GAA GCT GAA AAC CTG AAA
GGC ATG CAA TIT CTT CGA CTT TTG GAC ΊΤΓ 10 -m- -Id - -:je -«*- -Ig-
Lys Tyr Fhe Asn Ala Gly His Ser Asp Val
AAA TAC TTC AAC GCT GGT CAT TCT GAC GTT
ΊΤΓ ATG AAG TTG CGA CCA GTA AGA CTG CAA
-If-► -S-Ih-- -► -li-—
Ala Asp Asn Gly Thr Leu Phe Leu (Gly)
20 GCT GAC AAT GGT ACT CTG TTC CTG GG
CGA CTG ΤΓΑ CCA T3A GAC AAG GAC CCC TAG
-^ ^---;-
Barn HI
25 30 35
DK 164940 B
9 DNA-Seguens. II IFN-II: -=---Ila -:-*- (Gly) Ile Leu Lys Asn Trp Lys Glu Glu Ser Asp Arg
G ATC CTG AAA AAC IGG AAA GAA GAA TCT GAC CGT
EaraHI GAC HT TTG ACC ΊΤΓ CTT CIT AGA CTG GCA
--Ilb - -Ile-
Lys He Met Gin Ser Gin Ile Val Ser Phe A AA ATC ATG CAA TCT CAG ATC GTT TCT TTC
ΤΓΓ TAG TAC GTT AGA GTC TAG CAA AGA AAG
--s--Ud - —e-Ile-►
Tyr Phe Lys Leu Phe Lys Asn Fhe Lys Asp
TAC TTC AAA CTG TTC AAA AAC ΊΤΓ AAA GAC
ATG AAG TIT GAC AAG ITT TIG AAA TIT CTG
-^ -Ilf- --:-:-ng-
Asp Gin Ser Ile Gin Lys Ser Val Glu Thr
GAC CAG TCT ATC CAG AAA TCT GTT GAA ACT
CTG GTC AGA TAG GTC TIT AGA CAA CTT TGA
--Uh- -*► -Hi-
Ile Lys Glu Asp Met Asn Val Lys Phe Phe
' ATC AAG GAA GAC ATG AAC GTT AAA ΊΤΓ TIC
TAG TTC CTT CTG TAC TIG CAA TIT AAA AAG
--II j- -^ ^-:-Ilk-
Asn Ser Asn Lys Lys Lys Arg Asp Asp Phe
AAC TCT AAC AAA. AAA AAA CGT GAC GAC TTC
TTG AGA TTG TIT TIT TIT GCA CTG CTG AAG
.....— " — 1 k*· ·*&———————————————— in .......... »
Glu (Lys)
GAA A
CTT TTC GA Hind III
.......- .......
DK 164940 B
10 DNA-Sequens II IFN-III: ---Illa-:-»- - (Lys) Leu Thr Asn Tyr Ser Val Thr Asp
AG CTT ACT AAC TAC TCT GTT ACT GAT
Hind III A TGA TTG ATG AGA CAA T3A CIA
«s-IHb- - IIIc -►- --
Leu Asn Val Gin Arg Lys Ala Ile His Glu
ΊΤΑ AAC GTT CAA CGT AAA GCT ATC CAC GAG
AAT TTG CAA GTT GCA ΤΓΓ CGA TAG GTG CTC
-^ -tf-Uld -► -Ille-►!--
Leu Ile Gin Val Met Ala Glu Leu Ser Pro
CTC ATC CAG GTT ATG GOT GAA CTG TCT CCT
GAG TAG GTG CAA TAC CGA CTT . GAC AGA GGA
-s---Ulf-=---► ->- - Hig--Illi-
Ala Ala Lys Thr Gly Lys Arg Lys Arg Ser
GCA GCT AAA ACT GOT AAA CGT AAA CGT TCC
CGT CGA TH TGA CCA ΤΤΓ GCA ΊΊΤ GCA AGG
-HXh--- -Illi-;--Illk-
Gin Met Leu Phe Arg Gly Arg Arg Ala Ser
CAG ATG CTG TTC CGC GGT CGT CGT GCT TCT
GTC TAG GAC AAG GCG CCA GCA GCA CGA AGA
-m j-► -«-mi — -tJ~
Gin Stp Stp CAG TAA TAG 3' GTC ATT ATC AGC T 5' -tor
Sal I
o
DK 164940 B
11 som kan indbygges i godt undersøgte kloningsvektorer, såsom pBR 322 eller pUC 8. Desuden indbygges inden for strukturgenet en række af yderligere særlige genkendelsessekvenser for restriktionsenzymer, som på den 5 ene side giver adgang for delsekvenser af IFN-γ og på den anden side tillader gennemførelse af variationer: Restriktionsenzym Snit eft. nucleotid nr.
(indkodende streng)
Ava Ila) 20 10 Alu Ib) 39
Hinf ia) 134
Dde ic) 159
Aha Ilie) 199
Taq ic) 294 15 Aha Hid) 327
Sst ia) 357
Bst Nid) 362
Pst ia) 388
Bbv ia) 398 20
Sst Iia) 430
Dde Id) 444
a) speciel med hensyn til den samlede DNA-sekvens I 25 b) speciel med hensyn til delsekvensen IFN-I
c) speciel med hensyn til delsekvensen IFN-II
d) speciel med hensyn til delsekvensen IFN-III
DNA-Sekvensen I og de sekvenser, der findes 30 ved dens ender, kan opbygges af 34 oligonucleotider med en længde på 18-33 nucleotider (jfr. DNA-sekvens II), idet disse først syntetiseres kemisk og derpå via klæbrige ender på 4-6 nucleotider forbindes enzymatisk.
Ved DNA-sekvensen I er der endvidere taget 35 hensyn til, at sådanne aminosyrer, der kan tilforordnes flere codoner, ikke er ligeværdige, men tværtimod i de 0
DK 164940 B
12 pågældende værtsceller såsom E.coli udviser forskellige præferencer. Desuden reduceres palindromiske sekvenser til et minimum.
DNA-Sekvens I's genstruktur er derfor let til-5 gængelig ud fra relativt små byggesten, muliggør subklo-ning af tre genfragmenter i velkendte vektorer og tillader kombination heraf til et samlet gen samt ændringer af dette. Således kan man efter kloning af genet med DNA-sekvens I herudfra ved spaltning med bestemte restrik-10 tionsenzymer få DNA-delsekvenser, især delsekvenserne IA, IB og IC, som koder for interferon-delsekvenserne svarende til aminosyrerne 1-127, 5-146 og 5-127.
Som eksempel på en delsekvens kan tages DNA--sekvensen IA, som fører til et polypeptid med de første 15 127 aminosyrer i IFN-γ, hvorved DNA-sekvensen I er såle des ændret, at der til triplet nr. 127 umiddelbart føjes en stop-triplet eller fortrinsvis to stop-tripletter samt den udragende ende for et restriktionsenzym, f.eks.
Sal I.
20 Ved at skære i DNA-sekvensen I med restrik- tionsendonuclease AVA II og ligatering af det herved opnåede store fragment med en adaptorsekvens fås derimod en DNA-sekvens IB, hvori codonerne for de første fire aminosyrer i RFN-γ er udeladt, dvs. før aminosyre nr. 5 25 (asparaginsyre) findes direkte methionin. Ud fra denne DNA-sekvens IB kan der via Pst I-snitstedet dannes en DNA-sekvens IC, som koder for et polypeptid med aminosyrerne 5-127 i IFN-γ.
Indbygningen af de syntetiske gener eller gen-30 fragmenter i klonings vektorer, f.eks. de i handelen værende plasmider pUC 8 og pBR 322 eller andre alment tilgængelige plasmider såsom ptac 11 og pKK 177.3, sker på i og for sig kendt måde. De kemisk syntetiserede gener kan også først forsynes med egnede kemisk syntetiserede 35 kontrolregioner, som muliggør ekspression af proteinerne.
I denne forbindelse kan der henvises til Maniatis1 lære- 0
DK 164940 B
13 bog (Molecular Cloning, Maniatis m.fl., Cold Spring Harbor, 1982). Transformationen af de således opnåede hy-bridplasmider i egnede værtsorganismer, fortrinsvis E.
coli, er ligeledes i og for sig kendt og detaljeret be-5 skrevet i den ovennævnte lærebog. Udvindingen af det eksprimerede protein og dettes rensning er også beskrevet [J.A. Georgiades, Texas Reports in Biology and Medi-dine 41, 179 (19821), Came & Carter (udg.), "Interferons and Their Applications", Springer-Verlag 1984].
Hybridplasmiderne ifølge opfindelsen er ejendommelige ved, at de indeholder en DNA-sekvens IB.
Værtsorganismen ifølge opfindelsen er ejendommelig ved, at den indeholder et hybridpiasmid ifølge opfindelsen.
15 Lægemidlet ifølge opfindelsen er ejendommeligt ved, at det indeholder et polypeptid ifølge opfindelsen.
Opfindelsen forklares nærmere i de følgende ; eksempler, hvori nogle udføreIsesformer for opfindelsen 2o er detaljeret forklaret. Procentangivelser er i eksemplerne efter vægt, når andet ikke er anført.
Eksempel 1 25 Kemisk syntese af et enkelstrenget oligonucleotid
Med eksempel i genbyggestenen la, som omfatter nucleotiderne 1-23 i den indkodende streng, forklares syntesen af genbyggestenene. Ved hjælp af kendte metoder [M.J. Gait m.fl., Nucleic Acids Res. 8, 1081-1096 30 (1980)] bindes det ved 3'-enden værende nucleosid, i det foreligende tilfælde altså cytidin (nucleotid nr. 23) til kieselgel, "Fractosil"® fra firma Merck, covalent via 3'-hydroxyfunktionen. Hertil omsættes først kieselgelen 35
DK 164940 B
14 0 under fraspaltning af ethanol med 3-(triethoxysilyl)pro-pylamin, idet der opstår i Si-O-Si-binding. Cytidinet 4 omsættes som N -benzoyl-B'-O-succinoyl-S'-dimethoxytri-tylether i nærvær af paranitrophenol og N, N1-dicyclohex-5 ylcarbodiimid med den modificerede bærer, hvorved den frie carboxygruppe i succinylgruppen acylerer aminoresten i propylaminogruppen.
I de følgende syntesetrin anvendes basekomponenter som 5'-0-dimethoxytrityl-nucleosid-3'-phosphorsy-10 remonomethylester-dialkylamid eller -chlorid, idet adeni- net foreligger som N^-benzoyl-forbindelse, cytosinet som 4 2 N -benzoyl-forbindelse, guaninet som N -isobutyryl-forbindelse og thyminet, der ikke indeholder aminogrupper, uden beskyttelsegruppe.
15 50 mg af den polymere bærer, som indeholder 2^umol cytosin bundet, behandles efter hinaden med følgende stoffer: (a) Nitromethan, (b) mættet zinkbromidopløsning i nitromethan med 20 1% vand, (c) methanol, (d) tetrahydrofuran, (e) acetonitril, (f) 40^umol af det tilsvarende nucleosidphosphit 25 og 200^umol tetrazol i 0,5 ml vandfri acetoni tril (5 minutter), (g) 20% acetanhydrid i tetrahydrofuran med 40% lu-tidin og 10% dimethylaminopyridin (2 minutter), (h) tetrahydrofuran, 30 (i) tetrahydrofuran med 20% vand og 40% lutidin, (j) 3% jod i collidin/vand/tetrahydrofuran i volumenforholdet 5:4:1, (k) tetrahydrofuran og (l) methanol.
35 Ved "phosphit" forstås her desoxyribose-31-mo- nophosphorsyre-monomethylester, idet den tredje valens er
DK 164940B
o 15 mættet med chlor eller en tertiær aminogruppe, f.eks. en morpholinorest. Udbytterne i de enkelte syntestrin kan efter detrityleringsreaktionen (b) bestemmes spektro-fotometrisk ved måling af dimethoxytritylkationens ab-5 sorption ved en bølgelængde på 496 run.
Efter afsluttet syntese af olignucleotidet fraspaltes methylphosphatbeskyttelsesgrupperne for oli-gomeren ved hjælp af p-thiocresol og triethylamin.
Derefter fraskilles oligonucleotidet fra den 1° faste bærer ved hjælp af en 3 timer lang behandling med ammoniak. En behandling af oligomererne i 2-3 dage med koncentreret ammoniak fraspalter basernes aminobeskyt-telsesgrupper kvantitativt. Det således opnåede råprodukt renses ved højtryksvæskechromatografi (HPLC) eller 15 ved polyacrylamid-gelelektrophorese.
Helt tilsvarende syntetiseres også de øvrige genbyggesten Ib-IIIl, hvis nucleotidrækkefølge fremgår af DNA-sekvens II.
20 Eksempel 2
Enzymatisk sammenbinding af enkeltstrengede oligonucleo-tider med genfragmenterne IFN-I, IFN-II og IFN-III_
Til phosphorylering af oligonucleotiderne ved 5'-endestillingen behandles hvert 1 nmol oligonucleoti-25 der la og Ib med 5 nmol adenosintriphosphat med 4 enheder T4-polynucleotid-kinase i 20^ul 50 mmolær Tris-HCl--puffer (pH 7,6), 10 mmolær magnesiumchlorid og 10 mmolær dithiothreitol (DTT) i 30 minutter ved 37°C [C.C. Richardson, Progress in Nucl. Acids Res. 2, 825 (1972)].
30 Enzymet deaktiveres ved opvarmning i 5 minutter til 95°C.
Derpå hybridiseres oligonucleotiderne la og Ib mod hinanden, idet man opvarmer dem i vandig opløsning til 95°C og derpå afkøler langsomt til 5°C.
Analogt phosphoryleres oligonucleotiderne Ic 35 og Id, le og If, Ig og Ih samt li og Ij og hybridiseres parvis. Til underfragment IFN-II phosphoryleres oligo-
DK 164940 B
16 0 nucleotiderne Ila med Ilb osb. indtil Hk med III og til underfragmentet IFN-III oligomerene Illa med Hib osv. indtil Ulk med III1 og hybridiseres parvis.
De således opnåede 5 oligonucleotidpar til 5 genfragmentet IFN-I og de 6 oligonucleotidpar til genfragmenterne IFN-II og IFN-III ligateres hver som følger:
De dobbeltstrengede nucleotider forenes og ligateres i hver 40yUl 50 mmolær Tris-HCl-puffer, 20 mmo-lær magnesiumchlorid og 10 mmolær DTT ved hjælp af 100 10 enheder T4-DNA-ligase ved 15°C i løbet af 16 timer.
Rensningen af genfragmenterne IFN-I til IFN-III sker ved gelelektrophorese på en 10%'s polyacrylamidgel (uden urins tof tilsætning, 20 x 40 cm, 1 mm tyk) , idet "ØX 174 DNA" (firma BEL) snittet med Hinf I eller pBR 15 322 snittet med Hae III tjener som markør.
Eksempel 3
Fremstilling af hybridplasmider, som indeholder genfrag- menterne IFN-I, IFN-II og IFN-III_ 20 (a) Indbygning af genfragmentet IFN-I i pBR 322.
Det i handelen værende plasmid pBR 322 åbnes på kendt måde med restriktionsendonucleaserne Eco RI og Barn HI efter producentens anvisninger. Fordøjelsesblandingen opdeles på en 5%'s polyacrylamidgel.ved 25 hjælp af elektrophorese på kendte måde og brudstykket gøres .synligt ved hjælp af farvning med ethidiumbromid eller ved hjælp af radioaktiv markering (nick-translation ifølge Maniatis ovenfor), Plasmidbåndet udskæres derpå fra acrylamidgelen og fraskilles elektrophoretisk fra 30 polyacrylamidet. Opdeling af fordøjelsesblandingen kan også ske på 2%'s lavtsmeltende agarosegeler (som beskrevet i eksempel 6(a)).
Derpå ligateres 1 ,ug plasmid med 10 ng gen-fragment IFN-I natten over ved 16 C. Der fås det i fig.
35 1 viste hybridplasmid.
0
DK 164940 B
17 (b) Indbygning af genfragmentet IFN-II i pUC 8.
Analogt med (a) åbnes det i handelen værende plasmid pUC 8 med Bam HI og Hind III og ligateres med genfragmentet IFN-II. Der fås det i fig. 2 viste hy-5 bridplasmid.
(c) Indbygning af genfragmentet IFN-III i pUC 8.
Analogt med (a) åbnes plasmidet pUC 8 med Hind III og Sal I og ligateres med genfragmentet IFN-III.
Der fås det i fig. 3 viste hybridplasmid.
10
Eksempel 4
Syntese af det komplette gen (a) Transformation og udvikling.
De således opnåede hybridplasmider transforme-15 res i E.coli. Hertil gøres stammen E.coli K 12 egnet ved behandling med en 70 mmolær calciumchloridopløsning, og der tilsættes en suspension af hybridplasmidet i 10 mmolær Tris-HCl-puffer (pH 7,5) , der er 70 mmolær med hensyn til calciumchlorid. De transformerede stammer 20 udvælges som sædvanlig ved udnyttelse af de ved hjælp af plasmidet opnåede antibiotikaresistener eller -sensibiliteter, og hybridvektorerne udvikles. Efter at cellerne er dræbt,isoleres hybridplasmiderne, åbnes med de oprindeligt anvendte restriktionsenzymer, og genfragmen-25 terne IFN-I, IFN-II og IFN-III isoleres ved hjælp af gel-elektrophorese.
(b) Genfragmenternes sammenknytning.
De ved udvikling opnåede subfragmenter IFN-I, IFN-II og IFN-III 'forbindes enzymatisk som beskrevet i ek-30 sempel 2, og det således opnåede syntetiske gen med DNA-sekvensen I indføres i kloningsvektoren pUC 8. Der fås det i fig. 4 viste hybridplasmid.
35 0
DK 164940 B
18
Eksempel 5
Syntese af hybridplasmider, som indeholder DNA-sekvensen IA, IB og IC_ (a) Hybridplasmid med indsat IB.
5 Hybridplasmidet ifølge fig. 4, som indeholder DNA-sekvensen I, åbnes ved hjælp af kendte metoder med restriktionsenzymerne Eco RI og Sal I, det lille Eco RI-og Sal I-fragment fraskilles ved hjælp af polyacrylamid-gel-elektrophorese og åbnes derefter med enzymet Ava II.
10 Ved hjælp af følgende adaptor 5’ AA TTC ACC ATG 3’ 3' G TGG TAC CTG 5’
Eco RI Ava II
15 fås efter ligatering med det i forvejen fremstillede store DNA-fragment et hybridplasmid/ som indeholder den indsatte DNA-sekvens IB (fig. 5).
(b) Hybridplasmid med indsat IA.
DNA-Sekvensen I åbnes med restriktionsenzymet 20 Pst I efter producentens angivelser, og Eco RI-Pst I-frag-mentet isoleres. Desuden åbnes det i handelen værende plasmid pUC 8 med restriktionsenzymerne Eco RI og Sma I, og det tidligere isolerede fragment indsættes ved hjælp af følgende adaptor 25 5’ GOT TAG TAA CCC 3' 3' A CGT CGA ATC ATT GGG 5'
Pst I Sma I
hvorved man får det i fig. 6 viste hybridplasmid.
30 (c) Hybridplasmid med indsat IC.
Det ifølge eksempel 5(a) opnåede hybridplasmid underkastes fordøjelse med Eco RI og Pst I. Det i-solerede (Eco RI-Pst I)-fragment ligateres analogt med eksempel 5(b) til et nyt hybridplasmid, der nu indehol- 35 der aen indsatte DNA-sekvens IC (fig. 7).
0
DK 164940 B
19
Eksempel 6
Konstruktion af hybridplasmider til ekspression af DNA- sekvenserne IA, IB og IC_ (a) Indbygning i pKK 177.3.
5 Ekspressionsplasmidet pKK 177.3 [Plasmid ptac 11, Aman m.fl., Gene 25, 167 (1983)], hvori der i Eco RI-genkendelsesstedet syntetisk er indbyttet en sekvens, som indeholder Sal I-snitstedet), åbnes med restriktionsenzymerne Eco RI og Sal I. Ud fra plasmidet ifølge fig.
10 5 udskæres det indsatte IB med restriktionsenzymerne Eco RI og Sal I. På samme måde isoleres også de indsatte (kun lidt forlængede) IA og IC , da der kun få nucleo-tider bag ved den egentlige afslutning af de to genfragmenter, der er kendetegnet ved snitstedet for restriktions-15 enzyme. Sma I, i plasmidet pUC 8 sidder et Sal I-snit-sted (fig. 6 og 7).
Fragmenterne IA*, IB og IC* påføres på 2%'s lavtsmeltende agarose, fraskilles fra plasmid-DNA'et, og de indsatte dele genudvindes ved opløsning af gelen ved 20 forhøjet temperatur (efter producentens angivelser). Ved ligatering af det åbnede plasmid pKK 177.3 med fragmen-terne IA , og IB eller IC frembringes et hybridplasmid, hvori der forud for de indsatte fragmenter er indskudt en ekspressions- eller regulationsregion. Efter tilsæt-25 ning af en egnet induktor såsom isopropyl-8-thiogalacto-pyranosid (IPTG) dannes et mENA, som fører til ekspression af methionylpolypeptiderne svarende til DNA-sekven-serne IA, IB eller IC.
(b) Indbygning i pMX 2.
30 Ekspressionsplasmidet pMX 2 består af et med 21 nucleotlder forkortet pUC 8-plasmid og fremstilles på følgende måde: pUC 8 åbnes med res'triktionsendonuclease Eco RI og behandles derefter med exonuclase Bal 31,under sådanne
QC
betingelser, at der tillades fraspaltning på ca. 20 nu-cleotider på begge sider af Eco RI-snitstedet (Maniatis
DK 164940 B
20
O
ovenfor) .
Derefter suppleres eventuelt fremspringende ender i det således behandlede plasmid med Klenow-DNA--polymerase, plasmidet efteråbnes med restriktionsendo-5 nucleasen Hind III, og plasmidet renses over IS's lavt-smeltende agarosegeler ifølge producentens anvisninger.
I plasmidet genindsættes det oprindelige, i pUC 8 forekommende, og ved hjælp af restriktionsenzymsnit Eco RI og Hind III begrænsede po lymel lems tykke, som ved hjælp 10 af de tidligere beskrevne manipulationer blev ødelagt.
Hertil åbnes pUC 8 med restriktionsenzymet Eco RI, og de ovenstående ender suppleres med Klenow-DNA-polyme- rase under anvendelse af nucleosidtriphosphater, der er 32 mærket med P. Polymellemstykket udskæres derpå fra 15 plasmidet med restriktkonsenzymet Hind III og fraskilles ved hjælp af elektrophorese på 10%'s acrylamidgeler fra plasmidet. Efter identificering af polymellemstykkebåndet ved hjælp af et autoradiogram befries polymellemstykket ved hjælp af elektroeluering for acrylamid- 90 rester og ligateres i det forkortede pDC 8-plasmid.
Det således konstruerede plasmid pMX 2 åbnes derpå med restriktionsenzymerne Eco RI og Sal I og ligateres med γ-interferon-genfragmenterne IA*, IB eller IC*, som i deres ender har Eco RI- og Sal I-genkendelsessekvenser, 25 i ekspressionsplasmidet pMX 2 (fig. 8-10) . Kloner, der udviser en høj interferontiter, identificeres derpå ved hjælp af den biologiske aktivitetsbestemmelse.
Eksempel 7 30
Transformering af hybridplasmiderne
Kompetente E.coli-celler transformeres med 0,1-1 j\ig af hybridplasmiderne^ som indeholder sekvenserne IA eller IB lier IC, og udstryges på ampicillin-holdige agarpla der. Derpå kan kloner, som indeholder i de tilsvarende plas-35 mider korrekt indsatte γ-interferon-gensekvenser, identificeres ved DNA-hurtigoparbejdning (Maniatis ovenfor).
21 0
DK 164940B
Eksempel 8
Ekspression af polypeptider med γ-interferon-aktivitet
Efter transformering af de nævnte hybridplasmi-der i E.coli eksprimeres polypeptider, som foruden de 5 tilsvarende γ-interferon-aminosyresekvenser i aminoen-destillingen yderligere har en ekstra methionylgruppe, nemlig ved konstruktionen I Met-(IFN-γ-aminosyrer 1-127), ved konstruktionen IB Met-(IFN-γ, aminosyrer 5-146) , 10 og ved konstruktionen IC Met-(IFN-γ, aminosyrer 5-127).
Eksempel 9
Oparbejdning og rensning 15 Bakteriestammerne, der er dyrket til den ønske de optiske tæthed, inkuberes med en egnet induktor, f.eks.
IPTG, i tilstrækkelig lag tid, f.eks. 2 timer. Derpå dræbes cellerne med 0,1%'s cresol og 0,1 mmolær benzyl-sulfonylfluorid. Efter centrifugering eller filtrering 20 optages cellemassen i en pufferopløsning (50 mmolær Tris, 50 mmolær EDTA, pH 7,5) og oplukkes mekanisk, f.eks. med en French-presse eller "Dyno-Muhle1® (firma Willy Bach-ofer, Basel), hvorpå de uopløselige bestanddele fracentrifugeres. Ud fra den ovenfor stående væske renses de 25 proteiner, der indeholder γ-interferon-aktivitet, ved hjælp af gængse metoder. Hertil egner sig ionbytter-, adsorptions-, gelfiltreringskolonner eller affinitets-chromatografi på antistofkolonner. Ved hjælp af natri-umdodecylsulfat/acrylamidgel- eller HPLC-analyseteknik 30 kontrolleres produkternes berigelse og renhed.
For biologisk at karakterisere produkterne med hensyn til γ-interferonaktivitet anvendes på kendt måde indikatorcellelinier, som f.eks. Vero-celler, og inkuberes med række fortyndinger af interferonholdige 35 bakterieekstrakter. Derpå kontrolleres ved hjælp af infektion med et virus såsom VSV (vesicular stomatitis vi- 0
DK 164940 B
22 rus) , med hvor stærk fortynding der ved forbehandling med bakterieekstrakten hos Vero-cellerne kan opnås en antiviral status. Bedømmelsen kan ske mikroskopisk eller ved bestemmelse af neutralrødt-optagelsen.
_ Ved CPE-måling opnås følgende resultat 5
Aminosyrer Virkning i % 1 - 146 100 (standard) 5 - 146 110 5 - 127 ca. 5 1 - 127 ca. 5 10
Bestemmelsen af γ-interferon-aktiviteten kan også ske med en i handelen værende radioimmunanalyse (Celletech Ltd.) , der er baseret på et monoklonalt antistof mod γ-interferon.
16 20 25 30 35
Claims (9)
1. Polypeptid, kendetegnet ved, at det består af aminosyresekvensen 5-146 i human—r-interferon (IFN—r). 5
2. Human—r-interferon-analog ifølge krav 1 med antiviral, antitumoral og antineoplastisk aktivitet som ύ-interferon, kendetegnet ved, at den naturlige aminosyresekvens er ændret ved ombytning, tilføjelse eller eliminering af 10 aminosyrer, idet sekvensen altid skal starte med Asp.
3. Genteknologisk fremgangsmåde til fremstilling af polypeptid ifølge krav 1 eller 2, kendetegnet ved, at der i en værtsorganisme, fortrinsvis E.coli, bringes 15 et gen med DNA med den almene formel Pr-R-Z til ekspression, 20 hvor Pr og R er nucleotidsekvenser, som koder for følgende aminosyrer eller aminosyresekvenser: Pr for et præpeptid, der fraspaltes i værtsorganismen eller in vitro, eller Met R for aminosyrerne 5-146 eller modifikationer af 25 denne aminosyresekvens, og Z betyder en eller fortrinsvis to stop-codoner.
4. DNA-Sekvens, kendetegnet ved, at den har formlen 30 (IFN-r 5-146) (IB) hvor (IFN—r 5-146) er codonerne for aminosyrerne 5-146 i IFN—r eller modifikationer af denne aminosyresekvens. 35
5. Hybridplasmider, kendetegnet ved, at de DK 164940 B 24 indeholder en DNA-sekvens IB ifølge krav 4.
6. Hybridplasmider, kendetegnet ved, at de mellem et Eco RI- og et Sal I-snitsted indeholder DNA-sekven- 5 sen (IB) ifølge krav 4.
7. Hybridplasmider ifølge krav 6, kendetegnet ved, at de mellem Eco RI-snitstedet og codonet for de første aminosyrer i interferonsekvensen indeholder en præsekvens. 10
8. Værtsorganismer, fortrinsvis E.coli, kendetegnet ved, at de indeholder hybridplasmideme ifølge krav 5-7. 15
9. Lægemiddel, kendetegnet ved et indhold af et polypeptid ifølge krav 1 eller 2.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE3414831 | 1984-04-19 | ||
DE19843414831 DE3414831A1 (de) | 1984-04-19 | 1984-04-19 | Herstellung von polypeptiden mit human-gammainterferon-aktivitaet |
Publications (4)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DK176285D0 DK176285D0 (da) | 1985-04-18 |
DK176285A DK176285A (da) | 1985-10-20 |
DK164940B true DK164940B (da) | 1992-09-14 |
DK164940C DK164940C (da) | 1993-02-01 |
Family
ID=6234006
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DK176285A DK164940C (da) | 1984-04-19 | 1985-04-18 | Polypeptid med human-gamma-interferonaktivitet, genteknologisk fremgangsmaade til fremstilling deraf, hybrid-plasmider indeholdende en dna-sekvens, der koder for peptidet, vaertsorganismer indeholdende hybridplasmiderne, samt laegemidler, som indeholder polypeptidet |
Country Status (20)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4832959A (da) |
EP (1) | EP0161504B1 (da) |
JP (2) | JPH0745516B2 (da) |
KR (1) | KR920009505B1 (da) |
AT (1) | ATE69241T1 (da) |
CA (1) | CA1339892C (da) |
DE (2) | DE3414831A1 (da) |
DK (1) | DK164940C (da) |
ES (1) | ES8603574A1 (da) |
FI (1) | FI90436C (da) |
GR (1) | GR850941B (da) |
HU (1) | HU210111B (da) |
IE (1) | IE59460B1 (da) |
IL (1) | IL74947A (da) |
MA (1) | MA20411A1 (da) |
NO (1) | NO171983C (da) |
NZ (1) | NZ211827A (da) |
PH (1) | PH25251A (da) |
PT (1) | PT80300B (da) |
ZA (1) | ZA852900B (da) |
Families Citing this family (23)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3409966A1 (de) * | 1984-03-19 | 1985-09-26 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Gentechnologisches verfahren zur herstellung von human-gammainterferon und mittel zur durchfuehrung dieses verfahrens |
DE3536939A1 (de) * | 1985-10-17 | 1987-04-23 | Hoechst Ag | Biologisch aktive derivate des human-(gamma)-interferons, ihre herstellung und arzneimittel, die solche derivate enthalten |
GB8619725D0 (en) * | 1986-08-13 | 1986-09-24 | Hoffmann La Roche | Homogenous interferon fragments |
DE3642096A1 (de) * | 1986-12-10 | 1988-06-16 | Boehringer Ingelheim Int | Pferde-(gamma)-interferon |
US5157004A (en) * | 1986-12-27 | 1992-10-20 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Polypeptides and production thereof |
JP2653061B2 (ja) * | 1986-12-27 | 1997-09-10 | 武田薬品工業株式会社 | 新規ポリペプチドおよびその製造法 |
EP1231943A1 (en) * | 1999-11-12 | 2002-08-21 | Maxygen Holdings Ltd | Interferon gamma conjugates |
US7230081B1 (en) | 1999-11-12 | 2007-06-12 | Maxygen Holdings, Ltd. | Interferon gamma conjugates |
US7038015B2 (en) * | 2001-04-06 | 2006-05-02 | Maxygen Holdings, Ltd. | Interferon gamma polypeptide variants |
US6958388B2 (en) | 2001-04-06 | 2005-10-25 | Maxygen, Aps | Interferon gamma polypeptide variants |
US7524931B2 (en) * | 2002-07-03 | 2009-04-28 | Maxygen Holdings Ltd. | Full-length interferon gamma polypeptide variants |
US20050003533A1 (en) * | 2003-05-08 | 2005-01-06 | Pawel Kalinski | Mature type-1 polarized dendritic cells with enhanced IL-12 production and methods of serum-free production and use |
BG66458B1 (bg) | 2005-03-21 | 2014-10-31 | Иван Иванов | Средство за конкурентно инхибиране на ендогенен гама интерферон |
US20060251619A1 (en) * | 2005-05-04 | 2006-11-09 | Gilles Borrelly | Modified interferon-gamma polypeptides and methods for using modified interferon-gamma polypeptides |
WO2008121461A2 (en) * | 2007-02-26 | 2008-10-09 | University Of Pittsburgh - Of The Commonwealth System Of Higher Education | Vaccine for activating helper function of cd8+ tcells |
BG66517B1 (bg) * | 2008-04-08 | 2016-02-29 | Tigo Gmbh | Супресор на ендогенния човешки гама - интерферон |
US9359421B2 (en) | 2008-04-08 | 2016-06-07 | Tigo Gmbh | Suppressor of the endogenous interferon-gamma |
JP4821891B2 (ja) * | 2009-07-01 | 2011-11-24 | トヨタ自動車株式会社 | 電池制御システム及び車両 |
BG67190B1 (bg) | 2017-03-29 | 2020-11-16 | Tigo Gmbh | Анти-гама мутантен протеин срещу ендогенния човешки гама интерферон |
WO2020076992A1 (en) | 2018-10-11 | 2020-04-16 | Inhibrx, Inc. | 5t4 single domain antibodies and therapeutic compositions thereof |
JP7453219B2 (ja) | 2018-10-11 | 2024-03-19 | インヒブリックス, インコーポレイテッド | Pd-1単一ドメイン抗体およびその治療用組成物 |
JP2022512684A (ja) | 2018-10-11 | 2022-02-07 | インヒブルクス インコーポレイテッド | B7h3シングルドメイン抗体およびその治療用組成物 |
EP3864045A2 (en) | 2018-10-11 | 2021-08-18 | Inhibrx, Inc. | Dll3 single domain antibodies and therapeutic compositions thereof |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU561343B2 (en) * | 1981-10-19 | 1987-05-07 | Genentech Inc. | Human immune interferon by recombinant dna |
JPS58110548A (ja) * | 1981-12-24 | 1983-07-01 | Asahi Chem Ind Co Ltd | 新規な生理活性ペプチド |
EP0088540A3 (en) * | 1982-02-22 | 1984-10-17 | Biogen, Inc. | Dna sequences, recombinant dna molecules and processes for producing human immune interferon-like polypeptides |
IL68100A0 (en) * | 1982-03-24 | 1983-06-15 | Takeda Chemical Industries Ltd | Novel dna and use thereof |
US6936694B1 (en) * | 1982-05-06 | 2005-08-30 | Intermune, Inc. | Manufacture and expression of large structural genes |
JPH0787797B2 (ja) * | 1982-05-20 | 1995-09-27 | サントリー株式会社 | ヒト・ガンマ・インタ−フエロン様ポリペプチドの製造法 |
US4681848A (en) * | 1982-09-22 | 1987-07-21 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Novel peptide and use thereof |
US4604284A (en) * | 1983-09-20 | 1986-08-05 | Hoffmann-La Roche Inc. | Homogeneous immune interferon fragment |
US4855238A (en) * | 1983-12-16 | 1989-08-08 | Genentech, Inc. | Recombinant gamma interferons having enhanced stability and methods therefor |
-
1984
- 1984-04-19 DE DE19843414831 patent/DE3414831A1/de not_active Withdrawn
-
1985
- 1985-03-04 US US06/707,554 patent/US4832959A/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-04-13 DE DE8585104501T patent/DE3584579D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1985-04-13 EP EP85104501A patent/EP0161504B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1985-04-13 AT AT85104501T patent/ATE69241T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-04-15 HU HU851393A patent/HU210111B/hu not_active IP Right Cessation
- 1985-04-17 ES ES542337A patent/ES8603574A1/es not_active Expired
- 1985-04-17 PT PT80300A patent/PT80300B/pt unknown
- 1985-04-17 IL IL7494785A patent/IL74947A/xx not_active IP Right Cessation
- 1985-04-17 GR GR850941A patent/GR850941B/el not_active IP Right Cessation
- 1985-04-17 NZ NZ211827A patent/NZ211827A/xx unknown
- 1985-04-17 FI FI851529A patent/FI90436C/fi not_active IP Right Cessation
- 1985-04-18 PH PH32148A patent/PH25251A/en unknown
- 1985-04-18 KR KR1019850002625A patent/KR920009505B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1985-04-18 DK DK176285A patent/DK164940C/da not_active IP Right Cessation
- 1985-04-18 CA CA000479511A patent/CA1339892C/en not_active Expired - Fee Related
- 1985-04-18 NO NO851564A patent/NO171983C/no not_active IP Right Cessation
- 1985-04-18 ZA ZA852900A patent/ZA852900B/xx unknown
- 1985-04-18 MA MA20635A patent/MA20411A1/fr unknown
- 1985-04-18 IE IE99585A patent/IE59460B1/en not_active IP Right Cessation
- 1985-04-18 JP JP60081502A patent/JPH0745516B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1993
- 1993-09-01 JP JP5217335A patent/JPH07100037B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DK164940B (da) | Polypeptid med human-gamma-interferonaktivitet, genteknologisk fremgangsmaade til fremstilling deraf,hybrid-plasmider indeholdende en dna-sekvens, der koder for peptidet, vaertsorganismer indeholdende hybridplasmiderne, samt laegemidler, som indeholder polypeptidet | |
DK175337B1 (da) | Fremgangsmåde til fremstilling af et polypeptid med hirudinaktivitet og DNA-sekvenser, fusionspeptid, hybridplasmid og værtsorganisme, som kan anvendes ved fremgangsmåden | |
US5089400A (en) | Polypeptides and process for the production thereof | |
DK166681B1 (da) | Dna-sekvenser, dna-sekvenser og dna-oligonucleotider til brug ved fremstilling af de foerstnaevnte dna-sekvenser, hybridplasmider indeholdende dna-sekvens, vaertsceller indeholdende hybridplasmiderne samt genteknologisk fremgangsmaade til fremstilling af il-2 | |
EP0095350B1 (en) | A method of producing human gamma-interferon-like polipeptide | |
DK171940B1 (da) | Fremgangsmåde til fremstilling af polypeptider meden C-terminal carboxamidgruppe, polypeptider til anvendelse ved fremgangsmåden, fusionsproteiner deraf og dertil egnede DNA-sekvenser, plasmider og værtsorganismer | |
JPH05214000A (ja) | 成熟ポリペプチド | |
Paul Curley et al. | Cloning and sequencing of the gene encoding flavodoxin from Desulfovibrio vulgaris Hildenborough | |
JP2862870B2 (ja) | 新規ペプチド | |
JPS63304987A (ja) | アンギオゲニン類の遺伝子工学産生方法 | |
EP0095351B1 (en) | A precursor of a c-terminal amidated peptide and production thereof | |
AU592062B2 (en) | Synthetic regulation region | |
US4711847A (en) | Preparation of secretin | |
NO851065L (no) | Genteknologisk fremgangsmaate til fremstilling av human-gammainterferon og middel til gjennomfoering av denne fremgangsmaaten | |
Niemann et al. | Glycoprotein E1 of MHV-A59: Structure of the 0-Linked Carbohydrates and Construction of Full Length Recombinant cDNA Clones | |
FI68261C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av en rekombinations-dna-molekyl vilken har en humant korionsomatomammotropin kodande nukleotidsekvens | |
PT85753B (pt) | Processo para a preparacao por engenharia genetica de calcitonina de salmao bem como de agentes para a realizacao do referido processo | |
JPH0773506B2 (ja) | 癌壊死因子等の産生方法 | |
JPH0632625B2 (ja) | ウナギカルシトニン誘導体遺伝子 | |
JPH0687779B2 (ja) | 合成構造遺伝子 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PBP | Patent lapsed |