DK157194B

DK157194B - Oxadiazolylimidazobenzodiazepinforbindelse og farmaceutisk praeparat indeholdende samme

Info

Publication number: DK157194B
Application number: DK231686A
Authority: DK
Inventors: Frank Waetjen; Mogens Engelstoft; John Bondo Hansen; Leif Helth Jensen
Original assignee: Ferrosan As
Priority date: 1985-05-17
Filing date: 1986-05-16
Publication date: 1989-11-20
Also published as: FI862061A0; DE201678T1; AU614407B2; DK157194C; DK63288D0; PT82594B; IL78790A0; NZ216202A; DK63288A; US4622320A; CA1256864A; PT82594A; AU590273B2; IE59494B1; ATE35266T1; IE861306L; FI82049B; EP0201678B1; FI862061A; FI82049C

Description

DK 157194 B

Opfindelsen angâr en hidtil ukendt oxadiazolylimidazo-benzodi azepi nforbi ndel se.

Den hidtil ukendte forbindelse er anvendelig i psykofamaceu-tiske præparater, f.eks. til behandling af centralnervesystemssyg-5 domme, sâsom krampehæmmende midler og angstdæmpende midler.

Det er kendt (Squires, R.F. og Bræstrup, C., Nature (London) 266, (1977) 732), at specifikke steder i centralnervesystemet hos hvirveldyr udviser en stor specifik affinitet for binding af 1,4- og 1,5-benzodiazepiner. Disse steder kaldes benzodiazepinreceptorer.

10 Europæisk patentansogning nr. 109.921 omtaler forbindelser

med den almene formel I

R\ h ’ -

R

20 hvor R'betegner hydrogen, chlor, fluor eller nitro i 7- eller 8-stilling, betegner hydrogen eller C^^-alkyl, R3 betegner en oxadiazolylgruppe med formlen 25 ,°-M. N-0 -χΑ"" eller hvor 30 R" betegner C-j^-alkyl, A.....B betegner en gruppe med formlen Άν/ \ /

/ \ eller C=N

« 0 1,5 A—— R"

35 (OJ

hvor 5 2

DK 157194 B

R betegner hydrogen eller methyl og R'" betegner hydrogen eller chlor.

Europsisk patentansogning nr. 109.921 omtaler yderligere, at visse oxadiazolylbenzodiazepiner og oxadiazolylbetacarboliner udviser 5 sterre bindingsaffinitet overfor benzodiazepinreceptorerne end alkylestere af de tilsvarende syrer.

Europæisk patentansogning nr. 150.040 omtaler 1,2,4-oxadia-zolylbenzodiazepinforbindelser med formlerne II og III

1° fw8'.- R « // \d3

R4 0 R

15 R

hvor R^ betegner alkyl, cycloalkyl, methoxymethyl, R^ betegner H, CH., og 4 5 ύ 20 R og R - hver betegner H eller halogen, Λ-·

\ (««O

25 *s î ί hvor " X betegner 30 /°^ hvor 35 R^ betegner alkyl, cycloalkyl, CF_ eller methoxymethyl, 4 5 0 R og R hver betegner H, halogen, CF^ og n betegner 2 eller 3.

Forbindelserne, som omtales i eksemplerne 2, 3, 16, 29, 32, 3

DK 157194 B

43, 44, 45, 49, 50, 51, 53 og 56 i Europæisk patentansogning nr.

150.040, er 5,6-di hydro-6-oxo-4H-imidazo(1,5-a)(1,4)benzodi azepi n-forbindelser (med ovennævnte formel II), hvorimod de forbindelser, som omtales i eksemplerne 1, 8, 9, 17, 18, 23 og 30, er 5 10,n,12,12a-tetrahydro-9-oxo-9H-imidazo-(l,5-a)azeto(2,l-c)(l,4)- benzodiazepinforbindelser (med ovennævnte formel III) og forbindelserne, som omtales i eksemplerne 4, 5, 6, 7, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 19, 20, 21, 22, 24, 25, 26, 27, 28, 31, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 46, 48, 54, 55, 57, 58 og 59, er 10 ll,12,13,13a-tetrahydro-9-oxo-9H-imidazo-(l,5-a)pyrrol(2,1-c)(l,4)ben- zodiazepinforbindelser (ogsâ med formlen III).

Endelig er den forbindelse, som omtales i eksempel 47 i Europæisk patentansogning nr. 150.040, en 11,13a-dihydro-9-oxo--9H-imidazo(l,5-a)pyrrol(2,1-c)(1,4)benzodiazepinforbindelse.

15 De forbindelser, som omtales i eksemplerne 11, 15, 26 og 40 i

Europæisk patentansogning nr. 150.040, er forbindelser af formlen III, hvor X betegner en 1,2,4-oxadiazol-3-yl gruppe og i forbindelsen, som omtales i eksempel 40, betegner X en i 5-cyclopropy1-1,2,4-oxadi azol-3-yl gruppe.

20 Europæisk patentansogning nr. 150.040 omtaler ogsâ en fremgangsmâde ti1 fremstilling af forbindelser med formlerne II og III, hvilken fremgangsmâde omfatter en omsætning af en forbindelse med henholdsvis formlen V og VI: 25 * *

4 ο R4 O

30 R

4 5 hvor R , R og n har de ovenfor anforte betydninger og Y betegner en fraspaltelig gruppe (leaving group), med en forbindelse med formlen CN-CI^-^R, ti 1 dannelse af en forbindelse med formlen II eller III, 35 der omfatter en -C02R substituent i 3-stillingen og omdannelse i flere trin af denne forbindelse til det onskede oxadiazolderivat.

m

Ifolge opfindelsen tilvejebringes en hidtil ukendt gruppe 4

DK 157194 B

oxadiazolylbenzodiazepinforbindelse, 3-(5-cyclopropyl-1,2,4-oxadiazol -3-yl)-5,6-dihydro-5-methyl-6-oxo-4H-imidazo(l»5-a}(l,4)benzodiazepin, med den almene formel VII

@2.

O. ^3

10 J

og farmaceutisk acceptable syreadditionssalte deraf. Den hidtil ukendte forbindelse er anvendelig til behandling af centralnervesystemsforstyrrelser eller -sygdomme og specielt som 15 krampehæmmende midler og angstdæmpende midler.

Smeltepunktet for forbindelsen ifolge opfindelsen er 179-180,8°C.

Forbindelsen ifelge opfindelsen kan fremstilles ved en fremgangsmâde, som er analog med en fremgangsmâde, som er beskrevet i 20 Europæisk patentansogning nr. 109,921, nemlig ved den felgende reaktionssekvens: 25 foT > CN-CH2-co2Et foi ) - 7\ 11

M \h, f CH

O * O

NOH N

35 .. CK

o . · 3 0

DK 157194 B

5

Forbindelsen ifolge opfindelsen kan ogsâ fremstilles ved

a) en omsætning af en forbindelse med formlen VIII

Y

s O CH3

10 hvor Y betegner en fraspaltelig gruppe, med en forbindelse med formlen IX

cH-CHr|^-^ (,X) 15 eller

b) en omsætning af en forbindelse med formlen XII

20 /jTJh01 . «Ό ®rl,

O · J

25

med NH20H til dannelse af en forbindelse med formlen XIII

NOH

fV/ » (oÇp- O 3 35 og en omsætning af den derved fremkomne forbindelse med en forbindelse med formlen 6

DK 157194 B

£>—coci.

Forbindelsen med formlen IX, nemlig 5-cyclopropyl-3-isocyano-5 methyl-l,2,4-oxadiazol er hidtil ukendt.

Eksempler pâ egnede fraspaltelige grupper til brug ved ovennævnte omsætninger er halogen, alkylthio, f.eks. methylthio, aralkylthio, N-nitrosoalkylamino, alkoxy, mercapto, -0P-(0)(0R)2, hvor R betegner lavere alkyl, eller -0P(0)(NR“ R ), hvor R'og R" 10 hver repræsenterer lavere alkyl eller phenyl eller sammen med det tilst0dende nitrogervatom danner en heterocyklisk gruppe, sâsom morpholin, pyrrolidin, pi péridiπ eller methylpiperazin.

Omsætningen sker fortrinsvis under basiske betingelser d.v.s. under tilstedeværelse af en base. Foretrukne baser er alkalimetal-15 f.eks. kalium- eller natriumalkoxider eller -hydrider. Omsætningen sker fortrinsvis under tilstedeværelse af et organisk oplosningsmiddel, som ikke reagerer med reaktanterne og reaktionsprodukterne under de herskende reaktionsbetingelser. Egnede oplosningsmidler er vandfrie opl0sningsmidler og fortrinsvis vandfrie 20 aprotiske oplesningsmidler, sâsom dimethylformamid (DMF) eller lignende. Reaktionstemperaturen ber være tilstrækkelig hoj til, at omsætningen kan forl0be i et rimeligt tempo og uden unedvendigt ophold eller dekomposition, og et interval fra -40°C til ca. 30°C er normalt passende.

25 Opfindelsen angâr ogsâ et farmaceutisk præparat, der omfatter en effektiv mængde af forbindelsen ifolge opfindelsen eller et farmaceutisk accetabelt syreadditionssalt deraf. Det farmaceutiske præparat ifolge opfindelsen er egnet til behandling af centralnervesystemssygdomme, sâsom kramper og angsttilstande.

30 .Det farmaceutiske præparat ifolge opfindelsen kan omfatte et sædvanligt hjælpestof, bærer eller fortyndingsmiddel eller kan bruges i enhedsdosisform. Forbindelsen ifolge opfindelsen kan indgives i fast form, f.eks. i form af tabletter eller fyldte kapsler, i flydende form f.eks. i form af oplesninger, suspensioner, emulsioner, 35 eliksir eller kapsler fyldt med samme, aile til oral anvendelse; i form af suppositorier til rektal indgivelse; eller i form af stérile injicerbare opl0sninger til parentéral (inkl. subkutan) brug. Sâdanne

DK 157194 B

7 farmaceutiske præparater og enhedsdosisformer heraf kan omfatte sædvanlige bestanddele i sædvanlige mængder, med eller uden yderligere aktive forbindelser eller principper. Enhedsdosisformerne bor indeholde en til lindring af en lidelse i centralnervesystemet 5 effektiv (eller benzodiazepinagonistisk) mængde af den aktive bestanddel, der star i rimeligt forhold til det beregnede daglige dosisomrâde, som skal anvendes. Tabletter, soin indeholder ca. 10 mg aktivt bestanddel eller mere generelt fra ca. 10 til 30 mg per tablet, er passende enhedsdosisformer.

10 Forbindelsen ifolge opfindelsen kan formuleres til oral og parentéral indgivelse hos pattedyr, herunder mennesker i over-ensstemmelse med sædvanlige galeniske farmaceutiske metoder.

Sædvanlige tilsætningsstoffer er sâdanne farmaceutisk acceptable organiske eller uorganiske bærestoffer, som er egnede til 15 parentéral eller oral brug, og som ikke pâ skadelig vis reagerer med den aktive forbindelse.

Eksempler pâ sâdanne bærere er vand, saltoplesninger, alkoholer, polyethylenglycoler, polyhydroxy-ethoxyleret ricinusolie, , gélatine, lactose, amylose, magnesiumstearat, talkum, kiselsyre, 20 fedtsyremonoglycerider og fedtsyrediglycerider, pentaerythritol-fedtsyreestere, hydroxymethylcellulose og polyvinylpyrrolidon.

De farmaceutiske præparater kan sterilisérés og om onsket blandes med sâdanne hjælpemidler som simaremidler, konserverings-midler, stabiliseringsmidler, befugtningsmidler, emulgeringsmidler, 25 sa!te til pâvirkning af osmotiske tryk, puffere og/eller farvestoffer og lignende, som ikke pâ skadelig vis reagerer med den aktive forbindelse.

Injicerbare oplosninger eller suspensioner, fortrinsvis vandige oplesninger med den aktive forbindelse opl0st i 30 polyhydroxyleret ricinusolie, er særligt egnede til parentéral anvendelse.

Ampuller er hensigtsmæssige enhedsdoser.

Til oral anvendelse er tabletter, drageer eller kapsler, der indeholder talkum og/eller en kulhydratbærer eller binder eller 35 lignende, specielt egnede, idet bæreren fortrinsvis er lactose

og/eller majsstivelse og/eller kartoffelstivelse. En sirup, eliksir eller lignende kan anvendes, nâr en sodet' bærer kan bruges. I

8

DK 157194 B

almindelighed anvendes forbindelsen ifelge opfindelsen i enhedsdosisform, hvor en enhedsdosis omfatter fra 0.05-100 mg i en farmaceutisk acceptabel bærer.

Pâ grund af den store affinitet overfor benzodiazepin-5 receptorerne er forbindelsen ifolge opfindelsen meget anvendelig ved behandling af centralnervesystemssygdomme eller -forstyrrelser, nâr den indgives i en mængde, der er effektiv til lindring, mildning eller fjernelse af sâdanne sygdomme eller forstyrrelser. Dette omfatter ogsâ en benzodiazepinagonistisk mængde af forbindelsen. Den 10 vigtige CNS-aktivitet af forbindelsen ifolge opfindelsen omfatter bâde krampehæmmende og angstdæmpende aktiviteter sammen med en lav toksicitet, som sammen giver et meget gunstigt terapeutisk indeks. Forbindelsen ifolge opfindelsen kan folgelig indgives i pattedyr, sâsom mennesker, der har behov for samme til behandling, lindring, 15 mildning eller fjernelse af en indikation, som er forbundet med centralnervesystemet og bezodiazepinreceptorer og som gor sâdan psykofarmaceutisk behandling pâkrævet, f.eks. et menneske som lider af kramper eller som befinder sig i en angsttilstand. Forbindelsen , ifolge opfindelsen indgives fortrinsvis i form af et farmaceutisk 20 præparat som ovenfor beskrevet og fortrinsvis i en daglig dosis pâ 1-200 mg, fortrinsvis 10-100 mg og mest foretrukket 30-70 mg afhængig af den eksakte indgivelsesmâde, indgivelsesformen, indikationen, som indgivelsen er rettet mod, patienten, der er involveret, og den involverede patients kropsvægt, og den ansvarlige læge eller dyrlæges 25 præference eller erfaring. Bredere dosisintervaller for forbindelsen ifolge opfindelsen ligger pâ 0,1-300 mg/dag, nâr den ingives i patienter, f.eks. mennesker, i form af et medikament.

Opfindelsen vil nu blive beskrevet nærmere under henvisning til de folgende eksempler.

30 EKSEMPEL 1 a. 5,6-dihydro-5-methyl-6-oxo-4H-imidazo(l,5-a)(1,4)benzodiazepin-3- carboxamidoxim_

En blanding af 0,0125 mol 3-cyano-5,6-dihydro-5-mehtyl-6-oxo -4H-imidazo(l,5-a)(1,4)benzodiazepin, 1,1 g hydroxylaminhydrochlorid, 35

DK 157194 B

9 200 ml 99% éthanol og 5,2 ml af en 20% kaliumcarbonatoplosning i vand opvarmes under omrering i 2 timer. Reaktionsblandingen filtreres og filtratet koncentreres. Resten behandles med 100 ml vand og det krystallinske stof frafiltreres og vaskes med vand.

5 Smp. 224,6-225,9°C.

b. 3-(5-cyclopropy1-1,2,4-oxadiazol-3-y1)-5,6-dihydro-5-methyl-6-oxo-4H-imidazo(l,5-a)(l,4)benzodiazepin_ 10 En blanding af 580 mg 5,6-dihydro-5-methyl-6-oxo-4H-imidazo (l,5-a)(l,4)benzodiazepin-3-carboxamidoxim, 3 ml ethylcyclopropy!- • «9 carboxylat, 50 mg natrium og 3 g molekylsi (4Â) tilbagesvales i 6 timer i 50 ml tor éthanol. Reaktionsblandingen afkoles, filtreres og filtratet inddampes til dannelse af en inddampningsrest i form af 15 olieagtige krystaller.

Behandling af inddampningsresten med vand giver ovennævnte forbindelse i form af blege krystaller.

Smp. 179-180,8°C.

20 EKSEMPEL 2 a. Formylaminomethyl-carboxamldoxim 0,55 mol nylig frigjort hydroxylamin oplost i 370 ml methano! 25 sættes til 53,6 g (0,638 mol) N-formylamino-acetonitril. Et isbad bruges til at holde temperaturen under 20°C under tilsætningen. Oplosningen fâr lov til at henstâ natten over ved stuetemperatur, hvorefter den inddampes til dannelse af ovennævnte forbindelse 1 form af blege krystaller.

30 Dekomposition 104-110°C.

b. 3-Formylaminomethyl-5-cyclopropy!-1,2,4-oxadiazol

En blanding af 35 ml ethylcyclopropylcarboxylat, 30 g formylaminomethylcarboxamidoxim, 1 g natrium og 30 g knust molekylsi 35 (4Â) tilbagesvales i 300 ml abs. EtOH i 8 timer, hvorefter yderligere 1 g natrium tilsættes. Reaktionsblandingen filtreres og filtratet inddampes. En mork olieagtig inddampningsrest dannes og den opslæmmes

DK 157194 B

10 i 300 ml CHC13, filtreres og filtratet inddampes til dannelse af ovennævnte forbindelse i form af en olle.

H-NMR (60 MHz, CD13) o (ppm): 1,2 (4 H, m), 2,8 (1 H, m), 4,5 (2 H, d, J=6 HZ), 7,8 (1 H, bred-NH), 8,2 (1 H, s).

5 c. 5-Cyclopropyl-3-isocyanomethyl-l,2,4-oxadiazol

En omrert oplesning af 5-cyclopropyl-3-formylamino-methyl- 1,2,4-oxadiazol (60 ramol) og triethylamin (176 mmol) i (100 10 ml) tilsættes drâbevis P0C13 (60 mmol) ved 0°C, hvorefter en opl0sning af Na,,C03 (60 mmol) i H^O (50 ml) tilsættes. Blandingen opvarmes til stuetemperatur, hvorefter den organiske fase fraskilles, terres og inddampes i vakuum. Inddampningsresten behandles med ether, dekanteres og oplesningen inddampes til dannelse af ovennævnte 15 forbindelse i form af en olie.

Olien bruges uden yderligere rensning.

IR, cm"1: 2160.

, d. 3-(5-cyclopropyl-l,2,4-oxadiazol-3-yl)-5,6-dihydro-5-methyl-6- 20 oxo-4H-imidazo(l,5-a)(1,4)benzodiazepin_ 3,4-di hydro-4-methy1-2H-1,4-benzodi azepi n-2,5(1H)di on (16,5 mmol) opleses i ter DMF (25 ml) og tilsættes K-t-butylat (18 mmol).

Den derved fremkomne oplesning afkeles under Ng til -20°C, hvorefter 25 chlordiethylphosphat (20 mmol) tilsættes.

Reaktionsblandingen holdes under N3 under omrering ved -20°C og tilsættes en -30°C kold oplesning af 5-cyclopropyl-3-isocyano-methyl-1,2,4-oxadiazol (20 mmol) og K-t-butylat (20 mmol) i ter DMF (20 ml).

30 Den derved fremkomne reaktionsblanding fâr lov til at opvarme til stuetemperatur, hvorefter den inddampes til terhed i vakuum. En olieagtig inddampningsrest, som sâledes opnâs og som indeholder râproduktet, renses pâ SiOg med ethylacetat som elueringsmiddel.

Dette giver ovennævnte forbindelse i form af hvide krystaller.

35 Smp. 179-180°C.

DK 157194 B

n EKSEMPEL 3

Repræsentative farmaceutiske præparater.

a) Tabletter 5

En typisk tablet, som er egnet til behandling af angsttilstande, og som kan fremstilles efter sædvanlîge tabletteringsmetoder indeholder: 10

Forbindelse ifplge opfindelsen 1,0 mg

Lactose 67,4 mg Ph.Eur.

Avicer^(mikrocellulose) 31,4 mg

Amberliti^(IRP 88) 15 (ionbytterharpiks·)· 1,0 mg

Magnesiumstearat 0,25 mg Ph.Eur.

Den samme tablet kan bruges til behandling af kramper.

t 20 b) Suppositorier

Ved inkorporering af den aktive bestanddel under anvendelse af en kendt fremgangsmâde kan der anvendes hvilken som helst sædvanlig suppositoriebase, sâsom en polyethylenglycol, som er i fast 25 form ved stuetemperatur og som smelter ved eller omkring kropstemperatur. . . .

c) Stérile oplosninger til parentéral (herunder subkutan) indgivelse.

30 Den aktive bestanddel sammen med sædvanlige bestanddele, sâsom natriumchlorid, natriumdihydrogenphosphat, dinatriumedetat (dinatriumsaltet af ethylendiamintetraeddikesyre), benzylal kohol, natriumhydroxid til regulering af pH og dobbelt distilleret vand q.s., behandles pâ sædvanlig vis f.eks. ved filtrering, aseptisk 35 pâfyldning i ampuller, og autoklavering til sterilitet.

Det viser sig, at forbindelsen ifolge opfindelsen udviser en forbloffende gunstig og meget fordelagtig aktivitetsgrad i en 12

DK 15 719 4 B

klassisk standardprave til bestemmelse af in vivo affiniteten for benzodiazepinreceptorer samt ved en standardprave, som anses for at være en indikator for farmaceutisk aktivitet mod kramper og angsttilstande, som formidles gennem benzodiazepinreceptorerne.

5 Den falgende pr0ve blev udfart pâ forbindelsen ifalge opfindelsen samt pâ repræsentative eksempler pâ kendte forbindelser.

I. In vivo inhibering af H-flunitrazepambinding til muse- forhjernemembraner med intraperitonealt indgivne pravestoffer 10

Princip. 20 minutter efter indgivelse af en dosis af 3 3 H-flunitrazepam ( H-FNM) (200 pCi/kg i.v.) nâr omfanget af specifik 3 H-FNM binding til hjernebenzodiazepinreceptorer den maximale værdi.

3 H-FNMs specifikke binding kan delvist eller helt forhindres ved en 15 samtidig eller forudgâende indgivelse af farmakologisk aktive benzodiazepiner eller med benzodiazepinlignende midler (Chang og Snyder, Eur. J. Pharmacol. 48, 212-218 (1978)).

Bestemmelsesprocedure. Suspensioner af pravestoffer (2 mg/ml) / fremstilles i 5¾ "Duphasol-X" (ricinusolie-ethylenoxidderivat til 20 emulgering og oplasning af olie og andre vanduoplaselige stoffer) ved lydbehandling i 10 minutter ved brug af et Branson B15 microtip ultralydsapparat (indstilling 7). Grupper pâ 3 mus (hunmus af NMR-typen, der vejer 18-22 g) injiceres intraperitonealt med pravestoffet i en mængde pâ 100 mg/kg. 15 minutter efter 25 pravestoffets indgivelse pâvirkes musene intravenast med 4 pCi i form af ^H-FNM (70-90 Ci/mol) i 200 μΐ fysiologîsk saltoplasning. 20 3 minutter efter indgivelsen af H-FNM aflives musene ved halshugning og forhjernerne fjernes hurtigt (indenfor 30 sek.) og homogeniseres i 12 ml iskold 25 mM KH^PO^, pH 7,1 ved hjælp af et Ultra-Turrax 30 homogeniseringsapparat, som er forsynet med en N 10 aksel. To

portioner pâ 1 ml filtreres straks gennem Whatman GF/C

glasfibrefiltre og vaskes med 2 x 5 ml af ovennævnte puffer. Mængderne af radioaktivitet pâ filtrene mâles ved traditionel scintillationstælling. En gruppe af ubehandlede mus tjener som 35 kontrolgruppe. 1-3 mus injiceres med 25 mg/kg clonazepam i.p. 30 3 minutter far indgivelsen af H-FNM til bestemmelse af mængden af 3 ikke-specifik H-FNM binding, som bar ligge pâ mellem 8-15¾ af den '3

DK 157194 B

totale binding.

Nâr doser pâ 100 mg/kg inhiberer mere end 50% specifik 3 H-flunitrazepam binding, indgives provestofferne i doser, som er en faktor pâ 3,16 gange mindre end den dosis, som inhiberer mere end 50% 5 binding.

EDgg-værdien for provestoffet defineres som den dosis, der inhiberer 50% specifik ^H-FNM binding. Specifik binding defineres som omfanget af binding i kontrolmusene minus omfanget af binding hos clonazepambehandlede mus.

10 Resultater. ED5Q-værdien bestemmes ud fra dosis-respons- kurver. Hvis der kun indgives en dosis af provestoffet, beregnes EOgg-værdien , somfolger (forudsat at inhiberingen af specifik binding ligger indenfor et interval pâ 25-75%): 15 ED50 = indgivet dosis ^—^22 pg/:kg 0 1 5Γ1 / 20 hvor C betegner specifik binding hos kontrolmusene og C betegner

O X

binding hos mus, som er behandlet med prevestoffet. 1

Mus med pentazol-inducerede kloniske .kramper(i ,p.) 25

Princip. Pentylentetrazol fremkalder kloniske og toniske kramper i mus ved doser pâ 60-120 mg/kg s.c. Mekanismen er ukendt, men synes at skyldes visse pâvirkninger gennem fîABA

receptor/benzodiazepinreceptor/chloridionosfære komplekset. Aniago-30 nisme af kramper, som induceres med maksimale doser af pentylentetrazol, anses for at være en iniikator for, at lægemidler er effektive mod petit mal epilepsia og angst.

Fremgangsmâde. 150 mg/kg pentylentetrazol oplost i 0,9% NaCl oplosning indgives subkutant i mængder pi 15 ml/kg til han- «lier 35 hunmus af NMRI typen, der vejer 20-25 g, 30 minutter efter intraperitoneal injéktion af en proveforbindelse. Antallet af mus, der udviser kloniske kramper indenfor de næste 30 minutter, 14

DK 157194 B

registreres. Mindst 3 doser af hver proveforbindelse bruges pâ 4 eller 8 mus pr. dosis og med doser bâde over og under ED^g-værdien.

Resultater. EDgQ-værdien beregnes som den dosis i pg/kg, hvor kramper inhiberes hos 50% af dyrene,ved anvendelse af et EDB-program 5 baseret pâ en metode udviklet af Litchfield og Wilcoxon (1949).

III. Mus med pentazol-lnducerede toniske kramper(i-.p)

Princip. Pentylentetrazol fremkalder kloniske og toniske 10 kramper i mus ved doser pâ 60-120 mg/kg s.c. Mekanismen er ukendt,' men synes at skyldes visse pâvirkninger gennem GABA receptor/benzodi azepi nreceptor/chlori di onosfære komplekset. Antagonisme af kramper, som induceres med maksimale doser af pentylentetrazol, anses for at være en indikator for, at lægemidler 15 er effektive mod petit mal epilepsia og angst.

Fremgangsmâde. 150 mg/kg pentylentetrazol oplost i 0,9% NaCl oplosning indgives subkutant i mængder pâ 15 mg/kg til han- eller hunmus af NMRI typen, der vejer 20-25 g, 30 minutter efter ; intraperitoneal injektion af en proveforbindelse. Antallet af mus, 20 der udviser toniske kramper indenfor de næste 30 minutter, registreres. Mindst 3 doser af hver proveforbindelse bruges pâ 4 eller 8 mus pr. dosis og med doser bâde over og under ED^Q-værdien.

Resultater. ED^-vardien beregnes som den dosis i pg/kg, hvor kramper inhiberes hos 50% af dyrene,ved anvendelse af et EDB-program 25 baseret pâ en metode udviklet af Litchfield og Wilcoxon (1949).

De opnâede resultater ved undersogelse af forbindelsen ifolge opfindelsen og de mest relevante kendte forbindelser vil fremgâ af den efterf0lgende tabel.

30 35 15

DK 15 7194 B

TABEL

Xt;

Aktivitet mod pentazol-in'ducerede

In vivo ryOl. kramper, , s bindIn8· ««.«Λ- 10 / R RS X ED μβ/kg klon k ra

x\/ N—O

i f0T B CH, βΟ

15 N

N_O

B '0^ B C»3 ‘·β0° 21’00° 1,300 / 20 Ç (o^ a ' CB3 3K 600 3,000 1,700 O_N .

25 2 0(n C"3 -(JM 340 2,700 300

N_O

£ 0( -a,2c„2c«2- J «o ‘^-Doo ‘·<™ 30 '

CL

F (θ£ C.,2CH2C.<2 00 3S ci

O_N

O (o£ H CH, -4 ^ 2,200 °'000 2,000

DK 157194 B

16 A Forbindelse ifelge opfindelsen £ Forbindelse omtalt i EP 109.921, eksempel 3 £ Forbindelse omtalt i EP 109.921, side 3, linie 5 £ Forbindelse omtalt i EP 150,040, eksempel 29 5 £ Forbindelse omtalt i EP 150.040, eksempel 40 F Forbindelse omtalt i EP 150.040, eksempel 31 G Forbindelse omtalt i EP 109.921, eksempel 1.

Som det fremgâr af ovennævnte tabel er de farmakologiske 10 egenskaber af forbindelse A kl art bedre end de beslægtede kendte forbindelsers. Sâledes er affiniteten for binding til benzodia-zepinreceptorer ca. 4 gange storre og aktiviteten mod pentazol-inducerede kloniske og toniske kramper henholdsvis 40 og 10 gange storre end for forbindelse D, som er identisk med forbindelsen ifolge 15 opfindelsen bortset fra, at X betegner en 3-cyclo-propyl-l,2,4-oxa-diazolyl-5-yl gruppe.

Ved sammenligning med forbindelse E, som er identisk med forbindelsen ifplge opfindelsen hvad angâr X-substituenten, er ovennævnte egenskaber af forbindelsen ifolge opfindelsen 12, 185 og 20 33 gange storre end den kendte forbindelses.

25 30

Claims

DK 157194 B K r a v 1. 3-(5-cyclopropyl-l,2,4~oxadiazol-3-yl}-5,6-dihydro-5 -methyî-6-oxo*4H-imidazo(l,5-a}(l,4)benzodiazepin med formlen VII 5 «| N-0 10. ch3 (vn) og farmaceutisk acceptable syreadditionssalte heraf. •j5
2. Farmaceutisk præparat omfattende en effektiv mængde af forbindelsen ifdlge krav 1 og en farmaceutisk acceptabel bærer eller fortyndingsmiddel. f