DE892228C - Verfahren zur chromatographischen Reinigung und Fraktionierung von corticoide Hormone enthaltenden Extrakten - Google Patents

Description

• Verfahren zur chromatographischen Reinigung und Fraktionierung von corticoide Hormone enthaltenden Extrakten Das bislang übliche Verfahren zur Anreicherung und Abtrennung von corticoiden Hormonen aus sie enthaltenden Rohextrakten und -konzentraten beruht auf der Anwendung gewisser Ketoreagenzien und Aufarbeitung der abgeschiedenen Ketonfraktionen. Diese Methode ist vom wirtschaftlichen Standpunkt aus wenig befriedigend. Die Umsetzung der Hormone bzw. ihrer Gemische und ihre Rückgewinnung aus den Reaktionsprodukteen. ist mit erheblichen Ausbeuteverlusten verknüpft; außerdem wird hierdurch der bislang in seiner Zusammensetzung noch nicht aufgeklärte amorphe Anteil solcher Rohextrakte, welcher indessen Träger eines hohen Prozentsatzes ihrer Gesamtaktivität ist, nicht erfaßt. Soweit nun eine Anwendung der anderweitig für die Isolierung von Wirkstoffen aus tierischem und pflanzlichem Ausgangsmaterial mit Vorteil benutzten Methode der chromatographischen Adsorptionsanalyse in der Chemie der Nebennierenrinden-Hormone vorgenommen worden ist, konnten brauchbare Ergebnisse bisher nicht erzielt werden, was wohl auf den hydrotropenCbarakter der zu reinigenden Extrakte zurückzuführen ist, denen gegenüber die gebräuchlichen, mehr oder weniger im lipotropen Medium ansprechenden Adsorbentien (Aluminiumoxyd, Kieselsäure usw.) versagen.
• Es wurde nun gefunden, daß sich die Methode der chromatographischen Adsorptionsanalyse mit all ihren bekannten Vorteilen doch auf Rohextrakte von Nebennierenrinden-Hormonen im Sinne sowohl einer Entfernung noch vorhandener Verunreinigungen als auch einer Auftrennung bezüglich einzelner Bestandteile anwenden läßt, wenn man als Adsorptionsmittel Cellulose, vorzugsweise in feingepulverter Form, benutzt und die in an sich üblicher Weise erhaltenen und zu behandelnden Chromatogramme mittels Wasser-Alkohol-Gemischen entwickelt. ,Als besonders vorteilhaft zur Elution hat sich butanolgesättigtes Wasser erwiesen.
• Die nach dem erfindungsgemäßen Verfahren erhaltenen farblosen Extrakte sind nicht nur weitgehend frei von zuvor anwesenden, Ballaststoffen, sondern enthalten auch testgemäß in ihrer Summe praktisch die gesamte .Aktivität des eingesetzten Rohextraktes. Werden die Eluierungsflüssigkeiten fraktioniert aufgefangen, ergibt sich auf Grund der verschiedenen Wanderungsgeschwindigkeiten in der Adsorptionssäule eine Auftrennung in einzelne corticoide Hormone bzw. Hormongruppen (Reihenfolge: 17-Oxy-corticosteron, ii-Dehydroi7-oxy-corticosteron, Corticosteron, ii-Dehydrocorticosteron, ii-Desoxy-r7-oxy-corticosteron, i i-Desoxy-corticosteron) . Hierbei werden Ausbeuten erhalten, welche diejenigen bei Anwendung von Ketoreagenzien erzielten erheblich übersteigen. Zur praktischen Durchführung der Erfindung verfährt man zweckmäßig so, daß man eine Lösung des zu reinigenden, in üblicher Weise gewonnenen Rohextraktes in einem flüchtigen Lösungsmittel, z. B. Methanol, von einer 'ausreichenden Menge feingepulverter Cellulose aufsaugen läßt, das getrocknete Adsorbat auf eine Säule aus feingepulverter Cellulose bringt und hierauf das Eluierungsmittel in geeigneter Menge bzw. Geschwindigkeit durchlaufen läßt. Aus dem Eluat bzw. den einzelnen Eluierungsfraktionen lassen sich die Inhaltsstoffe leicht durch Extraktion mittels flüchtiger, mit Wasser nicht mischbarer organischer Lösungsmittel, z. B. Chloroform oder Essigester, und Eindampfen dieser Extrakte isolieren.
• Das vorstehend dargelegte besondere Verhalten der Cellulose gegenüber Extrakten, die corticoide Hormone enthalten, muß insofern als überraschend bezeichnet werden, also sonst in der Chromatographie ein solch grundsätzlicher Unterschied zwischen Cellulose und vergleichbaren Adsorbentien nicht bekanntgeworden ist.

Claims (1)

1. PATENTANSPRÜCHE: i. Verfahren zur chromatographischen Reinigung und Fraktionierung von corticoide Hormone enthaltenden Extrakten, dadurch gekennzeichnet, daß man Cellulose als Adsorbens und Alkohol-Wasser,Gemische als Eluierungsmittel verwendet. '2. Verfahren gemäß Anspruch i, dadurch gekennzeichnet, daß man als Eluierungsmittel butanolgesättigtes Wasser verwendet.