DE842527C

DE842527C - Verfahren zur Gewinnung von Vitamin B 12

Info

Publication number: DE842527C
Application number: DEP54306A
Authority: DE
Inventors: Ernst Dr Auhagen; Johannes Dr Schmid
Original assignee: Bayer AG
Current assignee: Bayer AG
Priority date: 1949-09-09
Filing date: 1949-09-09
Publication date: 1952-06-26

Description

Verfahren zur Gewinnung von Vitamin B 12 Vitamin B 12, dessen Vorkommen in Leber bekannt ist, wird auch von einer Reihe von Mikroorganismen gebildet. Man hat Vitamin B 12 bereits aus Kulturfiltraten solcher Mikroorganismen, insbesondere von Actinomyceten, gewonnen.
Es wurde nun gefunden, daß man zu besonders reinen Vitamin B i2-Präparaten gelangt, wenn man nicht von den Kulturfiltraten ausgeht, sondern von denZellen derMikroorganismen selbst. Man'kommt zu besonders hohen Ausbeuten, wenn man solche Zellen verwendet, deren Wachstum abgebrochen wurde, bevor der Hauptteil des Vitamin Bit in die, Nährlösung übergegangen ist. Dieses Verfahren hat den Vorteil, daß man bei der Kultur der Mikroorganismen mit kürzeren Zeiten auskommt und infolgedessen in der gleichen Apparatur mehr Ansätze durchführen kann. Cberraschenderweise hat sich nämlich gezeigt, daß das Vitamin B 12 nicht sofort, nachdem es gebildet ist, in die Nährlösung übertritt, sondern daß es zunächst in den Zellen gespeichert bleibt. Zu einer Zeit, zu der in der Nährlösung noch kaum Vitamin B 12 gefunden wird, ist der Gehalt der Zellen an Vitamin B12 bereits hoch. Erst später geht das Vitamin, vermutlich infolge Alterungs-und Autolyseprozessen, in die Nährlösung über und kann dort aufgefunden werden. Wenn man die Zellen abtrennt, bevor der Hauptteil des Vitamins in die Nährlösung übergegangen ist, entfernt man dadurch mit der Nährlösung den größten Teil der Ballaststoffe, die andernfalls die Anreicherung des Vitamins B 12 erschweren.
Aus den Zellen läßt sich das Vitamin B i2 leicht gewinnen, indem man diese in an sich üblicher Weise extrahiert. Man kann so vorgehen, daß man die Zellen, gegebenenfalls nachdem man sie bei normalen Temperaturen mit Wasser gewaschen hat, einer Extraktion mit Wasser bei Temperaturen über 50' unterwirft. Man kann-das Vitamin B12 auch dadurch in Lösung bringen, daß man die Zellen mit organischen Lösungsmitteln behandelt und dann mit Wasser oder wasserhaltigen organischen Lösungsmitteln extrahiert.
Als Mikroorganismen sind z. B. Actinomyceten, wie Actinomyces griseus, Actinomyces antibioticus u. a., geeignet. Man kann aber auch z. B. Vitamin B 12-bildende Bakterien benutzen, die im Verdauungstrakt vorkommen und nach üblichen Methoden isolierbar sind.
Aus den so hergestellten Lösungen lä.Bt sich das Vitamin B 12 nach den für die Anreicherung des Antiperniciosafaktors aus Leber bekannten Methoden in gereinigter Form gewinnen. Hierfür kommen Adsorptionsverfahren in Betracht, wie z. B. Adsorption an 'Kohle und Elution mit wässerigen Alkoholen oder Fällungsverfahren, wie z. B. eine Ausfällung mit Neutralsalzen, insbesondere Ammoniumsulfat.
Die so gewonnenen Präparate lassen sich therapeutisch, insbesondere als Mittel gegen perniciöse Anämie, anwenden.
Beispiel 3001 sterile wässerige Nährlösung, enthaltend 90o g Rohrzucker, i 50o g Invertzucker, i 50o g Glycerin, i2oog (NH4)2HP04, i5oog NaCI, 6oog K,HP04, 300g Mg S04 - 7 H20, i2og CaC12 . 6H2 0, 6 g Fe S04 - 7H2 0, 3 g Zn S04 - 7 H$ O, 0,39 Co S04 - 7 H20, 200o g Eiweißhydrolysat, werden mit Sporen von Actinomyces griseus beimpft. Unter Wahrung der Sterilität bläst man in die gut gerührte Nährlösung pro Minute 3001 Luft ein. Nach 70 Stunden wird das gebildete Mycel abgeschleudert. Man erhält 6ooo g Mycel mit insgesamt 18o mg Vitamin B.12. Das feuchte Mycel wird unter Rühren in 6o 1 Wasser von 9o° eingetragen. Dabei sinkt die Temperatur auf 8o°. Man kühlt schnell auf Zimmertemperatur ab und schleudert die Zellbestandteile ab. Die Lösung wird unter vermindertem Druck auf 21 eingeengt und mit "4l g6o/oigem Alkohol versetzt. Der dabei auftretende Niederschlag wird durch Abschleudern beseitigt und mit 65 o/oigem Alkohol gewaschen. Die Lösung wird mit der Waschflüssigkeit vereinigt, durch Abdestillieren unter vermindertem Druck von Alkohol befreit und mit Wasser auf ein Volumen von 311 gebracht. Man rührt die trübe Lösung i Stunde lang mit i2og einer hochaktivierten Kohle, schleudert die Kohle ab, wäscht sie mit Wasser und eluiert sie zweimal mit je 61 65o/oigem Alkohol. Die vereinigten Eluate werden eingeengt auf 21. Die so gewonnene rötlichgelbe Lösung enthält nach den Ergebnissen des mikrobiologischen Testes 6o mg Vitamin B 12 in einem Reinheitsgrad, der für die klinische Anwendung vollkommen ausreicht. Das Vitamin B 12 kann, wenn das gewünscht wird, von weiteren Ballaststoffen befreit werden, indem man beispielsweise die Lösung mit Ammoniumsulfat sättigt und den dabei entstehenden Niederschlag, der fast das gesamte Vitamin enthält, abtrennt. Man kann die so erhaltenen Präparate auch nach den Methoden der chromatographischen Adsorptionsanalyse weiterreihigen. .

Claims

PATENTANSPRÜCHE: i. Verfahren zur Gewinnung von Vitamin B i2, dadurch gekennzeichnet, daß man in an sich bekannter Weise Mikroorganismen, z. B. Actinomyceten, auf Nährlösungen wachsen läßt, dann, vorzugsweise nachdem man das Wachstum der Mikroorganismen unterbrochen hat, ehe die Hauptmenge des Vitamins B 12 in die Nährlösung übergetreten ist, die Zellen abtrennt und dann aus den Zellen das Vitamin B 12 durch Extraktion gewinnt.
2. Verfahren gemäß Anspruch i, dadurch gekennzeichnet, daß man das Vitamin B,i-- aus den Zellen durch Extraktion mit Wasser oder wässerigen organischen Lösemitteln in Lösung bringt und gegebenenfalls aus diesen Lösungen das Vitamin B 12 nach den für die Anreicherung des Antiperniciosafaktors bekannten Verfahren anreichert.