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Gebiet der
Erfindung
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Diese
Erfindung betrifft die Verwendung von TPO-Rezeptorliganden als Agonisten
des TPO-Rezeptors.
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Hintergrund
der Erfindung
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Megakaryozyten
sind aus Knochenmark stammende Zellen, die verantwortlich für die Erzeugung
von Blutplättchen
im Kreislauf sind. Obwohl sie < 0,25
% der Knochenmarkzellen in den meisten Arten umfassen, besitzen
sie das mehr als 10-fache des Volumens typischer Markzellen. Siehe
Kuter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91:11104-11108 (1994).
Megakaryozyten erfahren einen als Endomitose bekannten Prozeß, wodurch
sie ihre Kerne vervielfältigen,
aber keine Zellteilung erfahren und dadurch zu polyploiden Zellen
führen. Als
Reaktion auf eine verringerte Blutplättchenzahl erhöht sich
die Endomitoserate, höher
ploide Megakaryozyten werden gebildet, und die Anzahl von Megakaryozyten
kann bis zum 3-fachen zunehmen. Siehe Harker, J. Clin. Invest.,
47:458-465 (1968). Im Gegensatz nimmt die Endomitoserate als Reaktion
auf eine erhöhte Blutplättchenzahl
ab, niedriger ploide Megakaryozyten werden gebildet, und die Anzahl
von Megakaryozyten kann um 50 % abnehmen.
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Der
genaue physiologische Rückkopplungsmechanismus,
durch den die Masse der Blutplättchen
im Kreislauf die Endomitoserate und die Anzahl von Knochenmark-Megakaryozyten
reguliert, ist unbekannt. Es wird jetzt angenommen, daß der thrombopoetische
Kreislauffaktor, der an der Vermittlung dieses Rückkopplungskreises beteiligt
ist, Thrombopoietin (TPO) ist. Insbesondere wurde gezeigt, daß TPO der
humorale Hauptregulator in Situationen ist, die Thrombozytopenie
involvieren. Siehe z.B. Metcalf, Nature, 369:519-520 (1994). Es
wurde in mehreren Studien gezeigt, daß TPO die Blutplättchenzahlen
erhöht,
die Blutplättchengröße erhöht und die
Isotopenaufnahme in die Blutplättchen
von Empfängertieren
erhöht.
Spezifisch wird angenommen, daß TPO
die Megakaryozytopoese auf mehrere weisen beeinflußt: (1)
Es erzeugt Zunahmen der Megakaryozytengröße und -zahl; (2) es erzeugt eine
Zunahme des DNA-Gehalts in Form von Polyploidie in Megakaryozyten;
(3) es erhöht
die Megakaryozyten-Endomitose; (4) es erzeugt eine erhöhte Reifung
von Megakaryozyten; und (5) es erzeugt eine Zunahme des Prozentanteils
von Vorläuferzellen
in Form von kleinen Acetylcholinesterase-positiven Zellen im Knochenmark.
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Weil
Blutplättchen
(Thrombozyten) notwendig für
die Blutgerinnung sind und ein Patient, wenn ihre Zahlen sehr niedrig
sind, ein Risiko für
Tod aufgrund katastrophaler Blutung aufweist, besitzt TPO eine potentielle
nützliche
Anwendung sowohl in der Diagnose als auch in der Behandlung verschiedener
hämatologischer Störungen,
zum Beispiel von Krankheiten, die primär auf Blutplättchendefekten
beruhen. Fortgesetzte klinische Versuche mit TPO haben gezeigt,
daß TPO
sicher an Patienten verabreicht werden kann. Zusätzlich haben kürzliche
Untersuchungen eine Basis für
die Projektion der Effizienz der TPO-Therapie in der Behandlung von
Thrombozytopenie und insbesondere von Thrombozytopenie bereitgestellt,
die aus Chemotherapie, Bestrahlungstherapie oder Knochenmarktransplantation
als Behandlung für
Krebs oder Lymphom resultiert. Siehe z.B. McDonald, Am. J. Ped.
Hematology/Oncology, 14:8-21 (1992).
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Das
Gen, das TPO codiert, wurde kloniert und charakterisiert. Siehe
Kuter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91:11104-11108 (1994);
Barley et al., Cell, 77:1117-1124 (1994); Kaushansky et al., Nature,
369:568-571 (1994); Wendling et al., Nature, 369:571-574 (1994)
und Sauvage et al., Nature, 369:533-538 (1994). Thrombopoietin ist
ein Glycoprotein mit zwei besonderen Regionen, die durch einen potentiellen
Arg-Arg-Spaltort getrennt sind. Die Amino-terminale Region ist hoch
konserviert im Menschen und in der Maus und besitzt eine gewisse
Homologie mit Erythropoietin und Interferon-alpha und Interferon-beta.
Die Carboxy-terminale Region zeigt weite Art-Unterschiede.
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Die
DNA-Sequenzen und codierten Peptidsequenzen für den humanen TPO-Rezeptor (TPO-R;
auch als c-mpl bekannt) wurden beschrieben. Siehe Vigon et al.,
Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:5640-5644 (1992). TPO-R ist ein Mitglied
der Hämatopoietin-Wachstumsfaktorrezeptorfamilie,
einer Familie, die durch einen gemeinsamen strukturellen Aufbau
der extrazellulären
Domäne
gekennzeichnet ist, einschließlich
konservierter C-Reste in N-terminalen Teil und eines WSXWS-Motivs
in der Nähe
der Transmembranregion. Siehe Bazan, Proc. Natl. Acad. Sci. USA,
87:6934-6938 (1990). Der Nachweis, daß dieser Rezeptor eine funktionelle
Rolle in der Hämatopoese
spielt, schließt
die Beobachtungen ein, daß seine
Expression auf Milz, Knochenmark oder fötale Leber in Mäusen (siehe
Souyri et al., Cell, 63:1137-1147 (1990)) und auf Megakaryozyten,
Blutplättchen und
CD34+-Zellen in Menschen beschränkt ist
(siehe Methia et al., Blood, 82:1395-1401 (1993)). Ein weiterer Nachweis
für TPO-R
als Schlüsselregulator
der Megakaryopoese ist die Tatsache, daß der Kontakt von CD34+-Zellen mit synthetischen Oligonukleotiden
antisense zu TPO-R-RNA signifikant das Auftreten von Megakaryozytenkolonien
ohne Beeinflussung der Erythroid- oder Myeloid-Koloniebildung hemmt.
Einige Forscher postulieren, daß der
Rezeptor als Homodimer funktioniert, ähnlich der Situation mit den
Rezeptoren für
G-CSF und Erythropoietin.
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Die
langsame Erholung der Blutplättchenspiegel
in Patienten, die an Thrombozytopenie leiden, ist ein ernsthaftes
Problem und hat die Suche nach einem Blutwachstumsfaktoragonisten
dringend gemacht, der die Blutplättchenregeneration
beschleunigen kann. Es wäre
wünschenswert,
Verbindungen bereitzustellen, die die Behandlung von Thrombozytopenie
durch Wirkung als TPO-Mimetikum erlauben.
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Die
internationale Anmeldung PCT/GB92/02334 (internationaler Anmeldetag
16. Dezember 1992; WO 93/12096, veröffentlicht am 24. Juni 1993,
nachfolgend "Bridger") offenbart verbundene
cyclische Polyamine der Formel (I): Z-R-A-R'-Y (I)worin Z
und Y unabhängig
cyclische Polyamineinheiten mit 9 bis 32 Ringgliedern und 3 bis
8 Amin-Stickstoffatomen im Ring sind, die durch 2 oder mehr Kohlenstoffatome
voneinander getrennt sind; A eine aromatische oder heteroaromatische
Einheit ist; und R und R' jeweils
eine substituierte oder unsubstituierte Alkylenkette oder heteroatomhaltige
Kette sind, die die cyclischen Polyamine und die Einheit A trennt;
sowie Säureadditionssalze
oder Metallkomplexe davon.
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Bridger
offenbart weder noch beansprucht er die Verbindungen der Formel
(I) als TPO-Mimetika oder zur Behandlung von Thrombozytopenie.
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Wie
hier offenbart wird, wurde unerwartet festgestellt, daß bestimmte
kleine organische Moleküle,
bevorzugt die verbundenen cyclischen Polyamine von Bridger, wirksam
als Agonist für
den TPO-Rezeptor sind, d.h. sie sind wirksame TPO-Mimetika.
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Zusammenfassung der Erfindung
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Die
Erfindung stellt die Verwendung einer Verbindung der Formel (I)
in der Herstellung eines Medikaments zur Verwendung in der Behandlung
von Thrombozytopenie bereit.
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Die
Erfindung stellt ebenfalls die Verwendung einer Verbindung der Formel
(I) in der Herstellung eines Medikaments zur Verwendung in der Steigerung
der Blutplättchenproduktion
in einem Säugetier,
das dies benötigt,
und zur Verabreichung einer therapeutisch wirksamen Menge der Verbindung
der Formel (I) an ein solches Säugetier
bereit.
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Die
Erfindung kann gegebenenfalls in einem oder für ein Verfahren zur Behandlung
von Thrombozytopenie verwendet werden, wobei dies das Verabreichen
einer wirksamen Menge einer TPO-mimetischen Verbindung der Formel
(I) an einen Patienten umfaßt,
der dies benötigt.
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Die
vorliegende Erfindung betrifft auch den Befund, daß die Verbindungen
der Formel (I) wirksam als Agonist des TPO-Rezeptors sind.
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Die
vorliegend erfundenen TPO-mimetischen Verbindungen können mit
weiteren aktiven Bestandteilen co-verabreicht werden.
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Diese
Erfindung betrifft auch den Befund, daß bestimmte Nicht-Peptidverbindungen
wirksam als TPO-Mimetika sind.
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Ausführliche
Beschreibung der Erfindung
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Die
Herstellung der Verbindungen der Formel (I) und von Säureadditionssalzen
und Metallkomplexen davon und Formulierungen davon wird in der internationalen
Anmeldung PCT/GB92/02334 offenbart (internationaler Anmeldetag 16.
Dezember 1992; WO 93/12096, veröffentlicht
am 24. Juni 1993, Bridger). In Bridger werden Metallkomplexe der
beanspruchten verbundenen cyclischen Polyamidverbindungen als alternative Verfahren
zur Verabreichung offenbart und nicht als Teil eines Aktivierungsmechanismus
als antivirale Verbindungen offenbart.
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Mit
dem Begriff "bifunktioneller
Nicht-Peptidligand",
wie er hier verwendet wird, ist ein Ligand gemeint, der zwei positiv
geladene Regionen enthält,
die über
einen Linker mit 6 bis 16 Atomen verbunden sind, und der den TPO-Rezeptor
durch Binden an zwei nicht-benachbarte Orte aktivieren kann.
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Mit
dem Begriff "behandeln" und Abwandlungen
davon, wie sie hier verwendet werden, ist die prophylaktische oder
therapeutische Therapie gemeint.
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Die
Behandlung von Thrombozytopenie wie hier beschrieben wird durch
Steigerung der Produktion von Blutplättchen erreicht.
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Mit
dem Begriff "Co-Verabreichen" und Abwandlungen
davon, wie sie hier verwendet werden, ist entweder die gleichzeitige
Verabreichung oder jede Art und weise der getrennten aufeinanderfolgenden
Verabreichung einer TPO-mimetischen
Verbindung wie hier beschrieben und eines weiteren aktiven Bestandteils
oder weiterer aktiver Bestandteile gemeint, die zur Behandlung von
Thrombozytopenie bekannt sind, einschließlich Chemotherapie-induzierter
Thrombozytopenie und Knochenmarktransplantation und anderer Bedingungen mit
verringerter Blutplättchenproduktion.
Falls die Verabreichung nicht gleichzeitig ist, werden die Verbindungen
bevorzugt in zeitnaher Weise zueinander verabreicht. Außerdem ist
es unerheblich, ob die Verbindungen in der gleichen Arzneiform verabreicht
werden sollen, z.B. kann eine Verbindung topisch verabreicht werden und
eine andere Verbindung kann oral verabreicht werden.
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Weil
die pharmazeutisch aktiven Verbindungen der vorliegenden Erfindung
aktiv als TPO-Mimetika sind, weisen sie einen therapeutischen Nutzen
in der Behandlung von Thrombozytopenie und anderen Zuständen mit
verringerter Blutplättchenproduktion
auf.
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Bei
der Bestimmung der Wirksamkeit als TPO-Mimetika wurden die folgenden
Assays eingesetzt:
Luciferase-Assay
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Erfindungsgemäße Verbindungen
wurden auf Wirksamkeit als Mimetika des TPO-Rezeptors in einem Luciferase-Assay
untersucht, wie beschrieben in Lamb et al., Nucleic Acids Research,
23:3283-3289 (1995) und Seidel et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA,
92:3041-3045 (1995), indem die darin verwendeten HepG2-Zeilen gegen
eine TPO-reaktive BaF3-Zellinie ersetzt wurden (Vigon et al., Proc.
Natl. Acad. Sci. USA, 89:5640-5644 (1992)). Die murinen BaF3-Zellen
exprimieren TPO-Rezeptoren und ähneln
sehr dem Muster der in primären
murinen und humanen Knochenmarkzellen als Reaktion auf TPO beobachteten
STAT-Aktivierung (STAT = Signalwandler und -aktivatoren der Transkription).
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Einige
der am meisten bevorzugten Verbindungen dieser Erfindung waren auch
aktiv in einem in-vitro-Vermehrungsassay unter Verwendung der murinen
32D-mpl-Zellinie (T.D. Bartley et al., Cell, 177:1117-1124 (1994)).
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32D-mpl-Zellen
exprimieren TPO-R, und ihr Überleben
ist abhängig
von der Gegenwart von TPO. In ähnlicher
Weise waren einige der am meisten bevorzugten Verbindungen dieser
Erfindung auch positiv in der Stimulation der Reifung von Megakaryozyten
aus humanen Knochenmarkzellen. In diesem Assay wurden gereinigte
humane CD34+-Vorläuferzellen in Flüssigkultur
mit Testverbindungen für
10 Tage inkubiert, und die Anzahl von Zellen, die das Transmembran-Glycoprotein
CD41 (gpIIb), einen megakaryozytischen Marker, exprimieren, wurde
dann durch Durchflußzytometrie
gemessen (siehe S.E. Cwirla et al., Science, 276:1696-1699 (1997)).
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Die
pharmazeutisch aktiven Verbindungen im Umfang dieser Erfindung sind
nützlich
als TPO-Mimetika in Säugetieren,
einschließlich
Menschen, die dies benötigen.
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Verbindungen
der Beispiele 1 und 2 zeigten eine Aktivierung von über 30 %
der Kontrolle (die Kontrolle ist die maximale Reaktion auf TPO)
zwischen dem Konzentrationsbereich von 10 und 100 μM im Luciferase-Assay.
Die Verbindung aus Beispiel 1 förderte
die Vermehrung von 32D-mpl-Zellen bei einer Konzentration von 1-30 μM. Die Verbindung
aus Beispiel 1 zeigte Aktivität
im megakaryozytischen CD41-Assay bei Konzentrationen von 1-30 μM.
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Die
vorliegende Erfindung kann deshalb in einem oder für ein Verfahren
zur Behandlung von Thrombozytopenie und anderen Zuständen mit
verringerter Blutplättchenproduktion
verwendet werden, welches das Verabreichen einer Verbindung der
Formel (I) in einer Menge umfaßt,
die wirksam zur Steigerung der Blutplättchenproduktion ist: Z-R-A-R'-Y (I)worin Z
und Y unabhängig
cyclische Polyamineinheiten mit 9 bis 32 Ringgliedern und 3 bis
8 Amin-Stickstoffatomen im Ring sind, die durch 2 oder mehr Kohlenstoffatome
voneinander getrennt sind; A eine aromatische oder heteroaromatische
Einheit ist; und R und R' jeweils
eine substituierte oder unsubstituierte Alkylenkette oder heteroatomhaltige
Kette sind, die die cyclischen Polyamine und die Einheit A trennt,
und Säureadditionssalze
oder Metallkomplexe davon. Die Verbindungen der Formel (I) können in
einem oder für
ein Verfahren zur Behandlung der oben angegebenen Krankheitszustände wegen
ihrer aufgezeigten Fähigkeit,
als TPO-Mimetika zu wirken, verwendet werden. Der Wirkstoff kann
an einen bedürftigen
Patienten durch jeden herkömmlichen
Verabreichungsweg verabreicht werden, einschließlich intravenös, intramuskulär, oral,
subkutan, intradermal und parenteral.
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Die
pharmazeutisch aktiven Verbindungen der vorliegenden Erfindung werden
in zweckmäßige Arzneiformen
wie Kapseln, Tabletten oder injizierbare Zubereitungen aufgenommen.
Feste oder flüssige
pharmazeutische Träger
werden eingesetzt. Feste Träger
schließen
Stärke,
Lactose, Calciumsulfatdihydrat, Kaolin, Saccharose, Talkum, Gelatine,
Agar, Pectin, Gummi arabicum, Magnesiumstearat und Stearinsäure ein.
Flüssige
Träger
schließen
Sirup, Erdnußöl, Olivenöl, Kochsalzlösung und
Wasser ein. In ähnlicher
Weise kann der Träger
oder das Verdünnungsmittel
jedes Material zur verlängerten
Freisetzung einschließen,
wie z.B. Glycerylmonostearat oder Glyceryldistearat, allein oder
mit einem Wachs. Die Menge des festen Trä gers variiert stark, aber wird
bevorzugt circa 25 mg bis circa 1 g pro Dosierungseinheit sein.
Wenn ein flüssiger
Träger
verwendet wird, wird die Zubereitung in Form eines Sirups, Elixirs,
einer Emulsion, einer Weichgelatinekapsel, einer sterilen injizierbaren
Flüssigkeit,
wie z.B. als Ampulle, oder einer wäßrigen oder nicht-wäßrigen flüssigen Suspension
sein.
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Die
pharmazeutischen Zubereitungen werden unter Befolgen herkömmlicher
Techniken eines pharmazeutischen Chemikers hergestellt, die das
Vermischen, Granulieren und, wenn notwendig, Verpressen für Tablettenformen
oder Vermischen, Abfüllen
und Auflösen
der Bestandteile nach Bedarf beinhalten, um die gewünschten
oralen oder parenteralen Produkte zu ergeben.
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Die
Dosen der vorliegend erfundenen pharmazeutisch aktiven Verbindungen
in einer pharmazeutischen Dosierungseinheit wie oben beschrieben
werden eine wirksame, nicht-toxische Menge sein, die bevorzugt aus
dem Bereich von 0,001-100 mg/kg an aktiver Verbindung, bevorzugt
0,001-50 mg/kg, ausgewählt wird.
Bei der Behandlung eines menschlichen Patienten, der eines TPO-Mimetikums
bedarf, wird die ausgewählte
Dosis bevorzugt 1-6 mal täglich
oral oder parenteral verabreicht. Bevorzugte Formen der parenteralen Verabreichung
schließen
die topische, rektale, transdermale, durch Injektion und kontinuierliche
durch Infusion ein. Orale Dosierungseinheiten für die humane Verabreichung
enthalten bevorzugt 0,05-3.500 mg aktive Verbindung. Die orale Verabreichung,
die niedrigere Dosierungen verwendet, ist bevorzugt. Die parenterale
Verabreichung kann jedoch auch bei höheren Dosierungen verwendet
werden, wenn sie sicher und zweckmäßig für den Patienten ist.
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Optimale
Dosierungen zur Verabreichung können
leicht durch die Fachleute festgestellt werden und werden mit dem
besonderen verwendeten TPO-Mimetikum,
der Konzentration der Zubereitung, dem Verabreichungsmodus und dem
Fortschreiten des Krankheitszustands variieren. Zusätzliche
Faktoren, die vom besonderen behandelten Patienten abhängen, werden
zu der Notwendigkeit führen,
die Dosierungen anzupassen, einschließlich Patientenalter, -gewicht,
-ernährung
und Zeitpunkt der Verabreichung.
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Diese
Erfindung kann in einem oder für
ein Verfahren zur Induzierung von TPO-mimetischer Aktivität in Säugetieren,
einschließlich
Menschen, verwendet werden, umfassend das Verabreichen einer wirksamen TPO-mimetischen Menge
einer pharmazeutisch aktiven Verbindung der vorliegenden Erfindung
an einen Patienten, der solcher Aktivität bedarf.
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Die
Erfindung stellt auch die Verwendung einer Verbindung der Formel
(I) in der Herstellung eines Medikaments zur Verwendung als TPO-Mimetikum
bereit.
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Die
Erfindung stellt auch die Verwendung einer Verbindung der Formel
(I) in der Herstellung eines Medikaments zur Verwendung in der Steigerung
der Blutplättchenproduktion
bereit.
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Die
Erfindung stellt auch die Verwendung einer Verbindung der Formel
(I) in der Herstellung eines Medikaments zur Verwendung in der Behandlung
von Thrombozytopenie bereit.
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Eine
pharmazeutische Zusammensetzung zur Verwendung als TPO-Mimetikum,
die eine Verbindung der Formel (2) und einen pharmazeutisch akzeptablen
Träger
umfasst, kann in der Erfindung verwendet werden.
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Eine
pharmazeutische Zusammensetzung zur Verwendung in der Behandlung
von Thrombozytopenie, die eine Verbindung der Formel (I) und einen
pharmazeutisch akzeptablen Träger
umfasst, kann in der Erfindung verwendet werden.
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Eine
pharmazeutische Zusammensetzung zur Verwendung in der Steigerung
der Blutplättchenproduktion,
die eine Verbindung der Formel (I) und einen pharmazeutisch akzeptablen
Träger
umfasst, kann in der Erfindung verwendet werden.
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Keine
inakzeptablen toxikologischen Wirkungen werden erwartet, wenn Verbindungen
der Erfindung in Übereinstimmung
mit der vorliegenden Erfindung verabreicht werden.
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Zusätzlich sind
die pharmazeutisch aktiven Verbindungen der vorliegenden Erfindung
nützlich
zur Co-Verabreichung mit weiteren aktiven Bestandteilen, wie zum
Beispiel anderen Verbindungen, die zur Behandlung von Thrombozytopenie
bekannt sind, einschließlich
Chemotherapie-induzierter Thrombozytopenie und Knochenmarktransplantation
und anderer Zustände
mit verringerter Blutplättchenproduktion,
oder mit Verbindungen, deren Nutzen bekannt ist, wenn sie in Kombination
mit einem TPO-Mimetikum verwendet werden.
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Ohne
weitere Ausführung
wird angenommen, daß ein
Fachmann unter Verwendung der vorangehenden Beschreibung die vorliegende
Erfindung in ihrem weitestgehenden Ausmaß nutzen kann. Die folgenden Beispiele
sollen daher bloß als
Illustration und nicht als Beschränkung der Erfindung in irgendeiner
weise aufgefaßt
werden.
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Experimentelle Einzelheiten
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Beispiel 1
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Herstellung der Verbindung
1: 1,1'-[1,4-Phenylenbis(methylen)]bis[1,4,8,11-tetraazacyclotetradecan]-octahydrochloriddihydrat
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- a) 4,8,11-Tris(p-tolylsulfonyl)-1,4,8,11-tetraazacyclotetradecan
Eine
Lösung
aus Tosylchlorid (8,1 g, 43 mmol) in Chloroform (300 ml) wurde über einen
Zeitraum von 2 h zu einer Lösung
aus 1,4,8,11-Tetraazacyclotetradecan (4,28 g, 21 mmol) in Chloroform
(150 ml) und Triethylamin (18 ml), die auf 45°C gehalten wurden, getropft.
Nach Stehenlassen der Mischung bei Raumtemperatur über Nacht
wurde Wasser (40 ml) hinzugetropft. Die organische Schicht wurde
abgetrennt, getrocknet (Na2SO4)
und zur Trockene eingedampft. Der feste Rückstand wurde in heißem Methanol
(40 ml) gelöst und
auf Raumtemperatur abgekühlt,
um ein weißes Öl zu liefern.
Die Methanollösung
wurde abdekantiert und das Öl
mit weiterem Methanol verrieben, um weiße Kristalle von 7-H2O der Titelverbindung (5,5 g, 33 %) zu ergeben.
Eine zweite Ausbeute des Tritosylderivats wurde durch Eindampfen
der Mutterlauge der ersten Ausbeute zur Trockene, Auflösen des
resultierenden klebrigen Öls
in Chloroform (150 ml) und Triethylamin (10 ml) und Zugeben von
Tosylchlorid (2 g, 10 mmol), das in Chloroform (10 ml) gelöst war,
zur Lösung
bei 45°C
in 40 min erhalten. Standardaufarbeitung der Lösung ergab weiße Kristalle
von 7-H2O der Titelverbindung (2,1 g, 13
%). MS (ESP) m/z 663 [M + H]+.
- b) 1,1'-(1,4-Phenylenbis(methylen)]bis[4,8,11-tris(p-tolylsulfonyl)-1,4,8,11-tetraazacyclotetradecan]
Zu
einer Lösung
aus der Verbindung aus Beispiel 1(a) (5,5 g, 8,3 mmol) in Acetonitril
(80 ml) wurden α,α'-Dibrom-p-xylol (1,08
g, 4,1 mmol) und Kaliumcarbonat (3,4 g, 25 mmol) gegeben. Die Reaktion
wurde für
18 h unter schnellem Rühren
refluxiert. Die Reaktionsmischung wurde auf Raumtemperatur abkühlen gelassen
und aufkonzentriert, und der Rückstand
wurde zwischen Methylenchlorid und Wasser aufgetrennt. Die wäßrige Phase
wurde abgetrennt und mit zwei weiteren Teilen Methylenchlorid extrahiert.
Die vereinigten organischen Phasen wurden getrocknet (MgSO4) und eingedampft. Der Rückstand wurde mit Methanol
gewaschen, um die Titelverbindung als gelben Feststoff (5,62 g,
89%) zu ergeben. MS (ESP) m/z 714 [M + 2H]2+.
- c) 1,1'-[1,4-Phenylenbis(methylen)]bis[1,4,8,11-tetraazacyclotetradecan]-octahydrobromiddihydrat
Eine
schnell gerührte
Lösung
der Verbindung aus Beispiel 1(b) (1,94 g, 1,36 mmol) in 9 ml Essigsäure und 6
ml Bromwasserstoffsäure
(Aldrich, 48 %ig, wäßrig) wurde
für 48
h auf 100°C
erwärmt,
wobei ein kristalliner Feststoff aus der brauen Lösung ausfiel.
Nach Abkühlen
wurde der Feststoff durch Filtration aufgefangen und mit Essigsäure und
Diethylether gewaschen und im Vakuum über Nacht getrocknet, um das
Hydrobromidsalz der Titelver bindung als weißes Pulver (0,77 g, 48 %) zu
ergeben. MS (ESP) m/z 503 [M + H]+.
- d) 1,1'-[1,4-Phenylenbis(methylen)]bis[1,4,8,11-tetraazacyclotetradecan]-octahydrochloriddihydrat
Die
wäßrige Lösung (5
ml) des Hydrobromidsalzes der Verbindung aus Beispiel 1(c) (0,47
g) wurde mit 1 N Natriumhydroxid auf pH 7 neutralisiert. Die Lösung wurde
mit 2 ml Methylenchlorid extrahiert. Die wäßrige Schicht wurde auf pH > 14 neutralisiert und
mit Methylenchlorid extrahiert. Die organische Schicht wurde getrocknet
(Na2SO4) und aufkonzentriert.
Der Rückstand
wurde in 1 ml Ethanol, das in einem Eisbad gekühlt war, gelöst. Circa
1 ml konzentrierte Salzsäure
(Aldrich, 38 %ig, wäßrig) wurde
hinzugetropft, um einen weißen
Niederschlag zu ergeben. Der Niederschlag wurde abfiltriert, mit
Ethanol und Diethylether gewaschen und im Vakuum getrocknet, um
die Titelverbindung (0,124 g, 38 %) zu ergeben. MS (ESP) m/z 503
[M + H]+.
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Beispiel 2
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Herstellung der Verbindung
2: 1,1'-[1,3-Phenylenbis(methylen)]bis[1,4,8,11-tetraazacyclotetradecan]-octahydrobromiddihydrat
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- a) 1,1'-[1,3-Phenylenbis(methylen)]bis[4,8,11-tris(p-tolylsulfonyl)-1,4,8,11-tetraazacyclotetradecan]
Zu
einer Lösung
aus der Verbindung aus Beispiel 1(a) (0,98 g, 1,48 mmol) in Acetonitril
(40 ml) wurden α,α'-Dibrom-m-xylol (0,20
g, 0,74 mmol) und Kaliumcarbonat (0,61 g, 4,4 mmol) gegeben. Die
Reaktion wurde für
18 h unter schnellem Rühren
refluxiert. Die Reaktionsmischung wurde auf Raumtemperatur abkühlen gelassen
und aufkonzentriert, und der Rückstand
wurde zwischen Methylenchlorid und Wasser aufgetrennt. Die wäßrige Phase
wurde abgetrennt und mit zwei weiteren Teilen Methylenchlorid extrahiert.
Die vereinigten organischen Phasen wurden getrocknet (MgSO4) und eingedampft. Der Rückstand wurde mit Methanol
gewaschen, um die Titelverbindung als gelben Feststoff (0,86 g,
81 %) zu ergeben. MS (ESP) m/z 714 [M + 2H]2+.
- b) 1,1'-[1,3-Phenylenbis(methylen)]bis[1,4,8,11-tetraazacyclotetradecan]-octahydrobromiddihydrat
Eine
schnell gerührte
Lösung
aus der Verbindung aus Beispiel 2(a) (0,49 g, 0,34 mmol) in 6 ml
Essigsäure und
3 ml Bromwasserstoffsäure
(Aldrich, 48 %ig, wäßrig) wurde
für 48
h auf 100°C
erwärmt,
wobei ein kristalliner Feststoff aus der braunen Lösung ausfiel.
Nach Abkühlen
wurde der Feststoff durch Filtration aufgefangen und mit Essigsäure und
Diethyl ether gewaschen und im Vakuum über Nacht getrocknet, um die Titelverbindung
als weißes
Pulver (0,25 g, 59 %) zu ergeben. MS (ESP) m/z 503 [M + H]+.
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Beispiel 3: Kapselzusammensetzung
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Eine
orale Arzneiform zur Verabreichung eines vorliegend erfundenen Agonisten
des TPO-Rezeptors wird durch Füllen
einer zweiteiligen Standard-Hartgelatinekapsel
mit den Bestandteilen in den in der nachfolgenden Tabelle I gezeigten
Anteilen hergestellt.
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Beispiel 4: Injizierbare
parenterale Zusammensetzung
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Eine
injizierbare Form zur Verabreichung eines vorliegend erfundenen
Agonisten des TPO-Rezeptors wird durch Rühren von 1,5 Gew.% 1,1'-[1,4-Phenylenbis(methylen)]bis[1,4,8,11-tetraazacyclotetradecan]-octahydrochloriddihydrat
(Verbindung 1) in 10 Vol.% Propylenglycol in Wasser hergestellt.
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Beispiel 5: Tablettenzusammensetzung
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Saccharose,
Calciumsulfatdihydrat und ein vorliegend erfundener Agonist des
TPO-Rezeptors, wie in der nachfolgenden Tabelle II gezeigt, werden
vermischt und in den gezeigten Anteilen mit einer 10 %igen Gelatinelösung granuliert.
Die feuchten Granalien werden gesiebt, getrocknet, mit der Stärke, dem
Talkum und der Stearinsäure
vermischt, gesiebt und zu einer Tablette verpreßt.
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