DE69911058T2

DE69911058T2 - Kombinationen einem ibat inhibitor und einem mtp inhibitor für kardiovaskuläre indikationen

Info

Publication number: DE69911058T2
Application number: DE69911058T
Authority: DE
Inventors: T. Bradley KELLER; B. David REITZ; R. Joseph SCHUH; A. James SIKORSKI; J. Samuel TREMONT; W. Rodney LAPPE
Original assignee: GD Searle LLC
Current assignee: GD Searle LLC
Priority date: 1998-12-23
Filing date: 1999-12-17
Publication date: 2004-06-03
Anticipated expiration: 2019-12-18
Also published as: NO20013157L; ES2207330T3; NZ512532A; EP1140187A1; EP1140187B1; CN1342091A; DK1140187T3; KR20020002367A; ZA200105060B; ZA200105061B; EA200100704A1; EP1354604A1; AR037482A1; HUP0104655A2; MXPA01006468A; CZ20012344A3; ATE248606T1; NO20013157D0; ZA200105059B; PT1140187E

Description

HINTERGRUND DER ERFINDUNG
Gebiet der Erfindung
Die vorliegende Erfindung betrifft Präparate für die Behandlung von kardiovaskulären Erkrankungen, und sie betrifft speziell Kombinationen von Verbindungen, Zusammensetzungen und ihre Verwendung in der Medizin, insbesondere bei der Prophylaxe und Behandlung von hyperlipidämischen Zuständen, wie sie mit Atherosklerose, Hypercholesterinämie und anderen Faktoren bei der Erkrankung der Koronararterien in Säugetieren, mit Einschluss von Bluthochdruck, einhergehen. Insbesondere betrifft die Erfindung Hemmer für den ilealen Gallensäuretransport (IBAT), sowie Hemmer des mikrosomalen Triglycerid-Transferprotein (MTP).
Beschreibung des einschlägigen Stands der Technik
Es wird allgemein anerkannt, dass hyperlipidämische Zustände, die mit erhöhten Konzentrationen von Gesamt-Cholesterin und Lipoprotein niedriger Dichte (LDL) einhergehen, die hauptsächlichen Risikofaktoren für koronare Herzerkrankungen, und insbesondere für Atherosklerose, sind. Zahlreiche Untersuchungen haben gezeigt, dass eine niedrige Plasmakonzentration von Cholesterin-Lipoprotein hoher Dichte (HDL) ein starker Risikofaktor für die Entwicklung von Atherosklerose ist (Barter und Rye, Atherosclerosis, 121, 1–12 (1996)). Das HDL ist eine der Hauptklassen von Lipoproteinen, die beim Transport von Lipiden durch das Blut wirken. Die hauptsächlichen Lipide, bei denen gefunden wurde, dass sie mit HDL einhergehen, schließen Cholesterin, Cholesterylester, Triglyceride, Phospholipide und Fettsäuren ein. Die anderen Klassen von Lipoproteinen, die im Blut gefunden werden, sind Lipoprotein niedriger Dichte (LDL), Lipoprotein mit Zwischendichte (IDL) und Lipoprotein sehr niedriger Dichte (VLDL). Da hohe Gehalte von HDL-Cholesterin das Risiko von Atherosklerose erhöhen, wären Methoden zur Erhöhung des Plasma-HDL-Cholesterins für die Behandlung von Atherosklerose und anderen Erkrankungen, die mit der Akkumulierung von Lipiden in den Blutgefäßen einhergehen, therapeutisch günstig. Diese Erkrankungen schließen, jedoch ohne Begrenzung darauf, koronare Herzerkrankungen, periphere Gefäßerkrankungen und Schlaganfall ein.
Eine Atherosklerose liegt den meisten Koronararterienerkrankungen (CAD), einer Hauptursache der Sterblichkeit und der Sterblichkeit in der modernen Gesellschaft, zugrunde. Cholesterin mit hohem LDL (oberhalb etwa 180 mg/dl) und Cholesterin mit niedrigem HDL (unterhalb 35 mg/dl) haben sich als wichtige Mitverursacher für die Entwicklung von Atherosklerose erwiesen. Andere Erkrankungen oder Risikofaktoren, wie periphere Gefäßerkrankungen, Schlaganfall und Hypercholesterinämie, werden durch ungünstige HDL/LDL-Verhältnisse negativ beeinflusst.
Es wurde gefunden, dass eine Störung mit der Rezirkulation von Gallensäuren vom Lumen des Intestinaltrakts die Gehalte an Serumcholesterin in einer kausalen Beziehung verringert. Epidemiologische Daten haben sich angesammelt, die darauf hinweisen, dass eine Verringerung zu einer Verbesserung des Erkrankungszustands von Atherosklerose führt. Stedronsky diskutiert in "Interaction of bile acids and cholesterol with nonsystemic agents having hypocholesterolemic properties", Biochimica et Biophysica Acta, 1210, 255–287 (1994), die Biochemie, die Physiologie und bekannte Wirkstoffe, die Gallensäuren und Cholesterin umgeben.
Es ist gezeigt worden, dass vorübergehende pathophysiologische Veränderungen mit einer Unterbrechung der enterohepatischen Zirkulation von Gallensäuren im Menschen mit einem angeborenen Fehlen von IBAT einhergehen, wie von Heubi, J. E., et al. beschrieben wird. Vergleiche auch "Primary Bile Acid Malabsorption: Defective in Vitro Ileal Active Bile Acid Transport", Gastroenterology, 83, 804–11 (1982).
Bei einem weiteren Ansatz für die Verringerung der Rezirkulation von Gallensäuren ist das Ileum-Gallensäuretransportsystem ein putatives pharmazeutisches Ziel für die Behandlung von Hypercholesterinämie auf der Basis einer Unterbrechung der enterohepatischen Zirkulation mit speziellen Transporthemmern (Kramer, et al., "Intestinal Bile Acid Absorption", The Journal of Biological Chemistry, 268 (24), 18035–46 (1993).
In mehreren Patentanmeldungen der Hoechst Aktiengesellschaft werden Polymere von verschiedenen natürlich vorkommenden Bestandteilen des enterohepatischen Zirkulationssystems und ihre Derivate, mit Einschluss von Gallensäure, beschrieben, die den physiologischen Gallensäuretransport hemmen, mit dem Ziel, den LDL-Cholesteringehalt genügend zu verringern um als Arzneimittel wirksam zu sein, und zwar insbesondere für die Verwendung als hypocholesterinämische Mittel. Die jeweiligen Patentanmeldungen von Hoechst, die solche den Gallensäuretransport hemmenden Verbindungen beschreiben, werden nachstehend getrennt aufgeführt.

R1. Kanadische Patentanmeldung Nr. 2 025 294.
R2. Kanadische Patentanmeldung Nr. 2 078 588.
R3. Kanadische Patentanmeldung Nr. 2 085 782.
R4. Kanadische Patentanmeldung Nr. 2 085 830.
R5. EP-Anmeldung Nr. 0 379 161.
R6. EP-Anmeldung Nr. 0 549 967.
R7. EP-Anmeldung Nr. 0 559 064.
R8. EP-Anmeldung Nr. 0 563 731.

Ausgewählte Benzothiepine werden in der veröffentlichten PCT-Anmeldung WO 93/321146 für zahlreiche Verwendungszwecke, mit Einschluss des Fettsäuremetabolismus und für vaskuläre Koronarerkrankungen, beschrieben.
Andere ausgewählte Benzothiepine sind zur Verwendung als hypolipidämische und hypocholesterinämische Mittel, insbesondere für die Behandlung oder Prophylaxe von Athe rosklerose, bekannt geworden, wie in der Patentanmeldung Nr. EP 508425 beschrieben wird. Eine französische Patentanmeldung, FR 2661676, beschreibt weitere Benzothiepine zur Verwendung als hypolipämische und hypocholesterinämische Mittel. Weiterhin führt die Patentanmeldung WO 92/18462 weitere Benzothiepine zur Verwendung als hypolipämische und hypocholesterinämische Mittel auf. US-PS Nr. 5 994 391 (Lee et al.). Die einzelnen hypolipämischen und hypocholesterinämischen Benzothiepin-Mittel, die in diesen einzelnen Patentanmeldungen beschrieben worden sind, sind durch ein Amid begrenzt, das an das Kohlenstoffatom gebunden ist, das an den Phenylring des verschmolzenen Bicyclobenzothiepinrings angrenzt.
Weitere Benzothiepine, die für die Behandlung von Hypercholesterinämie und Hyperlipidämie geeignet sind, werden in der Patentanmeldung Nr. PCT/US95/10863 beschrieben. Weitere Benzothiepine, die für die Prophylaxe und Behandlung von Hypercholesterinämie und Hyperlipidämie geeignet sind, sowie pharmazeutische Präparate von solchen Benzothiepinen, werden in PCT/US97/04076 beschrieben. Noch weitere Benzothiepine und Präparate davon, die für die Prophylaxe und Behandlung von Hypercholesterinämie und Hyperlipidämie geeignet sind, werden in der US-Anmeldung Serien Nr. 08/816 065 beschrieben.
In der Patentanmeldung WO 93/16055, "Hypolipidemic Benzothiazepine Compounds" der Firma Wellcome Foundation Limited wird beschrieben, dass die in vitro erfolgende Hemmung des Gallensäuretransports in Korrelation mit der hypolipidämischen Aktivität steht. Diese Druckschrift beschreibt eine Anzahl von hypolipidämischen Benzothiazepinverbindungen. Weitere hypolipidämische Benzothiazepinverbindungen (insbesondere 2,3,4,5-Tetrahydrobenzo-1-thi-4-azepin-Verbindungen) werden in der Patentanmeldung WO 96/05188 beschrieben. Ein besonders gut geeignetes Benzothiazepin, das in der WO 96/05188 beschrieben wird, ist die Verbindung mit der Formel B-2. Weitere hypolipidämische Benzothiazepinverbindungen werden in der Patentanmeldung WO 96/16051 beschrieben.
(3R,SR)-3-Butyl-3-ethyl-2,3,4,5-tetrahydro-7,8-dimethoxy-5-phenyl-1-4-benzothiazepin-1,1-dioxid
Weitere Benzothiazepinverbindungen, die für die Kontrolle von Cholesterin einsetzbar sind, sind 2,3,4,5-Tetrahydrobenzo-1-thi-5-azepin-IBAT-Hemmverbindungen (bzw. Inhibitorverbindungen), beschrieben in der PCT-Patentanmeldung Nr. WO 99/35135. In dieser Beschreibung ist die Verbindung der Formel B-7 eingeschlossen.
Weitere IBAT-Hemmverbindungen schließen eine Klasse von Naphthalin-IBAT-Hemmverbindungen, beschrieben von T. Ichihashi et al. in J. Pharmacol. Exp. Ther., 284(1), 43–50 (1998), ein. In dieser Klasse ist das S-8921 (Methyl-1-(3,4-dimethoxyphenyl)-3-(3-ethylvaleryl)-4-hydroxy-6,7,8-trimethoxy-2-naphthoat) besonders gut einsetzbar. Die Struktur von S-8921 wird in der Formel B-20 gezeigt. Weitere Naphthalinverbindungen oder Lignin-Derivate, die für die Behandlung oder Prophylaxe von Hyperlipidämie oder von Atherosklerose einsetzbar sind, werden in der PCT-Patentanmeldung WO 94/24087 beschrieben.
Eine weitere Klasse von Lipid-senkenden Arzneimitteln sind Mittel gegen Fettleibigkeit. Ein Beispiel für Mittel gegen Fettleibigkeit ist Orlistat. Orlistat wird in der EP-PS 0 129 748 beschrieben.
Es ist gezeigt worden, dass die Hemmung des Cholesterylester-Transferproteins (CETP) wirksam die Plasma-HDL/LDL-Verhältnisse modifiziert, und es wird erwartet, dass der Fortschritt und/oder die Bildung von bestimmten kardiovaskulären Erkrankungen überprüft wird. CETP ist ein Plasmaprotein, das die Bewegung von Cholesterylestern und Triglyceriden zwischen den verschiedenen Lipoproteinen in dem Blut erleichtert (Tall, J. Lipid Res., 34, 1255–74 (1993)). Die Bewegung des Cholesterylesters von HDL zu LDL durch das CETP hat den Effekt, dass das HDL-Cholesterin erniedrigt wird. Daraus folgt daher, dass eine Hemmung von CETP zu einer Erhöhung des Plasma-HDL-Cholesterins und zu einer Erniedrigung des Plasma-LDL-Cholesterins führen sollte, wodurch ein therapeutisch günstiges Plasmalipidprofil erreicht wird. Beweisanzeichen für diesen Effekt werden in McCarthy, Medicinal Res. Revs., 13, 139-59 (1993), beschrieben. Weitere Beweisanzeichen für diesen Effekt werden in Sitori, Pharmac. Ther., 67, 443–47 (1995), beschrieben. Dieses Phänomen wurde zuerst von Swenson et al., (J. Biol. Chem., 264, 14318 (1989)) unter Verwendung eines monoklonalen Antikörpers, der speziell CETP hemmt, demonstriert. Bei Kaninchen bewirkte der Antikörper eine Erhöhung des Plasma-HDL-Cholesterins und eine Erniedrigung des LDL-Cholesterins. Son et al. (Biochim. Biophys. Acta, 795, 743–480 (1984)) beschreiben Proteine aus Humanplasma, die das CETP hemmen. Die US-PS 5 519 001 , erteilt an Kushwaha et al., beschreibt ein 36 Aminosäuren-Peptid, abgeleitet von Pavian-apo-C-1, das die CETP-Aktivität hemmt. Cho et al. (Biochim. Biophys. Acta 1391, 133–144 (1998)) beschreiben ein Peptid aus Froschplasma, das humanes CETP hemmt. Bonin et al. (J. Peptide Res., 51, 216–225 (1998)) beschreiben einen Decapeptidhemmer von CETP. Ein fungaler Depspeptidmetabolit wird als CETP-Hemmer von Hedge et al. in Bioorg. Med. Chem. Lett., 8, 1277–80 (1998), beschrieben.
Es gibt mehrere Berichte über nicht-peptidische Verbindungen, die als CETP-Hemmer (bzw. CETP-Inhibitoren) wirken. Barrett et al. (J. Am. Chem. Soc., 188, 7863–63 (1996)) beschreiben Cyclopropan-enthaltende CETP-Hemmer. Weitere Cyclopropan-enthaltende CETP-Hemmer werden von Kuo et al. (J. Am. Chem. Soc., 117, 10629–34 (1995)) beschrieben. Pietzonka et al. (Bioorg. Med. Chem. Lett., 6, 1951–54 (1996)) beschreiben Phosphonat-enthaltende Analoge von Cholesteryl-ester als CETP-Hemmer. Coval et al. (Bioorg. Med. Chem. Lett., 5, 605–610 (1995)) beschreiben Wiedendiol-A und -B und damit verwandte Sesquiterpenverbindungen als CETP-Hemmer. Lee et al. (J. Antibiotics, 49, 693–96 (1996)) beschreiben CETP-Hemmer, abgeleitet von einem Insektenpilz. Busch et al. (Lipids, 25, 216–220 (1990)) beschreiben Cholesterylacetylbromid als CETP-Hemmer. Morton und Zilversmit (J. Lipid Res., 35, 836–47 (1982)) beschreiben, dass p-Chlormercuriphenylsulfonat, p-Hydroxymercuribenzoat und Ethylmercurithiosalicylat das CETP hemmen. Connolly et al. (Biochem. Biophys. Res. Comm., 223, 42–47 (1996)) beschreiben weitere Cystein-Modifizierungsmittel als CETP-Hemmer. Xia et al. beschreiben 1,3,5-Triazine als CETP-Hemmer (Bioorg. Med. Chem. Lett., 6, 919–22 (1996)). Bisgaier et al. Lipids, 29, 811–8 (1994)) beschreiben 4-Phenyl-5-tridecyl-4H-1,2,4-triazolthiol als CETP-Hemmer. Weitere Triazol-CETP-Hemmer werden in der US- Patentanmeldung Serien-Nr. 09/153 360 beschrieben. Sikorski et al. beschreiben weitere neue CETP-Hemmer in der PCT-Patentanmeldung Nr. WO 9914204.
Substituierte 2-Mercaptoanilinamidverbindungen können als CETP-Hemmer verwendet werden, und solche therapeutischen Verbindungen werden von H. Schinkai et al. in der PCT-Patentanmeldung WO 98/35937 beschrieben.
Einige substituierte Heteroalkylaminverbindungen sind als CETP-Hemmer bekannt. In der europäischen Patentanmeldung Nr. 796846 beschreiben Schmidt et al. 2-Aryl-substituierte Pyridine als Cholesterinester-Transferprotein-Hemmer, die als kardiovaskuläre Mittel geeignet sind. Ein Substituent am C₃ des Pyridinrings kann eine Hydroxyalkylgruppe sein. In der europäischen Patentanmeldung Nr. 801060 beschreiben Dow und Wright heterocyclische Derivate, substituiert mit einem Aldehyd-Additionsprodukt eines Alkylamins um 1-Hydroxy-1-amine zu erhalten. Es heißt, dass diese β3-adrenergischer Rezeptor-Antagonisten sind, die für die Behandlung von Diabetes und anderen Störungen geeignet sind. In der GB-Patentanmeldung Nr. 2305665 beschreiben Fisher et al. 3-agonistische sekundäre Aminoalkohol-substituierte Pyridin-Derivate, die für die Behandlung von mehreren Störungen, mit Einschluss von Cholesterinspiegeln und atherosklerotischen Erkrankungen geeignet sind. In der europäischen Patentanmeldung Nr. 818448 beschreiben Schmidt et al. Tetrahydrochinolin-Derivate als Cholesterinester-Transferprotein-Hemmer. In der europäischen Patentanmeldung Nr. 818197 beschreiben Schmek et al. Pyridine mit verschmolzenen Heterocyclen als Cholesterinester-Transferprotein-Hemmer. Brandes et al. beschreiben in der DE-Patentanmeldung Nr. 19627430 bicyclische kondensierte Pyridin-Derivate als Cholesterinester-Transferprotein-Hemmer. In der PCT-Patentanmeldung Nr. WO 9839299 beschreiben Muller-Gliemann et al. Chinolin-Derivate als Cholesterylester-Transferprotein-Hemmer.
Polycyclische Verbindungen, die als CETP-Hemmer geeignet sind, werden auch von A. Oomura et al. in der japanischen Patentschrift Nr. 10287662 beschrieben. So wurden z. B. therapeutisch verwendbare Verbindungen mit den Strukturen C-1 und C-8 durch Züchten von Penicillium spp. hergestellt.
Als CETP-Hemmer geeignete Cycloalkylpyridine werden auch von Schmidt et al. in der europäischen Patentschrift Nr. EP 818448 offenbart. So wird dort z. B. beschrieben, dass eine therapeutisch wirksame Verbindung mit der Struktur C-9 besonders wirksam als CETP-Hemmer ist.
Substituierte Tetrahydronaphthalinverbindungen, die als CETP-Hemmer geeignet sind, werden in der PCT-Patentanmeldung Nr. WO 9914174 beschrieben. In dieser Druckschrift wird speziell als geeigneter CETP-Hemmer die Verbindung (8S)-3-Cyclopentyl-1-(4-fluorphenyl)-2-[(S)-fluor-(4-trifluormethylphenyl)methyl]-8-hydroxy-6-spirocclobutyl-5,6,7,8-tetrahydronaphthalin beschrieben.
Einige 4-Heteroaryl-Tetrahydrochinoline, die als CETP-Hemmer geeignet sind, werden in der PCT-Patentanmeldung Nr. WO 9914215 beschrieben. So beschreibt z. B. diese Druck schrift 3-(4-Trifluormethylbenzoyl)-5,6,7,8-tetrahydrochinolin-5-on als verwendbaren CETP-Hemmer.
Bei einem weiteren Ansatz zur Verringerung des Gesamtcholesterins wird von der Meinung Gebrauch gemacht, dass die HMG-CoA-Reduktase die die Geschwindigkeit begrenzende Stufe bei der Biosynthese von Cholesterin katalysiert (The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9. Aufl., J. G. Hardman und L. E. Limberd, Hrsg., McGraw-Hill, Inc., New York, S. 884-888 (1996)). Die HMG-CoA-Reduktase-Hemmer (mit Einschluss der Klasse der therapeutischen Wirkstoffe, die üblicherweise als "Statine" bezeichnet werden) verringern die Blutserumspiegel von LDL-Cholesterin durch kompetitive Hemmung dieser biosynthetischen Stufe (M. S. Brown et al., J. Biol. Chem, 253, 1121–28 (1978)). Weltweit wurden mehrere Statine entwickelt oder kommerzialisiert. Mevastatin gehörte zu den ersten Statinen, die entwickelt wurden. Diese Verbindung wird in der US-PS Nr. 3 983 140 beschrieben. Lovastatin, ein weiterer wichtiger HMG-CoA-Reduktase-Hemmer, wird in der US-PS Nr. 4 231 938 beschrieben. Simvastatin wird in der US-PS Nr. 4 444 784 beschrieben. Alle diese HMG-CoA-Reduktase-Hemmer enthalten eine sechsgliedrige Lactonfunktion, die offenbar die Struktur des HMG-CoA nachahmt in Konkurrenz mit der Reduktase. Die Klasse der HMG-CoA-Reduktase-Hemmer der Cholesterin-senkenden Arzneimittel wird weiterhin durch eine Gruppe von Arzneimitteln beispielhaft veranschaulicht, die 2,4-Dihydroxyheptansäure-Funktionalitäten anstelle des Lactons enthalten. Ein Glied dieser Gruppe ist das in der US-PS Nr. 4 346 227 beschriebene Pravastatin. Ein weiterer HMG-CoA-Reduktase-Hemmer der eine 2,4-Dihydroxyheptansäuregruppe enthält, ist Fluvastatin, das in der US-PS Nr. 5 354 772 beschrieben wird. Warnungen bezüglich Nebenwirkungen bei der Verwendung von HMG-CoA-Reduktase-Hemmern schließen Dysfunktionen der Leber, Myopathien der Skelettmuskulatur, Rhabdomyolyse und akutes Nierenversagen ein. Einige dieser Effekte werden verstärkt, wenn die HMG-CoA-Reduktase-Hemmer mit Fibraten oder Nicotinsäure kombiniert werden.
Die Fibrinsäure-Derivate umfassen eine weitere Klasse von Arzneimitteln, die einen Effekt auf die Lipoproteinspiegel ausüben. Ein erstes dieser Mittel, das entwickelt wurde, ist das Clofibrat, das in der US-PS Nr. 3 262 850 beschrieben wird. Das Clofibrat ist der Ethylester der p-Chlorphenoxyisobuttersäure. Eine in dieser Klasse weit verwendete arzneiliche Substanz ist Gemfibrozil, die in der US-PS Nr. 3 674 836 beschrieben wird. Das Gemfibrozil wird häufig zur Verminderung der Triglyceridspiegel oder zur Erhöhung der HDL-Cholesterin-Konzentrationen eingesetzt (The Pharmacological Basis of Therapeutics, S. 893). Fenofibrat (US-PS Nr. 4 058 552) hat einen ähnlichen Effekt wie das Gemfibrozil, senkt aber zusätzlich noch die LDL-Spiegel. Ciprofibrat (US-PS Nr. 3 948 973) hat ähnliche Effekte wie das Fenofibrat. Ein weiteres Arzneimittel in dieser Klasse ist das Bezafibrat (US-PS Nr. 3 781 328). Warnungen bezüglich Nebenwirkungen bei der Verwendung von Fibrinsäure-Derivaten schließen Erkrankungen der Gallenblase (Cholelithiase), Rhabdomyolyse und akutes Nierenversagen ein. Einige dieser Effekte werden verstärkt, wenn Fibrate mit HMG-CoA-Reduktase-Hemmern kombiniert werden.
Probucol ist ein kräftiges Antioxidationsmittel, das die Fähigkeit gezeigt hat, die Serum-Cholesterinspiegel zu erniedrigen und eine Regression von Xanthome in Patienten zu bewirken, die an homozygoter familiärer Hypercholesterinämie leiden (A. Yamamoto et al., Am. J. Cardiol., 57, 29H–35H (1986)). Jedoch zeigt die Behandlung mit Probucol allein manchmal eine falsche Kontrolle des LDL und eine häufige Erniedrigung des HDL (The Pharmacological Basis of Therapeutics, S. 891). Probucol ist bei Patienten mit progressiven myokardialen Schädigungen und/oder ventrikulären Arrhythmien kontraindiziert.
Eine Klasse von Stoffen, die durch einen anderen Mechanismus zur Erniedrigung von LDL-Cholesterin wirkt, umfasst Gallensäure-Sequestrierungsmittel. Solche Mittel sind typischerweise Anionenaustauscher-Polymere, die dem Patienten oral verabreicht werden. Wenn das Mittel durch die Gedärme hindurchgeht, dann werden Anionen der Gallensäuren von dem Mittel sequestriert und ausgeschieden. Es wurde spekuliert, dass solche Sequestrierungsmittel eine Reabsorption durch die Eingeweide, z. B. das Ileum, verhindern, wodurch die Umwandlung der Gallensäuren in Cholesterin verhindert wird. Ein solches Gallensäure-Sequestrierungsmittel ist Cholestyramin, ein Styrol-Divinylbenzolcopolymeres, enthaltend quaternäre kationische Ammoniumgruppen, die dazu imstande sind, Gallensäuren zu binden. Es wird angenommen, dass das Cholestyramin die Gallensäuren in dem Intestinaltrakt bindet, wodurch ihre normale enterohepatische Zirkulation gestört wird. Dieser Effekt wird von Reihner et al. in "Regulation of hepatic cholesterol metabolism in humans: stimulatory effects of cholestyramine on HMG-CoA reductase activity and low density lipoprotein receptor expression in gallstone patients", Journal of Lipid Research, 31, 2219–2226 (1990), beschrieben. Eine weitere Beschreibung dieses Effekts findet sich in der Arbeit von Suckling et al. in "Cholesterol Lowering and bile acid excretion in the hamster with cholestyramine treatment", Atherosclerosis, 89, 183–90 (1991). Dies führt zu einer Erhöhung der Gallensäuresynthese in der Leber, weil die Leber Cholesterin verwendet, sowie zu einer Aufregulierung der LDL-Rezeptoren der Leber, was die Clearence von Cholesterin erhöht und die Serum-LDL-Cholesterinspiegel senkt.
Ein weiteres Gallensäure-Sequestrierungsmittel ist Colestipol, ein Copolymeres von Diethylentriamin und 1-Chlor-2,3-epoxypropan. Colestipol wird in der US-PS Nr. 3 692 895 beschrieben. Eine häufige Nebenwirkung von Colestipol und von Cholestyramin ist Gastritis.
Weitere Gallensäure-Sequestrierungsmittel werden in der US-PS Nr. 5 703 188, erteilt an Geltex Pharmaceuticals Inc., beschrieben. Ein solches Gallensäure-Sequestrierungsmittel ist z. B. das 3-Methacrylamidopropyltrimethylammoniumchlorid, copolymerisiert mit Ethylenglykoldimethacrylat, wodurch ein Copolymeres erhalten wird.
Eine weitere Klasse von Materialien, die als Gallensäure-Sequestrierungsmittel vorgeschlagen wurde, umfasst Teilchen, umfassend amphiphile Copolymere mit einem vernetzten Hüllenbereich und einem inneren Kernbereich (Patentanmeldung Nr. PCT/US 97/11610). Die Strukturen und die Herstellung von solchen vernetzten amphiphilinen Copolymeren wird in der PCT/US97/11345 beschrieben. Solchen Teilchen wurde der Trivialname "Knedels" verliehen (K. B. Thurmond et al., J. Am. Chem. Soc., 118 (30), 7239–40 (1996)).
Nicotinsäure (Niacin) ist ein B-Komplex-Vitamin, von dem bereits 1955 berichtet wurde, dass es als hypolipidämisches Mittel wirkt (R. Altschl et al., Arch. Biochem. Biophys., 54, 558–9 (1955)). Es wird in manchen Fällen dazu verwendet, niedrige HDL-Spiegel und niedrige VLDL- und LDL-Spiegel zu erhöhen. Verwendbare Handelszubereitungen der Nicotinsäure schließen die Präparate Niacor, Niaspan, Nicobid, Nicolar, Slo-Niacin ein. Die Nicotinsäure ist für Patienten kontraindiziert, die eine hepatische Dysfunktion, ein aktives Magengeschwür oder eine arterielle Blutung haben. Eine weitere Verbindung in dieser Klasse, die für kardiovaskuläre Indikationen geeignet ist, ist Niceritrol (T. Kazumi et al., Curr. Ther. Res., 55, 546–51). J. Sasaki et al. (Int. J. Clin. Pharm. Ther., 33 (7), 420–26 (1995)) beschreibt eine Verringerung der Cholesterinester-Transferaktivität durch eine Monotherapie mit Niceritrol. Das Acipimox (5-Methylpyrazin-2-carbonsäure-4-oxid, US-PS Nr. 4 002 750) ist strukturell der Nicotinsäure ähnlich, und es hat eine antihyperlipidämische Aktivität.
Eine Untersuchung von Wetterau et al. Science, 282, 751–54 (1998)) beschreibt eine Anzahl von Alkylpiperidinverbindungen, Isoindolverbindungen und Fluorenverbindungen, die für die Hemmung der mikrosomalen Triglycerid-Transfer-Proteine (MTP-Hemmer) geeignet sind. Nagetiere und Watanabe-heritable hyperlipidämische Kaninchen, die mit diesen Verbindungen behandelt worden sind, zeigen eine verringerte Produktion von Lipoproteinteilchen.
Cholesterin-Absorptionsantagonisten können auch für die Behandlung oder die Prophylaxe von kardiovaskulären Erkrankungen, wie Hypercholesterinämie oder Atherosklerose, geeignet sein. So sind z. B. Azetidinone, wie SCH 58235 ([3R-[3α(S*),4β]]-1-(4-Fluorphenyl)-3-[3-(4-fluorphenyl)-3-hydroxypropyl]-4-(4-hydroxyphenyl)-2-azetidinon) (Formel A-1), beschrieben in J. Med. Chem., 41(6), 973–980 (1998), einsetzbare Cholesterin-Absorptionsantagonisten. SCH 58235 wird weiterhin von Van Heek et al. in J. Pharmacol. Exp. Ther., 283(1), 157–163 (1997) beschrieben. Weitere Azetidinonverbindungen, die für die Behandlung oder Prophylaxe von kardiovaskulären Erkrankungen geeignet sind, werden in der US-PS Nr. 5 767 115 beschrieben.
[3R-[3a(S*),4b]]-1-(4-fluorphenyl)-3-[3-(4-fluorphenyl)-3-hydroxypropyl]-4-(4-hydroxyphenyl)-2-azetidinon
Es hat sich gezeigt, dass Phytosterine, und insbesondere Stanole, die Cholesterinabsorption aus dem Gastrointestinaltrakt hemmen und die Cholesterinsynthese negativ beeinflussen. Es wird erwartet, dass Phytosterine den Fortschritt und die Bildung von bestimmten kardiovaskulären Zuständen, mit Einschluss von hyperlipidämischen Zuständen, wie z. B. Hypercholesterinämie und Atherosklerose, verlangsamen oder hemmen. Die Stanole sind 5α-gesättigte Derivate von Phytosterinen. (Straub, US-PS Nr. 5 244 887). Es ist schon die Meinung geäußert worden, dass die Phytosterine die Blut-Cholesterinspiegel dadurch erniedrigen, dass sie die Absorption des Cholesterins aus dem Dünndarm verringern (Ling und Jones, "Minireview Dietary Phytosterols: A Review of Metabolism, Benefits and Side Effects", Life Sciences, 57 (3), 195-206 (1995)).
Sitostanol, Clionastanol, 22,23-Dihydrobrassicastanol, Campestanol und Gemische davon, die in Nahrungsergänzungsmitteln enthalten sind, die dazu vorgesehen sind, die Cholesterinabsorption aus Nahrungsmitteln und Getränken, die Cholesterin enthalten, zu verringern, werden von Straub in der US-PS Nr. 5 244 887 beschrieben.
Ein beta-Sitostanolfettsäureester oder ein Fettsäureestergemisch, das das Cholesterin im Serum erniedrigt, wird von Miettinen et al. in der US-PS Nr. 5 502 045 beschrieben.
Ein Stanol-Präparat, enthaltend Sitostanol und Campestanol, das beim Einarbeiten in Nahrungsmittel die Serum-Cholesterinspiegel wirksam erniedrigt, wird von Wester et al. in WO 9806405 beschrieben.
Ein therapeutisches Präparat aus einem oder mehreren Oxysterinen und einem geeigneten Träger für die Hemmung der Cholesterinabsorption aus der Nahrung wird von Haines in der US-PS Nr. 5 929 062 beschrieben.
Kardiovaskuläre Erkrankungen werden auch durch Bluthochdruck bewirkt oder verschärft. Bluthochdruck wird als dauernder hoher Blutdruck definiert. Im Allgemeinen werden Erwachsene dann als hypertensiv eingeordnet, wenn ihr systolischer Blutdruck dauernd oberhalb 140 mmHg liegt oder wenn ihr diastolischer Blutdruck oberhalb 90 mmHg liegt. Die Langzeitrisiken für die kardiovaskuläre Sterblichkeit erhöhen sich in direkter Beziehung mit einem dauernden Blutdruck (E. Braunwald, Heart Disease, 5. Aufl., W. B. Saunders & Co, Philadelphia, 1997, S. 807–823). Es sind schon verschiedene Mechanismen mit Vorteil ausgenutzt worden um den Bluthochdruck unter Kontrolle zu bringen. So können z. B. geeignete antihypertensive Mittel, ohne Begrenzung darauf, andrenergische Blocker, gemischte alpha/betaandrenergische Blocker, alpha-andrenergische Blocker, beta-andrenergische Blocker, andrenergische Stimulierungsmittel, ein Angiotensin-Konvertierungsenzym (ACE)-Hemmer, Angiotensin II-Rezeptorantagonist, Calciumkanalblocker, Diuretika oder Vasodilatatoren einschließen. Ein besonders gut geeignetes antihypertensives Mittel ist das Eplerenon (vergleiche z. B. US-PS Nr. 4 559 332). Das Eplerenon senkt den Blutdruck, indem es als Diuretikum wirkt. Das Eplerenon wurde früher als Epoxymexrenon bezeichnet.
Einige Kombinationstherapien für die Behandlung von kardiovaskulären Erkrankungen sind in der Literatur beschrieben worden. Kombinationen von IBAT-Hemmern mit HMG-CoA-Reduktase-Hemmern, die für die Behandlung von kardiovaskulären Erkrankungen geeignet sind, werden in der US-Patentanmeldung Nr. 09/037 308 und in der PCT-Patentanmeldung Nr. 98/40375 beschrieben.
Eine Kombinationstherapie mit Fluvastatin und Niceritrol wird von J. Sasaki et al. (Id.) beschrieben. Diese Forscher schließen die Schlussfolgerung, dass es offenbar so ist, dass die Kombination von Fluvastatin mit Niceritrol "bei einer Dosis von 750 mg/Tag die günstigen Werte des Fluvastatins nicht verstärkt oder abschwächt".
L. Cashin-Hemphill et al. (J. Am. Med. Assoc., 264 (23), 3013–17 (1990)) beschreiben die günstigen Effekte einer Kombinationstherapie von Colestipol und Niacin auf die Koronaratherosklerose. Die beschriebenen Effekte schließen eine Nicht-Progression und eine Regression bei nativen Läsionen der Koronararterien ein.
Eine Kombinationstherapie von Acipimox und Simvastatin zeigt günstige HDL-Effekte bei Patienten mit hohen Triglyceridspiegeln (N. Hoogerbrugge et al., J. Internal Med., 241, 151-55 (1997)).
Eine Sitostanolestermargarine- und Pravastatin-Kombinationstherapie wird von H. Gylling et al. (J. Lipid Res., 37, 1776–85 (1996)) beschrieben. Es heißt, dass diese Therapie gleichzeitig die Cholesterinabsorption hemmt und das LDL-Cholesterin signifikant beim nichtinsulinabhängigen Diabetiker erniedrigt.
Brown et al. (New Eng. J. Med., 323 (19), 1289–1339 (1990)) beschreiben eine Kombinationstherapie von Lovastatin und Colestipol, die den Fortschritt der atheriosklerotischen Läsionen verringert und die Läsionsregression relativ zu Lovastatin allein erhöht.
Scott (PCT-Patentanmeldung Nr. WO 99/11260) beschreibt Kombinationen von Atorvastatin (ein HMG-CoA-Reduktase-Hemmer) mit einem Blutdruck-senkenden Mittel für die Behandlung von Angina pectoris, Atherosklerose, kombiniertem Bluthochdruck und Hyperlipidämie und Symptomen von Herzrisiken.
Egan et al. (PCT-Patentanmeldung Nr. WO 96/40255) beschreiben eine Kombinationstherapie mit einem Angiotensin II-Antagonisten und einem Epoxy-steroidalen Aldosteronantagonisten. Der Epoxy-steroidale Aldosteronantagonist in der Egan-Anmeldung schließt das Eplerenon ein.
Die obigen Druckschriften zeigen ein kontinuierliches Bedürfnis nach der Auffindung von sicheren, wirksamen Mitteln für die Prophylaxe oder Behandlung von kardiovaskulären Erkrankungen.
Zusammenfassung der Erfindung
Um die fortlaufende Notwendigkeit anzusprechen, sichere und wirksame Mittel für die Prophylaxe und Behandlung von kardiovaskulären Erkrankungen aufzufinden, wird nunmehr über kombinierte Therapien mit kardiovaskulären Arzneimitteln berichtet. Die vorliegende Erfindung liefert eine Zusammensetzung, umfassend eine erste Menge eines IBAT-Hemmers und eine zweite Menge eines mikrosomalen Triglycerid-Transferproteins (MTP-Hemmer) bereit, wobei die erste und die zweite Menge miteinander eine gegen einen hyperlipidämischen Zustand wirksame Menge oder eine gegen einen atherosklerotischen Zustand wirksame Menge umfassen. Gemäß einer weiteren Ausführungsform kann der IBAT-Hemmer ein Benzothiepin-IBAT-Hemmer sein. In einer anderen Ausführungsform kann der IBAT-Hemmer ein Benzothiazepin-IBAT-Hemmer sein. Gemäß einer weiteren Ausführungsform kann der IBAT-Hemmer ein Naphthalin-IBAT-Hemmer sein.
Unter ihren mehreren Ausführungsformen stellt die vorliegende Erfindung weiterhin eine Kombination zur Verfügung, die eine erste Menge eines IBAT-Hemmers und eine zweite Menge eines weiteren kardiovaskulären Therapeutikums, das für die Prophylaxe oder Behandlung von Hyperlipidämie oder Atherosklerose geeignet ist, umfasst, wobei die erste und die zweite Menge miteinander eine gegen einen hyperlipidämischen Zustand wirksame Menge oder eine gegen einen atherosklerotischen Zustand wirksame Menge der Verbindungen umfassen.
Eine weitere Ausführungsform der vorliegenden Erfindung umfasst die Verwendung einer beliebigen der hierin beschriebenen kardiovaskulären Kombinationstherapien bei der Herstellung eines Medikaments für die Prophylaxe oder Behandlung von Hypercholesterinämie oder Atherosklerose.
Gemäß einer weiteren Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung die Verwendung für die Herstellung eines Medikaments zur Prophylaxe oder Behandlung eines hyperlipidämischen Zustands oder einer Störung bei einem Säugetier einer ersten Menge einer den ilealen Gallensäuretransport hemmenden Verbindung und einer zweiten Menge einer das mikrosomale Triglycerid-Transferprotein hemmenden Verbindung zur Verfügung, wobei die erste Menge und die zweite Menge zusammen eine gegen einen hyperlipidämischen Zustand wirksame Menge, eine gegen einen atherosklerotischen Zustand wirksame Menge oder eine gegen einen hypercholesterinämischen Zustand wirksame Menge der Verbindung umfassen.
Gemäß einer weiteren Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung einen Kit zum Erhalt eines therapeutischen Effekts an einem Säugetier, umfassend eine Menge einer den ilealen Gallensäuretransport hemmenden Verbindung in einer ersten Dosierungseinheitsform; eine Menge einer das mikrosomale Triglycerid-Transferprotein hemmenden Verbindung in einer zweiten Dosierungseinheitsform; und ein Behältnis zur Aufnahme der genannten ersten und zweiten Dosierungseinheitsformen zur Verfügung.
Der weitere Rahmen der Anwendbarkeit der vorliegenden Erfindung wird aus der unten angegebenen detaillierten Beschreibung ersichtlich. Es sollte jedoch beachtet werden, dass die folgende detaillierte Beschreibung und die Beispiele, während diese bevorzugte Ausführungsformen der Erfindung angeben, lediglich zum Zwecke der Illustration angegeben werden, da verschiedene Veränderungen und Modifikationen innerhalb des Rahmens der Erfindung für den Fachmann aus dieser detaillierten Beschreibung ersichtlich werden.
DETAILLIERTE BESCHREIBUNG DER BEVORZUGTEN AUSFÜHRUNGSFORMEN
Die folgende detaillierte Beschreibung wird angeführt um den Fachmann bei der Durchführung der vorliegenden Erfindung zu unterstützen. Selbst dann sollte diese detaillierte Beschreibung nicht dahingehend ausgelegt werden, dass sie die vorliegende Erfindung in unziemlicher Weise einschränkt, da Modifikationen und Variationen der hierin beschriebenen Ausführungsformen vom Fachmann gemacht werden können, ohne dass vom Rahmen der erfindungsgemäßen Entdeckung abgewichen wird.
a. Definitionen
Die folgenden Definitionen werden gegeben um den Leser beim Verständnis der detaillierten Beschreibung der vorliegenden Erfindung zu unterstützen:
"Benzothiepin-IBAT-Hemmer" bzw. "Benzothiepin-IBAT-Inhibitor" bedeutet einen Hemmer des ilealen Gallensäuretransports, umfassend eine therapeutische Verbindung, umfassend eine 2,3,4,5-Tetrahydro-1-benzothiepin-1,1-dioxid-Struktur oder eine 2,3,4,5-Tetrahydro-1-benzothiepin-1-oxid-Struktur.
"Benzothiazepin-IBAT-Hemmer" bzw. "Benzothiazepin-IBAT-Inhibitor" bedeutet einen Hemmer des ilealen Gallensäuretransports, umfassend eine therapeutisch wirksame Verbindung, umfassend eine 2,3,4,5-Tetrahydro-1-benzothi-4-azepin-1,1-dioxid-Struktur oder eine 2,3,4,5-Tetrahydro-1-benzothi-5-azepin-1,1-dioxid-Struktur.
"Naphthalin-IBAT-Hemmer" bedeutet einen Hemmer des ilealen Gallensäuretransports, umfassend eine Verbindung, die eine substituierte Naphthalinstruktur umfasst.
"Kombinationstherapie" bedeutet die Verabreichung von zwei oder mehreren thrapeutischen Mitteln zur Behandlung eines Bluthochdruckzustands oder eines hyperlipidämischen Zustands, z. B. von Atherosklerose und Hypercholesterinämie. Eine derartige Verabreichung umfasst die Co-Verabreichung dieser therapeutischen Mittel in einer im Wesentlichen gleichzeitigen Weise, wie einer einzigen Dosierungsform mit einem fixierten Verhältnis der Wirkstoffe oder in mehrfachen getrennten Dosierungsformen für jedes Hemmmittel. Weiterhin umfasst eine derartige Verabreichung auch die Verwendung jedes Typs des therapeutischen Mittels in sequentieller An und Weise. In jedem Falle ergibt das Behandlungsschema günstige Effekte der Arzneimittelkombination bei der Behandlung eines Bluthochdruckzustands oder eines hyperlipidämischen Zustands.
Der Ausdruck "therapeutisch wirksam" soll die kombinierte Menge der Hemmer bei der Kombinationstherapie qualifizieren. Diese kombinierte Menge erreicht das Ziel der Verringerung oder der Eliminierung des Bluthochdruckzustands oder des hyperlipidämischen Zustands.
"Therapeutische Verbindung" bedeutet eine Verbindung, die für die Prophylaxe oder Behandlung eines Bluthochdruckzustands oder eines hyperlipidämischen Zustands, mit Einschluss von Atherosklerose und Hypercholesterinämie, verwendbar ist.
b. Kombinationen
Die Kombinationen gemäß der vorliegenden Erfindung haben eine Anzahl von Anwendungsmöglichkeiten. So sind z. B. durch eine Einstellung der Dosierung und eine medizinische Überwachung die individuellen Dosierungen der in den erfindungsgemäßen Kombinationen verwendeten therapeutischen Verbindungen niedriger, als es für Dosierungen von therapeutischen Verbindungen bei Verwendung in der Monotherapie typisch ist. Diese Dosiserniedrigung liefert Vorteile, mit Einschluss einer Verringerung von Nebenwirkungen der individuellen therapeutischen Verbindungen im Vergleich zu der Monotherapie. Weiterhin führen weniger Nebenwirkungen der Kombinationstherapie im Vergleich zu der Monotherapie zu einer größeren Befolgung des Therapieplans durch den Patienten.
Eine weitere Verwendbarkeit der vorliegenden Erfindung liegt in Kombinationen, die komplementäre Effekte oder komplementäre Wirkungsweisen haben. So erniedrigen z. B. IBAT-Hemmer häufig das LDL-Lipoprotein, doch erniedrigen sie auch das HDL-Lipoprotein. Demgegenüber erhöhen CETP (Cholesterylester-Transferprotein)-Hemmer das HDL. Eine therapeutische Kombination eines IBAT-Hemmers und eines CEPT-Hemmers wird bei optimaler Einstellung der Dosierungen das LDL erniedrigen und doch das HDL aufrechterhalten oder erhöhen.
Die Verbindungen, die für die vorliegende Erfindung einsetzbar sind, umfassen einen breiten Bereich von therapeutisch wirksamen Verbindungen. IBAT-Hemmer, die für die Zwecke der vorliegenden Erfindung einsetzbar sind, werden in der Patentanmeldung Nr. PCT/US95/10863 offenbart. Weitere IBAT-Hemmer werden in der PCT/US97/04076 beschrieben. Noch weitere IBAT-Hemmer, die für die vorliegende Erfindung einsetzbar sind, werden in der US-Anmeldung Serien-Nr. 08/816 065 beschrieben.
Weitere IBAT-Hemmverbindungen, die für die vorliegende Erfindung geeignet sind, werden in der WO 98/40375 beschrieben. Weitere IBAT-Hemmverbindungen, die für die vorliegende Erfindung geeignet sind, werden in der US-Anmeldung Serien-Nr. 08/816 065 beschrieben. IBAT-Hemmer von besonderem Interesse für die vorliegende Erfindung werden in Tabelle 1, sowie deren Diastereomere, Entantiomere, Racemate, Salze und Tautomere der IBAT-Hemmer werden in der Tabelle 1 angegeben.
Tabelle 1
MTP-Hemmverbindungen, die für die Kombinationen und Verfahren gemäß der vorliegenden Erfindung geeignet sind, umfassen eine weite Vielzahl von Strukturen und Funktionalitäten. Einige der MTP-Hemmverbindungen, die für die Verwendung gemäß der vorliegenden Erfindung von besonderem Interesse sind, werden in Tabelle 4b gezeigt. Die therapeutischen Verbindungen der Tabelle 4b können für die vorliegende Erfindung in einer Vielzahl von Formen verwendet werden, mit Einschluss der Säureform, der Salzform, der Racemate, der Entantiomeren, der Zwitterionen und der Tautomeren. Beschreibungen der therapeutischen Verbindungen der Tabelle 4b können in Science, 282, 23. Oktober 1998, S. 751–754, gefunden werden.
Tabelle 4b
Bei den Kombinationen gemäß der vorliegenden Erfindung ist der IBAT-Hemmer vorzugsweise ein Benzothiazepin-IBAT-Hemmer. Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform ist der Benzothiazepin-IBAT-Hemmer die Verbindung B-2. Gemäß einer weiteren bevorzugten Ausführungsform ist der Benzothiazepin-IBAT-Hemmer die Verbindung B-7. Gemäß einer weiteren bevorzugten Ausführungsform ist der IBAT-Hemmer ein Benzothiepin-IBAT-Hemmer. Alle folgenden Benzothiepin-IBAT-Hemmer repräsentieren eine getrennte bevorzugte Ausführungsform der vorliegenden Erfindung.

B-1.
B-3.
B-4.
B-5.
B-6.
B-8.
B-9.
B-10.
B-11.
B-12.
B-13.
B-14.
B-15.
B-16.
B-17.
B-18.
B-19.
B-21.
B-22.
B-23.
B-24.
B-25.
B-26.
B-27.
B-28.
B-29.
B-30.
B-31.
B-32.
B-33.
B-34.
B-35.
B-36.
B-37.
B-38.
B-39.

In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform ist der IBAT-Hemmer ein Naphthalin-IBAT-Hemmer, z. B. die Verbindung B-20.
Bluthochdruck wird als dauernder hoher Blutdruck definiert. Im Allgemeinen werden Erwachsene dann als Bluthochdruck-Patienten klassifiziert, wenn der systolische Blutdruck dauerhaft oberhalb 140 mmHg liegt oder wenn der diastolische Blutdruck oberhalb 90 mmHg liegt. Die Langzeitrisiken für die kardiovaskuläre Sterblichkeit steigen in direkter Beziehung mit einem dauernden Blutdruck an (E. Braunwald, Heart Disease, 5. Aufl., W. B. Saunders & Co, Philadelphia, 1997, S. 807–823). Der Blutdruck ist eine Funktion des kardialen Outputs und des peripheren Widerstands des Gefäßsystems, und er kann durch die folgende Gleichung angegeben werden: BP = CO × PR worin BP den Blutdruck bedeutet, CO der kardiale Output ist und PR der periphere Widerstand ist. (Id., S. 816). Faktoren, die den peripheren Widerstand beeinträchtigen, schließen Fettleibigkeit und/oder funktionelle Konstriktion ein. Faktoren, die den kardialen Output beeinträchtigen, schließen eine Konstriktion der Venen ein. Eine funktionale Konstriktion der Blutgefäße kann durch eine Vielzahl von Faktoren bewirkt werden, mit Einschluss der Verdickung der Wände der Blutgefäße, was zu einer Verringerung des Innendurchmessers der Gefäße führt. Ein weiterer Faktor, der den systolischen Blutdruck beeinflusst, ist die Starrheit der Aorta (Id. S. 811).
Bluthochdruck und Atherosklerose oder andere hyperlipidämische Zustände liegen bei einem Patienten oftmals gemeinsam vor. Es ist möglich, dass bestimmte hyperlipidämische Bedingungen, wie Atherosklerose, einen direkten oder indirekten Effekt auf den Blutdruck haben können. So führt z. B. eine Atherosklerose häufig zu einer Verringerung des inneren Durchmessers der Blutgefäße. Weiterhin führt eine Atherosklerose häufig zu einer erhöhten Starrheit der Blutgefäße, mit Einschluss der Aorta. Sowohl ein verringerter innerer Durchmesser der Blutgefäße, als auch eine Starrheit der Blutgefäße sind Faktoren, die zu Bluthochdruck beitragen.
Ein Myokardinfarkt ist die Nekrose der Herzmuskelzellen, resultierend aus einer Sauerstoffverarmung. Er wird gewöhnlich durch eine Obstruktion der Zuführung von Blut zu dem betroffenen Gewebe bewirkt. So kann z. B. eine Hyperlipidämie oder eine Hypercholesterinämie die Bildung von atherosklerotischen Plaques bewirken, die eine Obstruktion des Blutflusses bewirken können, und hierdurch einen Myokardinfarkt bewirken. (Id., S. 1185–1187). Ein weiterer hauptsächlicher Risikofaktor für einen Myokardinfarkt ist der Bluthochdruck (Id., S. 815). In anderen Worten wirken der Bluthochdruck und hyperlipidämische Zustände, wie Atherosklerose oder Hypercholesterinämie, zusammen um einen Myokardinfarkt zu bewirken. Eine koronare Herzerkrankung ist eine weitere Erkrankung, die durch mehrfache Faktoren, mit Einschluss von hyperlipidämischen Zuständen und Bluthochdruck, bewirkt oder verschlechtert wird. Die Kontrolle, sowohl von hyperlipidämischen Zuständen, als auch von Bluthochdruck, sind wichtig um die Symptome oder den Fortschritt der koronaren Herzerkrankungen zu kontrollieren.
Angina pectoris ist ein akuter Brustschmerz, der von einer verringerten Blutzuführung in das Herz bewirkt wird. Eine verminderte Blutzuführung in das Herz ist als myokardiale Ischämie bekannt. Angina pectoris kann z. B. das Ergebnis einer Stenose der Aorta, einer pulmonären Stenose und einer ventrikulären Hypertrophie sein. Einige antihypertensive Mittel, wie z. B. Amlodipin, kontrollieren Angina pectoris durch Verringerung des peripheren Widerstands.
Es wird nun offenbart, dass eine Therapie, die Bluthochdruck kontrolliert und in Kombination hyperlipidämische Zustände kontrolliert, die Risiken von kardiovaskulären Erkrankun gen oder die Symptome von Herzerkrankungen, wie z. B. von koronaren Herzerkrankungen, von Myokardinfarkt oder von Angina pectoris, verringert.
Viele der Verbindungen, die gemäß der vorliegenden Erfindung verwendbar sind, können mindestens zwei asymmetrische Kohlenstoffatome haben, und sie schließen daher die Racemate und die Stereoisomeren sowie die Diastereomeren und die Enantiomeren, sowohl in reiner Form, als auch im Gemisch, ein. Solche Stereoisomere können unter Verwendung von herkömmlichen Techniken hergestellt werden, und zwar entweder durch Umsetzung von enantiomeren Ausgangsmaterialien oder durch Trennung der Isomeren der Verbindungen gemäß der vorliegenden Erfindung.
Die Isomeren können geometrische Isomere einschließen, z. B. cis-Isomere oder trans-Isomere, über eine Doppelbindung. Alle solche Isomeren sollen unter die Verbindungen fallen, die gemäß der vorliegenden Erfindung verwendbar sind.
Die in der vorliegenden Erfindung verwendbaren Verbindungen schließen auch Tautomere ein.
Die untenstehend beschriebenen Verbindungen, die gemäß der vorliegenden Erfindung verwendbar sind, schließen ihre Salze, ihre Solvate und ihre Prodrugs ein.
Dosierungen, Zubereitungen und Verabreichungswege
Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen können zur Prophylaxe und Behandlung von hyperlipidämischen Erkrankungen oder Zuständen auf jedem beliebigen Wege, vorzugsweise oralem Weg, verabreicht werden, die einen Kontakt dieser Verbindungen mit ihrer Stelle der Wirkung im Körper, z. B. im Ileum eines Säugetiers, z. B. eines Menschen, herstellen.
Für die Prophylaxe oder Behandlung der oben beschriebenen Zustände können die erfindungsgemäß verwendeten Verbindungen als Verbindung per se eingesetzt werden. Pharmazeutisch annehmbare Salze sind besonders gut für medizinische Anwendungszwecke geeignet, und zwar wegen ihrer größeren Wasserlöslichkeit im Vergleich zu der Stammverbindung. Solche Salze müssen ein pharmazeutisch annehmbares Anion oder Kation haben. Geeignete pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze der Verbindungen gemäß der vorliegenden Erfindung schließen, wenn möglich, solche, abgeleitet von anorganischen Säuren, wie Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Phosphorsäure, Metaphosphorsäure, Salpetersäure, Sulfonsäure und Schwefelsäure, und von organischen Säuren, wie Essigsäure, Benzolsulfonsäure, Benzoesäure, Zitronensäure, Ethansulfonsäure, Fumarsäure, Gluconsäure, Glykolsäure, Isothionsäure, Milchsäure, Lactobionsäure, Maleinsäure, Äpfelsäure, Methansulfonsäure, Bernsteinsäure, Toluolsulfonsäure, Weinsäure und Trifluoressigsäure, ein. Das Chloridsalz wird für medizinische Zwecke ganz besonders bevorzugt. Geeignete pharmazeutisch annehmbare Salze von Basen schließen Ammoniumsalze, Alkalimetallsalze, wie die Natrium- und Kaliumsalze, und Erdalkalimetallsalze, wie die Magnesium- und Calciumsalze, ein.
Die erfindungsgemäß verwendbaren Anionen müssen naturgemäß ebenfalls pharmazeutisch annehmbar sein, und sie werden gleichfalls aus der obigen Liste ausgewählt.
Die Verbindungen, die gemäß der vorliegenden Erfindung verwendbar sind, können mit einem annehmbaren Träger in der Form eines pharmazeutischen Präparats beziehungsweise einer pharmazeutischen Zusammensetzung präsentiert werden. Der Träger muss naturgemäß in dem Sinne annehmbar sein, dass er mit den anderen Bestandteilen der Zusammensetzung verträglich ist, und er darf für den Empfänger nicht schädlich sein. Der Träger kann ein Feststoff oder eine Flüssigkeit oder beides sein, und er wird vorzugsweise mit der Verbindung als Einheitsdosiszusammensetzung, z. B. als Tablette, formuliert, die 0,05% bis 95 Gew.-% des Wirkstoffs enthalten kann. Andere pharmakologisch aktive Substanzen können gleichfalls vorhanden sein, mit Einschluss von anderen Verbindungen gemäß der vorliegenden Erfindung. Die pharmazeutischen Präparate gemäß der Erfindung können nach beliebigen der gut bekannten Techniken der Pharmazie, die im Wesentlichen aus einem Vermischen der Komponenten bestehen, hergestellt werden.
Diese Verbindungen können nach allen beliebigen verfügbaren Maßnahmen zur Verwendung im Zusammenhang mit pharmazeutischen Produkten verabreicht werden, entweder als individuelle therapeutische Verbindungen, oder als eine Kombination von therapeutischen Verbindungen.
Die Menge der Verbindung, die erforderlich ist, den biologischen gewünschten Effekt zu erzielen, wird naturgemäß von einer Anzahl von Faktoren abhängen, wie der speziell ausgewählten Verbindung, dem vorgesehenen Anwendungszweck, der Art und Weise der Verabreichung sowie vom klinischen Zustand des Empfängers.
Im Allgemeinen kann eine gesamte tägliche Dosis eines IBAT-Hemmers im Bereich von etwa 0,01 bis etwa 1000 mg/Tag, vorzugsweise von etwa 0,1 mg bis etwa 50 mg/Tag, mehr bevorzugt von etwa 1 bis etwa 10 mg/Tag, liegen.
Bei MTP-Hemmern wird eine tägliche Dosis von etwa 0,001 bis etwa 800 mg/kg Körpergewicht/Tag, vorzugsweise zwischen etwa 0,01 bis etwa 500 mg/kg Körpergewicht/Tag, mehr bevorzugt zwischen etwa 0,1 bis etwa 300 mg/kg Körpergewicht/Tag, und noch mehr bevorzugt zwischen etwa 1 bis etwa 200 mg/kg Körpergewicht/Tag, im Allgemeinen angemessen sein.
Die in den vorstehenden Paragraphen beschriebenen täglichen Dosen für verschiedene therapeutische Verbindungen können dem Patienten in einer einzigen Dosis oder in proportionierten mehrfachen Subdosen verabreicht werden. Subdosen können 2 bis 6 mal täglich verabreicht werden. Die Dosen können in Depotform vorliegen, die dazu wirksam sind, die gewünschten Ergebnisse zu erhalten.
Im Falle von pharmazeutisch annehmbaren Salzen beziehen sich die oben angegebenen Gewichtsmengen auf die Gewichtsmenge des Säureäquivalents oder des Basenäquivalents der therapeutischen Verbindung, abgeleitet von dem Salz.
Die orale Abgabe der Kombinationen gemäß der vorliegenden Erfindung kann Zubereitungen, wie sie im Stand der Technik gut bekannt sind, einschließen um eine verlängerte oder verzögerte Abgabe des Arzneimittels an den gastrointestinalen Trakt durch eine beliebige Anzahl von Mechanismen zu erhalten. Diese schließen, jedoch ohne Begrenzung darauf, eine pHempfindliche Freisetzung aus der Dosierungsform auf der Basis einer Veränderung des pH-Werts des Dünndarms eine langsame Erosion einer Tablette oder einer Kapsel, die Retention im Magen auf der Basis der physikalischen Eigenschaften der Zubereitung, die Bioadhäsion der Dosierungsform an der Schleimhautauskleidung des Intestinaltrakts oder die enzymatische Freisetzung des aktiven Arzneimittels aus der Dosierungsform ein. Für einige der therapeutischen Verbindungen, die erfindungsgemäß einsetzbar sind (z. B. IBAT-Hemmer), soll der beabsichtigte Effekt die Zeitspanne ausdehnen, über die das Molekül des Wirkstoffs an die Wirkungsstelle (z. B. des Ileums) durch Manipulierung der Dosierungsform geliefert wird. Daher liegen magensaftresistent beschichtete und magensaftresistent beschichtete Depotzubereitungen innerhalb des Rahmens der vorliegenden Erfindung. Geeignete magensaftresistente Überzüge schließen Celluloseacetatphthalat, Polyvinylacetatphthalat, Hydroxypropylmethylcellulosephthalat und anionische Polymere der Methacrylsäure und des Methacrylsäuremethylesters ein.
Die erfindungsgemäßen Kombinationen können oral entweder in einer festen oder in einer halbfesten oder in einer flüssigen Form verabreicht werden. Wenn dies in einer flüssigen oder in einer halbfesten Form erfolgt, können die Kombinationen gemäß der vorliegenden Erfindung z. B. in Form einer Flüssigkeit, eines Sirups, vorhanden sein oder sie können in einer Gelkapsel (z. B. einer Gelkappe) enthalten sein.
Bei der intravenösen Verabreichung kann die Dosis eines IBAT-Hemmers z. B. im Bereich von etwa 0,1 mg/kg Körpergewicht bis etwa 1,0 mg/kg Körpergewicht, vorzugsweise von etwa 0,25 mg/kg Körpergewicht bis etwa 0,75 mg/kg Körpergewicht, mehr bevorzugt von etwa 0,4 mg/kg Körpergewicht bis etwa 0,6 mg/kg Körpergewicht, liegen.
Die Dosis aller dieser therapeutischen Verbindungen kann in geeigneter Weise als Infusion mit etwa 10 ng/kg Körpergewicht bis etwa 100 ng/kg Körpergewicht pro Minute verabreicht werden. Für diesen Zweck geeignete Infusionsflüssigkeiten können z. B. von etwa 0,1 ng bis etwa 10 mg, vorzugsweise von etwa 1 ng bis etwa 10 mg pro Milliliter, enthalten. Einheitsdosierungen können z. B. von etwa 1 mg bis etwa 10 g der Verbindung gemäß der vorliegenden Erfindung enthalten. Somit können Ampullen zur Injektion z. B. etwa 1 mg bis etwa 100 mg enthalten.
Pharmazeutische Zusammensetzungen gemäß der vorliegenden Erfindung können solche einschließen, die für die orale, rektale, topische, bukkale (z. B. sublinguale) und parenterale (z. B. subcutane, intramuskuläre, intradermale oder intravenöse) Verabreichung geeignet sind, obgleich der beste Verabreichungsweg in jedem gegebenen Fall von der Natur und dem Schweregrad des zu behandelnden Zustands sowie der Natur der jeweils verwendeten Verbindung abhängen wird. In den meisten Fällen ist der bevorzugte Weg der Verabreichung der orale Weg.
Pharmazeutische Zusammensetzungen, die für die orale Verabreichung geeignet sind, können in diskreten Einheiten, wie Kapseln, Cachets, Kautabletten oder Tabletten vorliegen, die jeweils eine vorbestimmte Menge von mindestens einer erfindungsgemäß geeigneten therapeutischen Verbindung enthalten. Sie können auch als Pulver oder Granulate, als Lösung oder als Suspension in einer wässrigen oder nicht-wässrigen Flüssigkeit oder als eine Öl-in-Wasser-Emulsion oder als eine Wasser-in-Öl-Emulsion vorliegen. Wie angegeben, können solche Zusammensetzungen nach allen beliebigen geeigneten Methoden der Pharmazie hergestellt werden, die die Stufe der Assoziierung des Wirkstoffs beziehungsweise der Wirkstoffe und des Trägers (der ein oder mehrere zugängliche Bestandteile darstellen kann) einschließt. Im Allgemeinen werden die Zusammensetzungen durch gleichförmiges und inniges Vermischen des Wirkstoffs mit einem flüssigen oder fein verteilten festen Träger oder mit beidem, und dann erforderlichenfalls durch Verformung des Produkts, hergestellt. So kann beispielsweise eine Tablette dadurch hergestellt werden, dass ein Pulver oder ein Granulat der Verbindung, gegebenenfalls mit ein oder mehreren zugänglichen Bestandteilen, verpresst oder verformt wird. Verpresste Tabletten können dadurch hergestellt werden, dass in einer geeigneten Maschine die Verbindung in frei fließender Form, z. B. als Pulver oder als Granulat, gegebenenfalls vermischt mit einem Bindemittel, einem Schmiermittel, einem inerten Verdünnungsmittel und/oder einem oberflächenaktiven/dispergierenden Mittel beziehungsweise Mitteln, verpresst wird. Geformte Tabletten können dadurch hergestellt werden, dass in einer geeigneten Maschine die gepulverte Verbindung, die mit einem inerten flüssigen Verdünnungsmittel befeuchtet ist, verformt wird.
Pharmazeutische Zusammensetzungen, die für die bukkale (sublinguale) Verabreichung geeignet sind, schließen Kautabletten ein, die eine Verbindung gemäß der vorliegenden Erfindung in einer aromatisierten Grundlage, gewöhnlich Saccharose, und Gummi akazia oder Gummi traganth enthalten, sowie Pastillen, die die Verbindung in einer inerten Grundlage, wie Gelatine und Glycerin oder Saccharose und Gummi akazia, enthalten, ein.
Pharmazeutische Zusammensetzungen, die für die parenterale Verabreichung geeignet sind, umfassen geeigneterweise sterile wässrige Zubereitungen einer Verbindung gemäß der vorliegenden Erfindung. Diese Zubereitungen werden vorzugsweise intravenös verabreicht, obgleich die Verabreichung auch durch die Maßnahmen einer subcutanen, intramuskulären oder intradermalen Injizierung bewirkt werden kann. Solche Zubereitungen können geeigneterweise dadurch hergestellt werden, dass die Verbindung mit Wasser vermischt wird, und dass die resultierende Lösung steril und gegenüber Blut isotonisch gemacht wird. Injizierbare Zubereitungen gemäß der Erfindung werden im Allgemeinen von etwa 0,1 bis 5% G/G der hierin beschriebenen Verbindung enthalten.
Pharmazeutische Zusammensetzungen, die für die rektale Verabreichung geeignet sind, werden vorzugsweise als Einheitsdosis-Suppositorien präsentiert. Diese können dadurch hergestellt werden, dass eine Verbindung gemäß der vorliegenden Erfindung mit einem oder mehreren herkömmlichen festen Trägern, wie z. B. Kakaobutter, vermischt wird, und dass dann das resultierende Gemisch verformt wird.
Pharmazeutische Zusammensetzungen, die für die topische Verabreichung an die Haut geeignet sind, nehmen vorzugsweise die Form einer Salbe, einer Creme, einer Lotion, einer Paste, eines Gels, eines Sprays, eines Aerosols oder eines Öls ein. Geeignete Träger schließen Petroleumgel (z. B. Vaselin), Lanolin, Polyethylenglykole, Alkohole, und Kombinationen von zwei oder mehreren der genannten Materialien, ein. Der Wirkstoff ist im Allgemeinen in einer Konzentration von 0,1 bis 50% G/G der Zusammensetzung, z. B. von 0,5 bis 2%, vorhanden.
Es ist auch eine transdermale Verabreichung möglich. Pharmazeutische Zusammensetzungen, die für die transdermale Verabreichung geeignet sind, können als diskrete Pflaster präsentiert werden, die so angepasst sind, dass sie in einem innigen Kontakt mit der Haut des Empfängers über einen verlängerten Zeitraum verbleiben. Solche Pflaster enthalten geeigneterweise eine Verbindung gemäß der vorliegenden Erfindung in einer gegebenenfalls gepufferten wässrigen Lösung, aufgelöst und/oder dispergiert in einem Klebstoff oder dispergiert in einem Polymeren. Eine geeignete Konzentration des Wirkstoffs beträgt etwa 1% bis 35%, vorzugsweise etwa 3% bis 15%. Als eine besondere Möglichkeit kann die Verbindung von dem Pflaster durch Elektrotransport oder durch Iontophorese abgegeben werden, wie es z. B. in Pharmaceutical Research, 3(6), 318 (1986), beschrieben wird.
In jedem Falle wird die Menge des Wirkstoffs, die mit den Trägermaterialien kombiniert werden kann um eine Einzeldosisform für die Verabreichung zu erzeugen, in Abhängigkeit von den jeweils behandelten Patienten und der besonderen Art und Weise der Verabreichung, abhängen.
Die festen Dosierungsformen für die orale Verabreichung, mit Einschluss von Kapseln, Tabletten, Pillen, Pulvern, Gelkapseln und Granulaten, wie sie oben beschrieben wurden, umfassen eine oder mehrere Verbindungen, die für die Zwecke der vorliegenden Erfindung geeignet sind, im Gemisch mit mindestens einem inerten Verdünnungsmittel, wie Saccharose, Lactose oder Stärke. Solche Dosierungsformen können, wie in der normalen Praxis, auch zusätzliche Substanzen, die anders sind als die inerten Verdünnungsmittel, z. B. Schmiermittel, wie Magnesiumstearat, oder Solubilisierungsmittel, wie Cyclodextrine, enthalten. Im Falle von Kapseln, Tabletten, Pulvern, Granulaten, Gelkapseln und Pillen können die Dosierungsformen auch Puffermittel enthalten. Tabletten und Pillen können weiterhin mit magensaftresistenten Überzügen hergestellt werden.
Flüssige Dosierungsformen für die orale Verabreichung können pharmazeutisch annehmbare Emulsionen, Lösungen, Suspensionen, Sirups und Elixiere, enthaltend inerte Verdünnungsmittel, die üblicherweise auf diesem Gebiet verwendet werden, wie Wasser, einschließen. Solche Zusammensetzungen können auch Adjuvantien, wie Befeuchtungsmittel, Emulgierungsmittel und Suspendierungsmittel und Süßungsmittel, Aromatisierungsmittel und Duftstoffe, enthalten.
Injizierbare Zubereitungen, z. B. sterile injizierbare wässrige oder ölartige Suspensionen, können entsprechend dem bekannten Stand der Technik unter Verwendung von geeigneten Dispergierungsmitteln oder Absetzungsmitteln und Suspendierungsmittel formuliert werden. Die sterile injizierbare Zubereitung kann auch eine sterile injizierbare Lösung oder Suspension in einem nicht-toxischen, parenteral annehmbaren Verdünnungsmittel oder Lösungsmittel, z. B. als Lösung in 1,3-Butandiol, sein. Unter den annehmbaren Trägern und Lösungsmitteln, die verwendet werden können, befinden sich Wasser, Ringer'sche Lösung und eine isotonische Natriumchloridlösung. Weiterhin werden sterile, nichtflüssige Öle herkömmlicherweise als ein Lösungsmittel oder als ein Suspendierungsmittel eingesetzt. Zu diesem Zweck kann ein beliebiges geeignetes, mildes, nichtflüssiges Öl, mit Einschluss von synthetischen Mono- oder Diglyceriden, verwendet werden. Weiterhin finden Fettsäuren, wie Ölsäure, bei der Herstellung von injizierbaren Zubereitungen Verwendung.
Die pharmazeutisch annehmbaren Träger schließen alle der vorgenannten, und dergleichen, ein.
Bei der Kombinationstherapie kann die Verabreichung von zwei oder mehreren der erfindungsgemäß geeigneten therapeutischen Mittel sequenziell in getrennten Zubereitungen erfolgen oder sie kann durch gleichzeitige Verabreichung in einer einzigen Zubereitung oder in getrennten Zubereitungen bewerkstelligt werden. Die Verabreichung kann auf oralem Weg oder durch intravenöse, intramuskuläre oder subcutane Injektionen bewerkstelligt werden. Die Zubereitung kann auch in Form eines Bolus oder in der Form einer wässrigen oder nicht-wässrigen isotonischen, sterilen Lösung zur Injektion oder von Suspensionen vorliegen. Diese Lösungen und Suspensionen können aus sterilen Pulvern oder Granulaten hergestellt werden, die einen oder mehrere pharmazeutisch annehmbare Träger oder ein oder mehrere Verdünnungsmittel oder ein Bindemittel, wie Gelatine oder Hydroxypropylmethylcellulose, zusammen mit einem oder mehreren der Materialien, Schmiermittel, Konservierungsmittel, Tenside oder Dispergierungsmittel, enthalten.
Für die orale Verabreichung kann die pharmazeutische Zusammensetzung beispielsweise in der Form einer Tablette, einer Kapsel, einer Suspension oder einer Flüssigkeit vorliegen. Kapseln, Tabletten, etc., können durch im Stand der Technik gut bekannte herkömmliche Methoden hergestellt werden. Die pharmazeutische Zusammensetzung wird vorzugsweise in Form einer Dosiseinheit hergestellt, die eine bestimmte Menge des aktiven Bestandteils oder der aktiven Bestandteile enthält. Beispiele für solche Dosierungseinheiten sind Tabletten oder Kapseln. Diese können vorteilhafterweise eine oder mehrere therapeutische Verbindungen in den oben beschriebenen Mengen enthalten. So kann z. B. im Falle eines IBAT-Hemmers die Dosis im Bereich von etwa 0,01 mg/Tag bis etwa 500 mg/Tag oder einer beliebigen anderen Dosierung, je nach dem speziellen Inhibitor, liegen, wie es im Stand der Technik bekannt ist.
Die Wirkstoffe können auch durch Injektion als eine Zusammensetzung verabreicht werden, in der z. B. Kochsalzlösung, Dextrose oder Wasser als geeigneter Träger verwendet wird. Eine geeignete tägliche Dosis jedes therapeutischen Wirkstoffs ist eine solche, die den gleichen Blut-Serumspiegel, wie durch orale Verabreichung erzeugt, wie oben beschrieben erreicht.
Die therapeutischen Verbindungen können weiterhin durch jede beliebige Kombination des oral/oralen, oral/parenteralen oder parenteralen/parenteralen Weg verabreicht werden.
Pharmazeutische Zusammensetzungen für die Verwendung bei den Behandlungsmethoden gemäß der vorliegenden Erfindung können in oraler Form oder durch intravenöse Verabreichung verabreicht werden. Die orale Verabreichung der Kombinationstherapie wird bevorzugt. Die Dosierung für die orale Verabreichung kann innerhalb eines Dosierungsschemas sein, das eine einzige tägliche Dosis oder eine einzige Dosis jeden zweiten Tag oder mehrfache, im Abstand angeordnete Dosen den Tag hindurch vorsieht. Die therapeutischen Verbindungen, die die Kombinationstherapie herstellen, können gleichzeitig entweder in kombinierter Dosierungsform oder in getrennten Dosierungsformen, die für die im Wesentlichen gleichzeitige orale Verabreichung beabsichtigt sind, verabreicht werden. Die therapeutischen Verbindungen, die die Kombinationstherapie ausmachen, können auch sequenziell verabreicht werden, wobei jede therapeutische Verbindung durch ein Dosierungsschema verabreicht wird, das eine Zwei-Stufen-Aufnahme vorschreibt. Somit kann ein Dosierungsschema eine sequenzielle Verabreichung der therapeutischen Verbindungen mit einer im Abstand angeordneten Aufnahme der getrennten Wirkstoffe vorschreiben. Die Zeitspanne zwischen den mehrfachen Aufnahmestufen kann im Bereich von wenigen Minuten bis zu mehreren Stunden, in Abhängigkeit von den Eigenschaften jeder therapeutischen Verbindung, wie der Wirksamkeit, der Löslichkeit, der Bioverfügbarkeit, der Plasma-Halbwertszeit und des kinetischen Profils der therapeutischen Verbindung, sowie in Abhängigkeit von dem Effekt der Nahrungsaufnahme und dem Alter und dem Zustand des Patienten, liegen. Eine ungefähre Variierung der Zielmolekülkonzentration kann ebenfalls das optimale Dosisintervall bestimmen. Die therapeutischen Verbindungen der kombinierten Therapie, ob sie nun gleichzeitig, im Wesentlichen gleichzeitig oder sequenziell verabreicht werden, können ein Behandlungsschema beinhalten, das die Verabreichung einer therapeutischen Verbindung auf oralem Weg und einer weiteren therapeutischen Verbindung auf intravenösem Weg vorschreibt. Ungeachtet, ob die therapeutischen Verbindungen der kombinierten Therapie auf dem oralen oder intravenösen Weg, getrennt oder miteinander verabreicht werden, wird jede solche therapeutische Verbindung in einer geeigneten pharmazeutischen Zubereitung von pharmazeutisch annehmbaren Exzipientien, Verdünnungsmitteln oder anderen Formulierungskomponenten enthalten sein. Beispiele für geeignete, pharmazeutisch annehmbare Zubereitungen, die die therapeutischen Verbindungen für die orale Verabreichung enthalten, sind obenstehend angegeben.
Behandlungs-Dosierungsschema
Das Behandlungsschema zur Verhinderung, zur Milderung oder zur Verbesserung eines Krankheitszustands mit einer Hyperlipidämie als einem Element der Erkrankung, z. B. von Atherosklerose, oder zum Schutz gegen hohe Cholesterin-Plasma- oder -Blutspiegel oder zur weiteren Behandlung davon, mit den Verbindungen und/oder Zusammensetzungen gemäß der vorliegenden Erfindung wird gemäß einer Anzahl von Faktoren ausgewählt. Diese schließen den Typ, das Alter, das Gewicht, das Geschlecht, die Ernährung und den medizinischen Zustand des Patienten, den Schweregrad der Erkrankung, den Verabreichungsweg, pharmakologische Erwägungen, wie die Aktivität, die Wirksamkeit, die Pharmakokinetik und die toxiologischen Profile der jeweils verwendeten Verbindung, entweder bei Verwendung eines Arzneimittel-Zuführungs-systems oder als Verabreichung der Verbindung als Teil einer Arzneimittelkombination, ein. Somit kann das Dosierungsschema, das tatsächlich angewendet wird, im weiten Umfang variieren, und es kann daher von den oben angegebenen bevorzugten Dosierungsschemen abweichen.
Die Anfangsbehandlung eines Patienten, der an einem hyperlipidämischen Zustand leidet, kann mit den oben angegebenen Dosierungen beginnen. Die Behandlung sollte im Allgemeinen, wie erforderlich, über einen Zeitraum von mehreren Wochen bis mehreren Monaten oder Jahren, bis der Zustand der hyperlipidämischen Erkrankung kontrolliert oder eliminiert worden ist, fortgeführt werden. Patienten, die eine Behandlung mit den Verbindungen oder Zusammensetzungen, die hierin beschrieben sind, erfahren, können routinemäßig überwacht werden, indem z. B. die Serum-LDL- und Gesamt-Cholesterinspiegel nach im Stand der Technik gut bekannten Methoden gemessen werden um die Wirksamkeit der Kombinationstherapie festzustellen. Eine kontinuierliche Analyse von solchen Daten gestattet die Modifzierung des Behandlungsschemas während der Therapie, so dass optimale wirksame Mengen jedes Typs der therapeutischen Verbindung zu einem beliebigen Zeitpunkt verabreicht werden, und so, dass die Dauer der Behandlung bestimmt werden kann. Auf diese Weise kann das Behandlungsschema/Dosierungsschema rational im Verlauf der Therapie so modifiziert werden, dass die niedrigste Menge der therapeutischen Verbindungen verabreicht wird, die miteinander eine zufriedenstellende Wirksamkeit zeigt, und dass die Verabreichung so lange weitergeführt wird, wie es notwendig ist um den hyperlipidämischen Zustand erfolgreich zu behandeln.
Ein potentieller Vorteil der hierin beschriebenen Kombination kann eine Verringerung der Menge jeder beliebigen therapeutischen Verbindung oder aller therapeutischen Verbindungen sein, die bei der Behandlung von hyperlipidämischen Zuständen, wie Atherosklerose und Hypercholesterinämie, wirksam sind, sein.
Eine der mehreren Ausführungsformen gemäß der vorliegenden Erfindung stellt eine Kombination zur Verfügung, die die Verwendung einer ersten Menge eines IBAT-Hemmers und einer zweiten Menge einer das mikrosomale Triglycerid-Transferprotein hemmenden Verbindung zur Herstellung eines Medikaments zur Prophylaxe oder Behandlung von Hyperlipidämie oder Atherosklerose umfasst, wobei die erste Menge und die zweite Menge miteinander eine gegen einen hyperlipidämischen Zustand wirksame Menge oder eine gegen einen atherosklerotischen Zustand wirksame Menge der Verbindungen umfassen.
Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform ist der IBAT-Hemmer ein Benzothiepin-IBAT-Hemmer. Gemäß einer weiteren bevorzugten Ausführungsform ist der IBAT-Hemmer ein Benzothiazepin-IBAT-Hemmer. Gemäß einer weiteren bevorzugten Ausführungsform ist der IBAT-Hemmer ein Naphthalin-IBAT-Hemmer.
Die Ausfiührungsformen der vorliegenden Erfindung können eine Kombinationstherapie umfassen, bei der zwei oder mehrere der hierin beschriebenen oder genannten therapeutischen Verbindungen verwendet werden. Die Kombinationstherapie kann zwei oder mehrere therapeutische Verbindungen aus verschiedenen Klassen der Chemie umfassen.
Therapeutische Kombinationen können mehr als zwei therapeutische Verbindungen umfassen. So können z. B. zwei oder mehrere therapeutische Verbindungen aus der gleichen Klasse der Chemie die Therapie umfassen, z. B. eine Kombinationstherapie, umfassend zwei oder mehrere IBAT-Hemmer.
Eine weitere Ausführungsform der vorliegenden Erfindung umfasst die Verwendung von beliebigen der hierin beschriebenen kardiovaskulären Kombinationstherapien für die Prophylaxe oder Behandlung von Hypercholesterinämie oder Atherosklerose.
Die folgenden nicht-einschränkenden Beispiele dienen dazu, die verschiedenen Aspekte der vorliegenden Erfindung zu erläutern.
Alle der von Wetterau et al. (Id.) beschriebenen MTP-Hemmerverbindungen können in den Kombinationen gemäß der vorliegenden Erfindung verwendet werden, wobei die Kombination eine erste Menge einer den ilealen Gallensäuretransport hemmenden Verbindung und eine zweite Menge einer das mikrosomale Triglycerid-Transferprotein hemmenden Verbindung umfasst, wobei die erste und die zweite Menge zusammen eine gegen einen hyperlipidämischen Zustand wirksame Menge, eine gegen einen atherosklerotischen Zustand wirksame Menge, eine gegen einen hypercholesterinämischen Zustand wirksame Menge oder eine gegen einen Bluthochdruck-Zustand wirksame Menge der Verbindungen umfassen. Der IBAT-Hemmer in den erfindungsgemäßen Ausführungsformen ist vorzugsweise ein Benzothiepin-IBAT-Hemmer. Gemäß einer weiteren bevorzugten Ausführungsform ist der IBAT-Hemmer ein Benzothiazepin-IBAT-Hemmer. Gemäß einer weiteren bevorzugten Ausführungsform ist der IBAT-Hemmer ein Naphthalin-IBAT-Hemmer. Der IBAT-Hemmer kann ohne Beschränkung eine beliebige oder eine Kombination der Verbindungen, aufgelistet in Tabelle 1, sein.
Gemäß einer weiteren Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung ein Verfahren zur Prophylaxe oder Behandlung eines hyperlipidämischen Zustands oder einer Störung in einem Säugetier zur Verfügung, die die Verabreichung einer ersten Menge einer den ilealen Gallensäuretransport hemmenden Verbindung und einer zweiten Menge einer das mikrosomale Triglycerid-Transferprotein hemmenden Verbindung umfasst, wobei die erste Menge und die zweite Menge zusammen eine gegen einen hyperlipidämischen Zustand wirksame Menge, eine gegen einen atherosklerotischen Zustand wirksame Menge oder eine gegen einen hypercholesterinämischen Zustand wirksame Menge der Verbindung umfassen.
Gemäß einer weiteren Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung einen Kit zum Erhalt eines therapeutischen Effekts an einem Säugetier zur Verfügung, der eine Menge einer den ilealen Gallensäuretransport hemmenden Verbindung in einer ersten Dosierungseinheitsform, eine Menge einer das mikrosomale Triglycerid-Transferprotein hemmenden Verbindung in einer zweiten Dosierungseinheitsform und eine Behältereinrichtung zur Aufnahme der genannten ersten und zweiten Dosierungseinheitsformen umfasst.
BIOLOGISCHE ASSAYS
Die Eignung der erfindungsgemäßen Kombinationen kann durch die folgenden Assays gezeigt werden. Diese Assays werden in vitro und in Tiermodellen durchgeführt, wobei im Wesentlichen Verfahrensweisen angewendet werden, von denen erkannt worden ist, dass sie die Eignung der vorliegenden Erfindung zeigen.
Assays mit Verbindungen, die nicht unter den Umfang der Ansprüche fallen, sind für Vergleichszwecke.
In vitro-Assay von Verbindungen, die die durch IBAT hervorgerufene Aufnahme von [¹⁴C]-Taurocholat (TC) in H14-Zellen hemmen
Nierenzellen von Baby-Hamstern (BHK), transfiziert mit der cDNA von menschlichem IBAT (H14-Zellen), werden mit 60.000 Zellen/Vertiefung in Top-Count-Gewebekulturplatten mit 96 Vertiefungen für Assays, die innerhalb von 24 Stunden nach dem Einsäen laufen, mit 30.000 Ze1len/Vertiefung für Assays, die innerhalb von 48 Stunden laufen, und mit 10.000 Zellen/Vertiefung für Assays, die innerhalb von 72 Stunden laufen, eingesät.
Am Tag des Assays wird die Zellmonoschicht vorsichtig einmal mit 100 μl Assaypuffer (Dulbecco's modifiziertes Eagle-Medium mit 4,5 g/l Glucose + 0,2% (G/V) fettsäurefreiem Rinderserumalbumin-(FAF)BSA) gewaschen. In jede Vertiefung werden 50 μl eines zweifachen Konzentrats der Testverbindung in dem Assaypuffer zusammen mit 50 μl von 6 μM [¹⁴C]-Taurocholat in dem Assaypuffer gegeben (Endkonzentration von 3 μM [¹⁴C]-Taurocholat). Die Zellkulturplatten werden 2 Stunden lang bei 37°C vor dem vorsichtigen Waschen jeder Vertiefung zweimal mit 100 μl 4°C Dulbecco's Phosphat-gepufferter Kochsalzlösung (PBS), enthaltend 0,2% (G/V) (FAF)BSA, inkubiert. Die Vertiefungen werden dann vorsichtig einmal mit 100 μl 4°C PBS ohne (FAF)BSA gewaschen. Zu jeweils 200 μl Flüssigkeit wird ein Szintillationszellfluid gegeben, und die Platten werden wärmeversiegelt und 30 Minuten lang bei Raumtemperatur geschüttelt, bevor die Menge der Radioaktivität in jeder Vertiefung mit einem Packard Top-Count-Instrument gemessen wird.
In vitro-Assay von Verbindungen, die die Aufnahme von [¹⁴C]-Alanin hemmen
Der Alanin-Aufnahme-Assay kann in identischer Weise wie der Taurocholat-Assay mit der Ausnahme durchgeführt werden, dass markiertes Alanin anstelle des markierten Taurocholats eingesetzt wird.
In vivo-Assay von Verbindungen, die die ileale Aufnahme des [¹⁴C]-Taurocholats in der Galle von Ratten hemmen
(Vergleiche "Metabolism von 3α,7β-Dihydroxy-7α-methyl-5β-cholansäure und 3α,7β-Dihydroxy-7α-methyl-5β-cholansäure in Hamstern" in Biochimica et Biophysica Acta, 833, 196–202 (1985) von Une et al.).
Männliche Wistar-Ratten (200–300 g) werden mit 100 mg/kg Inactin anästhesiert. Die Gallengänge werden mit einem Rohr aus PE10 mit einer Länge von 10'' kanüliert. Der Dünndarm wird freigelegt und auf ein Gazekissen ausgelegt. Eine Kanüle (mit einem Luer-Verschluss von 1/8'', verjüngter negativer Adapter) wird bei 12 cm von der Verbindung des Dünndarms mit dem Cecum eingesetzt. Ein Schlitz wird bei 4 cm ab der gleichen Verbindung (unter Verwendung von 8 cm Länge Ileum) gemacht. 20 ml warme Dulbecco's Phosphatgepufferte Kochsalzlösung, pH 6,5 (PBS) wird dazu verwendet um das Darmsegment auszuspülen. Die distale Öffnung wird mit einem Siliconschlauch mit einer Länge von 20 cm (0,02" I.D. × 0,037" O. D.) kanüliert. Die proximale Kanüle wird auf einer peristaltischen Pumpe aufgewickelt, und der Dünndarm wird 20 Minuten lang mit warmem PBS bei 0,25 ml/min gewaschen. Die Temperatur des Darmsegments wird kontinuierlich überwacht. Am Beginn des Experiments werden 2,0 ml Kontrollprobe ([¹⁴C]-Taurocholat @ 0,05 mCi/ml mit 5 mM nichtradiomarkiertem Taurocholat) in das Darmsegment mittels einer Spritze mit 3 ml eingebracht. Es wird mit dem Sammeln der Gallenprobe begonnen. Die Kontrollprobe wird mit einer Geschwindigkeit von 0,25 ml/min 21 min lang infundiert. Die Fraktionen der Galleproben werden alle 3 Minuten für die ersten 27 Minuten der Verfahrensweise gesammelt. Nach der 21. Minute der Probeinfusion wird die ileale Schleife mit 20 ml warmer PBS (unter Verwendung einer Spritze mit 30 ml) herausgewaschen, und dann wird die Schleife 21 Minuten lang mit warmer PBS mit 0,25 ml/min gewaschen. Es wird eine zweite Perfusion, wie oben beschrieben, begonnen, wobei jedoch die Testverbindung verabreicht wird (21-minütige Verabreichung, gefolgt von einem 21-minütigen Herauswaschen) und die Galle alle 3 Minuten lang über die ersten 27 min Proben abgenommen wird. Erforderlichenfalls wird eine dritte Perfusion, wie oben beschrieben, durchgeführt, die typischerweise die Kontrollprobe enthält.
Messung der hepatischen Cholesterin-Konzentration (HEPATIC CHOL)
Lebergewebe wird abgewogen und in Chlorofom : Methanol (2 : 1) homogenisiert. Nach der Homogenisierung und der Zentrifugierung wird das überstehende Produkt abgetrennt und unter Stickstoff getrocknet. Der Rückstand wird in Isopropanol aufgelöst, und der Cholesteringehalt wird enzymatisch gemessen, wobei eine Kombination von Cholsterinoxidase und Peroxidase, wie von Allain, C. A., et al., Clin. Chem., 20, 470 (1974), beschrieben, verwendet wird.
Bestimmung von Serum-Cholesterin (SER. CHOL, HDL-CHOL, TGI und VLDL + LDL)
Das Gesamt-Serumcholesterin (SER. CHOL) wird enzymatisch unter Verwendung eines handelsüblichen Kits der Firma Wako Fine Chemicals (Richmond, VA) gemessen. Das HDL-Cholesterin (HDL-CHOL) wird unter Verwendung des gleichen Kits nach Ausfällung von VLDL und LDL mit einem HDL-Cholesterin-Reagens von Sigma Chemical Co., Katalog Nr.
352–3 (Dextransulfat-Methode) gemessen. Die Serumgesamttriglyceride (Vergleichswert) (TGI) werden enzymatisch mit dem GPO-Trinder von der Firma Sigma Chemical Co., Katalog Nr. 337-B, bestimmt. Die VLDL- und LDL-Cholesterin-Konzentrationen (VLDL + LDL) werden als Differenz zwischen dem Gesamt- und dem HDL-Cholesterin errechnet.
Messung der hepatischen Cholesterin-7α-Hydrozylase-Aktivität (7a-OHase)
Hepatische Mikrosomen werden hergestellt, indem Leberproben in einem Phosphat/Saccharose-Puffer homogenisiert werden und anschließend einer zentrifugalen Trennung unterworfen werden. Das am Schluss erhaltene pelletisierte Material wird in Puffer resuspendiert, und ein aliquoter Teil wird auf die Cholesterin-7α-hydroxylase-Aktivität durch 5 Minuten langes Inkubieren bei 37°C in Gegenwart von NADPH untersucht. Nach der Extraktion in Petrolether wird das organische Lösungsmittel abgedampft, und der Rückstand wird in Acetonitril/Methanol aufgelöst. Das enzymatische Produkt wird in der Weise getrennt, dass ein aliquoter Teil des Extrakts auf eine C₁₈-Umkehrphasen-HPLC-Säule aufgespritzt wird, und dass das eluierte Material quantitativ erfasst wird, wobei eine UV-Erfassung bei 240 nm angewendet wird (Referenz: Horton, J. D., et al. (1994), J. Clin. Invest. 93, 2084).
Assay unter Anwendung einer Sonde bei Ratten
Männlichen Wistar-Ratten (275–300 g) werden IBAT-Hemmer unter Verwendung einer oralen Verabreichungsweise mittels einer Sonde verabreicht. Das Arzneimittel oder der Träger (0,2% TWEEN 80 in Wasser) wird einmal am Tag (9:00–10:00 a.m.) 4 Tage lang mit variierenden Dosierungen bei einem Endvolumen von 2 mg/kg Körpergewicht verabreicht. (TWEEN 80 ist ein 20-molares Polyethylenoxid-Sorbitanmonooleattensid, hergestellt von der Firma ICI Specialty Chemicals, Wilmington, Delaware, U.S.A.). Die gesamten Stuhlproben werden während der letzten 48 Stunden der Behandlungsperiode gesammelt und auf den Gallensäuregehalt analysiert, wobei ein wie unten stehend beschriebener enzymatischer Assay verwendet wird. Die Wirksamkeit der Verbindung wird durch Vergleich der Erhöhung der Stuhlgallensäure (FBA)-Konzentration in den behandelten Ratten zu der mittleren FBA-Konzentration der Ratten in der Trägergruppe bestimmt.
Messung der gesamten Stuhlgallensäure-Konzentration (FBA)
Die Gesamt-Stuhlabgabe der individuell gehaltenen Ratten wird 24 oder 48 Stunden lang gesammelt, unter einem Stickstoffstrom getrocknet, pulverisiert und gewogen. Es werden ungefähr 0,1 Gramm abgewogen und in ein organisches Lösungsmittel (Butanol/Wasser) extrahiert. Nach dem Trennen und dem Trocknen wird der Rückstand in Methanol aufgelöst, und die Menge der vorhandenen Gallensäure wird enzymatisch gemessen, wobei eine 3α-Hydroxysteroid-Dehyrogenase-Reaktion mit Gallensäuren zur Verringerung von NAD angewendet wird (vergleiche Mashige, F., et al. Clin. Chem., 27, 1352 (1981)).
[³H]-Taurocholat-Aufnahme in Kaninchen-Bürstensaum-Membranbläschen (BBMV)
Ileale Bürstensaum-Membranen von Kaninchen werden aus der gefrorenen ilealen Mucosa durch die von Malathi et al. (Biochimica Biophysica Acta, 554, 259 (1979)) beschriebene Calcium-Ausfällungsmethode hergestellt. Die Methode der Messung des Taurocholats ist im Wesentlichen so, wie von Kramer et al. (Biochimica Biophysica Acta, 1111, 93 (1992)) beschrieben, mit der Ausnahme, dass das Assayvolumen 200 μl anstelle von 100 μl beträgt. Kurz gesagt, bei Raumtemperatur werden 190 μl einer Lösung, enthaltend 2 μM [³H]-Taurocholat (0,75 μCi), 20 mM Tris, 100 mM NaCl, 100 mM Mannit mit einem pH-Wert von 7,4, 5 s lang mit 10 μl Bürstensaum-Membranbläschen (60–120 μg Protein) inkubiert. Die Inkubation wird durch Zugabe der BBMV unter heftigem Schütteln initiiert, und die Reaktion wird durch Zugabe von 5 ml eiskaltem Puffer (20 mM Hepes-Tris, 150 mM KCl) abgebrochen. Dann wird sofort durch ein Nylonfilter (Poren 0,2 μm) filtriert, und es wird mit 5 ml eines Stop-Puffers gewaschen.
Acyl-CoA; Cholesterin-Acyl-Transferase (ACAT)
Hamsterleber- und Rattenintestinalmikrosomen werden aus dem Gewebe, wie vorstehend beschrieben (J. Biol. Chem., 255, 9098 (1980)), hergestellt und als Quelle für das ACAT-Enzym verwendet. Der Assay besteht aus einer Inkubation von 2,0 ml, enthaltend 24 μM Oleoyl-CoA (0,05 μCi) in 50 mM Natriumphosphat, 2 mM DTT-Puffer mit einem pH-Wert von 7,4, enthaltend 0,25% BSA, und 200 μg mikrosomales Protein. Der Assay wird durch Zugabe von Oleoyl-CoA initiiert. Die Reaktion läuft 5 Minuten lang bei 37°C ab, und sie wird durch Zugabe von 8,0 ml Chloroform/Methanol (2 : 1) beendet. Zu dem Extrakt werden 125 μg Cholesterinoleat in Chloroform/Methanol (2 : 1), wirkend als Träger, gegeben, und die organischen und wässrigen Phasen des Extrakts werden durch Zentrifugieren nach gründlichem, heftigen Schütteln getrennt. Die Chloroform-Phase wird zur Trockene aufgenommen und dann auf eine Silicagelplatte 60 TLC aufgetüpfelt, und es wird in Hexan/Ethylether (9 : 1) entwickelt. Die gebildete Menge des Cholesterinesters wird dadurch bestimmt, dass die Menge der in dem Cholesterinoleat-Fleck auf der TLC-Platte eingearbeiteten Menge der Radioaktivität mit einem Packard-Instaimager gemessen wird.
Hunde-Modell für die Bewertung von Lipid-senkenden Arzneimitteln
Männliche Beagle-Hunde, erhalten von einem Verkäufer, wie den Marshall-Farmen, und mit einem Gewicht von 6–12 kg, werden einmal am Tag zwei Stunden lang gefüttert. Sie erhalten Wasser ad libitum. Die Hunde können beliebig Dosierungsgruppen, bestehend aus jeweils 6 bis 12 Hunden, zugeordnet werden, wie z. B.: Träger, i. g.; 1 mg/kg, i. g.; 2 mg/kg, i. g.; 4 mg/kg, i. g.; 2 mg/kg, p. o. (Pulver in Kapseln). Eine intragastrale Verabreichung eines therapeutischen Materials, gelöst in einer wässrigen Lösung (z. B. einer TWEEN 80-Lösung mit 0,2% [Polyoxyethylenmonooleat, Sigma Chemical Co., St. Louis, MO], kann unter Verwendung einer (Magen-)Sonde erfolgen. Vor dem Beginn der Verabreichung können Blutproben von der kephali schen Vene am Morgen vor dem Füttern entnommen werden um das Serum-Cholesterin (Gesamt- und HDL) und die Triglyceride zu bestimmen. Über mehrere aufeinanderfolgende Tage erfolgt eine Verabreichung an die Tiere am Morgen vor dem Füttern. Die Tiere dürfen 2 Stunden lang fressen, bevor zurückbleibendes Futter entfernt wird. Die Fäzes werden über eine 2-tägige Periode am Ende der Studie gesammelt, und sie können auf den Gallensäure- oder Lipidgehalt analysiert werden. Blutproben werden ebenfalls am Ende der Behandlungsperiode zum Vergleich mit den Serum-Lipidspiegeln vor der Studie abgenommen. Die statistische Signifikanz wird unter Anwendung eines Standard-Student-T-Test mit p < .05 bestimmt.
Messung des Serum-Lipids von Hunden
Blut wird aus der kephalischen Vene von Hunden, die fasten gelassen wurden, in Serum-Trennröhrchen (Vacutainer SST, Becton Dickinson und Co., Franklin Lakes, NJ) gesammelt. Das Blut wird bei 2000 UpM 20 Minuten lang zentrifugiert, und das Serum wird dekantiert.
Das Gesamt-Cholesterin kann in einem Format mit 96 Vertiefungen unter Verwendung eines enzymatischen diagnostischen Kits von Wako (Cholesterin CII) (Wako Chemicals, Richmond, VA) gemessen werden, wobei die Cholesterin-Oxidasereduktion zur Erzeugung von Wasserstoffperoxid das colorimetrisch gemessen wird, angewendet wird. Eine Standardkurve von 0,5 bis 10 μg Cholesterin wird in den ersten zwei Säulen der Platte hergestellt. Die Serumproben (20–40 μl, in Abhängigkeit von der erwarteten Lipidkonzentration) oder bekannte Serum-Kontrollproben werden dem Duplikat zugesetzt um die Vertiefungen zu trennen. Wasser wird zugegeben um das Volumen in jeder Vertiefung auf 100 μl zu bringen. Ein aliquoter Teil mit 100 μl eines Farbregenzes wird in jede Vertiefung gegeben, und die Platten werden bei 500 nm nach einer 15-minütigen Inkubation bei 37°C abgelesen.
Das HDL-Cholesterin kann unter Verwendung des Sigma-Kits Nr. 352–3 (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO), der Dextransulfat und Mg-Ionen zur selektiven Ausfällung von LDL und VLDL verwendet, bestimmt werden. Ein Volumen von 150 μl jeder Serumprobe wird in individuelle Mikrozentrifugierröhrchen gegeben, gefolgt von 15 μl HDL-Cholesterinreagens (Sigma 352-3). Die Proben werden vermischt und 5 Minuten lang bei 5000 UpM zentrifugiert. Ein aliquoter Teil mit 50 μl des überstehenden Produkts wird dann mit 200 μl Kochsalzlösung gemischt und unter Verwendung der gleichen Verfahrensweise, wie für die Messung des gesamten Cholesterins, analysiert.
Die Triglyceride werden unter Verwendung des Sigma-Kits Nr. 337 in einem Plattenformat mit 96 Vertiefungen gemessen. Bei dieser Verfahrensweise wird das Glycerin nach seiner Freisetzung durch Umsetzung der Triglyceride mit Lipoproteinlipase gemessen. Standardlösungen von Glycerin (Sigma 339–11) im Bereich von 1 bis 24 μg werden dazu verwendet um die Standardkurve zu erstellen. Serumproben (20–40 μl, in Abhängigkeit von der erwarteten Lipidkonzentration) werden zu den Vertiefungen im Duplikat gegeben. Wasser wird zugegeben um das Volumen in jeder Vertiefung auf 100 μl zu bringen, und es werden auch 100 μl Farbre agens zu jeder Vertiefung zugesetzt. Nach dem Vermischen und einer 15-minütigen Inkubation werden die Platten bei 540 nm abgelesen, und die Triglyceridwerte werden aus der Standardkurve errechnet. Eine Replikatplatte wird gleichfalls laufen gelassen, wobei ein Blindenzymreagens verwendet wird um eine Korrektur bezüglich irgendwelcher endogener Glycerine in den Serumproben durchzuführen.
Messung der Hundestuhl-Gallensäure
Stuhlproben können gesammelt werden um die Stuhlgallensäure-Konzentration (FBA) bei jedem Tier zu bestimmen. Die Stuhlsammlungen können während der letzten 48 Stunden der Studie über zwei aufeinanderfolgende Perioden mit 24 Stunden zwischen 9:00 Uhr und 10:00 Uhr an jedem Tag vor der Verabreichung und dem Füttern erfolgen. Das getrennte Produkt von zwei Tagessammelmengen von jedem Tier wird abgewogen, kombiniert und mit destilliertem Wasser in einer Verarbeitungsvorrichtung (Cuisinart) homogenisiert um eine homogene Aufschlämmung herzustellen. Etwa 1,4 g des Homogenats werden mit einer Endkonzentration von 50% tert.-Butanol/destilliertem Wasser (2 : 0,6) 45 Minuten lang in einem Wasserbad von 37°C extrahiert und 13 Minuten lang bei 2000 × g zentrifugiert. Die Konzentration der Gallensäuren (mmol/Tag) kann unter Verwendung eines enzymatischen Assaysystems mit 96 Vertiefungen (1,2) bestimmt werden. Ein aliquoter Teil von 20 μl des Stuhlextrakts wird zu zwei Sätzen von jedem von Dreifachvertiefungen in einer Assayplatte mit 96 Vertiefungen gegeben. Eine standardisierte Natriumtaurocholatlösung und eine standardisierte Stuhlextraktlösung (zuvor aus gepoolten Proben hergestellt und auf ihre Gallensäurekonzentration charakterisiert) wird gleichfalls zur Kontrolle der Assayqualität analysiert. Aliquote Teile von 20 μl von Natriumtaurocholat, serienmäßig verdünnt um eine Standardkurve zu erstellen, werden in ähnlicher Weise zu zwei Sätzen von Dreifachvertiefungen gegeben. 230 μl eines Reaktionsgemisches, enthaltend 1 M Hydrazinhydrat, 0,1 M Pyrophosphat und 0,46 mg/ml NAD, werden in jede Vertiefung gegeben. Ein aliquoter Teil von 50 μl eines 3a-Hydroxysteroid-Dehydrogenaseenzyms (HSD; 0,8 Einheiten/ml) oder eines Assaypuffers (0,1 M Natriumpyrophosphat) werden dann zu einem der zwei Sätze der Triplikate gegeben. Alle Reagentien können von der Firma Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, erhalten werden. Nach einer 60-minütigen Inkubation bei Raumtemperatur wird die optische Dichte bei 340 nm gemessen, und der Mittelwert jedes Satzes der Dreifachproben wird errechnet. Die Differenz der optischen Dichte ± HSD-Enzym wird dazu verwendet um die Gallensäurekonzentration (mM) jeder Probe auf der Basis der Natriumtaurocholat-Standardkurve zu bestimmen. Die Gallensäurekonzentration des Extrakts, das Gewicht des Stuhlhomogenats (Gramm) und das Körpergewicht des Tieres werden dazu verwendet um die entsprechende FBA-Konzentration in mmol/kg/Tag für jedes Tier zu errechnen. Die mittlere FBA-Konzentration (mmol/kg/Tag) der Trägergruppe wird von der FBA-Konzentration jeder Behandlungsgruppe abgezogen um die Erhöhung (delta-Wert) der FBA-Konzentration als Ergebnis der Behandlung zu bestimmen.
Verseifung und Extraktion der neutralen Sterine im Stuhl von Hamstern
Im Allgemeinen wird eine Probe der getrockneten Fäzes direkt mit 0,3 N KOH/Methanol über einen Zeitraum von 1 Stunde verseift. Nach der Verseifung werden die Proben filtriert um Feststoffe zu entfernen. Die Proben werden zweimal mit Petrolether extrahiert, und die Extrakte werden kombiniert und unter Erhitzen und unter einem Strom von Stickstoffgas eingedampft. Die Probe kann mit einem Hewlett Packard-Modell 6890 GC mit einem Autosampler analysiert werden, wobei eine Kapillarkolonne mit 50 Meter HP-5 Ultra-2 mit einer Filmdicke von 0,33 μm, einem 0,32 ID, einem Spaltungsverhältnis von 100 : 1 und einem FID-Detektor verwendet werden.
Zur Herstellung der verseiften Proben werden Proben mit jeweils 0,25 g der getrockneten, gepulverten Fäzes in ein markiertes Röhrchen mit Schraubverschluss und den Abmessungen 20 × 150 mm überführt. Drei Milliliter 0,3 N KOH/MEOH (mit 7,5 ml 8 N (45%) KOH 200 ml Methanol der HPCL-Sorte) und 25 Mikroliter 20 mg/ml 5-alpha-Cholestan als innerer Standard werden zu den Röhrchen gegeben. Die Röhrchen werden dicht verkappt und heftig geschüttelt. Die Röhrchen werden in einen Reacti-Therm-Heizblock in einer Haube eingegeben und eine Stunde unter intermittierendem Mischen auf 70°C erhitzt.
Zur Herstellung der verseiften Standards wird jede Standard-Stammlösung mit 3 Milliliter 0,3 N KOH/MEOH und 25 Mikroliter 5-alpha-Cholestan vermischt. Die Standardproben werden verkappt, eine Stunde lang bei 70°C erhitzt und extrahiert. Der Standard 1 schließt eine Kombination von 40 Mikroliter von 20 mg/ml Stammlösungen von jedem von Stigmasterin, Coprostanol und beta-Sitosterol ein. Der Standard 2 ist eine Kombination aus einem Mikroliter 20 mg/ml Cholesterin (0,04 μg/μl) und 5 Mikroliter 20 mg/ml Sitostanol (0,2 μg/μl). Der Standard 3 ist eine Kombination aus 40 Mikroliter 20 mg/ml Cholesterin (1,5 μg/μl) und 200 Mikroliter 20 mg/ml Sitostanol (8,0 μg/μl).
Zur Herstellung der nicht-verseiften Standards werden die Standards in V-Gläschen mit einem Milliliter einpipettiert, und es werden 25 Mikroliter 5-alpha-Cholestan zugegeben. Die Standards werden zur Trockene in einem Reacti-Therm-Heizblock eingedampft, aus dem Block herausgenommen und abkühlen gelassen. Mehtylenchlorid (500 μl) wird zugegeben. Die Extrakte werden vermischt und durch Whatman-Anatop-Filter filtriert. Der Standard 1 schließt die Kombination von 40 μl 20 mg/ml Stammlösungen von jedem Stigmasterin, Coprostanol und beta-Sitosterol ein. Der Standard 2 schließt die Kombination von 5 Mikroliter 20 mg/ml Cholesterin (0,2 μg/μl) und 25 Mikroliter 20 mg/μl Sitostanol (1,0 μg/μl) ein. Der Standard 3 schließt die Kombination von 20 Mikroliter 20 mg/ml Cholesterin (0,8 μg/μl) und 100 Mikroliter 20 mg/ml Sitostanol (4,0 μg/μl) ein. Der Standard 4 schließt die Kombination von 80 Mikroliter 20 mg/ml Cholesterin (3,2 μg/μl) und 300 Mikroliter 20 mg/ml Sitostanol (12,0 μg/μl) ein.
Alle Röhrchen werden aus den Heizblöcken herausgenommen und abgekühlt. Jede verseifte Probe und der Standard werden durch eine spritzenlose Filtervorrichtung von Whatman (Autovial), 0,45 μm, PTFE (Teflon)-Membran, filtriert. Jedes Röhrchen wird mit 10 μl Petrol ether gewaschen, heftig geschüttelt und in die Filtervorrichtung gegeben. Der Kolben wird gedrückt um die Probe in ein sauberes Glasröhrchen mit 50 ml einzugeben. Weiterer Petrolether (10 ml) wird zu der Probe in dem 50 ml-Röhrchen gegeben, zusammen mit 2 ml Wasser. Jede Probe wird mit mäßiger Geschwindigkeit (ein zu schnelles Vermischen würde die Bildung von Emulsionen bewirken) 20 Sekunden lang geschüttelt. Nach dem Trennen der Schichten werden 2 ×7 ml der Petroletherphase entfernt und in Glasröhrchen mit den Abmessungen 16 × 125 Milliliter überführt. Die Proben werden ein weiteres Mal unter Zugabe von 10 ml Petrolether extrahiert, und es werden 8 ml entfernt, und die Extrakte jeder Probe werden kombiniert. Alle Röhrchen werden unter einem Strom von Stickstoffgas bei 70°C eingedampft. Der Rückstand jeder Probe wird quantitativ in konische Glasröhrchen mit 1,5 ml überführt, wobei 3 × 0,5 ml Waschungen mit Petrolether durchgeführt werden. Die Proben werden wiederum zur Trockne eingedampft. Nach Abkühlung der Gläschen auf Raumtemperatur werden 500 Mikroliter Methylenchlorid zugegeben. Alle Proben und Standards werden durch Whatman-Anotop-l0-Plus Spritzenfilter (0,2 μm, 10 mm) filtriert. Genügend Filtrat (ungefähr 300 Mikroliter) wird in Mikro-GC-Proberöhrchen gesammelt. Die Mikroröhrchen werden in Gläschen mit Schraubverschluss eingebracht und dicht verschlossen. Die Analyse erfolgt nach der Verfahrensweise von Hewlett Packard GC.
ASSAY AUF CETP-AKTIVITÄT IN MESCHLICHEM PLASMA (tritiierter Cholesterylester)
Blut wird von gesunden Versuchspersonen erhalten. Das Blut wird in Röhrchen, enthaltend EDTA (EDTA-Plasmapool) gesammelt. Der menschliche EDTA-Plasmapool, der zuvor bei –20°C gelagert wurde, wird bei Raumtemperatur aufgetaut und 5 Minuten lang zentrifugiert um irgendwelche teilchenförmige Stoffe zu entfernen. Tritiiertes HDL, das in der Cholesterylestergruppierung radiomarkiert ist ([³H]-CE-HDL), wie von Morton und Zilversmit (J. Biol. Chem., 256, 11992–95 (1981)) beschrieben, wird zu dem Plasma zu einer Endkonzentration von 25 μg/ml Cholesterin gegeben. Die Hemmverbindungen werden zu dem Plasma wie folgt gegeben: Gleiche Volumina von Plasma, enthaltend das [³H]-CE-HDL (396 μl), werden mittels einer Pipette in Mikroröhrchen (Titertube^®, Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) gegeben. Die Verbindungen, die gewöhnlich als Stammlösungen mit 20–50 mM in DMSO gelöst sind, werden reihenmäßig in DMSO (oder in einigen Fällen in einem alternativen Lösungsmittel, wie Dimethylformamid oder Ethanol) verdünnt. Vier μl jeder der Reihenverdünnungen der Hemmverbindungen oder von DMSO allein werden dann zu jedem der Plasmaröhrchen gegeben. Der Inhalt der Röhrchen wird sofort vermischt. Je drei aliquote Teile (100 μl) von jedem Plasmaröhrchen werden dann in die Vertiefungen von Polystyrol-Mikrotiterplatten mit rundem Boden und mit 96 Vertiefungen (Corning, Corning, NY) gegeben. Die Platten werden mit einem Kunststofffilm versiegelt und 4 Stunden lang bei 37°C inkubiert. Die Testvertiefungen enthalten Plasma mit Verdünnungen der Hemmverbindungen. Die Kontrollvertiefungen enthalten Plasma mit DMSO allein. Blindvertiefungen enthalten Plasma mit DMSO allein, die in den Mikroröhrchen bei 4°C über die Inkubationszeit von 4 Stunden gehalten werden und dann zu den Mikrotitervertiefungen am Ende der Inkubationsperiode gegeben werden. VLDL und LDL werden durch Zugabe von 10 μl des Ausfällungsreagenzes (1% (G/V) Dextransulfat (Dextra-lip50)/0,5 M Magnesiumchlorid, pH 7,4) zu allen Vertiefungen ausgefällt. Die Vertiefungen werden auf einem Plattenmischer vermischt und dann bei Umgebungstemperatur 10 Minuten lang inkubiert. Die Platten werden dann bei 1000 × g 30 Minuten lang bei 10°C zentrifugiert. Das überstehende Produkt (50 μl) von jeder Vertiefung wird dann in die 96 Plattenvertiefungen der Picoplate^TM (Packard, Meriden, CT), enthaltend 250 : 1 Microscint^TM-40 (Packard, Meriden, CT), gegeben. Die Platten werden wärmeversiegelt (TopSeal^TM-P, Packard, Meriden, CT), entsprechend den Vorschriften des Herstellers, und 30 Minuten lang vermischt. Die Radioaktivität wird auf einem Mikroplatten-Szintillationszähler (TopCount, Packard, Meriden, CT) gemessen. Die IC₅₀-Werte werden als Konzentration der Hemmverbindung, die die Übertragung des [³H]-CE von dem überstehenden Produkt [³H]-CE-HDL zu dem ausgefällten VLDL und LDL um 50% im Vergleich zu der Übertragung, erhalten in den Kontrollvertiefungen, hemmt, bestimmt. Die maximale prozentuale Übertragung (in den Kontrollvertiefungen) wird nach der folgenden Gleichung errechnet:
Der prozentuale Anteil der Kontrollübertragung, bestimmt in den Vertiefungen, die die Hemmverbindungen enthalten, wird wie folgt bestimmt:
Die IC₅₀ Werte werden aus den Plots der %-Kontrolle gegen die Konzentration der Hemmverbindung errechnet.
CETP-Aktivität in vitro
Die Fähigkeit der Verbindungen, die CETP-Aktivität zu hemmen, werden unter Verwendung eines in vitro durchgeführten Assays bestimmt, der die Geschwindigkeit der Übertragung von radiomarkiertem Cholesterylester ([³H]-CE) von HDL-Donatorteilchen zu LDL-Akzeptorteilchen misst. Details dieses Assays werden von Glenn et al. gegeben (Glenn und Melton, "Quantification of Cholesteryl Ester Transfer Protein (CETP): A) CETP Activity und B) Immunochemical Assay of CETP Protein", Meth. Enzymol., 263, 339–351 (1996)). Das CETP kann aus dem serumfreien konditionierten Medium von CHO-Zellen, die mit einer cDNA für CETP transfiziert worden sind, erhalten werden (Wang, S., et al., J. Biol. Chem. 267, 17487–17490 (1992)). Zur Messung der CETP-Aktivität werden [³H]-CE-markiertes HDL, LDL, CETP und ein Puffer für den Assay (50 mM Tris(hydroxymethyl)aminomethan, pH 7,4; 150 mM Natriumchlorid; 2 mM Ethylendiamin-tetraessigsäure; 1% Rinderserumalbumin) in einem Volumen von 200 μl 2 Stunden lang bei 37°C in Platten mit 96 Vertiefungen inkubiert. Das LDL wird differentiell durch Zugabe von 50 μl 1% (G/V) Dextransulfat/0,5 M Magnesiumchlorid durch heftiges Mischen und durch 10-minütiges Inkubieren bei Raumtemperatur ausgefällt. Die Lösung (200 μl) wird auf ein Filterplättchen überführt (Millipore). Nach dem Filtrieren wird die in dem ausgefällten LDL vorhandene Radioaktivität durch Flüssig-Szintillationszählung gemessen. Eine Korrektur für eine nicht-spezifische Übertragung oder eine Ausfällung wird in der Weise durchgeführt, dass Proben eingeschlossen werden, die kein CETP enthalten. Die Geschwindigkeit der [³H]-CE-Übertragung bei Verwendung dieses Assays ist bezüglich der Zeit und der CETP-Konzentration bis zu 25–30% des übertragenen [³H]-CE linear. Die Potenz der Testverbindungen kann dadurch bestimmt werden, dass der oben beschriebene Assay in Gegenwart von variierenden Konzentrationen der Testverbindungen durchgeführt wird, und dass diejenige Konzentration ermittelt wird, die für eine 50%ige Hemmung der Übetragung von [³H]-CE von HDL zu LDL erforderlich ist. Dieser Wert wird als IC₅₀ definiert. Die bei diesem Assay bestimmten IC₅₀-Werte sind genau, wenn der IC₅₀-Wert größer als 10 nM ist. Im Falle von Verbindungen, die eine größere Hemmpotenz haben, können genaue Messungen der IC₅₀-Werte unter Verwendung von längeren Inkubationszeiten (bis zu 18 Stunden) und von niedrigeren Endkonzentrationen von CETP (<50 nM) durchgeführt werden.
Hemmung der CETP-Aktivität in vivo
Die Hemmung der CETP-Aktivität durch eine Testverbindung kann in der Weise bestimmt werden, dass einem Tier die Verbindung durch intravenöse Injektion oder durch orale Verabreichung mit einer Sonde verabreicht wird, dass das Ausmaß der Übertragung des Tritium-markierten Cholesterylesters ([³H]-CE) von den HDL- zu den VLDL- und den LDL-Teilchen gemessen wird, und dass dieses Ausmaß der Übertragung mit dem Ausmaß der Übertragung verglichen wird, welches bei Kontrolltieren bestimmt worden ist.
Männliche syrische Goldhamster werden bei einer Diät eines Futters, enthaltend 0,24% Cholesterin, über mindestens zwei Wochen vor der Studie gehalten. Diejenigen Tiere, die eine intravenöse Verabreichung erhalten, werden unmittelbar vor dem Experiment mit Pentobarbital anästhesiert. Die Anästhesie wird durch das Experiment hindurch aufrechterhalten. Verbleibende Katheter werden in die Jugularvene und in die Carotidarterie eingesetzt. Am Beginn des Experiments erhalten alle Tiere 0,2 ml einer Lösung, enthaltend [³H]-CE-HDL, in die Jugularvene. [³H]-CE-HDL ist eine Zubereitung von Human-HDL, enthaltend Tritium-markierten Cholesterylester, und dieses wird nach dem Verfahren von Glenn et al. (Meth. Enzymol., 263, 339–351 (1996)) hergestellt. Die Testverbindung wird als Stammlösung mit 80 mM in einem Träger (2% Ethanol: 98% PEG 400, Sigma Chemical Company, St. Louis, Missouri, USA) aufgelöst und entweder durch eine Bolusinjektion oder durch kontinuierliche Infusion verabreicht. Zwei Minuten danach wird die [³H]-CE-HDL-Dosis verabreicht. Die Tiere erhalten 0,1 ml der Testlösung, die in die Jugularvene injiziert wird. Die Kontrolltiere erhalten 0,1 ml der intravenösen Trägerlösung ohne die Testverbindung. Nach 5 Minuten werden die ersten Blutproben (0,5 ml) aus der Carotidarterie abgenommen und in Standard-Microtainer-Röhrchen, enthaltend Ethylendiamintetraessigsäure, gesammelt. Kochsalzlösung (0,5 ml) wird injiziert um den Katheter zu spülen und das Blutvolumen zu ersetzen. Die nachfolgenden Blutproben werden nach der gleichen Methode nach zwei Stunden und nach vier Stunden entnommen. Die Blutproben werden gut gemischt und bis zum Ende des Experiments auf Eis gehalten. Das Plasma wird durch Zentrifugieren der Blutproben bei 4°C erhalten. Das Plasma (50 μl) wird mit 5 μl Ausfällungsreagens (Dextransulfat, 10 g/l; 0,5 M Magnesiumchlorid) behandelt um VLDL/LDL zu entfernen. Nach dem Zentrifugieren wird das resultierende überstehende Produkt (25 μl), das das HDL enthält, unter Verwendung eines Flüssig-Szintillationszählers auf die Radioaktivität analysiert.
Der prozentuale Anteil des [³H]-CE, der von HDL zu LDL und VLDL übertragen wird (% Übertragung), wird auf der Basis der gesamten Radioaktivität in äquivalenten Plasmaproben vor der Ausfällung errechnet. Typischerweise beträgt das Ausmaß der Übertragung von HDL zu LDL und VLDL 20% bis 35% bei den Kontrolltieren nach 4 Stunden.
Alternativ können nicht-anästhesierte Tiere, die sich bei Bewusstheit befinden, eine orale Dosis der Testverbindung als Suspension in 0,1% Methylcellulose in Wasser durch eine Sonde erhalten. Zu einem bestimmten Zeitpunkt, der für jede Verbindung bestimmt wird, bei dem die Plasmaspiegel der Testsubstanz nach der oralen Verabreichung ihren Peakwert (C_max) erreichen, werden die Tiere mit Pentobarbital anästhesiert, und dann erhalten sie 0,2 ml einer Lösung, enthaltend [³H]-CE-HDL, in die Jugularvene, wie oben beschrieben. Kontrolltiere erhalten 0,25 ml der Trägerlösung ohne die Testverbindung durch eine orale Sonde. Nach 4 Stunden werden die Tiere getötet, und Blutproben werden gesammelt. Der prozentuale Anteil des [³H]-CE, übertragen von HDL auf LDL und VLDL (% Übertragung), wird wie oben beschrieben bestimmt.
Alternativ kann eine Hemmung der CETP-Aktivität durch eine Testverbindung in der Weise bestimmt werden, dass die Verbindung Mäusen verabreicht wird, die durch transgene Manipulierung zur Expression des humanen CETP (hCETP) ausgewählt worden sind (hCETP-Mäuse). Die Testverbindungen können durch orale Injektion oder durch orale Verabreichung mit der Sonde verabreicht werden, und das Ausmaß der Übertragung des Tritium-markierten Cholesterylester ([³H]-CE) von HDL zu den VLDL- und LDL-Teilchen wird bestimmt und mit dem Ausmaß der Übertragung verglichen, das bei den Kontrolltieren beobachtet worden ist. C57B1/6-Mäuse, die für das hCETP-Gen homozygen sind, werden bei einer Futterdiät mit hohem Fettgehalt, wie TD 88051, wie von Nishina et al. beschrieben (J. Lipid Res., 31, 859–869 (1990)), über mindestens zwei Wochen vor der Studie gehalten. Die Mäuse erhalten eine orale Dosis durch (Magen-)Sonde der Testverbindung als Suspension in 0,1 % Methylcellulose in Wasser oder eine intravenöse Bolusinjektion der Testverbindung in 10% Ethanol und 90% Polyethylenglykol. Die Kontrolltiere erhalten die Trägerlösung ohne die Testverbindung durch orale Magensonde oder durch intravenöse Bolusinjektion. Am Beginn des Experiments erhalten alle Tiere 0,05 ml einer Lösung, enthaltend [³H]-CE-HDL, in die Schwanzvene. [³H]-CE-HDL ist eine Zubereitung von humanem HDL, enthaltend Tritium-markierten Cholesterylester, hergestellt nach der Methode von Glenn et al. (Meth. Enzymol., 263, 339–351 (1996)). Nach 30 Minuten wird von den Tieren das Blut entnommen, und das Blut wird in Standard-Microtainer-Röhrchen, enthaltend Ethylendiamintetraessigsäure, gesammelt. Die Blutproben werden gut gemischt und bis zum Ende des Experiments auf Eis gehalten. Das Plasma wird durch Zentrifugation der Blutproben bei 4°C erhalten. Das Plasma wird abgetrennt und durch Gelfiltrationschromatographie analysiert. Der relative Anteil von [³H]-CE in den VLDL-, LDL- und HDL-Bereichen wird bestimmt.
Der prozentuale Anteil von [³H]-CE, das von HDL an LDL und VLDL übertragen worden ist (% Übertragung), wird auf der Basis der gesamten Radioaktivität in äquivalenten Plasmaproben vor der Ausfällung errechnet. Typischerweise beträgt das Ausmaß der Übertragung von HDL zu LDL und VLDL bei den Kontrolltieren nach 30 min 20% bis 35%.
Assay auf die Cholesterinabsorption im Darm
Eine Vielzahl von Verbindungen zeigt eine Cholesterinabsorption aus dem Intestinaltrakt. Diese Verbindungen senken die Serum-Cholesterinspiegel, indem sie Intestinalabsorption des Cholesterins sowohl von exogenen Quellen (Nahrungsmittel-Cholesterin) und von endogenem Cholesterin (von der Gallenblase in den Intestinaltrakt sezerniert) verringern.
Bei Hamstern wurde die Anwendung der Dual-Isotop-Plasmaverhältnismethode zur Messung der intestinalen Cholesterinabsorption verfeinert, und sie erfolgt wie von Turley et al. (J. Lipid Res., 35, 329–339 (1994)) beschrieben, worauf hierin Bezug genommen wird.
Männliche Hamster mit einem Gewicht von 80–100 g erhalten Futter und Wasser ad libitum in einem Raum mit im Abstand von 12 Stunden wechselnden Perioden von Licht und Dunkelheit. Nach vier Stunden des Verbleibens in der Lichtperiode wird jedem Hamster eine intravenöse Dosis von 2,5 μCi von [1,2-³H]-Cholesterin, suspendiert in Intralipid (20%), und dann eine orale Dosis von [4-¹⁴C]-Cholesterin in einem Öl aus Triglyceriden mit mittlerer Kette (MCT) verabreicht. Die i. v.-Dosis wird in der Weise verabreicht, dass ein Volumen des Intralipidgemisches von 0,4 ml in die distale femorale Vene injiziert wird. Die orale Dosis wird in der Weise verabreicht, dass ein Volumen des MCT-Ölgemisches von 0,6 ml unter Verwendung einer Magensonde intragastral auf dem Wege über einen Polyethylenschlauch verabreicht wird. Nach 72 Stunden werden die Hamster ausbluten gelassen, und das Ausmaß von ³H und ¹⁴C in dem Plasma und in der ursprünglichen Menge der verabreichten Markierung werden durch Flüssig-Szintillationsspektrometrie ermittelt. Die Cholesterinabsorption wird auf der Basis der folgenden Gleichung errechnet:
Assay auf das mikrosomale Triglycerid-Transferprotein (MTP)
Das MTP kann aus Lebergewebe oder kultivierten Zellen (z. B. HepG2-Zellen) unter Verwendung von Standardmethoden, wie von Ohringer et al. beschrieben (Acta Crystallogr. D52, 224–225 (1996)) gereinigt werden.
Die nachfolgende Analyse der MTP-Aktivität kann wie von Jamil et al. beschrieben (Proc. Natl. Acad. Sci. 93, 11991–11995 (1996)) durchgeführt werden.
Die Grundlage dieses Assays ist die Messung der Übertragung der markierten Triglyceride von einer Population von Donatorbläschen zu einer Population von Akzeptorvesikel in Gegenwart von MTP. Hemmer von MTP können in der Weise untersucht werden, dass sie zu dem Gemisch vor der Einführung von MTP gegeben werden. Die Donatorvesikel werden durch Beschallung eines wässrigen Gemisches von Ei-Phospholipiden, Cardiolipin, ³H-markiertem Phospholipid und ¹⁴C-markierten Triglyceriden hergestellt. Die Akzeptorversikel werden durch Beschallung eines wässrigen Gemisches von Ei-Phospholipiden hergestellt. Die Vesikellösungen werden miteinander mit oder ohne zugegebene MTP-Hemmer vermischt, und MTP wird zugesetzt um die Übertragungsreaktion zu initiieren. Der Assay wird nach 60 Minuten durch Zugabe von 0,5 ml DE-52 beendet, gefolgt von einer Zentrifugation um die Donatormoleküle zu pelletisieren. Die Menge von ³H und ¹⁴C in den Pellets und das ursprüngliche Ausmaß der Markierung in dem Gemisch werden durch Flüssig-Szintillationsspektrometrie bestimmt. Die Übertragungsgeschwindigkeit für das Lipid wird auf der Basis der Kinetik der ersten Ordnung errechnet, wobei die Gleichung: [S] = [S]₀e^–kt angewendet wird, worin [S]₀ und [S] die Fraktionen der ¹⁴C-Markierung in dem Donatormembranpellet zu den Zeitpunkten 0 beziehungsweise t sind, und wobei k die Fraktion der Markierung angibt, die pro Zeiteinheit übertragen wird.
Assay auf Plasmalipide bei Kaninchen
Die Plasmalipide können unter Verwendung von Standardmethoden bestimmt werden, wie sie von J. R. Schuh et al. (J. Clin. Invest., 91, 1453–1458 (1993)) beschrieben worden sind. Gruppen von männlichen weißen Neuseeland-Kaninchen werden auf ein Standardfutter (100 g/Tag) gesetzt, das durch 0,3% Cholesterin und 2% Maisöl (Zeigler Bothers, Inc., Garners, PA) ergänzt worden ist. Wasser wird ad lib. zur Verfügung gestellt. Gruppen der Kontrolltiere und der behandelten Tiere werden nach ein und drei Monaten der Behandlung getötet. Die Gewebe werden zur Charakterisierung der Atheroskleroseläsionen entfernt. Blutproben werden abgenommen um die Plasmalipid-Konzentrationen zu bestimmen.
Plasmalipide
Das Plasma für die Lipidanalyse wird dadurch erhalten, dass Blut von der Ohrvene in EDTA-enthaltende Röhrchen (Vacutainer; Becton Dickenson & Co., Rutherford, NJ) entnommen wird, gefolgt von einer Zentrifugaltrennung der Zellen. Das Gesamtcholesterin wird enzymatisch bestimmt, wobei die Cholesterinoxidasereaktion (C. A. Allain et al., Clin. Chem., 20, 470–475 (1974)) verwendet wird. Das HDL-Cholesterin wird ebenfalls enzymatisch bestimmt, nach selektiver Ausfällung von LDL und VLDL durch Dextransulfat mit Magnesium (G. R. Warnick et al., Clin. Chem., 28, 1379–1388 (1982)). Die Plasma-Triglyceridspiegel werden dadurch bestimmt, dass die Menge von Glycerin, die durch Lipoproteinlipase freigesetzt wird, auf dem Wege über einen mit einem Enzym verbundenen Assay gemessen wird (G. Bucolo et al., Clin. Chem., 19, 476–482 (1973)).
Atherosklerose
Die Tiere werden durch Pentobarbital-Injektion getötet. Die Thoraxaorten werden rasch entfernt und in 10%igem, neutral gepuffertem Formalin eintauchfixiert und mit Ölrot O (0,3%) angefärbt. Nach einem einzigen längsförmigen Einschnitt entlang der Wand, die der arteriellen Ostia gegenüberliegt, werden die Gefäße zur Bestimmung der Plaquefläche pin-geöffnet. Die prozentuale Plaquebedeckung wird aus den Werten für den gesamten untersuchten Bereich und den angefärbten Bereich durch Schwellenanalyse unter Verwendung eines Echtfarben-Bildanalysators (Videometric 150; American Innovision, Incl., San Diego, CA) bestimmt. Letzterer liegt einer Farbkamera (Toshiba 3CCD), montiert auf einem Präparier-Mikroskop, gegenüber. Das Gewebe-Cholesterin wird enzymatisch, wie beschrieben, nach Extraktion mit einem Chloroform/Methanol-Gemisch (2 : 1) nach der Methode von Folch et al. (J. Biol. Chem., 226, 497–509 (1957)) gemessen.
In vitro erfolgende vaskuläre Reaktion
Die abdominalen Aorten werden rasch nach Injektion von Natriumpentobarbital herausgeschnitten und in einen oxygenierten Krebs-Bicarbonat-Puffer eingebracht. Nach Entfernung des perivaskulären Gewebes werden Ringsegmente mit 3 mm. herausgeschnitten und in ein Muskelbad, enthaltend eine Krebs-Bicarbonat-Lösung von 37°C, eingebracht und zwischen zwei Edelstahldrähten aufgehängt, von denen einer mit einem Kraftumwandler (Grass Instrument Co., Quincy, MA) verbunden ist. Die Veränderungen der Kraft in Beantwortung des zu dem Bad zugegebenen Angiotensin II werden auf einem Diagramm-Rekorder aufgezeichnet.
Modell des renalen Hochdrucks bei der Ratte
Zu Vergleichszwecken kann eine Kombinationstherapie eines Blutdruck-senkenden Mittels und eines den ilealen Gallensäuretransport hemmenden Hemmers auf die Blutdrucksenkende Aktivität bei der an der renalen Arterie ligatisierten Bluthochdruck-Ratte bestimmt werden. Es handelt sich um ein Modell von Nierenhochdruck. Bei diesem Modell sind sechs Tage nach der Ligatation der linken renalen Arterie sowohl die Plasma-Reninaktivität, als auch der Blutdruck signifikant erhöht (J. L. Cangiano et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 206, 310–313 (1979)). Männliche Sprague-Dawley-Ratten werden mit einem radiotelemetrischen Blutdrucktransmitter zur kontinuierlichen Überwachung des Blutdrucks instrumentiert. Die Ratten werden mit einem Gemisch von Ketamin-HCl (100 mg/kg) und Acepromazinmaleat (2,2 mg/kg) anästhesiert. Die abdominale Aorta wird durch einen Mittellinieneinschnitt freigelegt. Mikrovaskuläre Klammern werden an der Aorta distal zu den renalen Arterien und der ilealischen Furche angebracht. Die Aorta wird mit einer Nadel mit 22 Gauge punktiert, und die Spitze eines Katheters wird eingesetzt. Der Katheter, der an Ort und Stelle mittels einer Ligatur in dem Psoasmuskel gehalten wird, wird an einen radiotelemetrischen Blutdrucktransmitter (Mini-Mitter Co., Inc., Sunriver, OR) angeschlossen. Der Transmitter wird in die peritoneale Höhe gebracht und nach dem Schließen des Schnitts an den abdominalen Muskel angenäht. Die Ratten werden einzeln oberhalb eines radiotelemetrischen Empfängers gehalten, und sie erhalten ad libitum Standard-Rattenfutter und Wasser. Es werden ihnen mindestens fünf Tage zur Erholung von dem chirurgischen Eingriff gewährt. Der mittlere arterielle Druck und die Herzfrequenz werden auf einem geeigneten Datenrekorder, wie einem Minicomputer, gemessen. Von den Werten werden 10 Sekunden lang bei 200–500 Hz in Intervallen von 2,5 bis 10 Minuten, 24 Stunden pro Tag, Proben genommen. Nach dem Sammeln der Kontrolldaten für 24 Stunden werden die Ratten mit Methohexital (30 mg/kg, i. p.) und wie erforderlich ergänzt anästhesiert. Es wird ein abdominaler Mittellinieneinschnitt, ungefähr mit einer Länge von 2 cm, durchgeführt um die linke Niere freizulegen. Die renale Arterie wird von der Vene in der Nähe der Aorta getrennt, wobei darauf geachtet wird, die Vene nicht zu verletzen. Die Arterie wird vollständig mit steriler 4-O-Seide ligatisiert. Der Einschnitt wird durch sorgfältiges Vernähen der Muskelschicht mit der Haut geschlossen. Sechs Tage danach, wenn das MAP typischerweise um 50–70 mmHg erhöht worden ist, wird ein Blutdruck-senkendes Mittel oder eine Kombination mit einem oder mehreren therapeutischen kaadiovaskulären Mitteln durch eine Magensonde jeden Tag über einen Zeitraum von etwa 8 Wochen verabreicht. Eine einzige Arzneimitteldosierung wird durchgeführt, wobei 20 und 200 mg/kg/Tag Blutdruck-senkendes Mittel (z. B. Eplerenon) und 1, 3, 10, 30 und 100 mg/kg/Tag des anderen therapeutischen kardiovaskulären Mittels verwendet werden. Die Arzneimittelgemische werden dadurch erhalten, dass eine Kombination einer Dosis von 1, 3, 10, 30 oder 100 mg/kg/Tag des anderen therapeutischen kardiovaskulären Mittels mit entweder 20 oder 200 mg/kg/Tag des Blutdruck-senkenden Mittels verabreicht wird. Die Senkung des Blutdrucks wird durch das radiotelemetrische System überwacht, und die Reaktionen gegenüber den Verbindungen werden mit der Reaktion, erhalten bei Tieren, verglichen, die lediglich mit dem Träger behandelt worden sind. Die Plasma- und Urin-Natrium- und – Kaliumspiegel werden zur Bestimmung der Wirksamkeit der Aldosteronblockade überwacht. Urinproben werden über Nacht gesammelt, wobei metabolische Käftige zur Isolierung der Proben eingesetzt werden. Plasmaproben werden durch Katheterisierung der Venen erhalten. Das Natrium und das Kalium werden durch Flammenphotometrie gemessen. Eine Herzfibrose wird durch histologische und chemische Messung der herausgeschnittenen Herzen, gefolgt von einer Perfusionsfixierung, bestimmt. Die linken und die rechten Ventrikel werden abgewogen, eingebettet und sektioniert. Danach werden die Sektionen mit Picrosirius rot angefärbt, und die rotgefärbten Kollagenflächen werden durch eine computerisierte Bildanalyse quantitativ bestimmt. Der Scheitel des Herzes wird mit Säure aufgeschlossen, und das freie Hydroxyprolin wird colorimetrisch gemessen. Es wird angenommen, dass das MAP in Richtung auf normale Drücke bei den Testtieren, die mit der Kombinationstherapie behandelt wurden, signifikant erniedrigt werden und dass der Zustand der myokardialen Fibrose angehalten oder vermieden wird.
Effekt eines IBAT-Hemmers und eines Blutdruck-senkenden Mittels allein und in Kombination bei der Behandlung von Atherosklerose
Diese Vergleichsstudie ist eine prospektive randomisierte Bestimmung des Effekts einer Kombination eines IBAT-Hemmers oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon und eines Blutdruck-senkenden Mittels auf die Progression/Regression von koronaren und Carotidarterien-Erkrankungen. Die Studie wird dazu verwendet um zu zeigen, dass eine Kombination eines IBAT-Hemmers oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon und eines Blutdruck-senkenden Mittels dazu wirksam ist, die Progression einer existierenden koronaren Arterienerkrankung (CAD) zu verlangsamen oder anzuhalten, oder sogar eine Regression zu bewirken, wie es sich durch Veränderungen bei der koronaren Angiographie oder des Carotid-Ultraschallbilds bei Patienten mit ausgebildeter Erkrankung zeigt.
Diese Studie ist eine angiographische Dokumentation einer koronaren Arterienerkrankung, durchgeführt als Doppelblind-, Placebo-kontrollierte Untersuchung eines Minimums von etwa 500 Patienten, und vorzugsweise etwa 780 bis etwa 1200 Patienten. Es wird besonders bevorzugt, bei dieser Studie etwa 1200 Patienten zu verwenden. Die Patienten werden zu der Studie zugelassen, nachdem sie bestimmte Aufnahmekriterien, wie nachstehend angegeben, zufriedenstellend erfüllt haben.
Aufnahmekriterien: Personen müssen zur Aufnahme in diesen Test bestimmte Kriterien erfüllen. Die Person muss ein Erwachsener sein, männlich oder weiblich, ein Alter von 18 bis 80 Jahren haben, und bei ihm muss eine Koronarangiographie klinisch indiziert sein. Die Personen werden ein angiographisches Vorliegen einer deutlichen Herdläsion, z. B. 30% bis 50%, bei anschließender Beurteilung durch quantitative Koronarangiographie (QCA), in mindestens einem Segment (Nicht-PTCA, ohne Bypass oder kein MI-Gefäß) aufweisen, die so beurteilt wird, dass sie in den nächsten 3 Jahren wahrschienlich keine Intervention erfordert. Es ist erforderlich, dass die Segmente, die einer Analyse unterzogen werden, nicht störend sind. Da percutane transluminale Herzangioplastie (PTCA) mit Segmenten durch die Insertion eines Bal-lonkatheters in Wechselwirkung tritt, sind PTCA-Segmente für eine Analyse nicht geeignet. Es ist auch notwendig, dass die zu analysierenden Segmente an keinem thrombotischen Ereignis, wie z. B. einem Myokardinfarkt (MI) litten. Daher das Erfordernis für Nicht-MI-Gefäße. Segmente, die analysiert werden, umfassen: linke Hauptarterie, proximale, mittlere und distale linke vordere deszendierende Arterie, erste und zweite diagonale Verzweigung, proximaler und distaler linker Circumflexus, erstes oder größtes randständiges Spatium, proximale, mittlere und distale rechte Koronararterie. Die Personen werden eine Ejektionsfraktion von größer als 40% haben; diese wird durch Katheterisierung oder durch Radionuklid-Ventrikulographie oder Echokardiogramm zum Zeitpunkt der Angiogrammbestimmung oder innerhalb der vorangegangenen drei Monate der Akzeptanz des qualifizierenden Angiogramms bestimmt, vorausgesetzt, dass kein intervenierendes Ereignis, z. B. ein thrombotisches Event oder ein Eingriff, wie z. B. PTCA, erfolgt ist.
Infolge der Zahl der Patienten und der physikalischen Beschränkungen einer Einrichtung wird die Untersuchung im Allgemeinen an mehreren Stellen durchgeführt. Beim Eintritt in die Untersuchung werden die Personen einer quantitativen Koronarangiographie, wie auch einer Ultraschallsonographie der Arteria carotis des B-Modus und einer Untersuchung der Compliance der Arteria carotis in autorisierten Testcentern unterzogen. Dadurch werden Basislinien für jede Person entwickelt. Sobald die Personen zum Test zugelassen sind, werden sie statistisch ausgewählt um ein Antihypertensivum (z. B. Eplerenon) oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon (die Dosis wird von dem besonderen Antihypertensivum oder dem Salz davon, das ausgewählt wurde, abhängen), und Placebo oder ein Lipid-senkendes Mittel, z. B. einen IBAT-Inhibitor (50 mg) und Placebo, oder ein Antihypertensivum oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon (die Dosis wird von dem besonderen Antihypertensivum oder dem Salz davon, das ausgewählt wurde, abhängen) und IBAT-Inhibitor (50 mg) zu erhalten. Einem Fachmann wird klar sein, dass die freie Basenform oder andere Salzformen eines Antihypertensivums oder die freie Basenform oder andere Salzformen des IBAT-Inhibitors (bzw. -Hemmers) verwendet werden können.
Eine Berechnung der Dosierungsmenge für diese anderen Formen des IBAT-Inhibitors und Amlodipinbesylat wird in einfacher Weise erreicht, indem ein einfaches Verhältnis der Molekulargewichte der involvierten Spezies erstellt wird. Die Menge des Antihypertensivums kann nach Bedarf verändert werden. Die Menge des IBAT-Inhibitors wird von 80 mg nach unten titriert, wenn es vom behandelnden Arzt als im Interesse der Person erachtet wird. Die Personen werden für einen Zeitraum von ein bis drei Jahren überwacht, wobei drei Jahre im Allgemeinen bevorzugt sind. Eine Carotid-Ultraschalluntersuchung des B-Modus auf Arteroclerose und Compliance der Arteria carotis wird in regelmäßigen Intervallen während der Untersuchung durchgeführt. Im Allgemeinen sind Sechs-Monats-Intervalle geeignet. Typischerweise wird diese Untersuchung unter Verwendung eines Ultraschallgeräts des B-Modus durchgeführt. Allerdings kann ein Fachmann auf diesem Gebiet andere Verfahren zur Durchführung dieser Untersuchung einsetzen. Am Ende des Behandlungszeitraums über ein bis drei Jahre wird eine Koronarangiographie durchgeführt. Die Basislinien-Angiogramme und die Angiogramme nach der Behandlung sowie die dazwischenliegenden Echogramme der A. carotis nach dein B-Modus werden auf neue Läsionen oder ein Fortschreiten atherosklerotischer Läsionen beurteilt. Messungen der Arteriencompliance werden auf Änderungen von der Basislinie und über die sechsmonatigen Beurteilungszeiträume bewertet.
Das primäre Ziel dieser Untersuchung besteht darin, zu zeigen, dass die Kombination eines Antihypertensivums und eines IBAT-Inhibitors das Fortschreiten atherosklerotischer Läsionen, das durch quantitative Koronarangiographie (QCA) bei Personen mit klinischer Koro nararterienerkrankung gemessen wird, reduziert. QCA misst die Öffnung im Lumen der gemessenen Arterien.
Der primäre Endpunkt der Untersuchung ist die Änderung im durchschnittlichen mittleren Segmentdurchmesser des Koronararteriensystems. Der Durchmesser eines Arteriensegments wird an verschiedenen Teilen entlang der Länge dieses Segments gemessen. Dann wird der durchschnittliche Durchmesser dieses Segments bestimmt. Nachdem der durchschnittliche Segmentdurchmesser vieler Segmente bestimmt wurde, wird der Mittelwert aller Segmentdurchschnitte bestimmt um so den durchschnittlichen mittleren Segmentdurchmesser zu erhalten. Der mittlere Segmentdurchmesser von Personen, die den IBAT-Inhibitor oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon und das Antihypertensivum oder ein pharmazeutisch annehmbares Säureadditionssalz davon nehmen, wird langsamer abnehmen, wird vollständig gehalten oder es wird eine Zunahme im mittleren Segmentdurchmesser auftreten. Diese Resultate werden eine verlangsamte Progression der Atherosklerose, eine gestoppte Progression der Atherosklerose beziehungsweise eine Regression der Atherosklerose darstellen.
Das sekundäre Ziel dieser Untersuchung besteht darin, zu zeigen, dass die Kombination aus einem Antihypertensivum und dem IBAT-Inhibitor oder einem pharmazeutisch annehmbaren Salz davon die Progressionsrate von Atherosklerose reduziert, wie es durch die Reduzierung bei der Messung des Maximums der intimal-medialen Dicke, gemittelt über 12 getrennte Wandsegmente (Mittel-Max) als Funktion der Zeit gemessen wird, und zwar ist diese Reduzierung stärker als mit Amlodipin oder einem pharmazeutisch annehmbaren Säureadditionssalz davon oder IBAT-Inhibitor oder einem pharmazeutisch annehmbaren Salz davon allein. Die intimal-mediale Dicke bei Personen, die einen IBAT-Inhibitor oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon und Amlodipin oder ein pharmazeutisch annehmbares Säureadditionssalz davon nehmen, wird langsam ansteigen, wird aufhören anzusteigen oder wird abnehmen. Diese Resultate repräsentieren eine verlangsamte Progression der Atherosklerose, eine gestoppte Progression der Atherosklerose beziehungsweise eine Regression der Atherosklerose. Darüber hinaus können diese Resultate verwendet werden um Dosierungsbestimmungen zu erleichtern.
Die Verwendbarkeit der Verbindungen als Medikamente in der Behandlung von Angina pectoris bei Säugern (z. B. Menschen) wird durch die Aktivität der Verbindungen in herkömmlichen Assays und dem unten beschriebenen klinischen Protokoll bewiesen:
Wirkung von IBAT-Inhibitor und einem Antihypertensivum, allein und in Kombination, in der Behandlung von Angina.
Diese Studie wird eine statistische Doppelblind-Parallel-Studie sein um die Wirksamkeit eines IBAT-Inhibitors oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon und eines Antihypertensivums, die in Kombination bei der Behandlung von symptomatischer Angina gegeben werden, zu zeigen.
Aufnahmekriterien: Die Personen sind männlich oder weiblich mit einem Alter zwischen 18 und 80 Jahren mit einer Geschichte typischer Brustschmerzen in Verbindung mit einem der folgenden objektiven Anzeichen für kardiale Ischämie: (1) Belastungstestsegmenterhöhung um etwa einen Millimeter oder mehr im EKG; (2) positiver Laufband-Belastungstest; (3) neue Wandbewegungsabnormalität im Ultraschall; oder (4) Koronarangiogramm mit signifikanter qualifizierender Stenose. Im Allgemeinen wird eine Stenose von etwa 30 bis 50% als deutlich angesehen.
Jede Person wird über etwa 10 bis 32 Wochen beurteilt. Im Allgemeinen sind wenigstens 10 Wochen notwendig um die Untersuchung vollständig durchzuführen. Die Personen werden während eines vierwöchigen Durchgangs auf Übereinstimmung mit den Aufnahmekriterien, wie sie unten aufgeführt sind, durchgemustert. Nachdem die Durchmusterungskriterien erfüllt sind, wird die aktuelle Anti-Angina-Medikation aus den Personen ausgewaschen, und sie werden mit einem Langzeitnitrat, z. B. Nitroglycerin, Isosorbid-5-mononitrat oder Isosorbiddinitrat, stabilisiert. Der Ausdruck "ausgewaschen", wenn er in Verbindung mit dieser Durchmusterung verwendet wird, bedeutet den Entzug der aktuellen Anti-Angina-Medikation derart, dass im Wesentlichen das gesamte Medikament aus dem Körper der Person entfernt ist. Vorzugsweise wird ein Zeitraum von 8 Wochen, sowohl für den Zeitraum des Auswaschens, als auch für die Einstellung der Person auf stabile Dosen des Nitrats, vergehen. Personen, die einen oder zwei Anginaanfälle bei stabilen Dosen eines langwirkenden Nitrats haben, werden die Auswaschphase überspringen gelassen. Nachdem die Personen mit Nitraten stabilisiert wurden, treten die Personen in die Randomisierungsphase ein, vorausgesetzt, die Personen haben weiterhin einen oder zwei Anginaanfälle pro Woche. In der Randomisierungsphase werden die Personen statistisch in eine der vier Gruppen der Untersuchung, die nachfolgend beschrieben wird, eingeteilt. Nach Beendigung der Auswaschphase wird an Personen, die die Aufnahmekriterien erfüllen, ein ambulantes 24-Stunden-Elektrokardiogramm (EKG), z. B. Holter-Überwachung, eine Belastungsuntersuchung, z. B. Laufband, und eine Beurteilung der Myokardperfusion unter Verwendung eines PET (Photonen-Emulsions-Tomographie)-Scanning durchgeführt um eine Basislinie für jede Person zu entwickeln. Bei Durchführung des Belastungstests können die Geschwindigkeit des Laufbandes und der Steigung des Laufbandes von einem Techniker gesteuert werden. Die Geschwindigkeit des Laufbandes und der Winkel der Steigung werden im Allgemeinen während des Tests erhöht. Die Zeitintervalle zwischen jeder Geschwindigkeit und jeder Gradientenerhöhung werden im Allgemeinen unter Verwendung eines modifizierten Bruce-Protokolls bestimmt.
Nachdem die Basislinien-Untersuchungen beendet waren, wurde die Untersuchung mit den Personen in einer der folgenden Gruppen der Studie initiiert: (1) Placebo; (2) IBAT-Inhibitor (etwa 1 mg bis etwa 80 mg); (3) ein Antihypertensivum (Dosis ist von dem besonderen Antihypertensivum, das ausgewählt wurde, abhängig); oder (4) eine Kombination der obigen Dosen an IBAT-Inhibitor und Antihypertensivum. Vom Fachmann wird erkannt werden, dass die freie Basenform oder andere Salzformen von Amlodipinbesylat oder die freie Basenform oder andere Salzformen des IBAT-Inhibitors verwendet werden können. Eine Berechnung der Dosierungsmenge für diese anderen Formen des IBAT-Inhibitors und von Amlodipinbesylat wird in einfacher Weise erreicht, indem ein einfaches Verhältnis für die Molekulargewichte der involvierten Spezies erstellt wird. Die Personen werden dann für 2 bis 24 Wochen überwacht.
Nachdem der Überwachungszeitraum beendet wurde, werden die Personen den folgenden Untersuchungen unterzogen: (1) ambulantes 24-Stunden-EKG, z. B. Holler-Überwachung*, (2) Belastungstest (z. B. Laufband unter Verwendung des modifizierten Bruce-Protokolls), und (3) Beurteilung der Myokardperfusion unter Verwendung des PET-Scanning. Die Patienten führen ein Tagebuch über schmerzhafte ischämische Ereignisse und den Nitroglycerinverbrauch. Es ist allgemein wünschenswert, eine genaue Aufzeichnung der Anzahl der Anginaanfälle zu haben, unter denen der Patient während der Dauer des Tests leidet. Da ein Patient im Allgemeinen Nitroglycerin nimmt um die Schmerzen eines Anginaanfalls zu lindern, liefert die Anzahl der Male, die der Patient sich Nitroglycerin verabreicht, eine vernünftig genaue Aufzeichnung der Anzahl der Anginaanfälle.
Um die Wirksamkeit und die Dosierung der Arzneimittelkombination zu beweisen, wird die Person, die den Test durchführt, die Person unter Anwendung der beschriebenen Test beurteilen. Eine erfolgreiche Behandlung, die zu weniger häufigem Auftreten von ischämischen Ereignissen führt, wie sie durch EKG nachgewiesen werden, wird es der Person ermöglichen, länger oder bei höherem Intensitätsgrad am Laufband zu üben oder ohne Schmerzen am Laufband zu trainieren oder wird zu einer besseren Perfusion oder zu weniger Perfusionsmengen beim Ultraschall führen.
Die Verwendbarkeit der Verbindungen als Medikamente bei der Behandlung von Bluthochdruck und Hyperlipidämie bei Säugetieren (z. B. Menschen), die an einer Kombination aus Bluthochdruck und Hyperlipidämie leiden, wird durch die Aktivität der Verbindungen in herkömmlichen Assays und im klinischen Protokoll, die nachfolgend beschrieben werden, bewiesen.
Wirkung eines IBAT-Inhibitors und eines Antihypertensivums, allein und in Kombination, auf die Behandlung von Personen, die sowohl an Bluthochdruck (beziehungsweise Hypertension), als auch an Hyperlipidämie leiden.
Diese Studie wird eine statistische Doppelblind-Parallel-Studie sein um die Wirksamkeit eines IBAT-Inhibitors oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon und eines Antihypertensivums, die in Kombination gegeben werden, sowohl bei der Kontrolle des Bluthochdrucks, als auch der Hyperlipidämie bei Personen, die eine milde, moderate oder schwere Hypertension und Hyperlipidämie haben, zu zeigen.
Jede Person wird über 10 bis 20 Wochen, und vorzugsweise über 14 Wochen, beurteilt. Bei dieser Durchmusterung werden ausreichend Personen verwendet um sicherzustellen, dass etwa 400 bis 800 Personen zur Vervollständigung der Untersuchung beurteilt werden.
Aufnahmekriterien: Die Personen sind männliche oder weibliche Erwachsene mit einem Alter zwischen 18 und 80 Jahren, die sowohl Hyperlipidämie als auch Bluthochdruck haben. Das Vorliegen von Hyperlipidämie wird durch Beurteilung des Spiegels an Lipoprotein niedriger Dichte (LDL) der Person bezüglich bestimmter positiver Risikofaktoren bewiesen. Wenn die Person keine koronare Herzkrankheit (KHK) hat und weniger als zwei positive Risikofaktoren hat, dann wird die Person als eine mit Hyperlipidämie angesehen, die eine Arzneimitteltherapie benötigt, wenn das LDL der Person größer oder gleich 190 ist. Wenn die Person keine KHK hat und zwei oder mehr positive Risikofaktoren hat, dann wird die Person als eine mit Hyperlipidämie angesehen, die eine Arzneimitteltherapie benötigt, wenn das LDL der Person größer oder gleich 160 ist. Wenn die Person KHIK hat, dann wird die Person als eine mit Hyperlipidämie angesehen, wenn das LDL der Person größer oder gleiche 130 ist.
Positive Risikofaktoren umfassen: (1) männlich, über 45, (2) weiblich, über 55, wobei die Frau keine Hormonersatztherapie (hormon replacement therapy (HIRT)) erhält, (3) Familiengeschichte einer prämaturen kardiovaskulären Krankheit, (4) die Person ist gegenwärtig Raucher, (5) die Person hat Diabetes, (6) die Person hat einen HDL-Spiegel von weniger als 45, und (7) die Person hat Bluthochdruck. Ein HDL-Spiegel von größer als 60 wird als negativer Risikofaktor angesehen und wird einen der oben genannten positiven Risikofaktoren ausschalten. Das Vorliegen von Bluthochdruck wird durch einen diastolischen Blutdruck (BP) im Sitzen von größer als 90 und einem systolischen BP im Sitzen von höher als 140 angezeigt. Alle Blutdruckwerte werden im Allgemeinen als Durchschnitt von drei Messungen, die im Abstand von 5 Minuten vorgenommen werden, bestimmt. Personen werden auf Erfüllung der Aufnahmekriterien, wie sie oben angeführt sind, durchgemustert. Nachdem alle Aufnahmekriterien erfüllt sind, wird bei den Personen ein Auswaschen ihres derzeitigen Antihypertensivums und der Lipid-senkenden Medizin vorgenommen, und sie werden auf eine Diät gemäß NCEP ATP 11, Stufe 1, gesetzt. Die Diät nach NCEP ATP 11 (Erwachsenen-Behandlungsgruppe, 2. Überarbeitung), Stufe I, bezieht sich auf die Menge an gesättigtem und ungesättigtem Fett, das als Anteil der Gesamtkalorienaufnahme verbraucht werden kann. Der Ausdruck "Auswaschen", wie er in Verbindung mit dieser Durchmusterung verwendet wird, bedeutet die Eliminierung eines aktuellen Antihypertensivums und eines Lipid-senkenden Medikaments, so dass im Wesentlichen das gesamte Medikament aus dem Körper der Person eliminiert wird. Neu diagnostizierte Personen bleiben im Allgemeinen bis zu Testbeginn unbehandelt. Diese Personen werden auch auf Diät gemäß NCEP, Stufe I, gesetzt. Nach dem vierwöchigen Auswaschen und dem Diätstabilisierungszeitraum werden die Personen den folgenden Basislinien-Untersuchungen unterzogen: (1) Blutdruck, und (2) Lipid-Bestimmung, nüchtern. Die Lipid-Bestimmung, nüchtern, bestimmt die Basislinien-Lipidspiegel einer Person im nüchternen Zustand. Im Allgemeinen nahm die Person zwölf Stunden bevor die Lipidspiegel gemessen werden keine Nahrung zu sich. Nachdem die Basislinien-Untersuchungen durchgeführt sind, beginnen die Personen die Untersuchung in einer der folgenden Gruppen: (1) eine festgelegte Dosis eines Antihypertensivums, wobei die Dosis von dem besonderen ausgewählten Antihypertensivum abhängt; (2) eine festgelegte Dosis eines IBAT-Inhibitors, im Allgemeinen etwa 1 bis 80 mg, oder (3) eine Kombination der obigen Dosen des IBAT-Inhibitors und des Antihypertensivums. Der Fachmann wird erkennen, dass die freie Basenform oder andere Salzformen von Amplodipinbesylat oder die freie Basenform oder andere Salzformen des IBAT-Inhibitors verwendet werden können. Eine Berechnung der Dosierungsmenge für diese anderen Formen des IBAT-Inhibitors und von Amlodipinbesylat können leicht durchgeführt werden, indem ein einfaches Verhältnis für die Molekulargewichte der involvierten Spezies erstellt wird. Personen bleiben für mindestens sechs Wochen, und im Allgemeinen nicht länger als acht Wochen, bei diesen Dosen. Die Personen kehren nach Abschluss der sechs bis acht Wochen zum Testcenter zurück, so dass die Basislinien-Beurteilungen wiederholt werden können. Der Blutdruck der Person zum Abschluss der Studie wird mit dem Blutdruck der Person beim Eintritt in die Studie verglichen. Die Lipid-Durchmusterung misst Gesamtcholesterin, LDL-Cholesterin, HDL-Cholesterin, Triglyceride, apoB, VLDL (Lipoprotein sehr niedriger Dichte) und andere Komponenten des Lipidprofils der Person. Verbesserungen in den erhaltenen Werten nach Behandlung bezüglich den Werten vor Behandlung zeigen die Nützlichkeit der Arzneimittelkombination an. Die Nützlichkeit der Verbindungen als Medikamente bei der Behandlung von Herzrisiken bei Säugetieren (z. B. Menschen) bei einer Gefahr für einen Herzanfall, wird durch die Aktivität der Verbindungen in herkömmlichen Assays und in dem nachfolgend beschriebenen klinischen Protokoll bewiesen.
Wirkungen eines IBAT-Inhibitors und eines Antihypertensivums, allein und in Kombination, bei Personen mit dem Risiko zukunftiger kardiovaskulärer Ereignisse
Diese Untersuchung wird eine statistische Doppelblind-Parallel-Studie sein um die Wirksamkeit eines IBAT-Inhibitors oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon und eines Antihypertensivums, die in Kombination gegeben werden, bei der Reduzierung des kalkulierten Gesamtrisikos zukünftiger kardiovaskulärer Ereignisse für Personen, bei denen ein Risiko für zukünftige kardiovaskuläre Events besteht, zu zeigen. Das Risiko wird unter Verwendung der Framing risk-Gleichung errechnet. Eine Person wird als mit einem Risiko für ein zukünftiges kardiovaskuläres Ereignis angesehen, wenn die Person mehr als eine Standardabweichung von dem Mittelwert, wie er durch die Framingham risk-Gleichung berechnet wird, aufweist. Die Untersuchung wird angewendet um die Wirksamkeit einer festgelegten Kombination des IBAT-Inhibitors oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon und des Antihypertensivums bei der Kontrolle eines kardiovaskulären Risikos zu beurteilen, wobei sowohl Hypertension, als auch Hyperlipidämie bei Patienten kontrolliert wird, die milde bis moderate Hypertension und Hyperlipidämie haben.
Jede Person wird für 10 bis 20 Wochen, und vorzugsweise für 14 Wochen, beurteilt. Es werden ausreichend Personen angeworben um sicherzustellen, dass etwa 400 bis 800 Personen zur Beendigung der Untersuchung beurteilt werden.
Aufnahmekriterien: Personen, die von der Untersuchung umfasst werden, sind männliche oder weibliche erwachsene Personen mit einem Alter zwischen 18 und 80 Jahren mit einem fünfjährigen Basislinienrisiko, wobei das Risiko über dem Mittelwert für Personen des entsprechenden Alters und Geschlechts liegt, wie er durch die Framingham Heart Study definiert ist. Diese ist eine ständig erweiterte Zukunftsstudie über erwachsene Männer und Frauen, die zeigt, dass bestimmte Risikofaktoren verwendet werden können um die Entwicklung einer koronaren Herzkrankheit vorauszusagen. Bei der Bestimmung, ob ein Patient ein Risiko für schädliche Herzevents trägt, werden Alter, Geschlecht, systolischer und diastolischer Blutdruck, Rauchgewohnheiten, Vorliegen oder Fehlen von Kohlenhydratintoleranz, Vorliegen oder Fehlen von linksventrikulärer Hypertrophie, Serumcholesterin und Lipoprotein hoher Dichte (HDL) bezüglich mehr als einer Standardabweichung über die Norm für die Framingham-Population beurteilt. Personen werden auf Übereinstimmung mit den Aufnahmekriterien, die oben angegeben sind, durchgemustert. Nachdem alle Aufnahmekriterien erfüllt sind, wird das aktuelle Antihypertensivum und das aktuelle Lipid-senkende Medikament, sowie jede andere Medikation, die die Resultate der Durchmusterung beeinträchtigen werden, ausgewaschen. Die Patienten werden dann auf Diät gemäß NCEP ATP 11, Stufe I, gesetzt, wie es oben beschrieben ist. Neu diagnostizierte Personen bleiben im Allgemeinen bis zum Testbeginn unbehandelt. Diese Personen werden ebenfalls auf Diät gemäß NCEP ATP 11, Stufe I, gesetzt. Nach dem vierwöchigen Zeitraum des Auswaschens und der Diätstabilisierung werden die Personen den folgenden Basislinien-Untersuchungen unterzogen: (1) Blutdruck; (2) Fasten; (3) DPW-Screening; (4) Glucosetoleranztest; (5) EKG; und (6) Herzultraschall. Diese Tests werden unter Verwendung von Standardverfahren, die Fachleuten auf diesem Gebiet gut bekannt sind, durchgeführt. Das EKG und der Herzultraschall werden im Allgemeinen eingesetzt um das Vorliegen oder Fehlen linksventrikulärer Hypertrophie zu messen.
Nachdem die Basislinien-Untersuchungen durchgeführt wurden, werden die Patienten mit einem der Folgenden beginnen: (1) eine festgelegte Dosis eines Antihypertensivums, wobei die Dosis von dem besonderen ausgewählten Hypertensivum abhängt; (2) eine festgelegte Dosis eines IBAT-Inhibitors (etwa 1 bis 80 mg), oder (3) die Kombination der obigen Dosen des IBAT-Inhibitors und eines Antihypertensivums. Der Fachmann wird erkennen, dass die freie Basenform oder andere Salzformen von Amlodipinbesylat oder die freie Basenform oder andere Salzformen des IBAT-Inhibitors verwendet werden können. Eine Berechnung der Dosierungsmenge für diese anderen Formen des IBAT-Inhibitors und von Amlodipinbesylat wird in einfacher Weise erreicht, indem ein einfaches Verhältnis bezüglich der Molekulargewichte der involvierten Spezies erstellt wird. Patienten werden bei diesen Dosen gehalten und werden gebeten, in sechs bis acht Wochen wiederzukommen, damit Basislinienbeurteilungen wiederholt werden können. Dabei werden die neuen Werte in die Framingham risk-Gleichung eingegeben um zu bestimmen, ob die Person ein geringeres, höheres oder unverändertes Risiko für ein zukünftiges kardiovaskuläres Ereignis besitzt.
Die obigen Assays, die die Wirksamkeit von Amlodipin oder pharmazeutisch annehmbaren Säureadditionssalzen davon und eines IBAT-Inhibitors oder pharmazeutisch annehmbarer Salze davon bei der Behandlung von Angina pectoris, Atherosklerose, Bluthochdruck und Hyperlipidämie und bei der Behandlung eines Herzkrankheitsrisikos beweisen, liefern auch ein Mittel, durch das die Aktivitäten der Verbindungen untereinander und mit den Aktivitäten anderer bekannter Verbindungen verglichen werden können. Die Resultate dieser Vergleiche sind zur Bestimmung der Dosierungskonzentrationen bei Säugetieren, einschließlich Menschen, zur Behandlung solcher Krankheiten nützlich. Die folgenden Dosierungsmengen und andere Dosierungsmengen, die an anderer Stelle in dieser Beschreibung und in den beigefügten Ansprüchen angegeben sind, gelten für ein durchschnittliches menschliches Subjekt mit einem Gewicht von etwa 65 kg bis etwa 70 kg. Der Fachmann wird auf der Basis der medizinischen Geschichte der Person und des Vorliegens von Krankheiten, z. B. Diabetes, bei der Person leicht fähig sein, die Dosierungsmenge zu bestimmen, die für eine Person erforderlich ist, deren Gewicht außerhalb des Bereichs von 65 kg bis 70 kg liegt. Alle hier und in den Ansprüchen angegebenen Dosen sind Tagesdosen.
Beispielsweise kann das unten aufgelistete Antihypertensivum in den folgenden täglichen Dosierungsmengen verabreicht werden:
Diltiazem, im Allgemeinen etwa 120 mg bis etwa 480 mg;
Verapamil, im Allgemeinen etwa 20 mg bis etwa 48 mg;
Felodipin, im Allgemeinen etwa 2,5 mg bis etwa 40 mg;
Isradipin, im Allgemeinen etwa 2,5 mg bis etwa 40 mg;
Lacidipin, im Allgemeinen etwa 1 mg bis etwa 6 mg;
Nicardipin, im Allgemeinen etwa 32 mg bis etwa 120 mg;
Nifedipin, im Allgemeinen etwa 10 mg bis etwa 120 mg;
Nimodipin, im Allgemeinen etwa 120 mg bis etwa 480 mg;
Nisoldipin, im Allgemeinen etwa 5 mg bis etwa 80 mg;
Nitrendipin, im Allgemeinen etwa 5 mg bis etwa 20 mg;
Benazepril, im Allgemeinen etwa 10 mg bis etwa 80 mg;
Captopril, im Allgemeinen etwa 50 mg bis etwa 150 mg;
Enalapril, im Allgemeinen etwa 5 mg bis etwa 40 mg;
Fosinopril, im Allgemeinen etwa 10 mg bis etwa 80 mg;
Lisinopril, im Allgemeinen etwa 10 mg bis etwa 80 mg;
Quinapril, im Allgemeinen etwa 10 mg bis etwa 80 mg;
Losartan, im Allgemeinen etwa 25 mg bis etwa 100 mg;
Valsartan, im Allgemeinen etwa 40 mg bis etwa 640 mg;
Doxazosin, im Allgemeinen etwa 0,5 mg bis etwa 16 mg;
Prazosin, im Allgemeinen etwa 1 mg bis etwa 40 mg;
Trimazosin, im Allgemeinen etwa 1 mg bis etwa 20 mg;
Arnilorid, im Allgemeinen etwa 5 mg bis etwa 20 mg;
Eplerenon, im Allgemeinen etwa 10 mg bis etwa 150 mg.
Dem Fachmann wird klar sein, dass Dosierungen der oben genannten Antihypertensiva für jede spezifische Person individualisiert werden müssen. Diese Individualisierung wird von der medizinischen Geschichte der Person abhängen, und davon abhängen, ob die Person gleichzeitig andere Medikamente nimmt, die mit den obigen Antihypertensiva wechselwirken können oder nicht oder nachteilige Wirkung haben oder nicht. Eine Individualisierung wird dann erreicht, indem mit einer niedrigen Dosis der Verbindung begonnen wird und die Menge titriert wird, bis die gewünschte therapeutische Wirkung erreicht ist. Im Allgemeinen wird der IBAT-Inhibitor in einer Dosierung von etwa 0,1 mg/Tag bis etwa 500 mg/Tag verabreicht. Vorzugsweise wird der IBAT-Inhibitor in einer Dosierung von etwa 1 mg/Tag bis etwa 100 mg/Tag verabreicht.
Da die vorliegende Erfindung sich auf die Behandlung von Krankheiten und Krankheitsbildern mit einer Kombination von aktiven Ingredientien, die getrennt verabreicht werden können, bezieht, bezieht sich die Erfindung auch auf die Kombination getrennter pharmazeutischer Zusammensetzungen in Kit-Form. Der Kit umfasst zwei getrennte pharmazeutische Zusammensetzungen. Der Kit umfasst Behälter zur Aufnahme der getrennten Zusammensetzungen, z. B. eine aufgeteilte Flasche oder eine aufgeteilte Folienpackung; die getrennten Zusammensetzungen können allerdings auch in einem einzelnen, nicht-aufgeteilten Behälter enthalten sein. Typischerweise umfasst der Kit Anweisungen für die Verabreichung der getrennten Komponenten. Die Kit-Form ist besonders vorteilhaft, wenn die getrennten Komponenten vorzugsweise in unterschiedlichen Dosierungsformen (z. B. oral und parenteral) verabreicht werden, in unterschiedlichen Dosierungsintervallen verabreicht werden oder wenn eine Titration der einzelnen Komponenten der Kombination durch den verschreibenden Arzt gewünscht ist.
Die hier beschriebenen Beispiele können durchgeführt werden, indem die allgemein oder spezifisch beschriebenen therapeutischen Verbindungen oder inerten Ingredientien für solche eingesetzt werden, die in den vorhergehenden Beispielen verwendet wurden.
Es ist selbstverständlich, dass die Erfindung, die beschrieben wurde, auf unterschiedliche Art variiert werden kann. Solche Variationen werden nicht als Verlassen des Rahmens der Erfindung angesehen, und alle derartigen Modifikationen und Äquivalente, wie sie dem Fachmann auf diesem Gebiet einfallen, sollen im Rahmen der folgenden Ansprüche enthalten sein.

Claims

Therapeutische Kombination, umfassend eine erste Menge einer den ilealen Gallensäuretransport hemmenden Verbindung und eine zweite Menge einer das mikrosomale Triglycerid-Transferprotein hemmenden Verbindung, worin die erste Menge und die zweite Menge zusammen eine gegen einen hyperlipidämischen Zustand wirksame Menge, eine gegen einen aterosklerotischen Zustand wirksame Menge oder eine gegen einen hypercholesterinämischen Zustand wirksame Menge der Verbindungen umfassen.
Therapeutische Kombination nach Anspruch 1, worin die den ilealen Gallensäuretransport hemmende Verbindung eine der folgenden Strukturen besitzt:
oder ein Enantiomer oder Racemat davon;
oder ein Enantiomer oder Racemat davon;
oder ein Enantiomer oder Racemat davon, wobei PEG eine Polyethylenglykolpolymerkette mit einem Molekulargewicht von etwa 3000 bis etwa 4000 ist;
oder ein Enantiomer oder Racemat davon.
Verwendung einer ersten Menge einer den ilealen Gallensäuretransport hemmenden Verbindung und einer zweiten Menge eines das mikrosomale Triglycerid-Transferprotein hemmenden Verbindung zur Herstellung eines Medikaments zur Prophylaxe oder Behandlung eines hyperlipidämischen Zustands oder einer hyperlipidämischen Erkrankung an einem Säugetier, wobei die erste Menge und die zweite Menge zusammen eine gegen einen hyperlipidämischen Zustand wirksame Menge, eine gegen einen aterosklerotischen Zustand wirksame Menge, oder eine gegen einen hypercholesterinämischen Zustand wirksame Menge der Verbindungen umfassen.
Kit zum Erhalt eines therapeutischen Effekts an einem Säugetier umfassend eine Menge einer den ilealen Gallensäuretransport hemmenden Verbindung in einer ersten Dosierungseinheitsform; eine Menge einer das mikrosomale Triglycerid-Transferprotein hemmenden Verbindung in einer zweiten Dosierungseinheitsform; und ein Behältnis zur Aufnahme der genannten ersten und zweiten Dosierungseinheitsformen.
Therapeutische Kombination umfassend eine erste Menge einer den ilealen Gallensäuretransport (IBAT) hemmenden Verbindung und eine zweite Menge einer das mikrosomale Triglycerid-Transferprotein (MTP) hemmenden Verbindung, wobei die genannte erste Menge und die genannte zweite Menge zusammen eine gegen einen hyperlipidämischen Zustand wirksame Menge, eine gegen einen aterosklerotischen Zustand wirksame Menge oder eine gegen einen hypercholesterinämischen Zustand wirksame Menge der genannten IBAT-hemmenden und der genannten MTP-hemmenden Verbindungen umfassen und worin die genannte MTP-hemmende Verbindung ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus M-1, M-2, M-3, M-4, M-5, M-6, M-7, M-8 und M-9, dargestellt durch:

sowie Enantiomeren, Racematen, Tautomeren und Salzen davon.
Therapeutische Kombination nach Anspruch 5, worin die genannte IBAT-hemmende Verbindung durch Formel B-5:
oder Enantiomere oder Racemate davon dargestellt wird.
Therapeutische Kombination nach Anspruch 6, worin die genannte MTP-hemmende Verbindung durch Formel M-9 dargestellt ist.