DE69810817T2

DE69810817T2 - Cytostatika

Info

Publication number: DE69810817T2
Application number: DE69810817T
Authority: DE
Inventors: Paul Ayscough; Hastings Drummond; Philip Huxley; Ann Pearson
Original assignee: British Biotech Pharmaceuticals Ltd
Current assignee: Vernalis R&D Ltd
Priority date: 1998-03-12
Filing date: 1998-03-12
Publication date: 2003-11-20
Anticipated expiration: 2018-03-13
Also published as: AU6410698A; GB2349149A; WO1999046241A1; CA2323414C; EP1062202A1; NO20004528D0; CN1286681A; CA2323414A1; JP2002506057A; ATE231122T1; CZ299610B6; AU747977B2; IL137774A0; PL342811A1; IL137774A; HUP0100999A2; NO20004528L; GB0019414D0; BR9815717A; NZ506293A

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft therapeutisch wirksame Ester und Thioester, Verfahren zu deren Herstellung, diese enthaltende pharmazeutische Zusammensetzungen und die medizinische Verwendung dieser Verbindungen. Insbesondere sind die Verbindungen Proliferationshemmer einer Anzahl von schnell teilenden Tumorzellen, z. B. Melanom- und/oder Lymphomzellen.

Hintergrund der Erfindung

Unsere internationale Patentanmeldung PCT/GB97/02398 beschreibt und beansprucht ein Verfahren zur Proliferationshemmung von Tumorzellen in Säugetieren, umfassend das Verabreichen einer ausreichenden Menge einer Verbindung der allgemeinen Formel (I) oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes, Hydrats oder Solvats davon an Säugetiere, die an einer solchen Proliferation leiden, zur Hemmung der Proliferation:
worin
R Wasserstoff oder (C&sub1;&submin;&sub6;)-Alkyl ist;
R&sub1; ist Wasserstoff; (C&sub1;&submin;&sub6;)-Alkyl; (C&sub2;&submin;&sub6;)-Alkenyl; Phenyl oder substituiertes Phenyl; Phenyl-(C&sub1;&submin;&sub6;)-alkyl oder substituiertes Phenyl- (C&sub1;&submin;&sub6;)-alkyl; Phenyl-(C&sub2;&submin;&sub6;)-alkenyl oder substituiertes Phenyl-(C&sub2;&submin;&sub6;)- alkenyl; Heterocyclus oder substituierter Heterocyclus; Heterocyclus- (C&sub1;&submin;&sub6;)-alkyl oder substituierter Heterocyclus-(C&sub1;&submin;&sub6;)-alkyl; eine Gruppe BSOnA, worin n 0, 1 oder 2 ist und B ist Wasserstoff oder eine (C&sub1;&submin;&sub6;)- Alkyl-, Phenyl-, substituierte Phenyl-, heterocyclische, substituierte heterocyclische, (C&sub1;&submin;&sub6;)-Acyl-, Phenacyl- oder substituierte Phenacyl-Gruppe und A ist (C&sub1;&submin;&sub6;)Alkylen; Hydroxy oder (C&sub1;&submin;&sub6;)-Alkoxy; Amino, geschütztes Amino, Acylamino, (C&sub1;&submin;&sub6;)-Alkylamino oder Di-(C&sub1;&submin;&sub6;)-alkylamino; Mercapto oder (C&sub1;&submin;&sub6;)-Alkylthio; Amino-(C&sub1;&submin;&sub6;)-alkyl, (C&sub1;&submin;&sub6;)-Alkylamino-(C&sub1;&submin;&sub6;)-alkyl, Di-(C&sub1;&submin;&sub6;)-alkylamino-(C&sub1;&submin;&sub6;)-alyl, Hydroxy-(C&sub1;&submin;&sub6;)-alkyl, Mercapto-(C&sub1;&submin;&sub6;)- alkyl oder Carboxy-(C&sub1;&submin;&sub6;)-alkyl, worin die Amino-, Hydroxy-, Mercapto- oder Carboxyl-Gruppe gegebenenfalls geschützt sind oder die Carboxyl-Gruppe amidiert ist; Niederalkyl substituiert durch Carbamoyl, Mono(niederalkyl)- carbamoyl, Di(niederalkyl)carbamoyl, Di(niederalkyl)amino oder Carboxyniederalkanoylamino; oder ein Cycloalkyl-, Cycloalkenyl- oder nichtaromatischer heterocyclischer Ring, enthaltend bis zu 3 Heteroatome, jeder von diesen kann (i) substituiert sein mit ein oder mehreren Substituenten ausgewählt als C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl, C&sub2;&submin;&sub6;-Alkenyl, Halo; Cyano (-CN), -CO&sub2;H, -CO&sub2;R, -CONH&sub2;, -CONHR, -CON(R)&sub2;, -OH, -OR, Oxo-, -SH, -SR, -NHCOR und -NHCO&sub2;R, wobei R ist C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl oder Benzyl und/oder (ii) zu einem Cycloalkyl oder heterocyclischen Ring fusioniert sein;
R&sub2; ist C&sub1;&submin;&sub1;&sub2;-Alkyl, C&sub2;&submin;&sub1;&sub2;-Alkenyl, C&sub2;&submin;&sub1;&sub2;-Alkinyl, Phenyl-(C&sub1;&submin;&sub6;)- alkyl)-, Heteroaryl-(C&sub1;&submin;&sub6;-alkyl)-, Phenyl-(C&sub2;&submin;&sub6;-alkenyl)-, Heteroaryl- (C&sub2;&submin;&sub6;-alkenyl)-, Phenyl-(C&sub2;&submin;&sub6;-alkinyl)-, Heteroaryl-(C&sub2;&submin;&sub6;-alkinyl)-, Cycloalkyl-(C&sub1;&submin;&sub6;-alkyl)-, Cycloalkyl-(C&sub2;&submin;&sub6;-alkenyl)-, Cycloalkyl-(C&sub2;&submin;&sub6;- alkinyl)-, Cycloalkenyl-(C&sub1;&submin;&sub6;-alkyl)-, Cycloalkenyl-(C&sub2;&submin;&sub6;-alkenyl)-, Cycloalkenyl-(C&sub2;&submin;&sub8;-alkinyl)-, Phenyl-(C&sub1;&submin;&sub6;-alkyl)-O-(C&sub1;&submin;&sub6;-alkyl)- oder Heteroaryl-(C&sub1;&submin;&sub6;-alkyl)-O-(C&sub1;&submin;&sub6;-alkyl)-Gruppe, irgendeiner kann gegebenenfalls substituiert sein mit C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl, C&sub1;&submin;&sub6;-Alkoxy, Halogen, Cyano (-CN), Phenyl oder Phenyl-substituiert mit C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl, C&sub1;&submin;&sub6;-Alkoxy, Halogen oder Cyano (-CN);
R&sub3; ist die kennzeichnende Gruppe einer natürlichen oder nicht- natürlichen α-Aminosäure, bei der die funktionellen Gruppen geschützt sein können; und
R&sub4; ist eine Ester oder Thioester-Gruppe
oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz, Hydrat oder Solvat davon.

Kurze Beschreibung der Erfindung

Diese Erfindung betrifft bestimmte spezifische Verbindungen, die Proliferationshemmer von Tumorzellen bei Säugetieren sind. Die fraglichen Verbindungen sind nicht spezifisch in der PCT/GB97/02398 offenbart und haben nützliche pharmakologische und pharmakokinetische Eigenschaften als Tumorzellhemmer.
Die Verwendung von Matrix-Metalloproteasen mit einer Hydroxam-Gruppe als Hemmer des Tumorwachstums sind weiterhin in der WO-9321942 offenbart.

Ausführliche Beschreibung der Erfindung

Gemäß der vorliegenden Erfindung wird eine Verbindung bereitgestellt, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus
2(R oder S)-[2R-(S-Hydroxy-hydroxycarbamoyl-methyl)-4-methyl- pentanoylamin]-2-phenyl-ethansäurecyclopentylester
2(R oder S)-(3S-Hydroxycarbamoyl-2R-isobutyl-hex-5-enoylamino)-2- phenylethansäureisopropylester
2(R oder S)-[2R-(S-Hydroxycarbamoyl-methoxy-methyl)-4-methylpentanoylamino]-3-phenylethansäurecyclopentylester
2(R oder S)-(3S-Hydroxycarbamoyl-2R-isobutyl-hex-5-enoylamino)-2-(4- methoxyphenyl)ethansäurecyclopentylester
2(R oder S)-(3S-Hydroxycarbamoyl-2R-isobutyl-hex-5-enoylamino)-2- (thien-2-yl)ethansäurecyclopentylester
2(R oder S)-(3S-Hydroxycarbamoyl-2R-isobutyl-hex-5-enoylamino)-2- (thien-3-yl)ethansäurecyclopentylester
und pharmazeutisch oder veterinärmedizinisch annehmbare Salze, Hydrate und Solvate davon.
Die 2-S-Diastereomere der obigen Verbindungen sind bevorzugt.
Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen schließen physiologisch annehmbare Säureadditionssalze ein, z. B. Hydrochloride, Hydrobromide, Sulfate, Methansulfonate, p-Toluolsulfonate, Phosphate, Acetate, Citrate, Succinate, Lactate, Tartrate, Fumarate und Maleate. Salze können auch mit Basen gebildet werden, z. B. Natrium-, Kalium-, Magnesium- und Calciumsalze.
In einem anderen Aspekt umfaßt die Erfindung ein Verfahren zur Hemmung der Proliferation von Tumorzellen in Säugetieren, umfassend das Verabreichen einer Menge einer oben spezifizierten Verbindung oder eines pharmazeutisch oder veterinärmedizinisch annehmbaren Salzes, Hydrats oder Solvats davon, ausreichend um die Proliferation zu hemmen, bei Säugetieren die unter einer solchen Proliferation leiden.
In einem weiteren Aspekt umfaßt die Erfindung die Verwendung einer oben spezifizierten Verbindung oder eines pharmazeutisch oder veterinärmedizinisch annehmbaren Salzes, Hydrats oder Solvats davon, zur Herstellung eine Zusammensetzung zur Proliferationshemmung von Tumorzellen bei Säugetieren.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind in der Human- oder Veterinärmedizin nützlich, da sie als Hemmer der Proliferation von Krebszellen wirken. Der Nutzen der Erfindung liegt daher in der Behandlung von Krebs, wie solcher hervorgerufen durch übermäßige Proliferation von Lymphom-, Leukämie-, Myelom-, Adenokarzinom-, Karzinom-, Mesotheliom-, Teratokarzinom-, Mesotheliom-, Teratokarzinom-, Choriokarzinom-, Kleinzellkarzinom-, Großzellkarzinom-, Melanom-, Retinoblastom-, Fibrosarkom-, Leiomyosarkom-, Glioblastom- oder Endotheliom-Zellen. Es ist klar, daß verschiedene erfindungsgemäße Verbindungen unterschiedliche Potentiale als Proliferationshemmer in Abhängigkeit von dem zu behandelnden Krebs aufzeigen. Die Wirksamkeit von irgendeiner bestimmten erfindungsgemäßen Verbindung zur Hemmung der Proliferation eines bestimmten Zelltyps kann routinemäßig bestimmt werden gemäß Standardverfahren, z. B. einem solchen wie hierin im biologischen Beispiel beschrieben.
In einem weiteren Aspekt der Erfindung wird ein pharmazeutische oder veterinärmedizinische Zusammensetzung bereitgestellt, umfassend eine erfindungsgemäße Verbindung, zusammen mit einem pharmazeutisch oder veterinärmedizinisch annehmbaren Exzipienten oder Träger. Ein oder mehrere erfindungsgemäße Verbindungen können in der Zusammensetzung zusammen mit einem oder mehreren Exzipienten oder Träger vorhanden sein.
Oral verabreichbare Zusammensetzungen können in Form von Tabletten, Kapseln, Pulver, Körnchen, Pastillen, Flüssig- oder Gelpräparaten, wie oralen, topischen oder sterilen parenteralen Lösungen oder Suspensionen sein. Tabletten und Kapseln zur oralen Verabreichung können in einer Dosiseinheitsform sein und sie können herkömmliche Exzipienten wie Bindemittel, z. B. Sirup, Gummi arabicum, Gelatine, Sorbitol, Tragacanth oder Polyvinylpyrrolidon; Füllmittel z. B. Lactose, Zucker, Maisstärke, Calciumphosphat, Sorbitol oder Glycin; Tablettierungs-Schmiermittel, z. B. Magnesiumstearat, Talg, Polyethylenglykol oder Silica; Zersetzungsmittel z. B. Kartoffelstärke oder annehmbare Benetzungsmittel, wie Natriumlaurylsulfat, enthalten. Die Tabletten können gemäß in normaler pharmazeutischer Praxis bekannten Verfahren beschichtet sein. Orale flüssige Präparationen können z. B. in Form von wäßrigen oder öligen Suspensionen, Lösungen, Emulsionen, Sirup oder Elixieren sein oder können vorliegen als Trockenprodukt, welches dann mit Wasser oder anderen geeigneten Vehikeln vor Verwendung wieder hergestellt wird. Solche flüssige Präparationen können herkömmliche Zusatzmittel enthalten, wie Suspendierungsmittel, z. B. Sorbitol, Sirup, Methylcellulose, Glucosesirup, Gelatine, hydrierte eßbare Fette; Emulgationsmittel, z. B. Lecithin, Sorbitanmonooleat oder Gummi arabicum; nicht-wäßrige Vehikel (die eßbare Öle einschließen), z. B. Mandelöl, fraktioniertes Kokosnußöl, ölige Ester wie Glycerin, Propylenglykol oder Ethylalkohol; Konservierungsmittel z. B. Methyl- oder Propyl-p-hydroxybenzoat oder Sorbinsäure und, wenn gewünscht, herkömmliche Geschmacks- und Färbemittel.
Zur topischen Anwendung auf der Haut kann das Arzneimittel in Form einer Creme, Lotion oder Seife vorliegen. Creme- oder Salbenformulierungen, die für das Arzneimittel verwendet werden können, sind herkömmliche, bekannte Formulierungen, z. B. wie in Standardtextbüchern der Pharmazie beschrieben, wie British Pharmacopoeia.
Der wirksame Inhaltsstoff kann auch parenteral in einem sterilem Medium verabreicht werden. In Abhängigkeit von dem verwendeten Vehikel und der verwendeten Konzentration kann das Arzneimittel in dem Vehikel entweder suspendiert oder gelöst sein. Vorteilhaft sind Adjuvantien, wie Lokalanästhetika, Konservierungsmittel und Puffermittel in dem Vehikel gelöst.
Es ist klar, daß der spezifische Dosierungsspiegel für jeden einzelnen Patienten von einer Vielzahl von Faktoren einschließlich der Aktivität der spezifischen verwendeten Verbindung, dem Alter, Körpergewicht, allgemeinem Gesundheitszustand, Geschlecht, Diät, Verabreichungszeit, Verabreichungsweg, Ausscheidungsrate, Arzneimittelkombination und Schwere die bestimmten Erkrankung während der Therapie abhängt.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen (Beispiel 1 bis 6) wurden unter Verwendung von ähnlichen Verfahren, wie die beschrieben für die Beispiele 8, 16, 3 und 41 unserer internationalen Patentanmeldung PCT/GB97/02398 hergestellt. Diese Beispiele sind als präparative Beispiele A bis D entsprechend unten dargestellt. Als Mischungen von Diastereomere erhaltene Produkte wurden durch Umkehrphasen-HPLC getrennt. In den Beispielen wurden die folgenden Abkürzungen verwendet:
DCM - Dichlormethan
DMF - N,N-Dimethylformamid
NMM - N-Methylmorpholin
TFA - Trifluoressigsäure
HOBt - 1-Hydroxybenzotriazol
Blitz-Säulenchromatographie wurde mit Silicagel durchgeführt. ¹H-NMR und ¹³C-NMR wurde mit einem Bruker AC 250E-Spektrometer bei 250,1 bzw. 62,9 MHz aufgenommen, CDCl&sub3;-Methanol-d&sub4; und Dimethylsulfoxid-d&sub6; (DMSO-d&sub6;) wurden als Lösungsmittel und interne Referenzen verwendet und die Spektren wurden aufgezeichnet als δ ppm von TMS. Präparatives Beispiel A 2S-[2R-(S-Hydroxy-hydroxycarbamoyl-methyl)-4-methyl-pentanoylamin]-3- phenyl-propionsäureisopropylester

(a) 25-[2R-(2,2-Dimethyl-5-oxo-[1,3]-dioxolan-4S-yl)-4-methylpentanoylamino]-3-phenylpropionsäureisopropylester

Eine Lösung von 2R-(2,2-Dimethyl-5-oxo-[1,3]-dioxolan-4S-yl)-4- methyl-pentansäurepentafluorphenylester (WO 95/19956) (2,87 g, 7,3 mmol) in L-Phenylalaninisopropylester (1,5 g, 7,3 mmol) in DCM konnte bei Raumtemperatur für 96 Stunden stehen. Die Reaktionsmischung wurde mit DCM verdünnt und mit 1M wäßrigem Natriumcarbonat, 1M Salzsäure und Salzlösung gewaschen, bevor es über Magnesiumsulfat getrocknet wurde, filtriert wurde und unter reduziertem Druck einkonzentriert wurde. Das Produkt wurde aus Ethylacetat/Hexan rekristallisiert, um 2S-[2R-(2,2-Dimethyl-5-oxo-[1,3]- dioxolan-4A-yl)-4-methyl-pentanoylamino]-3-phenylpropionsäureisopropylester als feine weiße Nadeln zu ergeben (810 mg, 29%).

(b) 2A-[2R-(S-Hydroxy-hydroxycarbamoyl-methyl)-4-methyl-pentanoylamin]-3-phenyl-propionsäureisopropylester

Eine Lösung von Natriummethoxid (325 mg, 6,1 mmol) und Hydroxylaminhydrochlorid (396 mg, 6,1 mmol) in Methanol (10 ml) wurde bei Raumtemperatur für 2 Stunden gerührt. Die Lösung wurde abfiltriert, in eine Lösung von 2S-[2R-(2,2-Dimethyl-5-oxo-[1,3]-dioxolan-45-yl)-4-methylpentanoylamino]-3-phenylpropionsäureisopropylester (800 mg, 2,1 mmol) in Methanol (10 ml) gegeben. Die Reaktion konnte bei Raumtemperatur für 18 Stunden stehen. Die Reaktionsmischung wurde unter reduziertem Druck einkonzentriert und der Rest wurde zwischen Ethylacetat und Wasser getrennt. Die organische Schicht wurde mit Wasser gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und unter reduziertem Druck einkonzentriert. Die Rekristallisation aus Ethylacetat ergab 2S-[2R-(S-Hydroxy-hydroxycarbarnoylmethyl)-4-methyl-pentanoylamin]-3-phenyl-propionsäureisopropylester als weißes kristallines Material, das dann im Vakuum getrocknet wurde (465 mg, 58%). Präparatives Beispiel B 2S-[2R-(S-Hydroxycarbamoyl-methoxy-methyl)-4-methyl-pentanoylamino]- 3-phenyl-propionsäureisopropylester

(a) 2R-(S-Benzyloxycarbamoyl-methoxy-methyl)-4-methyl-pentansäure

Eine Lösung von 3R-Isobutyl-4S-methoxy-dihydrofuran-2,5-dion (WO 97/02239) (609 mg, 3,27 mmol) und O-Benzylhydroxylamin (403 mg, 3,27 mmol) in Ethylacetat (5 ml) wurden bei Raumtemperatur für 1 Stunde gerührt. Die Reaktionsmischung wurde dann unter reduziertem Druck einkonzentriert um 2R-(S-Benzyloxycarbamoyl-methoxy-methyl)-4-methyl-pentansäure als weißen Schaum zu erhalten (1,01 g, 100%).

(b) 2S-[2R-(S-Benzyloxycarbamoyl-methoxy-methyl)-4-methylpentanoylamino]-3-phenyl-propionsäureisopropylester

Eine Lösung von 2R-(S-Benzyloxycarbamoyl-methoxy-methyl)-4-methylpentansäure (1,01 g, 3,3 mmol) in Tetrahydrofuran (15 ml) bei 0ºC wurde mit L-Phenylalaninisopropylester (810 mg, 3,9 mol) und N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodümidhydrochlorid (750 mg, 3,9 mmol) behandelt. Die Reaktionsmischung konnte sich auf Umgebungstemperatur erwärmen und wurde für 18 Stunden gerührt. Die Lösung wurde unter reduziertem Druck einkonzentriert und der Rest wurde in DCM aufgenommen. Diese Lösung wurde mit 1 M Salzsäure, gesättigter Natriumhydrogencarbonat- und Salzlösung gewaschen. Die organische Phase wurde mit Natriumsulfat getrocknet, filtriert und unter reduziertem Druck einkonzentriert. Das Produkt wurde durch Säulenchromatographie aufgereinigt, eluiert mit 2% Methanol/DCM. Die das Produkt enthaltenden Fraktionen wurden miteinander kombiniert und unter reduziertem Druck einkonzentriert um 2S-[2R-(S-Benzyloxycarbamoyl-methoxymethyl)-4-methyl-pentanoylamino]-3-phenyl-propionsäureisopropylester als weißen Feststoff zu ergeben (1,39 g, 85%).

(c) 2S-[2R-(S-Hydroxycarbamoyl-methoxy-methyl)-4-methylpentanoylamino]-3-phenyl-propionsäureisopropylester

Eine Lösung von 2S-[2R-(S-Benzyloxycarbamoyl-methoxy-methyl)-4- methyl-pentanoylamino]-3-phenyl-propionsäureisopropylester (1,37 g, 2,8 mmol) in Ethanol (30 ml) wurde mit Palladium-Katalysator (274 mg, 10% Pd/Aktivkohle) als Aufschlämmung in Ethylacetat (5 ml) behandelt. Wasserstoffgas wurde durch die Suspension für 2 Stunden geleitet. Die Reaktionsmischung wurde filtriert und unter reduziertem Druck einkonzentriert. Das Produkt wurde aus Ethylacetat/Hexan rekristallisiert, um 2S-[2R-(S-Hydroxycarbamoyl-methoxy-methyl)-4-methyl-pentanoylamino]-3- phenyl-propionsäureisopropylester als weißen Feststoff zu ergeben (778 mg, 70%). Präpratives Beispiel C 2S-(3S-Hydroxycarbamoyl-2R-isobutyl-hex-5-enoylamino)-3-phenylpropionsäureisopropylester

(a) 2S-(3S-tert-Butoxycarbonyl-2R-isobutyl-hex-5-enoylamino)-3- phenylpropionsäureisopropylester

Eine Lösung von L-Phenylalaninisopropylester (3,9 g, 18,8 mmol) in DMF (15 ml) wurde in einem Eiswasserbad gekühlt und mit 3S-tert-Butoxycarbonyl-2R-isobutyl-hex-5-ensäurepentafluorphenylester (9,03 g, 20,7 mmol) behandelt. Die Reaktion konnte sich auf Raumtemperatur erwärmen und wurde über Nacht gerührt. Die Reaktionsmischung wurde unter reduziertem DrucJc einkonzentriert. Der Rest wurde in Ethylacetat aufgenommen und mit iM Salzsäure, 1M Natriumcarbonat und Salzlösung gewaschen. Die Lösung wurde über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und unter reduziertem Druck einkonzentriert. Das Produkt wurde mit Säulenchromatographie unter Verwendung einer Gradientenelution von 100% DCM zu 10% Methanol/DCM aufgereinigt. Die das Produkt enthaltenden Fraktionen wurden miteinander kombiniert und das Lösungsmittel entfernt, um 2S-(3S-tert-Butoxycarbonyl-2R-isobutyl-hex- 5-enoylamino)-3-phenylpropionsäureisopropylester als gelben Feststoff zu ergeben (3,5 g, 41%).

(b) 2S-(3S-Hydroxycarbonyl-2R-isobutyl-hex-5-enoylamino)-3- phenylpropionsäureisopropylester

Eine Lösung von 2S-(3S-tert-Butoxycarbonyl-2R-isobutyl-hex-5-enoylamino)-3-phenylpropionsäureisopropylester (3,5 g, 7,6 mmol) in einer Mischung von TFA und DCM (1 : 1, 10 ml) konnte über Nacht bei 5ºC stehen. Die Reaktionsmischung wurde unter reduziertem Druck einkonzentriert. Die Zugabe von Ether zu dem Rest ergab 25-(35-Hydroxycarbonyl-2R-isobutyl-hex-5- enoylamino)-3-phenylpropionsäureisopropylester als weißen Feststoff (261 mg, 8%).

(c) 2S-(3S-Hydroxycarbamoyl-2R-isobutyl-hex-5-enoylamino)-3-phenylpropionsäureisopropylester

Eine Lösung von 2S-(3S-Hydroxycarbonyl-2R-isobutyl-hex-5-enoylamino)- 3-phenylpropionsäureisopropylester (260 mg, 0,64 mmol) in DMF (10 ml) wurde in einem Eiswasserbad gekühlt. N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodümidhydrochlorid (148 mg, 0,77 mmol) und. HOBT (104 mg, 0,77 mmol) wurden unter Rühren hinzugegeben. Die Reaktion konnte sich auf Raumtemperatur erwärmen und nach 2 Stunden wurde eine Lösung von Hydroxylaminhydrochlorid (67 mg, 0,96 mmol) und NMM (0,1 ml, 0,96 mmol) in DMF (5 ml) hinzugegeben. Nach Rühren über Nacht wurde die Reaktionsmischung unter reduziertem Druck einkonzentriert und das Produkt wurde durch Chromatographie auf säuregewaschenen Silica unter Verwendung von 5 bis 10% Methanol und DCM aufgereinigt. Die Rekristallisation aus Ethylacetat/Hexan ergab 2S-(3S-Hydroxycarbamoyl-2R-isobutyl-hex-5-enoylamino)-3-phenylpropionsäureisopropylester als weißen Feststoff (12 mg, 4%). Präparatives Beispiel D 2S-(3S-Hydroxycarbamoyl-2R-isobutyl-hex-5-enoylamino)-2-penylethansäurecyclopentylester
Die obige Verbindung wurde analog zu dem für präparatives Beispiel C beschriebenen Weg unter Verwendung von L-Phenylglycincyclopentylester anstelle von L-Phenylalaninisopropylester hergestellt. Beispiel 1 2-[R-(S-Hydroxy-hydroxycarbamoyl-methyl)-4-methyl-pentanoylamin]-2- phenyl-ethansäurecyclopentylester
Hergestellt gemäß Verfahren ähnlich zu dem beschrieben im präparativen Beispiel A unter Verwendung von Phenylglycincyclopentylester.

Diastereoisomer A

¹H-NMR; δ (MeOD): 7,4-7,29 (5H, m), 5,43 (1H, s), 5,2-5,14 (1H, m), 4,02 (1H, d, J = 6,9 Hz), 2,94-2,85 (1H, m), 1,91-1,34 (10H, bm), 1,25-1,14 (1H, m) und 0,86 (6H, dd, J = 6,5, 11,5 Hz).
¹³C-NMR; δ (MeOD): 175,8, 171,8, 171,4, 137,8, 129,8, 129,4, 128,6, 80,0, 73,2, 58,5, 49,2, 39,1, 33,3, 33,3, 26,8, 24,5, 24,4, 23,7 und 22,1.

Diastereoisomer B

¹H-NMR; δ (MeOD): 7,33-7,19 (5H, m), 5,3 (1H, s.), 5,11-5,06 (1H, m), 3,81 (1H, d, J = 7,3 Hz), 2,83-2,74 (1H, m), 1,83-1,45 (10H, bm), 1,12-1,03 (1H, m) und 0,88-0,81 (6H, dd, J = 6,4, 12,3 Hz).
¹³C-NMR; δ (MeOD): 175,8, 171,8, 171,5, 137,3, 129,8, 129,5, 128,8, 79,9, 73,3, 58,7, 48,9, 39,2, 33,3, 33,3, 26,7, 24,5, 24,5, 24,0 und 22,2. Beispiel 2 2-(3S-Hydroxycarbamoyl-2R-isobutyl-hex-5-enoylamino)-2-phenylethansäureisopropylester
Hergestellt gemäß Verfahren ähnlich zu dem beschriebenen präparativen Beispiel D, unter Verwendung von Phenylglycinisopropylester.

Diastereoisomer A

¹H-NMR; δ (MeOD): 7,34-7,24 (5H, m), 5,59-5,42 (1H, m), 5,36 (1H, d), 5,02-4,77 (3H, m), 2,63-2,53 (1H, m), 2,17-2,02 (2H, m), 1,89- 1,78 (1H, m), 1,63-1,45 (2H, m), 1,18 (3H, d, J = 6,3 Hz), 1,05 (3H, d, J = 6,2 Hz), 1,00-0,93 (1H, m), 0,88 (3H, d, J = 6,5 Hz) und 0,81 (3H, d, J = 6,5 Hz).
¹³C-NMR; δ (MeOD): 176,2, 172,4, 171,3, 137,6, 136,0, 129,9, 129,6, 129,0, 117,4, 70,5, 58,7, 47,4, 41,5, 36,0, 26,7, 24,5, 21,9, 21,7 und 21,7.

Diasteroisomer B

¹H-NMR; δ (MeOD): 7,4-7,34 (5H, m), 5,77-5,61 (1H, m), 5,42 (1H, s), 5,1 - 4,98 (3H, m), 2,7-2,6 (1H, m), 2,44-2,17 (3H, m), 1,61-1,51 (1H, m), 1,42-1,29 (1H, m), 1,25 (3H, d, J = 6,3 Hz), 1,13 (3H, d, J = 6,2 Hz), 1,09-1,00 (1H, m) und 0,81 (6H, d, J = 6,4 Hz.
¹³C-NMR; δ (MeOD): 176,4, 172,5, 171,5, 137,2, 136,4, 129,9, 129,6, 129,0, 117,5, 70,5,58,8, 48,4, 47,4, 41,3, 36,0, 27,1, 24,3, 21,9, 21,8 und 21,6. Beispiel 3 2-[2R-(S-Hydroxycarbamoyl-methoxy-methyl)-4-methyl-pentanoylamino]-3- phenylethansäurecyclopentylester
Hergestellt gemäß Verfahren ähnlich zu dem beschriebenen präparativen Beispiel B unter Verwendung von Phenylglycincyclopentylester.

Diastereoisomer A

¹H-NMR; δ (MeOD): 8,83 (1H, d, J = 6,6 Hz), 7,48-7,29 (5H, m), 5,44- 5,42 (1H, m), 5,20-5,16 (1H, m), 3,53 (1H, d, J = 9,7 Hz), 3,17 (3H, s), 2,89-2,79 (1H, m), 1,90-1,54 (10H, bm), 1,06-0,99 (1H, m), 0,95 (3H, d, J = 6,5 Hz) und 0,90 (3H, d, J = 6,4 Hz).
¹³C-NMR; δ (MeOD): 175,3, 171,6, 169,4, 137,5, 129,7, 129,4, 128,7, 83,1, 79,9, 58,7, 58,1, 48,5, 38,4, 33,4, 33,3, 26,7, 24,6, 24,5, 24,3 und 21,8.

Diastereoisomer B

¹H-NMR; δ (MeOD): 7,39-7,30 (5H, m), 5,45 (1H, s), 5,21-5,15 (1H, m), 3,59 (1H, d, J = 9,4 Hz), 3,29 (3H, s), 2,89-2,79 (1H, m), 1,93-1,49 (9H, bm), 1,42-1,21 (1H, m), 1,01 (1H, ddd, J = 3,7, 9,9, 13,3 Hz), 0,83 (3H, d, J = 6,5 Hz) und 0,79 (3H, d, J = 6,6 Hz).
¹³C-NMR; δ (MeOD): 175,1, 171,5, 169,5, 137,9, 129,7, 129,4, 128,7, 83,0, 79,8, 58,5, 58,3, 48,6, 38,5, 33,3, 27,8, 24,5, 24,4, 24,1 und 21,7. Beispiel 4 2(3S-Hydroxycarbamoyl-2R-isobutyl-hex-5-enoylamino)-2-(4-methoxyphenyl)ethansäurecyclopentylester
Hergestellt gemäß Verfahren ähnlich zu dem beschrieben in präparativen Beispiel D unter Verwendung von 4-Methoxyphenylglycincyclopentylester.

Diastereoisomer A

¹H-NMR; δ (MeOD): 8,94 (1H, d, J = 6,4 Hz), 7,32 (2H, d, J = 8,7 Hz), 6,93 (2H, d, J = 8,7 Hz), 5,67-5,50 (1H, m), 5,36-5,33 (1H, m), 5,20-5,14 (1H, m), 4,93-4,87 (2H, m), 3,79 (3H, s), 2,68 - 2,59 (1H, m), 2,24- 2,09 (2H, m), 1,97-1,55 (11H, bm), 1,11-1,00 (1H, m), 0,95 (3H, d, J = 6,5 Hz) und 0,88 (3H, d, J = 6,5 Hz).
¹³C-NMR; δ (MeOD): 176,2, 172,4, 171,9, 161,4, 136,0, 130,2, 129,4, 117,4, 115,2, 79,7, 58,2, 55,8, 48,3, 47,3, 41,5, 36,0, 33,4, 33,3, 26,7, 24,6, 24,5 und 21,7.

Diastereoisomer B

¹H-NMR; δ (MeOD): 8,96 (1H, d, J = 6,7 Hz), 7,29 (2H, d, J = 8,7 Hz), 6,93 (2H, d, J = 8,7 Hz); 5,77-5,61 (1H, m), 5,32 (1H, s), 5,20-5,15 (1H, m), 5,09-4,97 (2H, m), 3,80 (3H, s), 2,64 (1H, dt, J = 3,3, 11,4, 13,5 Hz), 2,43-2,16 (3H, m), 1,91-1,49 (9H, bm), 1,42-1,29 (1H, m), 1,05 (1H, ddd, J = 3,3, 10,1, 13,2 Hz) und 0,81 (6H, d, J = 6,5 Hz).
¹³C-NMR; δ (MeOD): 176,3, 172,5, 172,0, 161,4, 136,4, 130,2, 129,0, 117,5, 115,2, 79,8, 58,2, 55,8, 48,4, 47,4, 41,3, 36,1, 33,4, 27,1, 24,5, 24,3 und 21,6. Beispiel 5 2-(3S-Hydroxycarbamoyl-2R-isobutyl-hex-5-enoylamino)-2-(thien-2-yl)- ethansäurecyclopentylester
Hergestellt gemäß Verfahren ähnlich zu dem beschriebenen präparativen Beispiel D unter Verwendung von Thien-2-ylglycincyclopentylester.

Diastereoisomer A

¹H-NMR; δ (MeOD): 7,41 (1H, dd, J = 5,1, 1,2 Hz), 7,12 (1H, d, J = 3,5 Hz), 7,01 (1H, dd, J = 5,1, 3,5 Hz), 5,72 (1H, s), 5,69-5,52 (1H, m), 5,26-5,18 (1H, m), 5,00-4,89 (2H, m), 2,70-2,59 (1H, m), 2,28-2,13 (2H, m), 2,09-1,50 (11H, m), 1,05 (1H, ddd, J = 13,8, 11,0, 108 Hz), 0,93 (3H, d, J = 6,4 Hz) und 0,87 (3H, d, J = 6,5 Hz).
¹³C-NMR; δ (MeOD): 176,5, 172,7, 171,1, 139,5, 136,4, 128,4, 128,3, 127,7, 117,9, 80,7, 54,1, 48,7, 47,7, 41,9, 36,5, 33,8, 33,7, 27,2, 25,1, 25,0, 24,9 und 22,1.

Diastereoisomer B

¹H-NMR; δ (MeOD): 7,42 (1H, dd, J = 5,0 0,7 Hz), 7,10 (1H, d, J = 3,6 Hz), 7,01 (1H, dd, J = 5,0, 3,6 Hz), 5,79-5,59 (2H, m), 5,28-5,19 (1H, m), 5,10-4,94 (2H, m), 2,71-2,59 (1H, m), 2,36-2,16 (3H, m), 1,97-1,34 (10H, m), 1,13-1,00 (1H, m), 0,86 (3H, d, J = 6,2 Hz) und 0,84 (3H, d, J = 6,3 Hz).
¹³C-NMR; δ (MeOD): 176,7, 172,8, 171,2, 139,3, 136,7, 128,3, 128,2, 127,6, 117,9, 80,7, 54,2, 48,8, 47,8, 41,7, 36,4, 33,8, 27,5, 25,1, 25,0, 24,8 und 22,1. Beispiel 6 2-(3S-Hydroxycarbamoyl-2R-isobutyl-hex-5-enoylamino)-2-(thien-3-yl)- ethansäurecyclopentylester
Hergestellt gemäß Verfahren ähnlich zu dem beschrieben in präperativen Beispiel D unter Verwendung von Thien-3-ylglycincyclopentylester

Diastereoisomer A

¹H-NMR; δ (MeOD): 7,48-7,42 (2H, m), 7,13 (1H, dd, J = 42, 2,0 Hz), 5,69-5,52 (2H, m), 5,21-2,16 (1H, m), 4,98-4,90 (2H, m), 2,71-2,59 (1H, m), 2,28-2,11 (2H, m), 2,00-1,50 (11H, m), 1,12-0,98 (1H, m), 0,94 (3H, d, J = 6,4 Hz) und 0,88 (3H, d, J = 6,5 Hz).
¹³C-NMR; δ (MeOD): 176,6, 172,8, 171,8, 137,8, 136,4, 128,3, 128,0, 125,2, 117,9, 80,3, 54,6, 41,9, 36,5, 33,8, 33,8, 27,1, 25,0, 24,9 und 22,1.

Diastereoisomer B

¹H-NMR; δ (MeOD): 7,45 (1H, dd, J = 4,9, 3,0 Hz), 7,43-7,40 (1H, m), 7,12 (1H, dd, J = 5,0, 1,3 Hz), 5,68 (1H, ddt, J = 17,0, 10,1, 6,8 Hz), 5,53 (1H, s), 5,23-5,17 (1H, m), 5,10-4,96 (2H, m), 2,70-2,60 (1H, m), 2,41- 2,16 (3H, m), 1,94-1,49 (9H, m), 1,44-1,29 (1H, m), 1,05 (1H, ddd, J = 12,9, 10,3, 3,3 Hz), 0,84 (3H, d, J = 6,5 Hz) und 0,83 (3H, d, J = 6,5 Hz).

Biologisches Beispiel

Die Verbindungen der Beispiele 1 bis 6 wurden im folgenden Zellproliferations-Assay getestet, um ihre entsprechenden Kapazitäten der Proliferationshemmung bei diesen entsprechenden Zellarten zu bestimmen.
Eine humane Zellinie, nämlich hystozytisches Lymphom (U937) wurde in 30 mm² Gewebekulturvertiefungen ausgesät, in einem entsprechenden, mit 10% fötalem Kälberserum versetzten Kulturmedium mit einer Dichte von 250 Zellen/mm². 6 Stunden später wurden die Testverbindungen in dem gleichen Zellmedium zu den Zellen gegeben, um eine Endkonzentration vom 6 pH zu erhalten. Kontrollvertiefungen enthalten Zellen, die mit dem gleichen Kulturmedium, enthaltend eine äquivalente Menge an Arzneimittelvehikel, hier DMSO mit einer Endkonzentration von 0,08% versetzt wurden. Nach 72 Stunden in Kultur wurden die Zellen für 3 Stunden mit [Methyl-³[H]- Thymidin] (2 uCi/ml) gepulst und dann auf Filtermatten geerntet und die mit DNA assoziierte Radioaktivität gezählt. Die Ergebnisse wurden dargestellt als Prozent des Kontroll-³[H]-Thymidin-einbaus (n = 6 ± 1 Standardabweichung). Die Hemmung der Proliferation wurde in allen Testverbindungen beobachtet.

Claims

1. Verbindung, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus:

2(R oder S)-[2R-(S-Hydroxy-hydroxycarbamoyl-methyl)-4-methylpentanoylamin]-2-phenyl-ethansäurecyclopentylester

2(R oder S)-(3S-Hydroxycarbamoyl-2R-isobutyl-hex-5-enoylamino)-2- phenylethansäureisopropylester

2(R oder S)-[2R-(S-Hydroxycarbamoyl-methoxy-methyl)-4-methylpentanoylamino]-3-phenylethansäurecyclopentylester

2(R oder S)-(3S-Hydroxycarbamoyl-2R-isobutyl-hex-5-enoylamino)-2-(4- methoxyphenyl)ethansäurecyclopentylester

2(R oder S)-(3S-Hydroxycarbamoyl-2R-isobutyl-hex-5-enoylamino)-2- (thien-2-yl)ethansäurecyclopentylester

2(R oder S)-(3S-Hydroxycarbamoyl-2R-isobutyl-hex-5-enoylamino)-2- (thien-3-yl)ethansäurecyclopentylester

und pharmazeutisch oder veterinärmedizinisch annehmbare Salze, Hydrate oder Solvate davon.

2. Verbindung gemäss Anspruch 1, die das 2-S-Diastereomer ist.

3. Pharmazeutische oder veterinärmedizinische Zusammensetzung, umfassend eine Verbindung gemäss Anspruch 1 oder Anspruch 2 zusammen mit einem pharmazeutisch oder veterinärmedizinisch annehmbaren Exzipienten oder Träger.

4. Verwendung einer Verbindung gemäss Anspruch 1 oder 2 bei der Herstellung einer Zusammensetzung zur Inhibierung der Proliferation von Tumorzellen in Säugern.

5. Verwendung gemäss Anspruch 4, worin die behandelte Zellproliferation übermässige Proliferation von Lymphom-, Leukämie-, Myelom-, Adenokarzinom-, Karzinom-, Mesotheliom-, Teratokarzinom-, Chorionepitheliom-, Kleinzellkarzinom-, Grosszellkarzinom-, Melanom-, Retinoblastom-, Fibrosarkom-, Leiomyosarkom-, Glioblastom- oder Endotheliomzellen ist.