DE69230993T2 - Rekombinante viren vektoren zur expression in muskelzellen - Google Patents
Rekombinante viren vektoren zur expression in muskelzellenInfo
- Publication number
- DE69230993T2 DE69230993T2 DE69230993T DE69230993T DE69230993T2 DE 69230993 T2 DE69230993 T2 DE 69230993T2 DE 69230993 T DE69230993 T DE 69230993T DE 69230993 T DE69230993 T DE 69230993T DE 69230993 T2 DE69230993 T2 DE 69230993T2
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- nucleic acid
- vectors
- muscle cells
- cells
- adenovirus
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 239000013598 vector Substances 0.000 title claims abstract description 39
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 32
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims description 7
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 26
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 26
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 26
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims abstract description 13
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims abstract description 13
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 13
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 13
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 12
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 7
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 claims description 33
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 21
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 18
- 230000007170 pathology Effects 0.000 claims description 13
- 230000006798 recombination Effects 0.000 claims description 10
- 238000005215 recombination Methods 0.000 claims description 10
- 230000002950 deficient Effects 0.000 claims description 7
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 claims description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 5
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 claims description 5
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 claims description 5
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 claims description 5
- 230000002537 thrombolytic effect Effects 0.000 claims description 5
- 108010069091 Dystrophin Proteins 0.000 claims description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 4
- 230000010076 replication Effects 0.000 claims description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 4
- 206010013801 Duchenne Muscular Dystrophy Diseases 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims description 3
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 claims description 2
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 2
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 claims 2
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 claims 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 abstract description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 14
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 10
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 8
- 241001135569 Human adenovirus 5 Species 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 6
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010061216 Infarction Diseases 0.000 description 2
- 241000713333 Mouse mammary tumor virus Species 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 208000029578 Muscle disease Diseases 0.000 description 2
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 2
- 230000001744 histochemical effect Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000007574 infarction Effects 0.000 description 2
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 2
- 201000006938 muscular dystrophy Diseases 0.000 description 2
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 2
- 210000001087 myotubule Anatomy 0.000 description 2
- 208000001297 phlebitis Diseases 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 2
- OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl beta-D-galactoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CNC2=CC=C(Br)C(Cl)=C12 OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 241000598171 Human adenovirus sp. Species 0.000 description 1
- 101150102264 IE gene Proteins 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000012503 blood component Substances 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000001617 migratory effect Effects 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 210000002363 skeletal muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
- C12N2710/10341—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/10343—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Virology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
- Die Erfindung betrifft rekombinante Vektoren viralen Ursprungs, die eine Nukleotidsequenz tragen, die für ein bestimmtes Polypeptid kodiert, und ihre Verwendung für die Expression dieses Polypeptids in Muskelzellen. Die Erfindung zielt gleichermassen auf ein Verfahren zur Herstellung dieser Vektoren sowie ihre Anwendungen, insbesondere als Medikamente im Bereich der Muskelpathologien.
- Das bisher nicht gelöste Problem der direkten Diffusion eines Gens zu einem spezifischen Gewebe behindert die Entwicklung einer Gentherapie im Bereich der Muskelerkrankungen.
- Die verschiedenen Versuche zur Modifikation des Muskelgewebes, die bis heute vorgenommen wurden, sind im Prinzip die Fusion von Muskelzellen mit einem Wirtsmuskel (Salminen, A. et al., Hum. Gene Ther. 2, 15-26 (1991); Partridge, T. A. et al., Nature 337, 176-179 (1989)) und die Injektion von DNA direkt in die Muskeln (Wolff, J. A. et al., Science 247, 1465-1468 (1991); Acsadi, G., New Biol. 3, 71-81 (1991)).
- Die Methode der Fusion von Vorstufen von Muskelzellen aus einem normalen Spender mit Muskelfasern eines Wirts wurde bei Mäusen (Partridge, T. A. et al. siehe oben) mit Erfolg durchgeführt und diese Zelltherapie war Gegenstand von Vorversuchen bei Kindern. Dennoch scheint dieser Ansatz zu viele Nachteile aufzuweisen, als dass sie für die Behandlung von Muskelpathologien anwendbar sein kann. In der Tat sind die Migrationskapazitäten dieser Zellvorstufen auf einige Millimeter reduziert, ihre Zellimplantation erfordert Millionen von Injektionen während stundenlanger Anästhesie. Es ist unausbleiblich, dass ein Risiko immunologischer Probleme auftritt, die zu Abstossungserscheinungen führen, wie im Falle zahlreicher Transplantationen. Ausserdem benötigt die Behandlung der Duchenne-Muskeldystrophie (DMD) nicht nur ein Erreichen der Skelettmuskeln, sondern gleichermassen der Myokardzellen; die Schwierigkeiten, die beim Implantieren von Vorstufen von Muskelzellen in das Myokard möglicherweise angetroffen werden, kann man sich leicht vorstellen. Die Zelltherapie erscheint folglich wenig geeignet für die Behandlung von kranken Zellen, die eine solche Verbreitung im Organismus aufweisen.
- Die Gentherapie mit direkter Einführung von Nukleinsäuren ins Innere von Organen in vivo ist eine Methode, die aufgrund ihrer Einfachheit verlockend ist, deren Entwicklung sich aber an einer Reihe von Hindernissen stösst. Insbesondere bleibt die Expression von Genen in den Muskeln auf den Punkt der Injektion lokalisiert (Wolff, J. A. et al. siehe oben) und scheint zeitlich ziemlich begrenzt, insbesondere im Herzmuskel (Acsadi, G. et al. siehe oben).
- Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist die präzise Einführung einer sehr grossen Zahl von Nukleinsäuren in eine bedeutende Zahl von Muskelzellen (bis zu 50% und mehr) eines menschlichen oder tierischen Organismus zu ermöglichen, seien diese Muskelzellen nun Skelettmuskelzellen oder auch Myokardzellen.
- Die vorliegende Erfindung hat insbesondere das Ziel, die Beförderung dieser Nukleinsäuren zu den Zielmuskelzellen durch den Blutkreislauf ermöglichen, wobei diese Nukleinsäuren vor dem Angriff verschiedener Blutbestandteile geschützt sind.
- Ein anderes Ziel der vorliegenden Erfindung ist, der Öffentlichkeit pharmazeutische Zusammensetzungen zur Verfügung zu stellen, die die Behandlung von Muskelerkrankungen ermöglichen, und insbesondere von genetischen Pathologien des Mus kelsystems oder auch von Pathologien, deren Lokalisation im Organismus sie für Expressionsprodukte der oben genannten Nukleinsäuren zugänglich machen, wobei diese Produkte von den Muskelzellen ausgeschieden werden.
- Die vorliegende Erfindung ergibt sich aus der von den Erfindern gemachten Entdeckung der Tatsache, dass man bei Mäusen nach Injektion von rekombinanten Vektoren viralen Ursprungs, insbesondere von Adenoviren, in deren Genom das für die β- Galactosidase kodierende Gen eingeführt wurde, in zahlreichen Geweben β-Galactosidaseaktivität findet. Unter diesen Geweben sind zu nennen die Lungen, die Leber, die Eingeweide, das Herz und die Skelettmuskeln. Die Expression des Gens der β- Galactosidase ist zeitlich konstant, da der Anteil der Zellen in blauer Farbe (Anfärbung nach der Expression des Gens) im Muskelgewebe von einem Monat zum anderen ungefähr äquivalent ist.
- Fig. 1 stellt ein Beispiel der Konstruktion eines rekombinanten Vektors gemäss der Erfindung und entsprechend einem Adenovirus vom Typ Ad5 dar, in dessen Genom das Gen der β-Galactosidase unter Kontrolle des Promotors RSV eingefügt ist.
- Die vorliegende Erfindung hat zum Gegenstand die Verwendung von Rekombinationsvektoren viralen Ursprungs, die nicht replizierbar sind und die geeignet sind, von Rezeptoren menschlicher oder tierischer Muskelzellen erkannt zu werden, die durch diese Viren infizierbar sind, wobei diese Vektoren darüber hinaus durch eine Insertions-Nukleinsäure modifiziert sind, welche eine für eine Polypeptidsequenz kodierende Nukleotidsequenz beinhaltet, deren Expression in den genannten Muskelzellen erwünscht ist, wobei diese Sequenz unter der Kontrolle eines Promotors ist, der von den Polymerasen dieser Zellen erkannt wird, zur Herstellung eines intravenös oder intraarteriös verabreichbaren Medikaments, und das zur Be handlung von Pathologien bestimmt ist, die Muskelzellen betreffen, oder von Pathologien, deren Lokalisierung im Organismus so ist, dass sie zugänglich sind für die durch die genannten Muskelzellen abgesonderten Produkte der Expression der genannten Nukleotidsequenz.
- Die Adenoviren, insbesondere die menschlichen Adenoviren vom Typ 2 oder 5 stellen im Rahmen der vorliegenden Erfindung besonders bevorzugte Vektoren dar, besonders aufgrund der grossen Grösse des fremden DNA-Fragments, das in das Genom dieses Virus eingefügt werden kann.
- Mit Vorteil ist die oben genannte Insertionsnukleinsäure in einem defekten Adenovirusgenom enthalten, wobei diesem Genom essentielle Sequenzen fehlen, die zur Replikation dieser Adenoviren nötig sind, und insbesondere Transaktivatoren EA und EB; dieses Genom enthält trotzdem bevorzugt alle die essentiellen Sequenzen, die für die Verkapselung dieser Adenoviren nötig sind.
- Der verwendete Promotor kann ein endogener Promotor sein (beispielsweise ein früher oder später Promotor des verwendeten Adenovirus) oder ein exogener.
- Mit Vorteil wird auf die Verwendung von starken Promotoren zurückgegriffen, beispielsweise mit einer Stärke in der Grössenordnung des im LTR (Long Terminal Repeat) von RSV (Rous Sarcome Virus) enthaltenen Promotors.
- Als Beispiel anderer Promotoren, deren Verwendung in Betracht gezogen werden kann, sind zu nennen:
- - der Promotor des Gens IE von CMV (Cytomegalievirus)
- - die induzierbaren Promotoren MMTV (Mouse Mammary Tumor Virus) oder Metallothionin.
- Die Stärke des verwendbaren Promotors kann in ähnlichen Versuchen beurteilt werden wie sie in den folgenden Beispielen beschrieben sind, beispielsweise durch Substitution in den Vektoren dieser Beispiele des untersuchten Promotors auf den im LTR von RSV enthaltenen Promotor und durch Bewertung der Expressionsintensität des erhaltenen Markers, wobei die Intensität dann mit der verglichen werden kann, die mit dem Promotor von LTR von RSV erhalten wird.
- Die Menge der in den Organismus verabreichten Vektoren ist mir Vorteil so ausgewählt, dass sie über das Immunsystem des Organismus hinausgeht, in den sie injiziert sind.
- Mit Vorteil ist der im Rahmen der vorliegenden Erfindung gewählte Verabreichungsweg der intravenöse oder intraarterielle Weg.
- Unter den oben genannten Pathologien, die Muskelzellen betreffen, sind genetische Pathologien zu nennen wie die Muskeldystrophie.
- Zu diesem Zweck umfasst die in das Genom des viralen Vektors eingesetzte Nukleinsäure, und von der die Diffusion in die Muskelmasse gewünscht ist, eine Nukleotidsequenz, die für ein Polypeptid kodiert, das geeignet ist, die fragliche Pathologie zu behandeln, und insbesondere in der Muskelzelle des normalerweise in einer gesunden Zelle vorhandenen Polypeptids eine Rolle zu spielen, aber deren Mangel bedingt ist entweder durch eine anormal schwache, sogar null, Produktion dieses Polypeptids oder auf einen Fehler in seiner Aminosäuresequenz was zu Anomalien in der genetischen Ordnung in der kodierenden Nukleotidsequenz führt.
- Erfindungsgemäss für die Herstellung eines Medikaments, das zur Behandlung der Muskeldystrophie bestimmt ist, verwendete Vektoren sind besonders dadurch gekennzeichnet, dass die Insertionsnukleinsäure ganz oder teilweise aus einem gesunden Gen des Dystrophin besteht. Die Einfügung des ganzen Genes des Dystrophin oder auch jedes Teils dieses Genes, das für ein Polypeptid kodiert, das eine Aktivität erhält, die der des ganzen Proteins vergleichbar ist, kann nach einem Verfahren vorgenommen werden, das zu dem nachfolgend zum Einführen des Gens der β-Galactosidase beschriebenen identisch ist.
- Als Beispiel für andere Pathologien als Muskelpathologien, die für eine Behandlung im Rahmen der vorliegenden Erfindung geeignet sind, sind Thrombosen aufgrund von Infarkten oder Venenentzündungen zu nennen.
- Erfindungsgemäss für die Herstellung eines Medikaments verwendete Vektoren, das zur Behandlung von Thrombosen bestimmt ist und zur Vorbeugung von Infarkten und von Venenentzündungen, sind besondere dadurch gekennzeichnet, dass die Insertionsnukleinsäure eine Nukleotidsequenz umfasst, die für eine thrombolytische Substanz kodiert. Dieser letzteren Sequenz geht mit Vorteil eine Signalsequenz voraus, die für ein Peptid kodiert, wobei das Signal die Ausscheidung der thrombolytischen Substanz ausserhalb der Muskelzelle gewährleistet.
- Die Anmeldung beschreibt gleichermassen jeden Rekombinationsvektor, der dadurch gekennzeichnet ist, dass er aus dem defekten Genom eines Adenovirus besteht, der zumindest die Menge der essentiellen Sequenzen beinhaltet, die für die Verkapselung dieses Adenovirus notwendig sind, und in die eine rekombinante Nukleinsäure eingefügt ist, deren Diffusion in die Muskelmasse gewünscht ist, wobei diese Nukleinsäure unter die Kontrolle eines Promotors gestellt ist, der geeignet ist, von den Polymerasen der Muskelzellen erkannt zu werden, insbesondere der starke Promotor der frühen Region E1A des Adenovirusgenoms.
- Ein bevorzugter rekombinanter Vektor der Erfindung ist dadurch gekennzeichnet, dass diese rekombinante Nukleinsäure ganz oder teilweise aus dem Gen des Dystrophin gebildet ist.
- Die Erfindung betrifft gleichermassen pharmazeutische Zusammensetzungen umfassend einen oder mehrere rekombinante Vektoren wie sie oben beschrieben sind, in Verbindung mit einem pharmazeutisch akzeptablen Träger.
- Ein Verfahren zur Herstellung von Rekombinationsvektoren ist gleichermassen beschrieben. Dieses Verfahren umfasst nach dem eigentlichen Schritt der Bildung der Vektoren durch Einführen der Insertionsnukleinsäure in ihr Genom einen Transformationsschritt von transformierbaren Zell-Linien höherer Eukaryonten (insbesondere menschlichen oder tierischen Ursprungs), die selbst eine bestimmte Nukleotidsequenz enthalten, die geeignet ist, den Teil des Adenovirusgenoms zu komplementieren, der für seine Replikation essentiell ist, und dem der oben genannte Vektor fehlt, wobei die bestimmte Sequenz bevorzugt im Genom von Zellen der genannten Zell-Linie enthalten ist.
- Als bevorzugtes Beispiel solcher Zell-Linien ist die Linie 293 zu nennen, die Linie der Embryonalniere des Menschen, die in ihr Genom integriert die ersten elf Prozent des linken Endes des Genoms eines Ad5 enthält. Diese ermöglichen, defekte rekombinante Viren zu komplementieren, die in dieser Region Deletionen aufweisen. Ein solches Herstellungsverfahren ist insbesondere in der europäischen Patentanmeldung Nr. 0185573 vom 20.11.85 beschrieben.
- Nach Transformation dieser Zell-Linien werden die so multiplizierten Vektoren aufgenommen und gereinigt.
- Die vorliegende Erfindung wird insbesondere mit Hilfe der folgenden ausführlichen Beschreibung der Bildung von rekombinanten Adenovirusvektoren erläutert, die das Gen enthalten, das für die β-Galactosidase kodiert, und die Eigenschaften dieses Adenovirusvektors.
- Dieser rekombinante Adenovirus wurde durch homologe Rekombination zwischen einem geeigneten Plasmid und dem Genom des Adenovirus vom Typ 5 (Ad5) gebildet. In dieser Konstruktion ist das Gen der β-Galactosidase unter die Kontrolle des Promotors RSV (Rous Sarcoma Virus) gestellt. Das verwendete Plasmid pAdRSVβgal enthält das Segment PvuII des linken Endes von Ad5 (das zwischen den Positionen 0 und 1,3 des Plasmids gelegene Segment in Fig. 1), das die intervertierte Endwiedergabe, Ursprung der Replikation, der Signale der Verkapselung und des Verstärkers E1a umfasst. Dieses Fragment ist gefolgt von einem Gen nlslacZ (beschrieben bei Bonnerot, C. et al., Proc. Natn. Acad. Sci. USA, 1987, 84, 6795-6799), das für die β-Galactosidase kodiert und von einem Fragment des Adenovirus Ad5, das zwischen den Positionen 9,4 und 17 des Plasmids von Fig. 1 gelegen ist.
- Die Werte der oben angegebenen Positionen 1,3, 9,4 und 17 sind Einheiten, die die Anzahl von Basenpaaren angeben, die im Inneren dieser Fragmente enthalten sind, wobei eine Einheit 360 Basenpaare darstellt.
- Die zwischen den oben genannten Positionen 9,4 und 17 gelegene Sequenz Ad5 erlaubt die Rekombination mit dem Adenovirus d1324, der durch das Restriktionsenzym ClaI behandelt ist (entsprechend einer Deletionsmutante E3; wobei die Deletion zwischen den Positionen 78,4 und 84,3 des in Fig. 1 gezeig ten Adenovirusgenoms vorgenommen ist), nach Transfektion der Zellen 293 (menschliche Embryonalzellen der Niere transformiert durch den Adenovirus und oben genannt), um den Rekombinationsvektor Ad-RSV-βgal zu erzeugen. Das Gen nlslacZ ist durch den Promotor RSV LTR kontrolliert und besitzt das Signal der Polyadenylierung des Virus SV40. Der auf diese Weise erhaltene rekombinante Virus ist aufgrund der Deletion der Gene E1 nicht in der Lage, sich zu replizieren.
- Vier Tage alte Mäuse Balb/C erhielten eine intravenöse Injektion von 20-40 Mikrolitern hochgereinigter rekombinanter Adenoviren, Ad-RSV-βgal (10&sup9; Einheiten: UFP/ml), die Organe wurden 15 Tage nach der Injektion entfernt und 30 Minuten in einem Phosphatpuffer mit 4%igem Paraformaldehyd behandelt. Nach Spülung wurden die Organe über Nacht bei 30ºC in einer X-gal-Lösung inkubiert. Die ganzen Organe wurden dann eingefroren und in geeigneter Weise präpariert, um Kryoschnitte vorzunehmen (von 10 Mikrometern Dicke), wobei die Schnitte mit Hilfe von Hämatoxylin und Eosin angefärbt wurden.
- Der Nachweis der β-Galactosidaseaktivität auf den erhaltenen Schnitten durch histochemische Anfärbung in der oben angegebenen Weise zeigt die Anwesenheit des eingefügten Gens im Adenovirusvektor in den Zellen der entnommenen Organe an.
- Die makroskopische Untersuchung des entnommenen Herzens sowie der Skelettmuskeln der behandelten Mäuse zeigt die grosse Wirksamkeit, mit der dieser Gentransfer nach nur einer Injektion des rekombinanten Adenovirus bewirkt wurde. Der Nutzen der Wahl des intravenösen Weges liegt in der Tatsache, dass der virale Vektor nicht in irgendeiner Zone des Muskelgewebes konzentriert ist, sondern im Gegenteil, dass er in der gesam ten Muskelmasse vorteilhaft verteilt ist. Die histochemische Anfärbung ermöglicht die Bestimmung, dass die Anzahl der transformierten Zellen in einigen Zonen 50% der Anzahl der in dieser Zone vorhandenen Muskelzellen erreicht.
- Die Expression der β-Galactosidase im Myokard sowie in den Skelettmuskeln ist vollkommen stabil. Es konnten positive Anfärbungen 15, 33, 55, 66, 90, 127 und 150 Tage nach der Injektion des rekombinanten Adenovirus beobachtet werden. Die Expression des Gens erscheint als Funktion der Zeit konstant, da der Anteil der blauen Zellen in den Muskelgeweben von einem Monat zum anderen ungefähr äquivalent erscheinen.
- Die Analyse der isolierten Muskelfasern zeigt, dass eine einzelne Faser in der Lage ist, zahlreiche "Expressionszentren" aufzuweisen.
- Analysen durch Immuntransfer (Southern), die ausgehend vom Herzen einer behandelten Maus vorgenommen wurden, ermöglichten eine einzige und intensive Bande entsprechend 35 Kbp nachzuweisen, was angibt, dass die in die Muskelzellen eingeführte virale DNA im wesentlichen extrachromosom ist.
Claims (13)
1. Verwendung von Rekombinations-Vektoren adenoviralen
Ursprungs, die nicht replizierbar sind und die geeignet
sind, von Rezeptoren menschlicher oder tierischer
Muskelzellen erkannt zu werden, die durch diese Viren
infizierbar sind, wobei die Vektoren darüber hinaus
durch eine Insertions-Nukleinsäure modifiziert sind,
welche eine eine Polypeptid-Sequenz kodierende
Nukleotid-Sequenz, deren Expression in den genannten
Muskelzellen erwünscht ist, beinhaltet, wobei diese
Sequenz unter der Kontrolle eines Promotors ist, der von
den Polymerasen dieser Zellen erkannt wird, zur
Herstellung eines intravenös oder intraarteriös verabreichbaren
Medikaments, und das zur Behandlung von Pathologien, die
die Muskelzellen betreffen, oder von Pathologien, deren
Lokalisierung im Organismus so ist, daß sie zugänglich
sind für die durch die genannten Muskelzellen
abgesonderten Produkte der Expression der genannten Nukleotid-
Sequenz, geeignet ist.
2. Verwendung der Vektoren nach dem Anspruch 1, dadurch
gekennzeichnet, daß die Vektoren aus den defekten
Adenoviren, deren Genome von den für die Replikation der
Adenoviren notwendigen essentiellen Sequenzen
insbesondere von den Transaktivatoren EA und EB befreit sind,
ausgewählt werden.
3. Verwendung der Vektoren nach den Ansprüchen 1 oder 2,
dadurch gekennzeichnet, daß die Insertions-Nukleinsäure
in einem defekten Genom von Adenoviren, die dennoch
zumindest die Menge der essentiellen Sequenzen
beinhalten, die für die Verkapselung dieser Adenoviren
notwendig sind, enthalten ist.
4. Verwendung von Vektoren nach einer der Ansprüche 1 bis
3, dadurch gekennzeichnet, daß die
Insertions-Nukleinsäure aus dem Ganzen oder einem Teil eines gesunden
Genes des Dystrophin besteht.
5. Verwendung eines Vektors nach einem der Ansprüche 1 bis
4 für die Herstellung eines Medikamentes, das zur
Behandlung der Muskeldystrophie nach Duchenne bestimmt
ist.
6. Verwendung von Vektoren nach einem der Ansprüche 1 bis 3
für die Herstellung von Medikamenten für die Behandlung
von Herzkrankheiten, dadurch gekennzeichnet, daß die
Insertions-Nukleinsäure ein Protein oder ein Polypeptid
mit thrombolytischen Eigenschaften kodiert.
7. Verwendung von Rekombinations-Vektoren adenoviralen
Ursprungs, die nicht replizierbar sind und geeignet
sind, von den Rezeptoren menschlicher oder tierischer
Muskelzellen erkannt zu werden, die durch diesen Virus
infizierbar sind, wobei diese Vektoren darüber hinaus
durch eine Insertions-Nukleinsäure modifiziert sind, die
eine Nukleotid-Sequenz beinhaltet, die eine Polypeptid-
Sequenz kodiert, deren Expression in den genannten
Muskelzellen erwünscht ist, wobei diese Sequenz unter
der Kontrolle eines Promotors, der von den Polymerasen
dieser Zellen erkannt wird, ist, für die Herstellung
eines Medikaments, das zum Transfer der genannten
Nukleotid-Sequenz in die Muskelzellen auf intravenösem
oder intraarteriellem Weg geeignet ist.
8. Verwendung nach Anspruch 7 für die Übertragung in die
Zellen der Skelett-Muskulatur.
9. Verwendung nach Anspruch 7 für die Übertragung in die
Zellen des Herzmuskels.
10. Pharmazeutische Zusammensetzung mit einem
Rekombinations-Vektor, der aus dem defekten Genom eines
Adenovirus besteht, der zumindest die Menge der essentiellen
Sequenzen, die für die Verkapselung dieses Adenovirus
notwendig sind, beinhaltet, und in den eine rekombinante
Nukleinsäure eingefügt ist, deren Diffusion in der
Herzmasse erwünscht ist, wobei diese Nukleinsäure unter
die Kontrolle eines Promotors, der geeignet ist, von den
Polymerasen der Muskelzellen erkannt zu werden,
insbesondere des starken Promotors der frühen Region E1A
des Genoms der Adenoviren, gestellt ist, in Verbindung
mit einem pharmazeutisch akzeptablen Träger, für die
Verwendung zur Behandlung von Herzkrankheiten.
11. Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 10,
dadurch gekennzeichnet, daß die Insertions-Nukleinsäure
ein Protein oder Polypeptid kodiert, das thrombolytische
Eigenschaften aufweist.
12. Pharmazeutische Zusammensetzung mit einem
Rekombinations-Vektor, der aus dem defekten Genom eines
Adenovirus besteht, der dennoch zumindest die Menge der
essentiellen Sequenzen, die für die Verkapselung dieses
Adenovirus notwendig sind, beinhaltet, und in den eine
rekombinante Nukleinsäure eingefügt ist, deren Diffusion
in der Herzmasse erwünscht ist, wobei diese Nukleinsäure
unter die Kontrolle eines Promotors, der geeignet ist,
von den Polymerasen der Muskelzellen erkannt zu werden,
insbesondere des starken Promotors der frühen Region E1A
des Genoms des Adenovirus, gestellt ist, in Verbindung
mit einem pharmazeutisch akzeptablen Träger für die
Verabreichung des Vektors auf intravenöse oder
intraarterielle Weise.
13. Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 12,
dadurch gekennzeichnet, daß die Einfügungs-Nukleinsäure
ein Protein oder Polypeptid kodiert, das thrombolytische
Eigenschaften aufweist.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9111947 | 1991-09-27 | ||
| FR9111947A FR2681786A1 (fr) | 1991-09-27 | 1991-09-27 | Vecteurs recombinants d'origine virale, leur procede d'obtention et leur utilisation pour l'expression de polypeptides dans des cellules musculaires. |
| PCT/FR1992/000898 WO1993006223A1 (fr) | 1991-09-27 | 1992-09-25 | Vecteurs recombinants viraux pour l'expression dans des cellules musculaires |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE69230993D1 DE69230993D1 (de) | 2000-06-08 |
| DE69230993T2 true DE69230993T2 (de) | 2000-11-30 |
| DE69230993T3 DE69230993T3 (de) | 2004-12-16 |
Family
ID=9417378
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE69230993T Expired - Lifetime DE69230993T3 (de) | 1991-09-27 | 1992-09-25 | Rekombinante viren vektoren zur expression in muskelzellen |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0559884B2 (de) |
| JP (1) | JP3487597B2 (de) |
| AT (1) | ATE192500T1 (de) |
| AU (1) | AU666142B2 (de) |
| CA (1) | CA2097185C (de) |
| DE (1) | DE69230993T3 (de) |
| DK (1) | DK0559884T4 (de) |
| ES (1) | ES2147553T5 (de) |
| FR (1) | FR2681786A1 (de) |
| GR (1) | GR3034094T3 (de) |
| SG (1) | SG49081A1 (de) |
| WO (1) | WO1993006223A1 (de) |
Families Citing this family (79)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5538722A (en) * | 1989-06-13 | 1996-07-23 | Stanford University | Isolation, growth, differentiation and genetic engineering of human muscle cells |
| AU5457294A (en) * | 1992-10-29 | 1994-05-24 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Adenovirus-mediated ldl receptor gene transfer and targeting |
| ATE307212T1 (de) * | 1992-11-18 | 2005-11-15 | Arch Dev Corp | Adenovirus-gelenkter gen-transfer zum herz-und glatten vaskulären muskel |
| FR2705361B1 (fr) * | 1993-05-18 | 1995-08-04 | Centre Nat Rech Scient | Vecteurs viraux et utilisation en thérapie génique. |
| US6133028A (en) * | 1993-05-28 | 2000-10-17 | Transgene S.A. | Defective adenoviruses and corresponding complementation lines |
| FR2705686B1 (fr) * | 1993-05-28 | 1995-08-18 | Transgene Sa | Nouveaux adénovirus défectifs et lignées de complémentation correspondantes. |
| US6730507B1 (en) | 1993-06-24 | 2004-05-04 | Merck & Co., Inc. | Use of helper-dependent adenoviral vectors of alternative serotypes permits repeat vector administration |
| US20020136708A1 (en) | 1993-06-24 | 2002-09-26 | Graham Frank L. | System for production of helper dependent adenovirus vectors based on use of endonucleases |
| JP3532566B2 (ja) * | 1993-06-24 | 2004-05-31 | エル． グラハム，フランク | 遺伝子治療のためのアデノウイルスベクター |
| US6080569A (en) * | 1993-06-24 | 2000-06-27 | Merck & Co., Inc. | Adenovirus vectors generated from helper viruses and helper-dependent vectors |
| US6140087A (en) * | 1993-06-24 | 2000-10-31 | Advec, Inc. | Adenovirus vectors for gene therapy |
| US7045347B2 (en) | 1993-06-24 | 2006-05-16 | Advec, Inc. | Helper dependent adenovirus vectors based on integrase family site-specific recombinases |
| US5919676A (en) * | 1993-06-24 | 1999-07-06 | Advec, Inc. | Adenoviral vector system comprising Cre-loxP recombination |
| US6120764A (en) * | 1993-06-24 | 2000-09-19 | Advec, Inc. | Adenoviruses for control of gene expression |
| FR2707664B1 (fr) * | 1993-07-13 | 1995-09-29 | Centre Nat Rech Scient | Vecteurs viraux et utilisation en thérapie génique. |
| FR2718749B1 (fr) * | 1994-04-18 | 1996-05-31 | Centre Nat Rech Scient | Vecteurs viraux et utilisation en thérapie génique. |
| JP4190028B2 (ja) * | 1993-07-13 | 2008-12-03 | アベンテイス・フアルマ・ソシエテ・アノニム | 欠陥組換えアデノウイルスベクター及び遺伝子治療での使用 |
| FR2712812B1 (fr) * | 1993-11-23 | 1996-02-09 | Centre Nat Rech Scient | Composition pour la production de produits thérapeutiques in vivo. |
| US6379943B1 (en) | 1999-03-05 | 2002-04-30 | Merck & Co., Inc. | High-efficiency Cre/loxp based system for construction of adenovirus vectors |
| US6465253B1 (en) | 1994-09-08 | 2002-10-15 | Genvec, Inc. | Vectors and methods for gene transfer to cells |
| US5846782A (en) | 1995-11-28 | 1998-12-08 | Genvec, Inc. | Targeting adenovirus with use of constrained peptide motifs |
| FR2730637B1 (fr) | 1995-02-17 | 1997-03-28 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Composition pharmaceutique contenant des acides nucleiques, et ses utilisations |
| US6127525A (en) * | 1995-02-21 | 2000-10-03 | Cornell Research Foundation, Inc. | Chimeric adenoviral coat protein and methods of using same |
| US5770442A (en) * | 1995-02-21 | 1998-06-23 | Cornell Research Foundation, Inc. | Chimeric adenoviral fiber protein and methods of using same |
| EP0760682A4 (de) * | 1995-02-28 | 1998-09-09 | Univ California | Gentransfer-vermittelte therapie zur gefässneubildung |
| US5792453A (en) * | 1995-02-28 | 1998-08-11 | The Regents Of The University Of California | Gene transfer-mediated angiogenesis therapy |
| US6281010B1 (en) | 1995-06-05 | 2001-08-28 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Adenovirus gene therapy vehicle and cell line |
| US6974694B2 (en) | 1995-06-07 | 2005-12-13 | Advec, Inc. | Adenoviruses for control of gene expression |
| US6783980B2 (en) | 1995-06-15 | 2004-08-31 | Crucell Holland B.V. | Packaging systems for human recombinant adenovirus to be used in gene therapy |
| US5837534A (en) * | 1995-11-14 | 1998-11-17 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Smooth muscle 22α promoter, gene transfer vectors containing the same, and method of use of the same to target gene expression in arterial smooth muscle cells |
| US5866552A (en) * | 1996-09-06 | 1999-02-02 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Method for expressing a gene in the absence of an immune response |
| US6544523B1 (en) | 1996-11-13 | 2003-04-08 | Chiron Corporation | Mutant forms of Fas ligand and uses thereof |
| AU8444798A (en) | 1997-06-30 | 1999-01-25 | Centre National De La Recherche Scientifique | Improved method for transferring nucleic acid into the striped muscle and combination therefor |
| US6914131B1 (en) | 1998-10-09 | 2005-07-05 | Chiron S.R.L. | Neisserial antigens |
| CA2308606A1 (en) | 1997-11-06 | 1999-05-20 | Chiron S.P.A. | Neisserial antigens |
| DE69941567D1 (de) | 1998-01-14 | 2009-12-03 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Antigene aus neisseria meningitidis |
| US6479654B1 (en) | 1998-02-06 | 2002-11-12 | Collateral Therapeutics | Forms of the angiogenic factor vascular endothelial cell growth factor: VEGF |
| CN101293920B (zh) | 1998-05-01 | 2012-07-18 | 诺华疫苗和诊断公司 | 脑膜炎奈瑟球菌抗原和组合物 |
| US20030017138A1 (en) | 1998-07-08 | 2003-01-23 | Menzo Havenga | Chimeric adenoviruses |
| EP1121437B1 (de) | 1998-10-15 | 2008-02-20 | Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. | Gene mit veränderter expression in metastatischen brust- oder dickdarm- krebszellen |
| US6929946B1 (en) | 1998-11-20 | 2005-08-16 | Crucell Holland B.V. | Gene delivery vectors provided with a tissue tropism for smooth muscle cells, and/or endothelial cells |
| AU2367600A (en) | 1998-12-16 | 2000-07-03 | Chiron Corporation | Human cyclin-dependent kinase ((hpnqalre)) |
| US6673601B1 (en) | 1999-04-15 | 2004-01-06 | Institut Pasteur | Chimeric lyssavirus nucleic acids and polypeptides |
| EP1721982B1 (de) | 1999-04-15 | 2013-04-10 | Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH | Chimäre Nukleinsäuren und Polypeptide aus Iyssavirus |
| NZ530640A (en) | 1999-04-30 | 2006-06-30 | Chiron S | Conserved neisserial antigens |
| US6492169B1 (en) | 1999-05-18 | 2002-12-10 | Crucell Holland, B.V. | Complementing cell lines |
| US6913922B1 (en) | 1999-05-18 | 2005-07-05 | Crucell Holland B.V. | Serotype of adenovirus and uses thereof |
| GB9911683D0 (en) | 1999-05-19 | 1999-07-21 | Chiron Spa | Antigenic peptides |
| GB9916529D0 (en) | 1999-07-14 | 1999-09-15 | Chiron Spa | Antigenic peptides |
| AU784203B2 (en) | 1999-10-29 | 2006-02-23 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Neisserial antigenic peptides |
| RU2279889C2 (ru) | 2000-01-17 | 2006-07-20 | Чирон С.Р.Л. | ВАКЦИНА ВЕЗИКУЛ НАРУЖНЫХ МЕМБРАН (OMV), СОДЕРЖАЩАЯ БЕЛКИ НАРУЖНОЙ МЕБРАНЫ N.Meningitidis СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ГРУППЫ В |
| ES2391153T3 (es) | 2000-02-28 | 2012-11-22 | Novartis Vaccines And Diagnostics S.R.L. | Expresión heteróloga de proteínas de Neisseria |
| US7238672B1 (en) | 2000-04-17 | 2007-07-03 | Institut Pasteur | Chimeric lyssavirus nucleic acids and polypeptides |
| EP1950297A2 (de) | 2000-05-31 | 2008-07-30 | Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. | Zusammensetzungen und Verfahren zur Behandlung neoplastischer Erkrankungen mithilfe von Chemotherapie und Strahlungssensibilisatoren |
| DE60138403D1 (de) | 2000-09-26 | 2009-05-28 | Crucell Holland Bv | Adenovirale vektoren für die übertragung von genen in zellen der skelettmuskulatur oder myoblasten |
| EP1191104A1 (de) * | 2000-09-26 | 2002-03-27 | Introgene B.V. | Genträger und deren Verwendung zur Herstellung von Arzneimitteln und/oder Impfstöffen |
| KR20030042003A (ko) * | 2000-10-06 | 2003-05-27 | 가부시키가이샤 디나벡크 겐큐쇼 | 골격근에 외래유전자를 도입하기 위한 파라믹소바이러스 벡터 |
| US7939087B2 (en) | 2000-10-27 | 2011-05-10 | Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. | Nucleic acids and proteins from Streptococcus groups A & B |
| GB0107661D0 (en) | 2001-03-27 | 2001-05-16 | Chiron Spa | Staphylococcus aureus |
| GB0107658D0 (en) | 2001-03-27 | 2001-05-16 | Chiron Spa | Streptococcus pneumoniae |
| FR2829136B1 (fr) | 2001-08-29 | 2006-11-17 | Aventis Pharma Sa | Derives lipidiques d'aminoglycosides |
| JP4413617B2 (ja) | 2001-12-12 | 2010-02-10 | カイロン ソチエタ ア レスポンサビリタ リミタータ | Ｃｈｌａｍｙｄｉａｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓに対する免疫化 |
| ES2335657T3 (es) | 2002-04-25 | 2010-03-31 | Crucell Holland B.V. | Medios y metodos para la produccion de vectores de adenovirus. |
| GB0308198D0 (en) | 2003-04-09 | 2003-05-14 | Chiron Srl | ADP-ribosylating bacterial toxin |
| US8268324B2 (en) | 2004-03-29 | 2012-09-18 | Galpharma Co., Ltd. | Modified galectin 9 proteins and use thereof |
| US8563511B2 (en) | 2004-10-06 | 2013-10-22 | University Of Rochester | Treatment of pulmonary hypertension using an agent that inhibits a tissue factor pathway |
| WO2006078853A2 (en) | 2005-01-20 | 2006-07-27 | University Of Rochester | Thioredoxin interacting protein (txnip) as regulator of vascular function |
| US8026354B2 (en) | 2005-11-23 | 2011-09-27 | Institut Pasteur | Recombinant plasmodium falciparum merozoite surface proteins 4 and 5 and their use |
| US20100015168A1 (en) | 2006-06-09 | 2010-01-21 | Novartis Ag | Immunogenic compositions for streptococcus agalactiae |
| US8673859B2 (en) | 2007-03-20 | 2014-03-18 | New York University | GM-CSF cosmeceutical compositions and methods of use thereof |
| EP2331071A1 (de) | 2008-09-05 | 2011-06-15 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale | Neue multimodulare anordnung zur intrazellulären abgabe |
| US8772238B2 (en) | 2009-03-18 | 2014-07-08 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Use of ixolaris, a tissue factor inhibitor, for the treatment of cancer |
| JP5917394B2 (ja) | 2009-06-10 | 2016-05-11 | ニューヨーク・ユニバーシティ | 病理学的タウタンパク質の免疫学的標的化方法 |
| EP2658567A4 (de) | 2010-12-28 | 2014-09-24 | Univ Rochester | Verfahren zur modifikation einer insulinsignalübertragung mittels biliverdinreduktase (bvr) und bvr-abgeleiteten peptiden |
| WO2013036875A1 (en) | 2011-09-07 | 2013-03-14 | Mount Sinai School Of Medicine | Ceramidase and cell differentiation |
| EP2908853B1 (de) | 2012-10-21 | 2018-12-05 | University Of Rochester | Thy1 (cd90) als therapie zur steuerung von fettgewebeakkumulation |
| EP2992112B1 (de) | 2013-04-22 | 2020-06-03 | Icahn School of Medicine at Mount Sinai | Mutationen in pdgfrb und notch3 als ursachen für autosomale dominante infantile myofibromatose |
| EP3371211A4 (de) | 2015-11-04 | 2019-08-21 | Icahn School of Medicine at Mount Sinai | Verfahren zur behandlung von tumoren und krebs sowie identifizierung von kandidatenpatienten für solch eine behandlung |
| WO2017189730A1 (en) | 2016-04-26 | 2017-11-02 | Icahn School Of Medicine At Mount Sinai | Treatment of hippo pathway mutant tumors and methods of identifying subjects as candidates for treatment |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IL76751A (en) * | 1984-11-01 | 1991-04-15 | American Home Prod | Method and oral vaccines against infectious organisms using live,recombinant adenovirus for the production of antibodies |
| FR2573436B1 (fr) * | 1984-11-20 | 1989-02-17 | Pasteur Institut | Adn recombinant comportant une sequence nucleotidique codant pour un polypeptide determine sous le controle d'un promoteur d'adenovirus, vecteurs contenant cet adn recombinant, cellules eucaryotes transformees par cet adn recombinant, produits d'excretion de ces cellules transformees et leurs applications, notamment a la constitution de vaccins |
| CA1339346C (en) * | 1986-08-01 | 1997-08-26 | Ian Allister Ramshaw | Recombinant chimeric vaccine |
| DE69034078T2 (de) * | 1989-03-21 | 2004-04-01 | Vical, Inc., San Diego | Expression von exogenen Polynukleotidsequenzen in Wirbeltieren |
| EP0467987A4 (en) * | 1989-05-01 | 1992-07-08 | The University Of Notre Dame Du Lac | Methods and materials for expression of human plasminogen in a eukaryotic cell system |
| GB9001766D0 (en) * | 1990-01-25 | 1990-03-28 | Univ Court Of The University O | Vaccines |
-
1991
- 1991-09-27 FR FR9111947A patent/FR2681786A1/fr active Granted
-
1992
- 1992-09-25 CA CA002097185A patent/CA2097185C/fr not_active Expired - Lifetime
- 1992-09-25 DK DK92921684T patent/DK0559884T4/da active
- 1992-09-25 AT AT92921684T patent/ATE192500T1/de active
- 1992-09-25 JP JP50585393A patent/JP3487597B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1992-09-25 EP EP92921684A patent/EP0559884B2/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-09-25 AU AU27902/92A patent/AU666142B2/en not_active Expired
- 1992-09-25 WO PCT/FR1992/000898 patent/WO1993006223A1/fr active IP Right Grant
- 1992-09-25 ES ES92921684T patent/ES2147553T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-09-25 SG SG1996005855A patent/SG49081A1/en unknown
- 1992-09-25 DE DE69230993T patent/DE69230993T3/de not_active Expired - Lifetime
-
2000
- 2000-08-02 GR GR20000401791T patent/GR3034094T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1993006223A1 (fr) | 1993-04-01 |
| DK0559884T3 (da) | 2000-10-02 |
| GR3034094T3 (en) | 2000-11-30 |
| FR2681786B1 (de) | 1995-05-12 |
| AU666142B2 (en) | 1996-02-01 |
| JPH06502771A (ja) | 1994-03-31 |
| EP0559884B1 (de) | 2000-05-03 |
| ES2147553T3 (es) | 2000-09-16 |
| DE69230993T3 (de) | 2004-12-16 |
| EP0559884A1 (de) | 1993-09-15 |
| AU2790292A (en) | 1993-04-27 |
| DK0559884T4 (da) | 2004-08-02 |
| CA2097185C (fr) | 2007-07-24 |
| ATE192500T1 (de) | 2000-05-15 |
| FR2681786A1 (fr) | 1993-04-02 |
| SG49081A1 (en) | 1998-05-18 |
| EP0559884B2 (de) | 2004-04-07 |
| JP3487597B2 (ja) | 2004-01-19 |
| DE69230993D1 (de) | 2000-06-08 |
| ES2147553T5 (es) | 2004-11-16 |
| CA2097185A1 (fr) | 1993-03-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE69230993T2 (de) | Rekombinante viren vektoren zur expression in muskelzellen | |
| DE69331526T2 (de) | Adenovirus gelenkter gen-transfer zum herz- und glatten vaskularen muskel | |
| Tripathy et al. | Stable delivery of physiologic levels of recombinant erythropoietin to the systemic circulation by intramuscular injection of replication-defective adenovirus. | |
| DE69534166T2 (de) | Rekombinanter adenovirus und methoden zu dessen verwendung | |
| DE69434069T2 (de) | Gentherapie für solide tumoren, papillome und warzen | |
| DE69429260T2 (de) | Adenovirale vektoren tierischen ursprungs und ihre verwendung bei der gentherapie | |
| DE69839071T2 (de) | Adenovirale vektoren spezifisch für zellen, welche alpha-fetoprotein exprimieren, sowie methoden zu deren verwendung | |
| EP3132043B1 (de) | Viraler vektor für den zielgerichteten gentransfer in gehirn und rückenmark | |
| DE69808274T2 (de) | Kombinationsprodukt, enthaltend eine nukleinsäure und eine substanz, die die extrazellulärematrix desorganisiert, zur verwendung in gentherapie | |
| DE60115070T2 (de) | Expressionsvektoren mit hybriden ubiquitin-promotoren | |
| DE69534791T2 (de) | Vektoren zur gewebsspezifischen replikation | |
| DE69434781T2 (de) | Defektive rekombinante adenoviren zur tumor-gentherapie | |
| DE60129229T2 (de) | Adeno-assoziierte virus-vermittelte übertragung von angiogenesefaktoren | |
| DE69836139T2 (de) | Verfahren zur behandlung von vaskulären proliferativen erkrankungen mit p27 und fusionen davon | |
| DE4311651A1 (de) | Virus für den Transport von Fremd-DNA in höhere eukaryotische Zellen | |
| DE60114006T2 (de) | Replikationsdefizienter adenoviraler tnf-vektor | |
| DE60037189T2 (de) | Rekombinante, natrium-jodid symporter-kodierende adenoviren | |
| EP3536794A2 (de) | Peptide mit spezifität für die lunge | |
| DE69725882T2 (de) | Adenovirus e4 proteine für induktion von zelltod | |
| EP1185279B1 (de) | Mittel zur behandlung maligner erkrankungen unter verwendung des proteins yb-1 | |
| DE69534633T2 (de) | Implantat und vektor zur behandlung von erworbenen krankheiten | |
| US6743623B2 (en) | Viral recombinant vectors for expression in muscle cells | |
| DE69716581T2 (de) | Retroviraler vektor und dessen verwendung in gentherapie | |
| US6099831A (en) | Viral recombinant vectors for expression in muscle cells | |
| DE60219142T2 (de) | Verfahren zum erhöhen der zuführung einer therapeutischen nukleinsäure |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| 8363 | Opposition against the patent | ||
| 8366 | Restricted maintained after opposition proceedings | ||
| R071 | Expiry of right |
Ref document number: 559884 Country of ref document: EP |