DE69218042T2

DE69218042T2 - Aromatische Amid-Verbindungen und ihre Herstellung und Anwendung

Info

Publication number: DE69218042T2
Application number: DE69218042T
Authority: DE
Inventors: Kyozo Hayashi; Munekazu Iinuma
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Current assignee: Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1991-05-16
Filing date: 1992-05-14
Publication date: 1997-10-09
Anticipated expiration: 2012-05-15
Also published as: EP0515917A1; EP0515917B1; US5480907A; CA2068636A1; ATE150008T1; DE69218042D1

Description

Die Erfindung bezieht sich auf neue aromatische Amidverbindungen, die eine die Sekretion des Nervenwachstumsfaktors (im folgenden als NGF bezeichnet) induzierende Wirkung ausüben, eine Zusammensetzung, die wenigstens eine dieser Verbindungen zusammen mit einem pharmazeutisch annehmbaren Träger enthält, und ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention degenerativer Störungen des Nervensystems, die mit seniler Demenz, Alzheimer-Krankheit usw. verbunden sind.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind wertvoll als Medizin und insbesondere als Medikament für die Behandlung oder Prävention degenerativer Störungen des Nervensystems einschließ lich seniler Demenz, Alzheimer-Krankheit usw.

Hintergrund der Erfindung

Mit dem fortwährenden Aufwärtstrend in der Altersverteilung der Bevölkerung wurde eine Vielzahl von Mitteln vorgeschlagen, die die Hirnfunktion verbessern.
Der Nervenwachstumsfaktor (NGF) wurde als ein Nährfaktor angesehen, der für die Erhaltung des lebenden Körpers wesentlich ist und der dazu dient, die Differenzierung der sympathetischen und sensorischen Nervenzellen und der Gehirnnervenzellen im Stadium der Genese zu fördern. Die Merkmale von NGF als chemische Verbindung (Protein) wurden ebenfalls aufgeklärt [Nature, 302, 538 (1983)].
Bei Patienten, die an seniler Demenz oder Alzheimer-Krankheit leiden, befinden sich die Biosynthese und Sekretion von NGF entweder auf einem niedrigen Niveau oder sind mit Mängeln behaftet. Daher wurden Versuche unternommen, NGF zur Behandlung von Leiden bei degenerativen Störungen des Nervensystems, wie seniler Demenz und Alzheimer-Krankheit, zu verwenden [Nature, 329, 65 (1989)]. Da das Niveau der Biosynthese und Sekretion von NGF jedoch im allgemeinen gering ist, ist es sehr schwierig, NGF aus dem lebenden Gewebe zu isolieren oder es durch Klonieren in Mengen herzustellen, die für therapeutische und andere Zwecke geeignet sind. Andererseits ist bekannt, daß NGF in vivo in den sympathetischen und sensorischen Nervenzellen und den Gehirnnervenzellen synthetisiert wird [Biochemical Biophysical Research Communications, 136, 57 (1986)].
Unter diesen Umständen wurden Versuche unternommen, die Sekretion von NGF in verschiedenen Nervenzellen und cerebralen Neuronen mit Hilfe von Brenzkatechinverbindungen zu stimulieren [The Pharmaceuticals Monthly (Japan), 29, 49 (1987)]. Diese Verbindungen sind jedoch nicht befriedigend in bezug auf den Grad der Wirkung oder im Hinblick auf die Cytotoxizität.
EP-A-0 333 522 offenbart Brenzkatechinderivate mit der Fähigkeit, die Produktion und Sekretion von Nervenwachstumsfaktor im lokalen Gewebe des Gehirns zu induzieren.
Unter den obigen Gesichtspunkten führten die Erfinder ausgedehnte Forschungen durch, um ein die NGF-Sekretion induzierendes Mittel zu entwickeln, das an die Stelle der Brenzkatechinverbindungen treten kann, und fanden, daß bestimmte aromatische Amidverbindungen eine unerwartet starke NGF-Sekretion induzierende Wirkung haben.
EP-A-0 399 814 offenbart Phenolderivate, die sich zur Förderung der Herstellung von Nervenwachstumsfaktor eignen und die die allgemeine Formel (Ia) oder (Ib) haben,
wobei jedes R¹ Wasserstoff oder eine Hydroxy-Schutzgruppe ist,
entweder R² Alkyl, Cycloalkyl, mit Aryl kondensiertes Cycloalkyl, Aryl, Aralkyl oder ein heterocyclischer Rest ist und R³ Wasserstoff oder eine Gruppe R² ist
oder R² und R³ zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, eine cyclische Aminogruppe darstellen,
m 1 bis 6 ist,
n 1 bis 3 ist, mit der Maßgabe, daß, wenn n 2 oder 3 ist, zwei benachbarte Gruppen R¹ gemeinsam eine Hydroxy-Schutzgruppe bilden können,
p 0 oder 1 bis 3 ist,
q 0 oder 1 bis 3 ist und
die mit einer gestrichelten Linie markierte Bindung eine Einfachbindung oder eine Doppelbindung sein kann, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.

Kurzbeschreibung der Erfindung

Die Erfindung bezieht sich auf neue aromatische Amidverbindungen der Formel:
wobei R&sub1;, R&sub2; und R&sub3; unabhängig Wasserstoff, eine C&sub1;- bis C&sub1;&sub5;- Alkyl- oder eine C&sub1;- bis C&sub6;-Alkoxygruppe sind, Ar eine gegebenenfalls substituierte aromatische Gruppe ist, die Gruppe
C=C oder HC-CH ist, X Wasserstoff, CH&sub2;COOH oder CH&sub2;CONHAr ist und Y Wasserstoff oder COOH ist, mit der Maßgabe, daß, wenn X CH&sub2;COOH ist oder Y COOH ist, das COOH unter Bildung eines Lactonrings durch Dehydratisierung zusammen mit der benachbarten Hydroxygruppe an dem Benzolring genommen werden kann, und mit der weiteren Maßgabe, daß X und Y nicht beide gleichzeitig Wasserstoff sind, eine Chinonform davon oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
Die Erf indung bezieht sich außerdem auf eine die NGF-Sekretion induzierende Zusammensetzung, die eine wirksame Menge wenigstens einer der Verbindungen der Formel (I) oder einer Chinonform davon oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon im Gemisch mit einem pharmazeutisch annehmbaren Träger umfaßt.
Die Erfindung bezieht sich weiterhin auf ein Verfahren zur Prophylaxe oder Behandlung degenerativer Störungen des Nervensystems, das das Verabreichen einer wirksamen Menge wenigstens einer der Verbindungen der Formel (I) oder einer Chinonform davon oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon an einen Säuger, der an den Störungen leidet, umfaßt.

Kurzbeschreibung der Zeichnungen

Figur 1 zeigt die EIA-Standardkurve von Maus-β-NGF gemäß dem B-SA-System-Verfahren.
Figur 2 zeigt die die NGF-Sekretion induzierenden Wirkungen des ersten kristallisierten Gemischs der Verbindungen (B) und (C).
Figur 3 zeigt die die NGF-Sekretion induzierenden Wirkungen des Gemischs der Verbindungen (B) und (C) (Zusammensetzungsverhältnis: (B) 0,25 g + (C) 0,81 g).
Figur 4 zeigt die die NGF-Sekretion induzierenden Wirkungen von (C).

Ausführliche Beschreibung der Erfindung

In der obigen Formel (I) ist das Niederalkyl für R&sub1;, R&sub2; und R&sub3; eine geradkettige oder verzweigte Niederalkylgruppe mit 1 bis 15 Kohlenstoffatomen, wie Methyl, Ethyl, Propyl, Butyl, Pentyl, Hexyl, Heptyl, Octyl, Decyl, Dodecyl und Pentadecyl. Das Niederalkoxy für R&sub1;, R&sub2; und R&sub3; ist eine geradkettige oder verzweigte Niederalkoxygruppe mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, wie Methoxy, Ethoxy, Propoxy, Butoxy und Hexyloxy. Ein bevorzugtes Beispiel für R&sub1; ist Wasserstoff, geradkettiges Niederalkyl mit 1 bis 10 Kohlenstoffatomen, wie Methyl, Ethyl, Propyl, Butyl, Pentyl, Hexyl, Heptyl, Decyl und dergleichen oder eine geradkettige Niederalkoxygruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, wie Methoxy, Ethoxy, n-Propoxy und n-Butoxy. Davon wird Wasserstoff oder Methyl am meisten bevorzugt. Ein bevorzugtes Beispiel für R&sub2; und R&sub3; ist Wasserstoff, geradkettiges Niederalkyl mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, wie Methyl, Bthyl, n-Propyl, n-Butyl, n-Pentyl und n-Hexyl oder eine geradkettige Niederalkoxygruppe mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen, wie Methoxy, Ethoxy und n-Propoxy. Davon wird Wasserstoff oder Methyl am meisten bevorzugt.
In der obigen Formel (I) kann die aromatische Gruppe Ar 6 bis 10 Kohlenstoffatome enthalten und umfaßt Phenyl, α-Naphthyl, β-Naphthyl usw., das unsubstituiert oder mit einem oder mehreren Substituenten substituiert sein kann. Beispiele für solche Substituenten an der aromatischen Gruppe für Ar sind Halogen (z.B. Fluor, Chlor, Brom usw.), Hydroxy, Niederalkyl (z.B. Niederalkyl mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, wie Methyl, Ethyl und Propyl), Niederalkoxy (z.B. Niederalkoxy mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen, wie Methoxy und Ethoxy), Nitro usw.
In der obigen Formel (I) ist die Gruppe
eine Doppelbindung zwischen Kohlenstoffatomen (C=C) oder eine gesättigte chemische Bindung (CH-CH).
X ist Wasserstoff, CH&sub2;COOH oder CH&sub2;CONHAr, wobei Ar dasselbe wie oben bedeutet, und Y ist Wasserstoff oder COOH.
Wenn X CH&sub2;COOH ist oder Y COOH ist, kann das COOH unter Bildung eines Lactonrings durch Dehydratisierung zusammen mit der benachbarten Hydroxygruppe an dem Benzolring genommen werden.
Wenn X CH&sub2;COOH ist, wird die Lactonform der Verbindung der Formel (I) durch die folgende Formel dargestellt:
wobei R&sub1;, R&sub2;, R&sub3;, Ar und Y dasselbe wie oben bedeuten.
Wenn Y COOH ist, wird die Lactonform der Verbindung der Formel (I) durch die folgende Formel dargestellt:
wobei R&sub1;, R&sub2;, R&sub3;, Ar und X dasselbe wie oben bedeuten.
Die Chinonform der Verbindungen der Formel (I) wird durch die folgende Formel dargestellt:
wobei R&sub1;, R&sub2;, R&sub3;, Ar, X und Y dasselbe wie oben bedeuten.
Gemäß der vorliegenden Erfindung umfaßt eine bevorzugte Ausführungsform eine Verbindung mit der Formel:
wobei X CH&sub2;COOH oder CH&sub2;CONHAr ist und R&sub1;, R&sub2;, R&sub3; und Ar dasselbe wie oben bedeuten.
Von den durch die obige Formel (I) dargestellten Verbindungen ist ein bevorzugtes Beispiel für die Erfindung eine Verbindung der Formel: (Typ II) (Typ III)
oder (Typ IV - Chinonform)
Die Verbindungen der Formel (I) können gemäß der Art ihrer Substituenten verschiedene Salze bilden, wie Salze mit Alkalimetallen (z.B. Kalium, Natrium usw.) oder Erdalkalimetallen (z.B. Calcium, Magnesium usw.) sowie Ammoniumsalze.
Die Verbindungen der Formel (I) können aus 2,5-Dihydroxybenzaldehyd-Derivaten (V), Malonsäuren (VI) und Anilinderivaten (VII) in Gegenwart einer organischen Base in einem geeigneten Lösungsmittel synthetisiert werden, wie es unten dargestellt ist.
Zu den Lösungsmittel gehören herkömmliche organische Lösungsmittel, zum Beispiel aromatische Kohlenwasserstofflösungsmittel, wie Benzol und Toluol, Esterlösungsmittel, wie Ethylacetat und Butylacetat, Etherlösungsmittel, wie Tetrahydrofuran und Dibutylether, basische Lösungsmittel, wie Pyridin und Piperidin. Die organische Base umfaßt Butylamin, Dibutylamin, Cyclohexylamin, Dicyclohexylamin, Triethylamin, Pyridin und Piperidin.
Die Base wird in einem Bereich von 0,001 bis 0,1 mol, vorzugsweise 0,005 bis 0,05 mol, bezogen auf 1 mol des 2,5-Dihydroxybenzaldehyd-Derivats (V), verwendet. Zweckmäßigerweise wird ein basisches Lösungsmittel, wie Pyridin und Piperidin, als Base sowie als Lösungsmittel dafür verwendet. Die Reaktion wird bei einer Temperatur in einem Bereich von Raumtemperatur bis 180ºC, vorzugsweise 50 bis 130ºC, durchgeführt. Die Malonsäure (VI) wird gewöhnlich in einer überschüssigen Menge (1,05 bis 5 mol), vorzugsweise in einem Bereich von 1,5 bis 2,5 mol, bezogen auf 1 mol des 2,5-Dihydroxybenzaldehyd-Derivats (V), verwendet. Das Anilinderivat (VII) wird ebenfalls in einer überschüssigen Menge (2 bis 20 mol), bezogen auf 1 mol des 2,5-Dihydroxybenzaldehyd-Derivats (V), verwendet. Die Reaktionszeit liegt gewöhnlich in einem Bereich von 1 bis 40 Stunden, vorzugsweise 3 bis 15 Stunden.
Das 2,5-Dihydroxybenzaldehyd-Derivat (V) und das Anilinderivat (VII) können im Handel erhältlich sein, oder wenn sie nicht im Handel erhältlich sind, können sie nach in der Technik bekannten oder dazu analogen Verfahren hergestellt werden.
Die Chinonform (IV) kann hergestellt werden, indem man die Verbindung (1) in herkömmlicher Weise oxidiert. Die Verbindungen (1) und (IV) können mit herkömmlichen Verfahren, wie Extraktion und Reinigung, aus der Reaktionslösung isoliert werden.
Die pharmazeutisch aktiven Verbindungen dieser Erfindung können allein verwendet oder als pharmazeutische Zusammensetzungen zubereitet werden, die neben dem Wirkstoff noch einen pharmazeutisch annehmbaren Träger oder ein Verdünnungsmittel umfassen. Die Verbindungen können auf vielerlei Weise verabreicht werden. Zu denen, die von hauptsächlichem Interesse sind, gehören: oral, topisch oder parenteral (intravenöse oder intramuskuläre Injektion). Die pharmazeutischen Zusammensetzungen können in fester Form, wie Kapseln, Tabletten, Pulver usw., oder in flüssiger Form, wie Lösungen, Suspensionen oder Emulsionen, vorliegen. Zusammensetzungen zur Injektion, dem bevorzugten Verabreichungsweg, können in Form von Dosierungseinheiten in Ampullen oder in Mehrfachdosisbehältern hergestellt werden und können Zubereitungshilfsmittel, wie Suspendiermittel, Stabilisatoren und Dispergiermittel, enthalten. Die Zusammensetzungen können in gebrauchsfertiger Form oder in Pulverform zur Rekonstitution zum Zeitpunkt der Verabreichung mit einem geeigneten Träger, wie sterilem Wasser, vorliegen.
Zur Anwendung als die Nervenwachstumsfaktorsekretion induzierendes Mittel können die Verbindungen der Formel (I) in an sich bekannter Weise zu verschiedenen Darreichungsformen, wie Tabletten, Granulat, Kapseln, Injektionen, Suppositorien usw., zubereitet werden, und die resultierenden Präparate können Säugern einschließlich des Menschen oral oder parenteral verabreicht werden. Die zu verabreichende Dosis hängt weitgehend von der besonderen Verbindung oder ihrer Kombination mit anderen verwendeten spezifischen Verbindungen, der besonderen zubereiteten Zusammensetzung, dem Verabreichungsweg, der Art und dem Zustand des Patienten und dem besonderen behandelten Situs und Organ ab. Die Dosis sollte gemäß der zu behandelnden Krankheit, dem Zustand des Patienten und anderen Faktoren optimiert werden, aber im allgemeinen beträgt die übliche orale Dosis für Erwachsene 0,1 mg bis 500 mg pro Tag und vorzugsweise 5 mg bis 200 mg pro Tag. Es wird auch beobachtet, daß die kombinierte Verwendung von zwei oder mehr Verbindungen der Formel (I) eine stärkere die Nervenwachstumsfaktorsekretion induzierende Wirkung zeigt, als man bei Verwendung einer der Verbindungen der Formel (I) allein erwarten würde.
Die die Nervenwachstumsfaktorsekretion induzierende Zusammensetzung der Erfindung eignet sich zur Behandlung und Prophylaxe funktioneller Störungen des Gehirns bei Säugetieren einschließlich des Menschen, und zu den erwarteten Indikationen gehören familiäre Dysautonomie, Neurofibrome, Neuroblastome, Melanocytome, senile Demenz, Alzheimer-Krankheit usw.
Die die Nervenwachstumsfaktorsekret ion induzierenden Verbindungen der Formel (I) der Erfindung haben eine starke die NGF-Sekretion induzierende Wirkung mit geringer Toxizität und hoher Sicherheit.
Die Erfindung wird anhand der folgenden Test- und Herstellungsbeispiele konkreter erläutert, aber diese sollten nicht als die Erfindung in irgendeiner Weise einschränkend angesehen werden.

Testbeispiel

i) Experimentelle Materialien und Verfahren

Die Untersuchung der NGF-Biosynthese unter Verwendung von Astrogliazellen ist eine sehr interessante Forschungslinie in Verbindung mit seniler Demenz vom Typ der Alzheimer-Krankheit. Daher wurde die die NGF-Biosynthese fördernde Wirkung der Verbindungen der Erfindung unter Verwendung von Maus-Astrogliazellen (MB-8- Zellen) untersucht. In der Untersuchung wurden MB-8-Zellen in der stationären Phase verwendet, da diese als näher am Zustand im normalen Gehirn angesehen wurden als die Zellen in der Wachstumsphase.

a) Versuchsmaterialien

DMEM (Dulbeccos modifiziertes Eagle-Medium) wurde von Nissui Pharmaceutical Co., Ltd. (Japan), Kälberfetusserum (FCS) von Bocknek, und Streptomycinsulfat und Benzylpenicillinkalium wurden von Meiji Seika Kaisha, Ltd. (Japan), bezogen. Die von Falcon hergestellte 24-Napf-Mikrotiterplatte wurde verwendet. Alle anderen Reagentien waren von kommerzieller Spezialreagensqualität.

b) Verfahren

Kultur der MB-8-Zellen

Die Astrogliazellen (MB-8) aus dem Gehirn von 8 Tage alten Mäusen wurden in DMEM, das 10% FCS, Glutamin (2 mM), Penicillin (100 Einheiten/ml) und Streptomycin (100 µg/ml) enthielt, in einem Kohlendioyidgasinkubator (37ºC, 5% CO&sub2;) kultiviert. Das Verfahren wurde mehrmals wiederholt, bis ein konfluentes Wachstum erhalten wurde. Dann wurden die Zellen etwa 10 Tage in DMEM, das 5% BSA anstelle von FCS enthielt, weiterkultiviert, um die Zellen in eine stationäre Wachstumsphase zu bringen. Die resultierenden Zellen wurden 24 Stunden in DMEM gezüchtet, das 0,5% BSA enthielt und dem verschiedene Verbindungen zugesetzt worden waren. Der Überstand wurde entnommen, und der NGF-Gehalt wurde nach dem Enzym-Immunoassayverfahren unter Verwendung von Maus-β-NGF, wie es unten erwähnt ist, bestimmt.

ii) Enzym-Immunoassay (EIA) von NGF

Anti-Maus-β-NGF-Antikörper-Immunglobulin G (IgG) (10 µl, 10 µg/ml), das durch Protein Alsepharose CL-4B hergestellt und mit 0,05 M Tris-HCl-Puffer (pH 8,3) verdünnt worden war, wurde in die Näpfe einer Polystyrol-Mikrotiterplatte (Falcon 3910; 96 Näpfe) verteilt und 2 Stunden bei Raumtemperatur stehen gelassen, um das Anti-Maus-β-NGF-Antikörper-IgG zu adsorbieren. Nach der Gewinnung der Antikörperlösung wurde die Platte dreimal mit 100-µl-Aliquoten eines Waschpuffers (0,1 M Tris-HCl-Puffer, der 0,4 M Natriumchlorid, 0,1% BSA, 0,1% Natriumazid und 1 Magnesiumchlorid enthielt; pH 7,6) gewaschen. Dann wurden 150 µl des Waschpuffers hinzugefügt, und man ließ die Platte 1 h lang blockieren. Nachdem der Waschpuffer abgesaugt worden war, wurden 25-µl-Aliquote entweder der Probe oder der Standard-NGF-Lösung (verdünnt mit demselben Puffer wie die Probe) in die Näpfe gegeben, und man ließ die Platte 4 Stunden bei Raumtemperatur stehen. Dann wurde die Platte dreimal mit 100-µl-Aliquoten des Waschpuffers gewaschen, und 30-ml-Aliquote einer mit dem Waschpuffer verdünnten Lösung von biotinyliertem Anti-β-NGF-Antikörper (35 ng/ml) wurden hinzugefügt. Man ließ die Platte über Nacht bei 4ºC stehen. Nach dem Waschen wurden 30 µl mit β-D-Galactosidase markiertes Streptavidin (200fach verdünnt) hinzugefügt, und man ließ die Platte 1 Stunde bei Raumtemperatur stehen. Die Aktivität der auf der festen Phase immobilisierten β-D-Galactosidase wurde durch Messen der Fluoreszenz des durch Enzymreaktion mit dem Substrat 4-Methylumbelliferyl-β-galactosid erzeugten 4-Methylumbelliferons abgeschätzt. Nachdem die Platte dreimal gewaschen worden war, wurden also 30-µl-Aliquote des Substrats (10 µg/ml) hinzugefügt, und die Reaktion wurde 3 Stunden lang bei Raumtemperatur durchgeführt. Die enzymatische Reaktion wurde abgebrochen, indem man 150 µl 0,1 M Glycin/Natriumhydroxid-Puffer (pH 10,3) hinzufügte, und die Reaktionssysteme wurden in Reagenzgläser übertragen, von denen jedes 2,0 ml des Reaktionsstoppers enthielt. Die Intensität der Fluoreszenz in jedem Glas wurde bei einer Anregungswellenlänge von 360 nm und einer Emissionswellenlänge von 450 nm gemessen.
Das Fluorophotometer wurde geeicht, indem man die Flureszenzintensität von 0,1 N Schwefelsäure, die 1 µg/ml Chinin enthielt, auf 100 einstellte.

iii) Ergebnisse

a) Standardkurve von Maus-β-NGF

Die EIA-Standardkurve von Maus-β-NGF gemäß dem bewährten B-SA- System-Verfahren ist in Figur 1 gezeigt.
Während Bestimmungen über einen Bereich von 0,15 pg/ml bis 9 ng/ml durchgeführt wurden, flachte die Kurve nach 9 pg/ml zu einem Plateau ab. Der Meßbereich betrug 1 pg/ml bis 9 ng/ml.
Der Hintergrund war gering, und der Unterschied in der Intensität der Fluoreszenz zwischen 1 pg/ml und 9 ng/ml entsprach etwa einem Faktor von 100, so daß es leicht war, die Konzentration des NGF abzulesen. Die Empfindlichkeit dieses Assayverfahrens betrug etwa 1 pg/ml.

b) Die Wirkung der Verbindung der Erfindung auf die Synthese und Sekretion von NGF bei MB-8-Zellen.

Die die NGF-Sekretion induzierenden Wirkungen der Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind in den Figuren 2 bis 4 gezeigt.
Figur 2 zeigt die die NGF-Sekretion induzierenden wirkungen des ersten umkristallisierten Gemischs von Verbindung (B) und Verbindung (C) (Zusammensetzungsverhältnis nicht bestimmt).
Figur 3 zeigt die die NGF-Sekretion induzierenden Wirkungen des Gemischs von Verbindung (B) und Verbindung (C) (zweites umkristallisiertes Gemisch, Zusammensetzungsverhältnis: (13) 0,25 g + (C) 0,81 g).
Figur 4 zeigt die die NGF-Sekretion induzierenden Wirkungen von Verbindung (C).

Arbeitsbeispiel 1 (Herstellungsbeispiel)

Zu einer gemischten Lösung von Pyridin (10 ml) und Anilin (2 ml) wurden 2,5-Dihydroxybenzaldehyd (1,1 g; 1 mM) und Malonsäure (1,6 g; 1,5 mM) gegeben, und das Reaktionsgemisch wurde 10 Stunden bei 70ºC gerührt und im Vakuum auf die Hälfte des Volumens konzentriert. Das Konzentrat wurde in eine wäßrige 2 N HCl-Lösung (50 ml) gegossen, und das Gemisch wurde mit; Ethylacetat (40 ml) extrahiert. Der Extrakt wurde über wasserfreiem Natriumsulfat (5 g) getrocknet und zur Trockne konzentriert. Der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie auf Silicagel gereinigt (200 g Silicagel, Säulengröße: 30 mm (Durchmesser) x 900 mm (Höhe)). Die Säule wurde mit Benzol/Aceton (2:1, v/v, 31) eluiert, was zuerst Verbindung A (45 mg), dann Verbindung B (150 mg) und schließlich Verbindung C (1,03 mg) ergab.

A. (6-Hydroxy-2-oxo-2H-chromen-3-carboanilid):

Umkristallisieren aus Ethanol ergab gelbe Nadeln.
Smp.: 284-286ºC (Zers.).
EIMS (Elektronenstoß-Massenspektrum, m/z, %) : 281 (M&spplus;, 40), 189 (100), 161 (4), 105 (21).
Elementaranalyse für C&sub1;&sub6;H&sub1;&sub1;O&sub4;N:
berechnet: C 68,32; H 3,94; N 4,98.
gefunden: C 68,17; H 3,97; N 4,95.
IR (ν KBr cm&supmin;¹): 3300, 1710, 1695, 1595, 1570, 1555, 1500 und 1440.
UV (λ MeOHnm (log &epsi;)): 207 (4.42), 229 (4.36), 304 (4.22) und 370sh (3.90).
¹HNMR (Aceton -d&sub6;, 270 MHz, δ): 7.15 (1H, br t, J=7Hz, H-4'), 7.20 (1H, dd, J=8.2 Hz, H-7), 7.31 (1H, d, J=2 Hz, H-5), 7.38 (2H, t, J=7 Hz, H-3', 5'), 7.41 (1H, d, J=8 Hz, H-8), 7.73 (2H, br d, J=7 Hz, H-2', 6'), 8.86 (1H, s, OH), 10.73 (1H, br s, NH), 10.75 (1H, br s, H-4).
13C-NMR (Aceton -d&sub6;, 67.5 MHz, δ): 160.7 (s, C-2), 119.6 (s, C-3), 147.5 (d, C-LI), 113.8 (d, C-5)1 154.4 (s, C-6), 122.6 (d, C-7), 117.2 (d, C-8), 147.3 (s, C-8a), 119.7 (s, C-4a), 159.9 (s, CONH), 138.8 (s, C-1'), 119.8 (d, C-2' 6'), 129.0 (d, C-3', 5'), 124.3 (d, C-4').

B. (6-Hydroxy-3,4-dihydro-2-oxo-2H-chromen-4-ylacetoanilid) :

Umkristallisieren aus Ethanol ergab farblose Plättchen.
Smp. 218-219ºC.
EIMS (m/z, %): 297 (M&spplus;, 30), 238 (4); 176 (7), 163 (38), 135 (85), 107 (17) und 93 (100).
Elementaranalyse für C&sub1;&sub7;H&sub1;&sub5;O&sub4;N:
berechnet: C 68,67; H 5,08; N 4,71.
gefunden: C 68,58; H 5,15; N 4,70.
IR (ν KBr cm&supmin;¹): 3350, 1715, 1665, 1602, 1540, 1503, 1485, 1190.
UV (λ MeOHnm (log &epsi;)): 206 (4.52), 240 (4.43), 285 (3.54).
¹HNMR (Aceton -d&sub6;, 270 MHz, δ): 2.58 (2H, m, H-3), 2.67 (1H, dd, J=17.5 Hz, H-9), 2.97 (1H, dd, J=17.5 Hz, H-90), 3.51 (1H, m, H-4), 6.65 (1H, dd, J=8, 2 Hz, H-7), 6.69 (1H, d, J=2 Hz, H-5), 6.90 (1H, d, J=8 Hz, H-8), 7.00 (1H, t, J=7 Hz, H-4'), 7.31 (2H, t, J=7 Hz, H-3', 5'), 7.55 (2H, brd, J=7 Hz, H-2', 6'), 9.40 (1H, s, OH), 9.95 (1H, br s, NH).
¹³C-NMR (Aceton -d&sub6;, 67.5 MHz, δ): 168.5 (s, C-2), 41.2 (t, C-3), 31.3 (d, C-4), 113.8 (d, C-5), 153.8 (s, C-6), 114.7 (d, C-7), 117.8 (d, C-8), 131.3 (s, C-4a), 143.6 (s, C-8a), 33.9 (t, C-9), 168.1 (s, C-10), 139.6 (s, C-1'), 119.6.(d, C-2', 6'), 128.9 (d, C-3', 5'), 123.4 (d, C-4').

C. (β-(2,5-Dihydroxyphenyl)glutarsäuredianilid) :

Umkristallisieren aus Aceton ergab farblose Nadeln.
Smp.: 177-178ºC (Aceton/n-Hexan).
EIMS (m/z, %): 390 (M&spplus;, -), 297 (30), 238 (4), 176 (8), 163 (38), 135 (86), 107 (17) und 93 (100).
Kationen-FAB-MS (m/z) : 391,1685 (M&spplus;-H), berechnet (C&sub2;&sub3;H&sub2;&sub2;O&sub4;N&sub2;) : 391,1658.
Elementaranalyse für C&sub2;&sub3;H&sub2;&sub2;O&sub4;N&sub2;: berechnet: C 70,75; H 5,68; N 7,18. gefunden: C 71,18; H 5,71; N 7,11.
IR (ν KBr cm&supmin;¹): 3330, 1675, 1650, 1595, 1540, 1500 und- 1445.
UV (λ MeOHnm (log &epsi;)): 205 (11.62), 2112 (11.51) nd 297 (3.68).
¹HNMR (Aceton -d&sub6;, 270 MHz, δ): 3.72 (4H, m, H-8, 10), 3.87 (1H, m, H-7), 6.38 (1H, dd, J=8, 2 Hz, H-4), 6.57 (1H, d, J=8 Hz, H-3), 6.59 (1H, d, J=2 Hz, H-6), 6.98 (2H, t, J=7 Hz, H-4',4"), 7.23 (4H, t, J=7 Hz, H-3', 5'und 3", 5"), 7.53 (4H, br d, J=7 Hz, H-2', 6' und 2", 6"), 8.54, 8.67 (1H, jede s, OH), 9.84 (2H, br s, NH x 2).
¹³C-NMR (Aceton -d&sub6;, 67.5 MHz, δ): 130.4 (s, C-1), 147.2 (s, C-2), 115.8 (d, C-3), 113.2 (d, C-4), 149.6 (s, C-5), 115.2 (d, C-6), 33.0 (d, C-7), 40.6 (t, C-8, 10), 170.0 (s, C-9, 11), 139.2 (s, C-1', 1"), 119.1 (d, C-2', 6', C-2", 6"), 128.6 (d, C-3', 5', C-3", 5"), 122.9 (d, C-4', 4").

Arbeitsbeispiel 2 (Herstellungsbeispiel)

Zu einer gemischten Lösung von Pyridin (40 ml) und Anilin (15 ml) wurden 2,5-Dihydroxybenzaldehyd (4,2 g; 35 mM) und Malonsäure (12 g; 0,1 M) gegeben, und das Reaktionsgemisch wurde 10 Stunden bei 90ºC gerührt und in derselben Weise wie in Arbeitsbeispiel 1 behandelt, was Verbindung A (110 mg), Verbindung B (380 mg) und Verbindung C (4,7 mg) ergab.

Arbeitsbeispiel 3 (Herstellungsbeispiel)

In eine Lösung von Pyridin (2 ml) in einem 50-ml-Rundkolben wurden 2,5-Dihydroxybenzaldehyd (212 mg; 2 mM) und Malonsäure (312 mg; 3 mM) gegeben, und anschließend wurde Anilin (1 ml) hinzugefügt, und das Reaktionsgemisch wurde unter den unten in Tabelle 1 genannten Bedingungen (3-1 bis 3-5) behandelt.
Nach der Reaktion wurde das Gemisch in eine 1 N HCl-Lösung (30 ml) gegossen, extrahiert, mit Wasser gewaschen und zur Trockne konzentriert. Das Entstehungsverhältnis ((A) (B): (C)) wurde durch HPLC gemessen. Tabelle 1

Zubereitungsbeispiel 1

(1) Verbindung B 5 g Verbindung C 16 g
(2) Lactose 198 g
(3) Maisstärke 40 g
(4) Magnesiumstearat 2 g
Die obigen Bestandteile (1) und (2) und eine aus einer 15-g-Portion Maisstärke (3) hergestellte Paste wurden gemischt und granuliert, und anschließend wurde eine 10-g-Portion Maisstärke sowie (4) hinzugefügt. Das resultierende Gemisch wurde in Formen gepreßt, um 1000 Tabletten mit einem Durchmesser von 5 mm herzustellen, die jeweils 20 mg (1) enthielten.

Claims

1. Verbindung der Formel:

wobei R&sub1;, R&sub2; und R&sub3; unabhängig Wasserstoff, eine C&sub1;- bis C&sub1;&sub5;-Alkyl- oder eine C&sub1;- bis C&sub6;-Alkoxygruppe sind, Ar eine gegebenenfalls substituierte aromatische Gruppe ist, die Gruppe

C=C oder HC-CH ist, X Wasserstdff, CH&sub2;COOH oder CH&sub2;CONHAr ist und Y Wasserstoff oder COOH ist, mit der Maßgabe, daß, wenn X CH&sub2;COOH ist oder Y COOH ist, das COOH durch Dehydratisierung unter Bildung eines Lactonrings zusammen mit der benachbarten Hydroxygruppe an dem Benzolring genommen werden kann, und mit der weiteren Maßgabe, daß X und Y nicht beide gleichzeitig Wasserstoff sind, eine Chinonform davon oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.

2. Verbindung gemäß Anspruch 1, wobei Ar Phenyl ist, das unsubstituiert oder mit Substituenten substituiert ist, die aus der Gruppe ausgewählt sind, die aus Halogen, Hydroxy, Alkyl mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, Alkoxy mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen und Nitro besteht.

3. Verbindung gemäß Anspruch 1, wobei R&sub1;, R&sub2; und R&sub3; unabhängig Wasserstoff oder eine geradkettige oder verzweigte Alkylgruppe mit 1 bis 15 Kohlenstoffatomen ist.

4. Verbindung gemäß Anspruch 1, wobei Ar eine aromatische Gruppe mit 6 bis 10 Kohlenstoffatomen ist.

5. Verbindung gemäß Anspruch 1, bei der es sich um eine Verbindung der Formel

wobei R&sub1;, R&sub2; und R&sub3; unabhängig Wasserstoff, eine C&sub1;- bis C&sub1;&sub5;-Alkyl- oder eine C&sub1;- bis C&sub6;-Alkoxygruppe sind und Ar eine gegebenenfalls substituierte aromatische Gruppe ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon handelt.

6. Verbindung gemäß Anspruch 1, bei der es sich um eine Verbindung der Formel

7. Verbindung gemäß Anspruch 1, bei der es sich um eine Verbindung der Formel

wobei X CH&sub2;COOH oder CH&sub2;CONHAr ist, R&sub1;, R&sub2; und R&sub3; unabhängig Wasserstoff, eine C&sub1;- bis C&sub1;&sub5;-Alkyl- oder eine C&sub1;- bis C&sub6;-Alkoxygruppe sind und Ar eine gegebenenfalls substituierte aromatische Gruppe ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon handelt.

8. Verbindung gemäß Anspruch 1, bei der es sich um eine Verbindung der Formel

oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon handelt.

9. Verbindung gemäß Anspruch 1, bei der es sich um eine Verbindung der Formel

oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon handelt.

10. Verbindung gemäß Anspruch 1, bei der es sich um eine Verbindung der Formel

oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon handelt.

11. Pharmazeutische Zusammensetzung, die eine wirksame Menge wenigstens einer der die NGF-Sekretion induzierenden Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 1 bis 10 oder pharmazeutisch annehmbare Salze davon im Gemisch mit einem pharmazeutisch annehmbaren Träger oder Verdünnungsmittel umfaßt.

12. Pharmazeutische Zusammensetzung gemäß Anspruch 11, wobei der Wirkstoff ein Gemisch der Verbindungen (B) und (C) ist.

13. Verwendung einer Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 10 oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon zur Herstellung eines die NGF-Sekretion induzierenden Mittels.