CN105017195B

CN105017195B - 4‑羟基香豆素‑3‑希夫碱类衍生物及其治疗阿尔茨海默症的用途

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Publication number: CN105017195B
Application number: CN201510402044.1A
Authority: CN
Inventors: 孔令义; 王小兵; 王志敏
Original assignee: China Pharmaceutical University
Current assignee: China Pharmaceutical University
Priority date: 2015-07-09
Filing date: 2015-07-09
Publication date: 2017-03-29
Anticipated expiration: 2035-07-09
Also published as: CN105017195A

Abstract

本发明涉及药物化学领域，具体涉及一类4‑羟基香豆素‑3‑希夫碱类化合物(I)，药效学试验证明，这类化合物作为多功能制单胺氧化酶(MAO)抑制剂，具有较好的抑制β‑淀粉样蛋白(Aβ)聚集，金属离子螯合，抗氧化以及神经保护作用，可用于治疗阿尔茨海默症。

Description

4-羟基香豆素-3-希夫碱类衍生物及其治疗阿尔茨海默症的用途

技术领域

本发明涉及药物化学领域，具体涉及一类4-羟基香豆素-3-希夫碱类化合物，这类化合物作为多功能制单胺氧化酶(MAO)抑制剂，具有较好的抑制β-淀粉样蛋白(Aβ)聚集，金属离子螯合，抗氧化以及神经保护作用，可用于治疗阿尔茨海默症。

背景技术

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)又叫老年性痴呆，是一种在老年人中常见的神经退行性疾病。AD发病机制复杂，其成因除了同脑内胆碱水平的降低相关外，还同Aβ的聚集、金属离子代谢的紊乱、钙平衡的失调、活性氧自由基(ROS)的增多以及炎症的发生等因素密切相关。虽然，目前为止阿尔兹海默病的病理学机制还不完全清楚，但是有几个学说被公认为阿尔兹海默病的发病机制。AD主要具有几种特征性的病理表现：神经传递基质乙酰胆碱水平的降低、氧化应激产生、β-淀粉样蛋白(Aβ)的沉积和Tan蛋白的过度磷酸化。一直以来，药物化学家都试图通过对以上几种主要病理特征的深入研究，找到AD的病因及其治疗策略。针对神经传递基质乙酰胆碱水平的降低，科学家提出了著名的胆碱能假说(cholinergic hypothesis)，即胆碱能系统的改变与AD的认知功能的损害程度密切相关。随后,基于该理论，人们对乙酰胆碱受体的激动剂和乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)的抑制剂展开了大量研究,其中AChE抑制剂他克林被成功开发成为临床上治疗AD的药物。针对脑内氧化应激的产生，主要是开发抗氧化剂，以及通过抑制单胺氧化酶来减少氧化应激对神经细胞的损伤。针对消除β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积的研究策略主要包括以下两种思路：一是设计Aβ蛋白分泌酶的抑制剂，主要是β-分泌酶的抑制剂；其次是运用免疫学的方法制备Aβ的特异性抗体对其进行识别以减少Aβ的沉积。针对Tau蛋白的过度磷酸化，主要的两种治疗策略分别是设计相应的蛋白激酶抑制剂和作用于高磷酸化Tau蛋白的脱磷酸化的磷酸酯酶激活剂。除此之外，还根据另外一些药理机制提出了假说，这些假说包括：金属离子螯合、炎症假说等。

随着AD致病机理的不断阐明，发现AD的发生和发展是生物体内复杂的调控网络和调控因子的多重作用结果，涉及多基因之间的关联。针对单一靶点的药物往往只能调控其中的某一个生理途径不能从根本上抑制AD的病理进程。因此，寻找具有针对多个靶标或多方面的治疗药物成了AD治疗药物研发的新趋势。香豆素类化合物广泛分布于自然界中，具有抗菌、消炎、抗癌、抑制蛋白酶等多种生物活性，有着良好的开发应用前景。近来研究发现一些希夫碱类化合物表现出较好的抑制Aβ聚集，金属螯合及抗氧化活性。因此，本发明设计并合成了一系列4-羟基香豆素-3-希夫碱类化合物，并将其作为多功能抗AD制剂。这类化合物作为多功能制单胺氧化酶(MAO)抑制剂，具有较好的抑制β-淀粉样蛋白(Aβ)聚集，金属离子螯合，抗氧化以及神经保护作用，可用于治疗阿尔茨海默症。开发此类具有香豆素骨架的新型多功能制剂不仅符合抗阿尔茨海默病的要求，而且具有良好的市场前景。

发明内容

本发明公开了一类4-羟基香豆素-3-希夫碱类化合物，药效学实验证明，本发明的化合物可作为多功能制剂用于治疗阿尔茨海默症的治疗。

本发明的化合物结构如下所示：

其中R¹，R²、R³、R⁴各自独立的代表H、卤素、OH、CH₃、OCH₃、NO₂或NEt₂。且不同时代表H。

优选下列任一化合物：

本发明还包括化合物(I)的药学上可接受的盐，是通式(I)化合物的盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、萘磺酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、乳酸盐、丙酮酸盐、乙酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、水杨酸盐、苯基乙酸盐、杏仁酸盐、碱性金属阳离子盐、碱土金属阳离子盐或铵阳离子盐。最优选碱性金属阳离子盐。

本发明的化合物可用下列方法制备：

其中R¹，R²，R³，R⁴的定义同前。

反应基本过程包括硝基还原反应、缩合反应以及后处理。

下面是本发明化合物的部分药理学实验及数据，试验中各化合物的编号与实施例中编号一致，对应的结构如下：

一、单胺氧化酶抑制活性

实验方法：按照文献报道的方法测试单胺氧化酶抑制活性。将化合物溶解于DMSO中，依次用缓冲液稀释至所需浓度(控制所配置溶液中的DMSO含量低于1％)。在黑色96孔酶标板中依次加入80μl酶(用缓冲液稀释至)，20μl不同浓度化合物，37℃孵育15分钟后，加入终浓度为200μMAmplex Red溶液、1U/mL辣根过氧化物酶、1mM酪胺溶液。在激发光波长545nm和吸收光波长590nm下测定荧光吸收。抑制率的计算为:[1-F_实验组/F_空白组]*100％。选择化合物的五至七个浓度测定酶的抑制率(0.001-100μM)并以该化合物摩尔浓度的负对数与酶抑制率进行线性回归,求得50％抑制时的摩尔浓度即为该化合物的IC₅₀值.每个实验重复三次，实验结果表达为平均值±SEM。

表1本发明化合物单胺氧化酶(hMAO-AB)抑制活性和选择性指数

^a选择性指数＝IC₅₀(MAO-A)/IC₅₀(MAO-B)

^b100μM或更高浓度下化合物无明显抑制活性

从表1可知，本发明化合物对MAO-A和MAO-B均具有显著抑制作用，活性数值介于微摩尔到纳摩尔之间；特别是化合物3对单胺氧化酶-A的抑制活性(IC₅₀＝673nM)，约为阳性药异丙烟肼(IC₅₀＝7140nM)的11倍；对单胺氧化酶-B的抑制活性(IC₅₀＝711nM)是阳性药异丙烟肼(IC₅₀＝8540nM)的12倍。说明本发明的化合物对单胺氧化酶具有较好的抑制作用。

二、化合物3抑制单胺氧化酶-B的动力学研究

对化合物3进行酶动力学研究。化合物3的三个不同浓度选作动力学研究分别为2.0,1.0和0.5μM。往96空黑板中依次加入80μl酶(用缓冲液稀释至)，20μl不同浓度化合物，37℃孵育15分钟后，加入终浓度为200μM Amplex Red溶液、1U/mL辣根过氧化物酶以及五个不同浓度(0.1-1mM)酪胺溶液。在激发光波长545nm和吸收光波长590nm下测定荧光吸收。以浓度的倒数为X轴和吸光度变化速率为Y轴作图，做出第一条双倒数曲线。依此方法，加入2.0μM,1.0μM，0.5μM和0浓度的化合物，做出第二、三、四双倒数曲线，以双倒数曲线的的交点判断化合物同酶的作用模式。

结果见图1，图1表明：本发明的化合物随着浓度的增加Lineweaver-Burk的双倒数曲线的斜率和截距也不断增加，同时相交于x-轴。这种模式显示，化合物为非竞争性抑制剂，说明化合物不但结合于酶的催化中心，还能同时结合于酶的催化亚活性位点。

三、抗Aβ(1-42)聚集作用研究

将1mg Aβ(1-42)用1,1,1,3,3,3-六氟-2-异丙醇(HFIP)溶解后，分装为10份，在通风橱中隔夜挥干，使其解聚，保存在-30℃待用。在准备实验之前，取其中一份加DMSO配成悬浮液，再加入磷酸缓冲液稀释至25μM，超声使其溶解，控制DMSO含量不高于10％。化合物用DMSO配制为浓度200μM。往黑色96孔板中依次加入，1μl测试化合物和9μl Aβ(1-42)磷酸盐溶液，加入完毕后，轻拍使之混匀，用盖板膜将96孔板盖好，防止溶液挥发，于室温下，黑暗处静置46-48小时。静置结束后，加入200μl用甘氨酸-氢氧化钠缓冲液制备的50mM硫代硫磺素T，于激发光波长446nm和吸收光波长为490nm下测定荧光吸收。其抑制率计算公式为：100-(IFi/IFo*100)，IFi代表抑制剂存在下的荧光吸收；IFo代表无抑制存在下的荧光吸收。每个实验重复三次，结果表达为平均值±SD。结果见表2.

表2本发明化合物的Aβ(1-42)抑制率

表2表明，用硫代硫磺素T法测定化合物的抗Aβ(1-42)聚集活性，已知的Aβ(1-42)聚集抑制剂姜黄素和白藜芦醇做为阳性对照药。本发明的化合物都表现出了中等到好(33.2-82.3％，20μM)的抑制活性(阳性对照药姜黄素：50.2％，20μM)。优特别是化合物3(60.1％，20μM)及16(73.5％，20μM)都表现出较好的对Aβ(1-42)自聚集的抑制活性。

四、金属离子螯合物作用

将氯化铜用甲醇溶解后，分别定量到不同浓度，其终浓度为5,10,15,20,30,40,50,60μM留待后用，化合物用甲醇配制后定容，终浓度为25μM。在固定量的化合物中依次加入增量的金属离子，测定其200到500nM的吸光度。将加入增加金属离子后的化合物紫外光谱减去相同浓度下的金属离子的吸光度和化合物本身的吸光度得到化合物由于加入金属离子后的吸光度增加的差谱。

图2中上图为化合物3与增加量的铜离子作用的紫外吸光谱图。其增加的吸收可以由图2下图看出，化合物3吸光度的增加是由于化合物与金属离子作用引起的并不是金属离子本身造成的。图3进一步说明化合物3与铜离子螯合比接近于1:1。这些都说明化合物能够螯合金属离子可以作为金属离子螯合剂，从而用于阿尔茨海默病的治疗。

五、抗氧化作用

化合物的抗氧化活性通过测试自由基清除能力来体现，本发明采用了ABTS测试和DPPH测试两种方法分别如下。1.ABTS测试方法：Trolox标准品：用无水乙醇配制成5mmol/LTrolox标准品的储备液,使用时再用无水乙醇稀释成若干个不同的浓度,使其分别具有5％～85％的自由基清除能力，根据预实验结果，合适的Trolox标准溶液浓度为：0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6和1.8mmol/L。ABTS工作液：将5mL的7mmol/L ABTS和88μl140mmol/L的过硫酸钾溶液混合,在室温、避光的条件下静置过夜,形成ABTS^·+储备液，该储备液在室温、避光的条件下表现稳定，使用前用无水甲醇稀释成工作液,在30℃的黑暗环境下孵育6min，测量在415nm波长下的吸收值，实验反复三次。2.DPPH测试方法：取DPPH适量溶于甲醇中到400μM，超声5min，充分振摇。化合物及对照药白藜芦醇和姜黄素用甲醇溶解成不同的浓度。测试时在96孔板上每孔加入20μl化合物，再加入180μl的DPPH溶液，室温避光放置30分钟，测量在517nm波长下的吸收值，实验反复三次。自由基清除率的计算为:1-[(A_DPPH+A_化合物)-A_DPPH/A_化合物)]*100％。选择化合物的五至七个浓度测定抑制率，求得 50％抑制时的摩尔浓度即为该化合物的IC₅₀值。每个实验重复三次，实验结果表达为平均值±SEM。

表3本发明化合物自由基清除活性

^a化合物抗氧化活性以同浓度下trolox倍数表示(mmoltrolox/mmol测定化合物)

^b100μM或更高浓度下化合物无明显抑制活性

^c没有测试

抗氧化作用结果如表3所示，以水溶性维生素E类似物——trolox作为阳性对照药，与本发明化合物测定其抗氧化作用用作对比。ABTS测试中化合物抗氧化活性以同浓度下trolox倍数表示(mmoltrolox/mmol测定化合物)。测定结果显示，大部分化合物(1，2，3，4，8，16)表现出了中等较好的抗氧化作用，其抗氧化能力大于trolox。化合物3以及16的抗氧化能力分别是trolox的1.34和1.57倍。DPPH测试中化合物抗氧化活性用IC₅₀表示，大部分化合物的抗氧化活性优于对照药白藜芦醇，其中化合物3和16的抗氧化能力IC₅₀分别是45.8μM和38.6μM。这些结果表明此类化合物具有较好的抗氧化活性，可以对抗氧化应激进而应用于AD治疗。

六、PC12细胞毒性及对H₂O₂诱导的PC12细胞损伤的保护作用

PC12细胞接种于盛有1:1混合的Dulbecco’s modified Eagle’s medium(EMEM)和ham’s F-12培养基的25ml培养瓶中，并辅以10％的胎牛血清，100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素，置于37℃下，5％二氧化碳培养箱中培养。然后将细胞以20000每孔的密度分植于96孔板中生长。当细胞生长达到要求后，将细胞置于无血清培养基中，加入200μM H₂O₂和不同浓度的化合物培养24小时。培养结束后,加入20μl MTT 37度下培养4小时，结束后加入200μlDMSO溶解甲瓒结晶，570nm下测定其吸光度。

化合物1-16用MTT法评价其对神经细胞的细胞毒性。结果如图4所示，在最大50μM浓度下经过对细胞24小时的暴露，化合物1，2，3，4，16对细胞生存率并没有明显的影响。继而，我们选取了有代表性的化合1，3，4与16来研究其对H₂O₂诱导的PC12细胞损伤的作用，以Trolox为阳性对照药。实验结果如图5所示，与H₂O₂细胞损伤组相比，化合物在5μM下可以显著提高细胞生存率。化合物16在5μM浓度下对H₂O₂诱导的PC12细胞损伤有明显的保护作用。显微拍照也清楚体现出了这些化合物的神经保护作用，见图5。这些化合物对H₂O₂诱导的PC12细胞损伤的保护作用程度与其体外抗氧化活性一致，说明我们所设计的化合物的神经保护作用可能与其清除自由基作用有关。

本发明4-羟基香豆素-3-希夫碱类化合物还通过分子对接证明其可结合MAO-AB以及Aβ(1-42)，从而表现出抑制单胺氧化酶和抑制Aβ(1-42)自聚集的活性；另外，通过体外血脑屏障通透性实验表明最优化合物3以及16都可以透过血脑屏障。总之，4-羟基香豆素-3-希夫碱类化合物在体外实验中显示出好的单胺氧化酶抑制活性，抗Aβ(1-42)聚集活性，抗氧化活性和金属离子螯合活性，也可以减轻H₂O₂诱导的PC12细胞凋亡并且能够通过血脑屏障。故它们可以作为多功能制剂来控制AD病程的发展。

本发明的化合物临床所用剂量为0.01mg～1000mg/天，也可根据病情的轻重或剂型的不同偏离此范围。

本发明的化合物或其药学上可接受的盐可以通过添加药学上可接受的载体制成各种制剂。在临床用于口服、注射等。

附图说明

图1是化合物3抑制单胺氧化酶的动力学研究

图2是化合物3加入增加量铜离子的紫外吸收谱图及化合物与铜离子的差谱

图3是化合物3/铜离子螯合比

图4是化合物PC12细胞毒作用

图5是化合物PC12神经保护作用

图6是化合物神经保护显微拍照(分别为空白及模型组，阳性药trolox空白及保护组，化合物3空白及保护组，化合物16空白及保护组)

具体实施方式

实施例1

中间体3-氨基-4-羟基香豆素(1b)的制备

将3.0g原料3-硝基-4-羟基香豆素(1a)用200ml无水乙醇溶解，加入催化量10％Pt/C，在H₂气氛下室温反应6-8小时，监测反应结束后，抽滤除去Pt/C，乙醇重结晶得白色固体1b约2.1g,收率约70％。m.p.220-222℃.1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.27(s,2H),7.86(dd,J＝7.9,1.5Hz,1H),7.52-7.45(m,1H),7.33-7.18(m,2H).13C NMR(126MHz,DMSO)δ160.71,152.00,130.54,124.12,123.50,123.50,121.57,116.45,116.45.ESI-MS m/z:178.0[M+H]+.

实施例2

(E)-4-羟基-3-((2，3-二羟基苯亚甲基)氨基)-2-氢-吡喃-2-酮(1)的制备

在单口烧瓶中加入0.1g(0.56mmol)的3-氨基-4-羟基香豆素，用适量无水乙醇溶解，再加入约0.08g(0.56mmol)2，3-二羟基苯甲醛，滴加3滴冰乙酸,室温下搅拌反应5小时后，出现黄色沉淀,抽滤,无水乙醇洗涤3次,干燥,DMF/丙酮(体积比为3：1)重结晶，得到红色固体120mg。，收率81％；m.p.>250℃,IR(KBr)ν3421,1606,1542,1461,1417,1228,1109,901,754,474cm^-1.¹H NMR(500MHz,DMSO)δ16.23(s,1H),9.85(s,1H),7.95(d,J＝7.7Hz,1H),7.50(t,J＝7.6Hz,1H),7.24(dd,J＝14.2,7.6Hz,2H),6.75(d,J＝7.8Hz,1H),6.69(d,J＝7.4Hz,1H),6.44(t,J＝7.7Hz,1H).ESI-MS m/z:295.8[M-H]^-；HRMS(ESI)m/z 296.0562[M-H]^-(calcd for 296.0564,C₁₆H₁₀NO₅).

实施例3

(E)-4-羟基-3-((2，4-二羟基苯亚甲基)氨基)-2-氢-吡喃-2-酮(2)的制备

制备过程同1，将原料水杨醛换为2，4-二羟基苯甲醛，收率81％；黄色固体，m.p.>250℃,IR(KBr)ν3427,1619,1538,1392,1316,1234,1136,1031,759,445cm^-1.¹H NMR(500MHz,DMSO)δ12.79(s,2H),10.94(s,1H),9.80(s,1H),7.97(d,J＝7.3Hz,1H),7.61(dd,J＝18.6,7.9 Hz,2H),7.40-7.29(m,3H),6.53(s,1H).ESI-MS m/z:295.9[M-H]^-；HRMS(ESI)m/z 296.0562[M-H]^-(calcd for 296.0564,C₁₆H₁₀NO₅).

实施例4

(E)-4-羟基-3-((2，3，4-三羟基苯亚甲基)氨基)-2-氢-吡喃-2-酮(3)的制备

制备过程同1，将原料水杨醛换为2，3，4-三羟基苯甲醛，收率78％；黄色固体，m.p.210-212℃,IR(KBr)ν3396,1616,1546,1421,1324,1228,1101,1023,786,754,461cm^- ¹.¹H NMR(500MHz,DMSO)δ10.84(s,1H),9.80(s,1H),9.11(s,1H),7.97(dd,J＝7.9,1.4Hz,1H),7.67–7.53(m,1H),7.32(dd,J＝7.7,5.8Hz,2H),7.14(d,J＝8.7Hz,1H),6.59(d,J＝8.6Hz,1H).ESI-MS m/z:311.9[M-H]^-；HRMS(ESI)m/z 312.0511[M-H]^-(calcd for312.0514,C₁₆H₁₀NO₆).

实施例5

(E)-4-羟基-3-((2，4，6-三羟基苯亚甲基)氨基)-2-氢-吡喃-2-酮(4)的制备

制备过程同1，将原料水杨醛换为2，4，6-三羟基苯甲醛，收率68％；黄色固体,m.p.>250℃,IR(KBr)ν3332,1616,1537,1403,1296,1235,1172,1136,1067,824,758,446cm^-1.¹HNMR(500MHz,DMSO)δ12.52(s,1H),11.78(s,1H),10.76(s,1H),10.09(s,1H),7.93(dd,J＝7.9,1.4Hz,1H),7.63–7.48(m,1H),7.29(dd,J＝7.7,6.0Hz,2H),6.00(s,2H).ESI-MS m/z:311.9[M-H]^-；HRMS(ESI)m/z 312.0516[M-H]^-(calcd for 312.0514,C₁₆H₁₀NO₆).

实施例6

(E)-4-羟基-3-((2-羟基-3-甲氧基苯亚甲基)氨基)-2-氢-吡喃-2-酮(5)的制备

制备过程同1，将原料水杨醛换为2-羟基-3-甲氧基苯甲醛，收率71％；黄色固体,m.p.>250℃,IR(KBr)ν1619.96,1589.59,1472.84,1399.63,1326.60,1251.65,1176.42,968.39,884.26,820.45,736.91cm^-1.¹H NMR(500MHz,DMSO)δ9.93(s,1H),7.99(dd,J＝7.9,1.4Hz,1H),7.68–7.56(m,1H),7.48-7.19(m,4H),7.04(t,J＝8.0Hz,1H),3.91(s,3H).ESI-MS m/z:309.8[M-H]^-；HRMS(ESI)m/z 310.0719[M-H]^-(calcd for 310.0721,C₁₇H₁₂NO₅).

实施例7

(E)-4-羟基-3-((2-羟基-4-甲氧基苯亚甲基)氨基)-2-氢-吡喃-2-酮(6)的制备

制备过程同1，将原料水杨醛换为2-羟基-4-甲氧基苯甲醛，收率74％；黄色固体,m.p.>250℃,IR(KBr)ν3445,1677,1519,1411,1360,1290,1231,1211,1119,1031,906,755,679,555,474cm^-1.¹H NMR(500MHz,DMSO)δ13.05(s,2H),9.85(s,1H),7.97(dd,J＝7.9,1.4Hz,1H),7.74(d,J＝8.8Hz,1H),7.62–7.58(m,1H),7.33(dd,J＝7.7,4.4Hz,2H),6.70(dd,J＝8.7, 2.1Hz,1H),6.59(d,J＝2.1Hz,1H),3.87(s,3H).ESI-MS m/z:309.9[M-H]^-；HRMS(ESI)m/z310.0720[M-H]^-(calcd for 310.0721,C₁₇H₁₂NO₅).

实施例8

(E)-4-羟基-3-((2-羟基-5-甲氧基苯亚甲基)氨基)-2-氢-吡喃-2-酮(7)的制备

制备过程同1，将原料水杨醛换为2-羟基-5-甲氧基苯甲醛，收率76％；黄色固体,m.p.>250℃,IR(KBr)ν3444,1679,1597,1538,1511,1447,1381,1257,1224,1090,1037,899,752,713,479cm^-1.¹H NMR(500MHz,DMSO)δ12.63(s,1H),9.92(s,1H),8.08-7.94(m,1H),7.64(t,J＝7.7Hz,1H),7.44(d,J＝2.8Hz,1H),7.35(dd,J＝7.6,4.4Hz,2H),7.17(dd,J＝9.0,3.0Hz,1H),7.03(d,J＝9.0Hz,1H),3.79(s,3H).ESI-MS m/z:312.2[M+H]⁺；HRMS(ESI)m/z 310.0718[M-H]^-(calcd for 310.0721,C₁₇H₁₂NO₅).

实施例9

(E)-4-羟基-3-((2-羟基-3-甲基苯亚甲基)氨基)-2-氢-吡喃-2-酮(8)的制备

制备过程同1，将原料水杨醛换为2-羟基-3-甲基苯甲醛，收率77％；黄色固体,m.p.>250℃,IR(KBr)ν3446,1681,1650,1600,1545,1487,1412,1373,1326,1240,1212,1109,1036,899754,472cm^-1.¹H NMR(500MHz,DMSO)δ12.44(s,1H),9.81(s,1H),7.99(dd,J＝8.0,1.4Hz,1H),7.66–7.59(m,1H),7.56(d,J＝7.4Hz,1H),7.40(d,J＝7.3Hz,1H),7.34(dd,J＝7.4,6.4Hz,2H),6.98(t,J＝7.6Hz,1H),2.29(s,3H).ESI-MS m/z:293.9[M-H]^-；HRMS(ESI)m/z294.0773[M-H]^-(calcd for 294.0772,C₁₇H₁₂NO₄).

实施例10

(E)-4-羟基-3-((2-羟基-4-甲基苯亚甲基)氨基)-2-氢-吡喃-2-酮(9)的制备

制备过程同1，将原料水杨醛换为2-羟基-4-甲基苯甲醛，收率73％；黄色固体,m.p.>250℃,IR(KBr)ν3057,1686,1611,1527,1410,1362,1229,1135,1083,903,748,443cm^-1.¹H NMR(500MHz,DMSO)δ13.13(s,1H),9.89(s,1H),7.98(d,J＝7.5Hz,1H),7.67(d,J＝7.8Hz,1H),7.62(t,J＝7.5Hz,1H),7.39-7.30(m,2H),6.92(d,J＝8.3Hz,2H),2.37(s,3H).ESI-MS m/z:293.9[M-H]^-；HRMS(ESI)m/z 294.0770[M-H]^-(calcd for 294.0772,C₁₇H₁₂NO₄).

实施例11

(E)-4-羟基-3-((2-羟基-5-甲基苯亚甲基)氨基)-2-氢-吡喃-2-酮(10)的制备

制备过程同1，将原料水杨醛换为2-羟基-5-甲基苯甲醛，收率67％；黄色固体,m.p.>250℃,IR(KBr)ν3449,1688,1599,1535,1364,1265,1238,1085,899,755,637,487,454cm^-1.¹H NMR(500MHz,DMSO)δ13.01(s,2H),9.86(s,1H),8.02–7.91(m,1H),7.61(dd,J＝11.1,4.3 Hz,1H),7.56(s,1H),7.37–7.26(m,3H),6.98(d,J＝8.4Hz,1H),2.28(s,3H).ESI-MS m/z:293.9[M-H]^-；HRMS(ESI)m/z 294.0771[M-H]^-(calcd for 294.0772,C₁₇H₁₂NO₄).

实施例12

(E)-4-羟基-3-((2-羟基-4-二乙胺基苯亚甲基)氨基)-2-氢-吡喃-2-酮(11)的制备

制备过程同1，将原料水杨醛换为2-羟基-4-二乙胺基苯甲醛，收率67％；黄色固体,m.p.>250℃,IR(KBr)ν3447,2976,1672,1610,1520,1423,1350,1237,1140,1079,753,690cm^-1.¹H NMR(500MHz,DMSO)δ12.20(s,2H),9.63(s,1H),7.92(d,J＝7.4Hz,1H),7.54(t,J＝7.5Hz,1H),7.46(d,J＝8.9Hz,1H),7.28(t,J＝6.6Hz,2H),6.44(d,J＝8.5Hz,1H),6.25(s,1H),3.46–3.41(m,4H),1.15(t,J＝6.8Hz,6H).ESI-MS m/z:351.0[M-H]^-；HRMS(ESI)m/z 351.1347[M-H]^-(calcd for 351.1350,C₂₀H₁₉N₂O₄).

实施例13

(E)-4-羟基-3-((2-羟基-5-溴苯亚甲基)氨基)-2-氢-吡喃-2-酮(12)的制备

制备过程同1，将原料水杨醛换为2-羟基-5-溴苯甲醛，收率58％；黄色固体,m.p.>250℃,IR(KBr)ν3446,1698,1612,15311491,1461,1416,1372,1316,1282,1196,1076,900,824,755,663,498cm^-1.¹H NMR(500MHz,DMSO)δ12.99(s,1H),9.87(s,1H),8.13(d,J＝2.1Hz,1H),8.00(dd,J＝7.9,1.5Hz,1H),7.65(dd,J＝11.0,5.0Hz,2H),7.36(dd,J＝7.6,4.7Hz,2H),7.03–6.98(m,1H).ESI-MS m/z:391.2[M+Na]⁺；HRMS(ESI)m/z 357.9717[M-H]^-(calcd for 357.9720,C₁₆H₉BrNO₄).

实施例14

(E)-4-羟基-3-((2-羟基-3，5-二溴苯亚甲基)氨基)-2-氢-吡喃-2-酮(13)的制备

制备过程同1，将原料水杨醛换为2-羟基-3，5-二溴苯甲醛，收率64％；黄色固体,m.p.>250℃,IR(KBr)ν3444,1692,1617,1555,1485,1420,1384,1288,1204,1149,896,752,695,477cm^-1.¹H NMR(500MHz,DMSO)δ11.28(s,1H),9.77(s,1H),7.97(d,J＝7.8Hz,1H),7.67(dd,J＝10.0,4.5Hz,2H),7.56(t,J＝7.6Hz,1H),7.30(t,J＝6.4Hz,2H).ESI-MS m/z:437.7[M+H]⁺；HRMS(ESI)m/z 435.8825[M-H]^-(calcd for 435.8826,C₁₆H₈Br₂NO₄).

实施例15

(E)-4-羟基-3-((2-羟基-5-氟苯亚甲基)氨基)-2-氢-吡喃-2-酮(14)的制备

制备过程同1，将原料水杨醛换为2-羟基-5-氟苯甲醛，收率83％；黄色固体,m.p.>250℃,IR(KBr)ν3075,1683,1603,1544,1513,1453,1372,1320,1248,1096,1039,903,820,754,487cm^-1.¹H NMR(500MHz,DMSO)δ12.98(s,2H),9.86(s,1H),7.97(d,J＝7.5Hz,1H),7.79(d,J ＝7.0Hz,1H),7.62(t,J＝7.3Hz,1H),7.35(t,J＝6.7Hz,3H),7.04(dd,J＝8.6,3.8Hz,1H).ESI-MS m/z:300.1[M+H]⁺；HRMS(ESI)m/z 298.0524[M-H]^-(calcd for298.0521,C₁₆H₉FNO₄).

实施例16

(E)-4-羟基-3-((2-羟基-5-氯苯亚甲基)氨基)-2-氢-吡喃-2-酮(15)的制备

制备过程同1，将原料水杨醛换为2-羟基-5-氯苯甲醛，收率65％；黄色固体,m.p.>250℃,IR(KBr)ν3058,1679,1601,1537,1500,1442,1390,1364,1322,1273,1221,1088,1040,919,895,816,751,734cm^-1.¹H NMR(500MHz,DMSO)δ9.87(s,1H),7.95(d,J＝7.5Hz,1H),7.77(s,1H),7.56(s,1H),7.38(s,1H),7.28(d,J＝6.9Hz,2H),7.01-6.92(m,1H).ESI-MS m/z:313.9[M-H]^-；HRMS(ESI)m/z 314.0224[M-H]^-(calcd for 314.0226,C₁₆H₉ClNO₄).

实施例17

(E)-4-羟基-3-((2-羟基-5-硝基苯亚甲基)氨基)-2-氢-吡喃-2-酮(16)的制备

制备过程同1，将原料水杨醛换为2-羟基-5-硝基苯甲醛，收率79％；黄色固体,m.p.>250℃,IR(KBr)ν3276,1691,1607,1528,1482,1426,1368,1261,1227,1098,1026,901,762,736,472cm^-1.¹H NMR(500MHz,DMSO)δ9.96(s,1H),8.53(s,1H),8.08(d,J＝9.3Hz,1H),7.98(d,J＝7.2Hz,1H),7.88(d,J＝8.0Hz,1H),7.59(t,J＝7.7Hz,1H),7.37(d,J＝8.3Hz,1H),7.31(d,J＝7.8Hz,1H).ESI-MS m/z:324.9[M-H]^-；HRMS(ESI)m/z 425.0464[M-H]^-(calcd for 325.0466,C₁₆H₉N₂O₆)。

Claims

1.一种通式(I)的4-羟基香豆素-3-希夫碱类化合物或其药学上可接受的盐：

其中R¹、R²、R³、R⁴各自独立的代表H、卤素、OH、CH₃、OCH₃、NO₂或NEt₂，且不同时代表H。

2.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，是下列任一结构的化合物：

3.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中药学上可接受的盐是通式(I)化合物的盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、萘磺酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、乳酸盐、丙酮酸盐、乙酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、水杨酸盐、苯基乙酸盐、杏仁酸盐、碱性金属阳离子盐、碱土金属阳离子盐或铵阳离子盐。

4.一种药物组合物，含有权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐及药学上可接受的载体。

5.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐用于制备单胺氧化酶抑制剂的用途。

6.权利要求5的用途，其中所述的单胺氧化酶抑制剂是制备治疗阿尔茨海默病的药物。