DE69033342T2

DE69033342T2 - Etoposidanaloge

Info

Publication number: DE69033342T2
Application number: DE69033342T
Authority: DE
Inventors: Scott Beers; Phillip Bowen; Chung-Hsiung Chen; Yung-Chi Cheng; Hua-Juan Room 302 Dai; Mitsumasa 1-1729 Haruna; Yasuhiro Imakura; Yao Kuo; Kuo-Hsiung Lee; Su-Ying Liu; Masami 46-2 Mori; Dora Schnur; Lee Thurston; Zhe Wang
Original assignee: University of North Carolina at Chapel Hill
Current assignee: University of North Carolina at Chapel Hill
Priority date: 1989-02-23
Filing date: 1990-02-23
Publication date: 2000-05-11
Anticipated expiration: 2010-02-24
Also published as: JP3043802B2; AU632796B2; EP0461141A1; EP0461141B1; WO1990009788A1; ATE186302T1; AU5157190A; DE69033342D1; EP0461141A4

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft Verbindungen, die Analoge von Etoposid sind und Antitumoraktivität aufweisen. Die Erfindung betrifft auch ein Verfahren zur Behandlung von Tumoren durch Verabreichung einer sicheren und effektiven Menge der Etoposid analogen Verbindungen.

HINTERGRUND DER ERFINDUNG

Podophyllotoxin ist eine natürliche auftretende, von der Mandragore extrahierte Verbindung. Vor kurzem sind zwei therapeutisch nützliche halbsynthetische Glykoside von Podophyllotoxin, Etoposid (auch bekannt als VP-16), unten gezeigt, und Teniposid (auch bekannt als VM-26) entwickelt worden.
R=CH&sub3; (Etoposid)
Die Verbindungen zeigen therapeutische Aktivität in verschiedenen humanen Neoplasmen, einschließlich Kleinzell-Karzinomen der Lunge, Hodentumoren, maligner Lymphogranulomatose, Papilloma- Viren und diffusen histozytischen Lymphoma.
Es wird vermutet, daß diese Wirkstoffe die katalytische Aktivität der DNA-Topoisomerase 11 durch Stabilisierung eines Enzym- DNA-Komplexes blockieren, in dem die DNA gespalten und kovalent an das Enzym gebunden ist. Siehe Chen, G. L., Yang, L., Rowe, T. C., Halligan, B. D., Tewey, K. und Liu, L., J. Biol. Chem., 259, 13560 (1984), Ross, W., Rowe, T., Glisson, B., Yalowich, J. und Liu, L., Cancer Res., 44, 5857 (1984), Rowe, T., Kuppfer, G. und Ross, W., Biochem. Pharmacol., 34, 2483 (1985), auf die hier Bezug genommen wird. Zum Hintergrund: Topoisomerasen sind Enzyme, die den topologischen Zustand von DNS steuern. Typ II-Topoisomerasen katalysieren den DNS-Strangdurchtritt durch zeitweilige Doppelstrangbrüche der DNS. Die resultierende Änderung der Verknüpfungszahl der DNS ermöglicht diesen Enzymen DNS-Zustandsveränderungen zu vermitteln, wie Über-Windung (Supercoiling) und Relaxation der Über-Windung, Katenisierung und Dekatenisierung, Verknotung und Entknotung. Siehe Wang, J. C., Annu. Rev. Biochem., 54, 665 (1985) und Maxwell, A. und Gellert, M., Adv. Protein Chem., 38, 69 (1986), auf die hier Bezug genommen wird.
Es hat sich gezeigt, daß Typ II-DNA Topoisomerase-Enzyme an einer Vielzahl von vitalen Zellprozessen beteiligt sind, einschließlich DNS-Replikation und -Transkription sowie chromosomale Trennung. Diese Enzyme sind daher ein kritisches Ziel für die Wirkung einer großen Anzahl an Antikrebs-Arzneimitteln, einschließlich Etoposid und Teniposid. Der zum Zelltod führende Schlüsselschritt kann, wie oben beschrieben, die Fähigkeit dieser Wirkstoffe zur Blockierung der katalytischen Aktivität der DNS-Topoisomerase II, sein.
Struktur-Aktivität-Studien haben eine direkte Beziehung zwischen Zytotoxizität, DNA-Bruch und Inhibierungsaktivitäten von Maus- Topoisomerase II der Podophyllotoxin-Analogen gezeigt. Siehe Minocha, A. und Long, B., Biochem. Res. Co mm., 122, 165 (1984). Die Isolierung und Reinigung von humaner Typ-II-Topoisomerase aus lymphozytischen Leukämiezellen hat ein Mittel zur Verwendung dieses Enzyms als ein Ziel zur Untersuchung der Struktur-Aktivitäts-Beziehung von Etoposid und damit verknüpften Congeneren bereitgestellt.
Es wurde gezeigt, daß die Substitution des glykosidischen Rests von Etoposid durch eine 4-Alkoxygruppe, wie in 4'-Demethyl-epipodophyllotoxinethylether, die inhibitorische Aktivität der DNS- Topoisomerase-II bei höheren Konzentrationen unverändert läßt. Siehe Thurston, L. S., Irie, H., Tani, S., Han, F. S., Liu, Z. C., Cheng, Y. C. und Lee, K. H., J. Med. Chem., 29, 1547 (1986), auf die hier vollständig Bezug genommen wird. Allerdings wurde auch gezeigt, daß eine Reihe von 4-Acyl-Congeneren weniger aktiv sind, obwohl einige davon mögliche Zytotoxizität aufwiesen. Siehe Thurston, L. S., Imakura, Y., Harung, M., Li, D. H., Liu, Z. C., Liu, S. Y., Cheng, Y. C. und Lee, K. H., J. Med. Chem., 31, (1988).

Zusammenfassung der Erfindung

Die vorliegende Erfindung liefert neuartige, Antitumoraktivität aufweisende Verbindungen. Die Verbindungen sind Etoposid-Analoge. Insbesondere sind erfindungsgemäß bevorzugte Verbindungen Etoposid-Analoge, in denen der glykosidische Rest durch verschiedene Substituenten wie eine 4"-Fluoranilinyl-Kette ersetzt ist. Es hat sich gezeigt, daß die erfindungsgemäßen Verbindungen humane Typ-II-Topoisomerase inhibieren und auch den Bruch zellulärer, proteinverbundener DNS hervorrufen, und daher bei der Behandlung von Tumoren nützlich sein können. Die Verbindungen können auch bei der Behandlung des Papilloma-Virus verwendet werden.
Erfindungsgemäß wird eine Verbindung mit der Formel:
geliefert, in der R&sub1;
R&sub2; H oder Br,
R&sub3; H oder Br,
R&sub4; H oder Br,
R&sub5; H oder Br und
R&sub6; H oder -CH&sub3; ist.
Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform sind R&sub2; bis R&sub6; H.
Die vorliegende Erfindung liefert auch eine Verbindung der Formel:
in der R&sub1;:
ist, oder eine Verbindung der Formel:
in der R&sub1; ein Arylamin der Formel:
ist, in der R&sub7; H, OH, F, Cl, Br, CO&sub2;CH&sub3;, CO&sub2;C&sub2;H&sub5;, CN, NO&sub2;, NH&sub2;, N(CH&sub3;)&sub2;, OCH&sub3;, CH&sub2;OH, CH&sub3;, CF&sub3;, CH&sub2;CH&sub2;OH, COCH&sub3;, CH&sub2;NH&sub2;,
R&sub8; H, OH, F, Cl, Br, CO&sub2;CH&sub3;, CO&sub2;C&sub2;H&sub5;, CN, NO&sub2;, NH&sub2;, (CH&sub3;)&sub2;, OCH&sub3;, CH&sub2;OH, CH&sub3;, CF&sub3;, CH&sub2;CH&sub2;OH, COCH&sub3;, CH&sub2;NH&sub2;, CHOHCH&sub3;, SCH&sub3;,
R&sub9; H, OH, F, Cl, Br, I, CHOCH&sub3;, CO&sub2;C&sub2;H&sub5;, CN, NO&sub2;, NH&sub2;, N(CH&sub3;)&sub2;, OCH&sub3;, CH&sub2;OH, CH&sub3;, CF&sub3;, CH&sub2;CH&sub2;OH, COCH&sub3;, CH&sub2;NH&sub2;, N(CH&sub2;CH&sub2;OH)&sub2;,
R&sub1;&sub0; H, F, Cl, OH, OCH&sub3;, CO&sub2;CH&sub3;, CO&sub2;C&sub2;H&sub5;, CH&sub3;, CF&sub3;, NO&sub2;, NH&sub2;, Cl,
R&sub1;&sub1; H, F, Cl, CH&sub3;, CF&sub3;, OH, OCH&sub3;, NO&sub2; oder
R&sub9; und R&sub1;&sub0; zusammen OCH&sub2;O oder OCH&sub2;CH&sub2;O sind.
Gemäß einem weiteren erfindungsgemäßen Aspekt wird eine pharmazeutische Zusammensetzung geliefert, die eine wie oben beschriebene erfindungsgemäße Verbindung enthält.
Besonders bevorzugte Verbindungen umfassen 4'-Demethyl-4β-[3"- hydroxyanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin, 4'-Demethyl-4β-[2"- hydroxyanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin, 4'-Demethyl-4β-[4"- hydroxyanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin, 4'-Demethyl-4β-[2"- fluoranilinyl-4-desoxypodophyllotoxin, 4'-Demethyl-4β-[3"- fluoranilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin, 4'-Demethyl-4β-[4"- fluoranilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin, 4'-Demethyl-4β-[3",5"- difluoranilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin, 4'-Demethyl-4β-[4"- chloranilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin, 4'-Demethyl-4β-[4"- bromanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin, 4'-Demethyl-4β-anilinyl- 4-desoxypodophyllotoxin, 4'-Demethyl-4β-[4"-cyanoanilinyl]-4- desoxypodophyllotoxin, 4'-Demethyl-4β-[3"-cyanoanilinyl]-4- desoxypodophyllotoxin, 4'-Demethyl-4β-[4"-ethoxycarbonylanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin, 4'-Demethyl-4β-[4"-morpholinoanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin, 4'-Demethyl-4β-[3",4"-methylendioxyanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin, 4'-Demethyl-4β- [3",4"-dimethoxyanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin, 4'-Demethyl- 4β-[3"-pyridylamino]-4-desoxypodophyllotoxin und 4'-Demethyl- 4β-[3"-chinolinylamino]-4-desoxypodophyllotoxin.
Weitere erfindungsgemäßen Aufgaben und Vorteile werden teilweise in der nachfolgenden Beschreibung beschrieben, teilweise aus der Beschreibung offensichtlich oder können bei der Durchführung der Erfindung gelernt werden.

Beschreibung der bevorzugten Ausführungsformen

Es wird nunmehr detailliert auf die zur Zeit bevorzugten erfindungsgemäßen Ausführungsformen Bezug genommen, die zusammen mit den folgenden Beispielen die erfindungsgemäßen Prinzipien erklären sollen.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind Etoposid-Analoge, in denen die glykosidische Einheit ersetzt wurde. Zusammensetzungen, die eine starke Inhibition humaner DNS-Topoisomerase-II zeigen, resultieren vom Ersatz der glykosidischen Einheit mit einem substituierten Arylamin in der C-4β-Position. Die inhibitorische Aktivität kann auch gesteigert werden, indem die glykosidische Einheit an der C-4β-Position durch Chlor, Brom oder eine Aminogruppe ersetzt wird. Es wird vermutet, daß die Stereochemie der 4β-Substituenten eine wichtige Rolle bei der Bestimmung des Inhibitionspotentials spielt. Im allgemeinen zeigen β- Isomere höhere Aktivität als die entsprechenden α-Isomere. Ein weiterer, das Potential beeinflußender Faktor ist die Länge der Substituentengruppe an der C-4-Position und die Substitution an dieser Gruppe. Dieser Distanzfaktor ist unterschiedlich für halogen- und hydroxysubstituierte Arylamine. Bei den hydroxysubstituierten Arylaminen zeigte die meta-Position das größte Potential, wohingegen bei den Halogenen para-Substitution das größte Potential zeigte. Ein zweiter Potentialfaktor in bezug auf die halogensubstituierten Arylamine ist die Größe des Halogens. Fluor, das kleinste, hat das größte Potential, während Iod, das Größte, das geringste Potential hat. Darüberhinaus führt die Substitution von Brom an einem oder mehreren der R&sub2;-, R&sub3;-, R&sub4;- und R&sub5;-Positionen zu Verbindungen mit signifikanter inhibitorischer Aktivität. R&sub6; kann durch Substitution des Wasser stoffs durch eine Methylgruppe variiert werden. Diese Modifikationen zeigen Veränderungen der inhibitorischen Aktivität, die leicht durch im Stand der Technik bekannte Assays durch Anwendung von Routinemaßnahmen im Licht der hier enthaltenen Lehren bestimmt werden können.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen wurden bezüglich ihres Grads an inhibitorischer Aktivität für humane Typ-II-DNS-Topoisomerase, ihrer Wirkung bei der Bildung von Brüchen in Proteinverknüpfter DNS und ihrer Zytotoxizität untersucht. Die inhibitorische Aktivität der erfindungsgemäßen Verbindungen hing mit der Fähigkeit der Verbindungen, DNS-Strangbrüche hervorzurufen zusammen. Allerdings schien die in vitro-Zytotoxizität der untersuchten Verbindungen nicht mit der enzyminhibitorischen Aktivität und DNS-Strangbruchaktivität in Beziehung zu stehen. Die Ergebnisse der Untersuchungen einiger erfindungsgemäßen Verbindungen sind in Tabellen I und III aufgeführt. Für eine Beschreibung der in bezug auf die in Tabellen I und III aufgeführten Verbindungen durchgeführten Assays siehe Thurston, L. S., Irie, H., Tani, S., Han, F. S., Liu, Z. C., Cheng, Y. C. und Lee, K. H., Antitumor Agents 78. Inhibition of Human DNA Topoisomerase 11 by Podophyllotoxin and α-Peltatin Analogues, J. Med. Chem. 29, 1547 (1986) und die darin aufgeführten Zitate.
Tabelle III illustriert die inhibitorische Aktivität, DNS- Strangbruchfähigkeit sowie die Zytotoxizität von Etoposid und einigen erfindungsgemäßen Verbindungen. Wie in Tabelle III aufgeführt, entspricht die inhibitorische Aktivität von 4'-Demethyl-4β-[3"-hydroxyanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin (Beispiel 33), 4'-Demethyl-4β-[2"-hydroxyanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin (Beispiel 34), 4'-Demethyl-4β-[4"-hydroxyanilinyl]- 4-desoxypodophyllotoxin (Beispiel 35), 4'-Demethyl-4β-[3"-fluoranilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin (Beispiel 26), 4'-Demethyl-4β- [4"-fluoranilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin (Beispiel 28), 4'- Demethyl-4β-[4"-chloranilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin (Beispiel 38), 4'-Demethyl-4β-anilinyl-4-desoxypodophyllotoxin (Beispiel 19), 4'-Demethyl-4β-[4"-cyanoanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin (Beispiel 20), 4'-Demethyl-4β-[3"-cyanoanilinyl]-4- desoxypodophyllotoxin (Beispiel 21), 4'-Demethyl-4β-[4"-ethoxycarbonylanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin (Beispiel 22), 4'- Demethyl-4β-[4"-morpholinoanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin - (Beispiel 23), 4'-Demethyl-4β-[3"-methylendioxyanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin (Beispiel 24), 4'-Demethyl-4β-[3"-dimethoxyanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin (Beispiel 25), 4'-Demethyl-4β- [3"-pyridylamino]-4-desoxypodophyllotoxin (Beispiel 30), 4'- Demethyl-4β-[2"-pyridylamino]-4-desoxypodophyllotoxin (Beispiel 31) und 4'-Demethyl-4β-[3"-chinolinylamino]-4-desoxypodophyllotoxin (Beispiel 32) derjenigen von Etoposid oder übertrifft diese. Wie in Tabelle III gezeigt, übertrifft die DNS-Strangbruchfähigkeit von 4'-Demethyl-4β-[3-hydroxyanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin (Beispiel 33), 4'-Demethyl-4β-[2-hydroxyanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin (Beispiel 34), 4'-Demethyl-4β-[4- hydroxyanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin (Beispiel 35), 4'-Demethyl-4β-[3"-fluoranilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin (Beispiel 26), 4'-Demethyl-4β-[2"-fluoranilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin (Beispiel 27), 4'-Demethyl-4β-[4"-fluoranilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin (Beispiel 28), 4'-Demethyl-4β-[3",5"-difluoranilinyl-4-desoxypodophyllotoxin (Beispiel 29), 4'-Demethyl-4β-anilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin (Beispiel 19), 4'-Demethyl-4β- [4"-cyanoanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin (Beispiel 20), 4'- Demethyl-4β-[3"-cyanoanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin(Beispiel 21), 4'-Demethyl-4β-[4"-ethoxycarbonylanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin (Beispiel 22), 4'-Demethyl-4β-[4"-morpholinoanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin (Beispiel 23), 4'-Demethyl-4β- [3",4"-methylendioxyanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin (Beispiel 24), 4'-Demethyl-4β-[3",4"-dimethoxyanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin (Beispiel 25), 4'-Demethyl-4β-[3"-pyridylamino]-4-desoxypodophyllotoxin (Beispiel 30), 4'-Demethyl-4β-[3"-chinolinylamino]-4-desoxypodophyllotoxin (Beispiel 32) und 4'-Demethyl- 4β-[4"-bromanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin (Beispiel 40) darüber hinaus weit diejenige von Etoposid.
Die Herstellung von erfindungsgemäßen Verbindungen wird in den folgenden Beispielen aufgeführt.

BEISPIEL 1 (Vergleichsbeispiel)

Herstellung von 4'-Demethylepipodophyllotoxin.

5 g (12,1 mmol) Podophyllotoxin wurden in 75 ml wasserfreiem CH&sub2;Cl&sub2; gelöst. Trockenes Bromwasserstoff-Gas wurde anschließend bis zur Sättigung durch die Lösung geleitet. Die Reaktionsmischung wurde dann verschlossen und bei Raumtemperatur 48 Stunden stehen gelassen. Die Entfernung des Lösungsmittels ergab einen Rückstand, der dann mit 25 ml Wasser, 50 ml Aceton und 5 g BaCO&sub3; behandelt und 1 Stunde unter Rückfluß gerührt wurde. Die Reaktionsmischung wurde mit Chloroform extrahiert und über eine Kieselgelsäule chromatographiert. Das Produkt wurde durch Elution mit Chloroform-Methanol (30 : 1) erhalten und aus CH&sub2;Cl&sub2;/Ethylether umkristallisiert, um 2,5 g (52%) 4'-Demethylepipodophyllotoxin zu ergeben. Die Spektraldaten stimmten mit denen von Kuhn, M., Keller-Julsen, C. und von Wartburg, A., Helv. Chim. Acta, 52, 944 (1969) beschrieben (siehe Schema 1) überein.

BEISPIEL 2 (Vergleichsbeispiel)

Herstellung von 4'-Demethylpodophyllotoxin.

4-'-Demethylpodophyllotoxin wurde unter Verwendung der Kieselgelsäule von Beispiel 1 durch weitere Elution mit Chloroformmethanol (30 : 1) erhalten. Das durch Elution erhaltene Produkt wurde in 5%iger (0,5 g) Ausbeute aus Aceton kristallisiert. Die Spektraldaten stimmten mit denen von Kuhn, M. und von Wartburg, A., Helv. Chim. Acta, 52, 948 (1969) (nachfolgend Kuhn und von Wartburg) beschriebenen überein.

BEISPIELE 19 41

Herstellung von 4'-Demethyl-4β-(arylamino)-4-desoxypodophyllotoxinen (19-41). (Schema VIII)

Die in Beispielen 19-41 aufgeführten 4'-Demethyl-4β-[arylamino]-4-desoxypodophyllotoxine wurden gemäß dem folgenden Verfahren hergestellt:
Eine Lösung von 4'-Demethylepipodophyllotoxin (10 g, 24 mmol) in 250 ml trockenem Dichlormethan wurde auf 0ºC gekühlt, und trockenes Bromgas wurde durch die Lösung geleitet. Nach 30 Minuten wurde Stickstoff durch die Lösung geleitet, um überschüssiges Bromwasserstoff auszuleiten. Die Lösung wurde dann im Vakuum zur Trockne mittels azeotopischer Destillation mit Benzol verdampft.
Das gewünschte Produkt (11,5 g) wurde erhalten und dann ohne weitere Reinigung in der Reaktion der nächsten Stufe verwendet.
Die Spektraldaten stimmten mit denen von M. Kuhn und A. von Wartburg Helv. Chim. Acta, 52, 944 (1969) beschriebenen überein.
Eine 4'-Demethyl-4β-brom-4-desoxypodophyllotoxin (300 mg, 0,65 mmol), Bariumcarbonat (153 mg, 0,78 mmol) und die geeigneten Arylamine (0,78 mmol) enthaltende Lösung in 7 ml trockenem 1,2-Dichlorethan wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionsmischung wurde filtriert, mit Ethylacetat verdünnt, mit Wasser gewaschen, getrocknet und mittels Säulenchromatographie gereinigt. Die in den Beispielen erhaltenen Produkte (19- 41) haben die nachfolgend aufgeführten Eigenschaften.

BEISPIEL 19

4'-Demethyl-4-β-anilinyl-4-desoxypodophyllotoxin.

Kristalle aus Methanol; Smp. 172-173ºC, [α]²&sup5;D-120º (C = 1,0, CHCl&sub3;), IR (KBr) 3500 (OH), 3360 (NH), 2900 (aliphatische C-H), 1755 (Lacton), 1595, 1500 und 1475 (aromatische c=c) cm&supmin;¹; ¹H-NMR CDCl&sub3; δ 7,22 (t, J = 7,5 Hz, 2H, 3",5"-H), 6,80 (m, 2H, 4"-H und 5-H), 6,50 (m, 3H, 2"-H, 6"-H und 8-H), 6,33 (s, 2H, 2',6'-H), 5,97 (ABq, J = 1,3, 3,6 Hz, OCH&sub2;O), 5,42 (s, 1H, austauschbar 4'-OH), 4,68 (br, 1H, 4-H), 4,60 (d, J = 4,9 Hz, 1-H), 4,38 (t, J = 8,4 Hz, 1H, 11-H), 4,01 (t, J = 8,4 Hz, 1H, 11- H), 3,85 (br, 1H, austauschbar, NH), 3,79 (s, 6H, 3',5'-OCH), 3,16 (dd, J = 5,0, 14,0 Hz, 1H, 2-H), 3,00 (m, 1H, 3-H).
Anal. (C&sub2;&sub7;H&sub2;&sub5;NO&sub7;), C.H.N.

BEISPIEL 20

4'-Demethyl-4β-[4"-cyanoanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin.

Kristalle aus Ethanol; Smp. 187-189ºC, [α]²&sup5;D-145º (C = 1,0, CHCl&sub3;), IR (KBr) 3500 (OH), 3360 (NH), 2890 (aliphatische C-H), 2210 (Lacton), 1600, 1510 und 1475 (aromatische C=C) cm&supmin;¹; ¹H-NMR CDCl&sub3;, δ 7,50 (d, J = 8,7 Hz, 2H, 3",5"-H), 6,74 (s, 1H, 5-H), 6,57 (d, J = 8,7 Hz, 2H, 2",6"-H), 6,55 (s, 1H, 8-H), 6,32 (s, 2H, 2',6'-H), 5,99 (ABq, J = 1,2, 8,3 Hz, 2H, OCH&sub2;O), 5,44 (5, 1H, austauschbar, 4'-OH), 4,78 (m, 1H, austauschbar, NH), 4,63 (d, J = 4,2 Hz, 1H, 4-H), 4,36 (m, 2H, 11-H), 3,85 (m, 1H, 1-H), 3,79 (s, 6H, 3',5'-OCH&sub3;), 3,09 (dd, 1H, 2-H), 3,05 (m, 1H, 3-H).
Anal. (C&sub2;&sub8;H&sub2;&sub4;NO&sub7;), C.H.N.

BEISPIEL 21

4'-Demethyl-4β-[3"-cyanoanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin.

Kristalle aus Methanol; Smp. 191-192ºC, [α]²&sup5;D-117º (C = 0,33, CHCl&sub3;), IR (KBr) 3450 (OH), 3360 (NH), 2900 (aliphatische C-H), 2225 (CN), 1750 (Lacton), 1595, 1500 und 1450 (aromatische C=C) cm&supmin;¹; ¹H-NMR CDCl&sub3; δ 7,31 (t, J = 7,6 Hz, 5"- H), 7,07 (d, J = 7,6 Hz, 4"-H), 6,80 (d, 2H, 2"-H und 6"-H), 6,74 (s, 1H, 5-H), 6,55 (s, 1H, 8-H), 6,33 (s, 2H, 2',6'-H), 6,00 (d, J = 7,0 Hz, 2H, OCH&sub2;O), 5,48 (s, 1H austauschbar, 4'-OH), 4,69 (d, J = 3,8 Hz, 1H, 4-H), 4,62 (d, J = 4,5 Hz, 1H, 2-H), 4,41 (t, J = 8,5 Hz, 1H, 11-H), 3,92 (t, J = 8,5 Hz, 1H, 11-H), 3,81 (s, 6H, 3', 5'-OCH&sub3;), 3,14-3,00 (m, 2H, 2-H und 3-H).
Anal. (C&sub2;&sub8;H&sub2;&sub4;N&sub2;O&sub7;) · 1/2 H&sub2;O, C.H.N.

BEISPIEL 22

4'-Demethyl-4β-[4"-ethoxycarbonylanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin.

Kristalle aus Ethanol; Smp. 270-271º, [α]²&sup5;D-145º (C = 0,33, CHCl&sub3;), IR (KBr) 3500 (OH), 3370 (NH), 2940 (aliphatische C-H), 1762 (Lacton), 1695 (Ester), 1610, 1520 und 1480 (aromatische C=C) cm&supmin;¹; ¹H-NMR CDCl&sub3; δ 7,92 (d, J = 8,8 Hz, 2H, 3",5"-H), 6,77 (s, 1H, 5-H), 6,55 (d, J = 8,8 Hz, 2H, 2",6"-H), 6,54 (s, 1H, 8-H), 6,33 (s, 2H, 2',6'-H), 5,99 (ABq, J = 1,1, 8,2 Hz, 2H, OCH&sub2;O), 5,44 (s, 1H, austauschbar, 4'-OH), 4,78 (d, J = 3,3 Hz, 1H, 4-H), 4,62 (d, J = 4,5 Hz, 1H, 1-H), 4,40 (m, 2H, 4-H und 11-H), 4,37 (q, J = 7,1 Hz, 2H, CO&sub2;&sub2;CH&sub3;), 4,32 (d, J = 7,1, 1H, austauschbar, NH), 3,92 (t, J = 7,5 Hz, 1H, 11-H), 3,80 (s, 6H, 3',5'-OCH&sub3;), 3,10 (dd, 1H, 2-H), 3,08 (m, 1H, 3-H), 1,38 (t, J = 7,1 Hz, 3H, CO&sub2;CH&sub2;&sub3;).
Anal. (C&sub3;&sub0;H&sub2;&sub9;NO&sub9;), C.H.N.

BEISPIEL 23

4'-Demethyl-4β-[4"-morpholinoanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin.

Kristalle aus Ethanol; Smp. 235-237º, [α]²&sup5;D-129º (C = 1, CHCl&sub3;), IR (KBr) 3500 (OH), 3300 (NH), 2880 (aliphatische C-H), 1755 (Lacton), 1620, 1510 und 1475 (aromatische C=C) cm&supmin;¹; ¹H-NMR CDCl&sub3; δ 6,86 (d, J = 9,5 Hz, 2H, 3",5"-H), 6,76 (s, 1H, 5-H), 6,52 (br, 3H, 8-H und 2",6"-H), 6,35 (s, 2H, 2',6'-H), 5,96 (d, J = 66,7 Hz, 2H, OCH&sub2;O), 5,44 (s, 1H, austauschbar, 4'-OH), 4,61 (m, 2H, 4-H und 1-H), 4,37 (t, J = 7,0 Hz, 1H, 11-H), 4,08 (t, J = 7,0 Hz, 1H, 11-H), 3,82 (br, 4H), 3,80 (s, 6H, 3',5'-OCH&sub3;), 3,22-2,90 (m, 2H, 2-H, 3-H und 4H
Anal. (C&sub3;&sub1;H&sub3;&sub2;N&sub2;O&sub8;), C.H.N.

BEISPIEL 24

4'-Demethyl-4β-[3",4"-(methylendioxy)anilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin.

Kristalle aus Methanol; Smp. 247-2497º, [α]²&sup5;D-126º (C = 1, CHCl&sub3;), IR (KBr) 3500 (OH), 3340 (NH), 2900 (aliphatische C-H), 1752 (Lacton), 1605, 1496 und 1475 (aromatische C=C) cm&supmin;¹; ¹H-NMR CDCl&sub3; δ 6,76 (s, 1H, 5-H), 6,68 (d, J = 8,1 Hz, 1H, 5"-H), 6,52 (s, 1H, 8-H), 6,33 (s, 2H, 2',6'-H), 6,17 (d, J = 1,2 Hz, 1H, 2"-H), 5,96 (q, J = 1,2, 8,1 Hz, 3H, 6"H und OCH&sub2;O), 5,90 (s, 2H, 7"-H), 5,43 (s, 1H austauschbar, 4'-OH), 4,59 (d, J = 4,9 Hz, 1H, 4-H), 4,56 (d, J = 3,9 Hz, 1H, 1-H), 4,37 (t, 1H, 11-H), 4,05 (t, 1H, 11-H), 3,79 (s, 6H, 3',5'-OCH&sub3;), 3,15 (dd, 1H, 2-H), 2,95 (m, 1H, 3-H).
Anal. (C&sub2;&sub8;H&sub2;&sub5;NO&sub9;), C.H.N.

BEISPIEL 25

4'-Demethyl-4β-[3",4"-dimethoxyanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin.

Kristalle aus Methanol; Smp. 233-234º (Zers.), [α]²&sup5;D-118º (C = 1, CHCl&sub3;), IR (KBr) 3500 (OH), 3360 (NH), 2920 (aliphatische C-H), 1770 (Lacton), 1605 und 1505 (aromatische C=C) cm&supmin;¹; ¹H-NMR CDCl&sub3; δ 6,78 (s, 1H, 5-H), 6,75 (d, J = 8,5 Hz, 1H, 5"-H), 6,53 (s, 1H, 8-H), 6,34 (s, 2H, 2',6'-H), 6,17 (s, 1H, 2"-H), 6,05 (d, J = 8,5 Hz, 1H, 6"-H), 5,96 (d, J = 2,4 Hz, 2H, OCH&sub2;O), 5,43 (s, austauschbar, 4'-OH), 4,60 (d, 2H, 4-H und 1-H), 4,38 (t, J = 8,3 Hz, 1H, 11-H), 4,05 (t, J = 8,3 Hz, 1, 11-H), 3,83 (s, 3H, 4"-OCH&sub3;), 3,81 (s, 3H, 3"-OCH&sub3;), 3,80 (s, 6H, 3',5'- OCH&sub3;), 3,18 (dd, J = 5,0, 14,0 Hz, 1H, 2-H), 2,96 (m, 1H, 3-H).
Anal. (C&sub2;&sub8;H&sub2;&sub5;NO&sub9;), C. H, N.

BEISPIEL 26

4'-Demethyl-4β-[3"-fluoranilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin.

Kristalle aus Methanol; Smp. 201-203º (Zers.), [α]²&sup5;D-132º (c = 1, CHCl&sub3;), IR (KBr) 3500 (OH), 3360 (NH), 2900 (aliphatische C-H), 1750 (Lacton), 1605, 1500 und 1475 (aromatische C=C) cm&supmin;¹; ¹H-NMR CDCl&sub3; δ 7,15 (t, J = 7,4 Hz, 1H, 5"-H), 6,76 (s, 1H, 5-H), 6,53 (s, 1H, 8-H), 6,49 (dd, H = 1,2, 7,4 Hz, 1H, 4"-H), 6,40 (s, 2H, 2',6'-H), 6,32 (d, J = 1,2 Hz, 1H, 2"-H), 6,24 (dd, J = 1,2, 7,4 Hz, 1H, 6"H), 5,97 (ABq, J = 1,2, 7,9 Hz, 2H OCH&sub2;O), 5,44 (s, 1H, austauschbar, 4'-OH), 4,67 (s, 1H, austauschbar, NH), 4,63 (d, J = 4,0 Hz, 1H, 4-H), 4,59 (d, J = 5,0 Hz, 1H, 1H), 4,39 (t, J = 8,5 Hz, 1H, 11-H), 3,98 (t, J = 8,5 Hz, 1H, 11-H), 3,79 (s, 6H, 3',5'-OCH&sub3;), 3,11 (dd, J = 5,0, 14,0 Hz, 1H, 2- H), 3,00 (m, 1H, 3-H).
Anal. Berechnet für C&sub2;&sub7;H&sub2;&sub4;FNO&sub7;: C, 65,71; H, 4,90; N, 2,84.
Gefunden: C, 66,81; H, 4,94; N, 2,779.

BEISPIEL 27

4'-Demethyl-4β-[2"-fluoranilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin.

Kristalle aus Methanol; Smp. 197-198º [α]²&sup5;D-128º (c = 0,25, CHCl&sub3;), IR (KBr) 3500 (OH), 4480 (NH), 2890 (aliphatische C-H), 1755 (Lacton), 1610, 1505 und (aromatische C=C) cm&supmin;¹; ¹H-NMR CDCl&sub3; δ 7,04 (m, 2H, 3", 6"-H), 6,76 (s, 1H, 5H), 6,72 (m, 1H, 5"-H), 6,60 (t, J = 7,2 Hz, 1H, 4"-H), 6,54 (s, 1H, 8-H), 6,34 (s, 2H, 2',6'-H), 5,97 (d, J = 7,3 Hz, 2H, OCH&sub3;O), 5,46 (s, 1H, austauschbar, 4'-OH), 4,69 (d, J = 4,2 Hz, 1H, 4-H), 4,62 (d, J = 4,9 Hz, 1H, 1-H), 4,38 (t, J = 8,2 Hz, 1H, 11-H), 4,10 (t, 1H, austauschbar, NH), 3,82 (t, J = 8,2 Hz, 1H, 11-H), 3,79 (s, 6H, 3',5'-OCH&sub3;), 3,15 (dd, J = 5,0, 14,0 Hz, 1H, 2-H), 3,00 (m, 1H, 3-H).
Anal. Berechnet für C&sub2;&sub7;H&sub2;&sub4;FNO&sub7;: C, 65,71; H, 4,90; N, 2,84.
Gefunden: C, 66,80; H, 4,95; N, 2,84.

BEISPIEL 28

4'-Demethyl-4β-[4"-fluoranilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin.

Kristalle aus Ethanol; Smp. 176-177ºC [α]²&sup5;D-100º (c = 0,8, CHCl&sub3;), IR (KBr) 3540 (OH), 3420 (NH), 2900 (aliphatische C-H), 1740 (Lacton), 1610, 1500, 1480 und (aromatische C=C) cm&supmin;¹; ¹H-NMR CDCl&sub3; δ 6,94 (t, J = 6,7, 2-H, 3",5"-H), 6,75 (s, 1H, 5-H), 6,53 (s, 1H, 8H), 6,49 (q, J = 2,2, 6,2 Hz, 2H, 2",6"-H), 6,33 (s, 2H, 2',6'-H), 5,96 (ABq, J = 1,2, 7,5 Hz, 2H OCH&sub2;O), 5,43 (s, 1H, austauschbar, 4'-OH), 4,60 (d, 2H, 4-H und 1-H), 4,37 (t, J = 7,5 Hz, 1H, 11-H), 3,99 (t, J = 7,5 Hz, 1H, 11- H), 3,79 (s, 6H, 3',5'-OCH&sub3;), 3,73 (br, 1H, austauschbar, NH), 3,13 (t, J = 5,0, 14,0 Hz, 1H, 2-H), 3,00 (m, 1H, 3-H).
Anal. C&sub2;&sub7;H&sub2;&sub4;FNO&sub7;, C.H.N.

BEISPIEL 29

4'-Demethyl-4β-[3",5"-difluoranilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin.

Kristalle aus Ethanol; Smp. 180-183ºC. [α]²&sup5;D-132º (c = 0,33 CHCl&sub3;), IR (KBr) 3500 (OH), 3370 (NH), 2890 (aliphatische C-H), 1750 (Lacton), 1620, 1590, 1500 und 1475 (aromatische C=C) cm&supmin;¹; ¹H-NMR CDCl&sub3; δ 6,75 (s, 1H, 5-H), 6,54 (s, 1H, 8-H), 6,32 (s, 2H, 2',6'-H), 6,23 (m, 1H, 4"-H), 6,07 (m, 2H, 2",6"-H), 5,98 (ABq, J = 1,3, 9,0 Hz, 2H, OCH&sub2;O), 5,45 (s, 1H, austauschbar, 4'-OH), 4,61 (m, 2H, 4-H und 1-H), 4,39 (t, J = 8,5 Hz, 1H, 11-H), 4,10 (d, J = 6,1 Hz, 1H, 1H, austauschbar, NH), 3,85 (t, J = 8,5 Hz, 1H, 11-H), 3,81 (s, 6H, 3',5'-OCH&sub3;), 3,08 (dd, J = 4,8, 14,1 Hz, 1H, 2-H), 3,02 (m, 1H, 3-H).
Anal. (C&sub2;&sub7;H&sub2;&sub3;NH&sub2;O&sub9;). C.H.N.

BEISPIEL 30

4'-Demethyl-4β-[3"-pyridylamino]-4-desoxypodophyllotoxin.

Kristalle aus Ethanol; Smp. 179-181ºC (Zers.) [α]²&sup5;D-99º (c = 0,33 CHCl&sub3;), IR (KBr) 3500 (OH), 3350 (NH), 2900 (aliphatische C-H), 1765 (Lacton), 1575, 1500 und 1470 (aromatische C=C=N) cm&supmin;¹; ¹H-NMR CDCl&sub3; δ 8,08 (d, J = 5,5 Hz, 1H, 6"-H), 8,02 (br, 1H, 2"-H), 7,16 (m, 1H, 5"-H), 6,85 (dd, 1H, 4"-H), 6,75 (s, 1H, 5-H), 6,55 (s, 1H, 8-H), 6,32 (s, 2H, 2',6'H), 5,98 (ABq, J = 1,3, 7,3 Hz, 2H, OCH&sub2;O), 4,65 (d, J = 4,9 Hz, 1H, 4-H), 4,60 (m, 1H, 1-H), 4,20 (t, J = 8,2, 1H, 11-H), 3,90 (m, 2H, 11-H und NH), 3,80 (s, 6H, 3',5'-OCH&sub3;), 3,18 (dd, J = 5,0, 14,1 Hz, 1H, 2-H), 3,03 (m, 1H, 3-H).
Anal. (C&sub2;&sub8;N&sub2;&sub4;N&sub2;O&sub7;) 1/2 H&sub2;O, C.H.N.

BEISPIEL 31

4'-Demethyl-4β-[2"-pyridylamino]-4-desoxypodophyllotoxin

Kristalle aus Ethanol; Smp. 215-218ºC (Zers.) [α]²&sup5;D-82º (C = 0,33, CHCl&sub3;), IR (KBr) 3500 (OH), 3360 (NH), 2950 (aliphatische C-H), 1760 (Lacton), 1690, 1645, 1600 und 1460 (aromatische C=C=N) cm&supmin;¹; ¹H-NMR CDCl&sub3; δ 8,11 (d, 1H, 4"-H), 7,45 (m, 1H, 4"-H), 6,81 (s, 1H, 5-H), 6,67 (m, 1H, 5"-H), 6,55 (s, 1H, 8-H), 6,45 (d, 1H, 3"-H), 6,34 (s, 2H, 2',6'-H), 5,97 (ABq, J = 1,3, 6,7 Hz, 2H, OCH&sub2;O), 5,43 (br, 1H austauschbar, 4'-OH), 5,35 (m, 1H, austauschbar, NH), 4,60 (d, J = 4,2 Hz, 1H, 4-H), 4,24 (m, 2H, 1-H und 11NH), 3,85 (m, 1H, 11H), 3,78 (s, 6H, 3',5'-OCH&sub3;), 3,05 (m, 2H, 2-H und 3-H).
Anal. (C&sub2;&sub6;H&sub2;&sub4;N&sub2;O&sub7;), 1/2 H&sub2;O, C.H.N.

BEISPIEL 32

4'-Demethyl-4β-[3"-chinolinylamino]-4-desoxypodophyllotoxin.

Kristalle aus Ethanol-Ether; Smp. 243-246ºC (Zers.) [α]²&sup5;-179º (C = 0,5, CHCl&sub3;), IR (KBr) 3460 (OH), 3380 (NH), 2900 (aliphatische C-H), 1775 (Lacton), 1605, 1510 und 1480 (aromatische C=C=N) cm&supmin;¹; ¹H-NMR CDCl&sub3; δ 8,46 (d, J = 2,9 Hz, 2"-H), 7,97 (m, 1H-, 4"-H), 7,65 (m, 1H, 7"-H), 7,48 (m, 2H, 5",6"-H), 6,99 (d, J = 2,9 Hz, 8'-H), 6,76 (s, 1H, 5-H), 6,57 (s, 1H, 8-H), 6,35 (s, 2H, 2',6'-H), 5,99 (ABq, J = 1,1, 8,0 Hz, 2H, OCH&sub2;O), 5,48 (s, 1H austauschbar, 4'-OH), 4,78 (d, J = 4,8 Hz, 1H, 1-H), 4,45 (t, 1H, 11-H), 4,23 (d, 1H, austauschbar, NH), 3,99 (t, 1H, 11-H), 3,81 (s, 6H, 3',5'-OCH&sub3;), 3,15 (m, 2H, 2-H und 3-H).
Anal. (C&sub3;&sub0;H&sub2;&sub6;N&sub2;O&sub7;) 1/2 H&sub2;O, C.H.N.

BEISPIEL 33

4'-Demethyl-4β-[3"-hydroxyanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin.

Amorphes Pulver aus Ether: Smp. 163-166ºC IR (KBr) 3480 (OH), 3380 (NH), 2900 (aliphatische CH), 1750 (Lacton), 1590, 1475 (aromatische C=C) cm; ¹H-NMR CDCl&sub3; δ 7,05 (t, J = 8 Hz, 1H, 5"-H), 6,78 (s, 1H, 5-H), 6,52 (s, 1H, 8-H), 6,33 (s, 2H, 2',6'-H), 6,24 (dd, J = 2,2, 8 Hz, 1H, 4"-H), 6,15 (dd, J = 1,7, 8 Hz, 1H, 6"-H), 6,07 (t, J = 2,2 Hz, 1H, 2"-H), 5,97 (d, J = 4,4 Hz, 2H, OCH&sub2;O), 5,43 (s, austauschbar), 4,82 (s, austauschbar), 4,65 (d, J = 3,9 Hz, 1H, 4-H), 4,58 (d, J = 4,8 Hz, 1H, 1-H), 4,37 (t, J = 8,7 Hz, 1H, 11-H), 4,0 (t, J = 8,7 Hz, 1H, 11-H), 3,79 (s, 6H, 3'5'-OCH&sub3;), 3,1 (dd, J = 4,8, 14,1 Hz, 1H, 2-H), 2,98 (m, 1H, 3-H), MS, m/z = 491 (m+).
Anal. Berechnet für C&sub2;&sub7;H&sub2;&sub5;NO&sub8; · H&sub2;O: C, 63,65; H, 5,30.
Gefunden: C, 63,35; H, 5,44.

BEISPIEL 34

4'-Demethyl-4β-[2"-hydroxyanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin.

Amorphe Kristalle aus Ether: Smp. 175ºC IR (KBr) 3360 (OH, NH), 2900 (aliphatische C-H), 1750 (Lacton), 1600, 1475 (aromatische C=C) cm&supmin;¹; ¹H-NMR CDCl&sub3; δ 6,88 (t, J = 7,4 Hz, 1H, 4"-H), 6,78 (s, 1H, 5-H), 6,65 (m, 2H, 3",6"-H), 6, 5 (m, 2H, 8-H, 5"-H), 6,35 (s, 2H, 2',6'-H), 5,96 (ABq, J = 1,2 Hz, 3,5 Hz, 2H, OCH&sub2;O), 5,44 (s, austauschbar), 5,10 (s, austauschbar), 4,67 (d, J = 4 Hz, 1H, 4-H), 4,61 (d, J = 4,8 Hz, 1H, 1-H), 4,38 (t, J = 8,5 Hz, 1H, 11-H), 3,98 (t, J = 8,5 Hz, 1H, 11-H), 3,79 (s, 6H, 3',5'-OCH&sub3;), 3,24 (dd, J = 4,8, 14 Hz, 1H, 2-H), 3,02 (m, 1H, 3-H), MS, m/z = 491 (m+).
Anal. Berechnet für C&sub2;&sub7;H&sub2;&sub9;NO&sub8;: C, 65,99; H, 5,09.
Gefunden: C, 65,85; H, 5,18.

BEISPIEL 35

4'-Demethyl-4β-[4"-hydroxyanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin.

Amorphes Pulver aus Ether: Smp. 162-165ºC IR (KBr) 3525 (OH), 3345 (NH), 3010 (aromatische CH), 2900 (aliphatische CH), 1745 (Lacton), 1600, 1475 (aromatische C=C) cm&supmin;¹; ¹H-NMR (DMSO d&sub6;, D&sub2;O-Austausch) δ 6,69 (s, 1H, 5-H), 6,55 (s, 4H, 2",3",5",6"-H), 6,48 (s, 1H, 8-H), 6,23 (s, 2H, 2'6'-H), 5,94 (d, J = 9,7 Hz, 2H, O-CH&sub2;-O), 4,68 (d, J = 4,3 Hz, 1H, 4-H), 4,46 (d, J = 5,4 Hz, 1H, 1-H), 4,29 (t, J = 7,6, 1H, 11-H), 3,76 (t, J = 7,6 Hz, 1H, 11-H), 3,61 (s, 6H, 3',5'-OCH&sub3;), 3,28 (dd, J = 5,4, 15,8 Hz, 1H, 2-H), 2,95 (m, 1H, 3-H).

BEISPIEL 36

4'-Demethyl-4β-[2"-chloranilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin.

Kristalle aus Ethylacetat/Ether: Smp. 253-255ºC [α]²&sup5;D-90º (c = 1,0, CHCl&sub3;), IR (KBr) 3500 (OH), 3450 (NH), 2895 (aliphatische CH), 1751 (Lacton), 1590, 1500, 1472 (aromatische C=C) cm&supmin;¹; ¹H-NMR (CDCl&sub3;) 7,31 (dd, J = 1,4, 7,9 Hz, 1H, 3"-H), 7,18 (t, J = 8,8 Hz, 1H, 5"-H), 6,76 (s, 1H, 5-H), 6,73 (t, J = 9,0 Hz, 4"-H), 6,58 (d, J = 8,2 Hz, 1H, 6"-H), 6,54 (s, 1H, 8-H), 6,35 (s, 2H, 2'-,6'-H), 5,98 (ABq, J = 1,2, 4,2 Hz, 2H, OCOCH&sub2;O), 5,44 (s, 1H, austauschbar, 4'-OH), 4,73 (t, J = 4,9 Hz, 1H, 4-H), 4,64 (d, J = 4,9 Hz, 1H, 1-H), 4,49 (d, J = 6,0 Hz, 1H, austauschbar, NH), 4,36 (t, J = 8,3 Hz, 1H, 11-H), 3,91 (t, J = 8,3 Hz, 1H, 11-H), 3,80 (s, 6H, 3',5'-OCH&sub3;), 3,17 (dd, J = 4,8, 14,0 Hz, 1H, 2-H), 3,04 (m, 1H, 3-H).
Anal. (C&sub2;&sub7;H&sub2;&sub4;CINO&sub7;), C.H.N.

BEISPIEL 37

4'-Demethyl-4β-[3"-chloranilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin.

Kristalle aus Ethylacetat/Ether: Smp. 174-176ºC [α]²&sup5;D-112º (C = 1,0, CHCl&sub3;), IR (KBr) 3500 (OH), 3360 (NH), 2920 (aliphatische CH), 1752 (Lacton), 1580, und 1452 (aromatische C=C) cm&supmin;¹; ¹H-NMR (CDCl&sub3;) 7,12 (t, J = 8,1 Hz, 1H, 5"-H), 6,76 (s, 1H, 5-H), 6,74 (dd, J = 1,0, 8,1 Hz, 1H, 4"-H), 6,53 (br, 2H, 8-H und 2"-H), 6,42 (dd, J = 1,6, 6,5 Hz, 1H, 6"-H), 6,33 (s, 2H, 2',6'-H), 5,97 (Abq, J = 1,0, 8,7 Hz, 2H OCH&sub2;O), 5,43 (s, 1H, austauschbar, 4'-OH), 4,66 (br, 1H, 4-H), 4,59 (d, J = 4,8 Hz, 1H, 1-H), 4,39 (t, J = 7,7 Hz, 1H, 11-H), 3,99 (t, J = 7,7 Hz, 1H, 11- H), 3,96 (br, 1H, austauschbar, NH), 3,79 (s, 6H, 3',5'-OCH&sub3;), 3,11 (dd, J = 5,8, 14,0 Hz, H, 2-H), 3,01 (m, 1H, 3-H),
Anal. (C&sub2;&sub7;H&sub2;&sub4;CINO&sub7;) C.H.N.

BEISPIEL 38

4'-Demethyl-4β-[4"-chloranilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin.

Kristalle aus Ethyleacetat/Ether: Smp. 253-255ºC [α]²&sup5;D-125º (c = 0,75, CHCl&sub3;), IR (KBr) 3500 (OH), 3360 (NH), 2920 (aliphatische CH), 1758 (Lacton), 1605, 1590 und 1475 (aromatische C=C) cm&supmin;¹; ¹H-NMR (CDCl&sub3;) δ 7,17 (d, J = 8,7 Hz, 2H, 3",5"- H), 6,74 (s, 1H, 5-H), 6,53 (s, 1H, 8-H), 6,48 (d, J = 8,7 Hz, 2H, 2",6"-H), 6,32 (s, 2',6'-H), 5,96 (ABq, J = 1,0, 6,8 Hz, 2H OCH&sub2;O), 5,43 (s, 1H, austauschbar, 4'-OH), 4,63 (d, J = 4,2 Hz, 1H, 4-H), 4,59 (d, J = 4,9 Hz, 1H, 1-H), 4,38 (t, J = 8,0 Hz, 1H, 11-H), 3,96 (t, J = 8,0 Hz, 1H, 11-H), 3,79 (s, 6H, 3',5'-OCH&sub3;), 3,12 (dd, J = 4,9, 14,1 Hz, H, 2-H), 2,99 (m, 1H, 3-H).
Anal. (C&sub2;&sub7;H&sub2;&sub4;CINO&sub7;) C.H.N.

BEISPIEL 39

4'-Demethyl-4β-[3"-bromanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin.

Kristalle aus Methanol/Ether: Smp. 177-179ºC [α]²&sup5;D-105º (c = 1, CHCl&sub3;), IR (KBr) 3450 (OH), 3340 (NH), 2900 (aliphatische CH), 1740 (Lacton), 1590, 1500 und 1475 (aromatische C=C) cm&supmin;¹; ¹H-NMR (CDCl&sub3;) δ 7,07 (t, J = 8,0 Hz, 1H, 5"-H), 6,90 (dd, J = 0,9, 7,9 Hz, 1H, 4"-H), 6,75 (s, 1H, 5-H), 6,70 (br, 1H, 2"-H), 6,53 (s, 1H 8-H), 6,47 (dd, J = 1,7, 8,3 Hz, 1H, 6"-H), 6,33 (s, 2H, 2',6'-H), 5,97 (dd, J = 1,2, 9,3 Hz, 2H, OCH&sub3;O), 5,43 (s, 1H, austauschbar, 4'-OH), 4,65 (d, J = 4,2 Hz, 1H, 4-H), 4,60 (d, J = 4,8 Hz, 1H, 1-H), 4,39 (t, J = 7,3 Hz, 1H, 11-H), 3,96 (t, J = 7,3 Hz, 1H, 11-H), 3,90 (d, J = 6,2 Hz, 1H, austauschbar, NH), 3,80 (s, 6H, 3',5'-OCH&sub3;), 3,10 (dd, J = 4,9, 14,0 Hz, 1H, 2-H), 3,02 (m, 1H, 3-H).
Anal. (C&sub2;&sub7;H&sub2;&sub4;BrNO&sub7;) C.H.N.

BEISPIEL 40

4'-Demethyl-4β-[4"-bromanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin.

Kristalle aus Ethylacetat/Ethanol: Smp. 227-230ºC [α]²&sup5;D-110º (c = 0,5, CHCl&sub3;), IR (KBr) 3500 (OH), 3330 (NH), 2900 (aliphatische CH), 1755 (Lacton), 1605, 1590 und 1475 (aromatische C=C) cm&supmin;¹; ¹H-NMR (CDCl&sub3;) δ 7,30 (d, J = 8,9 Hz, 2H, 3",5"- H), 6,75 (s, 1H, 5-H), 6,53 (s, 1H, 8-H), 6,44 (d, J = 8,9 Hz, 2H, 2",6"-H), 6,32 (s, 2H, 2',6'-H), 5,98 (ABq, J = 1,3, 8,3, Hz, 2H, OCH&sub2;O), 5,42 (s, 1H, austauschbar, 4'-OH), 4,62 (m, 2H, 4-H und 1-H), 4,36 (t, J = 8,5 Hz, 1H, 11-H), 3,95 (t, 8,5 Hz, 11-H), 3,86 (d, J = 7,8, 1H, austauschbar, NH), 3,79 (s, 6H, 3',5'-OCH&sub3;), 3,11 (dd, J = 4,8, 14,1 Hz, 1H, 2-H), 3,00 (m 1H, 3-H).
Anal. (C&sub2;&sub7;H&sub2;&sub4;BrNO&sub7;) C.H.N.

BEISPIEL 41

4'-Demethyl-4β-[4"-iodanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin.

Kristalle aus Ethanol: Smp. 198-200ºC (Zers.); [α]²&sup5;D-111º (c = 0,5, CHCl&sub3;), IR (KBr) 3450 (OH), 3420 (NH), 2900 (aliphatische CH), 1770 (Lacton), 1610, 1585 und 1480 (aromatische C=C) cm&supmin;¹; ¹H-NMR (CDCl&sub3;) δ 7,46 (d, J = 8,8 Hz, 2H, 2",6"- H), 6,32 (s, 2H, 2',6'-H), 5,59 (ABq, J = 1,1, 8,9 Hz, 2H, OCH&sub2;O), 5,44 (s, 1H, austauschbar, 4'-OH), 4,62 (m, 1H, 4-H), 4,58 (d, J = 4,9 Hz, 1H, 1-H), 4,34 (t, J = 8,5 Hz, 1H, 11-H), 3,94 (m, 2H, 11-H und NH), 3,78 (s, 6H, 3',5'-OCH&sub3;), 3,09 (dd, J = 4,9, 14,1 Hz, 1H 2-H), 2,99 (m 1H, 3-H).
Anal. (C&sub2;&sub7;H&sub2;&sub4;BrNO&sub7;) C.H.N.

BEISPIELE 42-44

(Schema IX)

Podophyllotoxin (500 mg, 1,2 mmol) wurde in trockenem Dichlormethan 10 ml) gelöst und auf 0ºC gekühlt. Bromwasserstoffgas wurde 45 Minuten in die Lösung eingeleitet, wonach das Lösungsmittel im Vakuum verdampft wurde und wasserfreies Tetrahydrofuran ml), wasserfreies Bariumcarbonat (474 mg, 2,4 mmol) und das geeignete Hydroxyanilin (142 mg, 1,3 mmol) zugegeben wurden. Die Mischung stand über Nacht bei Raumtemperatur und wurde dann filtriert und eingeengt. Das Rohprodukt wurde unter Verwendung von Säulenchromatographie gereinigt (Kieselgel 45 g mit Dichlormethan-aceton-ethylacetat 100 : 5 : 5 als Eluens). Die in den Beispielen erhaltenen Produkte(42-44) hatten die nachfolgend aufgeführten Eigenschaften.

BEISPIEL 42

4β-[2"-Hydroxyanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin.

Amorphe Kristalle aus Ether; Smp. 145-148ºC IR (KBr) 3480 (OH), 3410 (NH), 2900 (aliphatische CH), 1760 (Lacton), 1580, 1475 (aromatische C=C) cm&supmin;¹; ¹H-NMR (CDCl&sub3;) δ 6,90 (t, J = 6,6 Hz, 1H, 4"-H), 6,78 (s, 1H, 5-H), 6,65 (m, 2H, 3",6"- H), 6,53 (m, 2H, 8-H, 5"-H), 6,34 (s, 2H, 2',6'-H), 5,96 (ABq, J = 1,0, 3,5 Hz, 2H, OCH&sub2;O), 5,02 (s, 1H, austauschbar, 2"-OH), 4,68 (m, 1H, 4-H), 4,62 (d, J = 4,9 Hz, 1H, 1-H), 4,38 (t, J = 8,6 Hz, 1H, 11-H), 4,33 (m, 1H, austauschbar, NH), 4,00 (t, J = 8,6 Hz, 1H, 11H), 3,82 (s, 3H, 4'-OCH&sub3;), 3,76 (s, 6H, 3',5'-OCH&sub3;), 3,25 (dd, J = 5,1, 14,0 Hz, 1H, 2-H), 3,05 (m, 1H, 3-H); MS m/z = 505 (m+).
Anal. (C&sub2;&sub8;H&sub2;&sub7;NO&sub8; 3/2 H&sub2;O) C. H.

BEISPIEL 43

4β-[3"-Hydroxyanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin.

Amorphes Pulver aus Ether; Smp. 148-150ºC IR (KBr) 3370 (OH, NH), 2900 (aliphatische CH), 1760 (Lacton), 1585, 1475 (aromatische C=C) cm&supmin;¹; ¹H-NMR (CDCl&sub3;) δ 7,05 (t, J = 8,0 Hz, 1H, 5"-H), 6,77 (s, 1H, 5H), 6,52 (s, 1H, 8-H), 6,32 (s, 2H, 2',6'-H), 6,25 (dd, J = 2,2, 8,0 Hz, 1H, 4"-H), 6,14 (dd, J = 2,2, 8,0 Hz, 1H, 6"-H); 6,05 (t = 2,2 Hz, 1H, 2"-H), 5,96 (ABq, J = 1,3, 3,8 Hz, 2H OCH&sub2;O), 4,64 (d, J = 3,9, 1H, 4-H), 4,49 (d, J = 5,0 Hz, 1H, 1-H), 4,4 (t, J = 8,7 Hz, 1H, 11-H), 4,03 (t, J = 8,7 Hz, 1H, 11-H), 3,81 (s, 3H, 4'OCH&sub3;), 3,76 (s, 6H, 3',5'-OCH&sub3;), 3,18 (s, 6H, 3',5'-OCH&sub3;), 3,18 (dd, J = 5,0 Hz, 14,0 Hz, 1H, 2-H), 3,02 (m, 1H, 3-H); MS, m/z = 505 (m+).
Anal. (C&sub2;&sub8;H&sub2;&sub7;NO&sub8; · H&sub2;O) C. H.

BEISPIEL 44

4β-[4"-Hydroxyanilinyl]-4-desoxypodophyllotoxin.

Kristalle aus Chloroform; Smp. 145-150ºC IR (KBr) 3310 (OH, NH), 3010 (aromatische CH), 2900 (aliphatische CH), 1730 (Lacton), 1575, 1475 (aromatische C=H) cm&supmin;¹; ¹H- NMR (CDCl&sub3;) D&sub2;O-Austausch) δ 6,75 (d, J = 8,3 Hz, 3H, 5-H, 3",5"- H), 6,53 (s, 1H, 8H), 6,45 (d, J = 8,3 Hz, 2H, 2",6"-H), 6,23 (s, 2H, 2',6'-H), 5,95 (ABq, J = 1,0, 4,0 Hz, 2H OCH&sub2;O), 4,60 (d, J = 4,2 Hz, 1H, 4-H), 4,57 (d, J = 4,6 Hz, 1H, 1-H), 4,38 (t, J = 6,0 Hz, 1H, 11-H), 4,05 (t, J = 6,0 Hz, 1H, 11H), 3,83 (s, 3H, 4-OCH&sub3;), 3,75 (s, 6H, 3',5'-OCH&sub3;), 3,18 (dd, J = 4,6 Hz, 14,0 Hz, 1H, 2-H), 3,0 (m, 1H, 3-H).
Anal. (C&sub2;&sub8;H&sub2;&sub7;NO&sub8; 1/2 H&sub2;O) C. H.

Isolierung humaner DNA-Topoisomerase-II.

Humane DNA-Topoisomerase-II wurde aus peripheren Blastenzellen eines Patienten mit akuter Leukämie isoliert. Das Isolierungsverfahren ist in Thurston, L., Imakura, Y., Harung, M., Li, Z. C., Liu, S. Y. und Lee, K. H., J. Med. Chem., 31, COMPLETE (1988) beschrieben und ist eine teilweise Kombination der in Goto, T., Laiapia, P. und Wang, J., J. Biol. Chem. 259, 10422 (1984) und Halligan, B., Edwards, K. und Liu, L., J. Biol. Chem., 260, 2475 (1985) beschriebenen Verfahren, auf die hier besonders Bezug genommen wird.

Vorbereitung der Wirkstoffe.

Die Wirkstoffe wurden in Me&sub2;SO in einer Konzentration von 20 mM als Stammlösung gelöst und vor deren Verwendung mit Wasser auf die gewünschte Konzentration jedes Wirkstoffs verdünnt.

DNA-Topoisomerase-II-Assay.

Die P4-Entknotungsreaktion war eine Modifikation des von Hseih, T., J. Biol. Chem., 258, 8413 (1985) beschriebenen Verfahrens, auf das hier besonders Bezug genommen wird.
Die Reaktionsmischung (20 ul), die 50 mM HEPES, pH 7,0, 50 mM KCl, 100 mM NaCl, 1,0 mM EDTA, 10 mM MgCl&sub2;, 1,0 mM ATP, 50 ug/ml Rinderserumalbumin, 0,4 ug P4-verknotete DNA sowie Enzym enthielt, wurde mit oder ohne Wirkstoffe inkubiert.
Die Reaktionsmischung wurde 30 Minuten bei 37ºC inkubiert und durch Zugabe von 5,0 ul Stoplösung (2% Natriumdodecylsulfat, 20% Glycerin, 0,05% Bromphenolblau) beendet. Diese Lösungen wurden auf ein 1%iges Agarosegel geladen und über Nacht bei 55 V mit einem Elektrophoresepuffer elektrophorisiert, der 90 mM Tris-Borsäure, pH 8,3 und 2,5 mM EDTA enthielt. Nach Beendigung wurde das Gel in 0,5 ug/ml Ethidiumbromid gefärbt. Anschließend wurde ein Photo der mit durch eine UV-Lampe mit langer Wellenlänge induzierten Fluoreszenz visualisierten DNA-Banden aufgenommen. Die in Tabelle 1 aufgeführten Daten betreffen eine Wirkstoffkonzentration von 100 uM.

K-SDS-Ausfällungs-Assay für Protein-DNA-Komplexe.

Die intrazelluläre Bildung kovalenter Topoisomerase-II-DNS-Komplexe wurde unter Verwendung des Kalium-SDS-Präzipitations-Assays quantifiziert, ein Verfahren, das nach dem in Rowe, T. C., Chen, G. L., Hsiang, Y. H. und Liu, L., Cancer Res., 64, 2021 (1986) (nachfolgende Rowe et al.) beschriebenen Verfahren angepaßt ist, auf die hier besonders Bezug genommen wird. KB-ATCC- Zellen wurden mit 0,05 mCi/ml ¹&sup4;C-Thymidin (spezifische Aktivität 50,5 mCi/mmol) 18 Stunden vormarkiert. Eine Endkonzentration von 5 · 10&sup5; Zellen/Probe wurden mit 10 uM des Wirkstoffs bei 37ºC 1 Stunde behandelt und gemäß dem durch Rowe et al. beschriebenen Verfahren weiterbehandelt, um die Mengen der Protein-verknüpften DNA zu bestimmen.
Den Fachleuten wird klar, daß verschiedene Modifikationen und Variationen bei den erfindungsgemäßen Verfahren und Produkten stattfinden können. Somit ist beabsichtigt, daß die vorliegende Erfindung die erfindungsgemäßen Modifikationen und Variationen umfaßt, vorausgesetzt, daß sie in den Schutzbereich der nachfolgenden Ansprüche fallen. Tabelle III Biologische Untersuchung von 4-Demethyl-4β(arylamino)-4-desoxypodophyllotoxin
a ID&sub5;&sub0; ist die Wirkstoffkonzentration, die 50% Verminderung der Zellzahlen nach 3 Tagen Inkubation hervorruft.
b Aktivitäten der zellulären Protein-DNA-Komplexbildung in KB-ATCC-Gewebe-Kulturzellen im Vergleich zu Etoposid.
c +, ++, +++, ++++ bezeichnen 0-24%, 25-49%, 50-74% bzw. ≥ 75% Inhibierung. Tabelle IV Biologische Untersuchung von 4β-(Arylamino)-4-desoxypodophyllotoxinen Schema I Schema III Schema IV Schema V Schema VI Schema VIII Schema IX

Claims

1. Verbindung der Formel:

in der R&sub1;

R&sub2; H oder Br,

R&sub3; H oder Br,

R&sub4; H oder Br,

R&sub5; H oder Br und

R&sub6; H oder -CH&sub3; ist.

2. Verbindung nach Anspruch 1, in der R&sub2; bis R&sub6; H sind.

3. Verbindung der Formel:

in der R&sub1;:

oder

ist.

4. Verbindung der Formel

in der R&sub1; ein Arylamin der Formel:

ist, in der R&sub7; H, OH, F, Cl, Br, CO&sub2;CH&sub3;, CO&sub2;C&sub2;H&sub5;, CN, NO&sub2;, NH&sub2;, N(CH&sub3;)&sub2;, OCH&sub3;, CH&sub2;OH, CH&sub3;, CF&sub3;, CH&sub2;CH&sub2;OH, COCH&sub3;, CH&sub2;NH&sub2;,

R&sub8; H, OH, F, Cl, Br, CO&sub2;CH&sub3;, CO&sub2;C&sub2;H&sub5;, CN, NO&sub2;, NH&sub2;, N(CH&sub3;)&sub2;, OCH&sub3;, CH&sub2;OH, CH&sub3;, CF&sub3;, CH&sub2;CH&sub2;OH, COCH&sub3;, CH&sub2;NH&sub2;, CHOHCH&sub3;, SCH&sub3;,

R&sub9; H, OH, F, Cl, Br, I, CHOCH&sub3;, CO&sub2;C&sub2;H&sub5;, CN, NO&sub2;, NH&sub2;, N(CH&sub3;)&sub2;, OCH&sub3;, CH&sub2;OH, CH&sub3;, CF&sub3;, CHZCH&sub2;OH, COCH&sub3;, CH&sub2;NH&sub2;, N(CH&sub2;CH&sub2;OH)&sub2;,

R&sub1;&sub0; H, F, Cl, OH, OCH&sub3;, CO&sub2;CH&sub3;, CO&sub2;C&sub2;H&sub5;, CH&sub3;, CF&sub3;, NO&sub2;, NH&sub2;, Cl und

R&sub1;&sub1; H, F, Cl, CH&sub3;, CF&sub3;, OH, OCH&sub3;, NO&sub2; ist oder

R&sub9; und R&sub1;&sub0; OCH&sub2;O oder OCH&sub2;CH&sub2;O sind.

5. Pharmazeutische Zusammensetzung, die eine Verbindung gemäß einem der vorhergehenden Ansprüche enthält.