CN103601732A - 具抗肿瘤活性的氮取代鬼臼类衍生物及其制备方法和用途 - Google Patents

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CN103601732A CN201310572211.8A CN201310572211A CN103601732A CN 103601732 A CN103601732 A CN 103601732A CN 201310572211 A CN201310572211 A CN 201310572211A CN 103601732 A CN103601732 A CN 103601732A
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汤亚杰
王槐
赵巍
李红梅
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Abstract

本发明公开了具抗肿瘤活性的氮取代鬼臼类衍生物及其制备方法和用途。本发明通过氮取代反应将2-氨基嘧啶、2-氨基吡啶、2-氨基-3-甲基吡啶、2-氨基-4-甲基吡啶、2-氨基-5-甲基吡啶、2-氨基-4，6-二甲基吡啶、3-氨基吡啶、3-氨基-4-甲基吡啶、5-氨基-2-甲基吡啶、3-氨基-2-氯吡啶或4-氨基-2-氯吡啶分别引入到鬼臼毒素类化合物活化的C环4位，得到具有优异抗肿瘤活性的式(Ⅴ)所示的氮取代鬼臼类衍生物。本发明氮取代鬼臼类衍生物通过多途径、多靶点作用于肿瘤细胞，其抗肿瘤活性较鬼臼毒素类化合物的抗肿瘤活性有显著提升。本发明化合物可制备成抗肿瘤药物，临床应用于抗肿瘤治疗。

Description

具抗肿瘤活性的氮取代鬼臼类衍生物及其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及鬼臼毒素类化合物类衍生物，尤其涉及鬼臼毒素类化合物的C环4位取代后所得到的氮取代鬼臼类衍生物及其制备方法，本发明还涉及所述氮取代鬼臼类衍生物在制备抗肿瘤药物中的用途，属于鬼臼毒素类化合物类衍生物的制备及应用领域。 
背景技术
鬼臼毒素类化合物是从鬼臼类植物中（例如：小檗科植物桃儿七、山荷叶、八角莲等）提取得到的具有独特抗肿瘤活性的天然活性先导化合物。但是，鬼臼毒素类化合物不同程度的存在着毒副作用大、生物利用度差等缺陷，严重限制了它们在抗肿瘤临床上的应用，有待改进。 
发明内容
本发明目的之一提供具有抗肿瘤活性的氮取代鬼臼类衍生物； 
本发明目的之二是提供一种制备或纯化所述氮取代鬼臼类衍生物的方法； 
本发明目的之三是将所述氮取代鬼臼类衍生物应用于制备成临床用抗肿瘤药物； 
本发明上述目的是通过以下技术方案来实现的： 
具有抗肿瘤活性的氮取代鬼臼类衍生物，其结构式为式(Ⅴ)所示： 
Figure BDA0000414629360000011
其中，R为氢或CH3； 
R1为嘧啶类衍生物或吡啶类衍生物； 
优选的，所述嘧啶类衍生物是
Figure BDA0000414629360000012
所述的吡啶类衍生物选自 
Figure BDA0000414629360000021
或
此外，式（Ⅴ）化合物的酸成盐也当然包括在本发明的保护范围之内，优选的，所述的酸成盐包括盐酸盐或磷酸盐等酸成盐。 
2-氨基嘧啶、2-氨基吡啶、3-氨基吡啶等是抗肿瘤药物的医药中间体，这些杂环类化合物含有氮这一类活性原子，这些活性原子有可能增强化合物与微管蛋白的结合能力，使其更好的作用于微管蛋白的活性位点从而使药物的抗肿瘤活性提高。本发明根据药物拼合原理，以这些化合物为母核的衍生物2-氨基嘧啶、2-氨基吡啶，3-氨基吡啶作为鬼臼毒素类化合物结构修饰的功能基团。为比较甲基作为吸电子基团和氯离子作为给电子基团对鬼臼毒素类化合物活性的影响，同时通过骨架变换的方式，本发明还选择了2-氨基-3-甲基吡啶、2-氨基-4-甲基吡啶、2-氨基-5-甲基吡啶、2-氨基-4，6-二甲基吡啶、3-氨基-4-甲基吡啶、5-氨基-2-甲基吡啶、3-氨基-2-氯吡啶和4-氨基-2-氯吡啶作为鬼臼毒素类化合物结构修饰的功能基团，并将这些功能模块引入到鬼臼毒素类化合物的C环4位，得到本发明式(Ⅴ)所示的化合物。 
本发明目的之二是提供一种制备上述式(Ⅴ)化合物的方法，该方法包括以下步骤：通过氮取代反应，将2-氨基嘧啶、2-氨基吡啶、2-氨基-3-甲基吡啶、2-氨基-4-甲基吡啶、2-氨基-5-甲基吡啶、2-氨基-4，6-二甲基吡啶、3-氨基吡啶、3-氨基-4-甲基吡啶、5-氨基-2-甲基吡啶、3-氨基-2-氯吡啶或4-氨基-2-氯吡啶引入到鬼臼毒素类化合物的C环4位，即得式(Ⅴ)化合物。 
所述的氮取代反应优选在以下条件下进行：（1）将鬼臼毒素类化合物的C环4位活化；（2）将C环4位活化后的鬼臼毒素类化合物溶于有机溶剂中，加入2-氨基嘧啶、2-氨基吡啶、2-氨基-3-甲基吡啶、2-氨基-4-甲基吡啶、2-氨基-5-甲基吡啶、2-氨基-4，6-二甲基吡啶、3-氨基吡啶、3-氨基-4-甲基吡啶、5-氨基-2-甲基吡啶、3-氨基-2-氯吡啶或4-氨基-2-氯吡啶，搅拌进行氮取代反应。 
其中，所述鬼臼毒素类化合物C环4位的活化方式可以采用溴化氢对鬼臼毒素类化合物C环4位进行活化；更优选的，所述的活化方式包括以下步骤：将鬼臼毒素类化合物干燥，在氮气保护下，加入溴化氢；冰浴条件下反应半小时。 
步骤（2）中所述的有机溶剂优选为二氯甲烷； 
为了达到更好的合成效果，在氮取代反应中，鬼臼毒素类化合物与2-氨基嘧啶、2-氨基吡啶、2-氨基-3-甲基吡啶、2-氨基-4-甲基吡啶、2-氨基-5-甲基吡啶、2-氨基-4，6-二甲基吡啶、3-氨基吡啶、3-氨基-4-甲基吡啶、5-氨基-2-甲基吡啶、3-氨基-2-氯吡啶或4-氨基-2-氯吡啶的摩尔比优选为1:1.2。 
步骤（2）所述的搅拌优选为在真空条件下进行搅拌，其搅拌转速优选为50-800转/分钟，更优选为600转/分钟；所述的氮取代反应温度优选为常温；所述的氮取代反应时间优选为24-48小时，更优选为48小时。 
其中，本发明所述的鬼臼毒素类化合物优选为鬼臼毒素或4′-去甲基表鬼臼毒素。 
为了达到更好的技术效果，可以将上述反应产物在以下条件下进行处理得到初步纯化的氮取代鬼臼类衍生物粗产物：将反应产物旋转蒸发浓缩，用乙酸乙酯提取过滤得滤渣，再用体积比为1：1的二氯甲烷：甲醇复溶，真空干燥，得到初步纯化的氮取代鬼臼类衍生物产物。 
本发明还提供了一种将上述初步纯化的氮取代鬼臼类衍生物产物进一步纯化的方法，包括： 
(1)待分离纯化样品的制备：将初步纯化的氮取代鬼臼类衍生物产物通过乙酸乙酯溶剂溶解，并用水反复洗涤，收集有机层，真空干燥，备用； 
(2)分离纯化：将步骤（1）所制备的样品依次使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离，即得。 
优选的，所述的硅胶柱层析的分离方法包括：(1)硅胶柱层析为正相硅胶柱层析，正相硅胶以低极性有机溶剂拌匀后装柱，以洗脱剂平衡；所述的洗脱剂优选是由体积比为20:1:1的二氯甲烷、丙酮和乙酸乙酯组成；(2)将样品以洗脱液溶解，进行上样吸附，然后用洗脱剂洗脱，收集洗脱液，将样品挥干并重结晶； 
优选的，所述的凝胶柱层析分离方法包括：（1）凝胶以甲醇浸泡；将处理好的凝胶装柱，以甲醇平衡；（2）将经硅胶柱层析初步分离后的样品溶于甲醇中，进行上样吸附，然后用甲醇洗脱，收集洗脱液，将样品中溶剂挥干并重结晶。 
本发明将鬼臼毒素类化合物与2-氨基嘧啶、2-氨基吡啶、2-氨基-3-甲基吡啶、2-氨基-4-甲基吡啶、2-氨基-5-甲基吡啶、2-氨基-4，6-二甲基吡啶、3-氨基吡啶、3-氨基-4-甲基吡啶、5-氨基-2-甲基吡啶、3-氨基-2-氯吡啶或4-氨基-2-氯吡啶通过氮取代反应，得到具有良好抗肿瘤活性的式(Ⅴ)化合物，该化合物可通过多途径、多靶点作用于肿瘤细胞，从而达到更好的抗肿瘤疗效。体外BGC823、Hela细胞活性抑制的测试表明，本发明式(Ⅴ)所示化合物的抗肿瘤活性较鬼臼毒素类化合物的抗肿瘤活性有显著提升。试验结果表明，本发明式(Ⅴ)化合物可制备成抗肿瘤药物，临床应用于抗肿瘤治疗。 
本发明的另一目的在于提供一种抗肿瘤的药物组合物，该药物组合物由式(Ⅴ)所示的化合物和药学上可接受的载体配合而成，即：将治疗上有效量的式(Ⅴ)化合物与药学上可接受的载体配合后，按本领域常规的制剂方法将其制备成任意一类适宜的药物制剂，例如，可以是片剂、胶囊、粉剂、颗粒、锭剂、栓剂、口服液或无菌胃肠外悬液等液体制剂形式，还可以是大或小容量注射剂、冻干粉针、无菌粉分装等制剂形式。通常该药物组合物适合于口服给药和注射给药，也适合其他的给药方法，例如经皮给药。 
为了达到给药的一致性，本发明药物组合物优选为单剂形式。用于口服给药的单剂形式可以是片剂和胶囊，并可含有常规赋形剂诸如粘合剂，例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄芪胶或聚乙烯吡咯烷酮；填充剂，例如乳糖、糖、玉米淀粉、磷酸钙、山梨醇或甘氨酸；压片润滑剂，例如硬脂酸镁；崩解剂，例如淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、淀粉乙醇酸钠或微晶纤维素，或药学上可接受的湿润剂，诸如十二烷基硫酸钠。 
附图说明
图1鬼臼毒素类化合物的结构式。 
图22-氨基嘧啶、2-氨基吡啶、2-氨基-3-甲基吡啶、2-氨基-4-甲基吡啶、2-氨基-5-甲基吡啶、2-氨基-4，6-二甲基吡啶、3-氨基吡啶、3-氨基-4-甲基吡啶、5-氨基-2-甲基吡啶、3-氨基-2-氯吡啶或4-氨基-2-氯吡啶结构式。 
图3本发明氮取代鬼臼类衍生物的结构式。 
图4本发明氮取代鬼臼类衍生物的通式。 
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。 
试验材料 
鬼臼毒素以及4′-去甲基表鬼臼毒素均购自西安和霖生物工程有限公司，纯度为98%。 
2-氨基嘧啶、2-氨基吡啶、2-氨基-3-甲基吡啶、2-氨基-4-甲基吡啶、2-氨基-5-甲基吡啶、2-氨基-4，6-二甲基吡啶、3-氨基吡啶、3-氨基-4-甲基吡啶、5-氨基-2-甲基吡啶、3-氨基-2-氯吡啶和4-氨基-2-氯吡啶均购自阿拉丁试剂。 
预备实施例1鬼臼毒素C环4位的活化 
二氯甲烷的干燥：称取1.5g氢化钙于1000ML圆底四口瓶中，将干净的漏斗放入侧口，倒入500ML二氯甲烷，加入3-4颗玻璃珠防止暴沸，加热调整温度至二氯甲烷呈微沸状态，加回流管回流2-3h后冷凝回收至装有无水氯化钙的试剂瓶中，收集完液体后，向瓶中通入少许氮气，盖上盖子即可，以后每次用完后补充氮气。 
称取2克鬼臼毒素或4′-去甲基表鬼臼毒素，45℃真空干燥2小时；氮气保护下，将干燥的鬼臼毒素和40ml干燥好的二氯甲烷加入250ml四口瓶中，加入溴化氢10ml后冰浴反应半小时。反应结束后，用20ml水萃取反应液，取下层有机相，再用饱和食盐水反复萃取三次，取有机相于无水硫酸钠中干燥过夜，取上清旋转蒸干后，加入20ml乙酸乙酯溶解，然后向溶液中缓慢滴加正己烷并不断摇匀至无晶体析出，于4℃过夜，将液体与结晶物分离，所得化合物即为鬼臼毒素类化合物C环4位的活化产物。 
实施例1  4-N-(2-氨基嘧啶)-4-脱氧-鬼臼毒素（化合物(1)）的合成和纯化 
(1)4-N-(2-氨基嘧啶)-4-脱氧-鬼臼毒素的合成：称取1mol鬼臼毒素C环4位的活化产物（预备实施例1所制备），45℃真空干燥2小时；氮气保护下，将干燥好的二氯甲烷加入四口瓶中，加入干燥好的鬼臼毒素C环4位的活化产物和1.2mol2-氨基嘧啶，然后加入2mol碳酸钡，常温条件下，搅拌反应48小时，将反应液旋干后所得即为4-N-(2-氨基嘧啶)-4-脱氧-鬼臼毒素粗产品。 
(2)分离和纯化4-N-(2-氨基嘧啶)-4-脱氧-鬼臼毒素： 
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化： 
(A)用正相硅胶柱(正相硅胶：中国青岛海洋化工有限公司，HG/T2354-92；分离系统：瑞士步琪等度快速色谱系统：色谱柱：瑞士步琪玻璃柱C-690，长460毫米，内径15毫米)或者相似极性柱分离；二氯甲烷：丙酮：乙酸乙酯（20：1：1）系统作为洗脱液，上样量2毫升，流速恒流1.0毫升/分钟；每2毫升洗脱液作为一个馏分进行收集。用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（10：1）系统作为展开剂，将Rf值0.5的馏分进行合并；将合并后的样品真空干燥，避光条件下保存于4℃的冰箱中作为供纯化样品。 
(B)用凝胶柱层析(凝胶：Sephadex LH-20；分离柱：玻璃柱，长480毫米，内径30毫米)分离；将处理好的Sephadex LH-20凝胶湿法装柱，以甲醇平衡。将待纯化样品溶于6毫升甲醇中，以0.6毫升/分钟的流速上样吸附，然后用600毫升甲醇以0.6毫升/分钟的流速洗脱，每10毫升洗脱液收集1瓶，用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（10：1）系统作为展开剂，将Rf值0.5的馏分进行合并；真空干燥后所得的白色粉末状样品为4-N-(2-氨基嘧啶)-4-脱氧-鬼臼毒素。 
4-N-(2-氨基嘧啶)-4-脱氧-鬼臼毒素：白色粉末：C26H25O7N3;491, 
1H NMR(300MHz,CDCL3):δ=3.046(s,2H;CH),3.744(s,3H;OCH3),3.801(s,6H;OCH3),4.938(s,1H;CH2O),4.398-4.420(d,J=6.6Hz,1H;CH2O),4.601(s,1H;CH),5.286-5.336(d,J=15.0Hz,1H;CH),5.929-5.957(d,J=8.4Hz,2H;OCH2O),6.318(s,4H;Ar-H),6.509(s,1H;Ar-H),6.608(s,1H;Ar-H),6.818(s,1H;Ar-H),8.155ppm(s,1H;NH); 
13C NMR(75MHz,CDCL3):δ=38.291(CH),42.131(CH),44.031(CH),50.277(CH),56.452(OCH3),60.982(OCH3),69.634(CH2O),101.778(OCH2O),108.489(Ar-C),108.629(Ar-C),109.727(Ar-C),110.149(Ar-C),111.935(Ar-C),130.012(Ar-C),132.390(Ar-C),135.274(Ar-C),147.794(Ar-C),148.511(Ar-C),152.830(Ar-C),158.204(Ar-C),161.650(Ar-C),174.944ppm(OCO). 
实施例2  4-N-(2-氨基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素（化合物(2)）的合成和纯化 
(1)4-N-(2-氨基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素的合成：称取1mol鬼臼毒素C环4位的活化产物（预备实施例1所制备），45℃真空干燥2小时；氮气保护下，将干燥好的二氯甲烷加入四口瓶中，加入干燥好的鬼臼毒素类化合物C环4位的活化产物和1.2mol2-氨基吡啶，然后加入2mol碳酸钡，常温条件下，搅拌反应48小时，将反应液旋干后所得即为4-N-(2-氨基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素粗产品。 
(2)分离和纯化4-N-(2-氨基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素： 
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化： 
(A)用正相硅胶柱(正相硅胶：中国青岛海洋化工有限公司，HG/T2354-92；分离系统：瑞士步琪等度快速色谱系统：色谱柱：瑞士步琪玻璃柱C-690，长460毫米，内径15毫米)或者相似极性柱分离；二氯甲烷：丙酮：乙酸乙酯（30：1：1）系统作为洗脱液，上样量2毫升，流速恒流1.0毫升/分钟；每2毫升洗脱液作为一个馏分进行收集。用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（10：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；将合并后的样品真空干燥，避光条件下保存于4℃的冰箱中作为供纯化样品。 
(B)用凝胶柱层析(凝胶：Sephadex LH-20；分离柱：玻璃柱，长480毫米，内径30毫米)分离；将处理好 的Sephadex LH-20凝胶湿法装柱，以甲醇平衡。将待纯化样品溶于6毫升甲醇中，以0.6毫升/分钟的流速上样吸附，然后用600毫升甲醇以0.6毫升/分钟的流速洗脱，每10毫升洗脱液收集1瓶，用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（10：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；真空干燥后所得的白色粉末状样品为4-N-(2-氨基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素类化合物。 
4-N-(2-氨基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素：白色粉末,C27H26O7N2;490， 
1H NMR(300MHz,CD3OD):δ=3.049(s,2H;CH),3.714(s,3H;OCH3),3.734(s,6H;OCH3),4.618(s,2H;CH2O),4.631(s,1H;CH),5.076(s,1H;CH),5.983(s,2H;OCH2O),6.281(s,2H;Ar-H),6.517(s,1H;Ar-H),6.812-6.856(t,J=6.6Hz,1H;Ar-H),7.001-7.040(d,J=11.7Hz,2H;Ar-H),7.082-7.823ppm(d,J=6.3Hz,2H;Ar-H); 
13C NMR(75MHz,CD3OD):δ=25.744(CH),42.161(CH),51.706(CH),52.839(CH),55.371(OCH3),59.865(OCH3),69.126(CH2O),101.850(OCH2O),107.020(Ar-C),108.272(Ar-C),109.580(Ar-C),113.090(Ar-C),114.588(Ar-C),125.624(Ar-C),131.294(Ar-C),137.026(Ar-C),138.813(Ar-C),141.950(Ar-C),147.718(Ar-C),149.075(Ar-C),151.122(Ar-C),153.063(Ar-C),172.486ppm(OCO). 
实施例3  4-N-(2-氨基-3-甲基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素（化合物(3)）的合成和纯化 
(1)4-N-(2-氨基-3-甲基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素的合成：称取1mol鬼臼毒素C环4位的活化产物（预备实施例1所制备），45℃真空干燥2小时；氮气保护下，将干燥好的二氯甲烷加入四口瓶中，加入干燥好的鬼臼毒素类化合物C环4位的活化产物和1.2mol2-氨基-3-甲基吡啶，然后加入2mol碳酸钡，常温条件下，搅拌反应48小时，将反应液旋干后所得即为4-N-(2-氨基-3-甲基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素粗产品。 
(2)分离和纯化4-N-(2-氨基-3-甲基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素： 
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化： 
(A)用正相硅胶柱(正相硅胶：中国青岛海洋化工有限公司，HG/T2354-92；分离系统：瑞士步琪等度快速色谱系统：色谱柱：瑞士步琪玻璃柱C-690，长460毫米，内径15毫米)或者相似极性柱分离；二氯甲烷：丙酮：乙酸乙酯（25：1：1）系统作为洗脱液，上样量2毫升，流速恒流1.0毫升/分钟；每2毫升洗脱液作为一个馏分进行收集。用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（15：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；将合并后的样品真空干燥，避光条件下保存于4℃的冰箱中作为供纯化样品。 
(B)用凝胶柱层析(凝胶：Sephadex LH-20；分离柱：玻璃柱，长480毫米，内径30毫米)分离；将处理好的Sephadex LH-20凝胶湿法装柱，以甲醇平衡。将待纯化样品溶于6毫升甲醇中，以0.6毫升/分钟的流速上样吸附，然后用600毫升甲醇以0.6毫升/分钟的流速洗脱，每10毫升洗脱液收集1瓶，用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（15：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；真空干燥后所得的白色粉末状样品为4-N-(2-氨基-3-甲基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素类化合物。 
4-N-(2-氨基-3-甲基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素：白色粉末,C28H28O7N2,504, 
1H NMR(300MHz,DMSO):δ=2.258(s,3H;CH3),3.245-3.261(d,J=4.8Hz,2H;CH),3.607(s,3H;OCH3),3.678(s,6H;OCH3),3.768(s,1H;CH2O),4.500(s,1H;CH2O),4.524(s,1H;CH),4.673-4.687(d,J=4.2Hz,1H;CH),6.047-6.053(d,J=1.8Hz,2H;OCH2O),6.271(s,2H;Ar-H),6.430-6.444(d,J=4.2Hz,1H;Ar-H),6.711-6.741(d,J=9.0Hz,2H;Ar-H),6.979(s,1H;Ar-H),7.241-7.262(d,J=6.3Hz,1H;Ar-H),7.749-7.773(d,J=7.2Hz,1H;Ar-H),8.837ppm(s,1H;NH); 
13C NMR(75MHz,DMSO):δ=18.470(CH3),36.881(CH),39.602(CH),40.718(CH),43.639(CH),56.466(OCH3),60.590(OCH3),68.349(CH2O),102.595(OCH2O),108.493(Ar-C),109.696(Ar-C),110.583(Ar-C),124.299(Ar-C),135.380(Ar-C),135.523(Ar-C),136.124(Ar-C),137.040(Ar-C),141.436(Ar-C),148.293(Ar-C),149.496(Ar-C),152.479(Ar-C),154.793(Ar-C),173.691ppm(OCO). 
实施例4  4-N-(2-氨基-4-甲基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素（化合物(4)）的合成和纯化 
(1)4-N-(2-氨基-4-甲基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素的合成：称取1mol鬼臼毒素C环4位的活化产物（预备实施例1所制备），45℃真空干燥2小时；氮气保护下，将干燥好的二氯甲烷加入四口瓶中，加入干燥好的鬼臼毒素类化合物C环4位的活化产物和1.2mol2-氨基-4-甲基吡啶，然后加入2mol碳酸钡，常温条件下，搅拌反应48小时，将反应液旋干后所得即为4-N-(2-氨基-4-甲基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素粗产品。 
(2)分离和纯化4-N-(2-氨基-4-甲基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素： 
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化： 
(A)用正相硅胶柱(正相硅胶：中国青岛海洋化工有限公司，HG/T2354-92；分离系统：瑞士步琪等度快速色谱系统：色谱柱：瑞士步琪玻璃柱C-690，长460毫米，内径15毫米)或者相似极性柱分离；二氯甲烷：丙酮：乙酸乙酯（35：1：1）系统作为洗脱液，上样量2毫升，流速恒流1.0毫升/分钟；每2毫升洗脱液作为一个馏分进行收集。用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（17：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；将合并后的样品真空干燥，避光条件下保存于4℃的冰箱中作为供纯化样品。 
(B)用凝胶柱层析(凝胶：Sephadex LH-20；分离柱：玻璃柱，长480毫米，内径30毫米)分离；将处理好的Sephadex LH-20凝胶湿法装柱，以甲醇平衡。将待纯化样品溶于6毫升甲醇中，以0.6毫升/分钟的流速上样吸附，然后用600毫升甲醇以0.6毫升/分钟的流速洗脱，每10毫升洗脱液收集1瓶，用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（17：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；真空干燥后所得的白色粉末状样品为4-N-(2-氨基-4-甲基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素。 
4-N-(2-氨基-4-甲基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素：白色粉末,C28H28O7N2,504, 
1H NMR(300MHz,CDCL3):δ=2.260(s,3H;CH3),3.040-3.148(t,J=16.2Hz,2H;CH),3.732(s,6H;OCH3),3.790(s,3H;OCH3),3.837-3.870(d,J=9.9Hz,1H;CH2O),4.368-4.420(t,J=7.8Hz,1H;CH2O),4.585-4.598(d,J=3.9Hz,1H;CH),5.244-5.284(d,J=12.0Hz,1H;CH),5.927-5.947(d,J=6.0Hz,2H;OCH2O),6.300(s,3H;Ar-H),6.504(s,2H;Ar-H),6.774(s,1H;Ar-H),7.874(s,1H;Ar-H); 
13C NMR(75MHz,CDCL3):δ=21.499(CH3),38.389(CH),42.029(CH),43.967(CH),50.327(CH),56.407(OCH3),60.968(OCH3),69.628(CH2O),101.719(OCH2O),108.330(Ar-C),108.497(Ar-C),109.390(Ar-C),110.199(Ar-C),115.638(Ar-C),130.379(Ar-C),132.387(Ar-C),135.386(Ar-C),145.748(Ar-C),147.742(Ar-C),148.398(Ar-C),152.791(Ar-C),157.184(Ar-C),175.077ppm(OCO). 
实施例5  4-N-(2-氨基-5-甲基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素（化合物(5)）的合成和纯化 
(1)4-N-(2-氨基-5-甲基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素的合成：称取1mol鬼臼毒素C环4位的活化产物（预备实施例1所制备），45℃真空干燥2小时；氮气保护下，将干燥好的二氯甲烷加入四口瓶中，加入干燥好的鬼臼毒素C环4位的活化产物和1.2mol2-氨基-5-甲基吡啶，然后加入2mol碳酸钡，常温条件下，搅拌反应48小时， 将反应液旋干后所得即为4-N-(2-氨基-5-甲基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素粗产品。 
(2)分离和纯化4-N-(2-氨基-5-甲基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素： 
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化： 
(A)用正相硅胶柱(正相硅胶：中国青岛海洋化工有限公司，HG/T2354-92；分离系统：瑞士步琪等度快速色谱系统：色谱柱：瑞士步琪玻璃柱C-690，长460毫米，内径15毫米)或者相似极性柱分离；二氯甲烷：丙酮：乙酸乙酯（40：1：1）系统作为洗脱液，上样量2毫升，流速恒流1.0毫升/分钟；每2毫升洗脱液作为一个馏分进行收集。用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（20：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；将合并后的样品真空干燥，避光条件下保存于4℃的冰箱中作为供纯化样品。 
(B)用凝胶柱层析(凝胶：Sephadex LH-20；分离柱：玻璃柱，长480毫米，内径30毫米)分离；将处理好的Sephadex LH-20凝胶湿法装柱，以甲醇平衡。将待纯化样品溶于6毫升甲醇中，以0.6毫升/分钟的流速上样吸附，然后用600毫升甲醇以0.6毫升/分钟的流速洗脱，每10毫升洗脱液收集1瓶，用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（20：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；真空干燥后所得的白色粉末状样品为4-N-(2-氨基-5-甲基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素。 
4-N-(2-氨基-5-甲基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素：白色粉末,C28H28O7N2,504, 
1H NMR(300MHz,CD3OD):δ=2.196(s,3H;CH3),3.022(s,2H;CH),3.687(s,3H;OCH3),3.710-3.731(d,J=6.6Hz,6H;OCH3),4.583(s,2H;CH2O),4.614(s,1H;CH),5.066(S,1H;CH),5.972(s,2H;OCH2O),6.276(s,2H;Ar-H),6.496(s,1H;Ar-H),6.961-6.997(d,J=10.8Hz,2H;Ar-H),7.649-7.689ppm(d,J=12.0Hz,2H;Ar-H); 
13C NMR(75MHz,CD3OD):δ=15.749(CH3),25.864(CH),42.281(CH),46.979(CH),51.537(CH),52.670(CH),55.392(OCH3),59.886(CH2O),101.801(OCH2O),107.034(Ar-C),108.321(Ar-C),109.531(Ar-C),114.202(Ar-C),123.479(Ar-C),125.892(Ar-C),131.202(Ar-C),136.337(Ar-C),137.125(Ar-C),144.173(Ar-C),147.661(Ar-C),149.582(Ar-C),153.007(Ar-C),171.613ppm(OCO). 
实施例6  4-N-(2-氨基-4，6-二甲基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素（化合物(6)）的合成和纯化 
(1)4-N-(2-氨基-4，6-二甲基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素的合成：称取1mol鬼臼毒素C环4位的活化产物（预备实施例1所制备），45℃真空干燥2小时；氮气保护下，将干燥好的二氯甲烷加入四口瓶中，加入干燥好的鬼臼毒素C环4位的活化产物和1.2mol2-氨基-4，6-二甲基吡啶，然后加入2mol碳酸钡，常温条件下，搅拌反应48小时，将反应液旋干后所得即为4-N-(2-氨基-4，6-二甲基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素粗产品。 
(2)分离和纯化4-N-(2-氨基-4，6-二甲基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素： 
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化： 
(A)用正相硅胶柱(正相硅胶：中国青岛海洋化工有限公司，HG/T2354-92；分离系统：瑞士步琪等度快速色谱系统：色谱柱：瑞士步琪玻璃柱C-690，长460毫米，内径15毫米)或者相似极性柱分离；二氯甲烷：丙酮：乙酸乙酯（40：1：1）系统作为洗脱液，上样量2毫升，流速恒流1.0毫升/分钟；每2毫升洗脱液作为一个馏分进行收集。用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（20：1）系统 作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；将合并后的样品真空干燥，避光条件下保存于4℃的冰箱中作为供纯化样品。 
(B)用凝胶柱层析(凝胶：Sephadex LH-20；分离柱：玻璃柱，长480毫米，内径30毫米)分离；将处理好的Sephadex LH-20凝胶湿法装柱，以甲醇平衡。将待纯化样品溶于6毫升甲醇中，以0.6毫升/分钟的流速上样吸附，然后用600毫升甲醇以0.6毫升/分钟的流速洗脱，每10毫升洗脱液收集1瓶，用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（20：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；真空干燥后所得的白色粉末状样品为4-N-(2-氨基-4，6-二甲基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素。 
4-N-(2-氨基-4，6-二甲基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素：白色粉末，C29H30O7N2,518, 
1H NMR(300MHz,CDCL3):δ=2.388(s,3H;CH3),2.516(s,3H;CH3),3.173(s,1H;CH),3.720-3.730(d,J=3.0Hz,6H;OCH3),3.825-3.889(t,J=9.6Hz,1H;CH2O),4.486-4.537(t,J=7.5Hz,1H;CH2O),4.665-4.683(d,J=5.4Hz,1H;CH),5.423(s,1H;CH),5.959(s,2H;OCH2O),6.380(s,2H;Ar-H),6.541(s,1H;Ar-H),6.671(s,1H;Ar-H),6.866(s,1H;Ar-H),6.916ppm(s,1H;Ar-H); 
13C NMR(75MHz,CDCL3):δ=18.338(CH3),20.884(CH3),38.039(CH),41.493(CH),43.716(CH),50.925(CH),55.420(OCH3),59.908(OCH3),68.404(CH2O),101.928(OCH2O),108.265(Ar-C),109.074(Ar-C),109.700(Ar-C),115.017(Ar-C),128.340(Ar-C),132.482(Ar-C),135.732(Ar-C),137.054(Ar-C),147.654(Ar-C),147.985(Ar-C),148.942(Ar-C),152.691(Ar-C),152.958(Ar-C),175.234ppm(OCO). 
实施例7  4-N-(3-氨基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素（化合物(7)）的合成和纯化 
(1)4-N-(3-氨基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素的合成：称取1mol鬼臼毒素C环4位的活化产物（预备实施例1所制备），45℃真空干燥2小时；氮气保护下，将干燥好的二氯甲烷加入四口瓶中，加入干燥好的鬼臼毒素C环4位的活化产物和1.2mol3-氨基吡啶，然后加入2mol碳酸钡，常温条件下，搅拌反应48小时，将反应液旋干后所得即为4-N-(3-氨基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素粗产品。 
(2)分离和纯化4-N-(3-氨基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素： 
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化： 
(A)用正相硅胶柱(正相硅胶：中国青岛海洋化工有限公司，HG/T2354-92；分离系统：瑞士步琪等度快速色谱系统：色谱柱：瑞士步琪玻璃柱C-690，长460毫米，内径15毫米)或者相似极性柱分离；二氯甲烷：丙酮：乙酸乙酯（42：1：1）系统作为洗脱液，上样量2毫升，流速恒流1.0毫升/分钟；每2毫升洗脱液作为一个馏分进行收集。用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（21：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；将合并后的样品真空干燥，避光条件下保存于4℃的冰箱中作为供纯化样品。 
(B)用凝胶柱层析(凝胶：Sephadex LH-20；分离柱：玻璃柱，长480毫米，内径30毫米)分离；将处理好的Sephadex LH-20凝胶湿法装柱，以甲醇平衡。将待纯化样品溶于6毫升甲醇中，以0.6毫升/分钟的流速上样吸附，然后用600毫升甲醇以0.6毫升/分钟的流速洗脱，每10毫升洗脱液收集1瓶，用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（21：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；真空干燥后所得的白色粉末状样品为4-N-(3-氨基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素。 
4-N-(3-氨基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素：白色粉末,C27H26O7N2;490， 
1H NMR(300MHz,CDCL3):δ=3.477(s,1H;CH),3.565-3.606(d,J=12.3Hz,1H;CH),4.155(s,6H;OCH3),4.198(s,3H;OCH3),4.283-4.313(d,J=9.0Hz,1H;CH2O),4.816(s,2H;CH2O),5.009(s,1H;CH),5.116(s,1H;CH),6.353-6.375(d,J=6.6Hz,2H;OCH2O),6.709(s,2H;Ar-H),6.925(s,2H;Ar-H),7.395(s,1H;Ar-H),7.674(s,1H;Ar-H),8.490ppm(s,2H;Ar-H); 
13C NMR(75MHz,CDCL3):δ=39.127(CH),42.347(CH),44.179(CH),52.922(CH),56.875(OCH3),61.404(OCH3),69.126(CH2O),102.320(OCH2O),108.760(Ar-C),109.728(Ar-C),110.671(Ar-C),130.199(Ar-C),132.503(Ar-C),135.592(Ar-C),137.738(Ar-C),148.340(Ar-C),149.099(Ar-C),153.236(Ar-C),175.172ppm(OCO). 
实施例8  4-N-(3-氨基-4-甲基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素（化合物(8)）的合成和纯化 
(1)4-N-(3-氨基-4-甲基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素的合成：称取1mol鬼臼毒素C环4位的活化产物（预备实施例1所制备），45℃真空干燥2小时；氮气保护下，将干燥好的二氯甲烷加入四口瓶中，加入干燥好的鬼臼毒素类化合物C环4位的活化产物和1.2mol3-氨基-4-甲基吡啶，然后加入2mol碳酸钡，常温条件下，搅拌反应48小时，将反应液旋干后所得即为4-N-(3-氨基-4-甲基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素粗产品。 
(2)分离和纯化4-N-(3-氨基-4-甲基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素： 
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化： 
(A)用正相硅胶柱(正相硅胶：中国青岛海洋化工有限公司，HG/T2354-92；分离系统：瑞士步琪等度快速色谱系统：色谱柱：瑞士步琪玻璃柱C-690，长460毫米，内径15毫米)或者相似极性柱分离；二氯甲烷：丙酮：乙酸乙酯（44：1：1）系统作为洗脱液，上样量2毫升，流速恒流1.0毫升/分钟；每2毫升洗脱液作为一个馏分进行收集。用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（22：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；将合并后的样品真空干燥，避光条件下保存于4℃的冰箱中作为供纯化样品。 
(B)用凝胶柱层析(凝胶：Sephadex LH-20；分离柱：玻璃柱，长480毫米，内径30毫米)分离；将处理好的Sephadex LH-20凝胶湿法装柱，以甲醇平衡。将待纯化样品溶于6毫升甲醇中，以0.6毫升/分钟的流速上样吸附，然后用600毫升甲醇以0.6毫升/分钟的流速洗脱，每10毫升洗脱液收集1瓶，用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（22：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；真空干燥后所得的白色粉末状样品为4-N-(3-氨基-4-甲基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素。 
4-N-(3-氨基-4-甲基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素：白色粉末,C28H28O7N2,504, 
1H NMR(300MHz,DMSO):δ=2.275(s,3H;CH3),3.049(s,2H;CH),3.572(s,3H;OCH3),3.582(s,6H;OCH3),4.207(s,2H;CH2O),4.321(s,1H;CH),4.665(s,1H;CH),6.001(s,2H;OCH2O),6.416(s,3H;Ar-H),6.513(s,1H;Ar-H),6.684(s,1H;Ar-H),7.672(s,1H;Ar-H),8.003ppm(s,1H;Ar-H); 
13C NMR(75MHz,DMSO):δ=18.384(CH3),38.828(CH),40.489(CH),43.667(CH),44.813(CH),56.581(OCH3),60.647(OCH3),69.495(CH2O),102.652(OCH2O),107.519(Ar-C),108.665(Ar-C),110.898(Ar-C),125.816(Ar-C),129.223(Ar-C),134.578(Ar-C),135.866(Ar-C),137.069(Ar-C),148.207(Ar-C),149.009(Ar-C),152.903(Ar-C),174.120ppm(OCO). 
实施例9  4-N-(5-氨基-2-甲基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素（化合物(9)）的合成和纯化 
(1)4-N-(5-氨基-2-甲基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素的合成：称取1mol鬼臼毒素C环4位的活化产物（预备实施 例1所制备），45℃真空干燥2小时；氮气保护下，将干燥好的二氯甲烷加入四口瓶中，加入干燥好的鬼臼毒素类化合物C环4位的活化产物和1.2mol5-氨基-2-甲基吡啶，然后加入2mol碳酸钡，常温条件下，搅拌反应48小时，将反应液旋干后所得即为4-N-(5-氨基-2-甲基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素粗产品。 
(2)分离和纯化4-N-(5-氨基-2-甲基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素： 
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化： 
(A)用正相硅胶柱(正相硅胶：中国青岛海洋化工有限公司，HG/T2354-92；分离系统：瑞士步琪等度快速色谱系统：色谱柱：瑞士步琪玻璃柱C-690，长460毫米，内径15毫米)或者相似极性柱分离；二氯甲烷：丙酮：乙酸乙酯（30：1：1）系统作为洗脱液，上样量2毫升，流速恒流1.0毫升/分钟；每2毫升洗脱液作为一个馏分进行收集。用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（15：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；将合并后的样品真空干燥，避光条件下保存于4℃的冰箱中作为供纯化样品。 
(B)用凝胶柱层析(凝胶：Sephadex LH-20；分离柱：玻璃柱，长480毫米，内径30毫米)分离；将处理好的Sephadex LH-20凝胶湿法装柱，以甲醇平衡。将待纯化样品溶于6毫升甲醇中，以0.6毫升/分钟的流速上样吸附，然后用600毫升甲醇以0.6毫升/分钟的流速洗脱，每10毫升洗脱液收集1瓶，用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（15：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；真空干燥后所得的白色粉末状样品为4-N-(5-氨基-2-甲基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素。 
4-N-(5-氨基-2-甲基吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素：白色粉末,C28H28O7N2,504, 
1H NMR(300MHz,CD3OD):δ=2.567(s,3H;CH3),3.146-3.153(d,J=2.1Hz,1H;CH),3.302(s,1H;CH),3.721-3.757(d,J=10.8Hz,9H;OCH3),3.809-3.871(t,J=9.3Hz,1H;CH2O),4.467(s,1H;CH2O),4.624(S,1H;CH),5.000(S,1H;CH),5.929(s,2H;OCH2O),6.386(s,2H;Ar-H),6.491(s,1H;Ar-H),6.816(s,1H;Ar-H),7.524(s,1H;Ar-H),7.662-7.688(d,J=7.8Hz,1H;Ar-H),8.027ppm(s,1H;Ar-H); 
13C NMR(75MHz,CD3OD):δ=17.769(CH3),38.851(CH),41.616(CH),43.749(CH),51.397(CH),55.463(OCH3),59.934(OCH3),68.790(CH2O),101.750(OCH2O),108.375(Ar-C),109.228(Ar-C),109.476(Ar-C),124.041(Ar-C),127.360(Ar-C),130.011(Ar-C),132.009(Ar-C),136.082(Ar-C),137.013(Ar-C),141.299(Ar-C),147.767(Ar-C),148.556(Ar-C),152.636(Ar-C),175.787ppm(OCO). 
实施例10  4-N-(3-氨基-2-氯吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素（化合物(10)）的合成和纯化 
(1)4-N-(3-氨基-2-氯吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素的合成：称取1mol鬼臼毒素C环4位的活化产物（预备实施例1所制备），45℃真空干燥2小时；氮气保护下，将干燥好的二氯甲烷加入四口瓶中，加入干燥好的鬼臼毒素C环4位的活化产物和1.2mol3-氨基-2-氯吡啶，然后加入2mol碳酸钡，常温条件下，搅拌反应48小时，将反应液旋干后所得即为4-N-(3-氨基-2-氯吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素粗产品。 
(2)分离和纯化4-N-(3-氨基-2-氯吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素物： 
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化： 
(A)用正相硅胶柱(正相硅胶：中国青岛海洋化工有限公司，HG/T2354-92；分离系统：瑞士步琪等度快速色谱系统：色谱柱：瑞士步琪玻璃柱C-690，长460毫米，内径15毫米)或者相似极性柱分离；二氯甲烷：丙酮： 乙酸乙酯（36：1：1）系统作为洗脱液，上样量2毫升，流速恒流1.0毫升/分钟；每2毫升洗脱液作为一个馏分进行收集。用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（18：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；将合并后的样品真空干燥，避光条件下保存于4℃的冰箱中作为供纯化样品。 
(B)用凝胶柱层析(凝胶：Sephadex LH-20；分离柱：玻璃柱，长480毫米，内径30毫米)分离；将处理好的Sephadex LH-20凝胶湿法装柱，以甲醇平衡。将待纯化样品溶于6毫升甲醇中，以0.6毫升/分钟的流速上样吸附，然后用600毫升甲醇以0.6毫升/分钟的流速洗脱，每10毫升洗脱液收集1瓶，用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（18：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；真空干燥后所得的白色粉末状样品为4-N-(3-氨基-2-氯吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素。 
4-N-(3-氨基-2-氯吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素：白色粉末,C27H25ClO7N2,524, 
1H NMR(300MHz,CDCL3):δ=3.086(s,1H;CH),3.168-3.215(d,J=14.1Hz,1H;CH),3.759(s,6H;OCH3),3.812(s,3H;OCH3),3.846(s,1H;CH2O),4.346-4.368(d,J=6.6Hz,1H;CH2O),4.598(s,1H;CH),4.658-4.702(d,J=13.2Hz,1H;CH),5.992(s,2H;OCH2O),6.331(s,2H;Ar-H),6.556(s,1H;Ar-H),6.743(s,1H;Ar-H),6.841-6.865(d,J=7.2Hz,1H;Ar-H),7.150(s,1H;Ar-H),7.808ppm(s,1H;Ar-H); 
13C NMR(75MHz,CDCL3):δ=38.693(CH),41.985(CH),43.758(CH),52.508(CH),56.503(OCH3),60.976(OCH3),68.517(CH2O),101.970(OCH2O),108.525(Ar-C),109.229(Ar-C),110.298(Ar-C),117.022(Ar-C),123.718(Ar-C),129.514(Ar-C),132.272(Ar-C),135.085(Ar-C),137.899(Ar-C),140.206(Ar-C),148.140(Ar-C),148.900(Ar-C),152.895(Ar-C),174.390ppm(OCO). 
实施例11  4-N-(4-氨基-2-氯吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素（化合物(11)）的合成和纯化 
(1)4-N-(4-氨基-2-氯吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素的合成：称取1mol鬼臼毒素C环4位的活化产物（预备实施例1所制备），45℃真空干燥2小时；氮气保护下，将干燥好的二氯甲烷加入四口瓶中，加入干燥好的鬼臼毒素类化合物C环4位的活化产物和1.2mol4-氨基-2-氯吡啶，然后加入2mol碳酸钡，常温条件下，搅拌反应48小时，将反应液旋干后所得即为4-N-(4-氨基-2-氯吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素粗产品。 
(2)分离和纯化4-N-(4-氨基-2-氯吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素： 
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化： 
(A)用正相硅胶柱(正相硅胶：中国青岛海洋化工有限公司，HG/T2354-92；分离系统：瑞士步琪等度快速色谱系统：色谱柱：瑞士步琪玻璃柱C-690，长460毫米，内径15毫米)或者相似极性柱分离；二氯甲烷：丙酮：乙酸乙酯（28：1：1）系统作为洗脱液，上样量2毫升，流速恒流1.0毫升/分钟；每2毫升洗脱液作为一个馏分进行收集。用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（14：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；将合并后的样品真空干燥，避光条件下保存于4℃的冰箱中作为供纯化样品。 
(B)用凝胶柱层析(凝胶：Sephadex LH-20；分离柱：玻璃柱，长480毫米，内径30毫米)分离；将处理好的Sephadex LH-20凝胶湿法装柱，以甲醇平衡。将待纯化样品溶于6毫升甲醇中，以0.6毫升/分钟的流速上样吸附，然后用600毫升甲醇以0.6毫升/分钟的流速洗脱，每10毫升洗脱液收集1瓶，用正相硅胶薄层(德国莫克 高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（14：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；真空干燥后所得的白色粉末状样品为4-N-(4-氨基-2-氯吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素。 
4-N-(4-氨基-2-氯吡啶)-4-脱氧-鬼臼毒素：白色粉末,C27H25ClO7N2,524, 
1H NMR(300MHz,CDCL3):δ=3.079(s,2H;CH),3.747(s,6H;OCH3),3.789(s,3H;OCH3),3.836-3.867(d,J=9.3Hz,1H;CH2O),4.397(s,1H;CH2O),4.585(s,1H;CH),4.773-4.782(d,J=2.7Hz,1H;CH),5.958-5.981(d,J=6.9Hz,2H;OCH2O),6.291(s,2H;Ar-H),6.427(s,1H;Ar-H),6.523(s,2H;Ar-H),6.746(s,1H;Ar-H),7.956ppm(s,1H;Ar-H); 
13C NMR(75MHz,CDCL3):δ=38.117(CH),41.662(CH),43.491(CH),51.453(CH),56.264(OCH3),60.710(OCH3),68.137(CH2O),101.703(OCH2O),108.230(Ar-C),109.046(Ar-C),110.031(Ar-C),128.572(Ar-C),132.061(Ar-C),134.649(Ar-C),137.266(Ar-C),147.760(Ar-C),148.633(Ar-C),149.308(Ar-C),152.121(Ar-C),154.766(Ar-C),174.039ppm(OCO). 
实施例12  4-N-(2-氨基嘧啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素（化合物(12)）的合成和纯化 
(1)4-N-(2-氨基嘧啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素的合成：称取1mol4’-去甲基表鬼臼毒素C环4位的活化产物（预备实施例1所制备），45℃真空干燥2小时；氮气保护下，将干燥好的二氯甲烷加入四口瓶中，加入干燥好的4’-去甲基表鬼臼毒素C环4位的活化产物和1.2mol2-氨基嘧啶，然后加入2mol碳酸钡，常温条件下，搅拌反应48小时，将反应液旋干后所得即为4-N-(2-氨基嘧啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素粗产品。 
(2)分离和纯化4-N-(2-氨基嘧啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素： 
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化： 
(A)用正相硅胶柱(正相硅胶：中国青岛海洋化工有限公司，HG/T2354-92；分离系统：瑞士步琪等度快速色谱系统：色谱柱：瑞士步琪玻璃柱C-690，长460毫米，内径15毫米)或者相似极性柱分离；二氯甲烷：丙酮：乙酸乙酯（20：1：1）系统作为洗脱液，上样量2毫升，流速恒流1.0毫升/分钟；每2毫升洗脱液作为一个馏分进行收集。用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（10：1）系统作为展开剂，将Rf值0.5的馏分进行合并；将合并后的样品真空干燥，避光条件下保存于4℃的冰箱中作为供纯化样品。 
(B)用凝胶柱层析(凝胶：Sephadex LH-20；分离柱：玻璃柱，长480毫米，内径30毫米)分离；将处理好的Sephadex LH-20凝胶湿法装柱，以甲醇平衡。将待纯化样品溶于6毫升甲醇中，以0.6毫升/分钟的流速上样吸附，然后用600毫升甲醇以0.6毫升/分钟的流速洗脱，每10毫升洗脱液收集1瓶，用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（10：1）系统作为展开剂，将Rf值0.5的馏分进行合并；真空干燥后所得的白色粉末状样品为4-N-(2-氨基嘧啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素。 
4-N-(2-氨基嘧啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素：白色粉末，C25H23O7N3,477, 
1H NMR(300MHz,CDCL3):δ=2.960(s,2H;CH),3.698(s,6H;OCH3),3.756(s,1H;CH2O),4.311(s,1H;CH2O),4.531(s,1H;CH),5.226-5.279(sd,J=2.7Hz,1H;CH),5.861-5.893(d,J=9.6Hz,2H;OCH2O),6.259(s,3H;Ar-H),6.449(s,1H;Ar-H),6.551(s,1H;Ar-H),6.747(s,1H;Ar-H),8.099ppm(s,1H;NH); 
13C NMR(75MHz,CDCL3):δ=38.171(CH),42.187(CH),43.805(CH),50.248(CH),56.650(OCH3),69.578(CH2O),101.752(OCH2O),108.182(Ar-C),109.646(Ar-C),110.162(Ar-C),111.822(Ar-C),129.896(Ar-C),130.733(Ar-C),132.560(Ar-C),134.303(Ar-C),146.716(Ar-C),147.734(Ar-C),148.501(Ar-C),158.166(Ar-C),161.401 (Ar-C),174.985ppm(OCO). 
实施例13  4-N-(2-氨基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素（化合物(13)）的合成和纯化 
(1)4-N-(2-氨基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素的合成：称取1mol4’-去甲基表鬼臼毒素C环4位的活化产物（预备实施例1所制备），45℃真空干燥2小时；氮气保护下，将干燥好的二氯甲烷加入四口瓶中，加入干燥好的4’-去甲基表鬼臼毒素C环4位的活化产物和1.2mol2-氨基吡啶，然后加入2mol碳酸钡，常温条件下，搅拌反应48小时，将反应液旋干后所得即为4-N-(2-氨基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素粗产品。 
(2)分离和纯化4-N-(2-氨基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素： 
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化： 
(A)用正相硅胶柱(正相硅胶：中国青岛海洋化工有限公司，HG/T2354-92；分离系统：瑞士步琪等度快速色谱系统：色谱柱：瑞士步琪玻璃柱C-690，长460毫米，内径15毫米)或者相似极性柱分离；二氯甲烷：丙酮：乙酸乙酯（30：1：1）系统作为洗脱液，上样量2毫升，流速恒流1.0毫升/分钟；每2毫升洗脱液作为一个馏分进行收集。用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（10：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；将合并后的样品真空干燥，避光条件下保存于4℃的冰箱中作为供纯化样品。 
(B)用凝胶柱层析(凝胶：Sephadex LH-20；分离柱：玻璃柱，长480毫米，内径30毫米)分离；将处理好的Sephadex LH-20凝胶湿法装柱，以甲醇平衡。将待纯化样品溶于6毫升甲醇中，以0.6毫升/分钟的流速上样吸附，然后用600毫升甲醇以0.6毫升/分钟的流速洗脱，每10毫升洗脱液收集1瓶，用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（10：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；真空干燥后所得的白色粉末状样品为4-N-(2-氨基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素。 
4-N-(2-氨基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素：白色粉末，C26H24O7N2,476, 
1H NMR(300MHz,CD3OD):δ=3.030(s,2H;CH),3.707-3.737(d,J=9.0Hz,6H;OCH3),4.593(s,2H;CH2O),4.633(s,1H;CH),5.050(s,1H;CH),5.976(s,2H;OCH2O),6.249(s,2H;Ar-H),6.518(s,1H;Ar-H),6.826-6.848(d,J=6.6Hz,1H;Ar-H),6.983-7.028(d,J=13.5Hz,2H;Ar-H),7.792-7.813ppm(d,J=6.3Hz,2H;Ar-H); 
13C NMR(75MHz,CD3OD):δ=40.710(CH),41.832(CH),50.218(CH),51.317(CH),53.965(OCH3),59.109(CH2O),100.240(OCH2O),105.360(Ar-C),106.589(Ar-C),108.069(Ar-C),111.496(Ar-C),112.999(Ar-C),123.965(Ar-C),130.031(Ar-C),130.146(Ar-C),137.258(Ar-C),140.364(Ar-C),146.240(Ar-C),147.461(Ar-C),149.567(Ar-C),171.743ppm(OCO). 
实施例14  4-N-(2-氨基-3-甲基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素（化合物(14)）的合成和纯化 
(1)4-N-(2-氨基-3-甲基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素的合成：称取1mol4’-去甲基表鬼臼毒素C环4位的活化产物（预备实施例1所制备），45℃真空干燥2小时；氮气保护下，将干燥好的二氯甲烷加入四口瓶中，加入干燥好的4’-去甲基表鬼臼毒素C环4位的活化产物和1.2mol2-氨基-3-甲基吡啶，然后加入2mol碳酸钡，常温条件下，搅拌反应48小时，将反应液旋干后所得即为4-N-(2-氨基-3-甲基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素粗产品。 
(2)分离和纯化4-N-(2-氨基-3-甲基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素： 
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化： 
(A)用正相硅胶柱(正相硅胶：中国青岛海洋化工有限公司，HG/T2354-92；分离系统：瑞士步琪等度快速色谱系统：色谱柱：瑞士步琪玻璃柱C-690，长460毫米，内径15毫米)或者相似极性柱分离；二氯甲烷：丙酮：乙酸乙酯（25：1：1）系统作为洗脱液，上样量2毫升，流速恒流1.0毫升/分钟；每2毫升洗脱液作为一个馏分进行收集。用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（15：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；将合并后的样品真空干燥，避光条件下保存于4℃的冰箱中作为供纯化样品。 
(B)用凝胶柱层析(凝胶：Sephadex LH-20；分离柱：玻璃柱，长480毫米，内径30毫米)分离；将处理好的Sephadex LH-20凝胶湿法装柱，以甲醇平衡。将待纯化样品溶于6毫升甲醇中，以0.6毫升/分钟的流速上样吸附，然后用600毫升甲醇以0.6毫升/分钟的流速洗脱，每10毫升洗脱液收集1瓶，用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（15：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；真空干燥后所得的白色粉末状样品为4-N-(2-氨基-3-甲基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素。 
4-N-(2-氨基-3-甲基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素：白色粉末，C27H26O7N2,490, 
1H NMR(300MHz,CDCL3):δ=2.082(s,3H;CH3),3.080(s,2H;CH),3.775(s,6H;OCH3),4.295(s,1H;CH2O),4.419(s,1H;CH2O),4.601(s,1H;CH),5.292(s,1H;CH),5.476(s,1H;OH),5.963(s,2H;OCH2O),6.335(s,2H;Ar-H),6.533(s,1H;Ar-H),6.634(s,1H;Ar-H),6.800(s,1H;Ar-H),7.987-8.000ppm(d,J=3.9Hz,1H;Ar-H); 
13C NMR(75MHz,CDCL3):δ=17.213(CH3),38.349(CH),42.350(CH),43.894(CH),50.096(CH),56.595(OCH3),70.404(CH2O),101.745(OCH2O),107.933(Ar-C),109.420(Ar-C),110.163(Ar-C),114.236(Ar-C),130.885(Ar-C),132.843(Ar-C),134.058(Ar-C),137.702(Ar-C),145.391(Ar-C),146.620(Ar-C),147.792(Ar-C),148.364(Ar-C),156.053(Ar-C),175.517ppm(OCO). 
实施例15  4-N-(2-氨基-4-甲基吡啶)-4-脱氧-4′-去甲基表鬼臼毒素（化合物(15)）的合成和纯化 
(1)4-N-(2-氨基-4-甲基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素的合成：称取1mol4’-去甲基表鬼臼毒素C环4位的活化产物（预备实施例1所制备），45℃真空干燥2小时；氮气保护下，将干燥好的二氯甲烷加入四口瓶中，加入干燥好的4’-去甲基表鬼臼毒素C环4位的活化产物和1.2mol2-氨基-4-甲基吡啶，然后加入2mol碳酸钡，常温条件下，搅拌反应48小时，将反应液旋干后所得即为4-N-(2-氨基-4-甲基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素粗产品。 
(2)分离和纯化4-N-(2-氨基-4-甲基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素： 
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化： 
(A)用正相硅胶柱(正相硅胶：中国青岛海洋化工有限公司，HG/T2354-92；分离系统：瑞士步琪等度快速色谱系统：色谱柱：瑞士步琪玻璃柱C-690，长460毫米，内径15毫米)或者相似极性柱分离；二氯甲烷：丙酮：乙酸乙酯（35：1：1）系统作为洗脱液，上样量2毫升，流速恒流1.0毫升/分钟；每2毫升洗脱液作为一个馏分进行收集。用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（17：1）系统 作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；将合并后的样品真空干燥，避光条件下保存于4℃的冰箱中作为供纯化样品。 
(B)用凝胶柱层析(凝胶：Sephadex LH-20；分离柱：玻璃柱，长480毫米，内径30毫米)分离；将处理好的Sephadex LH-20凝胶湿法装柱，以甲醇平衡。将待纯化样品溶于6毫升甲醇中，以0.6毫升/分钟的流速上样吸附，然后用600毫升甲醇以0.6毫升/分钟的流速洗脱，每10毫升洗脱液收集1瓶，用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（17：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；真空干燥后所得的白色粉末状样品为4-N-(2-氨基-4-甲基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素。 
4-N-(2-氨基-4-甲基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素：白色粉末，C27H26O7N2,490, 
1H NMR(300MHz,CDCL3):δ=2.310(s,3H;CH3),3.057(s,1H;CH),3.136-3.198(dd,J=4.5Hz,J=4.5Hz,1H;CH),3.774(s,6H;OCH3),3.826-3.890(t,J=9.6Hz,1H;CH2O),4.354-4.407(t,J=8.4Hz,1H;CH2O),4.612-4.625(d,J=3.9Hz,1H;CH),5.175-5.179(d,J=1.2Hz,1H;CH),5.939-5.965(d,J=7.8Hz,2H;OCH2O),6.323(s,2H;Ar-H),6.391(s,1H;Ar-H),6.518(s,1H;Ar-H),6.542-6.559(d,J=5.1Hz,1H;Ar-H),6.763(s,1H;Ar-H),7.871ppm(s,1H;Ar-H); 
13C NMR(75MHz,CDCL3):δ=21.750(CH3),38.263(CH),42.070(CH),43.772(CH),50.578(CH),56.686(OCH3),69.224(CH2O),101.747(OCH2O),108.232(Ar-C),108.427(Ar-C),109.264(Ar-C),110.310(Ar-C),115.442(Ar-C),129.807(Ar-C),130.853(Ar-C),132.569(Ar-C),134.326(Ar-C),146.696(Ar-C),147.742(Ar-C),148.523(Ar-C),156.654(Ar-C),174.938ppm(OCO). 
实施例16  4-N-(2-氨基-5-甲基吡啶)-4-脱氧-4′-去甲基表鬼臼毒素（化合物(16)）的合成和纯化 
(1)4-N-(2-氨基-5-甲基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素的合成：称取1mol4’-去甲基表鬼臼毒素C环4位的活化产物（预备实施例1所制备），45℃真空干燥2小时；氮气保护下，将干燥好的二氯甲烷加入四口瓶中，加入干燥好的4’-去甲基表鬼臼毒素C环4位的活化产物和1.2mol2-氨基-5-甲基吡啶，然后加入2mol碳酸钡，常温条件下，搅拌反应48小时，将反应液旋干后所得即为4-N-(2-氨基-5-甲基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素粗产品。 
(2)分离和纯化4-N-(2-氨基-5-甲基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素： 
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化： 
(A)用正相硅胶柱(正相硅胶：中国青岛海洋化工有限公司，HG/T2354-92；分离系统：瑞士步琪等度快速色谱系统：色谱柱：瑞士步琪玻璃柱C-690，长460毫米，内径15毫米)或者相似极性柱分离；二氯甲烷：丙酮：乙酸乙酯（40：1：1）系统作为洗脱液，上样量2毫升，流速恒流1.0毫升/分钟；每2毫升洗脱液作为一个馏分进行收集。用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（20：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；将合并后的样品真空干燥，避光条件下保存于4℃的冰箱中作为供纯化样品。 
(B)用凝胶柱层析(凝胶：Sephadex LH-20；分离柱：玻璃柱，长480毫米，内径30毫米)分离；将处理好的Sephadex LH-20凝胶湿法装柱，以甲醇平衡。将待纯化样品溶于6毫升甲醇中，以0.6毫升/分钟的流速上样吸附，然后用600毫升甲醇以0.6毫升/分钟的流速洗脱，每10毫升洗脱液收集1瓶，用正相硅胶薄层(德国莫克 高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（20：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；真空干燥后所得的白色粉末状样品为4-N-(2-氨基-5-甲基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素。 
4-N-(2-氨基-5-甲基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素：白色粉末，C27H26O7N2,490, 
1H NMR(300MHz,CDCL3):δ=2.2508(s,3H;CH3),3.1450-3.1563(d,J=3.4Hz,2H;CH),3.8009(s,6H;OCH3),3.8554-3.9037(t,J=7.2Hz,1H;CH2O),4.3904-4.2999(t,J=5.9Hz,1H;CH2O),4.6233-4.6346(d,J=3.42Hz;1H;CH),5.0685(s,1H;OH),5.2166(S,1H;CH),5.9661-5.9925(d,J=7.9Hz,2H;OCH2O),6.3563(s,3H;Ar-H),6.4973-6.5413(t,J=6.6Hz,1H;Ar-H),6.8053(s,1H;Ar-H),7.3986-7.4192ppm(d,J=6.2Hz,1H;Ar-H),7.8795ppm(s,1H;NH); 
13C NMR(75MHz,CDCL3):δ=17.5684(CH3),38.3499(CH),42.0674(CH),43.7220(CH),50.5155(CH),56.6693(OCH3),69.5112(CH2O),101.7003(OCH2O),108.0346(Ar-C),109.3320(Ar-C),110.1703(Ar-C),122.8389(Ar-C),130.1427(Ar-C),130.8716(Ar-C),132.4534(Ar-C),134.1153(Ar-C),140.6713(Ar-C),146.6090(Ar-C),147.6149(Ar-C),148.3438(Ar-C),155.1592(Ar-C),175.2409ppm(OCO). 
实施例17  4-N-(2-氨基-4，6-二甲基吡啶)-4-脱氧-4′-去甲基表鬼臼毒（化合物(17)）的合成和纯化 
(1)4-N-(2-氨基-4，6-二甲基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素的合成：称取1mol4’-去甲基表鬼臼毒素C环4位的活化产物（预备实施例1所制备），45℃真空干燥2小时；氮气保护下，将干燥好的二氯甲烷加入四口瓶中，加入干燥好的4’-去甲基表鬼臼毒素C环4位的活化产物和1.2mol2-氨基-4，6-二甲基吡啶，然后加入2mol碳酸钡，常温条件下，搅拌反应48小时，将反应液旋干后所得即为4-N-(2-氨基-4，6-二甲基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素粗产品。 
(2)分离和纯化4-N-(2-氨基-4，6-二甲基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素： 
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化： 
(A)用正相硅胶柱(正相硅胶：中国青岛海洋化工有限公司，HG/T2354-92；分离系统：瑞士步琪等度快速色谱系统：色谱柱：瑞士步琪玻璃柱C-690，长460毫米，内径15毫米)或者相似极性柱分离；二氯甲烷：丙酮：乙酸乙酯（40：1：1）系统作为洗脱液，上样量2毫升，流速恒流1.0毫升/分钟；每2毫升洗脱液作为一个馏分进行收集。用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（20：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；将合并后的样品真空干燥，避光条件下保存于4℃的冰箱中作为供纯化样品。 
(B)用凝胶柱层析(凝胶：Sephadex LH-20；分离柱：玻璃柱，长480毫米，内径30毫米)分离；将处理好的Sephadex LH-20凝胶湿法装柱，以甲醇平衡。将待纯化样品溶于6毫升甲醇中，以0.6毫升/分钟的流速上样吸附，然后用600毫升甲醇以0.6毫升/分钟的流速洗脱，每10毫升洗脱液收集1瓶，用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（20：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；真空干燥后所得的白色粉末状样品为4-N-(2-氨基-4，6-二甲基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素。 
4-N-(2-氨基-4，6-二甲基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素：白色粉末，C28H28O7N2,504, 
1H NMR(300MHz,CDCL3):δ=2.415(s,3H;CH3),2.546(s,3H;CH3),3.211(s,1H;CH),3.781(s,6H;OCH3),3.888-3.918(d,J=9Hz,1H;CH2O),4.544(s,1H;CH2O),4.675(s,1H;CH),5.464(s,1H;CH),5.993(s,2H;OCH2O),6.396(s,2H;Ar-H),6.580(s,1H;Ar-H),6.685(s,1H;Ar-H),6.877(s,1H;Ar-H),6.932ppm(s,1H;Ar-H); 
13C NMR(75MHz,CDCL3):δ=18.664(CH3),20.798(CH3),38.037(CH),41.681(CH),43.579(CH),50.831(CH),55.606(OCH3),68.553(CH2O),101.852(OCH2O),108.172(Ar-C),109.099(Ar-C),109.717(Ar-C),114.882(Ar-C),128.571(Ar-C),130.505(Ar-C),132.793(Ar-C),134.597(Ar-C),147.461(Ar-C),147.850(Ar-C),148.829(Ar-C),153.392(Ar-C),175.536ppm(OCO). 
实施例18  4-N-(3-氨基吡啶)-4-脱氧-4′-去甲基表鬼臼毒素（化合物(18)）的合成和纯化 
(1)4-N-(3-氨基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素的合成：称取1mol4’-去甲基表鬼臼毒素C环4位的活化产物（预备实施例1所制备），45℃真空干燥2小时；氮气保护下，将干燥好的二氯甲烷加入四口瓶中，加入干燥好的4’-去甲基表鬼臼毒素C环4位的活化产物和1.2mol3-氨基吡啶，然后加入2mol碳酸钡，常温条件下，搅拌反应48小时，将反应液旋干后所得即为4-N-(3-氨基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素粗产品。 
(2)分离和纯化4-N-(3-氨基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素： 
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化： 
(A)用正相硅胶柱(正相硅胶：中国青岛海洋化工有限公司，HG/T2354-92；分离系统：瑞士步琪等度快速色谱系统：色谱柱：瑞士步琪玻璃柱C-690，长460毫米，内径15毫米)或者相似极性柱分离；二氯甲烷：丙酮：乙酸乙酯（42：1：1）系统作为洗脱液，上样量2毫升，流速恒流1.0毫升/分钟；每2毫升洗脱液作为一个馏分进行收集。用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（21：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；将合并后的样品真空干燥，避光条件下保存于4℃的冰箱中作为供纯化样品。 
(B)用凝胶柱层析(凝胶：Sephadex LH-20；分离柱：玻璃柱，长480毫米，内径30毫米)分离；将处理好的Sephadex LH-20凝胶湿法装柱，以甲醇平衡。将待纯化样品溶于6毫升甲醇中，以0.6毫升/分钟的流速上样吸附，然后用600毫升甲醇以0.6毫升/分钟的流速洗脱，每10毫升洗脱液收集1瓶，用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（21：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；真空干燥后所得的白色粉末状样品为4-N-(3-氨基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素。 
4-N-(3-氨基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素：白色粉末，C26H24O7N2,476, 
1H NMR(300MHz,CDCL3):δ=3.097(s,1H;CH),3.169-3.230(dd.J=3.6Hz,J=4.2Hz,1H;CH),3.816(s,6H;OCH3),3.931-3.994(t,J=9.3Hz,1H;CH2O),4.407-4.457(t,J=7.5Hz,1H;CH2O),4.629-4.643(d,J=4.2Hz,1H;CH),4.736(s,1H,CH),5.334(s,1H;OH),5.989-6.014(d,J=7.5Hz,2H;OCH2O),6.355(s,2H;Ar-H),6.566(s,1H;Ar-H),6.770(s,1H;Ar-H),6.956ppm(s,1H;Ar-H), 
13C NMR(75MHz,CDCL3):δ=38.640(CH),41.987(CH),43.521(CH),52.502(CH),56.630(OCH3),68.708(CH2O),101.789(OCH2O),108.093(Ar-C),109.236(Ar-C),110.157(Ar-C),119.166(Ar-C),129.961(Ar-C),130.519(Ar-C),132.220(Ar-C),134.368(Ar-C),146.724(Ar-C),147.784(Ar-C),148.565(Ar-C),174.784ppm(OCO). 
实施例19  4-N-(3-氨基-4-甲基吡啶)-4-脱氧-4′-去甲基表鬼臼毒素（化合物(19)）的合成和纯化 
(1)4-N-(3-氨基-4-甲基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素的合成：称取1mol4’-去甲基表鬼臼毒素C环4位的活化产物（预备实施例1所制备），45℃真空干燥2小时；氮气保护下，将干燥好的二氯甲烷加入四口瓶中，加入干燥好的4’-去甲基表鬼臼毒素C环4位的活化产物和1.2mol3-氨基-4-甲基吡啶，然后加入2mol碳 酸钡，常温条件下，搅拌反应48小时，将反应液旋干后所得即为4-N-(3-氨基-4-甲基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素粗产品。 
(2)分离和纯化4-N-(3-氨基-4-甲基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素： 
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化： 
(A)用正相硅胶柱(正相硅胶：中国青岛海洋化工有限公司，HG/T2354-92；分离系统：瑞士步琪等度快速色谱系统：色谱柱：瑞士步琪玻璃柱C-690，长460毫米，内径15毫米)或者相似极性柱分离；二氯甲烷：丙酮：乙酸乙酯（44：1：1）系统作为洗脱液，上样量2毫升，流速恒流1.0毫升/分钟；每2毫升洗脱液作为一个馏分进行收集。用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（22：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；将合并后的样品真空干燥，避光条件下保存于4℃的冰箱中作为供纯化样品。 
(B)用凝胶柱层析(凝胶：Sephadex LH-20；分离柱：玻璃柱，长480毫米，内径30毫米)分离；将处理好的Sephadex LH-20凝胶湿法装柱，以甲醇平衡。将待纯化样品溶于6毫升甲醇中，以0.6毫升/分钟的流速上样吸附，然后用600毫升甲醇以0.6毫升/分钟的流速洗脱，每10毫升洗脱液收集1瓶，用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（22：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；真空干燥后所得的白色粉末状样品为4-N-(3-氨基-4-甲基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素。 
4-N-(3-氨基-4-甲基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素：白色粉末，C27H26O7N2,490, 
1H NMR(300MHz,DMSO):δ=2.292(s,3H;CH3),3.205-3.262(d,J=17.1Hz,2H;CH),3.658(s,6H;OCH3),3.731(s,1H;CH2O),4.220-4.234(d,J=4.2Hz,1H;CH2O),4.450-4.470(d,J=6.0Hz,1H;CH),4.695(s,1H;CH),6.090(s,2H;OCH2O),6.248(s,1H;Ar-H),6.469(s,1H;Ar-H),6.607(s,1H;Ar-H),6.775(s,1H;Ar-H),6.993(s,1H;Ar-H),7.615-7.637(d,J=6.6Hz,1H;Ar-H),8.035ppm(s,1H;Ar-H); 
13C NMR(75MHz,DMSO):δ=17.9394(CH3),39.2284(CH),42.7871(CH),43.1011(CH),43.9035(CH),56.3936(OCH3),68.7582(CH2O),105.9355(OCH2O),108.7416(Ar-C),109.7035(Ar-C),110.3385(Ar-C),123.6171(Ar-C),129.5761(Ar-C),134.7187(Ar-C),135.3606(Ar-C),135.7304(Ar-C),140.1334(Ar-C),140.7753(Ar-C),147.6135(Ar-C),148.3950(Ar-C),149.4068(Ar-C),173.5079ppm(OCO). 
实施例20  4-N-(5-氨基-2-甲基吡啶)-4-脱氧-4′-去甲基表鬼臼毒素（化合物(20)）的合成和纯化 
(1)4-N-(5-氨基-2-甲基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素的合成：称取1mol4’-去甲基表鬼臼毒素C环4位的活化产物（预备实施例1所制备），45℃真空干燥2小时；氮气保护下，将干燥好的二氯甲烷加入四口瓶中，加入干燥好的4’-去甲基表鬼臼毒素C环4位的活化产物和1.2mol5-氨基-2-甲基吡啶，然后加入2mol碳酸钡，常温条件下，搅拌反应48小时，将反应液旋干后所得即为4-N-(5-氨基-2-甲基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素粗产品。 
(2)分离和纯化4-N-(5-氨基-2-甲基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素： 
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化： 
(A)用正相硅胶柱(正相硅胶：中国青岛海洋化工有限公司，HG/T2354-92；分离系统：瑞士步琪等度快速色谱系统：色谱柱：瑞士步琪玻璃柱C-690，长460毫米，内径15毫米)或者相似极性柱分离；二氯甲烷：丙酮： 乙酸乙酯（30：1：1）系统作为洗脱液，上样量2毫升，流速恒流1.0毫升/分钟；每2毫升洗脱液作为一个馏分进行收集。用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（15：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；将合并后的样品真空干燥，避光条件下保存于4℃的冰箱中作为供纯化样品。 
(B)用凝胶柱层析(凝胶：Sephadex LH-20；分离柱：玻璃柱，长480毫米，内径30毫米)分离；将处理好的Sephadex LH-20凝胶湿法装柱，以甲醇平衡。将待纯化样品溶于6毫升甲醇中，以0.6毫升/分钟的流速上样吸附，然后用600毫升甲醇以0.6毫升/分钟的流速洗脱，每10毫升洗脱液收集1瓶，用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（15：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；真空干燥后所得的白色粉末状样品为4-N-(5-氨基-2-甲基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素。 
4-N-(5-氨基-2-甲基吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素：白色粉末，C27H26O7N2,490, 
1H NMR(300MHz,CD3OD):δ=2.584(s,3H;CH3),3.156(s,2H;CH),3.730(s,6H;OCH3),3.828(s,1H;CH2O),4.459(s,1H;CH2O),4.598(s,1H;CH),4.994(s,1H;CH),5.929(s,2H;OCH2O),6.355(s,2H;Ar-H),6.506(s,1H;Ar-H),6.815(s,1H;Ar-H),7.561(s,1H;Ar-H),7.712(s,1H;Ar-H),8.025ppm(s,1H;Ar-H); 
13C NMR(75MHz,CD3OD):δ=17.381(CH3),38.729(CH),41.781(CH),43.561(CH),51.383(CH),55.589(OCH3),68.742(CH2O),101.724(OCH2O),108.188(Ar-C),109.144(Ar-C),109.531(Ar-C),123.078(Ar-C),128.072(Ar-C),129.834(Ar-C),130.717(Ar-C),132.377(Ar-C),134.543(Ar-C),136.049(Ar-C),140.817(Ar-C),145.495(Ar-C),147.415(Ar-C),175.909ppm(OCO). 
实施例21  4-N-(3-氨基-2-氯吡啶)-4-脱氧-4′-去甲基表鬼臼毒素（化合物(21)）的合成和纯化 
(1)4-N-(3-氨基-2-氯吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素的合成：称取1mol4’-去甲基表鬼臼毒素C环4位的活化产物（预备实施例1所制备），45℃真空干燥2小时；氮气保护下，将干燥好的二氯甲烷加入四口瓶中，加入干燥好的4’-去甲基表鬼臼毒素C环4位的活化产物和1.2mol3-氨基-2-氯吡啶，然后加入2mol碳酸钡，常温条件下，搅拌反应48小时，将反应液旋干后所得即为4-N-(3-氨基-2-氯吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素粗产品。 
(2)分离和纯化4-N-(3-氨基-2-氯吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素： 
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化： 
(A)用正相硅胶柱(正相硅胶：中国青岛海洋化工有限公司，HG/T2354-92；分离系统：瑞士步琪等度快速色谱系统：色谱柱：瑞士步琪玻璃柱C-690，长460毫米，内径15毫米)或者相似极性柱分离；二氯甲烷：丙酮：乙酸乙酯（36：1：1）系统作为洗脱液，上样量2毫升，流速恒流1.0毫升/分钟；每2毫升洗脱液作为一个馏分进行收集。用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（18：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；将合并后的样品真空干燥，避光条件下保存于4℃的冰箱中作为供纯化样品。 
(B)用凝胶柱层析(凝胶：Sephadex LH-20；分离柱：玻璃柱，长480毫米，内径30毫米)分离；将处理好的Sephadex LH-20凝胶湿法装柱，以甲醇平衡。将待纯化样品溶于6毫升甲醇中，以0.6毫升/分钟的流速上样 吸附，然后用600毫升甲醇以0.6毫升/分钟的流速洗脱，每10毫升洗脱液收集1瓶，用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（18：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；真空干燥后所得的白色粉末状样品为4-N-(3-氨基-2-氯吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素。 
4-N-(3-氨基-2-氯吡啶)-4-脱氧-4′-去甲基表鬼臼毒素：白色粉末；C26H28ClO7N2,510, 
1H NMR(300MHz,CDCL3):δ=3.061-3.085(t,J=3.6Hz,1H;CH),3.132-3.149(d,J=5.1Hz,1H;CH),3.796(s,9H;OCH3),3.841-3.876(d,J=10.5Hz,1H;CH2O),4.331-4.383(t,J=8.4Hz,1H;CH2O),4.565-4.585(d,J=6.0Hz,1H;CH),4.646-4.705(dd,J=4.8Hz,J=6.0Hz,1H;CH),5.479(s,1H;OH),5.994-6.001(d,J=2.1Hz,2H;OCH2O),6.338(s,2H;Ar-H),6.563(s,1H;Ar-H),6.734(s,1H;Ar-H),6.830-6.857(d,J=8.1Hz,1H;Ar-H),7.147-7.163(d,J=4.8Hz,1H;Ar-H),7.828ppm(s,1H;Ar-H); 
13C NMR(75MHz,CDCL3):δ=38.637(CH),42.126(CH),43.617(CH),52.536(CH),56.756(OCH3),68.489(CH2O),101.942(OCH2O),108.244(Ar-C),109.144(Ar-C),110.326(Ar-C),116.938(Ar-C),123.690(Ar-C),129.514(Ar-C),130.524(Ar-C),132.440(Ar-C),134.494(Ar-C),137.927(Ar-C),146.733(Ar-C),148.112(Ar-C),148.928(Ar-C),174.390ppm(OCO). 
实施例22  4-N-(4-氨基-2-氯吡啶)-4-脱氧-4′-去甲基表鬼臼毒素（化合物(22)）的合成和纯化 
(1)4-N-(4-氨基-2-氯吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素的合成：称取1mol4’-去甲基表鬼臼毒素C环4位的活化产物（预备实施例1所制备），45℃真空干燥2小时；氮气保护下，将干燥好的二氯甲烷加入四口瓶中，加入干燥好的4’-去甲基表鬼臼毒素C环4位的活化产物和1.2mol4-氨基-2-氯吡啶，然后加入2mol碳酸钡，常温条件下，搅拌反应48小时，将反应液旋干后所得即为4-N-(4-氨基-2-氯吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素粗产品。 
(2)分离和纯化4-N-(4-氨基-2-氯吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素： 
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化： 
(A)用正相硅胶柱(正相硅胶：中国青岛海洋化工有限公司，HG/T2354-92；分离系统：瑞士步琪等度快速色谱系统：色谱柱：瑞士步琪玻璃柱C-690，长460毫米，内径15毫米)或者相似极性柱分离；二氯甲烷：丙酮：乙酸乙酯（28：1：1）系统作为洗脱液，上样量2毫升，流速恒流1.0毫升/分钟；每2毫升洗脱液作为一个馏分进行收集。用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（14：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；将合并后的样品真空干燥，避光条件下保存于4℃的冰箱中作为供纯化样品。 
(B)用凝胶柱层析(凝胶：Sephadex LH-20；分离柱：玻璃柱，长480毫米，内径30毫米)分离；将处理好的Sephadex LH-20凝胶湿法装柱，以甲醇平衡。将待纯化样品溶于6毫升甲醇中，以0.6毫升/分钟的流速上样吸附，然后用600毫升甲醇以0.6毫升/分钟的流速洗脱，每10毫升洗脱液收集1瓶，用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；二氯甲烷：甲醇（14：1）系统作为展开剂，将Rf值0.7的馏分进行合并；真空干燥后所得的白色粉末状样品为4-N-(4-氨基-2-氯吡啶)-4-脱氧-4’-去甲基表鬼臼毒素。 
4-N-(4-氨基-2-氯吡啶)-4-脱氧-4′-去甲基表鬼臼毒素：白色粉末；C26H28ClO7N2,510, 
1H NMR(300MHz,DMSO):δ=3.016(s,2H;CH),3.585(s,6H;OCH3),4.158(s,1H;CH2O),4.335(s,1H;CH2O),4.477(s,1H;CH),4.941(s,1H;CH),5.902-5.927(d,J=7.5Hz,2H;OCH2O),6.202(s,2H;Ar-H),6.485(s,1H; Ar-H),6.599-6.657(d,J=17.4Hz,1H;Ar-H),6.732(s,1H;Ar-H),7.219-7.242(d,J=6.9Hz,1H;Ar-H),7.811(s,1H;Ar-H),8.413ppm(s,1H;NH); 
13C NMR(75MHz,DMSO):δ=38.516(CH),41.442(CH),43.356(CH),50.277(CH),56.692(OCH3),68.790(CH2O),101.933(OCH2O),109.051(Ar-C),109.811(Ar-C),109.980(Ar-C),130.491(Ar-C),130.800(Ar-C),132.685(Ar-C),135.245(Ar-C),147.231(Ar-C),1447.794(Ar-C),148.047(Ar-C),156.234(Ar-C),175.310ppm(OCO). 
试验例1本发明化合物抑制肿瘤细胞的活性试验 
一、试验材料 
1、供试化合物：实施例1-22所制备的化合物，分别编号为化合物（1）、化合物（2）、化合物（3），化合物（4），化合物（5），化合物（6），化合物（7），化合物（8），化合物（9），化合物（10），化合物（11），化合物（13），化合物（13），化合物（14），化合物（15），化合物（16），化合物（17），化合物（18），化合物（19），化合物（20），化合物（21）和化合物（22）。 
2、对照化合物：鬼臼毒素或4′-去甲基表鬼臼毒素； 
3、细胞株：A549、BGC823和Hela细胞株购自武汉博士得生物科技有限公司； 
二、试验方法 
将对数生长期的A549、BGC823、Hela细胞株，1000rpm离心5分钟，弃上清，适量培养基悬浮，调整细胞浓度至3.5×104/孔。将细胞接种于96孔培养板中，分成阴性对照组和23个同浓度同序列的试验组，即：化合物（1）组，化合物（2）组，化合物（3）组，化合物（4）组，化合物（5）组，化合物（6）组，化合物（7）组，化合物（8）组，化合物（9）组，化合物（10）组，化合物（11）组，化合物（12）组，化合物（13）组，化合物（14）组，化合物（15）组，化合物（16）组，化合物（17）组，化合物（18）组，化合物（19）组，化合物（20）组，化合物（21）组，化合物（22）组和阳性对照依托泊苷组；每孔0.10mL细胞，用含有10%小牛血清的RPMI1640作为培养液，37℃、5%CO2及饱和湿度下培养24h接近长满时，弃去培养液，分别加入含化合物（1），化合物（2），化合物（3），化合物（4），化合物（5），化合物（6），化合物（7），化合物（8），化合物（9），化合物（10），化合物（11），化合物（13），化合物（13），化合物（14），化合物（15），化合物（16），化合物（17），化合物（18），化合物（19），化合物（20），化合物（21），化合物（22）或依托泊苷的10%小牛血清的RPMI1640培养液0.10ml(阴性对照组加入终浓度为0.5%DMSO)；各组均设3个复孔，继续培养48h，每孔加入5mg/ml的MTT10μl,37℃放置4h。每孔加入100μl DMSO，37℃摇床振荡30min，492nm测吸光度（OD），计算MTT比值＝药物组OD值/阴性对照组OD值。 
三、试验结果 
试验结果见表1。 
由表1可知，本发明氮取代鬼臼类衍生物化合物的抗肿瘤活性比鬼臼毒素以及4′-去甲基表鬼臼毒素的抗肿瘤活性有明显提升。 
表1本发明氮取代鬼臼类衍生物体外对肿瘤细胞株的IC50值 
Figure BDA0000414629360000231
。

Claims (10)

1.具有抗肿瘤活性的氮取代鬼臼类衍生物或其盐，其特征在于，其结构式为式(Ⅴ)所示：
Figure FDA0000414629350000011
其中，R为氢或CH3；R1为嘧啶类衍生物或吡啶类衍生物。
2.按照权利要求1所述的氮取代鬼臼类衍生物，其特征在于：
所述嘧啶类衍生物是
Figure FDA0000414629350000012
所述的吡啶类衍生物选自以下功能基团中的任意一种
Figure FDA0000414629350000014
或
Figure FDA0000414629350000015
3.一种制备权利要求1或2所述氮取代鬼臼类衍生物的方法，其特征在于，包括以下步骤：通过氮取代反应，将2-氨基嘧啶、2-氨基吡啶、2-氨基-3-甲基吡啶、2-氨基-4-甲基吡啶、2-氨基-5-甲基吡啶、2-氨基-4，6-二甲基吡啶、3-氨基吡啶、3-氨基-4-甲基吡啶、5-氨基-2-甲基吡啶、3-氨基-2-氯吡啶或4-氨基-2-氯吡啶引入到鬼臼毒素类化合物的C环4位，得到氮取代鬼臼类衍生物粗产物。
4.按照权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的氮取代反应包括：（1）将鬼臼毒素类化合物的C环4位活化；（2）将C环4位活化后的鬼臼毒素类化合物溶于有机溶剂中，加入2-氨基嘧啶、2-氨基吡啶、2-氨基-3-甲基吡啶、2-氨基-4-甲基吡啶、2-氨基-5-甲基吡啶、2-氨基-4，6-二甲基吡啶、3-氨基吡啶、3-氨基-4-甲基吡啶、5-氨基-2-甲基吡啶、3-氨基-2-氯吡啶或4-氨基-2-氯吡啶，搅拌进行氮取代反应；
优选的，鬼臼毒素类化合物与2-氨基嘧啶、2-氨基吡啶、2-氨基-3-甲基吡啶、2-氨基-4-甲基吡啶、2-氨基-5-甲基吡啶、2-氨基-4，6-二甲基吡啶、3-氨基吡啶、3-氨基-4-甲基吡啶、5-氨基-2-甲基吡啶、3-氨基-2-氯吡啶或4-氨基-2-氯吡啶的摩尔比为1:1.2。
5.按照权利要求4所述的方法，其特征在于：鬼臼毒素类化合物C环4位的活化方式是用溴化氢对鬼臼毒素类化合物C环4位进行活化；更优选的，所述的活化方式包括以下步骤：将鬼臼毒素类化合物干燥，在氮气保护下，加入溴化氢；冰浴条件下反应半小时。
6.按照权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤（2）中所述的有机溶剂优选为二氯甲烷；所述的搅拌为在真空条件下进行搅拌，其搅拌转速为50-800转/分钟，优选为600转/分钟；所述的氮取代反应温度为常温；所述的氮取代反应时间为24-48小时。
7.按照权利要求3所述的方法，其特征在于所述鬼臼毒素类化合物包括鬼臼毒素或4′-去甲基表鬼臼毒素。
8.按照权利要求3所述的方法，其特征在于，还包括：(1)将氮取代鬼臼类衍生物粗产物旋转蒸发浓缩，用乙酸乙酯提取过滤得滤渣，再用体积比为1:1的二氯甲烷：甲醇复溶，真空干燥，得到待分离纯化样品；(2)将待分离纯化样品依次使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离；
优选的，所述的硅胶柱层析的分离方法包括：(1)硅胶柱层析为正相硅胶柱层析，正相硅胶以低极性有机溶剂拌匀后装柱，以洗脱剂平衡；所述的洗脱剂优选是由体积比为20:1:1的二氯甲烷、丙酮和乙酸乙酯组成；(2)将待分离纯化的样品以洗脱液溶解，进行上样吸附，然后进行梯度洗脱，收集洗脱液，将样品挥干并重结晶；
优选的，所述的凝胶柱层析分离方法包括：(1)以甲醇为洗脱剂，凝胶以洗脱剂浸泡，装柱，以洗脱剂平衡；(2)将经硅胶柱层析初步分离后的样品溶于以上洗脱剂中，进行上样吸附，洗脱，收集洗脱液，将样品中溶剂挥干并重结晶。
9.权利要求1或2所述氮取代鬼臼类衍生物或其盐在制备抗肿瘤药物中的用途。
10.一种抗肿瘤的药物组合物，其特征在于：包括有效量的权利要求1或2所述的氮取代鬼臼类衍生物或其盐和药学上可接受的载体。
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