CN102295648B - 斑蝥素酸钙及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种斑蝥素酸钙及其制备方法，其结构式(I)如下。其制备方法是按1：30-50的重量比在斑蝥素纯品中加入三氯甲烷或异丙醇，加热使其溶解；同时取斑蝥素纯品：氢氧化钙摩尔比为3：2的氢氧化钙加入到与三氯甲烷或异丙醇等体积的蒸馏水中制成悬浊液；将氢氧化钙悬浊液加入到溶解斑蝥素的三氯甲烷溶液或异丙醇溶液中，加热到60-75℃后，将三氯甲烷或异丙醇挥干，得白色悬浮液；置烘箱中浓缩，干燥，得白色结晶粉末；按1：30-50的重量比将三氯甲烷或异丙醇加入到白色结晶粉末中，加热到40℃保持此温度使斑蝥素溶解，过滤，干燥，得白色结晶粉末，即得。本发明具有较高抗癌活性，工艺简单，易于操作，安全性好，成品性能稳定，纯度高的特点。

Description

斑蝥素酸钙及其制备方法

技术领域

本发明属于化学技术领域，特别涉及一种斑蝥素酸钙，同时还涉及该斑蝥素酸钙的制备方法。

背景技术

在公元一，二世纪我国就开始使用斑蝥来治疗肿瘤。后被证实斑蝥分泌的斑蝥素及斑蝥素衍生物为主要有效物质。因斑蝥素不溶于水常被用作口服药物应用，这样限制了斑蝥素的应用范围，后人们开发出了斑蝥素酸钠来增加水溶性同时降低了毒性，利用这一优良属性，开发出了斑蝥素酸钠注射液，可以直接注射应用，目前斑蝥素酸钠注射液已经成功应用于临床，并取得了显著的效果。但是斑蝥素酸钠在降低毒性的同时，抗癌活性随着极大的降低，这迫切需要开发其他新的具有更高抗癌活性的斑蝥素衍生物来解决这一问题。

发明内容

本发明的目的在于克服上述缺点而提供的一种具有较高抗癌活性，工艺简单，易于操作，安全性好，成品性能稳定，纯度高的斑蝥素酸钙。

本发明的另一目的在于提供该斑蝥素酸钙的制备方法。

本发明的斑蝥素酸钙，其结构式(I)为： 

(I)

本发明的一种斑蝥素酸钙的制备方法，包括如下步骤：

（1）按1：30-50的重量比在斑蝥素纯品中加入三氯甲烷或异丙醇，加热使其溶解，同时取斑蝥素纯品：氢氧化钙摩尔比为3：2的氢氧化钙加入到与三氯甲烷或异丙醇等体积的蒸馏水中制成悬浊液； 

（2）将氢氧化钙悬浊液加入到溶解斑蝥素的三氯甲烷溶液或异丙醇溶液中，加热到60-75℃后，将三氯甲烷或异丙醇挥干，过滤，得白色悬浮液；置烘箱中浓缩，干燥，得白色结晶粉末； 

（3）按30-50：1的重量比将三氯甲烷或异丙醇加入到白色结晶粉末中，加热到40℃保持此温度使斑蝥素溶解，过滤，干燥，得白色结晶粉末，即得。

本发明与现有技术相比，具有明显的有益效果，由以上技术方案可知：本发明具有工艺简单，易于操作，得到的斑蝥素酸钙是斑蝥素的一类衍生物，具有与斑蝥素相似的抗肿瘤机制，实验证明其具有较高的抗癌活性。且分子量小，易入癌细胞内，产生细胞毒作用，因而具有较强的抗肿瘤作用，是一种较为理想的抗癌药物。在临床上可主要用于晚期原发性肝癌及晚期肺癌的治疗，且其安全性好。本方法制得的成品性质稳定，纯度高。由于其具有较好的水溶性，可应用于针剂、溶液剂、软膏剂等多种剂型的抗肿瘤药物生产。

具体实施方式

以下通过实施例及实验例来进一步说明本发明方法的有益效果。

实施例1：

一种斑蝥素酸钙的制备方法，包括如下步骤：

（1）在50ml的三角烧瓶中加入斑蝥素纯品1g，加入30ml三氯甲烷溶液，加热使其溶解，同时取氢氧化钙0.2 g加30ml蒸馏水制成悬浊液；

（2）将氢氧化钙悬浊液加入到溶解斑蝥素的三氯甲烷溶液中，加热到60℃，将三氯甲烷挥干，过滤，得白色悬浮液；置烘箱中浓缩，干燥，得白色结晶粉末；

（3）将30ml的三氯甲烷加入到白色结晶粉末中，加热到40℃保持 2小时，使斑蝥素溶解，过滤，干燥，得白色结晶粉末即为斑蝥素酸钙纯品。

实施例2：

一种斑蝥素酸钙的制备方法，包括如下步骤：

（1）在100ml的三角烧瓶中加入斑蝥素纯品1g，加入50 ml异丙醇溶液，加热使其溶解，同时取氢氧化钙0.2 g加30ml蒸馏水制成悬浊液；

（2）将氢氧化钙悬浊液加入到溶解斑蝥素的异丙醇溶液中，加热到75 ℃，将异丙醇挥干，过滤，得白色悬浮液；置烘箱中浓缩，干燥，得白色结晶粉末；

（3）将50ml的异丙醇加入到白色结晶粉末中（或将白色结晶粉末加入到50ml的异丙醇中），加热到40℃ 保持2小时，使斑蝥素溶解，过滤，干燥，得白色结晶粉末即为斑蝥素酸钙纯品。

 实验例1：产品纯度检查

 斑蝥素酸钙没有国家规定的质量测定标准，故在此参照斑蝥素酸钠国家药品标准[标准号：WS-10001-(HD-0044)-2002]的测定方法进行测定。

 含量测定

 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇—水（51：49）为流动相；流速为1.0ml/min；检测波长为227nm；灵敏度为0.005AUFS。理论板数按斑蝥素峰计算，应不低于2000。

 对照品溶液的制备：取斑蝥素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含斑蝥素0.15mg的溶液，作为对照品溶液。

供试品溶液的制备：精密称取本品10mg，至100ml烧瓶中，加50ml水，再加1mol/L H₂SO₄溶液10ml，摇匀，置65℃水浴中回流30分钟，稍冷后移于分液漏斗中，用三氯甲烷25 ml、15 ml、10 ml萃取三次，每次10分钟，合并萃取液，置70℃水浴中挥干溶剂，残渣用甲醇转容至50 ml量瓶中，定容，摇匀，即为供试品溶液。

测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，以外标法计算斑蝥素含量，再乘以1.29（斑蝥素酸钙的分子量/斑蝥素的分子量），即得斑蝥素酸钙含量。

检测结果实施例1、2得到的斑蝥素酸钙纯度在90%以上。

实验例2：用MTT法测定斑蝥素酸钙对癌细胞的抑制中浓度

用0.02% EDTA溶液消化细胞，经吹打、收集、离心后制成细胞悬液，调整细胞浓度为SGC7901细胞或肝癌QGY-7703细胞8 0000个/ mL，以每孔100μL接种于96孔板中，置于37℃、5%CO₂温箱中过夜，使细胞长满底面；去掉培养液，然后分别加入100 μL 系列含不同药物（分别为斑蝥素、斑蝥素酸钠、斑蝥素酸钙）浓度的DMEM培养液（斑蝥素处理组含0.5%丙酮），每个浓度复设4孔；在37℃CO₂温箱中孵育24 h后，每孔加入已经配制好的WST-1溶液20μL，避光于5% CO₂培养箱中，37℃培养2h，酶标仪检测每孔的吸光度（A）值，波长450nm；分别设无药对照组（培养液中有细胞，斑蝥素处理组含0.5%丙酮）和空白对照组（培养液中无细胞，斑蝥素处理组含0.5%丙酮）。

抑制率的计算公式如下：

抑制率%＝[1-(药物组OD值－空白对照OD值)/(对照OD值－空白对照OD值)]×100%

    用回归曲线求50%细胞抑制率时的药物浓度（IC₅₀）。

经检测，斑蝥素酸钙对肝癌QGY-7703的抑制中浓度（IC₅₀）为15.68 μmol/L，略低于斑蝥素，高于斑蝥素酸钠的活性。斑蝥素酸钙对胃癌SGC7901细胞的抑制中浓度（IC₅₀）为22.45 μmol/L，略低于同时测定的斑蝥素，高于斑蝥素酸钠的活性。 

Claims (1)

1.一种斑蝥素酸钙的制备方法，包括如下步骤：

（1）按1：30-50的重量比在斑蝥素纯品中加入三氯甲烷或异丙醇，加热使其溶解，同时取斑蝥素纯品：氢氧化钙摩尔比为3：2的氢氧化钙加入到与三氯甲烷或异丙醇等体积的蒸馏水中制成悬浊液； 

（2）将氢氧化钙悬浊液加入到溶解斑蝥素的三氯甲烷溶液或异丙醇溶液中，加热到60-75℃后，将三氯甲烷或异丙醇挥干，过滤，得白色悬浮液；置烘箱中浓缩，干燥，得白色结晶粉末； 

（3）按30-50：1的重量比将三氯甲烷或异丙醇加入到白色结晶粉末中，加热到40℃保持此温度使斑蝥素溶解，过滤，干燥，得白色结晶粉末，即得。