CN101786952B

CN101786952B - 一种蒽醌类化合物及其赖氨酸盐的制备方法及医药用途

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Publication number: CN101786952B
Application number: CN 201010110523
Authority: CN
Inventors: 李玉新; 张玉伟; 孟祥颖; 鲍永利; 林华; 郑丽华; 乌垠; 于春雷
Original assignee: Northeast Normal University
Current assignee: Northeast Normal University
Priority date: 2010-02-10
Filing date: 2010-02-10
Publication date: 2013-11-06
Anticipated expiration: 2030-02-10
Also published as: CN101786952A

Abstract

本发明涉及一种蒽醌类化合物楸皮酸及其结构修饰物赖氨楸皮酸，其结构通式如式(1)所示。本发明提供了上述两种化合物的制备方法，蒽醌类化合物楸皮酸为从核桃楸中提取所得，赖氨楸皮酸是将楸皮酸进行结构修饰和改造所得。同时本发明还涉及这两种化合物作为药物，尤其是作为抗肿瘤药物的用途。

Description

一种蒽醌类化合物及其赖氨酸盐的制备方法及医药用途

发明领域

本发明涉及一种蒽醌类化合物楸皮酸及其衍生物赖氨楸皮酸，同时还公开了它们的制备方法，以及它们的医学用途，属于中药新药研发领域。

背景技术

恶性肿瘤是严重威胁人类健康的常见病、多发病。目前药物治疗仍然是癌症的主要治疗方法之一，但现有的化疗药物由于存在耐药性和毒副作用等诸多问题，致使癌症药物治疗的效果并不理想，因此寻找高效、低毒的抗癌药物成为人们关注的焦点。近几十年来，从天然产物中寻找理想的抗肿瘤药物或药物前体已成为研究的热点，并且很多来源于天然产物的肿瘤治疗药物已经上市。

核桃楸(Juglans mandshurica Maxim)，又名胡桃楸、楸子树、山核桃(东北)，为胡桃科胡桃属植物，是我国重要的药源植物之一，多年来在中国、韩国的民间用于治疗癌症。本发明涉及的蒽醌类化合物--1，5-二羟基-3-羧基-9，10-蒽醌(以下称为：楸皮酸)，是采用活性追踪分离的方法，从核桃楸中分离得到的化合物，此化合物为首次从天然植物中提取出来的化合物，我们的研究结果显示，此化合物具有较好的抗肿瘤活性。

楸皮酸为含有一个游离羧基的芳香类化合物，水溶性不是很好，导致药品的生物利用度低，为增加楸皮酸的水溶性，提高其生物利用度，本发明制备了水溶性更好的楸皮酸的赖氨酸盐，即赖氨楸皮酸。我们进一步的研究结果表明，赖氨楸皮酸亦具有较好的抗肿瘤活性。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种通式为(1)的化合物楸皮酸及其衍生物赖氨楸皮酸。

其中R可为COOH，亦可为COO^-+NH₃(CH₂)₄CH(NH₂)COOH

当R为COOH时，此化合物为楸皮酸，其结构式如式(2)所示：

所述化合物为粉末状物质，分子式为C₁₅H₈O₆，分子量为284，为新的天然化合物。

当R为COO^-+NH₃(CH₂)₄CH(NH₂)COOH时，此化合物为赖氨楸皮酸，其结构式如式(3)所示》：

所述化合物为一种结晶状物质，分子式为C₂₁H₂₂N₂O₈，分子量为430，系楸皮酸的羧基与赖氨酸的氨基结合形成的稳定盐的结构，是一种新的化合物。

本发明的目的之二是提供一种提取纯化楸皮酸的方法。其主要技术特征如下：

(a)取核桃楸(Juglans Mandshurica Maxim.)茎皮、枝叶、花、果实、根或根皮的干燥粗粉；

(b)用所取原料质量的8-10倍的浓度为10～95％(V/V)醇溶液连续回流提取2～4次，每次2-4小时，合并提取液，减压浓缩得黑色浸膏；

(c)将浸膏悬浮于去离子水中得混悬液，将该混悬液依次用等体积的石油醚、氯仿各萃取3-5次，分别合并各萃取层，减压浓缩。将所得氯仿萃取物再经过减压硅胶柱层析，反复重结晶得到楸皮酸。所得产品通过核磁共振等方法进行结构鉴定。

本发明的目的之三是提供一种制备新化合物赖氨楸皮酸的方法，其特征在于：

(a)向反应容器中加入楸皮酸和赖氨酸，楸皮酸与赖氨酸的摩尔比控制在1∶(2～5)；

(b)再向容器中加入质量为楸皮酸100～300倍的水，搅拌反应，至反应液变为澄清透明的液体；反应温度控制在20～40℃之间，反应时间在3～60小时范围内；

(c)反应完毕后将反应容器置入冰水混合物中，边搅拌边向反应液中缓慢滴加无水乙醇或丙酮，滴加时间控制在30～70分钟，直至溶液出现紫红色晶体，停止加入无水乙醇或丙酮以使反应液析出晶体，最终加入的析晶溶液无水乙醇或丙酮的体积为整个反应体系的60～90％；

(d)将反应容器置入-80～0℃冰箱中12～48小时析出晶体，并用无水乙醇或丙酮洗涤晶体数次，直至洗液无色，干燥，保存。所得产物通过核磁共振等方法进行结构鉴定。

采用本发明合成出的赖氨楸皮酸纯度高，水溶性好，在水中的溶解度为1.39g，而楸皮酸微溶于水；另外赖氨楸皮酸的晶体稳定性好，不加任何稳定剂就可以达到作为商品使用和储存的要求。

本发明的目的之四是提供一种通式为(I)的化合物及其衍生物在制备药物方面的用途，尤其是在制备抗肿瘤药物方面的用途。

本发明的楸皮酸及赖氨楸皮酸在肿瘤治疗中的用途是通过以下方式证明的：

1.楸皮酸的体外抗肿瘤活性研究

采用MTT方法进行楸皮酸的体外抗肿瘤活性研究。分别各肿瘤细胞于96孔板中，细胞密度为5×10⁴个/ml；次日加入楸皮酸，浓度分别为100μg/ml、10μg/ml、1μg/ml药物用DMSO进行稀释，同时设DMSO对照组，每组设3复孔，给药容积为100μl/孔；细胞在含5％CO₂的37℃培养箱继续培养44h后，每孔加20μl MTT(5mg/ml)，继续培养4h；吸弃上清，每孔加入100μl DMSO，在酶标仪上，振动600s，检测570nm处的OD值；独立实验重复三次以上。结果显示，本发明所提到的楸皮酸对多种肿瘤细胞株，包括人肝癌细胞HepG2、人肝癌耐药细胞(HepG2/ADM)、人白血病细胞K562、人结肠癌细胞HCT-8细胞、人乳腺癌细胞MCF-7、人肺癌细胞A549、人胃癌细胞SGC7901、宫颈癌Hela和前列腺癌PC-3均有不同程度的增殖抑制作用，在楸皮酸为10μg/ml时对人肝癌细胞(HepG2)、人肝癌耐药细胞(HepG2/ADM)、人结肠癌细胞(HCT-8)、人肺癌细胞(A549)的抑制率均达到50％以上，而在此浓度下对正常细胞L02的影响较小，表明楸皮酸在一定安全范围内，对体外培养的肿瘤细胞有增殖抑制作用，结果见表1。

表1 楸皮酸对实验用肿瘤细胞的抑制率

2.赖氨楸皮酸的体外抗肿瘤活性研究

采用MTT方法进行体外抗肿瘤活性研究。分别各肿瘤细胞于96孔板中，细胞密度为5×10⁴个/ml；次日加入赖氨楸皮酸，浓度分别为100μg/ml、10μg/ml、1μg/ml药物用DMSO进行稀释，同时设DMSO对照组，每组设3复孔，给药容积为100μl/孔；细胞在含5％CO₂的37℃培养箱继续培养44h后，每孔加20μl MTT(5mg/ml)，继续培养4h；吸弃上清，每孔加入100μl DMSO，在酶标仪上，振动600s，检测570nm处的OD值；独立实验重复三次以上。结果显示，本发明所提到的赖氨楸皮酸对多种肿瘤细胞株，包括人肝癌细胞HepG2、人肝癌耐药细胞(HepG2/ADM)、人白血病细胞K562、人结肠癌细胞HCT-8细胞、人乳腺癌细胞MCF-7、人肺癌细胞A549、人胃癌细胞SGC7901、宫颈癌Hela和前列腺癌PC-3均有不同程度的增殖抑制作用。在赖氨楸皮酸为10μg/ml时，对人肝癌细胞(HepG2)、人肝癌耐药细胞(HepG2/ADM)、人结肠癌细胞(HCT-8)、人肺癌细胞(A549)的抑制率略优于楸皮酸，而对正常细胞L02的影响较小，表明赖氨楸皮酸在一定安全范围内，对体外培养的肿瘤细胞有增殖抑制作用。赖氨楸皮酸在高、中、低三个浓度下对HepG2、HepG2/ADM、HCT-8、A549、K562及L02的抑制率见表2.

表2 赖氨楸皮酸对实验用肿瘤细胞的抑制率

3.楸皮酸及赖氨楸皮酸的体内抗肿瘤活性研究

将5×10⁶个肿瘤细胞接种于BALB/c(nu/nu)裸鼠背部皮下。于肿瘤接种后10天开始静脉注射楸皮酸或赖氨楸皮酸0.3mg/kg/天，共注射15天，对照组则注射等体积的生理盐水。30天后处死动物，剥取肿瘤称重，计算抑瘤率，抑瘤率(％)＝[肿瘤对照组平均瘤重-治疗组平均瘤重]/肿瘤对照组平均瘤重×100％。结果显示，注射楸皮酸及赖氨楸皮酸均具有明显的体内抑瘤作用。

表3.楸皮酸对HepG2移植瘤生长的影响

分组动物数体重(克) 瘤重(克) 抑瘤率(％) P值

对照组 12 21.1±1.5 1.5±0.2

楸皮酸组 12 20.8±2.1 0.6±0.1 60.00 ＜0.01

赖氨楸皮酸组 12 21.3±1.7 0.5±0.1 66.67 ＜0.01

表4.楸皮酸对HepG2/ADM移植瘤生长的影响

分组动物数体重(克) 瘤重(克) 抑瘤率(％) P值

对照组 12 20.2±1.1 1.6±0.1

楸皮酸组 12 19.5±1.8 0.8±0.3 50.00 ＜0.01

赖氨楸皮酸组 12 21.3±1.3 0.6±0.1 62.50 ＜0.01

表5.楸皮酸对HCT-8移植瘤生长的影响

分组动物数体重(克) 瘤重(克) 抑瘤率(％) P值

对照组 12 20.4±1.1 2.3±0.2

楸皮酸组 12 20.6±1.4 1.0±0.1 56.52 ＜0.01

赖氨楸皮酸组 12 21.4±1.3 0.9±0.3 60.87 ＜0.01

表6.楸皮酸对A549移植瘤生长的影响

分组动物数体重(克) 瘤重(克) 抑瘤率(％) P值

对照组 12 20.2±1.3 1.9±0.2

楸皮酸组 12 21.1±1.1 1.1±0.1 42.10 ＜0.01

赖氨楸皮酸组 12 21.4±1.3 0.9±0.1 52.10 ＜0.01

表7.楸皮酸对K562荷瘤鼠生存期的影响

分组动物数平均生存时期(天) 生命延长率(％) P值

对照组 12 6.2±2.1

楸皮酸组 12 10.5±2.2 69.35 ＜0.01

赖氨楸皮酸组 12 12.1±1.3 95.16 ＜0.01

表8.楸皮酸对MCF-7移植瘤生长的影响

分组动物数体重(克) 瘤重(克) 抑瘤率(％) P值

对照组 12 20.1±1.5 1.9±0.2

楸皮酸组 12 19.9±1.2 1.3±0.1 31.58 ＜0.01

赖氨楸皮酸组 12 21.3±1.3 1.2±0.3 36.84 ＜0.01

表9.楸皮酸对SGC7901移植瘤生长的影响

分组动物数体重(克) 瘤重(克) 抑瘤率(％) P值

对照组 12 20.1±1.2 1.8±0.2

楸皮酸组 12 21.1±2.1 1.2±0.1 33.33 ＜0.01

赖氨楸皮酸组 12 20.8±1.5 1.1±0.2 38.89 ＜0.01

表10.楸皮酸对Hela移植瘤生长的影响

分组动物数体重(克) 瘤重(克) 抑瘤率(％) P值

对照组 12 20.5±1.2 2.2±0.2

楸皮酸组 12 21.1±1.3 1.4±0.1 36.36 ＜0.01

赖氨楸皮酸组 12 20.8±1.1 1.3±0.3 40.90 ＜0.01

表11.楸皮酸对PC3移植瘤生长的影响

分组动物数体重(克) 瘤重(克) 抑瘤率(％) P值

对照组 12 21.1±1.0 1.8±0.2

楸皮酸组 12 20.4±1.3 1.2±0.1 33.33 ＜0.01

赖氨楸皮酸组 12 21.3±1.1 1.1±0.3 38.89 ＜0.01

本发明的优点和积极效果在于：从天然植物中首次分离得到一种蒽醌类化合物--楸皮酸，并发现其具有抗肿瘤活性。我们进一步将其衍生化得到新化合物赖氨楸皮酸，更好地改善了化合物的水溶性，增加其生物利用度，以使其充分发挥抗肿瘤作用。另外赖氨楸皮酸的制备工艺简单，成本廉价，符合环保要求，利于批量生产，从而为进一步开发利用提供了良好条件。

药物组合物和治疗方法

药物组合物以及治疗肿瘤的方法亦在本发明的范围之内。所述药物组合物包括治疗有效量的本发明的楸皮酸及赖氨楸皮酸以及可药用载体。“可药用载体”包括溶剂、分散剂(dispersion medium)、包衣(a coating)、抗细菌和抗真菌剂以及等张剂(isotonic agent)、吸收延迟剂(absorption delaying agent)和吸收促进剂等。

本发明的药物组合物可通过传统方法制成各种适应于不同给药途径的药物剂型。例如，它可制成口服的胶囊、gel seal或片剂。胶囊剂可包含任何标准的可药用物质如明胶、纤维素等。片剂可按传统方法即将药物组合物与固相载体以及润滑剂压缩制得。所述固相载体包括淀粉和糖斑脱土(sugar bentonite)。本发明的药物组合物还可制成硬壳片剂(hard shell tablet)或包含捆绑剂(binder)如乳糖或甘露醇、常规填充剂以及tableting agent的胶囊。本发明的药物组合物还可通过非肠道途径给药。非肠道途径给药剂型包括本发明的药物组合物的水剂、等张盐溶液或5％的糖溶液以及与其他本领域公知的可药用赋形剂形成的制剂。环式糊精或其他本领域技术人员所公知的促溶剂均可作为药用赋形剂来递呈本发明的药物组合物。

概括地讲，本发明的楸皮酸及赖氨楸皮酸可悬溶于可药用载体(如生理溶液)中，通过口服或静脉输液，或通过皮下、肌内、胸腔内、腹腔内、直肠内、阴道内、鼻内、胃内、气道内、肺内注射或输液及气雾吸入、喷雾吸入、滴入及灌注等途径给药。

剂型的选择受到给药途径、制剂类型、患者(病种、病情、体形、体重、体表面积、年龄、性别)、药物相互影响以及收治医师的诊断等诸多因素的影响。适用的制剂用量范围为0.01～100.00mg/kg。用量范围可随病人情况与给药途径的不同而做相应的调整。其将主要取决于收治医师的诊断。例如，口服剂量一般要高于静脉注射剂量。所述剂量可通过本领域公知的经验优化方法进行调整。将本发明的药物组合物包裹于适宜的药物递呈载体(如聚合微粒体或输入设备)可提高给药，特别是口服给药的效率。

本发明的药物组合物的活性可通过体外(in vitro)和体内(in vivo)实验进行评价。简而言之，本发明的药物组合物的药理活性反映在抗肿瘤活性上。在体内实验中，所述药物组合物被注射入动物(如小鼠模型)体内以评价其药理活性。在此基础上，合适的剂量范围和给药途径遂得以确定。

为了便于理解本发明，特列举以下实施例。其作用应被理解为是对本发明的阐释而非对本发明的任何形式的限制。

具体实施方式

以下实施例仅为帮助本领域技术人员更好的理解本发明，但不要以任何方式限制本发明。

实施例1

楸皮酸的制备

取核桃楸茎皮干燥粗粉5kg，用体积分数为30％的乙醇溶液连续回流提取3次，每次2小时，合并提取液，减压浓缩得黑色浸膏，再将其悬浮于去离子水中得2L混悬液，将该混悬液依次用等体积的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇各萃取3次，分别合并各萃取层，减压浓缩。取氯仿萃取物(54g)进行减压硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱得到I-III 3个流份，流份II(Petroleum Ether∶EtOAc/70∶30)中析出黄绿色无定形粉末，于甲醇中重结晶得到楸皮酸，其结构鉴定数据见表12。

表12 实施例1所得楸皮酸的紫外，红外，质谱及核磁数据

UV_λmax(MeOH，nm)	228，258
		IR(KBr，cm^-1)	3060，2847，2597，1696，1635，1613，1589，1564，1456，1422，1374，1298，1254，1156，1055，877，712
ESI MS	283.2[M-H]^-，239.2[M-H-COOH]^-
		¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆，TMS)	7.76(1H，br s，H-2)，8.16(1H，br s，H-4)，7.44(1H，d，J＝8.0，H-6)，7.85(1H，t-like，J＝8.0，H-7)，7.77(1H，d，J＝8.0，H-8)，12.27(1H，s，C₁-OH)，12.29(1H，s，C₅-OH)，13.82(1H，s，C₃-COOH)
¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆，TMS)	161.3(C-1)，124.3(C-2)，138.1(C-3)，137.4(C-4)，133.5(C-4a)，161.5(C-5)，118.5(C-6)，124.9(C-7)，119.2(C-8)，133.0(C-8a)，187.0(C-9)，118.4(C-9a)，186.7(C-10)，115.9(C-10a)，165.3(-COOH)

实施例2

赖氨楸皮酸的制备

向反应瓶中加入20mg楸皮酸(取自实施例1)和32mg赖氨酸(购自北京市庆盛达化工技术有限公司)，再加入5ml双蒸水，搅拌反应20小时，温度控制在30℃，最终反应液变为澄清透明的液体。之后将反应瓶放入冰浴中，边搅拌边向反应液中缓慢滴加无水乙醇，大约6滴/分钟，同时观察反应液的变化，待溶液中有紫红色结晶出现时停止加入无水乙醇，此时共加入无水乙醇15.8ml，加入时间30分钟，然后把反应瓶放入4℃冰箱中过夜，次日观察到瓶壁上析出了一层紫红色晶体，将反应液倒在一个烧杯中备用，之后将反应容器真空干燥，用刮刀刮下结晶，并用无水乙醇洗涤3次，每次采用离心的方式除去洗液，洗涤三次后，洗液近乎无色。将产物在干燥器中干燥过夜，称重得产物5.7mg，在干燥器中保存备用。然后将保留的反应液放入-20℃冰箱中过夜，次日同样出现紫红色结晶，按照上述分离纯化的方法得产物2.5mg。之后再将反应液放入-40℃冰箱中过夜，同法处理得产物1.9mg。前后共得到产物10.1mg，产率为33.4％，该实施例得到的赖氨楸皮酸的结构鉴定数据见表14。

表14 实施例3所得赖氨楸皮酸的紫外，红外，质谱及核磁数据

UV_λmax(MeOH，nm)	204，226，260
		IR(KBr，cm^-1)	3062，2927，2843，2596，1638，1609，1592，1585，1560，1455，

	1427，1397，1370，1291，1250，1161，1055，876，714
		ESI MS	429.1[M-H]^-，453.4[M+Na]⁺
¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆，TMS)	楸皮酸部分：7.95(1H，d，J＝1.8，H-2)，8.37(1H，d，J＝1.8，H-4)，7.45(1H，d，J＝8.0，H-6)，7.86(1H，t-like，J＝8.0，H-7)，7.78(1H，d，J＝8.0，H-8)，12.31(1H，br s，C₁-OH)，12.06(1H，br s，C₅-OH)，赖氨酸部分：4.53(1H，m，H-2′)，2.36(1H，m，H-3′a)，2.28(1H，m，H-3′b)，1.82(2H，m，H-4′)，2.00(2H，m，H-5′)，3.39(2H，m，H-6′)，6.90(2H，m，H-5′)，7.62(3H，d，J＝6.2，H-6′)
		¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆，TMS)	楸皮酸部分：161.3(C-1)，125.7(C-2)，140.2(C-3)，138.3(C-4)，133.5(C-4a)，161.5(C-5)，118.5(C-6)，124.9(C-7)，119.2(C-8)，133.0(C-8a)，187.0(C-9)，118.4(C-9a)，186.7(C-10)，115.9(C-10a)，169.6(-COOH)赖氨酸部分：176.0(C-1′)，55.7(C-2′)，27.8(C-3′)，23.0(C-4′)，31.5(C-5′)41.3(C-6′)

实验例1

楸皮酸的体外抗肿瘤实验

采用MTT方法进行体外抗肿瘤实验。分别各肿瘤细胞于96孔板中，细胞密度为5×10⁴个/ml；次日加入楸皮酸，浓度分别为100μg/ml、10μg/ml、1μg/ml药物用DMSO进行稀释，同时设DMSO对照组，每组设3复孔，给药容积为100μl/孔；细胞在含5％CO₂的37℃培养箱继续培养44h后，每孔加20μl MTT(5mg/ml)，继续培养4h；吸弃上清，每孔加入100μl DMSO，在酶标仪上，振动600s，检测570nm处的OD值；独立实验重复三次以上，结果见表1。

实验例2

赖氨楸皮酸的体外抗肿瘤实验

采用MTT方法进行体外抗肿瘤实验。分别各肿瘤细胞于96孔板中，细胞密度为5×10⁴个/ml；次日加入赖氨楸皮酸，浓度分别为100μg/ml、10μg/ml、1μg/ml药物用DMSO进行稀释，同时设DMSO对照组，每组设3复孔，给药容积为100μl/孔；细胞在含5％CO₂的37℃培养箱继续培养44h后，每孔加20μl MTT(5mg/ml)，继续培养4h；吸弃上清，每孔加入100μl DMSO，在酶标仪上，振动600s，检测570nm处的OD值；独立实验重复三次以上，结果见表2.

实验例3

楸皮酸及赖氨楸皮酸的体内抗肿瘤实验

取36只雄性BALB/c(nu/nu)裸鼠，平均分为3组，每组12只。将5×10⁶个肿瘤细胞接种于裸鼠背部皮下。于肿瘤接种后10天开始静脉注射楸皮酸或赖氨楸皮酸0.3mg/kg/天，共注射15天，对照组则注射等体积的生理盐水。30天后处死动物，剥取肿瘤称重，计算抑瘤率，抑瘤率(％)＝(肿瘤对照组平均瘤重-治疗组平均瘤重)/肿瘤对照组平均瘤重×100，结果见表3-11。

Claims

1.一种制备1,5-二羟基-3-羧基-9,10-蒽醌的方法，其特征在于：

（a）以核桃楸的茎皮为原料；

（b）用药材质量8-10倍量的10～95%(V/V)醇-水溶剂连续回流提取3-4次；

（c）所得浸膏通过石油醚、氯仿分步萃取后，所得氯仿萃取部分再经硅胶减压柱层析，反复重结晶的方法得到化合物。

2.一种1,5-二羟基-3-羧基-9,10-蒽醌的结构修饰物1,5-二羟基-3-羧基-9,10-蒽醌的赖氨酸盐，其结构式如式(1)所示：

Figure 2010101105233100001DEST_PATH_IMAGE001

式(1)。

3.制备权利要求2所述的1,5-二羟基-3-羧基-9,10-蒽醌的赖氨酸盐的方法，其特征在于：

（a）将1,5-二羟基-3-羧基-9,10-蒽醌与赖氨酸按摩尔比1: 2～1: 5的比例在容器中混合；

（b）向反应容器中加入质量为1,5-二羟基-3-羧基-9,10-蒽醌100～300倍的水，反应温度控制在20～40℃，反应时间3～60小时；

（c）将反应容器放入冰水混合物中搅拌，缓慢滴加无水乙醇或丙酮，滴加时间控制在30～70分钟，最终使无水乙醇或丙酮的体积分数为整个反应体系的60～90%；

（d）将反应液置入-80～0℃冰箱中12～48小时析出晶体，收集结晶并用无水乙醇反复洗涤晶体，干燥，保存备用。

4.如权利要求1中所述的1,5-二羟基-3-羧基-9,10-蒽醌在制备抗肿瘤药物中的应用；肿瘤为肝癌、肺癌、结肠癌、白血病、胃癌、乳腺癌、宫颈癌、前列腺癌。

5.如权利要求2中所述的1,5-二羟基-3-羧基-9,10-蒽醌的赖氨酸盐在制备抗肿瘤药物中的应用；肿瘤为肝癌、肺癌、结肠癌、白血病、胃癌、乳腺癌、宫颈癌、前列腺癌。