CN104744518B - 金属钌配合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及金属钌配合物及其制备方法和应用。具体而言，本发明公开了新的具有良好抗肿瘤特别是抗肿瘤转移作用的如式(I)所示的金属钌配合物及其制备方法。本发明的钌配合物能够抑制肿瘤细胞增殖，对多个转移瘤株均表现出明显的抗肿瘤转移作用，且能延长荷瘤小鼠的生命周期。因此可用于制备抗肿瘤或抗肿瘤转移的药物。

Description

金属钌配合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及金属钌(III)配合物及其制备方法，以及在抗肿瘤方面的应用。
背景技术
近年来癌症的发病和死亡人数逐年上升，全国肿瘤防治办近日发布的《中国肿瘤统计年报》显示：我国每年新发癌症病例为350万，因癌症死亡的人数有250万。虽然原发性肿瘤非常凶险，但它们只引起10％左右的肿瘤患者死亡，而90％肿瘤患者最终死于癌细胞的侵袭和转移1。因此，肿瘤治疗亟待解决的难题除抑制原发肿瘤外，更要关注肿瘤的转移。肿瘤转移是恶性肿瘤最基本的生物学特征，是一系列具有内在联系的多个步骤相互作用的结果。
目前肿瘤的治疗尚缺乏标准方案，常规手术、放射疗法或化疗药物对部分早期发现或敏感肿瘤能很快起效。避开上述常规疗法对人体造成巨大的伤害不谈，单在术后或放化疗间歇期微小的残余病灶在患者免疫力日渐降低及失去药物的遏制后将表现出更加快速的增殖，并成为肿瘤复发、转移的根源。这时若能及时采用抗转移制剂，控制病灶的恶化，将有可能达到提高肿瘤患者生命质量，延长其带瘤生存时间，甚至达到治愈肿瘤的效果。
金属配合物顺式二氯二氨合铂(简称顺铂)自1969年卢森堡通过实验确定具有抗肿瘤活性2。1978年被批准应用于临床治疗睾丸肿瘤和卵巢癌，现已成为世界上治疗癌症应用最为广泛的药物之一。顺铂的成功应用引起广大科学家对铂类金属配合物类抗癌药物的极大关注。近年来金属钌配合物以低毒性、易吸收、体内排泄快且具有抗肿瘤转移的优点3成为继铂类药物之后最具研发前景的金属抗肿瘤药物之一4。到目前为止，已有两个钌配合物进入临床研究阶段：NAMI-A(1999年进入I期临床，2002年下半年已进入II期临床)对肺部的转移瘤效果明显，KP1019(2003年进入I期临床)主要是对结肠癌起作用5,6。
发明内容
本发明的目的是提供可用于治疗肿瘤特别是肿瘤转移的金属钌(III)配合物及其制备方法和用途。本发明的金属钌配合物，溶于水后在有效浓度范围内形成稳定的水溶液，其生物利用度高，抗肿瘤转移效应强，毒性低，具有开发成为临床抗肿瘤药物的前景。
因此，本发明一方面提供一种式(I)所示的金属钌配合物，
其中，L选自5或6元含氮杂芳环，其进一步被烷基、烯基、氰基、卤素或酰基取代。
在一个优选的实施方案中，式(I)所示的金属钌配合物，其中所述烷基为C1-C6烷基。
在另一个优选的实施方案中，式(I)所示的金属钌配合物，其中所述烯基为C2-C6烯基。
在另一个优选的实施方案中，式(I)所示的金属钌配合物，其中所述L选自吡啶、嘧啶、吡嗪、哒嗪、三嗪、吡咯、咪唑、吡唑、三氮唑和四氮唑。
在另一个优选的实施方案中，式(I)所示的金属钌配合物，其中所述L选自：
在本文中，术语“烷基”指饱和脂肪族烃基团，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至12个碳原子的烷基，更优选的是含有1至6个碳原子的低级烷基。非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、及其各种支链异构体等。烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基。
在本文中，术语“烯基”是指至少由两个碳原子和至少一个碳-碳双键组成的如上定义的烷基，例如乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-、2-或3-丁烯基等。烯基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基。
在本文中，术语“酰基”是指至少由两个碳原子和至少一个羰基组成的如上定义的烷基，例如乙酰基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基、甲酰丙酰基等。酰基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基。
在本文中，术语“含氮杂芳环”指包含1至4个杂原子、5至14个环原子的杂芳族体系，其中至少一个杂原子为氮，其余杂原子可以为氧或硫。“5元含氮杂芳环”指包含1至4个杂原子、5个环原子的杂芳族体系，其非限制性实例包括吡咯、咪唑、吡唑、三氮唑、四氮唑、噁唑、噻唑、异噁唑、异噻唑等，优选吡咯、咪唑、吡唑、三氮唑、四氮唑。“6元含氮杂芳环”指包含1至4个杂原子、6个环原子的杂芳族体系，其非限制性实例包括吡啶、吡嗪、嘧啶、哒嗪、三嗪等。
本发明另一方面提供一种式(I)所示的金属钌配合物的制备方法，其包括以下步骤：
1)制备化合物trans-[RuCl4(DMSO)2][(DMSO)2H]；
2)制备化合物trans-[RuCl4(DMSO)2]Na：
将步骤1)制得的trans-[RuCl4(DMSO)2][(DMSO)2H]溶解于乙醇溶液中，加入氯化钠溶液，搅拌至有大量橘黄色固体微晶粉末生成，过滤分别用冷乙醇和乙醚洗涤，硅胶干燥过夜；
3)制备化合物trans-[RuCl4(DMSO)L]Na·2DMSO：
将步骤2)制得的化合物trans-[RuCl4(DMSO)2]Na溶解于丙酮中，加入配体L和DMSO，超声至反应结束且固体完全溶解；过滤，将反应体系中的少量杂质去除；加入适量乙醚，放置得固体结晶；分别用不溶解产物的有机溶剂及乙醚洗涤，硅胶干燥过夜。
在步骤1)中，化合物trans-[RuCl4(DMSO)2][(DMSO)2H]可以根据本领域公知的方法制备(参见Alessio,E.；Balducci,G.；Calligaris,M.；Costa,G.；Attia,W.M.；Mestroni,G.Inorg.Chem.1991,30,609)。
在步骤2)中，氯化钠溶液的加入量，按氯化钠的摩尔当量计，优选为trans-[RuCl4(DMSO)2][(DMSO)2H]摩尔数的1.5～2.5倍。
在步骤3)中，trans-[RuCl4(DMSO)2]Na与加入的配体L的摩尔比优选为1:1.5～1:5.5；trans-[RuCl4(DMSO)2]Na与加入DMSO的摩尔比优选为1:19～1:42；超声的时间优选1～2小时。
在一个优选的实施方案中，在步骤3)中，加入适量乙醚或氯仿和乙醚的混合物，放置得固体结晶
在另一个优选的实施方案中，步骤3)中的不溶解产物的有机溶剂优选为乙醚、乙醚/氯仿或乙醚/丙酮，且所述氯仿或丙酮占洗涤溶剂的比例优选大于80％。
本发明另一方面提供一种药物组合物，其含有治疗有效量的式(I)所示的金属钌配合物以及药学上可接受的载体。
所述药学上可接受的载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。本发明的组合物可以利用本领域任何已知方法制成，以使病人用药后能提供快速、持久或缓慢释放的活性成分。
本领域技术人员能够理解，本发明的药物组合物可以根据具体的施用方式被配制成各种本领域熟知的制剂形式，例如口服剂型(粉剂、片剂、胶囊、软胶囊、口服溶液、糖浆、酏丸、散剂、囊剂、颗粒剂等)，或局部施用制剂(霜剂、乳膏、软膏、洗剂、凝胶、香脂、膏药、糊剂、喷雾剂、气雾剂等)，或注射制剂(溶液、悬浮剂、乳剂)。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。
本发明的活性成分金属钌配合物可以采用其它任何药学上可接受的盐的形式，其可以单独使用，也可以与其它药学活性成分联合使用。
本发明活性成分的给药剂量可以根据个体的情况和重量、病情的严重程度、药物形式、给药途径以及给药周期的不同而不同，其也可以由本领域技术人员进行选择。为了获得需要的作用，通常建议每日有效剂量为15～150mg/kg/天。剂量可以是每天单次给药或每天分多次给药。
本发明的药物组合物可以通过各种途径施用至个体动物如哺乳动物(大鼠、小鼠、驯化动物或人类)，所有的给药方式均是预期的，例如，给药可以是口服、直肠给药或经静脉、肌肉内、皮下、皮内、鞘膜内、硬膜外或脑室内注射。可通过注射、喷射、滴鼻、渗透、吸收、物理或化学介导的方法导入机体如肌肉、皮内、皮下、静脉、粘膜组织；或是被其它物质混合或包裹后导入机体。
本发明另一方面提供式(I)所示的金属钌配合物或包含其的药物组合物在制备预防和/或治疗肿瘤特别是肿瘤转移的药物中的用途，其中所述肿瘤可为癌，如乳腺癌、前列腺癌、肝癌、胰腺癌、肺癌、脑癌、卵巢癌、子宫癌、睾丸癌、皮肤癌、白血病、头颈癌、胃癌、鼻咽癌、结肠癌、视网膜癌、膀胱癌、肛门癌或直肠癌；特别优选肺癌和乳腺癌。
以下将结合附图和具体实施例进一步阐明本发明，但应理解其仅是举例说明的作用，并不以任何方式限制本发明的范围。
附图说明
图1显示本发明钌配合物对细胞迁移能力的抑制作用对比图。
图2显示本发明化合物G26b对血管生成的影响，其中图2A为模型对照组，图2B为NAMI-A组，图2C为G26b组。
图3是本发明化合物G26b的动物试验4T1肿瘤肺转移实体图，其中图3A为模型对照组，图3B为NAMI-A组，图3C为G26b组。
图4是本发明化合物G26b对荷瘤鼠生命延长作用图。
具体实施方式
实施例
1HNMR的测定是用Bruker Avance III600核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，内标为四甲基硅烷(TMS)，化学位移是以10-6(ppm)作为单位给出。
元素分析：Vario EL III型元素分析仪。
紫外光谱：Beckman Coulter DU800紫外分光光度计。
红外光谱：SHIMADZU FTIR-8400s傅立叶变换红外光谱仪。溴化钾压片测定，测量范围(4000～400cm-1)。
超声仪：KQ-100型超声仪(昆山市超声仪器有限公司)
本发明未注明来源的试剂为本领域常规试剂，可以通过本领域已知的方法来合成，或可容易地购自化学试剂公司；未详细注明的仪器均为本领域常规使用仪器。
实施例1化合物trans-[RuCl4(DMSO)2]Na的制备
称取起始物trans-[RuCl4(DMSO)2][(DMSO)2H]1.5g(2.70mmol)(根据现有技术文献Alessio,E.；Balducci,G.；Calligaris,M.；Costa,G.；Attia,W.M.；Mestroni,G.Inorg.Chem.1991,30,609制备)加入76.5ml 98％乙醇溶液，加入1.1ml 0.30g/ml氯化钠溶液，搅拌至有大量桔红色微晶粉末生成，过滤，分别用冷乙醇及乙醚洗涤，硅胶干燥，得目标产物。
实施例2钌(III)配合物trans-[RuCl4(DMSO)(3-CNpy)]Na·2DMSO(G26b)的合成
将实施例1制得的trans-[RuCl4(DMSO)2]Na 0.10g(0.24mmol)溶解于丙酮中，然后向得到的溶液中加入3-氰基吡啶0.12g(1.19mmol)和0.33ml二甲基亚砜。超声反应1.5～2小时。将反应液过滤，向滤液中加入乙醚，静置析出结晶。将结晶过滤，用乙醚洗涤，经硅胶干燥得目标产物G26b。产率：70.3％。熔点：187℃(变黑)，210℃(碳化)。
元素分析：C12H22N2Cl4O3Ru(III)S3Na理论值：C，23.85；H，3.67；N，4.64％；测定值：C，23.81；H，3.64；N，4.64％。分子量：604.3。
UV/Vis(25℃，H2O)λmax(ε，M-1·cm-1)：295nm(3510)，397nm(4700)，464nm(540)。
IR：υmax/cm-1(KBr)：3014，2925，1637，1600，1471，1415，1311，1187，1098(vs)，1021(vs)，431。
1H-NMR(DMSO-d6)δ：-1.18(Ru-3-CNpy'H3)；-12.73(Ru-DMSO'CH3)。
实施例3钌(III)配合物trans-[RuCl4(DMSO)(4-CNpy)]Na·2DMSO(G94a)的合成
将实施例1制得的trans-[RuCl4(DMSO)2]Na 0.05g(0.12mmol)溶解于丙酮中，然后向得到的溶液中加入4-氰基吡啶0.066g(0.63mmol)和0.35ml二甲基亚砜。超声反应1.5～2小时。将反应液过滤，向滤液中加入乙醚，静置析出结晶。将结晶过滤，用乙醚/丙酮混合液(v/v＝9：1)洗涤，经硅胶干燥得目标产物G94a。产率：75％。熔点：128～130℃。
元素分析：C12H22N2Cl4O3Ru(III)S3Na理论值：C，23.85；H，3.67；N，4.64％；测定值：C，23.66；H，3.53；N，4.74％。分子量：604.37。
UV/Vis(25℃，H2O)λmax，nm(ε，M-1·cm-1)：289(4730)，317(3480)，397(4670)，465(530)。
IR：υmax/cm-1(KBr)：3117，3011，2914，1653，1610，1414(vs)，1313(s)，1294，1223(s)，1095(vs)，1028(vs)，434。
1H-NMR(DMSO-d6)δ：3.32(Ru-4-CNpy'H3和H5)；-0.85(Ru-4-CNpy'H2和H6)；-12.52(Ru-DMSO'CH3)。
实施例4钌(III)配合物trans-[RuCl4(DMSO)(N-Vinylim)]Na·2DMSO(G81a)的合成
将实施例1制得的trans-[RuCl4(DMSO)2]Na 0.05g(0.12mmol)溶解于丙酮中，然后向得到的溶液中加入0.35ml二甲基亚砜，再加入N-乙烯基咪唑0.06ml(0.66mmol)。超声反应2小时。将反应液过滤，向滤液中加入乙醚，静置析出结晶。将结晶过滤，用乙醚/丙酮混合液(v/v＝9：1)洗涤，经硅胶干燥得目标产物G81a。产率：67％。熔点：135～137℃。
元素分析：C11H24N2Cl4O3Ru(III)S3Na理论值：C，22.23；H，4.07；N，4.71％；测定值：C，21.97；H，3.83；N，5.04％。分子量：594.37。
UV/Vis(25℃，H2O)λmax，nm(ε，M-1·cm-1)：288(1600)，390(4260)，454(580)。
IR：υmax/cm-1(KBr)：3136(s)，3007，2910，1668，1649(vs)，1510(vs)，1309，1278，1231(s)，1090(vs)，1024(vs)，434。
1H-NMR(DMSO-d6)δ：3.38(Ru-N-Vinylim'H7和H8)；2.09(Ru-N-Vinylim'H6)；-1.57(Ru-N-Vinylim'H4)；-13.16(Ru-DMSO'CH3)。
实施例5钌(III)配合物trans-[RuCl4(DMSO)(N-Propylim)]Na·2DMSO(G99)的合成
将实施例1制得的trans-[RuCl4(DMSO)2]Na 0.10g(0.24mmol)部分溶于丙酮及0.33ml二甲基亚砜中，再加入N-丙基咪唑0.14ml(1.23mmol)。超声反应2小时。将反应液过滤，向滤液加入氯仿与乙醚混合液使析晶。将结晶过滤，用氯仿/乙醚混合液(v/v＝1：9)洗涤，经硅胶干燥得目标产物G99。产率：70％。熔点：129℃。
元素分析：C12H28N2Cl4O3Ru(III)S3Na理论值：C，23.61；H，4.62；N，4.59％；测定值：C，23.54；H，4.36；N，4.88％。分子量：610.43。
UV/Vis(25℃，H2O)λmax，nm(ε，M-1·cm-1)：289(1390)，391(4030)，452(530)。
IR：υmax/cm-1(KBr)：3132(s)，2962，2920，1520(vs)，1456，1437，1406，1310，1288，1088(vs)，1026(vs)，434。
1H-NMR(DMSO-d6)δ:-1.21ppm(Ru-N-Propyl'CH2)；-1.04ppm(Ru-N-Propyl'CH3)；-0.33ppm(Ru-N-Propyl'CH2)；-13.3ppm(Ru-DMSO'CH3)。…
试验例
本发明中所用人乳腺癌MCF-7、人肺癌A549、小鼠乳腺癌4T1、小鼠Lewis肺癌细胞及人脐静脉内皮细胞(HUVEC细胞)均购自中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心，所述RPMI 1640、DMEM细胞培养基、胰酶和FBS均为GIBCO公司出品。
NAMI-A根据本领域公知的方法制备(参见Mestroni,G.；Alessio,E.；Sava,G.United States Patent.Patent No.US 6,221,905B1)。
卡铂购自齐鲁制药有限公司
试验例1本发明钌(III)配合物对肿瘤细胞增殖的影响
试验材料：
MTT试剂购自Sigma公司
酶标仪为雷杜公司的RT-6000
试验方法：
将人乳腺癌MCF-7、人肺癌A549、小鼠乳腺癌4T1、小鼠Lewis肺癌细胞分别接种于96孔培养板，其中MCF-7和Lewis细胞用含10％FBS的DMEM培养基培养，A549和4T1细胞用含10％FBS的RPMI-1640培养基培养。细胞密度为5×103细胞/mL～2×104细胞/mL，100μL/孔，于5％CO2、37℃、饱和湿度常规培养24小时，待细胞完全贴壁后开始加药。将受试细胞分为NAMI-A组、本发明化合物G26b、G81a、G94a、G99和卡铂阳性对照组，药物浓度为50μM，溶于完全培养基；另设培养基对照组(培养基+细胞)，空白组(仅培养基)。与药物共同作用72h后换药一次，144h后用MTT试剂检测细胞的增殖情况，自动酶标仪检测490nm波长下吸光度(A)值。根据A值计算细胞活力。
计算公式为：细胞增殖率(％)＝给药组A值/培养基对照组A值×100％
试验结果：
本发明钌配合物对肿瘤细胞增殖的影响见表1。
表1 本发明钌配合物对细胞的增殖活力的影响(％)
表1显示各细胞株经50μM钌配合物作用后与培养基对照组相比的增殖百分比。与阳性药物卡铂相比，各株细胞生命活力在78.87％以上，本发明钌配合物未见细胞毒性，提示我们本发明钌配合物的安全性较好。本发明钌配合物对细胞增殖活力的影响与抑制肿瘤转移的NAMI-A相当，特别地，G26b在50μM浓度条件下对人肺癌A549细胞表现出优异的抑制细胞生长作用，细胞活力为正常细胞的78.87％。
试验例2本发明钌(III)配合物对细胞迁移的影响
试验材料：
阳性对照药吉西他滨(Gemci)购自Lilly France
倒置显微镜Olympus CKX41，拍照时放大40倍
试验方法：
将HUVEC细胞接种于6孔板，以每孔2mL无血清RPMI 1640培养基培养于37℃、5％CO2孵箱中；细胞生长至约90％接触汇合后用无菌的移液器吸头在培养板单层细胞的相同位置划直线，造成宽度与长度均一致的“伤口”，用PBS洗去脱落的细胞。更换培养基，并加入用无血清RPMI 1640培养基配制的终浓度为20μM的本发明化合物G26b、G81a、G94a、G99、NAMI-A和1ug/mL的吉西他滨。在倒置显微镜下观察，放大40×拍照并测量伤口初始距离，记录每一个“伤口宽度”，每组取3个数值。24h后再次在倒置显微镜下相同位置拍照并记录“伤口宽度”并与0h宽度作比较，观察细胞的相对迁移率。
试验结果：
图1显示了各组细胞迁移能力的抑制作用对比图，可见本发明钌配合物对细胞迁移均有较为明显的抑制作用。特别地，G81a、G26b与NAMI-A相比表现出显著的抑制细胞迁移能力。
试验例3本发明钌(III)配合物对内皮细胞成管的影响
试验材料：
基质胶Matrigel购自BD Biosciences
倒置显微镜OlympusCKX41，拍照时放大40倍
试验方法：
内皮细胞可以在基质胶Matrigel上融合形成微管，利用内皮细胞的这种特性来研究药物对血管形成的影响。
将Matrigel于4℃过夜融化备用。在冰浴上，用预冷的枪头吸取Matrigel胶以50μl/孔加入到96孔板中，然后将96孔板放入37℃细胞培养箱中，放置1h使胶凝固。将处于对数生长期的HUVEC细胞用胰酶消化，计数。将终浓度20μM的NAMI-A和G26b与5×104细胞共同加入预先铺好的Matrigel的培养板中，终体积为100μL，继续培养6h；另设培养基对照组。倒置显微镜下观察细胞的变化并拍照记录小管形成情况，每孔随机摄取3个视野，整个实验重复三次。
试验结果：
图2显示本发明化合物G26b对血管生成的影响。由图2可知，本发明钌配合物对内皮细胞成管性均表现出抑制作用，其中G26b对三维血管生成的抑制作用更加显著。
试验例4本发明钌(III)配合物对小鼠4T1乳腺癌肺转移的影响
试验材料：
4-6周龄雌性BALB/c小鼠购自维通利华实验动物中心，SPF级环境饲养。
试验方法：
在本试验中使用体重为18.2g～22.5g的BALB/c小鼠，经过检疫观察后于右侧第二对乳腺的脂肪垫内注射小鼠乳腺癌4T1肿瘤细胞，接种量5×105细胞/只。于接种后第5～7天(根据肿瘤成瘤情况，在接种部位触及到瘤体后)开始给药。分为本发明钌配合物高、低剂量组和NAMI-A高、低剂量组，每组10只小鼠，其中低剂量组小鼠腹腔注射量为17.5mg/kg，高剂量组小鼠腹腔注射量为35mg/kg。将本发明化合物以无菌生理盐水配成浓度为1.75mg/mL和3.5mg/mL，给药体积为0.1mL/10g，每天给药1次，连续给药6天后改为隔天给药，继续给药4次；模型对照组给予等体积的生理盐水。各组小鼠于接种后每3天称重一次。至第21天，称重后处死小鼠。剥离瘤体和肺脏分别称重，拍照记录肺转移情况，然后将肺脏置于Boun's液中固定10天后直接观察，计数各组小鼠肺脏表面发生转移的动物数和转移灶的数量。
对肿瘤肺转移的抑制作用(TGI)按如下公式计算：
TGI(％)＝(1-T/C)*100％，其中T代表给药组，C代表模型对照组。
试验结果：
下表2显示本发明钌配合物对小鼠4T1乳腺癌移植瘤的生长抑制作用
表2 本发明钌配合物对小鼠4T1乳腺癌移植瘤的生长抑制作用
与模型对照组相比，*，P<0.05；**，P<0.01。与NAMI-A对照组相比，#，P<0.05。
由表2可知，模型对照组小鼠100％发生转移；通过比较解剖时各组动物原发瘤瘤重发现，本发明钌配合物与NAMI-A对原发瘤的抑制作用较弱。但与模型对照组相比，G26b剂量低至17.5mg/kg时对小鼠4T1肿瘤肺转移的抑制率可达52.91％(P＝0.0408)。同时，NAMI-A和G26b 35mg/kg剂量组的小鼠与肿瘤体重明显下降，而本发明钌配合物在低剂量下未见引起小鼠体重降低。以上结果提示我们，本发明钌配合物不但具有抑制肿瘤转移的效果，还有助于改善荷瘤小鼠的生存质量。
图3显示动物试验4T1肿瘤肺转移实体图。由该图可知17.5mg/kg的G26b组小鼠发生肿瘤肺转移数明显减少；相同剂量下，G26b比NAMI-A具有更加明显的抗转移作用。
试验例5本发明钌(III)配合物对小鼠Lewis肺癌肺转移的影响
试验材料：
6周龄C57BL/6小鼠购自维通利华实验动物中心，雌雄各半，SPF级环境饲养。
试验方法：
将生长状态良好的Lewis肺癌细胞接种于C57BL/6小鼠右侧腋下，待肿瘤长至2g～3g时，无菌解剖，将肿瘤用生理盐水按质量体积比1：10剪碎，研磨后过200目筛，接种于C57BL/6小鼠右腋下，完成体内传代。
本实验中所用小鼠体重为18.4g～25.6g。取体内传代三代以上的肿瘤，无菌研磨制成单细胞悬液后接种于小鼠右侧腋下。随机将接种后的小鼠分为本发明钌配合物组和NAMI-A组，每组10只，给药剂量为25mg/kg。将本发明化合物以无菌生理盐水配成浓度为2.5mg/mL的溶液，给药体积为0.1mL/10g，于接种后第7天开始腹腔注射给药，每天给药1次，连续给药6天后改为隔天给药，继续给药3次；模型对照组给予等体积的生理盐水。各组小鼠于接种后每3天称重一次。至第21天，称重后处死小鼠。剥离瘤体和肺脏分别称重，拍照记录肺转移情况，然后将肺脏置于Boun's液中固定10天后直接观察，计数各组小鼠肺脏表面发生转移的动物数和转移灶的数量。TGI计算如试验例4。
试验结果：
表3显示本发明钌配合物对小鼠Lewis肺癌移植瘤的生长抑制作用
表3 本发明钌配合物对小鼠Lewis肺癌移植瘤的生长抑制作用
与模型对照组相比，*，P<0.05。与NAMI-A对照组相比，#，P<0.05。
如表3所示，模型对照组小鼠100％发生转移。与模型对照组相比，G99在25mg/kg剂量时，对小鼠Lewis肺癌肺转移的抑制率高达78.94％，与同剂量组NAMI-A相比抗转移效果明显(P＝0.0470)。可见，本发明钌配合物表现出比NAMI-A更为明显的抗转移作用。
试验例6本发明化合物G26b对荷瘤小鼠生命延长作用研究
BALB/c小鼠肿瘤接种及给药方法同试验例4。给药结束后不处死小鼠，让其自然生长，直至死亡。记录下各组小鼠的死亡时间。
图4为本发明化合物G26b对荷瘤鼠生命延长作用图。由该图可知，本发明钌配合物G26b治疗后可以适当的延长荷瘤小鼠的存活时间，有助于改善其生活质量。
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Claims (12)

1.一种式(I)所示的金属钌配合物，
其中，L为
2.一种根据权利要求1所述的金属钌配合物的制备方法，其包括以下步骤：
1)制备化合物trans-[RuCl4(DMSO)2][(DMSO)2H]；
2)制备化合物trans-[RuCl4(DMSO)2]Na：
将步骤1)制得的trans-[RuCl4(DMSO)2][(DMSO)2H]溶解于乙醇溶液中，加入氯化钠溶液，搅拌至有大量橘黄色固体微晶粉末生成，过滤，分别用冷乙醇和乙醚洗涤，硅胶干燥；
3)制备化合物trans-[RuCl4(DMSO)L]Na·2DMSO：
将步骤2)制得的化合物trans-[RuCl4(DMSO)2]Na溶解于丙酮中，加入配体L和DMSO，超声至反应结束且固体完全溶解；过滤，将反应体系中的少量杂质去除；加入适量溶剂，放置得固体结晶；用不溶解产物的有机溶剂洗涤，硅胶干燥。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其中，在步骤2)中，氯化钠溶液的加入量，按氯化钠的摩尔当量计，为trans-[RuCl4(DMSO)2][(DMSO)2H]摩尔数的1.5～2.5倍。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其中，在步骤3)中，trans-[RuCl4(DMSO)2]Na与加入的配体L的摩尔比为1:1.5～1:5.5。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其中，在步骤3)中，trans-[RuCl4(DMSO)2]Na与加入DMSO的摩尔比为1:19～1:42。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其中，在步骤3)中，超声的时间为1～2小时。
7.根据权利要求2-6中任一项所述的制备方法，其中，在步骤3)中，加入适量乙醚或氯仿和乙醚的混合物，放置得固体结晶。
8.根据权利要求2-6中任一项所述的制备方法，其中，在步骤3)中，所述不溶解产物的有机溶剂选自乙醚、乙醚/氯仿和乙醚/丙酮。
9.一种药物组合物，其含有根据权利要求1所述的金属钌配合物和药学上可接受的载体。
10.根据权利要求1所述的金属钌配合物或根据权利要求9所述的药物组合物在制备治疗肿瘤的药物中的用途，其中所述肿瘤为癌，所述癌选自乳腺癌和肺癌。
11.根据权利要求1所述的金属钌配合物或根据权利要求9所述的药物组合物在制备治疗肿瘤转移的药物中的用途，其中所述肿瘤为癌，所述癌选自乳腺癌。
12.根据权利要求11所述的用途，其中所述肿瘤转移为乳腺癌的肺转移。
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