DE69133235T2 - Verfahren zur Herstellung von Harzen für die Feststoff-Peptidsynthese - Google Patents

Verfahren zur Herstellung von Harzen für die Feststoff-Peptidsynthese

Info

Publication number
DE69133235T2
DE69133235T2 DE69133235T DE69133235T DE69133235T2 DE 69133235 T2 DE69133235 T2 DE 69133235T2 DE 69133235 T DE69133235 T DE 69133235T DE 69133235 T DE69133235 T DE 69133235T DE 69133235 T2 DE69133235 T2 DE 69133235T2
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
group
acid
amino
peg
polystyrene
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
DE69133235T
Other languages
English (en)
Other versions
DE69133235D1 (de
Inventor
Fernando Albericio
George Barany
Jane Chang
Nuria A. Sole
Samuel Zalipski
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
University of Minnesota
Original Assignee
University of Minnesota
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by University of Minnesota filed Critical University of Minnesota
Publication of DE69133235D1 publication Critical patent/DE69133235D1/de
Application granted granted Critical
Publication of DE69133235T2 publication Critical patent/DE69133235T2/de
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/04—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers
    • C07K1/042—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers characterised by the nature of the carrier
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F8/00—Chemical modification by after-treatment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Other Resins Obtained By Reactions Not Involving Carbon-To-Carbon Unsaturated Bonds (AREA)
  • Polyethers (AREA)
  • Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
  • Polyamides (AREA)

Description

  • Spacer-Arme sind essenziell in vielen Bereichen der modernen Biochemie. Spacer- Arme können definiert werden als Moleküle, die ein Molekül mit einem anderen Molekül oder einem inerten Trägermaterial verbinden. Polyethylenglykol, z. B., ist vorteilhaft verwendet worden, um Enzyme mit unlöslichen Trägern und anderen Biomolekülen zu verbinden, während die Aktivität der Enzyme erhalten bleibt. M. Stark and K. Holmberg, Biotech. and Bioeng 34: 942-950 (1989). Dieses Konzept hat wichtige Konsequenzen für industrielle Prozesse, die immobilisierte Enzyme nutzen (zum Beispiel Affinitätschromatografieprozesse), und für diagnostische Untersuchungen (z. B. ELISA (Enzyme linked immuno sorbant assay) Untersuchungen). Zwei weitere Bereiche, in den Polyethylenglykol-Spacer-Arme eingesetzt worden sind, sind Peptidsynthese und Sequenzierung. Die Koppelungsrate von geschützten Nukleotid- und Aminosäureresten an inerte Trägermaterialien, solche wie Silikaten, Membranen und Polystyrol- Trägermaterial, erhöht sich häufig entsprechend der Absonderung der Reaktionsstelle von dem Trägermaterialrückgrat. Ähnliche Effekte sind bei der Sequenzierung von festphasen-immobilisierten Proben gezeigt worden. J. K. Inman et al., In Solid Phase Methods Protein Sequence Analysis. Previero and Coletti- Previero, (Eds.), Elsevier, North-Holland Biomed. Press, pp. 81-94 (1977).
  • Die Effektivität der Festphasen-Nucleinsäure- oder Peptid Synthese oder Sequenzanalyse wird durch die Festphase oder das Trägermaterial beeinflusst, das die reaktive Stelle verankert. Polystyrol-Gele oder poröses Glas sind beide als festes Trägermaterial für Peptidsequenzierung beispielsweise verwendet worden. In vielen Anwendungen kann das Lösungsmittel, das im Prozess verwendet wird, zu einer Volumenveränderung der Polystyrol-Partikeln führen, was zu einem blockieren der Reaktionsäule und Gegendruck führt. Umgekehrt, ist poröses Glas völlig starr und verändert sich nicht im Volumen, aber den chemischen Eigenschaften von porösen Glasderivaten fehlt es an Reproduzierbarkeit. Polymerpartikel, solche wie Polystyrolpartikeln, die derivatisiert worden sind, so dass reaktive Gruppen an sie angebunden werden können, haben sich für viele Anwendungen als nützlich erwiesen. Polyethylenglykol(PEG)strukturen sind als chemisch inerte Spacer-Arme verwendet worden, weil sie mit einem weiten Bereich von Lösungsmittel kompatibel sind. Inman et al., ibid. Die Verwendung von PEG Spacer-Armen minimiert die sterischen Effekte, die durch das Trägermaterial verursacht werden. PEG Spacer-Arme stellen eine weitere nützliche Funktion zur Modifizierung des Charakters des Porenraums bereit, so dass die trägermaterialgebundene reaktive Komponente mit einem breiteren Bereich von Lösemittel und Reagenzien kompatibel ist.
  • PEGmodifizierte Polystyrol(PEG-PS)harze sind geschrieben worden für die Verwendung in der Festphasen-Peptidsequenzierung. Iman et al., ibid. PEG-PS- Harze sind auch als Phasenübergangskatalysatoren verwendet worden. W. M. McKenzie et al., J Chem Soc.Chem.Commun., S. 541-543 (1978); S. L. Regen et al., J Amer.Chem.Soc., 101 : 116-120 (1979); J. G. Heffernan et al., J. Perkin II, S. 514-517 (1981); Y. Kimura et al., J. Org.Chem 48: 385-386 (1983) M. Tomoi et al., Reactive Polymers, 10: 27-36 (1989). PEG-PS-Harze sind als Trägermaterial für die Festphasen-Peptidsynthese geschrieben worden. Becker et al., Makromol. Chem. Rapid Commun, 3: 217-223 (1982); H. Hellermann, et al., Makromol. Chem., 184: 2603-2617 (1983). PEG-PS-Harze, wie über die angegebenen Methoden hergestellt werden, leiden jedoch an verschiedenen Nachteilen. Die Reaktionen verliefen schlecht mit hochmolekularem PEG (z. B. größer als 400 Dalton) und symmetrisches, bifunktionales PEG neigte zur Bildung von Vernetzungen. Diese Probleme wurden reduziert durch die anionische Polymerirsation von Ethylenoxid direkt auf vernetztes Polystyrol. Bayer et al., In Peptides: Structure and Function, V. J. Hruby and D. H. Rich (eds.), Proc. 8th Am. Peptide Symp. S. 87-90, Pierce Chem. Co., Rockford, IL (1983). Bayer and Rapp, Deutsches Patent DE 35 00 180 A1 (1986). Die PEG-Kettenlänge ist jedoch schwierig zu kontrollieren bei Verwendung dieser Methode, und die Einheitlichkeit der PEG-Polymere ist ungewiß. Ein weiteres Problem bei diesem Verfahren ist, dass das Polystyrol funktionalisiert wird unter Verwendung von Chlormethylether, der hochgiftig ist, und restliche Chlormethylguppen Nebenreaktionen während der Peptidsynthese verursachen können.
  • Ein weiteres Verfahren zur Herstellung von PEG-Pfropfcopolymeren ist beschrieben bei Zalipsky et.al. In Peptides: Structure and Function, C. M. Deber, V. J. Hruby and K. D. Kopple (eds.), Proc. 9th Am. Peptide Symp. S. 257-260, Pierce Chem. Co., Rockford, IL (1985). Bei diesem Verfahren wurden bestimmte heterobifunktionale PEG-Derivate mit definierter Molmasse (z. B. 2000 bis 4000 Daltons) verwendet. Diese Derivaten sind jedoch nicht ohne weiteres erhältlich, was ihre Kommerzialisierung behindert.
  • Ein Verfahren zur Herstellung nicht giftiger und effektiver fester Trägermaterialien, die für einen weiten Bereich von Lösemittel verwendet werden können, wäre sehr wertvoll für die Verwendung in der Festphasensynthese oder der Sequenzierung von Peptiden oder Nukleinsäuren oder für andere Festphasen Anwendungen.
    • Zusammenfassung der Erfindung
  • Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zu Herstellung von Polyethylenglykol-derivatisierten Propfträgermaterialien. Die Beschreibung offenbart Polyethylenglykol derivatisierte Propfträgermaterialien und Verfahren zur Verwendung der Trägermaterialien, um Peptide über Festphasen-Synthesetechniken zu synthetisieren. Die PEG-Propfträgermaterialien, die über das Verfahren dieser Erfindung hergestellt werden, umfassen funktionalisierte PEG-Derivate, die kovalent an feste Trägermaterialien gebunden sind. Die Erfindung stellt ein Verfahren zu Herstellung eines Harzes bereit, das ermöglicht, dass die Peptidsynthese an einem anderen Punkt als dem Ende des FEG auftritt. Solche Harze sind in Fig. 1 veranschaulicht und werden weiterhin durch die allgemeine Formel II repräsentiert: Formel II
  • worin Y ein Diamino-Monocarbonsäurerest ist, der ggf. durch eine Nω-Schutzgruppe geschützt sein kann; n eine ganze Zahl von 5 bis 150 ist; SS ein fester Träger ist; A eine linerare Kette oder verzweigte C1-C10 Alkylgruppe ist, solche wie Methylen, Ethylen, Propylen, Isopropylen, Butylen und Isobutylen; und R¹, R² und R³ unabhängig voneinander ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoff, Alkylgruppen und Arylgruppen.
  • Das Harz der Formel II, wie definiert im vorangehenden Abschnitt, ist Gegenstand der Ansprüche unserer EP-B-0687691.
  • Die vorliegende Erfindung stellt eine kompakte, kommerziell realisierbare Ruote zur Herstellung funktionalisierter inerter Trägermaterialien für Festphasenanwendungen bereit, die monofunktionelles oder homobifunktionelles Polyethylenglykol als Ausgangsmaterial verwenden. Die vorliegende PEG-Propfträgermaterialien bieten vorteilhafte physikalische und mechanische Eigenschaften für die Festphasen Peptidsynthese, Nukleinsäuresynthese und andere Anwendungen, bei denen immobilisierte Moleküle verwendet werden.
    • Kurze Beschreibung der Figuren
  • Fig. 1 zeigt die allgemeine Struktur eines Polyethylenglykol-Polystyrölen-(PEG-PS)- Propfträgermaterial. X veranschaulicht den Punkt an dem das Biopolymer Kettenwachstum beginnt.
  • Fig. 2 ist eine schematische Darstellung einer Serie von Reaktion, die zu einem PEG-PS-Propfträgermaterial führen, worin das Biopolymer von dem Orn-Rest synthetisiert werden kann.
    • Detaillierte Beschreibung der Erfindung
  • Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zu Herstellung eines Harzes, dass ein funktionalisiertes Polyethylenglykolderivat umfasst, das kovalent an ein festes Trägermaterial gebunden ist. Wie offenbart und beansprucht in Patent EP-B-0546055, umfasst ein solches Propfträgermaterial ein symmetrisches Poly(oxethylen)diamin-Derivate, dass mit dem Träger Material verbunden ist und repräsentiert wird durch Formel I; Formel I
  • worin n eine ganze Zahl von 5 bis etwa 150 ist; R¹, R², R³, R&sup4;, R&sup5; und R&sup6;, unabhängig voneinander ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoff (H) und einfachen Alkyl- oder Arylgruppen, so wie Methyl-, Ethyl- oder Phenyl; SS ein fester Träger ist; X gleich H oder H&sub2;N-B-NH-C(O)-A-C(O)- ist; und A und B unabhängig voneinander eine lineare oder verzweigte Alkylgruppe sind, sowie Ethylen, Propylen, Isopropylen, Butylen, Isobutylen oder Ähnliches bis zu C-10 in der Länge sind (z. B. A abgeleitet von Bernstein-, Glutar-, Adipin- oder anderen solchen Säuren; B abgeleitet von Ethylendiamin oder anderen aliphatischen Diaminen); eine CH=CH-Gruppe (z. B. A abgeleitet von Maleinsäure) oder eine aromatische Gruppe sind (z. B. A abgeleitet von Phthalsäure; B abgeleitet von Phenyldiamin). Das Kernstück der Formel, innerhalb desgeklammerten Stücks, korrespondiert mit einer Serie von Polyoxyethylendiamin- Polymeren. Die Aminogruppe(n) kann/können gegebenenfalls mit bekannten Nω- Schutzgruppen geschützt sein.
  • Ein Verfahren zu Herstellung von Propfträgermaterialien der Erfindung ist durch Reaktion von amino-funktionalisierter Kernpolymere mit Dicarbonsäure-Derivaten, einschließlich Anhydriden, zur Herstellung carboxyl-funktionaler Moleküle. Dicarbonsäure, die bei diesem Verfahren eingesetzt werden können, beinhalten Alkyl-disäuren, die bis zu etwa 12 Kohlenstoffatomen haben, solche wie zum Beispiel Malein-, Bernstein-, Glutar- oder Adipinsäure; Anhydride solche wie Malein-, Bernstein- oder Glutaranhydrid; oder aromatische Anhydride, solche wie Phthalanhydrid. Wie offenbart im Stammpatent EP-B-0546055 wird das Diamin- Polymer mit Bernstein-, Malein- oder Glutaranhydrid umgesetzt, um Vertreter der Verbindungen, die im Stamm EP-B-0546055 beansprucht werden, bis(succinyliertes), Bis(maleiniertes) oder bis(glutariertes) PEG herzustellen. Die Fig. 2 und 3 in EP-B-0546055 veranschaulichen die Bildung und darauf folgende Kopplung dieser Derivaten an ein amino-funktionalisiertes Trägermaterial.
  • Für einige Anwendungen können symmetrische Di-Carboxylsäure funktionalisierte Polymere, die ungefähr die gleiche allgemeine Struktur besitzen, verwendet werden.
  • Carboxyl-funktionalisierte Spacerarm-Verbinder, die über die vorliegende Methode hergestellt werden, werden dann an geeignete Stammträger gekoppelt, die mit Amingruppen funktionalisiert wurden. Träger, die als Festphasen in der vorliegenden Erfindung nützlich sind, beinhalten Makromoleküle oder Feststoffe, solche wie Membranen, poröses Glas, Silikate, Polystyrole, Polydimethylacrylamide, Baumwolle oder Papier. Feste Trägermaterialien, die besonders nützlich sind, beinhalten amino-funktionalisiertes Polystyrol, Aminomethyl- Polystyrol, Aminoacyl-Polystyrol und p-Methylbenzhydrylamin-Polystyrol. Ein besonders bevorzugtes Trägermaterial ist ein amino-funktionalisiertes Polystyrol- Co-1%-Divinylbenzol. Alle Aminogruppen des Stammträgers können bedeckt werden, durch Reagieren von einem Äquivalent des Trägers, basierend auf den Aminogruppen, mit einem Überschuss des carboxylfunktionalisierten Derivats. Die meisten der Aminogruppen auf dem Träger werden durch Polyethylenglykol- Derivate substituiert, wodurch Spacer-Arme gebildet werden, die einen freien Carboxylgruppen-Anhang haben.
  • Die Einführung einer Amino-Funktionalität in die vorliegenden PEG-Derivate ist erwünscht für viele Syntheseanwendungen. Dieses kann durch Säurehydrolyse der Amidkomponenten erreicht werden (siehe Fig. 2 des Stammpatent EP-B- 0546055), wodurch die Aminogruppe, die ursprünglich im Diamin vorhanden war, freigelegt wird, oder durch weitere Kopplung eines freien oder monogeschützten niedrigmolekularen Diamins (z. B. Ethylen- oder Hexamethylendiamin) mit der Carboxylat-Endgruppe (siehe Fig. 3 des Stammpatents EP-B-0546055). Für Stammträger zum Beispiel, die mit bis(maleierten) PEG-Verbinder modifiziert sind (siehe Fig. 2 des Stammpatents EP-B-0546055), wird die terminal anhängige Maleyl-Gruppe selektiv hydrolysiert durch kontrollierte Behandlung mit einer Säure, zum Beispiel Trifluoressigsäure oder verdünnte Salzsäure, während die andere Maleyl-Gruppe, die jetzt das PEG mit dem Träger verbindet, im wesentlichen stabil ist. Über diese Verfahren, werden amino-funktionalisierte PEGmodifizierte Materialien schnell, effizient und ökonomisch hergestellt.
  • Bei dem vorliegenden Verfahren zu Herstellung von PEG-PS Pfropfcopolymeren, wird die Disäure oder das Anhydrid zuerst mit dem amino-funktionalisierten Trägermaterial reagiert, wodurch ein amid-verknüpftes carboxyl-funktionalisiertes Trägermaterial gebildet wird. Dieses carboxyl-funktionalisierte Trägermaterial wird aktiviert und dann mit einem Überschuss eines bifunktionalen Diaminpolymers in Kontakt gebracht, das durch die oben beschriebene Kernstruktur wiedergegeben wird.
  • Das PEG-Pfropfträgermaterial des Stammpatents EP-B-0546055 ermöglicht es, Biopolymere an dem PEG Ende zu sammeln (wie in seiner Fig. 1A gezeigt). In der vorliegenden Erfindung können jedoch Harzes aufgebaut werden, so dass die Peptidsynthese an einem anderen Punkt als dem PEG Ende erfolgen kann. Solche Harze sind in Fig. 1 hiervon illustriert und werden weiter durch die allgemeine Formel II wiedergegeben: Formel II
  • worin Y ein Diamino-Monocarbonsäurerest ist, der ggf. durch eine Nω-Schutzgruppe geschützt sein kann; n eine ganze Zahl von 5 bis 150 ist; SS ein fester Träger ist; A eine linerare Kette oder verzweigte C1-C10 Alkylgruppe ist, solche wie Methylen, Ethylen, Propylen, Isopropylen, Butylen und Isobutylen; und R¹, R² und R³ unabhängig voneinander ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoff, Alkylgruppen und Arylgruppen.
  • Ein PEG-Pfropfträgermaterial dieses Typs (Formel II) würde synthetisiert unter Verwendung eines monofunktionalisierten Polyethylenglykol (z. B. PEG Monoamin oder PEG Monomethylether), das derivatisiert wurde. Kommerziell erhältliche PEG Ausgangsmaterialien sind entweder monofunktionelles Jeffamine® oder PEG Monomethylether, der Methoxy- und Hydroxyl-Endgruppen hat. Polymere, die besonders nützlich für diesen Zweck sind, beinhalten eine Serie von Poly(oxethylen)diaminen, die ein Molekulargewicht bis zu etwa 6000 Daltons haben, die kommerziell erhältlich sind unter dem Handelsnamen Jeffamine®. (Texaco Chemicals Co., Bellaire, TX). Die Jeffamine® Poly(oxethylen)diaminharze sind aliphatische primäre Diamine, die strukturell von Polypropylenoxidgekapptem Polyethylenglykol abstammen.
  • Eine Aminogruppe auf dem PEG kann mit einer Dicarboxylsäure oder einem Anhydrid reagiert werden, wie bereits beschrieben. Alternativ können carboxylfunktionalisierte Derivate von MPEG durch Reaktion mit Ethylbromacetat, 4- Bromvalerat oder Isocyanacetat, gefolgt von einer Verseifung, hergestellt werden z. B. wie in der unten stehenden Gleichung gezeigt.
  • Fig. 2 hiervon illustriert schematisch die Synthese eines PEG-Harzes der Formel II. Entsprechend diesem Verfahren wird ein Nα-Fmoc (Nα-9- Fluorenylmethyloxycarbonyl), Nδ--Boc-Orn-PS (Nδ--tert-butyloxycarbonylornithin-PS)-Harz (oder eine Permutation dieses Stamms) selektiv entblockt und eine monofunktionalisierte PEG-Säure daran gekoppelt, um eine Verzweigung zu bilden, die orthogonal zu der grundlegenden Richtung des Biopolymer- Kettenwachstums ist. Ein Ornithin-Rest (wie gezeigt in Fig. 2) wird verwendet, um das PEG Derivaten an das feste Trägermaterial zu binden; andere chemische Komponenten können jedoch verwendet werden, die eine Carboxylgruppe und zwei Aminogruppen haben.
  • Polyethylenglykol-Polystyrol (PEG-PS) Pfropfträgermaterialien, die über die Verfahren dieser Erfindung hergestellt werden, sind besonders nützlich. PEG-PS Trägermaterialien, die hergestellt sind unter Verwendung der vorliegenden PEG Derivate, haben verschiedene erwünschte Charakteristika für Festphasenanwendungen: sie schwellen an in einer Vielzahl von Lösungsmitteln, sind stabil unter den Bedingungen, die bei den meisten Festphasensynthesen verwendet werden, und verhalten sich gut in beiden Batch- und Säulenreaktoren, die bei Festphasenanwendungen verwendet werden, insbesondere Festphasen- Peptidsynthese.
  • Festphasen Peptidsynthese beginnt typischerweise mit der kovalenten Anbindung des Carboxylendes einer ersten Aminosäure an das feste Trägermaterial. Die Carboxylgruppe einer Nα-geschützten Aminosäure wird kovalent gebunden an eine Henkelkomponente, die an die Aminogruppe des PEG Spacerarms an einem Punkt anders als dem PEG Ende angebunden ist (Fig. 1 und 2). Ein "Henkel" ist deiniert als ein bifunktioneller Spacer, der dazu dient um den Anfangs- Aminosäurerest an das polymere Trägermaterial anzubinden. Ein Ende des Henkels vereinigt eine leicht abspaltbare Schutzgruppe und das andere Ende des Henkels ist an das funktionalisierte feste Trägermaterial gekoppelt. Henkel, die mit den vorliegenden Spacerarmen bei der Festphasen Peptidsynthese verwendet werden können, beinhalten, zum Beispiel säurelabile p-Alkoxybenzyl(PAB)henkel, photolabile o-Nitrobenzylester-Henkel und Henkel, solche wie beschrieben werden von Alberico et al., J. Chem. 55: 3730-3743 (1990) und darin zitierten Referenzen.
  • Die geeigneten Henkel werden quantitativ in einem einzigen Schritt an das aminofunktionalisierte Trägermaterial gekoppelt, um einen allgemeinen Startpunkt für genau-definierte Strukturen für den Peptidekettenaufbau bereitzustellen. Die Henkel-Schutzgruppe wird entfernt und der C-terminale Rest der Nα-geschützten ersten Aminosäure wird quantitativ an den Henkel gekoppelt. Sobald der Henkel an die Festphase gekoppelt ist und die Anfangs-Aminosäure oder das Peptid an den Henkel angebunden ist, beginnt der allgemeine Synthesezyklus. Der Synthesezyklus besteht allgemein aus der Entschützung der Aminogruppe der Aminosäure oder des Peptids auf dem Harz, waschen, und, wenn notwendig, einen Neutralisationsschritt, gefolgt von der Reaktion mit einer carboxyl-aktivierten Formen der nächsten Nα-geschützten Aminosäure. Der Zyklus wird wiederholt, um das Peptide oder Protein von Interesse zu bilden. Festphasen Peptidsyntheseverfahren, die funktionalisierte unlösliche Trägermaterialien verwenden, sind gut bekannt. Merrifield, J. Am.Chem.Soc, 85 2149 (1963); Barany ans Merrifield, In Peptides, Vol. 2, pp. 1-284 (1979); Barany et al., Int J. Peptide Protein Res., 30: 705-739 (1987).
  • Die vorliegenden PEG Derivaten sind besonders nützlich als Spacer-Arme, die das inerte Trägermaterialien von den reagierenden Aminosäuren trennen, die die Peptidkette während des Syntheseprozesses bilden. Die Wahl eines Spacerarms, der diesen Abstand bereitstellt, ist ein kritischer Parameter bei Festphasenanwendungen.
  • In einer bevorzugten Ausführungsform der vorliegenden Erfindung wird eine Vielzahl von PEG Spacerarmen, die ein mittleres Molekulargewicht von etwa 2000 Daltons haben, zwischen amino-funktionalisierten Gruppen auf einem Polystyrol- Rückgrat und dem Punkt zur Anbindung der geeigneten Henkel eingebracht. Das resultierende PEG-PS Pfropfträgermaterial enthält etwa gleiche Gewichtsmengen PEG und PS. Diese Trägermaterialien zeigen reproduziertbare Vorteile gegenüber PS Trägermaterialien im Hinblick auf physikalische und chemische Eigenschaften, sowie Quellung und bei der Synthese von Modellpeptiden. Die PEG-PS Trägermaterialien dieser Erfindung erlauben die Ausführung der Peptidsynthese unter Verwendung von Acetonitril als Lösungsmitteln für alle Reaktionsschritte und zum Waschen. Das Kontrollexperiment unter Verwendung von PS und Acetonitril als Lösungsmittel resultiert in keinem Peptidprodukt.
  • In einer weiteren Ausführungsform wurden Vergleichsversuche ausgeführt, bei denen die schwierige Acyl-Trägerprotein 65-74-Deacpeptidsequenz synthetisiert wurde unter Verwendung von Fmoc-Aminosäure. Das Peptid wurde in höherer Reinheit auf diesem neuen PEG-PS produziert als auf jedem PS, TentagelTM (eine Marke von Rapp Chem., Tübingen, Deutschland), oder Pepsyn KTM (eine Marke von Cambridge Research Biochem., Cambridge, England). Das PEG-PS Material erwies sich als sehr geeignet für beides Durchflusssynthese und Batchoperation. Vernachlässigbare Gegendrücke wurden sogar bei hohen Flussraten gefunden.
  • Der allgemeine Nutzen der PEG-PS Pfropfträgermaterialien wurde demonstriert durch Synthese einer Anzahl von langem (z. B. die etwa 30 bis 60 Reste hatten) komplexen Peptidsequenzen, solche wie Cecrophinanaloge, Calcitonin, β- Endorphin, Corticotropin-Releasingfaktor, zwei Zink-fingerbindende Sequenzen und verschiedene partielle Sequenzen von HIV I tat Protein. Die Verbesserung der synthetischen Effizienz, die aus der Verwendung der vorliegenden PEG-PS Verbinder resultiert, scheint von einem oder mehrerem des folgenden herzurühren: (i) ein Spacerarm Effekt, der die Reaktionsstelle aus der Umgebung des Polymerrückgrats entfernt; (ii) ein allgemeiner Umgebungseffekt, der die hydrophobe Natur des Harzes modifiziert mit einem gleichzeitig günstigen Einfluss auf die Reaktionsraten; und (iii) ein spezifischer Effekte auf konformationsbedingt schwierige Kopplungen durch verminderte Sekundärstrukturen (Hydrogenbindungs-Bildung).
  • Die PEG Derivaten können auch bei der Synthese oder Sequenzierung von Nukleinsäuren als Spacerarme oder Verbinder zwischen einem inerten Trägermaterial und dem regierenden Nukleotid oder der Nukleinsäuren verwendet werden. Beispielsweise können die Derivaten an Polystyrolharze, wie oben beschrieben, angelagert werden und bei der amidit-vermittelten DNA Synthese verwendet werden. Die PEG-PS HArze quellen in Acetonitril, das als Lösungsmittel bei der Amidit-Kopplungsmethode verwendet wird.
  • Die Erfindung wird nun weiter illustriert durch die folgenden Beispiele
    • Beispiele Beispiel 1. Herstellung eines Carboxylmethyl Derivates von Pol ethylenglykolmethylether (MPEG)
  • Eine Lösung von Polyethylenglykolmethylether (MPEG), Mw 2000 (100 g, 50 mmol) in Toluol (500 ml) wurde zur azeotopen Trocknung über Nacht unter Rückfluss gekocht, wobei Wasser über einen Dean-Stark-Fallen-Aufbau entfernt wurde. Die Lösung wurde auf 80ºC gekühlt, mit Kalium-tert-butoxid behandelt (11,2 g, 0,1 mol), und dann wurde eine Mischung aus Ethylbromacetat (11 ml, 0,1 mol) und Toluol (10 ml) über 30 Minuten zugegeben. Die Reaktion wurde 8 Stunden bei 90ºC fortgesetzt, worauf folgend das Gemisch in einem Rotationsverdampfer konzentriert wurde, um eine braune, visköse Schmelze zu bilden. Dichlormethan (500 ml) wurde zum Extrahierten des Polymers zugegeben, und aktiviertes Aluminiumoxid (200 g) wurde zugegeben. Nach 30 Minuten wurde die organische Phase durch Filtration gesammelt, teilweise konzentriert (bis -100 ml), mit Ethylether kombiniert (700 ml) und für mehrere Stunden auf -20ºC gebracht. Das ausgefällte Polymer wurde durch Filtration gesammelt, luftgetrocknet und in wässrigem Natriumhydroxid (1 N, 500 ml) für 3 Stunden, 25ºC aufgenommen. Die Verseifungsreaktion wurde durch Ansäuerung mit konzentrierter wässrige HCL auf pH 3 gestoppt und das Produkt wurde in Dichlormethan extrahiert (3 · 250 ml). Die organische Phase wurde getrocknet (MgSO&sub4;), teilweise konzentriert (bis -100 ml), kombiniert mit Ethylether (700 ml) und für mehrere Stunden auf -20 Grad Celsius gebracht. Das Endprodukt wurde durch Filtration gesammelt und im Vakuum getrocknet über P&sub2;O&sub5; für mehrere Tage. Ausbeute: 75 g (73%), die Titration auf Carboxylgruppen 94% der Theorie. NMR- Daten und Elementaranalyse in Übereinstimmung mit Struktur.
    • Beispiel 2. Herstellung eines PEG-Orn(Boc)-PS Harzes
  • Ein Aminomethyl-Polystyrolharz Trägermaterial (6,0 g, 0,95 mmol/g, 5,7 mmol) wurde mit Nα-Fmoc, Nδ-Boc-Ornithin über Standardverfahren derivatisiert. Das Harzes wurde gequollen und gewaschen mit Dichlormethan, neutralisiert mit 5% DIEA in Dichlormethan (1 · 5 min + 3 · 10 min), und mit Dichlormethan gewaschen. Die Kopplung des Orn-Derivates wurde vermittelt durch N,N'- Diisopropylcarbodümid (DIPCDI)/HOBt in DMF(3 Äquivalente jedes, 15 min Voraktivierung, 40 ml Redaktionsvolumen), 3 Stunden. Waschen mit DMF und Diclormethan folgte. Ein Ninhydrin-Test an einer Probe war fast negativ, aber unreagierte Stellen wurden blockierte durch verkappen mit Acetanhydrid (4,5 ml, 5 Äquivalente) und Triethylamin (7,0 ml, 5 Äquivalente) in DMF (20 ml), 30 Minuten. Das geschützte ORN-PS Harz (0,78 mmol/g, entsprechend der theoretischen Beladung wie dem erwarteten Gewichtsanstieg angepasst) wurde mit DMF, Dichlormethan gewaschen und behandelt mit Poperidin-DMF (1 : 4, v/v) (2 + 10 min) um selektive die Nα-Fmoc-Gruppen zu entfernen. Weiteres Waschen mit DMF, Dichlormethan, 2-Propanol und DMF-Dichlormethan (3 : 7, v/v) bereitete das Harzes für die Kopplung des MPEG-Säurederivates vor, hergestellt wie in Beispiel 1 beschrieben. Eine Lösung der MPEG-Säure (37 g, 18 mmol) in DMF- Dichlormethan (3 : 7, v/v, 75 ml) wurde kombiniert mit HOBt (2,75 g, 18 mmol) und DIPCDI (2,83 ml, 18 mmol) für 15 Minuten und wurde dann zu dem H-Orn(Boc)- PS Harz gegeben. Die Kopplung ging weiter für 5 Stunden, einen geringfügig positiven Ninhydrin-Test gebend. Eine zweite Kopplung folgte mit geringeren Mengen von MPEG-Säurederivat und aktivierten Mitteln (9 mmol Maßstab) und Acetylierung über die bereits beschriebenen Verfahren. Das endgültige MPEG- Orn(Boc)-PS Harz wurde mit Dichlormethan, DMF, Dichlormethan und Methanol gewaschen und im Vakuum über P&sub2;O&sub5; für 48 Stunden getrocknet. Es wurden 16,9 g des Harzes erhalten (exzellente Übereinstimmung mit der theoretischen Gewichtsausbeute) mit einer Beladung von nur 0,31 mmol/g, umfassend PEG : PS : Orn = 0,57 : 0,36 : 0,07 nach Gewicht (basierend auf der Elementaranalyse und Aminosäurenanalyse). Gleiche Ergebnisse wurden erhalten, wenn BOP/HOBt/NMM in DMF benutzt wurde zur Aktivierung und Kopplung.
    • Beispiel 3 Kontinuierlicher Fluss Peptidsynthese mit Polyethylengkol- Polystyrol Pfropf (PFG-PS)
  • PEG-Orn(Boc)-PS, das hergestellt wurde wie in Beispiel 2 beschrieben, wurde mit TFA-Dichlormethan (1 : 1) (5 + 25 min) behandelt, um selektiv die Nδ-Boc-gruppe zu entfernen. Darauf folgte waschen mit Dichlormethan, Neutralisisation mit 5% DIEA in Dichlormethan und Dichlormethan. Ein Fmoc-PAL-Henkel wurde zugegeben, und ein MilliGen/Biosearch Model 9050 Peptidsynthetisierer wurde verwendet mit einem DIPCDI + HOBt Kopplungsprotokoll (0,05 M Konzentrationen) um die herausfordernde Deca-Alanyl-Valin-Sequenz herzustellen. In einem folgenden Durchlauf wurde ein normales Polystyrolträgermaterial verwendet, um die gleiche Sequenz zu machen. Die Reinheit des Peptides, basierend auf HPLC, war 77% wenn PEG-PS verwendet wurde, im Vergleich zu 53% wenn PS verwendet wurde.

Claims (10)

1. Ein Verfahren zur Herstellung eines Harzes zur Festphasen Peptid-Synthese, umfassend die Schritte:
a) Bereitstellen eines amino-funktionalisierten, festen Trägers, der mit einer geschützten Diamino-Monocarbonsäure verbunden ist;
b) Entfernen einer Schutzgruppe von einer der zwei Nω-Amino-Komponeneten; und
c) Koppeln eines monofunktionellen, carboxylterminalen Polyethylenglykolderivates an die entschützte Nω-Aminogruppe um dadurch ein Harz herzustellen; wobei das Harzes dargestellt ist durch die Formel
worin Y ein Diamino-Monocarbonsäurerest ist, der ggf. durch eine Nω-Schutzgruppe geschützt sein kann; n eine ganze Zahl von 5 bis 150 ist; SS ein fester Träger ist; A eine linerare Kette oder verzweigte C1-C10 Alkylgruppe ist; und R¹, R² und R³ unabhängig voneinander ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Wasserstoff, Alkylgruppen und Arylgruppen.
2. Das Verfahren nach Anspruch 1, worin der feste Träger ausgewählt ist aus amino-funktionellen Membranen, porösem Glas, Silikaten, Polystyrolen, Polydimethylacrylamiden, Baumwolle und Papier.
3. Das Verfahren nach Anspruch 2, worin das Polystyrol ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Amino-Polystyrol, Aminomethyl-Polystyrol, Aminoacyl- Polystyrol und p-Methylbenzhydrylamin-Polystyrol.
4. Das Verfahren nach Anspruch 1, worin R¹, R² und R³ unabhängig voneinander Wasserstoff sind oder R¹ eine Methylgruppe ist.
5. Das Verfahren nach Anspruch 1, worin A ist unabhängig ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Ethylen, Propylen, Isopropylen, Butylen und Isobutylen.
6. Das Verfahren nach Ansprüchen 1-5, worin die Nω-geschützte Diaminomonocarbonsäure Ornithin ist.
7. Das Verfahren nach Ansprüchen 1-6, worin das monofunktionelle, carboxylterminale Polyethylenglykolderivat gebildet wird durch Reaktion eines aminoderivartisierten Polyethylenglykols mit einer Dicarbonsäure oder einem Dicarbonsäureanhydrid.
8. Das Verfahren nach Anspruch 7, worin die Dicarbonsäure ist ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Maleinsäure, Bernsteinsäure, Glutarsäure und Adipinsäure.
9. Das Verfahren nach Anspruch 7, worin die Dicarbonsäure ist ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Maleinsäureanhydrid, Bernsteinsäureanhydrid, Glutarsäureanhydrid und Phthalsäureanhydrid.
10. Das Verfahren nach Ansprüchen 1-6, worin das monofunktionelle, carboxylterminale Polyethylenglykolderivat gebildet wird durch die Schritte
d) Reagieren von Monomethyl-polyethylenglykol mit Ethylbromacetat, 4- Bromvalerat oder Isocyanat; und
e) das Produkts von Schritt d) der Verseifung unterworfen wird.
DE69133235T 1990-08-31 1991-08-27 Verfahren zur Herstellung von Harzen für die Feststoff-Peptidsynthese Expired - Lifetime DE69133235T2 (de)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US57631490A 1990-08-31 1990-08-31
US71528991A 1991-06-14 1991-06-14

Publications (2)

Publication Number Publication Date
DE69133235D1 DE69133235D1 (de) 2003-05-15
DE69133235T2 true DE69133235T2 (de) 2003-11-20

Family

ID=27076929

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE69130333T Expired - Lifetime DE69130333T2 (de) 1990-08-31 1991-08-27 Harze für die Feststoff-Peptidsynthese
DE69133235T Expired - Lifetime DE69133235T2 (de) 1990-08-31 1991-08-27 Verfahren zur Herstellung von Harzen für die Feststoff-Peptidsynthese
DE69120821T Expired - Lifetime DE69120821T2 (de) 1990-08-31 1991-08-27 Polyethylenglykol-Derivate für Festphasenanwendungen

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE69130333T Expired - Lifetime DE69130333T2 (de) 1990-08-31 1991-08-27 Harze für die Feststoff-Peptidsynthese

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE69120821T Expired - Lifetime DE69120821T2 (de) 1990-08-31 1991-08-27 Polyethylenglykol-Derivate für Festphasenanwendungen

Country Status (4)

Country Link
EP (3) EP0801082B1 (de)
JP (3) JP3122460B2 (de)
DE (3) DE69130333T2 (de)
WO (1) WO1992004384A1 (de)

Families Citing this family (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5545698A (en) * 1990-08-31 1996-08-13 University Of Minnesota Polyethylene glycol derivatives for solid-phase applications
WO1995000162A1 (en) * 1993-06-21 1995-01-05 Enzon, Inc. Site specific synthesis of conjugated peptides
US5446090A (en) 1993-11-12 1995-08-29 Shearwater Polymers, Inc. Isolatable, water soluble, and hydrolytically stable active sulfones of poly(ethylene glycol) and related polymers for modification of surfaces and molecules
US5629384A (en) * 1994-05-17 1997-05-13 Consiglio Nazionale Delle Ricerche Polymers of N-acryloylmorpholine activated at one end and conjugates with bioactive materials and surfaces
WO1995034813A1 (en) * 1994-06-14 1995-12-21 Smithkline Beecham Corporation Resins for solid state synthesis
US5604097A (en) 1994-10-13 1997-02-18 Spectragen, Inc. Methods for sorting polynucleotides using oligonucleotide tags
US5656707A (en) * 1995-06-16 1997-08-12 Regents Of The University Of Minnesota Highly cross-linked polymeric supports
US5858534A (en) * 1995-09-05 1999-01-12 Solid Phase Sciences Corp. Method of making and using derivatized paramagnetic polymer beads
DE19781535T1 (de) * 1996-01-23 1999-01-28 Argonaut Technologies Inc Hoch-funktionalisierte, mit Polyethylenglycol bepfropfte Polystyrol-Träger
TW555765B (en) 1996-07-09 2003-10-01 Amgen Inc Low molecular weight soluble tumor necrosis factor type-I and type-II proteins
US6281245B1 (en) 1996-10-28 2001-08-28 Versicor, Inc. Methods for solid-phase synthesis of hydroxylamine compounds and derivatives, and combinatorial libraries thereof
US6541276B2 (en) 1996-10-28 2003-04-01 Versicor, Inc. Methods for solid-phase synthesis of hydroxylamine compounds and derivatives and combinatorial libraries thereof
US6060240A (en) * 1996-12-13 2000-05-09 Arcaris, Inc. Methods for measuring relative amounts of nucleic acids in a complex mixture and retrieval of specific sequences therefrom
CA2285175A1 (en) * 1997-03-28 1998-10-08 Smithkline Beecham Corporation Rink-chloride linker for solid phase organic synthesis of organic molecules
EP0981554A4 (de) * 1997-05-08 2005-11-09 Smithkline Beecham Corp Chloridverbinder für die organische synthese in der festphase
GB9717173D0 (en) * 1997-08-13 1997-10-22 Akzo Nobel Nv Solid phase supports
GB9718415D0 (en) * 1997-08-29 1997-11-05 Smithkline Beecham Plc Formulation
CA2223114A1 (en) * 1997-11-28 1999-05-28 Brent R. Stranix Functional polymers with carbon-linked functional groups
GB9727126D0 (en) * 1997-12-22 1998-02-25 Zeneca Ltd Process
GB9814876D0 (en) * 1998-07-10 1998-09-09 Zeneca Ltd Polymer
WO2000012575A1 (de) * 1998-08-28 2000-03-09 Jerini Bio Tools Gmbh Verfahren zur herstellung polymerer festphasenträger
WO2000053578A1 (fr) * 1999-03-11 2000-09-14 Kuraray Co., Ltd. Derives de la vitamine d et leur procede de preparation
AU2008201460B2 (en) * 1999-03-22 2010-02-04 Ge Healthcare Bio-Sciences Ab Amino group containing support matrices, their use and manufacture
US6335438B1 (en) * 1999-03-22 2002-01-01 Geir Fonnum Method for the manufacture of amino group containing support matrices, support matrices prepared by the method, and use of the support matrices
SE9902133D0 (sv) 1999-06-06 1999-06-06 Amersham Pharm Biotech Ab A method for surface modification, a novel support matrix and the use of the matrix
KR100453185B1 (ko) * 2001-11-24 2004-10-15 이은규 고정상 칼럼을 이용한 단백질-폴리머 접합체의 제조방법
SE526038C2 (sv) * 2002-07-08 2005-06-21 Gambro Lundia Ab Polymeraffinitetsmatris, förfarande för framställning därav och anvädning därav
KR100936536B1 (ko) 2003-01-18 2010-01-13 주식회사 바이오인프라 목표 부위 이외의 아민이 보호된 펩타이드, 그 제조방법및 이를 이용한 ｐｅｇ가 선택적으로 접합된 펩타이드의제조방법
SI1778711T1 (sl) 2004-07-02 2017-11-30 Geron Corporation Sinteza zaščitenih 3'-aminonukleozidnih monomerov
KR101088579B1 (ko) * 2004-10-04 2011-12-05 재단법인서울대학교산학협력재단 젤 타입의 코어-쉘 수지
EP2159228A1 (de) * 2008-08-28 2010-03-03 Polymer Laboratories Limited Amphiphiler fester Träger
GB0818074D0 (en) * 2008-10-02 2008-11-05 Lytix Biopharma As Treatment of biofilms
RS60645B1 (sr) 2015-04-23 2020-09-30 Geron Corp Postupci za pripremu polinukleotida upotrebom kompozicija multivalentne katjonske soli
KR101978446B1 (ko) * 2017-02-28 2019-05-14 주식회사 비드테크 고체상 응용을 위한 에틸렌글리콜 유도체 및 코어-쉘형 그라프트 지지체
CN113248352B (zh) * 2021-05-18 2024-08-13 长沙创新药物工业技术研究院有限公司 一种固相合成七甘醇单甲醚的方法

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CH602822A5 (en) * 1974-07-16 1978-08-15 Hoffmann La Roche Polyethylene glycol] chloromethyl- or hydroxymethyl-benzoate
GB1559610A (en) * 1975-10-31 1980-01-23 Armour Pharma Synthesis of peptides
DE3500180A1 (de) 1985-01-04 1986-07-10 Ernst Prof. Dr. 7400 Tübingen Bayer Pfropfcopolymerisate aus vernetzten polymeren und polyoxyethylen, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung
US4831084A (en) * 1987-05-18 1989-05-16 Bachem Feinchemikalien A.G. Resin-linker combination for the solid-phase synthesis of peptides and intermediates
EP0347145A3 (de) * 1988-06-14 1990-10-24 University Of Utah Research Foundation Heterogene interpenetrierende Polymernetzwerke zur gesteuerten Arzneistofffreisetzung

Also Published As

Publication number Publication date
EP0801082B1 (de) 2003-04-09
EP0546055A1 (de) 1993-06-16
EP0801082A2 (de) 1997-10-15
JP2002080530A (ja) 2002-03-19
JP2001081099A (ja) 2001-03-27
EP0687691A2 (de) 1995-12-20
DE69130333D1 (de) 1998-11-12
DE69120821T2 (de) 1997-01-23
EP0687691A3 (de) 1995-12-27
DE69133235D1 (de) 2003-05-15
JP3435541B2 (ja) 2003-08-11
JP3122460B2 (ja) 2001-01-09
JP3266600B2 (ja) 2002-03-18
WO1992004384A1 (en) 1992-03-19
EP0546055B1 (de) 1996-07-10
EP0801082A3 (de) 1998-07-22
JPH06500331A (ja) 1994-01-13
EP0687691B1 (de) 1998-10-07
DE69130333T2 (de) 1999-03-04
DE69120821D1 (de) 1996-08-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE69133235T2 (de) Verfahren zur Herstellung von Harzen für die Feststoff-Peptidsynthese
US5235028A (en) Polyethylene glycol derivatives for solid-phase applications
DE69310148T2 (de) Polyethylenglykol oder polypropylenglykol enthaltend polymer
DE3855191T2 (de) Membranen mit gebundenen Oligonukleotiden oder Peptiden
DE69936322T2 (de) Polyamideketten von genauer Länge und deren Konjugate mit Proteinen
KR860000526B1 (ko) 아미노-기능이 부여된 아크릴 공중합체의 제조방법
DE68914843T2 (de) Peptid-synthese und fester träger zur verwendung dabei.
DE60017955T2 (de) Verfahren und zusammensetzungen zur peptidsynthese
US20110245460A1 (en) Solvent resistant diafiltration of peptides, pna or oligonucleotides
US5545698A (en) Polyethylene glycol derivatives for solid-phase applications
US7820785B2 (en) Solid phase synthesis supports and methods
EP1131281B1 (de) Derivatisierung von trägeroberflächen
DE60124376T2 (de) Funktionalisierter festträger zur organischen synthese von peptiden und kleinen molekülen
CN102272143A (zh) 用于泰德合成的可降解的支持物
DE60032759T2 (de) Funktionalisierte festträger zur herstellung von alpha-oxoaldehyden
KR101978446B1 (ko) 고체상 응용을 위한 에틸렌글리콜 유도체 및 코어-쉘형 그라프트 지지체
EP0207415B1 (de) Verbrückungsreagenz, Verfahren zu seiner Herstellung und seine Anwendung
DE3931731C2 (de) Verfahren zur Festphasenpeptidsynthese
JP2001504869A (ja) 反応機能を備えた成形体
DE19635768A1 (de) Methacryloyl-Gruppen enthaltende polymere Trägersysteme, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung in Festphasenreaktionen
Krepinsky et al. [26] Polymer-supported solution synthesis of oligosaccharides

Legal Events

Date Code Title Description
8364 No opposition during term of opposition