DE69117292T3 - Bestimmung von freiem und komplexiertem prostata-spezifischem antigen - Google Patents

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Description

  • Die vorliegende Erfindung betrifft einen Immunoassay für Prostata spezifisches Antigen (PSA), bei dem spezifische Reagenzien (Antikörper) verwendet werden, die die Messung von freiem PSA sowie auch von PSA im Komplex mit α1-Antichymotrypsin erlauben.
  • Die vorliegende Erfindung betrifft auch die Verwendung von freiem PSA und von PSA im Komglex mit α1-Antichymotrypsin und ihres Verhältnisses als nützlicher Marker für die Diagnose von Patienten mit Prostatakrebs.
  • Das Prostata-pezifische Antigen (PSA) wurde zuerst aus prostatischem Gewebe gereinigt (Wang et al., Invest. Urol. 1979), aber dasselbe Protein wurde nahezu gleichzeitig und unabhängig im Samenplasma charakterisiert (Hara et al., J. Lab. Clin. Med. 1989; Graves et al., N. Engl. 3. Med. 1985). PSA kennt man nun als eine 33 kDa glykosylierte Einzelketten-Serin-Protease (Lilja, J. Clin. Invest. 1985; Watt et al., Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 1986). Das 237 Aminosäuren lange Polypeptid-Gerüst hat ausnehmende Ähnlichkeiten mit dem der glandulären Kallikreine (Lundwall et al., FEBS Lett. 1987; Schaller et al., Eur. J. Biochem. 1987). Anders als die trypsinartigen glandulären Kallikreine, die eine auf Arg beschränkte Substrat-Spezifität zeigen (MacDonald et al., Biochem. J. 1988), zeigt PSA eine chymotrypsinartige Substratspezifität (Akiyama et al., FEBS Lett. 1987; Lilja et al., J. Biol. Chem. 1989). Für PSA ist vorhergesagt worden, daß es als vermutlich inaktives Zymogen produziert wird (Lundwall et al., FEBS Lett. 1987). Aktives PSA wird in das Plasma des Samens sekretiert (Lilja, J. Clin. Invest. 1985), wo es eines der am häufigsten vorkommenden Proteine der Prostata ist (Lilja et al., The Prostata 1988; Dubé et al., J. Androl. 1987). Die biologische Aktivität von PSA im Samen bezieht sich auf seine beschränkte proteolytische Fragmentierung des vorherrschenden Proteins, das durch die seminalen Vesikel sekretiert wird (Lilja, J. Clin. Invest. 1985, Lilja et al., J. Clin. Invest. 1987; McGee et al., Biol. Reprod. 1988).
  • Die ursprüngliche japanische Patentveröffentlichung 62-46263 beschreibt das Vorkommen von Gamma-Sm (Seminoprotein) im Plasma sowohl im Komplex mit Alpha-1-Antitrypsin als auch in nicht-komplexierter Form. Sie bezieht sich auch auf Literatur, die Immunoassays für Gesamt-Gamma-Sm lehrt und berichtet von der Entwicklung eines Immunoassays für die quantitative Messung des Komplexes von Gamma-Sm mit Alpha-1-Antitrypsin. Dieser Komplex ist auch als nützlich für die Diagnose von Prostatakrebs durch Nachweis des Gamma-Sm-Alpha-1-Antitrypsin-Komplexes in dem Serum des Patienten und durch Messung nur dieses Komplexes beschreiben worden. Dieser Komplex mit Alpha-1-Antitrypsin wurde offensichtlich dadurch entdeckt, daß das Serum von Prostatakrebspatienten nach Molekulargewicht fraktioniert wurde und eine Immunoreaktivität mit den bereits bekannten Antikörpern für die Messung von Gesamt-Gamma-Sm in den 30.000- und 90.000-Fraktionen beobachtet wurde. Von der 30.000-Fraktion wurde angenommen, daß es sich um nicht-komplexiertes Gamma-Sm gleich dem aus dem Samen isolierten handelt. Von der 90.000-Fraktion wurde angenommen, daß es sich um den. Komplex mit Antitrypsin handelt. Kein Immunoassay und keine andere quantitative Technik zur Messung von nicht-komplexiertem Gamma-Sm werden offenbart. Es wird nicht einmal ein anderer Komplex erwähnt. Nach dem Titel der japanischen Patent-Zusammenfassungen in englischer Sprache ist Gamma-Sm identisch mit PSA.
  • Nachdem das PSA aus dem Prostata-Epithel freigesetzt worden ist, kann es auch in der Blutbahn nachgewiesen werden (Papsidero et al., Cancer Res. 1980). Messungen der Serum-Konzentration von PSA haben nun eine weit verbreitete Anwendung bei der Überwachung von Patienten mit Prostatakrebs gefunden, obwohl von erhöhten Serum-Konzentrationen von PSA auch in gutartigen prostatischen Hyperplasien und nach einem operativen Trauma der Prostata berichtet worden ist (Duffy, Ann. Clin. Biochem. 1989; Brawer et al., Urology Suppl. 1989). Es ist jedoch gegenwärtig nicht bekannt, ob die Immunoreaktivität im Serum das PSA-Zymogen, das aktive PSA, oder durch extrazelluläre Proteinase-Inhibitoren inaktiviertes PSA darstellt. Widersprüchliche Ergebnisse sind bzgl. des Molekulargewichts dieser Immunoreaktivität berichtet worden. Papsidero berichtete 1980, daß die PSA-Immunoreaktivität als einzelner Peak von 90 bis 100 kDa eluiert (Papsidero et al., Cancer Res. 1980), wohingegen Alfthan und Stenman berichteten, daß der überwiegende Teil dieser Immunoreaktivität als ein 30 kDa-Protein eluiert (Alfthan et al., Clin. Chem. 1988), wenn sie einer Gelfiltrationschromatographie unterworfen wird.
  • In der fortschreitenden Erfindung zeigten wir, daß PSA die Fähigkeit hat, Komplexe mit Proteinase-Inhibitoren wie α1-Antichymotrypsin, die in hoher Konzentration in menschlichen extrazellulären Flüssigkeiten vorkommen, zu bilden, und daß PSA in diesen Flüssigkeiten sowohl in einer freien als auch einer komplexierten Form vorkommt. Außerdem erwies sich die Erfindung als sehr nützlich für die Diagnose von Prostatakrebspatienten.
  • Nach dem Verfahren der vorliegenden Erfindung werden Immunoassays angewendet, um freies PSA und PSA als Komplex mit α1-Antichymotryp sin zu messen. Freies PSA und der PSA-Komplex werden gemäß der vorliegenden Erfindung mittels eines nicht kompetitiven Immunoassays gemessen, der zumindest zwei verschiedene monoklonale Antikörper verwendet. Die Erfindung ist außerdem dadurch gekennzeichnet, daß der interessante PSA Proteinaseinhibitor Komplex mit α1-Antichymotrypsin (ACT) gebildet wird. Darüberhinaus ist die Erfindung dadurch gekennzeichnet, daß freies PSA, der PSA Proteinaseinhibitor-Komplex und ihr Verhältnis für die Diagnose von Patienten mit Prostatakrebs verwendet werden
  • 1 zeigt einen polyklonalen Antikörper und drei monoklonale Antikörper, die verwendet werden, um nach einer Agarosegel-Elektrophorese auf PVDF-Membranen übertragene Proteine zu untersuchen. In Spur 1 ist 1 μg PSA, in Spur 2 ist 1 μg PSA, 30 Minuten bei 37°C mit 6 μg α1-Antichymotrypsin inkubiert, und in Spur 3 sind 6 μg α1-Antichymotrypsin.
  • 2 zeigt einen polyklonalen Antikörper und drei monoklonale Antikörper, die verwendet werden, um nach einer SDS-PA-GE auf PVDF-Membranen übertragene Proteine zu untersuchen. In Spur 1 ist 1 μg PSA, in Spur 2 ist 1 μg PSA, 30 Minuten bei 37°C mit 6 μg α1-Antichymotrypsin inkubiert, und in Spur 3 sind 6 μg α1-Antichymotrypsin.
  • 3 zeigt die Spezifität dieser 3 Assay-Typen.
  • 4 zeigt eine Korrelation der PSA Immunoreaktivität in Serumproben von 65 verschiedenen Patienten nach einer Analyse mit den Assac-Typen A und C.
  • 5 zeigt eine Korrelation der PSA Immunoreaktivität in Serumproben von 65 verschiedenen Patienten nach einer Ana- lyse mit den Assay-Typen A und B.
  • 6 zeigt eine Gelfiltration einer Patientenprobe B auf einer TSK 250 HPLC-Säule. Die PSA Immunoreaktivität der eluierten Fraktionen wurde mittels der Assay-Typen A, B und C analysiert.
  • 7 zeigt eine Filtration einer Patientenprobe C auf einer TSK 250 HPLC-Säule. Die PSA-Immunoreaktivität der eluierten Fraktionen wurde mittels der Assay-Typen A, B und C analysiert.
  • 8 zeigt eine Gelfiltration einer Patientenprobe D auf einer TSK 250 HPLC-Säule. Die PSA-Immunoreaktivität der eluierten Fraktionen wurde mittels der Assay-Typen A, B und C analysiert.
  • 9 zeigt eine Darstellung der PSA-Immunoreaktivität in einer Serumprobe mit einer PSA-Konzentration von 10.000 μg/l mittels Gelfiltration. PSA und der PSA-ACT-Komplex wurden mittels IFMA gemessen.
  • 10 zeigt den Anteil des PSA-ACT-Komplexes an der GesamtPSA-Immunoreaktivität in Seren von Patienten mit Prostatakrebs als Funktion der PSA-Konzentration. Die Konzentration an PSA wurde mittels IRMA, die Konzentration von PSA-ACT mittels IFMA gemessen.
  • 1. Produktion und Charakterisierung von monoklonalen Antikörpern
  • Produktion von spezifisch gegen PSA gerichteten monoklonalen Antikörpern
  • Balb/c-Mäuse wurden mittels intraperitonealer Injektionen von 70 μg PSA, emulgiert in gleichen Volumina mit Freunds komplettem Adjuvans, immunisiert. Die Immunisierung wurde nach 3, 6 und 9 Wochen mit 50 μg PSA, emulgiert mit Freunds unvollständigem Adjuvans, wiederholt. 3 Wochen später wurde den Mäusen eine letzte Injektion mit 40 μg PSA gegeben. 4 Tage später wurden die Mäuse getötet. Lymphoide Zellen der Milz wurden zubereitet und in einem 1:1 Verhältnis mit Plasmazytom-Zellen (NS-1) gemischt. Die Zellen wurden verschmolzen und in Mikrotiter-Vertiefungen in KC-2000 (Hazleton Biologics Inc., Le nexa, USA), enhaltend 200 g/l fötales Kälberserum und die HAT-Ergänzung H-0262 (1:50, Sigma) (Matikainen et al., J. Gen. Microbiol. 1983) geerntet.
  • Es wurde mit Mikrotiterplatten mit Streifen (well strip plates), die mit gegen Maus-IgG gerichtetem Antikörper des Kaninchens (Lövgren et al., Talanta 2984) beschichtet waren, auf Produktion von spezifisch gegen PSA gerichtetem Antikörper durch die Vater-Klone geprüft. Die Streifen wurden entweder mit den Hybridom-Überständen oder dem Standard (monoklonaler Antikörper gegen PSA; 0812 Hybritech) inkubiert, gewaschen, mit Eu-markiertem PSA (50 ng pro Loch) inkubiert, und dann wurde die Menge von gebundenem Eu-markiertem PSA bestimmt.
  • Das Klonieren der Vater-Klone mittels beschränkter Verdünnungen wurde wie beschrieben durchgeführt (Staszewski und Yale, J. Biol. Med. 1984). Die gewünschten Klone wurden intraperitoneal in Balb/c-Mäusen vermehrt (expandiert). Die Aszites-Flüssigkeit wurde nach 10 Tagen gesammelt. Die IgG-Fraktion der Aszites-Flüssigkeit wurde mittels Chromatographie auf Protein A-Sepharose nach dem von dem Hersteller empfohlenen Protokoll gereinigt.
  • An feste Phase gebundenes PSA wurde verwendet, um zu testen, ob ein unmarkierter monoklonaler Antikörper die Bindung anderer Eu-markierter anti-PSA MAb an das festphasen-gebundene PSA blockieren kann. Das festphasen-gebundene PSA wurde durch Inkubation von 25 μl-Aliquots von gereinigtem PSA (25 μg/l) und 200 μl Assaypuffer DELFIA® (50 mMol/1 Tris, pH 7,75, 0,15 Mol/l NaCl, 0,5 g/l BSA und 0,5 g/l NaN3) über einen Zeitraum von zwei Stunden in Mikrotiterplatten mit Streifen, die mit dem 2E9- oder dem 5A10-anti-PSA MAb beschichtet waren, erhalten. Die Streifen wurden gewaschen und dann eine Stunde lang mit 200 μl von einem der unmarkierten anti-PSA MAb (0,005 bis 50 μg/l) inkubiert. Dann wurden die Streifen wiederum gewaschen und eine Stunde lang mit einem anderen Eu-markierten anti-PSA MAb inkubiert. Die Menge von gebundenem Eu-markiertem anti-PSA wurde bestimmt.
  • Partielle Charakterisierung der Epitop-Spezifität von drei monoklonalen Antikörpern gegen PSA
  • Verschiedene Klone produzierten monoklonale Antikörper gegen PSA, wie es ein fluorometrischer Assay anzeigte. Drei dieser Antikörper (bezeichnet als 2E9, 2H11 und 5A10) wurden expandiert, und die Antikörper wurden auf der Aszites-Flüssigkeit isoliert. Die drei monoklonalen Antikörper gegen PSA wurden verwendet, um nach Agarosegel-Elektrophorese (1) oder nach SDS-PAGE (2) von 1 μg PSA (Spur 1), 1 μg PSA, 30 Minuten bei 37°C mit 6 μg α1-Antichymotrypsin inkubiert (Spur 2) und 6 μg α1-Antichymotrypsin (Spur 3) auf PVDF-Membranen übertragene Proteine zu untersuchen Von den Agarosegelen auf PVDF-Membranen übertragenes PSA wurde mit allen drei monoklonalen Antikörpern identifiziert, wohingegen das PSA im Komplex mit α1-Antichymotrypsin durch die Antikörper 2E9 und 2H11 identifiziert wurde, nicht jedoch durch den Antikörper 5A10. Der Antikörper 2E9 war der einzige anti-PSA MAb der PSA und PSA im Komplex mit α1-Antichymotrypsin ohne weiteres identifizierte, wenn diese Proteine nach SDS-PAGE auf PVDF-Membranen transferiert worden waren. Eine geringe Reaktion wurde jedoch auch mit dem PSA (aber nicht mit dem PSA im Komplex mit α1-Antichymotrypsin} erhalten, wenn die Antikörper 2H11 und 5A10 verwendet wurden, um diese nach SDS-PAGE auf PVDF Membranen übertragenen Proteine zu untersuchen.
  • Die Epitop-Spezifität der drei monoklonalen Antikörper wurde ebenfalls unter Verwendung von 3 verschiedenen Systemen (Sätzen) von Festphasen-Sandwich-Assays charakterisiert. Dabei zeigte Assay (A), bei dem der Antikörper 2E9 als Festphasen-Fänger und Eu-markierter Antikörper 2H11 als nachweisender Antikörper verwendet wurden, eine im Vergleich mit PSA im Komplex mit α1-Antichymotrypsin fast identische Dosis-Antwort (dose-response) für PSA (Tabelle 1; 3). Dies ist ein Unterschied zu Assay (B) und Assay (C). Bei Assay (B) wurde der Antikörper 5A10, der vorzugsweise PSA erkannte, aber PSA im Komplex mit α1-Antichymotrypsin nur sehr schwach erkannte, als Fänger verwendet, und der Eu-markierte Antikörper 2H11 wurde als nachweisender Antikörper verwendet. Bei Assay (C) wurde der Antikörper 2E9 als Fänger und ein Eu-markierter Antikörper gegen α1-Antichymotrypsin als nachweisender Antikörper verwendet, wobei dieser letztere Antikörper nur PSA im Komplex mit α1-Antichymotrypsin erkannte (Tabelle 1; 3).
  • Festphasen-gebundenes PSA wurde verwendet, um die Epitop-Spezifität der drei monoklonalen. Antikörper gegen PSA weiter zu charakterisieren. Die Festphasen-Bindung von PSA wurde mittels Mikrotiterplatten mit Streifen (well strip plates), die mit dem Antikörper 2E9 oder 5A10 beschichtet waren, erreicht. Dadurch wurde gefunden, daß sich alle drei anti-PSA MAbs 2E9, 2H11 oder 5A10 nicht signifikant in ihrer Bindung gegenseitig blockierten, als wir die Fähigkeit eines anti-PSA MAb, die Bindung eines anderen Eu-markierten anti-PSA MAb an das festphasen-gebundene PSA zu blockieren, testeten.
  • 2. Das Auftretn von PSA Proteinaseinhibitor-Komplexen in menschlichem Serum
  • Analyse von PSA im menschlichen Serum
  • Serum von einzelnen Patientenproben (n = 65) wurden mit drei verschiedenen Sätzen von Assays (A, B und C) analysiert. Eine Regressionsanalyse der mit den Assays A und C erhaltenen Ergebnisse ergab y = 0,89x + 6,55, r = 0,97 (4). Die Regressionsanalyse zwischen Assay A und B ergab y = 0,10x + 9,56, r = 0,82 (5).
  • Die vollständige Wiedergewinnung der Immunoreaktivität aus Gelfiltrationsexperimenten von Patientenproben auf der TSK 250 HPLC-Säule war gleich hoch (82 bis 107%) mit allen drei Assay-Verfahren, die verwendet wurden (A, B und C). Die Gelfiltrationsexperimente von Patientenproben auf der TSK 250 HPLC-Säule zeigten, daß der überwiegende Peak der PSA-Immunoreaktivität, wenn mit Assay A analysiert wurde, in Fraktionen identifiziert wurde, die bei einer Position entsprechend einem Molekulargewicht von 80 bis 90 kDa eluierten, während ein geringerer Peak dieser Immunoreaktivität in Fraktionen gefunden wurde, die bei einer Position entsprechend einem Molekulargewicht von 25 bis 40 kDa eluierten (6 bis 8). Auf ganz genau dieselbe Weise identifizierte die Analyse der mit Assay C eluierten Fraktionen (spezifisch für PSA im Komplex mit α1-Antichymotrypsin) einen dominanten immunoreaktiven Peak im Bereich von 80 bis 90 kDa (6 bis 8). Wenn jedoch Assay B für die Analyse der aus den Gelfiltrationsexperimenten eluierten Fraktionen verwendet wurde, eluierte der dominante immunoreaktive Peak bei einer Position entsprechend einer Masse von 25 bis 40 kDa. Die Elutionsposition dieses Peaks entsprach dem geringeren immunoreaktiven Peak, der mit Assay A identifiziert wurde (6 bis 8).
  • Wenn Serumproben von Männern mit verschiedenen Konzentrationen von PSA (10 bis 10.000 μg/l) mittels Gelfiltration fraktioniert wurden, wurden auch zwei Komponenten entsprechend PSA und PSA ACT beobachtet. In Proben mit hohen PSA-Konzentrationen dominierte der PSA-ACT-Komplex (9). In weiblichen Sera wurden diese Komponenten nicht beobachtet (nicht gezeigt). Der Anteil von PSA-ACT an der Gesamt-PSA-Immunoreaktivität stieg mit steigenden Konzentrationen von PSA (10). In Sera von gesunden Männern mit PSA-Konzentrationen unten 2,8 μg/l war der Anteil von PSA-ACT 23 bis 47%, in Proben mit PSA-Konzentrationen von 2,8 bis 10 μg/l war der Anteil 26 bis 86%, und in Proben mit höheren Konzentrationen stieg der Anteil weiter und war 70 bis 100% bei PSA Konzentrationen über 1600 μg/l (10).
  • Auf der Basis der Konzentrationen der Komplexe, ausgedrückt in willkürlichen Einheiten, war der Haupt-Komplex von PSA in Sera der PSA-ACT-Komplex. In Proben mit geringen PSA Konzentrationen war die Konzentration von PSA-ACT nahe an der Nachweisgrenze. Daher war es nicht möglich, den Anteil dieses Komplexes in normalen Proben zu berechnen. Deutlich erhöhte Konzentrationen des PSA-ACT-Komplexes traten in Proben mit PSA-Konzentrationen über 40 μg/l auf, und die Konzentrationen tendierten zur Zunahme mit steigender Konzentration des PSA.
  • 3. PSA und PSA-α1-Antichymotrypsin-Komplexe bei der Diagnose von Patienten mit Prostatakrebs
  • Die drei Assay-Typen, die in dem Abschnitt "Charakterisierung der Epitop-Spezifität von drei monoklonalen Antikörpern gegen PSA'' beschrieben wurden, wurden verwendet, um 144 Patienten mit gutartiger prostatischer Hyperplasie (BPH) und 122 Patienten in verschiedenen Stadien von Prostatakrebs (CAP) zu testen. Die Verhältnisse zwischen A: PSA im Komplex mit α1-Antichymotrypsin/Gesamt-PSA und B: freies, nicht-komplexiertes PSA/Gesamt-PSA wurden genauso berechnet wie die klinische Empfindlichkeit und Spezifität für die Messung von Gesamt-PSA und PSA/α1-Antichymotrypsin allein (Tabelle 2). Aufgrund der gezeigten Daten ist es offensichtlich, daß eine erhöhte klinische Spezifität dadurch erreicht wird, daß der PSA/α1-Antichymotrypsin-Komplex gemessen wird, und daß die Verhältnisse zwischen freiem PSA/Gesamt-PSA und freiem PSA/PSA im Komplex mit α1-Antichymotrypsin zwischen BPH- und CAP-Patienten signifikant verschieden sind.
  • Tabelle 1
  • Tabelle 1 zeigt eine Dosis-Antwort von gereinigtem PSA und PSA im Komplex mit α1-Antichymotrypsin nach Analyse mit drei verschiedenen Assay-Typen.
    • – Assay A verwendet den anti-PSA MAb 2E9 als Festphasen-Fänger und den Eu-markierten anti-PSA MAb 2H11 als nachweisenden Antikörper.
    • – Assay B verwendet den anti-PSA MAb 5A10 als Festphasen-Fänger und den Eu-markierten anti-PSA MAb 2H11 als nachweisenden Antikörper.
    • – Assay C verwendet den Kaninchen-Antikärper gegen α1-Antichymotrypsin als Festphasen-Fänger und den Eu-markierten anti-PSA MAb 2H11 als nachweisenden Antikörper.
  • Die Spalten 1 beschreiben gereinigtes PSA, die Spalten 2 beschreiben PSA im Komplex mit α1-Antichymotrypsin.
  • Tabellen 2a und 2b
  • Tabellen 2a und 2b zeigen die Ergebnisse der Untersuchungen von Patientenproben mit drei verschiedenen Assa-Typen für freies, komplexiertes und Gesamt-PSA. In der Tabelle bedeutet BPH: gutartige prostatische Hyperplasie, CAP bedeutet Prostatakrebs, G bedeutet den Differenzierungsgrad, und T bedeutet die Stufe (grade). Tabelle 2b zeigt die Empfindlichkeit und die Spezifität.
  • Tabelle 1
    Figure 00130001
  • Tabelle 2a
    Figure 00140001
  • Tabelle 2b.
    Figure 00150001

Claims (12)

  1. Immunoassay zur quantitativen Bestimmung der Menge an freiem Prostata-spezifischen Antigen (freies PSA) in einer Probe, dadurch gekennzeichnet, dass die Probe einem monoklonalen Antikörper ausgesetzt wird, der freies PSA bindet, nicht jedoch PSA im Komplex mit α1-Antichymotrypsin bindet, und dass die Menge an freiem PSA, die an den Antikörper gebunden ist, nachgewiesen wird.
  2. Der Immunoassay nach Anspruch 1, wobei die quantitative Bestimmung des freien PSA durch einen nicht-kompetitiven Immunoassay erhalten wird.
  3. Immunoassay zur qualitativen Bestimmung der Menge an Prostata-spezifischem Antigen im Komplex mit α1-Antichymotrypsin (komplexiertes PSA) in einer Probe, dadurch gekennzeichnet, dass die Probe sowohl einem Antikörper, der komplexiertes PSA bindet, als auch einem Antikörper, der α1-Antichymotrypsin bindet, ausgesetzt wird, und dass die Menge des komplexierten PSA, die durch beide Antikörper gebunden wird, nachgewiesen wird.
  4. Immunoassay zur Bestimmung des Verhältnisses zwischen dem freien, nicht-komplexierten Prostata-spezifischen Antigen (freies PSA) und dem PSA im Komplex mit α1-Antichymotrypsin (komplexiertes PSA), dadurch gekennzeichnet, dass (a) die Menge des freien PSA gemäß Anspruch 1 gemessen wird, (b) die Menge an komplexiertem PSA gemäß Anspruch 3 gemessen wird, und (c) das Verhältnis zwischen der Menge von freiem PSA und der Menge von komplexiertem PSA bestimmt wird.
  5. Immunoassay zur Bestimmung des Verhältnisses zwischen dem freien, nicht-komplexierten Prostata-spezifischen Antigen (freies PSA) und der Gesamtmenge von PSA (Gesamt-PSA), dadurch gekennzeichnet, dass (a) die Menge des freien PSA gemäß Anspruch 1 gemessen wird, (b) die Menge an Gesamt-PSA gemessen wird, und (c) das Verhältnis zwischen der Menge von freiem PSA und der Menge von Gesamt-PSA bestimmt wird.
  6. Der Immunoassay nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei der Antikörper oder die Antikörper ein oder mehrere monoklonale Antikörper ist/sind.
  7. Der Immunoassay nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die quantitative Bestimmung der verschiedenen Formen von PSA dadurch erhalten wird, dass ein markierter und ein nicht-markierter monoklonaler Antikörper verwendet werden.
  8. Gereinigter PSA-α1-Antichymotrypsin-Komplex (PSA-ACT).
  9. Monoklonaler Antikörper mit der Fähigkeit, freies PSA zu binden, jedoch nicht fähig, PSA im Komplex mit α1-Antichymotrypsin zu binden.
  10. Zelllinie, die den monoklonalen Antikörper nach Anspruch 9 erzeugt.
  11. Verfahren zur Unterscheidung zwischen gutartiger prostatischer Hyperplasie und Prostatakrebs durch Bestimmung des Verhältnisses zwischen freiem PSA und Gesamt-PSA, zwischen freiem PSA und PSA im Komplex mit α1-Antichymotrypsin oder zwischen PSA im Komplex mit α1-Antichymotrypsin und Gesamt-PSA in dem Serum eines Patienten, wobei das freie PSA gemäß Anspruch 1 bestimmt wird, und wobei PSA im Komplex mit α1-Antichymotrypsin gemäß Anspruch 3 bestimmt wird.
  12. Verfahren zur Untersuchung auf Prostatakrebs durch Bestimmung des Verhältnisses zwischen freiem PSA und Gesamt-PSA, zwischen freiem PSA und PSA im Komplex mit α1-Antichymotrypsin oder zwischen PSA im Komplex mit α1-Antichymotrypsin und Gesamt-PSA in dem Serum eines Patienten, wobei das freie PSA gemäß Anspruch 1 bestimmt wird, und wobei PSA im Komplex mit α1-Antichymotrypsin gemäß Anspruch 3 bestimmt wird.
DE69117292T 1990-07-23 1991-07-22 Bestimmung von freiem und komplexiertem prostata-spezifischem antigen Expired - Lifetime DE69117292T3 (de)

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