DE69011913T2

DE69011913T2 - Phthalinidderivat, pharmazeutische Zubereitung und Verwendung.

Info

Publication number: DE69011913T2
Application number: DE69011913T
Authority: DE
Inventors: Kenji Kawamura; Katuhisa C O Banyu Phar Kojiri; Nasamori Okanishi; Akira C O Banyu Pharm Co Okura; Hiroyuki Suda
Original assignee: Banyu Phamaceutical Co Ltd
Current assignee: MSD KK
Priority date: 1989-03-23
Filing date: 1990-03-22
Publication date: 1995-02-09
Anticipated expiration: 2010-03-23
Also published as: DE69011913D1; ES2063186T3; EP0388956A2; KR920703597A; CA2012955C; EP0388956B1; JPH0320277A; US5290698A; JP3010675B2; NO300812B1; NO920614L; AU5835190A; ATE110727T1; KR0163202B1; HU210868A9; US5106864A; AU634247B2; NO920614D0; EP0388956A3; CA2012955A1

Description

Die Erfindung betrifft eine neue Verbindung, die im medizinischen Bereich wertvoll ist. Insbesondere betrifft die Erfindung eine neue Substanz, welche das Wachstum und die Vermehrung von Tumorzellen unter Erzeugung eines Antitumoreffekts verhindert, ein Verfahren zur Herstellung der neuen Substanz, Verwendungen für die Substanz und einen neuen, zur Gattung Streptoverticillium gehörenden Mikroorganismus, der die Substanz produziert.
Eine Vielzahl mikrobieller Metaboliten, wie die Bleomycine oder Adriamycin, sind im Bereich der Krebschemotherapie klinisch eingesetzt worden. Viele dieser Substanzen sind jedoch nicht ausreichend wirksam bei vielen Tumoren, die klinisch behandelt werden, und darüber hinaus hat die zunehmende Resistenz von Tumorzellen gegenüber diesen Arzneimitteln, welche zunehmend klar zutage tritt, ihre Verwendung in klinischen Fallen beeinträchtigt (the Proceedings of the 47th Congress of the Japanese Cancer Association, Seiten 12 bis 15, 1988).
Unter diesen Umständen besteht natürlich ein ständiges Bedürfnis zur Entwicklung von Antikrebsmitteln. Es besteht daher ein starkes Bedürfnis nach einer Substanz, welche die Resistenz verschiedener Tumortypen gegenüber den existierenden Antikrebsmitteln überwinden würde und auch in solchen Fallen wirksam wäre, die nicht auf die bislang zugänglichen Antikrebsmittel ansprechen.
Die Erfinder untersuchten eine Vielzahl mikrobieller Metaboliten bei der Suche nach einem Kandidaten für Antitumormittel. Als Ergebnis wurde gefunden, daß eine neue Verbindung mit der folgenden Formel eine hervorragende Antitumoraktivität aufweist. Die Erfindung beruht auf der Grundlage dieser Erkenntnis.
Die Erfindung stellt demnach eine neue Antitumorsubstanz, bezeichnet als BE-13793C, zur Verfügung, welche durch die folgende Formel dargestellt wird:
oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon. In einem weiteren Aspekt betrifft die Erfindung ein Verfahren zur Herstellung der Antitumorsubstanz BE-13793C, die Verwendung der Substanz BE-13793C als ein Antitumormittel und einen neuen, zur Gattung Streptoverticillium gehörenden Mikroorganismus, welcher die Substanz BE-13793C liefert.
Die physikochemischen Eigenschaften der neuen Antitumorsubstanz BE-13793C der vorliegenden Erfindung sind wie folgt:

Physikochemische Eigenschaften von BE-13793C

Beschreibung: gelblich-oranger amorpher Festkörper oder Kristall.
Summenformel: C&sub2;&sub0;H&sub1;&sub1;N&sub3;O&sub4;.
Elementaranalyse: berechnet C, 67,23 %; H, 3,10 %
gefunden C, 67,21 %; H, 3,12 %.
Schmelzpunkt: zeigt keinen klaren Zersetzungspunkt (Schmelzpunkt) bis zu 295ºC.
Löslichkeit: schwer löslich in Wasser, löslich in Methanol und leicht löslich in Tetrahdyrofuran oder Dimethylsulfoxid.
Acidität/Neutralität/Basizität sauer.
Rf: 0,45 (Laufmittel: Chloroform/Methanol; 5:1 Vol./Vol.), (Kieselgel 60 F&sub2;&sub5;&sub4;, Merck).
Farbreaktion: Kaliumpermanganat: positiv.
Massenspektrum: (FAB-MS) (m/z): 357 [M]&spplus;
Ultraviolett(UV)-Absorptionsspektrum:
245, 298, 307, 327, 440
Infrafrot(IR)-Absorptionsspektrum
3430, 3270, 1743, 1710, 1590, 1485, 1408, 1335, 1290, 1060, 815, 800, 765.
¹H-NMR (DMSO-d&sub6;, δ ppm): 6,98 (2H, br d, J=7,6Hz), 7,13 (2H, t, J=7,6Hz), 8,42 (2H, br, d, J=7,6Hz), 10,19 (2H, br s), 10,87 (1H, br s), 11,57 (2H, br s)
¹³C-NMR (DMSO-d&sub6;, δ ppm): 110,9 (d), 115,2 (d), 115,5 (s), 119,7 (s), 120,6 (s), 123,0 (s), 128,7 (s), 130,0 (s), 143,3 (s), 171,2 (s).

Biologische Aktivität von BE-13793C

Es wurden in vitro Aktivitätstest zur Bestimmung der inhibitorischen Eigenschaften der Antitumorsubstanz BE-13793C an Maustumorzellen durchgeführt. In dem in vitro Antitumortest unter Verwendung von P388-Tumorzellen wurde die Testsubstanz zuerst in Dimethylsulfoxid gelöst, und die erhaltene Lösung wurde in Serien mit einem 20 % Dimethylsulfoxid (20 % Vol./Vol. DMSO-RPMI-1640-Medium) haltigen Zeilkulturmedium verdünnt. anschließend wurden 2 ul der Verdünnung zu 200 ul eines Zellkulturmediums (10 % Vol./Vol. fotales Kalberserum-RPMI-1640-Medium), das 2 x 10&sup4; oder 3 x 10&sup4; Tumorzellen enthielt. Hierauf wurde jede Mischung bei 37ºC unter 5 % CO&sub2; für 72 h inkubiert. Die lebensfähigen Zellen wurden dann mit einem Coulter-Zähler gezahlt. Das Ergebnis wurde mit den Kontrollwerten verglichen. Hierbei ergab sich, daß die Antitumorsubstanz BE-13793C eine intensive Inhibierungswirkung auf das Wachstum der P388/S-Tumorzellen zeigte. Die Konzentration (IC&sub5;&sub0; der Antitumorsubstanz BE-13793C, welche eine 50 %ige Inhibierung des P388/S-Tumorzellwachstums verursachte, war 0,7 uM wogegen diejenige für das P388/V-Zellwachstum 0,7 uM war.
P388/S-Zellen sind üblicherweise eingesetzte Mausleukämiezellen, wogegen die P388/V-Zellen ein Stamm von P388-Leukämiezellen sind, welche eine Resistenz gegen das Antikrebsmittel Vincristin erworben haben.
Ferner inhibierte die Antitumorsubstanz BE-13793C das Wachstum von P388/A-Zellen, welche eine Resistenz gegen das Antikrebsmittel Adriamycin erworben hatten, und die 50 % Inhibierungskonzentration (IC&sub5;&sub0;) davon war 1,0 uM.
Die als BE-13793C bezeichnete erfindungsgemäße Verbindung zeigte eine Antitumorwirkung bei transplantierten Maus-Ehrlich-Tumorzellen (Ascitestyp). In diesem Test wurden 10&sup6; (lethale Dosis) an Tumorzellen pro Maus intraperitoneal verabreicht. anschließend wurde die Testsubstanz in Serien verdünnt und intraperitoneal verabreicht. Tabelle 1 faßt die Ergebnisse zusammen. Tabelle 1 Wirkung von BE-13793C auf Ehrlich-Asciteskrebs1,2 Substanz Dosierung, i.p.³ (mg/kg/Iniektion) MÜT (Tag) Kontrollgruppe (Fußnoten zu Tabelle 1) 1. Inokulum: 10&sup6; Ehrlich-Asciteskrebszellen, intraperitoneal. 2. Wirt: Weibliche ICR-Mäuse. 3. Behandlungsschema: BE-13793C wurde intraperitoneal einmal täglich vom ersten bis zum zehnten Tag verabreicht. 4. MÜT: mittlere Überlebenszeit (in Tagen). 5. % B/K: (Behandelte MÜT/Kontroll-MÜT) x 100. 6. Kriterien: Wenn % B/K ≥ 125 war, wurde die Testverbindung als auslösend für eine deutliche Antitumorwirkung bei der bestimmten Dosis eingestuft.
Hinsichtlich der akuten Toxizität der Antitumorsubstanz BE-13793C gegenüber weiblichen ICR-Mäusen trat kein Todesfall am 5. Tag auf, wenn 100 mg/kg der Substanz intraperitoneal einmal verabreicht wurde.
Wie oben beschrieben, inhibiert die erfindungsgemäße Antitumorsubstanz BE-13793C merklich das Wachstum von Mauskrebszellen. Daher ist sie wertvoll als therapeutisches Mittel bei Säugertumoren einschließlich Leukämie und vielen Tumoren, wie Lungen-, Magen-, Colonkrebs und anderen.
Ferner betrifft die Erfindung die Verwendungen der erfindungsgemäßen Verbindung als Antikrebsmittel, welche in Form einer pharmazeutischen Zusammensetzung vorliegt, die eine wirksame Menge der erfindungsgemäßen Verbindung, wahlweise zusammen mit einem inerten und pharmazeutisch annehmbaren Träger (oder mehreren) enthält.
Solch eine pharmazeutische Zusammensetzung kann unter Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindung in Kombination mit einem inerten und pharmazeutisch annehmbaren Träger hergestellt werden und in verschiedenen Dosierungsformen für die orale, parenterale oder topische Anwendung bereitgestellt werden. Geeigneten Dosierungsformen umfassen feste orale Zubereitungen (z. B. Tabletten, Kapseln, Pillen, Pulver, Granula) und flüssige orale Zubereitungen (Losungen, Suspensionen, Emulsionen). Ferner können sterile Zusammensetzungen, welche bei Bedarf mit sterilem Wasser, physiologischer Kochsalzlösung oder einem anderen für die Injektion geeigneten sterilen Lösungsmittel rekonstituiert werden können, zur Verfügung gestellt werden. Die Zusammensetzung kann 10 bis 100 % Gew./Gew. der erfindungsgemäßen Verbindung enthalten.
Die erfindungsgemäße Verbindung kann in Form eines Salzes davon eingesetzt werden, solange es pharmazeutisch annehmbar ist. Beispiele für das Salz umfassen solche, die unter Verwendung anorganischer oder organischer Basen (z. B. Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid, Natriumhydrogencarbonat, Triethylamin oder 2-Aminoethanol) erhalten werden.
Die klinisch bevorzugte Dosierung der erfindungsgemäßen Verbindung hängt von der zu verwendenden spezifischen Verbindung, dem Typ des Formulierungsmittels, der Häufigkeit der Verabreichung, dem therapeutischen Zielort und den charakteristischen Eigenschaften des Wirts und des Tumors ab. Zum Beispiel liegt die tägliche Dosis für einen Erwachsenen im Bereich von 10 bis 500 mg für die orale Verabreichung und von 10 bis 100 mg für die parenterale, vorzugsweise intravenöse Verabreichung. Obwohl die Häufigkeit der Verabreichung vom Verabreichungsverfahren und der Verfassung des Patienten abhängt, ist es im allgemeinen ausreichend, die erfindungsgemäße Verbindung einmal bis fünfmal täglich zu verabreichen.
Das Verfahren zur Herstellung von BE-13793C wird im folgenden beschrieben. Die Mikroorganismen und Mutanten davon, die bei der Herstellung der erfindungsgemäßen Antitumorsubstanz BE-13793C verwendet werden, sind nicht beschränkt solange sie die Antitumorsubstanz BE-13793C liefern. Zum Beispiel können Mikroorganismenstämme mit den folgenden bakteriologischen Eigenschaften hierfür verwendet werden.

1. Morphologie:

Der Stamm zeigt unter dem Mikroskop gut entwickelte Lufthyphen, von denen Wirbel in beinahe konstanten Abständen gebildet werden. Ferner werden 5 bis 8 Sekundarverzweigungen, jeweils mit 5 bis 10 terminalen Sporenketten, beobachtet.
Jede Spore hat die Form eines Zylinders (0,5 x 1 bis 1,5 um) mit einer glatten Oberfläche.
Es wird weder ein spezielles Organ (z. B. ein Sporangium, eine Flagellaspore oder ein Sclerotium) noch Fragmentation der Hyphen beobachtet.

2. Kulturcharakteristika:

Tabelle 2 zeigt die Kulturcharakteristika auf verschiedenen Agarplattenmedien bei 28ºC über 14 Tage. Tabelle 2 Medium Wachstum Lufthyphe Farbe der Basalhyphe lösliches Pigment Hefe-Malz-Agar ISP-2) Hafermehl-Agar (ISP-3) Stärke-anorganisches Salz-Agar (ISP-4) Glycerin-Asparagin-Agar (ISP-5) Pepton-Hefe-Eisen-Agar (ISP-6) Tyrosin-Agar (ISP-7) Nährstoff-Agar Saccharose-Nitrat-Agar Glucose-Asparagin-agar sehr gut flach sehr gut aufsteigend sehr gut faltig schlecht wenig, baumwollweiß gut, baumwollgräulich-weiß gut, Pulver gelblich-weiß gut, Pulver gräulich-weiß gut, Pulver weiß wenig hellbraun gelb gelb blaß gelblich-orange gelblich-orange blaßbraun hellbraun blaß gelbich-braun farblos keines

3. Wachstumstemperatur (Hefe-Malz-Agar-Medium, 14 Tage):

12ºC: schlechtes Wachstum, keine Bildung von Lufthyphen.
20ºC: schlechtes Wachstum, keine Bildung von Lufthyphen.
28ºC: gutes Wachstum und gute Bildung von Lufthyphen.
37ºC: gutes Wachstum, aber schwache Bildung von Lufthyphen.
45ºC: kein Wachstum.

4. Physiologische Charakteristika:

(1) Liquefaktion von Gelatine: negativ. (Glucose-Pepton-Gelatinemedium)
(2) Hydrolyse von Stärke: positiv. (Stärke-anorganisches Salz-Agarmedium)
(3) Koagulation und Peptonisierung von Vollmilch: negativ (Vollmilchmedium)
(4) Produktion von Melanoid-Pigmenten: negativ
(5) Resistenz gegen übliche Salze: Wachstum bei einem Gehalt üblicher Salze unter 4 % Gew./Vol. (Hefe-Malz-Agarmedium)

5. Verwendung von Kohlenstoffquellen:

Die folgenden Zucker werden zu einem Pridham-Gottlieb-Agarbasismedium zugesetzt und der Stamm wird hierin bei 28ºC 14 Tage kultiviert. Tabelle 3 zeigt die Ergebnisse. Tabelle 3 D-Glucose D-Xylose L-Arabinose L-Rhamnose D-Fructose D-Galactose Raffinose D-Mannitol Inositol Salicin Saccharose Anmerkung: +: verwertbar: ±: ungewiß; -: nicht verwertbar

6. Aminosäurezusammensetzung der Zellwand:

Es wurden LL-Diaminopimelinsäure und Glycin nachgewiesen.
Diese bakteriologischen Charakteristika legen nahe, daß der Stamm zur Gattung Streptoverticillium gehört. Die Bezugnahme auf relevante Literatur einschließlich Bergey's "Manual of Determinative Bacteriology", 8. Auflage (1974) und "Hosenkin no Dotei Jikken-ho (herausgegeben von The Society for Actinomycetes, Japan) offenbarte, daß dieser Stamm nahe mit Streptoverticillium mobaraense verwandt ist. Der Stamm unterscheidet sich jedoch von diesen in der Verwertung von Raffinose und Saccharose. Ferner zeigt Streptoverticillium mobaraense grüne Hyphen im Unterschied vom vorliegenden Stamm auf Agarmedium. Diese Tatsachen weisen darauf hin, daß der Stamm neu ist. Er wurde daher Streptoverticillium sp. BA-13793 genannt.
Dieser Stamm wurde beim Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, Ministry of International Trade and Industry Japan, unter der Hinterlegungsnummer FERM P-10489, nach Umwandlung in eine Hinterlegung gemäß Budapester Vertrag, FERM BP-2785, hinterlegt.
Für die erfindungsgemäßen Zwecke können alle Varianten und Mutanten des die Antitumorsubstanz BE-13793C liefernden Mikroorganismus verwendet werden. Solche Mutanten können aus den Ausgangs stammen durch bekannte Techniken, wie Bestrahlung mit Röntgenstrahlen oder ultraviolettem Licht, Behandlung mit einem chemischen Mutagen (z. B. Senfgas, Azaserin, salpetriger Säure, 2-Aminopurin oder N-Methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidin (NTG)) oder Routinetransformationstechniken (z. B. Inkontaktbringen mit Phagen, Transformation, Transduktion oder Konjugation) abgeleitet werden.
Zur Herstellung der erfindungsgemäßen Antitumorsubstanz BE-13793C wird der BE-13793C-liefernde Stamm in einem Nährmedium unter aeroben Bedingungen so kultiviert, daß er ein Kulturmedium bildet, das die Antitumorsubstanz BE-13793C enthält. Die in das Medium aufzunehmenden Nährstoffe können solche sein, die üblicherweise bei der Kultur von Actinomyceten verwendet werden. Zum Beispiel kann eine Kohlenstoffquelle ausgewählt sein aus handelsüblich erhältlicher Glucose, Glycerin, Maltose, Stärke, Saccharose, Mulassen, Dextrin und einer Mischung davon. Eine Stickstoffquelle kann ausgewählt sein aus handelsüblich erhältlichem Sojabohnenmehl, Maisglutenmehl, Cornsteep-Liquor, Fleischextrakt, Hefeextrakt, Baumwollsamenmehl, Pepton, Weizenkeimlingen, Fiscbmehl, anorganischen Ammoniumsalzen, Natriumnitrat und einer Mischung davon. Als anorganische Salze können handelsüblich erhä1tliches Kalziumcarbonat, Natriumchlorid, Kaliumchlorid, Magnesiumsulfat oder verschiedene Phosphate verwendet werden. Zusätzlich kann, falls erforderlich, eine Spurenmenge von Schwermetallsalzen (z. B. Eisen-, Kobalt-, Molybdän-, Mangan- und Zinksalze) verwendet werden. Darüber hinaus können, falls Schaumbildung störend ist, ein Antischaummittel, wie verschiedene Pflanzenole (z. B. Sojabohnenol oder Linsensamenol), hohere Alkohole (z. B. Octadecanol) und verschiedene Silikonverbindungen wahlweise dem Medium zugesetzt werden. Zusätzlich konnen andere Mediumbestandteile (z. B. Borsauresalze, 3-(N-Morpholino)propansulfonsäure) verwendet werden, solange der Stamm sie unter Beschleunigung der Produktion der Antitumorsubstanz BE-13793C verwenden kann.
Der Stamm kann nach denselben Verfahren wie den üblicherweise bei der Herstellung von mikrobiellen Metaboliten verwendeten kultiviert werden. Daher kann entweder eine Festkultur oder eine Flüssigkultur einge setzt werden. Bei einer Flüssigkultur kann entweder eine Stationärkultur, Ruhrkultur, Schüttelkultur oder eine untergetauchte aerobe Kultur eingesetzt werden, obwohl Schüttelkultur und untergetauchte aerobe Kultur unter Bewegung besonders bevorzugt sind. Die Kulturtemperatur kann im Bereich von 20 bis 37ºC, vorzugsweise von 25 bis 30ºC liegen. Der pH-Wert des Mediums liegt vorzugsweise im Bereich von 4 bis 8. Die Kultur kann 24 bis 192 h, vorzugsweise 48 bis 120 h, durchgeführt werden.
Die erwünschte Antitumorsubstanz BE-13793C kann aus dem Kulturmedium nach einem üblicherweise bei der Gewinnung eines mikrobiellen Metaboliten aus einem Kulturmedium eingesetzten Abtrennverfahren gewonnen werden. Da BE-13793C im Kulturfiltrat und in den Zellen enthalten ist, kann es durch Kombination üblicher Abtrenntechniken, die zur Gewinnung eines Kulturfiltrats und Zellen eingesetzt werden (z. B. Lösungsmittelextraktion, Ionenaustauschchromatographie, Affinitätschromatographie, Partitionschromatographie oder Gelfiltration), gereinigt werden. Ferner konnen hierfür Hochdruckflüssigkeitschromatographie und Dünnschichtchromatographie eingesetzt werden.
Ein bevorzugtes Verfahren für die Abtrennung und Reinigung ist wie folgt. Das Kulturmedium wird zunächst zentrifugiert unter Gewinnung der Zellen, die anschließend mit einem organischen Lösungsmittel wie Methanol oder Aceton, extrahiert werden. Der Extrakt wird unter vermindertem Druck konzentriert, und das erhaltene Konzentrat wird mit einem organischen Lösungsmittel, wie Ethylacetat, extrahiert. Dieser Extrakt wird unter Erhalt eines BE-13793C-haltigen Rohprodukts konzentriert. Anschließend wird das Rohprodukt z. B. durch Säulenchromatographie mit Sephadex LH-20 gereinigt. Auf diese Weise kann BE-13793C in Form einer gelblich-orangen, kristallinen Substanz erhalten werden.
Die folgenden Beispiele sollen nur die Erfindung in weiteren Einzelheiten illustrieren, und sollten keineswegs einschränkend ausgelegt werden. Die Erfindung sollte so betrachtet werden, daß sie alle Modifikationen des hierin gegebenen Beispiels, wie auch alle bekannten Produktions-, Konzentrations-, Extraktions- und Reinigungsverfahren, die vom Fachmann für BE-13793C im Hinblick auf die Eigenschaften von BE-13793C, wie in dieser Beschreibung offenbart, angewandt werden können, umfaßt.

BEISPIEL

Vier 500 ml-Erlenmeyer-Kolben mit je 100 ml eines Kulturmediums (pH 6,7), enthaltend 0,1 % Glucose, 2,0 % Dextrin, 1,0 % Mais-Gluten-Mehl, 0,5 % Fischmehl, 0,1 % Hefeextrakt, 0,1 % Natriumchlorid, 0,05 % Magnesiumsulfat, 0,05 % Kalziumchlorid, 0,0002 % Eisen-(II)-sulfat, 0,00004 % Kupferchlorid, 0,00004 % Manganchlorid, 0,00004 % Kobaltchlorid, 0,00008 % Zinksulfat, 0,00008 % Natriumborat, 0,00024 % Ammoniummolybdat und 0,5 % 3-(N-Morpholino)propansulfonsäure wurden mit dem Strertoverticillium BA-13793 Stamm, der auf einem Schrägagar-Medium gezüchtet wurde, angeimpft. Jeder Kolben wurde anschließend auf einem Rotationsschüttler (180 Upm) bei 28ºC 72 h inkubiert. 1 ml-Aliquots der Kultur wurden in 50 Erlenmeyer-Kolben mit 500 ml Fassungsvermögen, von denen jeder 100 ml des oben erwähnten Mediums enthielt, geimpft und auf einem Rotationsschüttler (180 Upm) 120 h bei 28ºC inkubiert. Das erhaltene Kulturmedium (ca. 5 l) wurde filtriert, und die so erhaltenen Zellen wurden mit 500 ml entionisiertem Wasser gewaschen. Anschließend wurden 2,5 l Methanol zugegeben, und die Mischung wurde bei Raumtemperatur 1 h geruhrt. Nach Filtration wurde ein Methanolextrakt erhalten. Die Extraktion mit Methanol wurde wiederholt. Die Methanolextrakte (ca. 5 l) wurden vereinigt und auf ca. 800 ml konzentriert. Das so erhaltene Konzentrat wurde mit 3 l Ethylacetat extrahiert, und der Ethylacetatextrakt wurde bis zur Trockne konzentriert. Der erhaltene Rückstand wurde mit 500 ml Chloroform gewaschen. Auf diese Weise wurden 720 mg eines BE-13793C-haltigen Rohprodukts erhalten. Dieses Rohprodukt wurde in 2 l Methanol gelöst und konzentriert. Das so gebildete orange Präzipitat wurde filtriert unter Erhalt von 546 mg eines BE-13793C-haltigen Produkts. Dieses Produkt wurde in einer Losungsmittelmischung (Methanol/Tetrahydrofuran; 1:1 Vol./Vol.) gelöst und einer Säulenchromatographie unter Verwendung von Sephadex LH-20 (1,5 x 120 cm, Pharmacia) unterworfen und mit Methanol/Tetrahydrofuran (1:1 Vol./Vol.) entwickelt. Die auf diese Weise erhaltene BE-13793C-Fraktion wurde konzentriert unter Erhalt von 99 mg BE-13793C in Form einer gelblich-orangen kristallinen Substanz.
Die erfindungsgemäße Antitumorsubstanz BE-13793C inhibiert nicht nur das Wachstum von Tumorzellen, die keine Resistenz gegenüber existierenden Antitumormitteln zeigen, sondern auch das Wachstum solcher, welche Resistenz gegen diese Antitumormittel erworben haben. Daher ist es als ein Antikrebsmittel im medizinischen Bereich von hohem Wert.
Die Erfindung wurde in Einzelheiten und unter Bezugnahme auf spezifische Ausführungsformen beschrieben, es ist jedoch für den Fachmann offensichtlich, daß verschiedene Abwandlungen und Modifikationen gemacht werden können, ohne von ihrem Geist und Umfang abzuweichen.

Claims

1. Die Substanz BE-13793C oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon, welches dargestellt wird durch die folgende Formel:

2. Pharmazeutische Zusammensetzung, die eine wirksame Menge der Substanz BE-13793C oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon enthalt, welches dargestellt wird durch die folgende Formel:

als Wirkstoff.

3. Zusammensetzung nach Anspruch 2, die zusätzlich einen pharmazeutisch annehmbaren Träger oder Verdünner enthält.

4. Verfahren zur Herstellung der Substanz BE-13793C oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon, welches dargestellt wird durch die Formel

welches umfaßt Kultur eines Mikroorganismus oder einer Mutante davon, die zur Bildung der Substanz BE-13793C in der Lage ist, und Gewinnen der auf diese Weise akkumulierten Substanz BE-13793C.

5. Verfahren nach Anspruch 4, worin der Streptoverticillium sp. BA-13793 Stamm oder eine Mutante davon kultiviert wird.

6. Mikroorganismus, welcher die Antitumorsubstanz BE-13793C bildet und zur Gattung Streptoverticillium oder einer Mutante davon gehört.

7. Mikroorganismus nach Anspruch 6, welcher ein Streptoverticillium sp. BA 13793-Stamm oder eine Mutante davon ist.

8. Verwendung der Substanz BE-13793C oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon zur Herstellung eines gegen Tumore wirksamen Arzneimittels.