HU210868A9 - Phthalinide derivative, pharmaceutical composition and use - Google Patents

Phthalinide derivative, pharmaceutical composition and use Download PDF

Info

Publication number
HU210868A9
HU210868A9 HU95P/P00138P HU9500138P HU210868A9 HU 210868 A9 HU210868 A9 HU 210868A9 HU 9500138 P HU9500138 P HU 9500138P HU 210868 A9 HU210868 A9 HU 210868A9
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
pharmaceutically acceptable
acceptable salt
substance
microorganism
streptoverticillium
Prior art date
Application number
HU95P/P00138P
Other languages
English (en)
Inventor
Katsuhisa Kojiri
Hiroyuki Suda
Akira Okura
Kenji Kawamura
Nasamori Okanishi
Original Assignee
Banyu Pharma Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Banyu Pharma Co Ltd filed Critical Banyu Pharma Co Ltd
Publication of HU210868A9 publication Critical patent/HU210868A9/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/12—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D487/14—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
    • C12P17/182—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/625—Streptoverticillium
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/908—Streptovirticillium

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)

Description

A találmány olyan új vegyületre vonatkozik, amely a gyógyászat területén bír jelentőséggel. A találmány tárgyát közelebbről egy olyan anyag képezi, amely a rákos sejtek növekedését és szaporodását gátolja, ily módon rákellenes hatást fejt ki, és a találmány kiterjed az új anyag előállítására, alkalmazására és az anyagot termelő új mikroorganizmusra, amely a Streptoverticillium nemzetséghez tartozik.
A rák kemoterápiájában számos mikrobiális metabolitot így például bleomicint vagy adriamicint használnak a klinikai gyakorlatban. Számos ilyen anyag azonban nem eléggé hatásos a klinikumban előforduló daganatok többsége esetében, ezenkívül a daganatsejtek velük szembeni rezisztenciájának kialakulása, amivel kapcsolatban egyre több adat áll rendelkezésre, befolyásolja klinikai alkalmazásukat (Poceedings of the 47the Congress of the Japanese Cancer Association, 12-15,1988.).
Ilyen körülmények között természetesen állandóan fennáll az igény új rákellenes szerek kifejlesztésére. így nagy szükség van egy olyan anyagra, amellyel szemben nem áll fenn a különböző típusú daganatok ismert rákellenes anyagokkal szembeni rezisztenciája és hatásos azokban az esetekben is amelyekben a jelenlegi rákellenes szerek nem használhatók eredményesen.
A potenciálisan rákellenes anyagok kutatása során számos mikrobiális metabolitot vizsgáltunk meg, és találtunk egy olyan, (I) képlettel jellemezhető vegyületet, amelynek daganatellenes hatása kitűnő. A találmány alapját ez a felismerés képezi.
Ily módon a találmány tárgya a BE-13 793C jelű, (I) képletű új daganatellenes hatású anyag és gyógyászatilag elfogadható sói. Kiterjed a találmány a BE-13 793C jelű rákellenes anyag előállítási eljárására, az anyag daganatellenes szerként való alkalmazására és egy új, a Streptoverticillium nemzetségbe tartozó mikroorganizmusra is, amely a BE-13 793C jelű anyagot termeli.
A találmány szerinti új BE-13 793 C jelű daganatellenes anyag a következő fizikokémiai tulajdonságokkal jellemezhető:
Külalak: sárgás-narancs színű amorf vagy kristályos szilárd anyag
A molekula összegképlete: C20C11N3O4:
Elemanalízise:
számított: C% 67,23; H% 3,10 talált: C% 67,21; H% 3,12.
Olvadáspont: 295 °C-ig láthatóan nem bomlik vagy olvad.
Oldhatóság: vízben alig oldódik, oldható metanolban és nagyon jól oldódik tetrahidrofuránban vagy dimetil-szulfoxidban.
Savasság/semlegesség/bázicitás: savas.
RF-értéke: 0,45 (Kieselgel 60 F254, Merck adszorbensen, kloroform és metanol 5:1 térfogatarányú elegyében futtatva).
Színreakció: kálium-permanganát: pozitív.
Tömegspektrum (FAB-MS) (m/z):357 [M]+. Ultraibolya (UV) abszorpciós spektrum (λ MeOH/max, nm): 245, 298, 307, 327, 400. Infravörös (IR) abszorpciós spektrum (vKBrcm_j):
3430, 3270, 1743, 1710, 1590, 1485, 1408, 1335,
1290, 1245, 1060, 815, 800, 765.
'1 l-NMR (DMSO-d6, δ ppm): 6,98 (2H, br d, J =
7,6 Hz); 7,13 (2H, t, J = 7,6 Hz); 8,42 (2H, br d, J =
7,6 Hz); 10,19 (2H, br s); 10,87 (1H, br, s); 11,57 (2H, br s).
13C-NMR (DMSO-d6, δ ppm): 110, 9 (d); 115,2 (d);
115,5 (s); 119,7 (s); 120,6 (s); 123,0 (s); 128,7 (s);
130,0 (s); 143,3 (s); 171,2 (s).
A BE-13 973C biológiai hatása
Egér daganatsejteken végeztünk in vitro vizsgálatokat a BE-13 973C jelű daganatellenes anyag gátló hatásának meghatározására. Az in vitro, P388 daganatsejtekkel való antitumor aktivitás vizsgálathoz a vizsgálandó anyagot először dimetil-szulfoxidban feloldottuk, és a kapott oldatból sorozathígítást készítettünk egy 20% dimetil-szulfoxidot tartalmazó sejttáptalajjal (20% v/v DMSO-RPMI-1640 közeggel). Ezután a hígításból 2 mikrolitert 200 mikroliter sejt táptalajhoz (10% v/v borjuemulzió-RPMI-1640 közeghez) adtunk, amely 2xl04 vagy 3xl04 daganatsejtet tartalmazott. Ezt követően az elegyeket 37 °C-on, 5% széndioxid jelenlétében inkubáltuk 72 órán át. Az élő sejteket Coulter számlálóval számoltuk meg. Az eredményt a kontroll adatokkal összehasonlítva azt találtuk, hogy a BE-13 793C jelű daganatellenes anyag intenzív gátló hatást fejtett ki a P388 daganatsejtek növekedésére. A BE-13 793C jelű anyag IC50 értéke, azaz a P388/S daganatsejtek növekedésének 50%-os gátlását okozó koncentrációja 0,7 pmol. és a P388/V sejtek esetében is 0,7 pmol.
A P388/S sejtek általánosan alkalmazott egér leukémia sejtek, míg a P388/V sejtek a P388 leukémiasejtek olyan törzsét képezik, amelyekben a rákellenes vinkrisztinnel szemben rezisztencia alakult ki.
A fentieken túlmenően a BE-13 793C jelű daganatellenes anyag gátolja a P338/A sejtek növekedését is, amelyek a rákellenes adriamicinnel szemben váltak rezisztenssé; ebben az esetben az 50%-os gátlási koncentráció (IC50) 1,0 pmol.
A találmány szerinti, BE-13 793C jelű vegyület az átültetett (ascites típusú) egér Ehrlich daganat sejtekkel szemben is daganatellenes hatást fejtett ki. Ebben a vizsgálatban a letális dózisnak megfelelő mennyiségű, egerenként 106 daganatsejtet adagoltunk intraperitoneálisan. A vizsgálandó anyagból sorozathígítást készítettünk, és intraperitoneálisan adtuk be. Az 1. táblázatban foglaljuk össze az eredményeket.
1. táblázat
A BE-13 793C hatása Ehrlich ascites rákra1·2
Anyag Dózis, i.p.3 (mg/kg/in- jektálás) MST4 (nap) MST5·6 (%T/C)
BE-13 793C 50 28,6 218
20 26,4 202
8 16,0 122
Kontroll csoport 0,25 ml 13,1 100
HU 210 868 A9
1. Inokulum: 106 Ehrlich ascites ráksejt, intraperitoneálisan adagolva.
2. Gazda: nőstény ICR egér.
3. Kezelés: a BE-13 793C-t intraperitoneálisan adagoltuk az elsőtől a 10. napig, napi egy alkalommal.
4. MST: átlagos túlélési idő (mean survival time) napokban.
5. %T/C (kezelt MST)x 100.
6. Kritérium: ha %T/C>125, a vizsgált vegyületet jelentős daganatellenes hatásúnak ítéltük az adott dózisban.
A BE-13 793C daganatellenes anyag nőstény ICR egerekre gyakorolt akut toxicitásával kapcsolatban azt mondhatjuk, hogy az 4. napig nem történt elhullás az említett anyag napi egy alkalommal, 100 mg/kg menynyiségben, intraperitoneálisa való beadása esetén.
Amint azt az előzőekben említettük, a találmány szerinti BE-13 793C jelű anyag jelentősen gátolja egér ráksejtek növekedését. Ezért a gyógyászatban emlősök daganatainak, így a leukémiának és más daganatos megbetegedéseknek, amilyen többek között a tüdő-, gyomor-, vastagbélrák, kezelésére gyógyszerként használható.
A találmány magába foglalja a találmány szerinti vegyület rákellenes szerként való alkalmazását is olyan gyógyászati készítmény formájában, amely a találmány szerinti vegyületet hatásos mennyiségben, adott esetben közömbös és gyógyászatilag elfogadható hordozóval vagy hordozókkal együtt tartalmazza.
Ilyen gyógyászati készítményt úgy állíthatunk elő, hogy a találmány szerinti vegyületet közömbös és gyógyászatilag elfogadható hordozókkal kombináljuk és különböző, így orálisan, parenterálisan vagy helyileg alkalmazható dózisformákká alakítjuk. Megfelelő dózisformák például a szilárd orális készítmények (pl. tabletták, kapszulák, pilulák, porok, granulátumok) és a folyékony orális készítmények (például oldatok, szuszpenziók, emulziók). A fentieken kívül az olyan steril kompozíciók is megemlíthetó'k, amelyeket steril vízzel, fiziológiás sóoldattal vagy más steril injektálásra alkalmas oldószerrel közvetlenül a felhasználás eló'tt állítunk elő. A készítmény a találmány szerinti vegyületet 10 és 100 tömeg% közötti mennyiségben tartalmazhatja.
A találmány szerinti vegyületet bármely sója formájában használhatjuk, amennyiben az gyógyászatilag elfogadható. Ilyen sókra példaként a szervetlen vagy szerves bázisokkal így például a nátrium-hidroxiddal, kálium-hidroxiddal, nátrium-hidrogén-karbonáttal, trietil-aminnal vagy 2-amino-etanollal előállított sókat említhetjük.
A találmány szerinti vegyület klinikailag előnyös dózisa az alkalmazott konkrét vegyülettől, a készítmény formázásához használt anyagok típusától, az adagolás gyakoriságától, a kezelés célzott helyétől, a gazdaszervezet és a daganat jellemzőitől függően változik. így például a felnőtt ember napi dózisa orális adagolás esetén 10 és 500 mg, parenterális, előnyösen intravénás adagolás esetén pedig 10 és 100 mg közötti. Bár az alkalmazás gyakorisága az adagolás módjától és a beteg állapotától függ, általában megfelel, ha a találmány szerinti vegyületet napi 1-5 alkalommal adjuk be.
A következőkben a BE-13 793C jelű vegyület előállítását ismertetjük. A mikroorganizmusok és mutánsaik köre, amelyeket a találmány szerinti BE-13 793C jelű daganatellenes anyag termelésére használunk, nem korlátozható mindaddig, amíg ezek BE-13 793C jelű daganatellenes anyagot képesek termelni. Erre a célra például a következő bakteriológiai jellemzőkkel rendelkező mikroorganizmus törzseket használhatjuk.
1. Morfológiai jellemzők:
Mikroszkóp alatt a törzs jólfejlett légmicéliumot mutat, amelyből szinte konstans intervallumokban spirálok képződnek. Emellett 5-8 másodlagos elágazás figyelhető meg, amelyek mindegyikén 5-10 terminális spóralánc található. A spóra hengeres alakú (0,5x10,5x1,5 mikrométer) és sima felületű.
Sem speciális szerv (például sporangium, flagella spóra, szklerócium), sem a hifa fragmentációja nem figyelhető meg.
2. Tenyésztési jellemzők:
A 2. táblázat mutatja a különböző táptalajú agarlemezeken 28 °C-on 14 nap alatt kialakult tenyészetjellemzőit.
2. táblázat
Közeg Növeke- dés Légmicé- lium A bazális micélium színe Oldó- dószín- anyag
élesztókivonat-malátakivonatagar (ISP-2) nagyon jó, lapos gyenge, bolyhos fehér világos- barna nincs
zablisztagar (ISP-3) nagyon jó, lapos gyenge, bolyhos fehér sárga nincs
keményítő- szervetlen só-agar (ISP-Φ) nagyon jó, lapos jó, bolyhos fehér halvány- sárgás-na- rancs
glicerinaszparaginagar (ISP-5) nagyon jó, kiemelkedő jó, porszeru sárgásfehér sárgás-na- rancs nincs
peptonélesztő ki- vonat-vasagar (ISP-6) nagyon jó,ráncos jó, porszeru szürkésfehér halvány- barna nincs
tirozin-agar (ISP-7) nagyon jó, kiemelkedő jó, porszeru sárgásfehér világos- barna nincs
tápagar nagyon jó, lapos jó, porszeru fehér halvány- sárgás- barna nincs
szacharóz- nitrát-agar gyenge kevés színtelen nincs
glükóz-asz- paragin- agar gyenge kevés sárgás-na- rancs nincs
HU 210 868 A9
3. Növekedési hőmérséklet (élesztőkivonatmalátakivonat-agar táptalaj, 14 nap) :
°C: gyenge növekedés és nem képződik légmicélium.
°C: gyenge növekedés és nem képződik légmícélium.
°C: jó növekedés és jó légmicéliumképződés.
°C: jó növekedés, de gyenge légmicéliumképződés.
°C: nincs növekedés.
4. Fiziológiai jellemzőik:
(1) Zselatin-elfolyósítás glükóz-pepton-zselatin táptalajon: negatív.
(2) Keményítő-hidrolízis keményítő-szervetlen sóagaron: pozitív.
(3) Fölözött tejre gyakorolt koaguláló és peptonizáló hatás: negatív.
(4) Melanoid pigmentek termelése: negatív.
(5) Konyhasóval szembeni rezisztencia élesztőkivonat-malátakivonat-agar táptalajon: 4 tömeg/térfogat% alatti sótartalom alatt tapasztalható növekedés.
5. Szénforrások hasznosítása:
A következő cukrokat Pridham-Gottlieb agar táptalajhoz adtuk, és a törzset 28 °C-on 14 napon át tenyésztettük. Az eredményeket a 3. táblázat mutatja.
3. táblázat
D-glükóz +
D-xilóz -
L-arabinóz +
L-ramnóz ±
D-fruktóz +
D-galaktóz +
raffinóz +
D-mannit -
inozit +
szalicin -
szacharóz -
Megjegyzés: +: jó hasznosítás; ±: kétséges hasznosítás; nincs hasznosítás.
6. A sejtfal aminosavösszetétele: LL-diamino-pimelinsavat és glicint mutattunk ki.
Ezek a bakteriológiai jellemzó'k arra utalnak, hogy a törzs a Streptoverticillium nemzetségbe tartozik. A releváns irodalom, így többek között a Bergey’s Manual of Determinativ Bacteriology 8th Edition (1974) és a Hosenkin no Dotei Jikken-ho (The Society fór Actinomycetes, Japan kiadásban) munka alapján megállapítható, hogy ez a törzs közeli kapcsolatban van a Streptoverticillium mobaraense-vel. Attól azonban a raffinóz és szacharóz hasznosításában különbözik. Emellett a Streptoverticillium mobaraense agar táptalajon a találmány szerinti törzstől eltérően zöld micéliumot képez. Ezek a tények azt jelentik, hogy a találmány szerinti törzs új. így ezt Streptoverticillium sp. BA-13 793-nak neveztük el.
Ezt a törzset a Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, Ministry of International Trade and Industry, Japan törzsgyüjteményben helyeztük letétbe 1989. január 20-án, ahol a FERM P10 489 azonosítási számot kapta, majd a letétbehelyezést a Budapesti Egyezmény szerint deponálássá alakítva 1990. március 1-jén a FERM BP-2795 számot kapta.
A találmány céljára a BE-13 793C jelű daganatellenes hatású anyagot termelő mikroorganizmus minden variánsa és mutánsa használható. Ilyen mutánsokat az eredeti törzsből ismert módon, így röntgensugárzással vagy ultraibolya fénynyel való besugárzással, kémiai mutagén anyagokkal [például nitrogénmustárral, azaszerinnel, salétromossavval, 2-amino-purinnal vagy Nmetil-N'-nitro-N-nitrozo-guanidinnel (NTG-vel)) vagy rutin transzformációs eljárásokkal (például fágokkal való érintkeztetéssel, transzformálással, transzdukcióval vagy konjugációval) állíthatunk elő.
A találmány szerinti BE-13 793C jelű daganatellenes anyag termelése céljából a BE-13 793C-t termelő BA13793 törzset valamely táptalajon aerob körülmények között tenyésztjük; így olyan tenyészetet kapunk, amely a BE-13 793C jelű daganatellenes hatású anyagot tartalmazza. A közegben olyan tápanyagokat alkalmazhatunk, amelyeket az Actinomycetes tenyésztésére általában használnak. így például szénforrást a kereskedelemben kapható glukóz, glicerin, maltóz, keményítő, szacharóz, melasz, dextrin és ezek keverékei közül választhatunk. A nitrogénforrás például a kereskedelemben kapható szójaliszt, kukoricacsíraliszt, kukoricalekvár, húskivonat, élesztőkivonat, gyapotmagliszt, pepton, búzacsíra, halliszt, szervetlen ammóniumsók, nátrium-nitrát és ezek keveréke lehet. Szervetlen sóként a kereskedelemben beszerezhető kalcium-karbonát, nátrium-klorid, káliumklorid, magnézium-szulfát vagy különböző foszfátok használhatók. A fentiek mellett nehézfémsók, (így vas, réz, kobalt, molibdén, mangán és cink sók) is alkalmazhatók nyomnyi mennyiségben. Ezenkívül, ha jelentős habzás tapasztalható, a habzás meggátlására különböző növényi olajokat (például szójaolajat vagy lenmagolajat), magasabb széntomszámú alkoholokat (például oktadekanolt) és különböző szilikonvegyületeket is adhatunk adott esetben a táptalajhoz. Emellett bármilyen más táptalaj komponenst [például bórsav-sókat, 3-(N-morfolino)-propánszulfonsavat] is alkalmazhatunk, ha ezt a törzs fel tudja használni, a rákellenes BE-13 793C anyag termelésének elősegítésére.
A törzset ugyanazokkal az eljárásokkal tenyészthetjük, mint amelyek általában használatosak mikrobiális metabolitok termelésére. így szilárd vagy folyékony tenyészet alkalmazható. Folyékony tenyészet esetén álló, kevert, rázott vagy süllyesztett aerób tenyésztési módot választatunk; a rázott és a süllyesztett aerob tenyésztés, keverés alkalmazása mellett különösen előnyös. A tenyésztést előnyösen 20 és 37 °C, előnyösen 25 és 30 °C közötti hőmérsékleten végezhetjük. A táptalaj pH-értéke előnyösen 4 és 8 között változik. A
HU 210 868 A9 tenyésztést 24 és 192, előnyösen 48 és 120 óra közötti ideig folytathatjuk.
A keresett, daganatellenes hatású BE-13 793C jelű anyagot a mikrobiális metabolitok elkülönítésére használatos szokásos módszerekkel nyerhetjük ki a fermentléből. Mivel a BE-13 793C a tenyészet szűrletéból és a sejtekben található, tisztítására a fermentlé szűrletéból és a sejtekből való kinyerésre alkalmazott szokásos elkülönítési eljárásokat kombinálhatjuk (ilyen például az oldószeres extrakció, ioncserélő' kromatográfia, affinitáskromatográfia, megosztásos kromatográfia vagy a gélszűrés). A fentieken kívül nagynyomású folyadékkromatográfiás és vékonyréteg-kromatográfiás módszereket is használhatunk.
Az elválasztást és tisztítást eló'nyösen a következőképpen végezzük. A fermentlevet eló'ször centrifugáljuk, így a sejteket elkülönítjük, majd ezeket szerves oldószerrel, például metanollal vagy acetonnal extraháljuk. Az extraktumot csökkentett nyomáson bepároljuk, és a kapott koncentrátumot szerves oldószerrel, például etil-acetáttal extraháljuk. Ezt a kivonatot bepároljuk; így BE-13 973C-t tartalmazó nyersterméket kapunk. Ezután a nyersterméket például Sephadex LH-20 abszorbensen oszlopkromatográfiásan tisztítjuk. így a BE13 793C-t sárgás-narancs színű kristályos anyagként kapjuk. A következő' példa pusztán a találmány további részleteinek bemutatására szolgál és semmiképpen nem korlátozó jellegű. A találmányt úgy kell tekinteni, mint amely az adott példa minden lehetséges módosítását magába foglalja, valamint az összes ismert olyan előállítási, bepárlási, extrakciós és tisztítási eljárásra kiteljed, amelyet a szakember a BE-13 793C-nek a leírásában ismertetett tulajdonságai figyelembevételével a BE-13 793Cvel kapcsolatos munka során alkalmazhat.
Példa
Négy darab 500 ml-es kúpos lombikban levó' 100100 ml 6,7 pH-jú táptalajt, amely 0,1% glukózt, 2,0% dextrint 1,0% kukoricacsíra lisztet, 0,5% hallisztet, 0,1% élesztókivonatot, 0,1% nátrium-kloridot, 0,05% magnézium-szulfátot, 0,05% kalcium-kloridot, 0,0002% vas(II)-szulfátot, 0,00004% réz(II)-kloridot, 0,00004% mangán-kloridot, 0,00004% kobalt-kloridot, 0,00008% cink-szulfátot, 0,00008% nátrium-borátot, 0,00024% ammónium-molibdátot és 0,5% 3-(N-morfolino)-propánszulfonsavat tartalmaz, Streptoverticillium BA13 793, ferde agar táptalajon növesztett törzzsel oltunk be. A lombikokat rotációs rázógépen (180 ford./perc) 28 °C-on 72 órán át inkubáljuk. A tenyészet 1 ml-es részleteivel 50 darab 500 ml-es kúpos lombikban levó' 100 ml-nyi fentebb említett összetételű táptalajt oltunk be és ezeket rotációs rázógépen (180 ford./perc) 28 °C-on 120 órán át inkubáljuk. A kapott tenyészetet, amelynek térfogata kb. 5 liter, szűrjük, és az így kapott sejteket 500 ml ionmentes vízzel mossuk. Ezután 2,5 liter metanolt adunk hozzá, és az elegyet szobahőmérsékleten 1 órán át keverjük. Szűrés után egy metanolos extraktumot kapunk. Ezt a metanolos extrakciót megismételjük. Az egyesített, kb. 5 liternyi metanolos extraktumot kb. 800 ml-re bepároljuk. Az így kapott koncentrátumot 3 liter etil-acetáttal extraháljuk és az etil-acetátos extraktumot szárazra pároljuk. A kapott maradékot 500 ml kloroformmal mossuk. így 720 mg, BE-13 793C-t tartalmazó nyersterméket kapunk. Ezt a nyersterméket 2 liter metanolban oldjuk és az oldatot betöményítjük. Az így képzó'dött narancsszínű csapadékot kiszűrjük, és ily módon 546 mg, BE-13 793C-t tartalmazó termékhez jutunk. Ezt a terméket metanol és tetrahidrofurán 1:1 térfogatarányú elegyében feloldjuk és Sephadex LH-20 adszorbenst tartalmazó oszlopon (1,5x120 cm, Pharmacia) kromatografáljuk; eluálószerként metanol és tetrahidrofurán 1:1 térfogatarányú elegyét használjuk. Az így kapott BE13 793C-t tartalmazó frakciókat egyesítve és bepárolva 99 mg BE-13 793C-t kapunk sárgás-narancs színű kristályos anyag formájában.
A találmány szerinti daganatellenes hatású BE13 793C jelű anyag nemcsak azon daganatsejtek növekedését gátolja, amelyek a jelenleg használatos rákellenes szerekkel szemben nem mutatnak rezisztenciát, hanem azokét is, amelyekben az említett daganatellenes szerekkel szemben rezisztencia alakult ki. így a találmány szerinti vegyület a daganatos megbetegedések gyógyítása területén igen értékes hatóanyag.
Bár a találmányt részletesen és konkrét megvalósítási alakokra írtuk le, a szakember számára nyilvánvaló, hogy abban különböző' változtatások és módosítások hajthatók végre anélkül, hogy a találmányi gondolattól eltávolodnánk és az oltalmi körbóT kilépnénk.

Claims (8)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. BE-13 793C jelű anyag, amely az (I) általános képlettel jellemezhető', vagy gyógyászatilag elfogadható sói.
  2. 2. Gyógyszerkészítmény, amely hatóanyagként hatásos mennyiségben a BE-13 793C jelű, (I) képlettel jellemezhető' anyagot vagy gyógyászatilag elfogadható sóját tartalmazza.
  3. 3. A 2. igénypont szerinti készítmény, amely egy gyógyászati szempontból elfogadható vivó'anyagot vagy hígítót is tartalmaz.
  4. 4. Eljárás a BE-13 793C jelű, (I) képlettel jellemezhető' anyag vagy gyógyászatilag elfogadható sói eló'áltítására, azzal jellemezve, hogy egy, a BE13 793C jelű anyagot termelő' mikroorganizmust vagy annak egy mutánsát tenyésztjük, és az így felhalmozódott BE-13 793C jelű anyagot elkülönítjük.
  5. 5. A 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a Streptoverticillium sp. BA-13 793 törzset vagy annak egy mutánsát tenyésztjük.
  6. 6. Mikroorganizmus, amely BE-13 793C jelű daganatellenes anyagot termel és a Streptoverticillium nemzetséghez tartozik, vagy annak egy mutánsa.
  7. 7. A 6. igénypont szerinti mikroorganizmus, amely a streptoverticillium sp. BA-13 793 törzs vagy annak egy mutánsa.
  8. 8. ABE-13 793C jelű anyag vagy egy gyógyászatilag elfogadható sója alkalmazása daganatok ellen hatásos gyógyszer eló'áltítására.
HU95P/P00138P 1989-03-23 1995-05-23 Phthalinide derivative, pharmaceutical composition and use HU210868A9 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP7114989 1989-03-23

Publications (1)

Publication Number Publication Date
HU210868A9 true HU210868A9 (en) 1995-08-28

Family

ID=13452261

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU95P/P00138P HU210868A9 (en) 1989-03-23 1995-05-23 Phthalinide derivative, pharmaceutical composition and use

Country Status (13)

Country Link
US (2) US5106864A (hu)
EP (1) EP0388956B1 (hu)
JP (1) JP3010675B2 (hu)
KR (1) KR0163202B1 (hu)
AT (1) ATE110727T1 (hu)
AU (1) AU634247B2 (hu)
CA (1) CA2012955C (hu)
DE (1) DE69011913T2 (hu)
DK (1) DK0388956T3 (hu)
ES (1) ES2063186T3 (hu)
HU (1) HU210868A9 (hu)
NO (1) NO300812B1 (hu)
WO (1) WO1991019716A1 (hu)

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE158298T1 (de) * 1990-05-11 1997-10-15 Banyu Pharma Co Ltd Be-13793c-derivat mit antitumorwirkung
US5478813A (en) * 1990-05-11 1995-12-26 Banyu Pharmaceutical Co., Ltd. Antitumor substance BE-13793C derivatives
US5589365A (en) * 1991-11-29 1996-12-31 Banyu Pharmaceutical Co., Ltd. Process for producing glycosylated indolopyrrolocarbazole derivatives by culturing certain microorganisms
US5668271A (en) * 1991-11-29 1997-09-16 Banyu Pharmaceutical Co., Ltd. Indolopyrrolocarbazole derivatives
US5591842A (en) * 1991-11-29 1997-01-07 Banyu Pharmaceutical Co., Ltd. Indolopyrrolocarbazole derivatives
ES2125976T3 (es) * 1992-03-20 1999-03-16 Wellcome Found Otros derivados de indol con accion antiviral.
DE4217964A1 (de) * 1992-05-30 1993-12-02 Goedecke Ag Indolocarbazol-Imide und deren Verwendung
DE4243321A1 (de) * 1992-12-21 1994-06-23 Goedecke Ag Aminosäurederivate von Heterocyclen als PKC-Inhibitoren
US5922860A (en) * 1994-05-09 1999-07-13 Banyu Pharmaceutical Co., Ltd. Antitumor indolopyrrolocarbazole derivatives
US5804564A (en) * 1994-05-09 1998-09-08 Banyu Pharmaceutical Co., Ltd. Antitumor indolopyrrolocarbazole derivatives
DE69531686T2 (de) * 1994-06-13 2004-07-15 Banyu Pharmaceutical Co., Ltd. Glycosyltransferase kodierendes gen und seine verwendung
US5808060A (en) * 1995-12-11 1998-09-15 Cephalon, Inc. Fused isoindolones
WO1997029205A1 (en) * 1996-02-07 1997-08-14 Banyu Pharmaceutical Co., Ltd. Effective production method of be-13793c
GB9811624D0 (en) * 1998-05-29 1998-07-29 Merck Sharp & Dohme Therapeutic use
US6703373B1 (en) 1999-09-10 2004-03-09 Banyu Pharmaceutical Co., Ltd. Indolopyrrolocarbazole derivatives and antitumor agents
FR2845996A1 (fr) * 2002-10-16 2004-04-23 Servier Lab Nouveaux derives de[3,4-a:3,4-c]carbazole, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
DE102006038635B4 (de) * 2006-08-19 2010-04-15 Josip Marinic Magnettonabnehmer für ein Saiteninstrument
WO2018013606A1 (en) 2016-07-12 2018-01-18 California Institute Of Technology Substrates for high-density cell growth and metabolite exchange

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0826037B2 (ja) * 1987-01-22 1996-03-13 協和醗酵工業株式会社 生理活性物質ｋ−２５２の誘導体
DE3803620A1 (de) * 1988-02-06 1989-08-17 Goedecke Ag Indolocarbazol-derivate, verfahren zu deren herstellung und diese enthaltende arzneimittel

Also Published As

Publication number Publication date
WO1991019716A1 (en) 1991-12-26
US5290698A (en) 1994-03-01
NO920614D0 (no) 1992-02-17
EP0388956A2 (en) 1990-09-26
JPH0320277A (ja) 1991-01-29
DE69011913D1 (de) 1994-10-06
ES2063186T3 (es) 1995-01-01
AU5835190A (en) 1992-01-07
DE69011913T2 (de) 1995-02-09
US5106864A (en) 1992-04-21
EP0388956B1 (en) 1994-08-31
EP0388956A3 (en) 1991-10-02
ATE110727T1 (de) 1994-09-15
CA2012955A1 (en) 1990-09-23
KR0163202B1 (ko) 1998-12-01
KR920703597A (ko) 1992-12-18
CA2012955C (en) 2001-08-21
NO300812B1 (no) 1997-07-28
AU634247B2 (en) 1993-02-18
NO920614L (no) 1992-03-24
DK0388956T3 (da) 1994-11-14
JP3010675B2 (ja) 2000-02-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5101038A (en) Novel substance dc 113 and production thereof
US4923990A (en) Pyrindamycins A and B and duocarmycin A antibiotics derived from certain streptomyces culture
HU210868A9 (en) Phthalinide derivative, pharmaceutical composition and use
US4487925A (en) Rebeccamycin and process for its preparation
US4518589A (en) BBM-2478 Antibiotic complex
KR100659680B1 (ko) 항생 물질 카프라자마이신류 및 그 제조법
IE49191B1 (en) Antitumor antibacterial agents
EP0326173B1 (en) Novel antitumor antibiotic substance and a method for production thereof
US4360458A (en) Antitumor antibacterial agents
JPH0576350A (ja) 抗腫瘍抗生物質産生菌
US4360595A (en) Fermentation process for producing anandimycin
US5217885A (en) Antitumor substance BE-13793C
US5665703A (en) GE3 compound
EP0189330B1 (en) Antitumor antibiotics and their production
US4572895A (en) Process for preparing an antibiotic complex by culturing actinomyces strain ATCC 39417
US5061695A (en) Antitumor substance be-12406
HU212160B (en) Process for producing antitumour compound be-13793c
CA1338184C (en) Bu-3862t antitumor antibiotic
KR0177585B1 (ko) 항종양성 물질 b e-13793c-생성 균주
EP0399444B1 (en) New carcinostatic or antitumor antibiotic, conagenin, and production and uses thereof
US5066817A (en) Dc115a compounds produced by streptomyces sp.
US5093248A (en) BU-3862T antitumor antibiotic
WO1998043955A1 (fr) Compose d'acide tetramique
JPH03232878A (ja) 抗腫瘍性物質ｂｅ―１２４０６類
JPH03197481A (ja) 抗腫瘍性物質ｂｅ―１０９８８