DE2715255B2 - Anthracyclinglykoside MA 144-M1 und MA 144-M2 und deren Salze, Verfahren zu deren Herstellung und diese Verbindungen enthaltende pharmazeutische Zubereitungen - Google Patents

Anthracyclinglykoside MA 144-M1 und MA 144-M2 und deren Salze, Verfahren zu deren Herstellung und diese Verbindungen enthaltende pharmazeutische Zubereitungen

Info

Publication number
DE2715255B2
DE2715255B2 DE2715255A DE2715255A DE2715255B2 DE 2715255 B2 DE2715255 B2 DE 2715255B2 DE 2715255 A DE2715255 A DE 2715255A DE 2715255 A DE2715255 A DE 2715255A DE 2715255 B2 DE2715255 B2 DE 2715255B2
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
brown
acid
methanol
salts
compounds
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
DE2715255A
Other languages
English (en)
Other versions
DE2715255C3 (de
DE2715255A1 (de
Inventor
Taiji Chigasaki Inui
Masaaki Ishizuka
Hiroshi Naganawa
Toshikazu Kamakura Oki
Norio Chigasaki Shibamoto
Tomio Takeuchi
Hamao Prof. Umezawa
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Microbial Chemistry Research Foundation
Original Assignee
Microbial Chemistry Research Foundation
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Microbial Chemistry Research Foundation filed Critical Microbial Chemistry Research Foundation
Publication of DE2715255A1 publication Critical patent/DE2715255A1/de
Publication of DE2715255B2 publication Critical patent/DE2715255B2/de
Application granted granted Critical
Publication of DE2715255C3 publication Critical patent/DE2715255C3/de
Expired legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/20—Carbocyclic rings
    • C07H15/24—Condensed ring systems having three or more rings
    • C07H15/252—Naphthacene radicals, e.g. daunomycins, adriamycins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
    • C12P19/56—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen atom of the saccharide radical directly bound to a condensed ring system having three or more carbocyclic rings, e.g. daunomycin, adriamycin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/465—Streptomyces
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/465—Streptomyces
    • C12R2001/48—Streptomyces antibioticus ; Actinomyces antibioticus
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/886—Streptomyces
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/886—Streptomyces
    • Y10S435/888—Streptomyces antibioticus

Description

worin R ein Wasserstoffa'om im Falle von MA 144-M1 oder eine Hydroxylgruppe im Falle von MA 144-M2 bedeutet, und deren nichttoxisehc Säureadditionssalze.
2. Verfahren zur Herstellung von Anthracylinglykosid MA 144-M1 und MA 144-M2 oder deren Gemischen, dadurch gekennzeichnet, daß man Streptomyces galilaeus ATCC 31 133, Streptomyces species ATCC 31 273, Streptomyces galilaeus ATCC 14 969. Streplomvccs cincrcoriibcr ATCC
19 740, Streptomyces niveoruber ATCC 14 971, Streptomyces antibioticus ATCC 8663 oder Streptomyces purpurascens ATCC 25 489 oder Mutanten davon unter aeroben Submersbedingungen in einem Niihrmedium bei einer Temperatur zwischen
20 und 35" C und einem pH-Wert zwischen 5 und 8 züchtet, das gebildete Anthracyclinglykoid-Gcmisch. jeweils in an sich bekannter Weise, aus dem Kulturmedium gewinnt und gegebenenfalls in MA 144-M, und MA 144-M2 auftrennt und diese Glykoside gegebenenfalls in nichttoxisehc Säureaddiionssalze überführt.
3. Verfahren zur Herstellung von Anthracyclinulvkosid MA 144-M, oder MA 144-M2 oder deren Gemischen durch Reduktion von Aclacinomycin A oder Cinerubin A oder deren Gemischen, dadurch gekennzeichnet, daß man die Reduktion durch Einwirkung von
A) in Säugetierlcbcrn enthaltenen Enzymsystemen und von Nicotinamid-adenin-dinucleotidphosphat oder dessen reduzierter Form bei einer Temperatur zwischen 20 u..jc' 42 C und einem pH von 5.5 bis 10,5 oder von
B) Natriumborhydrid, Lithiumhydrid, Aluminiumhydriden oder Lithiumaluminiumhydrid durchführt
und die nach A) oder B) gebildeten Anthracyclinglykoside, jeweils in an sich bekannter Weise, gewinnt und gegebenenfalls in MA 144-M, und MA 144-M2 auftrennt und diese Glykoside gegebenenfalls in niehttoxischc Säurcaddilionssalzc überführt.
4. Pharmazeutische Zubereitungen, gekennzeichnet durch einen Gehalt an einer antibakteriell wirksamen Menge von Anthracylinglykosid MA I44-M| und/oder MA 144-M2 oder deren nichttoxischen Säurcadditionssalzen gemäß Anspruch I.
Die Erfindung betrifft neue Anthracyclinglykoside. Verfahren zu ihrer Herstellung sowie pharmazeutische Zubereitungen, welche diese Antibiotika enthalten. Inbesondere betrifft die Erfindung neue Anthracyclinghkoside.dieals MA 144-M, und MA 144-M, be/eichnet werden. Verfahren /ti ihrer (lerslelliing durch Fermentation von MA 144-er/eiigcnden Stammen, die /u Streptomyces gehören, sowie durch chemische oder enzymalische Rcdukion von Aclacinomycin A oder Cinerubin A, Methoden zu ihrer Gewinnung und Reinigung sowie ihre Wirkung als Chemolhcrapeutica /ur Inhibierung von bösartigen Tumoren sowie zur Behandlung von infektiösen Krankheilen, die durch grampositive Bakterien hervorgerufen werden.
In Kulturbrühen von Streptomyces wurde eine Anzahl von Anthracyclinglykosiden gefunden. Von diesen wurden bereits Daunomycin und Adriamycin klinisch zur Bekämpfung von menschlichen Krebserkrankungen eingesetzt. Die Erfindung beruht auf ■"> der Erkenntnis, daß insbesondere Anthracyclinglykoside, die von Streptomyces galilaeus MA I44-M, (ATCC 31 133, FERM P-2455) erzeugt werden, neue Verbindungen sind, die nach einer Reinigung und Charakterisierung aufgrund ihrer physikaüsch-che- in mischen Eigenschaften als Antibiotika erkannt wurden, die als MA 144-M1 und MA 144-M2 bezeichnet werden. Diese Verbindungen besitzen eine wirksame Antitumoraktivität sowie eine geringe Toxizitiit gegenüber Tieren. Ferner werden durch die Erfindung r, reproduzierbare Verfahren und Methoden zu ihrer Herstellung und Reinigung zur Verfugung gestellt.
Aclacinomycin A wird in der US-PS 39 88 315 sowie von O k i et al. in »J. Antibiotics« 28, 830(1975), beschrieben. -Jo
Cinerubin A und Cinerubin B werden in der GB-PS 8 46 !30, in der US-PS 38 64 480. sowie von Keller·-Schierlein et al., in »Antimicrobial Agents and Chemotherapy«, Seite 68 (1970), »Chemical Abstracts«, 54, 1466 i (I960) sowie in »J. Antibiotics« j, 28, 830(1975), beschrieben.
Andere Anthracyclinantibiotika mit Aklavinon- oder i-Pyrromycinonaghkon-Anteilen werden in folgenden Literaturstellen beschrieben:
in
(a) Pyrromycin: Chem. Ber. 92. 1904-1909
(1959).
(b) Rutilanlin: Biochcm. J. 81. 101 104
(1961).
(e) Galirubin A und B: Naturwiss. 52. 539 540 r,
(1965).
Chemical Abstracts 64, 3896 g
(1966).
Chemical Abstracts 67.
90 573 z (1967). m
(d) Aklav.'.i: J. Bactcriol. 72, 90 (1956).
(c) Requinomycin: J. Antibiotics 25. 393 (1972).
Weitcrc Erläuterungen zu Anthracyclinantibiotika finden sich in »Index of Antibiotics from Actino- r> mycetes«, Hamao Umezawa. University Park Press, State College, Pennsylvania. U.S.A. (1967). woei die einzelnen Antibiotika an den nachfolgend angegebenen Stellen näher erläutert werden:
\iilihiolikuiN Sfik'ii/.ihl
Aklavin IM
Cinerubin A 220
Cinerubin B 221
Pyrromycin 542
In »Antibiotics«. Band 1. Mechanisms of Action, herausgegeben von David G ο 111 i e b und Paul D. S h u w, Springer-Verlag New York (1967). wird auf den Seiten 190 210 eine Zusammenfassung von A. Di Marco veröffentlicht, die mit »Daunomycin and Related Antibiotics« betitelt ist.
Ferner ist auf »Information Bulletin« Nr. 10. International Center of Information of Antibiotics, ir Zusammenarbeit mil WHO. Dezember 1972. Beliiien.
betreffend Anthracycljne sowie ihre Derivate, hinzuweisen.
In dieser Veröffentlichung wird auf Seite 25 auf •\micetiii hingewiesen (venileiehe auch J. Am. Chem. Soc. 86, 3592 [1964]).
Streptomyces galilaeus wird beispielsweise in »Arch, für Mikrobiol.'3l, 356 (1958), sowie im »International Journal of Systematic Bacteriology«. 22, 298 (197?) beschrieben.
Durch die Erfindung werden die Anthracyclinglykoside MA 144-M, und MA 144-M2 zur Verfügung gestellt.
Diese Antibiotika können entweder durch Fermentation der in Anspruch 2 genannten, MA 144-erzeu· genden Stämmen, die zu Streptomyces gehören, oder durch chemische oder enzymatischc Redukion von Aclacinomycin A oder Cinerubin A oder Materialien, welche diese Verbindungen enthalten, hergestellt werden, wobei all diese Verfahren in den Rahmen der Erfindung fallen. Die enzymatische Reduktion kann unter Einsatz verschiedener Typen aktiver Enzyme durchgeführt werden. Die chemi^he Reduktion kann in Gegenwart verschiedener Reduktionsmittel ausgeführt werden. Die auf diese Weise erzeugten MA 144-M1 und MA 144-M2 können nach herkömmlichen Methoden isoliert und gereinigt werden, wie sie zur Isolierung und Reinigung von wasserunlöslichen Antibiotika angewendet werden. Derartige Methoden bestehen beispielsweise aus einer Lösungsmittclextraktion, einer Lösungsmittelausfallung, einer Konzentration, einer Gelfiltration, einer Gegenstromverteilung, einer Chelierung mit Metallionen sowie einer Adsorption mit anschließender Eluierung aus einem loncnausiauscherharz, einer adsorbierend wirkenden Kieselerde oder einem synthetischen Adsorbens.
In dem Rahmen der Erfindung fallen MA 144-M1 sowie MA 144-M2 als rohe Feststoffe und als ihre Salze, ferner die Verfahren zur Herstellung der vorstehend angegebenen Substanzen, wobei die Lösung, welche MA 144 enthält, nach Zugabe einer anorganischen oder organischen Säure gefriergetrocknet V'ird.
Durch die Erfindung werden die Anthracyclinglykoside MA 144-M, und MA 144-M2 zur Vefügung gestellt, wcchc folgende Eigenschaften aufweisen:
(a) antimikrobiell Aktivitäten gegenüber grampositiven Bakterien,
(b) Wirkung bezüglich einer Inhibierung des Wachstums von festen und ascitischen Formen von bösartigen Tumoren in Säugetieren und
(c) eine höhere Zytotoxizität. so daß das Wachstum von Säugetiertumorzellen in Kulturen inhibiert wird.
Durch die Erfindung werden ferner pharmazeutische Zubereitungen zur Behandlung von Infektionen aufgrund grampsositiver Mikroorganismen zur Verfugung gestellt. Ferner werden durch die Erfindung pharmazeutische Zubereitungen für eine lnhibicrung von bösartigen Tumoren von Säugetieren geschaffen.
Die Erfindung wird durch die Zeichnungen näher erläutert. Es zeig!
Fig. I die Absorptionsspektren im UV und im sichtbaren Licht von MA 144-M1 in Methanol.
F i g. 2 das Infrarot-Absorptionsspektrum von MA I44-M| in Kaliumbromid.
F i g. 3 das NMR-Spcktrum von MA 144-M, InCDCl1(IOO MHz).
I ι μ 4 die Mtnoi pih'iis-.pckircn mi I \ -I ichl m>\\ic im ML-IiIhMiX1M IkIiI mn ΜΛ l44-\l· in Xleihaiml.
I i μ. 5 das Infrarot-Absorptionsspektrum son MA 144-M, in Kaliumbromid.
Ii g. 6 das NMR-Spektrum son MA 144-VI, in
I i μ. 1 das Infrarot-Absorptionsspektrum des durch p.iriielle Methanols se erhaltenen Methyldisaceharids.
I ι μ. S ilas NMK-Spektrum des durch partielle Mcthaiiolsse erhaltenen Methyldisaceharids und
I ι L', 1I die pll-Kurve der 1 nzymreaktion zur Bildung son MA 144-M1.
Durch die I rl'indunu werden /svei neue Anthracsclinantihioiika. MA 144-M1 und MA 144-M,. zur \ erlügun.n ucrvicllt. die sowohl eine antimikrobielie •\ktisit.ii ;ils auch eine Antitiimoraktivitat aufweisen. lnsheMiiulere zeigen die erfinduniisüemiiHen Verbindungen eine Aktivität gegenüber urampositiven Hak terien. Inhibieren des Wachstums von verschiedene! Säugetiertumoren, svie heispielssveise die Leukämie! 1.1210 und I' 3KX bei Mäusen, und besitzen eini geringe Toxizität. Daher eignen sich die Verbindungei als antibakteriell!.' Mittel sowie als Antitumormittel
I nter ·>ΜΑ 144« sind Antibiotika zu verstehen, dii svenigstens ein Antibiotikum umfassen, das aus M/ 144-M, und MA 144-M, besteht.
Die erlindungsgeniallen Verbindungen können ent weder nach i:inem l-'ermcntiitionss erfahren oder duicl chemische oder enzymatisch»? Reduktion bestimmte bekannter Anthraevclinausüiiniismalerialien hep^e stellt werilen.
Dieenzynialische Reduktion gehl aus dem folgende ι Reaktionsschema hers or:
1 1 I 1 I ti' II:
R ο
■ inen,
( Il (I
(Hl
ι ι (ι ()
Il Il < ι
1 I1ZS 111
( ι VlV. 111
Il Il O
( II.
> Il
' Ii
( Il
( II.
< II,
( II,
ι μ
'Il
IK» ( H
oll
R Il iM\ 144-M1I
R on (M \ 144-M-
!-τ. .ili-jjniei-'e' ~r ι: ei:;e >·ι"ΐ^1ι\ιΐΚ· <iizeiilra'!i'n jnier :"■, m>uu- eine F^eaktionszeitsparne son 20 bis 120 Minuten vorzuziehen.
Die bnzymaktivität in verschiedenen Quellen, die erfindungsgemäß eingesetzt werden, sowie die Anforderungen an das Coenzym bezüglich der Enzym- 55 A"en aktivität in Ratten sind foleende:
\l \ 4-1-
Tabelle 1
Vergleich der Enzymaktivität in den
Leberhomoeenaten aus verschiedenen Säuretieren
Siitii'c'icrc Gebildetes MA 144-M1
( j MoI g Gewebe ι
Meerschweinchen 0,08
Hamster 0,24
Maus
Kaninchen Ratte
0.38
0.38
0.26
0,37
60 Zusammensetzung der Enzymreaktionsmischung
Leberhomogenat (Enzym) 0,8 ml
NADP-Lösung (2 μ§/ΐηΙ) 0,1 ml
Substrat: Aclacinomycin A
(800 ug/m!} 0,1 m!
wobei N-XDP für Nicolinamidadenindinukleotic
phosphat steht. Die Reaktion wird während einer Zeitspanne von I Stunde bei 37 C durchgeführt. Die Bestimmung wird unter Einsatz eines Shimazu-Doppelwellen-Chromatoscanners nach einer Extraktion des Produkts mit dem Lösungsmittel durchgeführt (Chloroform zu Methanol — 1:1).
Tabelle 2
Anforderungen an dasCoenzym für die Enzymreaktion (Rattenleber)
(«■l'ililfi^ M \ 1-U-M1
I ,Mi. ■_■ ( kuilHi
Ki'!!VJ S
NAD
NADII
NADP
NADPII
η
0
0
0.35
0.37
Die En/vmreaktion wird nach der in Tabelle I angegebenen Methode durchgeführt. NAD steht für Nicotinamidadcniiuliniikleoiid. NADII für die reduzierte Form von NAD, NADP hat die gleiche Bcdcu''ing wie in Tablle I und NADPH steht für die reduzierte Form von NADP.
Die I i g. 9 zeigt den optimalen pH bei der enzymatischen Bildung von MA 144-M1 durch Rattenleberhomogenat. wobei die vertikale Linie die ag Reagenzgias an gebildetem MA 144-M1 zeigt. Die zur Einstellung des pH eingesetzte Pufferlösung besteht aus m 10 Veronal Natriumacetat (durchgehende Linie I) sowie aus m 10 Glycin Natriumchlorid Natriumhydroxid (gestrichelte Linie 2).
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können ferner durch chemische Reduktion von Aclacinomycin A und oder Cinerubin A mit den in Anspruch 3 (Verfahren B) genannten Reduktionsmitteln hergestellt werden, welche in selektiver Weise den Cinerulose A-/iickeranteil in ilen Amicelose-Zuckeranteil von MA 144-M1 und MA 144-M2 zu reduzieren vermögen. Diese Reduktionsmittel sind Natriumborhydrid. Lithiumhydrid (Li H). Lithiumaluminiumhydrid (LiAIH4) sowie Aluminiumhydride (beispielsweise AIH,).
Die erfindungsgemäß durchgeführte chemische Reduktion kann entweder in einem einzigen Lösungsmittel oder in einem Lösungsmittel-Gemisch durchgeführt werden, welches die erfindungsgemäßen Antibiotika auflöst. Die Reaktionsbedingungen, wie beispielsweise die Temperatur, die Substratkonzentration, die Reaktionszeit, hängen von dem Lösungsmittelsystem und dem Ausgangsmaterial ab, wobei solche Bedingungen vorzugsweise ausgewählt werden, welche die höchste Ausbeute und die höchste Reaktionsgeschwindigkeit ergeben.
Zusätzlich zu den vorstehend erwähnten chemischen und enzymatischen Methoden können die MA 144-Antibiotika auch fermentativ durch Züchten unter geeigneten Bedingungen der nachfolgend näher erläuterten MA 144-erzeugndcn Stämme hergestellt werden. Zur fermentatrven Erzeugung der erfindungsgemäßen Antibiotika werden Streptomyces galilaueus
MA 144-M, AFCC 31 133 (FHRM P-2455). Streplomycessp. MF! 505-HEIATCC 31 273(FHRM P-3667). S. galilaeus ATCC 14 969. S. cinercorubcr ATCC 740. S. niveoruber ATCC 14971. S. antibiolicus AFCC 8663. S. purpurasccns ATCC 25 489 sowie Mutanten davon, verwendet.
Von den vorstehend erwähnten Stämmen wurde S. galilaeus MA 144-M, AFCC 31 133 (FerM P-2455) aus einer Bodenprobe isoliert, die in Osaki, Shingawaku. Tokyo. Japan gesammelt worden ist. Eine Kultur von S. galilaeus MA 144-M, wurde bei der American Type Culture Collection. Rockville. Maryland sowie im Fermentation Research Institute. Japan, hinterlegt und unter der ATCC-Nr. 31 133 bzw. IERM-Nr. registriert.
Der Stamm Nr. MA 144-M, weist folgende Eigenschaften auf:
(I) Morpholoi'kihi* Fu'i'iisrliMflrn
Unter einem Mikroskop werden offene Spiralen beobachtet, die gut aus verzweigten Substratmyceln entwickelt sind. Es werden keine Wirtel festgestellt. Die reife Sporenkette ist mäßig lang und weist mehr als 10 Sporen auf. Die Sporen sind elliptisch und besitzen eine Größe von 0.4 bis 0.8.,. χ 0.8 bis 1.6 μ. Ihre Oberfläche ist glatt.
(2| Eigenschaften auf verschiedenen Medien:
Die Erläuterung in Klammern entspricht dem Farbstandard des »Color Harmony Manual«, das von der Container Corporation of America. U. S. A.. veröffentlicht worden ist.
IaI Auf einem Glukose Asparagin-Agar. bebrütet hei 27 C: leicht gelhlichbraimes Wachstum (3gc. leicht bernsteinfarben): keine Luftmyceln: kein lösliches Pigment.
(b) Auf einem Rohrzucker Asparagin-Agar. bebrütet bei 27 C:
farbloses bis leicht gelblichbraunes Wachstum (3gc. leicht bernsteinfarben): keine Luftmyceln: kein lösliches Pigment.
(c) Auf einem Glycerin Asparagin-Agar (ISP-Medium Nr. 5). bebrütet bei 27 C: gelblichoranges (4ic. rotbraunes) bis braunes (51 g. kakaobraunes) Wachstum: weiße bis hellgraue (2fe. deckgraue) Luftmyceln: braunes lösliches Pigment.
(d) Auf einem Agar aus Stärke und anorganischen Salzen (ISP-Medium Nr. 4). bebrütet bei 27 C: helloranges (3ea. leicht melonengelbes) bis hellgelblichbraunes (3ic. kamelfarbenes) Wachstum: leicht graue (2fe. deckgraue) bis graue (e, graue) Luftmyceln: braunes lösliches Pigment.
Ie) Auf einem Tyrosin-Agar (ISP-Medium Nr. 7), bebrütet bei 2TC: bräunlichgraue (3Ii, bibergraue) bis braune (41 g, toastfarbene) Luftmyceln, schwarzes lösliches Pigment. (0 Auf einem Nähragar, bebrütet bei 27 C: Farbloses bis gräulich-braunes Wachstum; keine Luftmyceln, braunes lösliches Pigment, (g) Auf einem Hefeextrakt/Malzextrakt-Agar (ISP-Medium Nr. 2). bebrütet bei 27 C: leicht braunes (41 e, ahornfarbenes) bis braunes (4ng, leicht braunes) Wachstum; leicht graue (3fe, silbergraue) bis graue (3ih, beigegraue) Luftmyceln; braunes lösliches Pigment, (h) Auf einem Hafermchl-Agar (ISP-Medium Nr. 3), bebrütet bei 27rC: farbloses bis hellgelblichbraunes (2gc, bambusfarbenes) Wachs-
turn: leicht graue (3fe. silbergraue) l.uflmyceln: braunes lösliches Pigment.
IiI \uf einem Glsceriii Nitral-.Agar. bebrütet bei 27 C: farbloses bis hellgclblichbraunes (3gc. leicht bernsteinfarbenes) oder leicht olivgraues (2db. pergamentfarbenes) Wachstum: keine Luftnneeln: kein lösliches Pigment.
IjI \tif einem Stärkeagar. bebrütet bei 27 C: hellgclblichbraunes (3gc. leicht bernsteinfarbenes) Wachstum: graue (e. graue) I.uflimceln: leicht braunes lösliches Pigment.
IkI Auf einem ('alciumnialiil-.Agar. bebrütet bei 27 C: farbloses Wachstum: gräulichweiße (b. hellgraue) bis leicht bräunlichgraiie (3 de. naturfarbene) Luftmyceln; kein lösliches Pigment.
(Il Aufeinem (ielaline-Ansät/, bebrütet bei 20 C: hellbraunes bis hellgclblichbraunes Wachstum: weiße Luftmyceln: braunes lösliches Pigment, (m) Auf einem Glukose Pepton Gelatine-Ansatz, bebrütet hei 27 C: hellbraunes bis braunes Wachstum: keine Luflmyceln; braunes lösliches Pigment.
(n) Auf Magermilch, bebrüted bei 37 C: hellbraunes bis braunes Wachstum: keine Luftmyceln: braunes lösliches Pigment.
(3) Physiologische Eigenschaften:
(a) Die Wachstumstemperatur wurde auf einem Maltose Hefeextrakt-Asiar (1.0% Maltose. 0.4% Hefeextrakt, 3.5% Aga"r. pH 6.0) bei 20. 24. 27. 30. 37 und 50 C untersucht. Die optimale Temperatur für das Wachstum liegt bei 27 bis 37 C. Bei 50 C wird kein Wachstum restgestellt.
(b) (ielalineverllüssigimg aufeinem I 5% (ielatine enthaltenden Ansatz bei 20 1C sowie aufeinem Glukose Pepton Gelatine-Ansatz bei 27 C: Auf dem erstcren Medium wird bei I4tägiger Bebrütung eine schwache Verflüssigung und auf dem letzteren Medium eine schwache oder maßige Verflüssigung nach einer 7 Tage dauernden Bebrütung festgestellt.
(C) Stärkehydrolyse auf einem Agar aus Stärke und anorganischen Salzen bei 27 C: Es wird eine schwache Hydrolyse nach 5tägiger Bebrütung festgestellt.
(d) Pcptonisicrung und Koagulierung von Magermilch bei 37 C: Eine mäßige bis starke Pcptonisierung beginnt 5 Tage nach der Bebrütung und ist nach ungefähr 17 Tagen beendet. Keine Koagulation.
(e) Melanin-Bildung auf Tyrosin-Agar (ISP-Medium Nr. 7). TyrosinHefeextrakt-Brühe (ISP-Medium Nr. l)und Pepton/Hefeextrakt/Eisen(!I)-Agar (ISP-Medium Nr. 6) bei ITC: Positiv auf allen Medien.
(f) Verflüssigung von Calciummalat auf Calciummalat-Agar bei 27° C: Stark positiv.
(g) Nitratreduktion auf Pepton-Agar, das 1,0% Natriumnitrat enthält, (ISP-Medium Nr. 8) bei 27° C: Positiv.
(h) Verbrauch von Kohlehydraten des Pridham-Gottlieb-Grundmediums(ISP-Medium Nr. 9),bebrütet bei 27°C: Reichliches Wachstum mit L-Arabinose, D-Xylose, Glukose, D-Fruktose, Rohrzucker, Inosit, L-Rhamnose und Raffinose; kein Wachstum mit D-Mannit.
Die vorstehend beschriebenen Eigenschaften von Nr. MA 144-M1 zusammenfassend ist festzustellen,
daß der Stamm zu dem Genus Streptomyces gehört und ein ehrotr,r>gener Typ ist. Er erzeugt ein braunes lösliches Pigment auf verschiedenen Agar-Medien. Luftmyceln bilden offene Spiralen, jedoch keine Wirtel. Die Sporenoberfläche ist glatt. Das Wachstum auf verschiedenen Medien ist im allgemeinen hellgelblichbraun bis braun, in einigen Medien jedoch olivfaiben. Die Luftmyceln sind leicht grau. Nitrat wird zu Nitrit reduziert. Die proteolytische Wirkung ist schwach bis mäßig und die Stärkehydrolyse relativ schwach. Melanin wird auf Tyrosin-Agar, Tyrosin Hefeextrakt-Brühe sowie Pepton, Hefeextrakt Eisen-(II)-Agar erzeugt.
Von den bekannten Species von Streptomyces ähnelt der Stamm Nr. MA I44-M, Streptomyces galilaeus.
l.itcraturslclle Nr. I: \rchiv für Mikrobiologie. .<l. 356.(1958). Literaturstelle Nr. 2: Internationa! Journal or Systematic Bacteriology 22. 29S (1972). Unter besonderer Berücksichtigung der Unterschiede der Morphologie, der Farbe der Luftmyceln sowie der anderen physikalischen Eigenschaften wurde der Unterschied zwischen dem erfindungsgemäßen Stamm und dem erhaltenen Standardstamm von S. galilaeus ISP 5481 in parallelen Kulturen untersucht.
Aus den Ergebnissen geht hervor, daß der erfindungsgemäße Stamm bezüglich der Morphologie sowie der Farbe des Wachstums sowie der Myceln auf verschiedenen Medien und der physiologischen .Eigenschaften weitgehend mit S. galilaeus ISP 54Sl übereinstimmt. Ferner existiert eine Ähnlichkeit beider Stämme bezüglich der Fermentationsprodukte, d.h. bezüglich Cinerubin. das von S. galilaeus erzeugt werden kann und eines der Nebenprodukte des erfindungsgemäßen Stammes ist. Daher kann der Stamm Nr. MA 144-M1 als Streptomyces galilaeus identifiziert werden.
Der Stamm Streptomyces sp. ME 505-HEl FERM P-3667 wurde ebenfalls aus einer Bodenprobe isoliert, die bei Osaki. Shinnagawa-ku Tokyo. Japan isoliert und in dem Fermentation Research Institute. Japan sowie in der American Type Culture Collection hinterlegt worden ist und die Nummern FERM P-3667 bzw. ATCC 31 273 erhalten hat. Nachfolgend werden die morphologischen und physikalischen Eigenschaften kurz erläutert:
Charakteristische Eigenschaften von Streptomyces sp. ME 505-HEl werden derzeit untersucht. Von dem Stamm Nr. 505-HEl sind derzeit folgende Eigenschaften bekannt: Unter dem Mikroskop weisen die Luftmyceln keine wirtelige Verzweigung und Spiralenstruktur auf. Das Wachstum auf den verschiedenen Medien ist farblos, hellrötlichbraun bis dunkelbräunlichpurpur. Es werden keine Luftmyceln gebildet oder nur geringfügig gebildet, die weiß bis rosaweiß sind. In geringem Ausmaße wird ein mattrotes lösliches Pigment gebildet. Die Melaninbildung ist positiv. Daher gehört der Stamm Nr. 505-HEl zu dem Genus Streptomyces.
Bei den weiteren, in Anspruch 2 genannten Streptomyces-Stämmen handelt es sich um bekannte Stämme.
Da die Streptomyces leicht natürlich oder künstlich mutierbar sind, umfassen S. galilaeus Nr. MA 144-M, sowie andere Mikroorganismen gemäß vorliegender Erfindung den vorstehend beschriebenen Stamm sowie alle natürlichen und künstlichen Varianten und Mutanten davon. Insbesondere sollen MA 144-erzeugende Mutanten in Frage kommen, die aus den vorstehend
erwähnten Stummen nach bekannten Methoden erzeugt werden.
DiefermentaliveEr/eugiingvon MA 144-M| iiiui Μ.Λ 144-M2 erfolgt unter aeroben Submersbedingungen. wobei große Mengen der Antibiotika erhalten werden. Medien, die aus bekannten Arten von Nährqucllen Tür Strahlenpilze bestehen, sind geeignet. Die allgemeinen Methoden, wie sie zum Züchten von anderen Strahlenpilzen angewendet werden, sind auf das erfindungsgemäße Züchten anwendbar. Das Medium enthält vorzugsweise im Handel erhältliche Produkte, wie Glycerin. Glukose, Stärke, Dextrin. Maltose. Melassen, öle. Fette, Lipide oder dergleichen als Kohlenstoffquellen in entweder reiner oder roher Form, ferner im Handel erhältliche Produkte, wie Sojabohnenmehl, Malzextrakt, Penton. Hefeextrakt. Schlempe. Fischmehl. Glutenmehl. Maisflüssigkeit. Naumwollsamenmehl, Kasein, hydrolisierte Proteinsunslanzen, Nitrate. Ammoniumsalze, Harnstoff oder dergleichen us Stickstoffquellen, anorganische Salze, wie Natriumchlorid, Kaliumchlorid, Kaliumphosphal. Magnesiumsulfat, Calciumcarbonat sowie Spurenmengen an Schwermctallsalzen. wie Kupfer. Zink. Mangan, Eisen oder dergleichen. Im Falle einer belüfteten Submerskultur wird ein Antischäumungsmittcl, wie flüssiges Paraffin. Sojabohncnöl. Fett oder Silicon verwendet. Man kann jede Fermentationstemperatur innerhalb eines Bereiches von 20 bis 35 C einsetzen, innerhalb dessen ein MA 144-er/eugender Organismus zu wachsen vermag, wobei jedoch der bevorzugte Temperaturbereich zwischen 25 und 30 C variiert. Der pH des Kulturmediums schwankt zwischen 5,0 und 8.0. Die Zeitspanne, die für die Herstellung notwendig ist, beträgt gewöhnlich 48 bis 72 Stunden.
Zur Isolierung von MA 144-M1 oder MA 144-M, aus Reaktionsgemischen oder der Kulturbrühe wird die folgende Methode als Beispiel angeführt:
Nach Beendigung der Enzymreaktion wird MA 144-M1 oder MA 144-M2 in die Reaktionsmischung mit organischen Losungsmitteln, die mit Wasser nicht mischbar sind, extrahiert, beispielsweise Äthylacetat. Butylacetat. Chloroform, Benzol, n-Butanol. Methylpropylketon, Methylenchlorid. Toluol, und zwar in einem neutralen bis schwachsauren Zustand (pH 3 — 7). Anstelle der Lösungsmittelextraktion der Reaktionsmischung oder zusätzlich zu dieser bietet eine Chromatographie unter Einsatz von Aktivkohle. Aluminiumoxid, Silicagel, oder eines zur Gelchromatographie mit organischen Lösungsmitteln geeigneten quervernetzten Dextrans sowie eine Gegenstromverteilung unter Einsatz eines geeigneten LösungsmiUelsystems eine bequemere Methode zur Wiedergewinnung und Reinigung von MA 144-M, oder MA 144-M2. Lösungsmittelextrakte, weiche die genannte Verbindung enthalten, werden direkt oder nach einer Konzentrierung unter vermindertem Druck mit organischen Lösungsmitteln, die mit Wasser nicht mischbar sind, rückextrahiert, wobei die Lösungsmittelschicht, die MA 144-M1 oder MA 144-M2 enthält, mit saurem Wasser vermischt wird, bis der pH unter 3,0 liegt. Dann werden MA 144-Mi oder MA 144-M2, die in einesaure wäßrige Schicht überführt worden sind, mit geeigneten organischen Lösungsmitteln rückextrahiert. Die aktive Substanz wird als rohes pigmentiertes Pulver durch Konzentrieren unter vermindertem Druck bis zur Trockne aus der organischen Lösung erhalten. Durch Wiederholung dieser Methoden können die Verbindungen in reiner Form erhallen werden.
Nach einer Zugabe von Wasser zu der chemischen Reaktionsmischung wird immer MA 144-M1 oder MA 144-M, nach den vorstehend beschriebenen Methoden extrahiert, gereinigt und als rohes Pulver erhalten. Die Lösung, welche MA 144-M1 oder MA 144-M, enthält, kann ferner allein oder mil einer organischen oder anorganischen Säure. w; -. Chlorwasserstoffs«ure. Phosphorsäure. Schwefelsäure. Essigsäure. Propionsäure, ölsäure. Palmitinsäure. Zitronensäure. Bernsteinsäure oder Pantothensäure, gefriergetrocknet werden. MA 144-M1 oder MA 144-M, in der Fermentationsbrühe werden nach den gleichen Reinigungsmethodcn erhalten, wie sie \orstehend in Zusammenhang mit der En/ymreaktionsmiscluing beschrieben worden sind.
Zur Gewinnung von reinem MA 144-M1 oder MA 144-M, kann eine weitere Reinigung durch Säulenchromatographie unter Einsatz verschiedener Adsorbenlien. wie Kieselsäure. Aluminiumoxid, oder eines zur Gelchromatographie mit organischen Lösungsmitteln geeigneten quervernetzten Dextrans. Ionenaustauschern (wie schwachsauren Harzen), sowie Aktivkohle. Gelfiltration. Chelierung mit verschiedenen Metallen oder durch eine Kombination aus verschiedenen Methoden durchgeführt werden, die aus einer Chelierung mit Metallionen. Lösungsmiltel-HUsRi I lung. Lösungsmittelextraktion. Gegenstrom verteilung. Chromatographie. Konzentration. Adsorption an einem Adsorbens sowie einer Adsorption mit anschließender Eluierung aus einem lonenaustauseherharz, einer adsorbierend wirkenden Kieselerde oder einem synthetischen Adsorbens bestehen, wobei diese Methoden in herkömmlicher Weise durchgeführt werden und nachfolgend in den Beispielen näher erläutert werden.
Nachfolgend werden physikalisch-chemische Eigenschaften von reinem MA 144-M, und MA 144-M, angegeben:
MA 144-M1
Gelbes schwachbasisches und lipophili... Pulver F. 149 bis 150 C.
Empirische Formel:
C42H55NO15 (Mol-Gew. 814)
Elementaranalyse:
Gefunden ... C 62.37. H 7.08. O 28,81. N 2.071V berechnet ... C 61,98, H 6,81, 0 29,49, N 1,72%.
Spezifische Drehung [λ]? einer l%igen Lösung in Chloroform: +40°.
Die Absorptionsspektren im UV sowie im sicht baren Bereich in Methanol zeigen Maxima bei folgenden Wellenlängen (Fig. 1):
In Methanol In 0,01 n-HCl-Methanol
229 (775), 258 (335), 290(128), 432(155) 229(815), 259(345). 290(130). 432Π60»
Fortsetzung
In 0.0! n-NaOH-MethanoI
237 (575), 250s (405).
290(125). 323 s (80).
526(135)
s: Schulter
In F i g. 1 zeigt die durchgehende Linie die UV-Absorptionsspektren sowie die Absorptionsspektren im sichtbaren Licht, während die gestrichelte Linie diejenige in 0,01 n-HCl-Methanol ist. Die x-.v-.v-Linie ist diejenige in 0,01 n-NaOH-Methanol. Die Fig. 2 zeigt das Infrarotabsorptionsspektrum(KBr-Preßling). F ig. 3 zeigt das NMR-Spektrum (100 MHz, CDCQ).
MA 144-M1 ist löslich in saurem Wasser, Dimethylsulfoxid. Methylcellosolve. Methanol, Äthanol, Athylacctut. Aceton. Chloroform. Benzol und Toluol und leicht löslich in Was>er. Diäth} lather und n-Hexan. Demgegenüber ist das Hydrochloridsalz löslich in Wasser. Methanol sowie Chloroform, jedoch nur wenig löslich in Aceton und Athylacetat. Die Methanollösung von MA 144-M1 ist gelb in konzentrierter HCI. schlägt jedoch in rötlichbraun in konzentrierter Schwefelsäure um. Mit alkoholischem Magnesiumacetat zeigt die Lösung eine rote Farbe und schlägt b:i der Alkalinisierung in rötlich-purpur um. MA 144-M1 zeigt eine negative Ninhydrin-Reaktion und reduziert nicht Fehlingsche Lösung.
MA 144-M;
Schwachbasische, lipophile und rote Nadelkristallc F. 151 bis 152" C.
Empirische Formel:
Ci2Hj5NO,,, (Mol-Gew. 830)
Elementaranalyse:
Gefunden ... C 60.43. H 6.74. 0 29.70. N 1.75%: berechnet ... C 60.79. H 6.68. 0 30.84. N 1.69%.
Die spezifische Drehung [-.] einer l%igen Lösung in Chloroform zeigt einen Wert von +127. Die Absorptionsspektren im UV sowie in den sichtbaren Bereichen zcisicn Maxima bei folgenden Wellenlängen IF ic. 4):
In MeOH
In 0.01 n-HCI-MeOH
In 0.01 n-NaOH -McOH
/■ H ; .ι
235(600). 259(310).
269(170). 291 (105).
492(165)
235(615). 259(325).
269(185). 291 (115).
492(170)
237(505). 269(145).
292 (95). 330 (55).
554(175). 597(145)
In Fi g. 4 zeigt die ausgezogene Linie die Spektren im UV sowie im sichtbaren Licht in Methanol, während die gestrichelte Linie diejenige in 0.01 n-HCI-Methanol und die .v-.v-.v-Linie diejenige in 0,01 n-NaOH-Methanol ist.
Die F i g. 5 zeigt das Infrarotabsorptionsspektrum (KBr-Preßling) und die Fig. 6 das NMR-Spektrum (100 MHz, CDCl3).
MA 144-M2 ist löslich in saurem Wasser, Dimethylsiiifoxid, Methylcellosolve, Chloroform, Äthylacetat, Methanol, Äthanol, Aceton, Benzol sowie geringlöslich in Wasser, η-Hexan, Cyclohexan, Diäthyläther sowie Petroläther. Das Hydrochloridsalz ist löslich in Wasser, Methanol, Äthanol und Chloroform, jedoch geringlöslich in Aceton und Äthylacetat. MA 144-M2 zeigt eine negative Ninhydrinreaktion und vermag Fehlingsche Lösung nicht zu reduzieren.
Die Methanollösung ist rot in konzentrierter Chlorwasserstoff» ure und schlägt in violett ;n konzentrierter Schwefelsäure um. Die Lösung erscheint in alkoholischem Magnesiumacetat rötlich-purpur und zeigt ein purpurnes Blau in einer NaOH-Lösuna.
Die chemische Struktur der Verbindungen MA 144-M, und MA 144-M2 wird wie folgt bestimmi:
Bei der Hydrolyse von MA !44-M1 oder MA 144-M2 mit verdünnter Chlorwasserstoffsäure fallen die physikalisch-chemischen Eigenschaften, wie die Absorptionsspektren im UV. im sichtbaren sowie im Infrarotbereich, die Massenresonanz sowie die kernmagnetiscbe Resonanz, der Schmelzpunkt, die Elementaranalyse sowie die Rf-Werte bei der Durchführung einer Kieselsüure-Dür.nschichtchromatographie des erhaltenen Aglyconteils vollständig mit den entsprechenden Parametern des Aglycons überein, die aus dem Ausgangsmatcrial erhalten werden, d. h. das Aglycon von MA 144-M1 besteht aus Aklavinon und dasjenige von MA 144-M2 aus i-Pyrromycinon.
Vergleicht man andererseits die Rf-Wcrtc bei der Durchführung einer Kieselsäure-Dünnschichtchromatographie der Zuckeranteile, die durch Hydrolyse aus dem Ausgangsmatrial (Aclacinomycin A oder Cincrubin A) erhalten werden, mit denjenigen der erfindungsgemäßen Verbindungen, dann stellt man Rhodosamin und 2-Desoxyfucosc fest, wobei jedoch der endständige Zucker, d. h. L-Cincrulosc. unterschiedlich ist. Das mcthyliertc Disaccharid. das aus MA 144-M1 und MA 144-M2 durch partielle Methanolysc in Methanol erhalten wird, welches bei Zimmertemperatur 0.1 n-Chlorwasserstoffsäure enthält, wird mit Äther extrahiert, durch Säulenchromatographie an Kieselsäure sowie einem zur Gclchromatographic mit organischen Lösungsmitteln geeigneten quervernetzten Dextran gereinigt und anschließend in Form von weißen Kristallplattcn in Äther kristallisiert.
Die physikalisch-chemischen Eigenschaften dieses Methyldisaccharids sind wie folgt
Elementaranalysc für C1,H24O6 (Mol-Gew. 276):
Gefunden ... C 57.09. H 8,61. 0 34.30%:
berechnet ... C 56.51. H 8.75. 0 34.74%.
F. 87 bis 91 C (Sublimationspunkt).
Spezifische Drehung: [λ] — 161 ~(c= 1,0. Chloroform).
Die Absorptionsspektren im UV sowie im sichtbaren Bereich des methylierten Disaccharids zeigen eine Endabsorption. Die Infrarotabsorption sowie die NMR-Spektrcn gehen aus den Fig. 7 bzw. 8 hervor. Aus den vorstehend analysierten Ergebnissen geht hervor, daß die Struktur des Mcthyldisaecharids wie folgt ist: '
HO
lc
/CH,
ο. ο\
OH
Methyldisaccharide, die aus MA 144-M1 und MA in 144-M2 erhalten worden sind, sind bezüglich ihrer physikalisch-chemischen Eigenschaften miteinander identisch.
Bei der Methanolyse von MA 144-M1 und MA 144-M2 konnten 1-Desoxypyrromycin bzw. Pyrromyein auf der Basis der Elementaranalyse, der Absorptionsspektren im Infrarotbereich, UV-Bereich sowie im sichtbaren Bereich, des NMR-Spektrums, des Schmelzpunktes sowie der Rf-Werte bei der Durchführung einer Kieselsäure-Dünnschichtchromatographic nachgewiesen werden.
Aus den vorstehend erwähnten Ergebnissen wurden die Strukturen der erfindungsgemäßen Verbindungen MA 144-M1 und MA 144-M2 wie folgt bestimmt:
COOCH.,
CH2CH,
OH
HO
CH,
CH.,
OH
O O O ! H HO
CH,
N ν
,CH, ClI, MA 144-M,
COOCH,
HO O !
il i CH, CH,
OH
O O O H H
MA 144-M,
Es ist eine Anzahl von Anthracylinglykosid-Antibiotika mit Aklavinon und f-Pyrromycinonaglycon-Anteilen bekannt. Die Verbindungen MA 144-Mi und MA 544-M2 unterscheiden sich jedoch deutlich von diesen Antibiotika im Hinblick auf die Molekülformel, die Abbauprodukte bei der sauren Hydrolyse, die UV-Absorptionsspektren, Absorptionsspektren im sichtbaren Bereich, Infrarot-Absorptionsspektren sowie NMR-Absorptionsspektren oder dergleichen, wie vorstehend ausgeführt worden ist. Wie weiter oben dargelegt worden ist, unterscheiden sich MA 144-M1 und MA 144-M2 von ihren Ausgangsmaterialien Aclacinomycin A und Cinerubin A bezüglich ihres endständigen Zuckers (vergleiche: 1. The Journal of Antibiotics 28 Nr. 10: 830—834 [1975]. 2. Antimicrobial Agents and Chemotherapy: 68—77 [1970]).
Amicetose, welche der endständige Zucker der erfindungsgemäßen Verbindungen ist, wurde nur in dem Antibiotikum Amicetin identifiziert (vergleiche: J. Am. Che/n. Soc. 86: 3592—3594 [1964]). Unter lien Rhodomycin-Antibiotika existiert ein Antibiotikum mit einem ähnlichen Zuckeranteil, und zwar Rhodosamin-2-desoxyfucose-rhodinose, diese Verbindung ist jedoch deutlich von MA 144-M1 und MA 144-M2 bezüglich seines Agglycons sowie seines endständigen Zuckers verschieden (vergleiche: Pharmazie 27:782—789 [1972]).
Daraus geht hervor, daß MA 144-M, und MA 144-Mi "eue Substanzen sind.
Um die Eigenschaften von MA 144-M, und MA
144-M2 weiter aufzuklären, werden nachfolgend die Rf-Werte angegeben, die bei einer Kieselsäure-Dünnschichtchromatographie unter Einsatz verschiedener Lösungsmittelsysteme erhalten worden sind:
Li IO 1. ÜMin}!Mnitlcls\sti;ni Rf-Wcrle MA 144-M
MA 144-M, 0,45
15 2. Chloroform zu 0,45
Methanol = 10:1 0,11
3. Chloroform zu 0,11
4. Methanol = 20:1 0,28
Aceton 0,38 0,024
Äthylacetat 0,024
Die biologischen Aktivitäten von MA 144-M1 und MA !44-M-, sind wie folgt:
1. MA 144-M1 und MA 144-M2 weisen eine antimikrobiellc Aktivität gegenüber verschiedenen Arten von Mikroorganismen auf. Die minimale inhibierende Konzentration der erfindungsgemäßen Verbindungen, die durch die Methode der verdünnten Brühe ermittelt wird, geht aus der Tabelle 3 hervor.
Tabelle 3
Minimale Inhil-erungskonzentration (MIC μι:/ml) von iVIA 144-M, und MA
TcslnrganismiiM
Staph. aurciis
Staph. aiircus
Bac. siibtilis
Bac. cercus
Bac. mcgalcriiim
Sarcina lutea
Mie. flavus
Cory, bovis
Ps. fluorcsccns
Proteus morganii
Myobact. smcgmatis
Strcpt. pyogcncs
Can. tropicalis
Can. albicans
ΜΛ 144-Μ, MA 144-M
FDA 209 P 3,1 (UK
Smith 0.2 0.1
ATCC 6633 0.4 0.05
ATCC 9634 0.7S 0.05
NRRL B-938 3.1 0.7S
ATCC 341 0.05 0.05
0.2 0.2
0.4 0.1
NIH .113-254 > K)O > KX)
(the Inslitiile for
Infectious Diseases)
> 100 > 100
ATCC 607 2.5 1.25
NY 5 1.25 0.63
IAM 4942 > KH) KX)
IAM 4905 KK) 50
Wie vorstehend angegeben wurde, zeigen MA 144-M1 und MA 144-M2 eine antimikrobielle Aktivität gegenüber grampositiven Bakterien, so daß sie therapeutisch zur Bekämpfung von Diphterie, Tuberkulose, Lungenentzündung, Tetanus, Infektionskrankheiten, die durch Staphylococcus sowie Streptococcus verursacht werden, sowie zur Bekämpfung von weiteren Krankheiten geeignet sind.
2. Antitumoraktivität: MA 144-M1 und M2 /eigen ausgeprägte hemmende Wirkungen auf veischicdcnc experimentelle Tiertuinore (feste und aszitischc Tumore). Die Antitumorwirkung läßt sich am wirksamsamsten bei der Bekämpfung von Leukämie und festem S 180-Tumor in Mäusen zeigen. Werden beispielsweise C'DF|-Müuse mit einem Gewicht von 18 bis 21g mit I χ 10" Zellen L 1210-Lcukämic intraperitoneal beimpft und MA 144-M1, M2 oder Doxorubicin intraperitoneal I χ täglich während aufeinanderfolgender 10 Tage 3 Stunden nach der Beimpfung verabreicht, dann werden die nachfolgend angegebenen Verlängerungen der Ubcrlcbenszeit festgestellt:
a) Therapeutische Wirkung auf mit LI210-infizierte Mäuse
Verlängerung der Dberlehens/eii l%|
ΜΛ 144-Mi ΜΛ 144-M. Dnuinihicin
IO 00
5 200
2,5 192
1,25 137
0,625 123
0,313 110
0,156 110
46
85
200
192
144
116
giftig
219
236
176
157
143
b) Therapeutische Wirkung auf mit P 388-infizierte Mäuse
CDFj-Mäusc werden intraperitoneal mit einer Suspension von P388-Leukämiezellen beimpft und intraperitoneal mit Lösungen verschiedener Konzentrationen an MA 144-M,, M2 und Doxorubicin während 9 aufeinanderfolgender Tage nach der Tumortransplantation behandelt. Die Verlängerung der Lebensspanne der mit Tumor infizierten Mäuse geht aus der folgenden Tabelle hervor:
Dosierung Verlanizeniiiii tier nberlehcn-./eil ΓΉ)
Imii/ki! TiIjIl ΜΛ 144-M, M \ 144-M. DoWfffCin
5 100 57 giftig
2,5 184 83 201
1,25 149 206 189
0,625 135 148 197
0,313 110 125 211
c) Therapeutische Wirkung auf festen Sarcoma- 180-Tumor
Werden DDY-Mäuse mit einem Gewicht von 19 bis 23 g mit 2 χ !^-Zellen Sarcom subcutan beimpft und werden MA 144-M, oder M2 intreperitoneal I κ täglich während 10 aufeinanderfolgender Tage verabreicht, dann zeigt MA 144-M, und M2 eine merkliche Hemmung des Wachstums von festem Sarcoma-180 wie aus der folgenden Tabelle hervorgeht:
Tiere Ver;ih- LD511. mg/kg ΜΛ 144-M
ΜΛ 144-M, 12,5
Maus i.p. 35 12—20
i. v. 30—35 10—15
Ratte i.p. 25—30 10—15
i. v. 25—30
4. Cytotoxizität
MA 144-M, und MA 144-M2 hemmen das Wachstum von Säugetiertumorzellen in Kulturen, insbesondere bei geringer Konzentration, wobei vollständig eine RNA-Synthese gehemmt wird. Zur Durchführung dieses Experiments werden L1210-Zellen in ein RPMI-1640-Medium (Nissui, Rosewell Park Memorial Institute 1640) eingeimpft, das 1^% Kalbserum enthält, wnhei bei 37C C während ftner Zeitspanne von 3 Tagen in einem CO2-lnkubator gezüchtet wird. MA 144-M,, MA 144-M2 Doxorubicin sowie 14C-Vorläufer werden in verschiedenen Konzentrationen zugesetzt. Die Wirkungen auf die Synthese von Protein. RNA und DNA geben sich durch die 50%ige Inhibierungskonzentration (ug/'ml) zu erkennen, wie aus der folgenden Tabelle hervorgeht. Aus den Ergebnissen geht hervor, daß MA 144-M, und MA 144-M2 merklich das Wachstum von gezüchteten L12!0-Zellen sowie die RNA-Synthese bei niedriger Konzentration hemmen. Diese Ergebnisse stützen die Ergebni.;se bezüglich der therapeutischen Wirksamkeit oci der Bekämpfung von Versuchstiertumoren.
Wirkung von MA 144-M, und MA 144-M2 auf das Wachstum und die makromolekulare Synthese in gezüchteten L 1210-Zellen:
Tiimoniewiehl. i!
".p-HemniuMi!
ID,,, l:iji mil ΜΛ 144-M, D(IMl-
ruhicin
ΜΛ 144-M,
L 1210-Zellen 0.05
1.0
0.5		 0.07
0.6
2,2
20
Wachstum
DNA-Synthese
RNA-Synthcsc
Proteinsynthesc		 0,12
1.7
0.7
10*)		 ,111,. W,, Ii »■j ml.
*l "r. !' llillifl ·1ΐυ !n i ι ilii . Kt'M/i .111
(ηιμ/Ιίμ l
1,25
0,6
0,3
Kontrolle
3.Akutc
und MA
hervor:
MA 44-M, ΜΛ 144-M,
0,38
0,65
0,81
0,78
1,25
1,68
giftig
0,28
0,39
0,90
1.41
M Λ 144-M,
77,4 61.3 51,9
53.7 25.5
M\
144-M·
83.3 76.8 46.5 16
l'oxizität: Die LD50-WeMe von MA 144-M, 144-M2 guHn aus der folgenden Tabelle Wie vorstehend erwähnt wurde, zeigen die Verbindungen MA 144-M, und MA 144-M2 fiine ausgeprägte inhibierende Wirkung gegenüber bösartigen Säugetiertumoren, insbesondere gegenüber ascitischcn sowie festen Tumoren jnd Leukämien. Die Verbindungen MA 144-M1 odrr MA 144-M2, ihre Salze oder Komplexe können daher als therapeutische Mittel gegenüber bösartigen, festen sowie ascitischen Tumoren eingesetzt werden.
Diecrfindungsgemäßen Verbindungen bilden nichttoxische Säurcadc.'tionssalze mit einer Vielzahl von organischen und anorganischen Säuren. Die Säureadditionsalzc. die mit derartigen pharmazeutisch verträglichen organischen oder anorganischen Säuren.
wie Schwefelsäure. Phosphorsäure. C hlorwasseistoH-säure. [Essigsäure. Propionsäure. Ölsäure. Palmitinsäure. /iironensäure. Bernsteinsäure. Weinsäure. Glutaminsäure. Pantothensäure, gebildet werden, können daher in der gleichen Weise wie die MA 144-Verbindungen als solche eingesetzt werden. Diese Salze werden nach Methoden gebildet, isoliert, gereinigt ;:!;> i f<> mm I iert. w ie sie im allgemeinen /ur Sa I/hi Kl 11 ng Mm Antibiotika eingesetzt werden. Beispielsweise werden das gewählte Antibiotikum sowie die beabsichtigte Säure getrennt in einem geeigneten Lösungsmittel aufgelöst, das eine geringe Löslichkeit gegeniiher Salzen aufweist, beispielsweise Λthyliither und Aceton oder Mischungen davon, worauf die Lösungen vermocht werden. Die Lösung wird dann erforderlichenfalls konzentriert und abgekühlt, wobei die Kristalle «los Saureadditionsal/.es erhalten werden, die zur ( iewinnuni; eines kristallinen Pulvers »esammell und
Ui. ( I ' "- Λ I [L < WLIUV-M. I /I«. L I 1 Kt I ILi IL [ I .Jill/L I 'L > Il / L I I LIIlL höhere Löslichkeit in Wasser als die entsprechenden \n!ibio!ika und werden vorzugsweise für therapeu-'iNche /wecke verwendet. L'ür die erfindungsgemäf.V'ii /wecke sind die Verbindungen in der form tier Ireien Base äquivalent zu ihren nichttoxischen Säureadditionssalzen.
I emcr werden durch die Lrt'indung pharmazeutische /'.hereitungen zur Verfügung gestellt, die MA 144-M, oder MA 144-M, oder eine Mischung davon in einer Menge enthält, die dazu ausreicht, einen HeIaII durch Leukämie in vivo zu reduzieren, wobei das MA 144-M1. MA 144-M, oder beide Substanzen mit einem inerter, pharmazeutisch verträglichen Träger oder Verdünnungsmittel vereinigt werden. Ls ist darauf hinzuweisen, dal.t die tatsächlich bevorzugten Mengen der MA 144-Substanz in Abhängigkeit von tier jeweils eingesetzten Verbindung, der jeweils formu- !:erten Zubereitung, der Verabreichungsmethode sowie der leweiligen Stelle und dem jeweils behandelten Organismus abhängen. Viele Faktoren, welche die Wirkung des Wirkstoffes beeinflussen, sind in Betracht zu ziehen, beispielsweise das Alter, das Körpergewicht. Geschlecht. Ua^ Nahrungsmittel, die Verabreichungszeit, der Verabreichungsweg, die Lxkrctionsmenge. die Wirk^offkombinationen. die Reaktionsempfindliehkcit sowie die Schwere der Krankheit. Optimale Verabreichungsmengen für bestimmte Bedingungen lassen sich leicht unter Anwendung herkömmlicher Dosierungsermittlungstests unter Berücksichtigung der vorstehenden Richtlinien ermitteln.
Zu einer parenteralen Injektion werden MA 144-M1 oder MA 144-M,. ihre Salze oder Komplexe in für Injektionszwecke geeignetem destillierten Wasser oder in einer physiologischen Kochsalzlösung aufgelöst und intraperitoneal, intravenös, subkutan oder lokal in das Wirtstier injiziert. Die Dosierungsmenge sowie der Injektionsweg werden aufgrund von Tierexperimenten, dem Zustand der Patienten und der Testtiere, dem Alter, dem Körpergewicht, dem Geschlecht, der Empfindlichkeit, dem Zeitplan der Injektionen, der Injektionsperiode sowie in Abhängigkeit davon gewählt, ob auch andere Wirkstoffe eingesetzt werden. Die Verabreichung kann kontinuierlich oder periodisch innerhalb der maximal tolerierten Dosis durchgeführt werden. MA 144-M, oder MA 144-M2, ihre Salze können ebenfalls auf oralem Wege in Form von Tabletten, Pillen, Kapseln, Pulvern, Granulaten, Suspensionen verabreicht werden.
Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung. Beispiel I
I.ine Mischung aus Lebern, die aus IO Wistar Ratten (300 g. t)) isoliert worden sind, sowie IO Volumina : 1OmM Iris-Puffer (pll 7.X) die 1OmM Magnesiumchlorid und 0.25 m Rohrzucker enthalten, werden mittels einer Teflon-Homogenisierungseinrichlung homogenisiert und mit K)O(K)UpM während einer Zeitspanne von 20 Minuten zentrifugiert. Die iiber-
i' stehende llüssigkeit (400 ml wird mit 50 ml 5 mg ml (inerubin A und 50 ml 6 mg ml NADP vermischt, worauf jeweils 50 ml in jeweils 500 ml-Kolben verteilt und bei 40 C während einer Zeitspanne von I Stunde auf einem Rotationsschüttler bebrütet werden. Die
;, Reaktion wird durch Zugabe von 2 Volumina einei kalten Mischung aus Chloroform und Methanol (1 : 11 beendet. Diese Lösung wird gut vermischt und von der Chlor oformsehicht abgetrennt. Die zurückbleibende aktive ! r;;kti."ri i~ ''er v»;i">-·""" t'.-u;..u· ...:„.ι
;n mit einem gleichen Volumen Chloroform lüekextrahiert.
Beide ( hloroformschiehten werden vereinigt, unter vermindertem Druck konzentriert, auf Kieselsäure Dünnschiehtplatten aufgebracht und mit einer Mi-
_■-. schling aus Chloroform und Methanol (10:1) entwickelt. Nach der Chromatographie wird das Band, das dem MA 144-M, entspricht, abgekratzt, worauf das >'..\ 144-M, mit Methanol extrahiert, unter vermindertem Druck konzentriert und aus einer
;·. Mischung aus Chloroform und η-Hexan kristallisiert wird. Man erhält 51.3 mg rot .τ Nadelkristalle von MA I44-M:.
H e i s ρ i e I 2
r. Inter Verwendung von Mäuseleberhoniogenaten als Lnzymqueile werden 100 mg Aclacinomycin A nach der in Beipiel 1 beschriebenen Methode behandelt (das eingesetzte Coenzym besteht aus NADP). Man erhält 4S.5 mg von MA 144-M, in Lorm eines
:.. gelben Pulvers.
Beispiel 3
L'nter L-insatz von frischen Kaninchenleberscheiben als Lnzymqueile werden 200 mg des Rohsubstrats
:-, einschließlich 35.5 mg Cinerubin A und 112.5 mg Aclacinoycin A mit Leberschnitten sowie dem Coenzym NADP und 1000 ml einer Magnesium-Rohrzucker - Tris - (hydroxymethyl) - aminomethan - lösung IpH 7.8) gemäß Beispiel 1 bebrütet.
Die Reaktionsmischung w ird mit Chloroform extrahiert, worauf 20 ml l%iges CuSO4 · 5 H2OderCnloroformschicht (100 ml) zugesetzt wird. Nachdem die Lösung kräftig geschüttelt worden ist, wird eine 10"3 m EDTA-Lösung der Chloroformsschicht zuge setzt, die von der wäßrigen Schicht abgetrennt worden ist, worauf kräftig geschüttelt wird. Die Chloroformschicht wird dann unter Schütteln zweimal mit einer kleinen Menge Wasser gewaschen. Dei Chloroformextrakt wird konzentriert. Man erhält
bo 51 mg eines gelben MA 144-M1-PuIvCrS durch Zugabe von η-Hexan. Die erste wäßrige Schicht, welche dec ausgefällten Cu++-chelierten MA 144-M2-KompIej enthält, wird zentrifugiert. Der Niederschlag wird mit Aceton gewaschen in 10 ml 0,1 n-HCl aufgelöst und mit einem gleichen Volumen Äthylacetat extrahiert Der Extrakt wird zweimal mit Wasser, das mit NaG gesättigt worden ist, gewaschen, dann erneut mit Wasser gewaschen und unter vermindertem Druck
konzentriert. Durch Zugabe von n-llexan zu dem Konzentrat erhält man 10,5 mg MA 144-M2 in Form eines roten Pulvers.
B c i s ρ i c 1 4
1 g Aclacmomycin Λ wird in 40 ml Allylacetat auflöst, worauf mit 40 ml Wasser vermischt wird, das 100 mg Natriumborhydrid enthält. Es wird kräftig während einer Zeitspanne von 20 Minuten bei Zimmertemperatur in einem Scheidetrich'er geschüttelt, in Man läßt die Reaktionsmischung stehen, wobei sich die Äthylacctatschicht abtrennt. Der Extrakt wird mit der mit NaCI gesättigten Lösung, die 10 5 m EDTA enthält, gewaschen, worauf sich ein zweimaliges Waschen mit Wasser anschließt. Dann erfolgt Konzcn- r, Irierung nach einer Entwässerung mit wasserfreiem Natriumsulfat. Nach einer Kieselsäure-SäulenchromatoKraphic(3 χ 20 cm) unter Einsatzeiner Mischung aus Toluol und Methanol (KX): 3) werden aktixe Fraktionen, die MA 144-M, enthalten, zusammen- -'<i geschüttet, konzentriert und η-Hexan zugesetzt. Der erhaltene gelbe Niederschlag von MA 144-M, wiegt 450 mg.
B e i s ρ i c I 5 ,.
2 g Cinerubin A werden in 80 ml einer Mischung aus Äthylacetat, Chloroform und Methanol (10:1 : 1) aufgelöst, worauf 80 ml Wasser zugemischt werden, die 200 mg Natriumborhydrid enthalten. Dann erfolgt ein kräftiges Schütteln während einer Zeitspanne von 20 Minuten bei Zimmertemperatur in einem Scheidetrichter. Eine weitere Reinigung wird gemäß Beispiel 4 durchgeführt. Man erhält 760 mg MA 144-M2 aus Äthylacetat/n-Hexan in Form von roten Nadclkristallen. 3-,
Beispiel 6
Ein Nährmedium mit folgender Zusammensetzung wird hergestellt:
Kartoffelstärke 2%, Gewicht/
Volumen
Glukose 2
Sojabohnenpulver 2 5
KH2PO4 0,1
K2HPO4 0,1
MgSO4 · 7 H2O 0,1
NaCI 0,3
MnCl2 · 4 H2O 0,0005
FeSO4 · 7 H2O 0,0005
Antischäumungssilikonöl ... 0,005 (pH 7.2)
45
50 ml dieses Mediums werden bei 1200C während einer Zeitspanne von 15 Minuten in einem 500-ml-Kolben sterilisiert, der mit 1 ml einer gefrorenen Kultur von Streptomyces galilaeus MA 144-M1 (FERM P-2455) beimpft und bei 300C während einer Zeitspanne von 48 Stunden auf einem Rotationsschüttler bebrütet wird. 101 des zuvor sterili- sierten Mediums werden in einem 201 Fermentationsgcfäß aus rostfreiem Stahl aseptisch mil 200 ml der vorstehend beschriebenen Impfkultur beimpft. Die Fermentation wird bei 30°C während einer Zeitspanne von 18 Stunden unter Rühren (300 UpM) und Belüften (5 l/min) durchgerührt. Dann werden 10 1 dieser Kultur in 600 1 des zuvor sterilisierten Mediums in einem Gefäß aus rostfreiem Stahl gegossen, worauf bei 30" C während einer Zeitspanne von 48 Stunden unter Rühren (180UpM) und Belüftung (200 l/min) gezüchtet wird.
Die erhaltene Kulturbrühe (570 I) wird auf einen pH von 5,0 mit Schwefelsäure eingestellt und mit Diatomeenerdc filtriert. Der erhaltene Filterkuchen (54 kg) wird in 7 I Aceton suspendiert und nach einem Rühren während einer Zeitspanne von 3 Stunden nitriert. Der Rückstand wird mit 85 I Aceton rückextrahiert. Beide Extrakte werden unter vermindertem Druck auf 40 I konzentriert, zu 25 1 Äthylacetat zugegeben und gerührt.
Nach dem Abtrennen der Äthylacetatschicht und einem Konzentrieren auf 1 i unter vermindertem Druck wird eine rohe Aclacinomycin A-Mischung durch Zugabe von η-Hexan zu dem Konzentrat ausgefällt. 16 g eines orange-gelbgefärbten Pulvers weiden nach einem zweimaligen Waschen mit einer Mischung aus η-Hexan und Äthylacetat (50:1) erhalten.
Dieses Rohpulver wird in 200 ml Äthylacetat aufgelöst, auf eine mit 7(K) g Kieselsäure gefüllte Säule aufgegeben und mit einer Mischung aus Äthylacetat und Methanol (1:1) eluiert. Das gelbe Eluat wird zur Trockne unter vermindertem Druck konzentriert. Das erhaltene rohe Aclacinomycinpulver (12 g) wird in 100 ml Choroform aufgelöst, mit 50 ml 10~J m EDTA/0,01 m Phosphat-PufTer (pH 6,8) zur Entfernung von restlichen Metallionen geschüttelt, worauf die Chloroformschicht zweimal mit Wasser gewaschen, mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und dann unter vermindertem Druck zur Trockne konzentriert wird. Man erhält 11 g eines gelben Pulvers, dus Aclacinomycin A enthält.
Dieses Pulver wird in einer kleinen Menge Toluol aufgelöst, auf eine mit Kieselsäure gefüllte Säule (4 χ 40 cm) aufgegeben und eluiert. Aclacinomycin A. B sowie andere Verunreinigungen werden mit 2% (Volumen/Volumen) Methanol, das Toluol enthält, eluiert, worauf die MA 144-M,-Fraktion mit 3% Methanol eluiert wird, das Toluol enthält. Dann wird zur Trockne konzentriert, wobei 10,5 mg MA 144-M, in Form eines gelben Pulvers erhalten werden.
Die vorstehend beschriebene mit Kieselsäure gefüllte Säule wird nach der Eluierung der gelben Fraktionen mit 10"3 m EDTA, das 30% (Volumen/Volumen) Methanol enthält, behandelt Das erhaltene rote Eluat wird zur Trockne eingedampft. Dabei erhält man 5,0 g eines roten, Cinerubin A enthaltenen Pulvers. Dieses rote Pulver wird mit EDTA behandelt und in einer mit Kieselsäure gefällten Säule nach der im Zusammenhang mit MA 144-M1 beschriebenen Methode Chromatographien. Man erhält 6,2 mg MA 144-M2 in Form eines roten Pulvers.
Hierzu 9 Blatt Zeichnungen

Claims (1)

  1. Patentansprüche; I. Anthracyclinglykoside MA 144-M1 und MA 144-M2 der allgemeinen Formel
    COOCH., R O
    / CH,
    HO
    / CH,
DE2715255A 1976-04-07 1977-04-05 Anthracyclinglykoside MA 144-M, und MA 144-M2 und deren Salze, Verfahren zu deren Herstellung und diese Verbindungen enthaltende pharmazeutische Zubereitungen Expired DE2715255C3 (de)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP3968876A JPS52136159A (en) 1976-04-07 1976-04-07 Anti/malignanttumor containing the same as active ingredients

Publications (3)

Publication Number Publication Date
DE2715255A1 DE2715255A1 (de) 1977-11-10
DE2715255B2 true DE2715255B2 (de) 1979-01-04
DE2715255C3 DE2715255C3 (de) 1979-08-30

Family

ID=12559990

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE2715255A Expired DE2715255C3 (de) 1976-04-07 1977-04-05 Anthracyclinglykoside MA 144-M, und MA 144-M2 und deren Salze, Verfahren zu deren Herstellung und diese Verbindungen enthaltende pharmazeutische Zubereitungen

Country Status (11)

Country Link
US (2) US4144329A (de)
JP (1) JPS52136159A (de)
BE (1) BE853203A (de)
CA (1) CA1097238A (de)
DE (1) DE2715255C3 (de)
DK (1) DK146342C (de)
ES (3) ES475579A1 (de)
FR (1) FR2347381A1 (de)
GB (1) GB1563432A (de)
NL (1) NL168557C (de)
SE (1) SE436758B (de)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4123608A (en) * 1977-07-18 1978-10-31 Bristol-Myers Company Antibiotic compound
ZA802929B (en) * 1979-05-22 1981-05-27 Hoffmann La Roche Novel tetracyclic compounds and process for the preparation thereof
JPS6023679B2 (ja) * 1979-07-13 1985-06-08 メルシャン株式会社 ロドマイシン群抗生物質とその製造法
EP0030255B1 (de) * 1979-09-07 1986-01-29 Sanraku Incorporated 2-Hydroxyaclacinomycin A, dies enthaltende pharmazeutische Zusammensetzung; 2-Hydroxyaclavinon und fermentatives Verfahren zu dessen Herstellung
JPS5767518A (en) * 1980-09-17 1982-04-24 Yamasa Shoyu Co Ltd Radiosensitizing agent or agent for increasing effect of radiomimetic substance
CH648327A5 (de) * 1980-10-16 1985-03-15 Hoffmann La Roche Anthracycline.
CA1187434A (en) * 1981-08-11 1985-05-21 Akihiro Yoshimoto Anthracycline antibiotics and their preparation method
JPS6133194A (ja) * 1984-07-25 1986-02-17 Sanraku Inc 新規アントラサイクリン抗生物質
US20050208037A1 (en) * 2003-10-21 2005-09-22 Board Of Regents, The University Of Texas System Thioredoxin increases redox-cycling of anticancer agents thereby sensitizes cancer cells to apoptosis
CN104644631A (zh) * 2015-01-31 2015-05-27 云南省第一人民医院 新乌头碱对k562细胞生物学特性的改变

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB846130A (en) 1956-03-23 1960-08-24 Ciba Ltd New antibiotic and derivatives and salts thereof, preparations containing the same and process for the manufacture of these substances
US3864480A (en) * 1974-05-06 1975-02-04 Merck & Co Inc Cinerubin A and B As Antiparasitic Agents
JPS5134915B2 (de) * 1974-07-27 1976-09-29
JPS5323961A (en) * 1976-08-16 1978-03-06 Microbial Chem Res Found Antitumors

Also Published As

Publication number Publication date
JPS5438100B2 (de) 1979-11-19
SE436758B (sv) 1985-01-21
ES469424A1 (es) 1979-04-01
DE2715255C3 (de) 1979-08-30
ES469423A1 (es) 1979-04-01
CA1097238A (en) 1981-03-10
FR2347381B1 (de) 1980-10-17
GB1563432A (en) 1980-03-26
SE7703760L (sv) 1977-10-08
US4219622A (en) 1980-08-26
NL168557C (nl) 1982-04-16
US4144329A (en) 1979-03-13
BE853203A (fr) 1977-08-01
DK146342B (da) 1983-09-12
DK146342C (da) 1984-04-09
NL7703753A (nl) 1977-10-11
DE2715255A1 (de) 1977-11-10
FR2347381A1 (fr) 1977-11-04
ES475579A1 (es) 1978-08-01
DK152977A (da) 1977-10-08
JPS52136159A (en) 1977-11-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE2532568C3 (de) Aclacinomycin A und B, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese Verbindungen enthaltende pharmazeutische Zubereitungen
DE2743654C3 (de)
DE2754326C2 (de) Antibiotikum AM 2282, seine Herstellung und Arzneimittel
CH630957A5 (de) Verfahren zur herstellung von neuen antibiotischen verbindungen auf basis eines bohemsaeurekomplexes.
DE2715255C3 (de) Anthracyclinglykoside MA 144-M, und MA 144-M2 und deren Salze, Verfahren zu deren Herstellung und diese Verbindungen enthaltende pharmazeutische Zubereitungen
DE3323025A1 (de) Anthracyclin-derivate, ein mikrobiologisches verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als cytostatika
DE2724441C2 (de) Als Baumycine bezeichnete Anthracyclinglycoside, Verfahren zu ihrer Herstellung und Arzneimittel
US4127714A (en) Anthracycline glycosides
EP0019302A1 (de) Neue tetracyclische Verbindungen, Verfahren zu deren Herstellung, deren Verwendung und pharmazeutische Präparate
DE2839668C2 (de)
CH634853A5 (de) Schwefelhaltige metabolite, ihre herstellung und verwendung in arznei- und futtermitteln.
EP0829487B1 (de) Neue Polyenantibiotika 3874 H1 bis H6, Verfahren zu ihrer Herstellung und Verwendung
EP0236894B1 (de) Efomycin G, seine Herstellung und seine Verwendung als Leistungsförderer bei Tieren
EP0652205A2 (de) Moenomycin-Abbauprodukte mit hydroxylierter oder oxidierter Lipidseitenkette und Moenomycin-Analoga, ein Verfahren zur Herstellung und die Verwendung dieser Verbindungen
DE2738656C2 (de)
EP0660825B1 (de) Entzündungshemmende makrolactame (cyclamenol)
CH648327A5 (de) Anthracycline.
DE2645528C3 (de) Antibiotisch wirksame Pyrrole [2,1c] -1,4benzdiazepine
DE2946793C2 (de) 4-O-Desmethyl-11-desoxy-anthracyclinglycoside, Verfahren zu deren Herstellung sowie diese Verbindungen enthaltende pharmazeutische Zusammensetzungen
DE2944143C2 (de) Antibiotikum SF-2052, Verfahren zu dessen Herstellung und das Antibiotikum SF-2052 enthaltende antibakterielle Mittel
DE2039990C2 (de) Neue Antibiotika B-5050 A bis F (Maridomycin I bis VI), Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre pharmazeutische Zubereitung
CH637137A5 (en) Antibiotic and process for its preparation
DE2818544A1 (de) Antibiotikum sf-1942, verfahren zu dessen herstellung und pharmazeutische zusammensetzung, die das antibiotikum sf-1942 enthaelt
DE3407979A1 (de) Spicamycin sowie verfahren zu seiner herstellung
US4192915A (en) Anthracycline glycosides from streptomyces

Legal Events

Date Code Title Description
C3 Grant after two publication steps (3rd publication)
8339 Ceased/non-payment of the annual fee