DE60307500T2

DE60307500T2 - Polysaccharid von echinacea angustifolia

Info

Publication number: DE60307500T2
Application number: DE60307500T
Authority: DE
Inventors: Andrea Giori; Alessandro Anelli; Paolo Morazzoni; Francesco Di Pierro
Original assignee: Indena SpA
Current assignee: Indena SpA
Priority date: 2002-07-30
Filing date: 2003-06-26
Publication date: 2007-03-29
Anticipated expiration: 2023-06-27
Also published as: CN1671745A; AU2003246588B2; RU2005102102A; EP1560855B1; KR101124047B1; WO2004014958A1; ATE335768T1; ITMI20021692A1; NO333509B1; PT1560855E; US6818761B2; DE60307500D1; KR20110018468A; NO20050508L; IL166554A0; KR101124105B1; CN1290867C; PL209967B1; DK1560855T3; KR20050025967A

Description

Gebiet der Erfindung
Die vorliegende Erfindung betrifft das Gebiet von Polysacchariden, insbesondere ein Polysaccharid von Echinacea angustifolia, und ein Verfahren zur Herstellung desselben. Das Polysaccharid kann bei der Behandlung von pathologischen Zuständen verwendet werden, in denen es erwünscht ist, die Immunabwehr zu stärken.
Hintergrund der Erfindung
Echinacea ist eine Pflanze, die aus Nordamerika und Mexiko stammt. Ihre therapeutischen Eigenschaften sind den Ureinwohnern Amerikas bekannt, die sie zum Heilen von Wunden verwendeten. Aufgrund der Tatsache, dass man Echinacea als die Widerstandsfähigkeit gegen Infektionen erhöhend erachtete, verbreitete sich ihre Verwendung zur Behandlung von örtlichen und allgemeinen Infektionen während der ersten Jahre des letzten Jahrhunderts. Echinacea, insbesondere Echinacea angustifolia, wird in der heutigen Zeit für die Behandlung von Influenza-Syndromen und insbesondere für die Behandlung von Erkältung, zum Heilen von Wunden und für die Behandlung von Mykose empfohlen.
Die allgemeine Wirkung erfolgt scheinbar aufgrund der aseptischen Stimulierung des Immunsystems und der Sensibilisierung von Keimen und Pathogenen gegen Chemotherapeutika und Antibiotika. Die vernarbenden Eigenschaften scheinen der Fähigkeit Hyaluronsäuren über die Hyaluronidasehemmung zu stabilisieren, die von einem der in der Pflanze enthaltenen Wirkprinzipien ausgeübt wird, d.h. Echinacosid und der massiven Makrophagenaktivierung, die durch Polysaccharide induziert wird, zuzuschreiben zu sein. Auf diese Weise bleiben die Infektionsherde lokalisiert und die für Heilvorgänge notwendige Akkumulation von Mukopolysacchariden und hystoplastischem Material wird begünstigt.
Eine große Fraktion von Echinaceapolysacchariden besteht aus Inulin, das für die vorstehend angeführten Eigenschaften als nicht verantwortlich angesehen wird.
DE-A-32 17 214 offenbart Polysaccharide aus Echinacea purpurea und angustifolia, die immunostimulierende Eigenschaften und entzündungshemmende Wirksamkeit besitzen. Diese Polysaccharide haben ein Molekulargewicht im Bereich von 35 000 bis 500 000 und enthalten als Hauptkomponente ein Rhamnoarabinogalactan, das Rhamnose, Arabinose, Xylose, Mannose, Galactose, Glucose und Glucuronsäure in einem Molverhältnis von 0,6-1,0:0,4-0,8:0,1-0,4:0,0-0,2:0,8-1,2:0,1-0,5:0,4-0,8 umfasst, ein Heteroxylan, das Rhamnose, Arabinose, Xylose, Galactose, Glucose und 4-O-Methylglucuronsuäre in einem Molverhältnis von 0,2-0,4:0,8-1,2:4,5-5,3-0,7-1,1:0,2-0,6:0,7-1,1 umfasst und ein Arabinogalactan, das Rhamnose, Arabinose, Xylose, Galactose und Glucuronsäure in einem Molverhältnis von 0,0-0,2:0,8-1,2:0,0-0,2:0,9-1,3:0,3-0,6 umfasst.
Offenbarung der Erfindung im Einzelnen
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Polysaccharid aus Echinacea-angustifolia-Wurzeln (nachstehend als „das Polysaccharid" bezeichnet) mit einem Molekulargewicht von 1,3 × 10⁵ Da und das aus Rhamnose, Arabinose, Galactose und Galacturonsäure in einem Molverhältnis von 0,5:2,5:1,75:10,25 besteht.
Das erfindungsgemäße Polysaccharid kann bei der Behandlung von pathologischen Zuständen, worin es erwünscht ist, die Immunabwehr zu stärken, verwendet werden.
Im Gerüst des Polysaccharids alternieren gerade oder verzweigte Teile, wobei die geraden Teile aus teilweise acetylierten (9 %) und methylierten (35 %) Galacturonsäureres ten, die über α-(1,4)-Bindung verbunden sind, bestehen, und die aus verzweigten Teilen abwechselnd aus Galacturonsäure und Rhamnose bestehen, an die Seitenketten, die Arabinose und Galactose in einem Verhältnis von 2,5:1,75 enthalten, gebunden sind. Das Polysaccharid wird durch ¹H-NMR-, ¹³C-NMR-Spektren und GCP-Profil, wie in 1 bis 3 berichtet, charakterisiert.
Das Polysaccharid wird aus Wurzeln von wird wachsenden oder kultivierten Echinacea angustifolia mithilfe eines Verfahrens gewonnen, umfassend die nachstehenden Schritte:

a) Entfernen von Nicht-Polysaccharid-Komponenten aus den Wurzeln durch Extraktion mit Lösungsmittel;
b) Extrahieren der Polysaccharidfraktion aus den Wurzeln, wie sie direkt aus dem vorangehenden Schritt erhalten wurden, mit Lösungsmittel;
c) Isolieren des Polysaccharids durch Chromatographie der Polysaccharidfraktion.

Der Zweck von Schritt a) ist es, die Nichtpolysaccharidkomponenten der Wurzeln, hauptsächlich Echinacosid und Analoge davon sowie die große Gruppe von Alkylamiden, die auch charakteristische Komponenten von Echinacea angustifolia darstellen (R. Bauer et al., Phytochemistry 28, 505, 1989; Planta Med. 55, 367, 1989), zu entfernen. Folglich werden die Wurzeln mit einem Lösungsmittel, das aus Aceton oder einem Alkohol mit einem bis drei Kohlenstoffatomen ausgewählt ist, gegebenenfalls in Anmischung mit Wasser, bei einer Temperatur im Bereich von 20°C bis zur Siedetemperatur, vorzugsweise unter Rückfluss, extrahiert. Der Wassergehalt des Lösungsmittels darf 40 % (Volumen/Volumen) nicht übersteigen. Ethanol bei einer Konzentration zwischen 80 und 95 % (Volumen/Volumen) ist das bevorzugte Lösungsmittel.
Der Zweck von Schritt b) ist es, das Gemisch von Polysaccharidkomponenten aus den Wurzeln zu extrahieren. Die Extraktion wird mit Wasser, Aceton oder einem Alkohol mit einem bis drei Kohlenstoffatomen in Anmischung mit Wasser bei einer Temperatur im Bereich von 20°C bis zu der Siedetempera tur des Lösungsmittels, vorzugsweise 40 bis 70°C, ausgeführt. Wenn Gemische von Lösungsmitteln verwendet werden, wird der Wassergehalt 60 % oder höher, vorzugsweise 85 % (Volumen/Volumen) sein. Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung ist das Lösungsmittel 15 %iges (Volumen/Volumen) Ethanol.
Schritt c) stellt das Fraktionieren des Extrakts von Schritt b) und die Abtrennung des Polysaccharids von anderen polaren Komponenten des Extrakts bereit. Dieser Schritt besteht vorzugsweise in Größenausschlusschromatographie oder Ionenaustauschchromatographie.
In dem ersten Fall wird das Polysaccharid, bezogen auf seine molekularen Abmessungen, gereinigt: Tatsächlich hat das Polysaccharid eine charakteristische Masse, die sich von jener von allen anderen Komponenten unterscheidet. Ein geeignet vernetztes Harz kann chemische Spezies mit verschiedenen Abmessungen trennen; Verarbeiten des Extrakts von Schritt b) über ein Harz dieses Typs (beispielsweise Toyopearl-HW-65S oder Superdex^® 200HR) erlaubt, das erfindungsgemäße Polysaccharid zu reinigen.
Die Reinigung des Polysaccharids durch Ionenaustauschchromatographie basiert auf dem sauren Charakter des Polysaccharids aufgrund des Vorliegens von Carboxyfunktionen in den Galacturonsäureeinheiten. Verarbeiten des Extrakts von Schritt b) über ein Anionenaustauschharz erlaubt, nur das Polysaccharid zurückzuhalten und beliebige andere saure Komponenten (die in kleinen Mengen vorliegen) und um die neutralen oder basischen Komponenten alle zu entfernen. Das Harz wird mit einer Salz- oder sauren wässrigen Lösung ausgewaschen, um die durch das Harz eingefangenen Moleküle wiederzugewinnen. Die Salze oder die Säuren in der gereinigten Lösung werden anschließend mithilfe von Ultrafiltrationsdialyse entfernt. Ein ausreichend hoher Cut-off (beispielsweise 10 000 oder 100 000 Da) wird ausgewählt, um auch die in dem Ausgangsmaterial und durch das anionische Harz zurückgehaltenen sauren Verunreinigungen zu entfernen.
Bevorzugte Anionenaustauscherharze sind starke Ionenaustauschharze, wie Daiion HPA 25 und Q Sepharose^® Fast Flow.
Die gemäß einem der in Schritt c) beschriebenen chromatographischen Verfahren erhaltene gereinigte Polysaccharidlösung wird dann auf konzentriert und unter Vakuum getrocknet oder gefriergetrocknet. Das Polysaccharid ist ein elfenbeinfarbiges Pulver.
Schritt c) kann auch vorausgehende Reinigungsschritte umfassen, die anwendbar sind, um die Chromatographie leichter zu machen. Auch wenn nicht unerlässlich, erlauben diese Schritte, eine erste aliquote Menge an Verunreinigungen aus dem Extrakt von Schritt b) zu entfernen und die Harzmenge zu vermindern.
Vorausgehende Behandlungen sind ausgewählt aus:

c1) Aufkonzentrierung des Extrakts von Schritt b) unter vermindertem Druck und anschließende Reinigung durch Behandlung mit einem Gemisch von Wasser und Aceton oder Wasser und einem Alkohol mit einem bis drei Kohlenstoffatomen, vorzugsweise Ethanol. Das Gemisch wird 50 bis 70 %, vorzugsweise 66,5 % Alkohol oder Aceton enthalten. Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung wird der Rückstand, der sich aus der Aufkonzentrierung des Extrakts ergibt, bei Raumtemperatur mit 3 Teilen von Wasser gelöst und unter Rühren mit 7 Volumen 95 %igem Ethanol verdünnt. Die ausgefällte Fraktion, die das Polysaccharid enthält, wird durch Filtration gesammelt, mit Ethanol bei einer Konzentration von 50 bis 70 % ge-waschen und chromatographischer Reinigung unterzogen.
c2) Behandlung der Polysaccharidfraktion von Schritt b) oder der angereicherten Fraktion von Schritt 1c) mit Wasser bei Raumtemperatur. Auf diese Weise wird das erfindungsgemäße Polysaccharid, das in Wasser sehr löslich ist, von anderen schlecht löslichen Polysacchariden abgetrennt. Der Extrakt, der sich aus Schritt b) (oder der Fraktion, die in Polysacchariden von Schritt c1) angereichert ist) ergibt, wird in Wasser bei Raumtemperatur suspendiert und gerührt, um Auf lösung zu fördern. Der unlösliche Rückstand wird abgetrennt und die wässrige Lösung wird Chromatographie unterzogen.
c3) Enzymatische Behandlung, die zum Hydrolysieren von Inulin-ähnlichen Oligosacchariden und Polysacchariden verwendbar ist, welche eine der Hauptverunreinigungen von dem Extrakt von Schritt b) wiedergeben. Der Extrakt (oder eines der teilweise gereinigten Produkte von Schritten c1) oder c2)) wird in wässriger Lösung mit einer katalytischen Menge an Inulinase für 10 bis 24 Stunden behandelt. Das Enzym wird dann wärme- oder trypsininaktiviert und die nach Hydrolyse gebildeten Kohlenhydratfragmente werden durch Dialyse entfernt (tangentiale Ultrafiltration mit Cut-off höher als 10 000 Da, vorzugsweise 100 000 Da). Das so erhaltene Retentat wird dann Chromatographie unterzogen.
c4) Hoch-Cut-off-Ultrafiltration (Cut-off höher als 10 000 Da, vorzugsweise 100 000 Da), um Verunreinigungen mit niederem Molekulargewicht zu entfernen. In diesem Fall wird der Extrakt von Schritt b) (oder eines von den teilweise gereinigten Produkten von Schritten c1) oder c2)) in Wasser, vorzugsweise 10 oder 20 Volumen, gelöst und dialysiert. Das Retentat, das das erfindungsgemäße Polysaccharid enthält, wird dann Chromatographie unterzogen.

Das erfindungsgemäße Polysaccharid zeigte immunstimulierende Eigenschaften bei Mäusen, insbesondere erwies es sich in der Lage, T-Lymphozytenaktivierung zu stimulieren und der Wirkung von Cyclosporin A entgegenzuwirken, wodurch die Mortalität aufgrund von Candida-albicans-Infektion vermindert wurde. Das erfindungsgemäße Polysaccharid kann deshalb für die Herstellung von Arzneimitteln, Nahrungsergänzungen oder Nährmittelzusammensetzungen verwendet werden, die in Situationen verabreicht werden sollen, bei denen eine Erhöhung der Immunsystemkörperabwehr erwünscht ist.
Das Polysaccharid kann gemäß herkömmlichen Techniken, beispielsweise gemäß jenen, die in Remington's Pharmaceutical Sciences Handbook, XVII. Ausgabe, Mack Pub., NY, USA beschrieben sind, formuliert werden.
Die vorliegende Erfindung wird nachstehend mithilfe von einigen Beispielen erläutert.
BEISPIELE
In allen folgenden Beispielen wird die Bestimmung des Polysaccharid-HPLC-Titers mit einer TosoHaas-TSK-Gel-G5000-PWXL-Säule, die mit Wasser, welches 0,5 % Triethylamin enthält, bei isokratischen Bedingungen mit einer Fließrate von 0,5 mm/min eluiert wird, ausgeführt. Während der Analyse, die 30 Minuten dauert, wird die Säule bei 50°C gehalten. Das Einspritzvolumen ist 50 μl. Ein Verdampfungsdetektor ELSD (Evaporative Light Scattering Detector) Sedex mod. 75 (S.E.D.E. R.E.), dessen Zerstäuber bei 60°C mit einem Gasdruck von 2,2 bar gehalten wird, wird mit der Säule gekuppelt.
Beispiel 1
Extraktion von Echinacea-angustifolia-Wurzeln (Schritte a) und b))
600 g vermahlene Wurzeln von Echinacea angustifolia werden für 4 Stunden mit 2,5 l 90 %igem (Volumen/Volumen) Ethanol unter Rückfluss extrahiert. Das Perkolat wird gesammelt und weitere sieben Extraktionen mit dem gleichen Lösungsmittel (Schritt a)) werden ausgeführt. Der erhaltene Extrakt wird verworfen. Die Wurzeln werden dann sieben Mal bei 70°C mit 15 % (Volumen/Volumen) Ethanol, wobei jede Extraktion vier Stunden dauert, extrahiert. Die vereinigten Perkolate werden filtriert und unter Vakuum aufkonzentriert unter Bereitstellung von 170 g braunem Rückstand (Polysaccharidvollextrakt, Schritt b)).
Beispiel 2
Gewinnung des Polysaccharids durch Vorreinigung mit Lösungsmitteln und Anionenaustauschchromatographie
170 g des gesamten Polysaccharidextrakts von Schritt b) von Beispiel 1 werden in 570 ml gelöst und 1,13 l Ethanol werden dann zugegeben. Das Gemisch wird für etwa eine Stunde gerührt, der Niederschlag nach etwa 20 Minuten abdekantiert, filtriert, mit 850 ml 66,5%igem (Volumen/Volumen) Ethanol gewaschen und bei 55°C unter Vakuum für 48 Stunden getrocknet, was 140 g eines haselnussfarbenen Feststoffs lieferte. Der Feststoff wird in 2,1 l Wasser aufgenommen und die erhaltene Suspension wird unter Rühren für 20 Minuten belassen, dann von dem unlöslichen Rückstand (der verworfen wird) getrennt.
Die in dem erfindungsgemäßen Polysaccharid angereicherte wässrige Lösung ergibt einen trockenen Rückstand von 38,7 g. Die Lösung wird auf eine Chromatographiesäule geladen, die 0,9 l Daiion-HPA-25-Harz, konditioniert mit AcOH/AcNH₄-Puffer bei pH 6,1, enthält. Das Harz wird mit 5,4 l AcOH/AcNH₄-Pufferlösung bei pH 6,1 gewaschen und die das Polysaccharid enthaltende Fraktion wird mit 5,4 l 0,5 M wässriger AcNH₄-Lösung eluiert. Das Eluat wird auf 0,3 l unter vermindertem Druck aufkonzentriert. Die konzentrierte Lösung wird Dialyse durch Tangentialultrafiltration mit 6 l gereinigtem Wasser unter Anwendung einer 10 000-Da-Cut-off-spiralumwundenen-Membran in Polyethersulfon gereinigt.
Das Retentat wird gewonnen und unter vermindertem Druck aufkonzentriert und der Rückstand wird unter Vakuum in der Wärme getrocknet zur Bereitstellung von 7,1 g eines elfenbeinfarbenen Pulvers (Polysaccharid-HPLC-Titer: 96 %).
Das Polysaccharid hat ein mittleres Molekulargewicht von 1,3 × 10⁵ Da (s = 5 365) mit < Mn 14 320 (s = 2 180), das mit einer Bestimmung mithilfe von LALLS (Low Angle Laser Light Scattering) übereinstimmt und besteht aus Galacturonsäure, Galactose, Arabinose und Rhamnose in einem Verhältnis 10,25:1,75:2,5:0,5 (HPAEC-Analyse). Das Polysaccharid hat ein charakteristisches ¹H-NMR-, ¹³C-NMR- bzw. GPC-Profil, wie in 1 bis 3 berichtet.
Beispiel 3
Gewinnung des Polysaccharids durch Ultrafiltration, Vorreinigung und Größenausschlusschromatographie
170 g des gesamten Polysaccharidextrakts von Schritt b) von Beispiel 1 werden in 850 ml gereinigtem Wasser gelöst. Die Lösung wird durch Tangentialultrafiltration mit 10 l gereinigtem Wasser unter Anwendung einer Cut-off-spiralumwundenen Membran von 50 000 Da in Polyethersulfon dialysiert.
Das Retentat, das 110,5 g gereinigten Extrakt enthält, wird gewonnen und auf eine Chromatographiesäule, die unter Mitteldruck gehalten wird, und 22 l Toyopearl-HW-65S-Harz, konditioniert mit Wasser, enthält, beladen. Die Elution wird mit gereinigtem Wasser ausgeführt, wobei man die Eluate in Fraktionen von jeweils 200 ml teilt. Die Fraktionen werden GPC-analysiert und jene, die ausreichend reines Polysaccharid enthalten, werden vereinigt.
Die vereinigten Fraktionen werden dann unter vermindertem Druck auf konzentriert und der Rückstand wärmegetrocknet unter Vakuum unter Bereitstellung von 5,7 g eines elfenbeinfarbenen Pulvers (Polysaccharid-HPLC-Titer: 95 %).
Beispiel 4
Gewinnung des Polysaccharids durch enzymatische Vorreinigung und Anionenaustauschchromatographie
170 g des gesamten Polysaccharidextrakts von Schritt b) von Beispiel 1 werden in 3230 ml gereinigtem Wasser gelöst und 850 mg Enzym Inulinase werden zugegeben. Das Gemisch wird unter mildem Rühren bei 40°C für 24 Stunden belassen, dann wird das Enzym mit 80 mg Trypsin unter Rühren für 2 Stunden bei 36°C inaktiviert. Die Lösung wird zwei Stunden auf 85°C erhitzt und unter vermindertem Druck auf 1,7 l aufkonzentriert.
Die konzentrierte Lösung wird Dialyse durch Tangentialultrafiltration mit 17 l gereinigtem Wasser unter Anwendung von einer Cut-off-spiralumwundenen Membran von 100 000 Da in Polyethersulfon unterzogen. Das Retentat (das 11,5 g gerei nigten Extrakt enthält) wird gewonnen und auf eine Chromatographiesäule, die 0,8 l Daiion-HPA-25-Harz, konditioniert mit AcOH/AcNH₄-Puffer bei pH 6,1, enthält, beladen. Das Harz wird mit 4,8 l AcOH/AcNH₄-Puffer-Lösung bei pH 6,1 gewaschen und die das Polysaccharid enthaltende Fraktion wird mit 4,8 l einer wässrigen 0,5 M AcNH₄-Lösung eluiert. Das Eluat wird unter vermindertem Druck auf 150 ml auf konzentriert und das Konzentrat wird durch Tangentialultrafiltration mit 1,5 l gereinigtem Wasser unter Anwendung einer Cut-off-spiralumwundenen Membran von 50 000 Da in Polyethersulfon dialysiert.
Das Retentat wird unter vermindertem Druck aufkonzentriert und der Rückstand wird unter Vakuum wärmegetrocknet unter Gewinnung von 6,9 g elfenbeinfarbenen Pulvers (Polysaccharid-HPLC-Titer: 97 %).
BIOLOGISCHER ABSCHNITT
Versuch 1
Test für die Herstellung von γ-Interferon in T-Lymphozyten (Zucca M. et al., New Microbiol. 1996, 19, 39-46)
Durch Abtrennung von Splenozyten auf Nylonwollesäule erhaltene murine T-Lymphozyten wurden in 1640-RPMI-Medium mit 4 %igem fötalem Kalbserum in Mikrotiterplatten, gegebenenfalls vorinkubiert mit α-CD3 (anti-CD3-monoklonale Antikörper als Zellfunktionsaktivator, der für die Interferonproduktion verantwortlich ist), kultiviert. Die zu testenden Substanzen wurden zu den Vertiefungen gegeben, und nach 48 Stunden in das Inkubationsmedium freigesetztes γ-Interferon wurde bewertet. Tabelle 1
Versuch 2
Wirkung auf die Mortalität von Mäusen durch Candida albicans (Microbiology, 2000, 1881-9)
Hefen wurden in Sabouraud'schem Agar kultiviert und bei einer Konzentration von 2,9 × 10⁵ in mit 1 mg/kg ip Cyclosporin A (CsA) immungeschwächte Mäuse inokuliert. Die Mäuse wurden täglich mit 5 und 10 mg/kg ip des erfindungsgemäßen Polysaccharids behandelt bis zum Tod aller Kontrollmäuse (unbehandelt). Die Ergebnisse wurden als überlebende Tiere in den Behandlungsgruppen bewertet. Tabelle 2

Claims

Polysaccharid von Echinacea angustifolia-Wurzeln mit einem Molekulargewicht von 1,3 × 10⁵ Da und bestehend aus Rhamnose, Arabinose, Galactose und Galacturonsäure in einem Verhältnis von 0,5:2,5:1,75:10,25.
Polysaccharid nach Anspruch 1, gekennzeichnet durch ein Gerüst mit alternierenden geraden und verzweigten Teilen, wobei die geraden Teile aus teilweise acetylierten und methylierten Galacturonsäureresten bestehen, die über α-(1-4)-Bindung verknüpft sind, und die verzweigten Teile, aus einer Abwechselung von Galacturonsäure und Rhamnose bestehen, an die Seitenketten, die Arabinose und Galactose in einem Verhältnis von 2,5:1,75 enthalten, gebunden sind.
Verfahren zur Herstellung eines Polysaccharids nach Ansprüchen 1 oder 2, umfassend die nachstehenden Schritte: a) Entfernen von Nicht-Polysaccharid-Komponenten aus den Wurzeln durch Extraktion mit Lösungsmittel; b) Extrahieren der Polysaccharidfraktion aus den Wurzeln, wie sie direkt aus dem vorangehenden Schritt erhalten wurden, mit Lösungsmittel; c) Isolieren des Polysaccharids durch Chromatographie der Polysaccharidfraktion.
Verfahren nach Anspruch 3, wobei das in Schritt a) verwendete Lösungsmittel Aceton oder ein Alkohol mit einem bis drei Kohlenstoffatomen ist.
Verfahren nach Anspruch 4, wobei das Lösungsmittel in Beimengung mit Wasser vorliegt.
Verfahren nach Anspruch 5, wobei der Wassergehalt des Lösungsmittels nicht höher als 40 % ist.
Verfahren nach einem der Ansprüche 4-6, wobei das Lösungsmittel Ethanol mit einer Konzentration im Bereich von 80 bis 95 % ist.
Verfahren nach einem der Ansprüche 4-7, wobei die Extraktionstemperatur im Bereich von 20°C bis zu der Siedetemperatur des Lösungsmittels liegt.
Verfahren nach Anspruch 3, wobei das in Schritt b) verwendete Lösungsmittel Wasser oder ein Gemisch von Wasser und Aceton, oder Wasser und einem Alkohol mit einem bis drei Kohlenstoffatomen ist.
Verfahren nach Anspruch 9, wobei der Wassergehalt des Lösungsmittelgemisches 60 % oder höher ist.
Verfahren nach einem der Ansprüche 9 oder 10, wobei das Lösungsmittel 15 % Ethanol ist.
Verfahren nach einem der Ansprüche 9-11, wobei die Extraktion bei einer Temperatur im Bereich von 20°C bis zur Siedetemperatur des Lösungsmittels ausgeführt wird.
Verfahren nach Anspruch 3, wobei die Chromatographie von Schritt c) eine Größenausschlusschromatographie oder eine Ionenaustauschchromatographie ist.
Verfahren nach Anspruch 3, wobei vor der Chromatographie von Schritt c) die Polysaccharidfraktion von Schritt b) einer oder mehreren vorausgehenden Reinigungsbehandlungen unterzogen wird.
Verfahren nach Anspruch 14, wobei die vorausgehenden Reinigungsbehandlungen ausgewählt sind aus: c1) Ausfällung und Isolierung einer mit Polysacchariden angereicherten Fraktion durch Auflösung in einem Gemisch von Wasser und 50-70 % Aceton oder Wasser und 50-70 % von einem Alkohol mit einem bis drei Kohlenstoffatomen; c2) Entfernung der unlöslichen Polysaccharidfraktion durch Behandlung mit Wasser; c3) Behandlung mit Inulinase; c4) Ultrafiltration mit einem Cutoff von 10 000 Da oder höher.
Verfahren nach Anspruch 15, wobei die vorausgehenden Reinigungsbehandlungen c1) und c2) ausgeführt werden.
Verfahren nach Anspruch 15, wobei die vorausgehende Reinigungsbehandlung c3), der gegebenenfalls eine oder beide Reinigungsbehandlung(en) c1) und c2) vorangestellt sind, ausgeführt wird.
Verfahren nach Anspruch 15, wobei die vorausgehende Reinigungsbehandlung c4), der gegebenenfalls eine oder beide Reinigungsbehandlung(en) c1) und c2) vorangestellt sind, ausgeführt wird.
Polysaccharid von Echinacea angustifolia, erhältlich durch das Verfahren von einem der Ansprüche 3-18.
Polysaccharid nach einem der Ansprüche 1, 2 und 19 zur Verwendung als ein Arzneimittel.
Pharmazeutische und nutrazeutische Zusammensetzungen und Nahrungsergänzungen, die das Polysaccharid nach einem der Ansprüche 1, 2 und 19 enthalten.