DE60220188T2

DE60220188T2 - Hemmer des phosphattransports

Info

Publication number: DE60220188T2
Application number: DE60220188T
Authority: DE
Inventors: Thomas H. Watertown JOZEFIAK; Cecilia M. Marlborough BASTOS; Andrew T. Canton PAPOULIS; Stephen Randall Arlington Holmes-Farley
Original assignee: Genzyme Corp
Current assignee: Genzyme Corp
Priority date: 2001-12-26
Filing date: 2002-12-24
Publication date: 2008-01-24
Anticipated expiration: 2022-12-25
Also published as: WO2003057225A3; EP1815860B1; US7119120B2; ATE464905T1; EP1815860A2; JP2005514413A; DE60220188D1; WO2003057225A2; JP2010132674A; US20070021509A1; ATE362360T1; US20040019113A1; JP4610900B2; EP1815860A3; EP1465638A2; EP1465638B1; DE60236117D1; AU2002367396A1

Description

HINTERGRUND DER ERFINDUNG
Personen mit inadäquater Nierenfunktion, Hypoparathyroidismus oder bestimmten anderen medizinischen Zuständen weisen häufig Hyperphosphatämie oder erhöhte Serumphosphatspiegel (über 6 mg/dl) auf. Hyperphosphatämie führt, insbesondere wenn sie über längere Zeiträume besteht, zu schweren Anomalien im Hinblick auf den Calcium- und Phosphorstoffwechsel, die sich häufig durch Hyperparathyroidismus, eine Knochenerkrankung und Verkalkung in Gelenken, Lunge, Augen und im Gefäßsystem manifestieren. Bei Patienten, die Niereninsuffizienz zeigen, wird die Erhöhung von Serumphosphor innerhalb des normalen Bereichs mit der Progression von Nierenversagen und erhöhtem Risiko für kardiovaskuläre Ereignisse in Verbindung gebracht. Die Progression einer Nierenerkrankung kann durch Verringerung der Phosphatretention verlangsamt werden. Daher ist für Patienten mit Nierenversagen, die hyperphosphatämisch sind, und für Patienten mit einer chronischen Nierenerkrankung, deren Serumphosphat innerhalb des normalen Bereichs liegt oder nur leicht erhöht ist, eine Therapie zur Verringerung der Phosphatretention vorteilhaft.
Bei Patienten, die Hyperphosphatämie zeigen, werden in weitem Umfang Calciumsalze zur Bindung von intestinalem Phosphat und Verhinderung von dessen Absorption verwendet. Verschiedene Arten von Calciumsalzen, die Calciumcarbonat, -acetat, -citrat, -alginat und Ketosäuresalze umfassen, wurden zur Phosphatbindung verwendet. Das Hauptproblem bei all diesen Therapeutika ist die Hypercalcämie, die sich häufig durch die Absorption von hohen Mengen von eingenommenem Calcium ergibt. Hypercalcämie verursacht schwere Nebenwirkungen, wie Herzarrhythmien, Nierenversagen und Haut- und Eingeweideverkalkung. Eine häufige Überwachung der Serumcalciumspiegel ist während einer Therapie mit Phosphatbindemitteln auf Calciumbasis erforderlich. Andere calcium- und aluminiumfreie Phosphatbindemittel weisen Nachteile auf, die die Menge und Häufigkeit einer Dosierung, die erforderlich sind, um therapeutisch wirksam zu sein, umfassen.
Ein alternativer Ansatz zur Verhinderung einer Phosphatabsorption aus dem Darm bei Patienten mit erhöhten Phosphatserumspiegeln erfolgt über die Hemmung des Darmtransportsystems, das die Phosphataufnahme im Darm vermittelt. Es ist klar, dass die Phosphatabsorption im oberen Darm zumindest teilweise durch einen trägervermittelten Mechanismus, der die Absorption von Phosphat an die von Natrium in energieabhängiger Weise koppelt, vermittelt wird. Die Hemmung des Transports von intestinalem Phosphat verringert Serumphosphatspiegel. Dies wäre besonders vorteilhaft bei Patienten, die für Hyperphosphatämie infolge einer Niereninsuffizienz empfänglich sind, oder bei Patienten, die eine Erkrankung aufweisen, die durch Hemmung der Aufnahme von Phosphat aus dem Darm behandelbar ist. Die Hemmung der Phosphatabsorption aus dem Harn durch die Nieren wäre auch zur Behandlung von chronischem Nierenversagen vorteilhaft. Ferner kann eine Hemmung des Phosphattransports die Progression von Nierenversagen verlangsamen und das Risiko kardiovaskulärer Ereignisse verringern.
Die WO 01/05398 , WO 01/82924 und WO 01/87294 offenbaren alle Phosphattransportinhibitoren.
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
Es wurde nun ermittelt, dass bestimmte Bisarylverbindungen und andere biscyclische Verbindungen wirksame Inhibitoren von Phosphattransportproteinen sind. Beispielsweise hemmen viele Bisphenylsulfonamide, die in den Tabellen 1 und 2 angegeben sind, den Phosphattransport mit einem IC₅₀-Wert von unter 50 μM oder einer prozentualen Hemmung von größer als 80 % bei 100 μM in einem In-vitro-Assay. Ferner zeigt Tabelle 3 in Beispiel 25, dass Bisphenylsulfonamide den Phosphattransport mit einem IC₅₀-Wert von 40 μM oder darunter in einem In-vitro-Assay hemmen. Ein Ex-vivo-Assay mit den gleichen Verbindungen, dessen Ergebnisse ebenfalls in Tabelle 3 angegeben sind, zeigte ferner, dass sie zur Hemmung der Phosphataufnahme durch den Darm wirksam waren. Auf der Grundlage dieser Entdeckung können die hierin offenbarten Verbindungen bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung eines Subjekts mit einer chronischen Nierenerkrankung, einer Erkrankung, die mit Störungen des Phosphatstoffwechsels in Verbindung steht, oder einer Erkrankung, die durch eine beeinträchtigte Phosphattransportfunktion vermittelt wird, verwendet werden.
In einem Aspekt betrifft die Erfindung die Verwendung einer Verbindung der Strukturformel (II)
worin die Ringe A, B und C optional substituiert sind, bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Hyperphosphatämie, chronischem Nierenversagen, Hypoparathyroidismus, urämischer Knochenerkrankung, renaler Knochenerkrankung, Weichteilverkalkung, kardiovaskulären Ereignissen oder Osteoporose.
Die Erfindung ist auch auf neue pharmazeutische Zusammensetzungen gerichtet, die Verbindungen der im folgenden angegebenen Strukturformel umfassen:
worin R₃₀ für eine substituierte Alkoxygruppe, vorzugsweise eine Halogenalkyl- oder Halogenalkoxygruppe, wie Trifluormethyl oder Trifluromethoxy, steht, die Ringe A und C optional substituiert sind und der Ring B optional einen oder mehrere andere Substituenten als R₃₀ umfasst. Pharmazeutische Zusammensetzungen dieser Verbindungen, die einen Träger oder ein Verdünnungsmittel umfassen, und Verfahren zur Verwendung derselben zur Phosphattransporthemmung werden ebenfalls in der vorliegenden Erfindung umfasst.
Eine weitere Ausführungsform der vorliegenden Erfindung umfasst eine pharmazeutische Zusammensetzung, die eine oder mehrere der hierin offenbarten Verbindungen, die als Phosphattransportinhibitoren identifiziert wurden, und einen pharmazeutisch akzeptablen Träger, ein pharmazeutisch akzeptables Verdünnungsmittel oder Streckmittel umfasst.
Eine weitere Ausführungsform der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung einer Verbindung der Strukturformel (II) in Kombination mit einer pharmazeutisch akzeptablen Verbindung, die Phosphat bindet (ein "Phosphatmaskierungsmittel"). Das pharmazeutisch akzeptable Phosphatbindemittel kann ein Calcium, Aluminium oder Lanthan enthaltendes Phosphatbindemittel oder ein phosphatbindendes Polymer, bei spielsweise diejenigen der Offenbarung in US-Patent 5 496 545 , 5 667 775 und 6 083 495 , deren Inhalt hierin durch Bezugnahme in dessen Gesamtheit aufgenommen ist, sein. Vorzugsweise ist das phosphatbindende Polymer ein Polyallylamin.
Die hierin offenbarten Verbindungen sind wirksame Inhibitoren des Phosphattransports und daher zur Behandlung von Hyperphosphatämie, chronischem Nierenversagen, Erkrankungen, die mit Störungen des Phosphatstoffwechsels und beeinträchtigter Phosphattransportfunktion in Verbindung stehen, verwendbar. Die vorteilhaften Aspekte gegenüber chronischem Nierenversagen, Störungen des Phosphatstoffwechsels oder beeinträchtigter Phosphattransportfunktion, beispielsweise Hyperparathyroidismus, urämische Knochenerkrankung, renale Knochenerkrankung, Weichteilverkalkung (beispielsweise kardiovaskuläre Verkalkung), kardiovaskuläre Ereignisse und Osteoporose, können durch entweder Wirkung auf die Darmtransporter oder auf Transporter in anderen Geweben, beispielsweise die in Knochen, Niere oder Gefäßsystem vorhandenen, vermittelt werden.
DETAILLIERTE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
Hierin werden Verbindungen eines kleinen Moleküls, die Inhibitoren des Phosphattransports sind, offenbart. Diese Verbindungen eines kleinen Moleküls werden vorzugsweise zur Hemmung (d.h. vollständigen oder teilweisen Verringerung oder Verhinderung) des Phosphattransports im Gastrointestinaltrakt verwendet und sind daher bei der Behandlung von Zuständen und Erkrankungen, die durch erhöhte Phosphatspiegel gekennzeichnet sind, beispielsweise Hyperphosphatämie, Nierenversagen und Hypoparathyroidismus, verwendbar. Es wird angenommen, dass viele der Inhibitoren eines kleinen Moleküls durch den Gastrointestinaltrakt absorbiert werden und daher systemisch verfügbar sind. Infolgedessen können sie den Phosphattransport in anderen Organen, wie den Nieren, hemmen und in vorteilhafter Weise zur Behandlung von chronischem Nierenversagen verwendet werden.
In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden Phosphattransportinhibitoren der Strukturformel (II) durch die Strukturformel
worin R₉ für Wasserstoff oder eine elektronenziehende Gruppe steht und der Ring A optional mit einem oder mehreren anderen Substituenten als R₉ substituiert ist, dargestellt. Vorzugsweise steht R₉ für Wasserstoff oder ein Halogen.
Noch günstiger wird eine Verbindung der Strukturformel (II) durch die im folgenden angegebene Strukturformel dargestellt:
worin R₁₀ für Wasserstoff, ein Halogen, eine substituierte Alkylgruppe, eine Alkoxygruppe, eine substituierte Alkoxygruppe oder -NO₂ steht; der Ring B optional mit einem oder mehreren anderen Substituenten als R₁₀ substituiert ist; der Ring A optional mit einem oder mehreren anderen Substituenten als R₉ substituiert ist und der Ring C optional substituiert ist. Vorzugsweise steht R₁₀ für Wasserstoff, ein Halogen, eine Alkoxygruppe, eine substituierte Alkoxygruppe oder -NO₂. Noch besser steht R₁₀ für ein Halogen oder eine substituierte Alkoxygruppe, wie eine halogensubstituierte Alkoxygruppe. Eine besonders bevorzugte substituierte Alkoxygruppe ist eine fluorsubstituierte oder perfluorsubstituierte Gruppe, wie eine Trifluormethoxygruppe.
Eine noch günstigere Verbindung der Strukturformel (II) wird durch die im folgenden angegebene Strukturformel dargestellt:
worin R₁₁ für Wasserstoff, ein Halogen, eine Alkoxygruppe, eine substituierte Alkoxygruppe oder -NO₂ steht und der Ring C optional wie oben substituiert ist. Typische Substituenten für den Ring C umfassen Halogene, Hydroxylgruppen, substituierte oder unsubstituierte Alkylgruppen und substituierte oder unsubstituierte Alkoxygruppen. Vorzugsweise ist der Ring C mit einem Halogen (beispielsweise Brom, Fluor), einer Hydroxylgruppe oder einer substituierten oder unsubstituierten Alkoxygruppe (beispielsweise Methoxy, Trifluormethoxy) substituiert. Mindestens ein Substituent des Rings C ist typischerweise ortho oder para zur Amidgruppe, vorzugsweise ortho. Der Ring C weist typischer weise einen oder zwei Substituenten auf, die häufig ortho und para zur Amidgruppe stehen.
Bevorzugte Verbindungen der Strukturformel (VI) werden durch die im folgenden angegebene Strukturformel dargestellt:
worin die Ringe A und C optional substituiert sind und der Ring B optional einen oder mehrere andere Substituenten als R₃₀ umfasst. Noch besser wird die Verbindung durch die Strukturformel:
worin R₃₁ für ein Halogen steht; der Ring C optional substituiert ist und die Ringe A und B optional einen oder mehrere andere Substituenten als R₃₀ und R₃₁ umfassen, dargestellt wird. Noch günstiger wird die Verbindung durch die im folgenden angegebene Strukturformel:
worin der Ring C optional substituiert ist und die Ringe A und B optional einen oder mehrere andere Substituenten als R₃₀ und R₃₁ umfassen, dargestellt. Die Ringe A und B weisen typischerweise keine anderen Substituenten als R₃₀ und R₃₁ auf. Noch günstiger ist der Ring A mit R₃₁ monosubstituiert und der Ring B mit R₃₀ monosubstituiert oder mit R₃₀ und einer Nitrogruppe ortho zur Sulfonamideinheit disubstituiert. Der Ring C ist typischerweise mit einem Halogen (beispielsweise Brom, Fluor), einer Hydroxylgruppe oder einer substituierten oder unsubstituierten Alkoxygruppe (beispielsweise Methoxy, Trifluormethoxy) substituiert. Mindestens ein Substituent des Rings C ist typischerweise ortho oder para zur Amidgruppe, vorzugsweise ortho. Der Ring C weist typischerweise einen oder zwei Substituenten auf, die häufig ortho und para zur Amidgruppe sind.
Von der vorliegenden Erfindung werden auch physiologisch akzeptable Salze der hierin beschriebenen Verbindungen umfasst. Hierin offenbarte Verbindungen, die eine ausreichend saure, ausreichend basische funktionelle Gruppe oder beide besitzen, können mit einer beliebigen einer Zahl von organischen oder anorganischen Basen und anorganischen und organischen Säuren unter Bildung eines Salzes reagieren.
Salze von Verbindungen, die eine Amingruppe oder andere basische Gruppe enthalten, können beispielsweise durch Umsetzung dieser Verbindungen mit einer geeigneten organi schen oder anorganischen Säure erhalten werden. Salze von Verbindungen, die eine Carbonsäure oder andere saure funktionelle Gruppe enthalten, können durch Umsetzung derselben mit einer geeigneten Base hergestellt werden.
Baseadditionssalze umfassen diejenigen, die von anorganischen Basen, wie Ammonium- oder Alkali- oder Erdalkalimetallhydroxiden, -carbonaten, -bicarbonaten und dgl. abgeleitet sind. Derartige Basen, die bei der Herstellung der Salze dieser Erfindung verwendbar sind, umfassen daher Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid, Ammoniumhydroxid, Kaliumcarbonat und dgl.
Säuren, die üblicherweise zur Bildung von Säureadditionssalzen von Verbindungen mit basischen Gruppen verwendet werden, sind anorganische Säuren, wie Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Iodwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure und dgl., und organische Säuren, wie p-Toluolsulfonsäure, Methansulfonsäure, Oxalsäure, p-Bromphenylsulfonsäure, Kohlensäure, Bernsteinsäure, Citronensäure, Benzoesäure, Essigsäure und dgl. Beispiele für derartige Salze umfassen das Sulfat, Pyrosulfat, Bisulfat, Sulfat, Bisulfit, Phosphat, Monohydrogenphosphat, Dihydrogenphosphat, Metaphosphat, Pyrophosphat, Chlorid, Bromid, Iodid, Acetat, Propionat, Decanoat, Caprylat, Acrylat, Formiat, Isobutyrat, Caproat, Heptanoat, Propiolat, Oxalat, Malonat, Succinat, Suberat, Sebacat, Fumarat, Maleat, Butin-1,4-disäuresalz, Hexen-1,6-disäuresalz, Benzoat, Chlorbenzoat, Methylbenzoat, Dinitrobenzoat, Hydroxybenzoat, Methoxybenzoat, Phthalat, Sulfonat, Xylolsulfonat, Phenylacetat, Phenylpropionat, Phenylbutyrat, Citrat, Lactat, gamma-Hydroxybutyrat, Glykolat, Tartrat, Methansulfonat, Propansulfonat, Naphthalin-1-sulfonat, Naphthalin-2-sulfonat, Mandelat und dgl.
Die hierin verwendete "Niederalkylgruppe" ist ein gesättigter geradkettiger oder verzweigter Kohlenwasserstoff. Typischerweise weisen Niederalkylgruppen ein bis acht Kohlenstoffe auf. Vorzugsweise weisen Niederalkylgruppen ein bis sechs Kohlenstoffatome auf.
Die hierin verwendete "Heteroalkylgruppe" ist eine Niederalkylgruppe, in der mindestens eine Methylengruppe durch ein Heteroatom, wie Stickstoff, Sauerstoff oder Schwefel, ersetzt ist.
Die hierin verwendete "Cycloalkylgruppe" ist ein nichtaromatisches carbocyclisches Ringsystem, das 3 bis 10 Atome aufweist. Eine Cycloalkylgruppe kann optional an einen carbocyclischen nichtaromatischen Ring, carbocyclischen aromatischen Ring, heterocyclischen aromatischen Ring, nichtaromatischen heterocyclischen Ring oder einen anderen nichtaromatischen carbocyclischen Ring kondensiert sein. Beispiele für eine Cycloalkylgruppe umfassen Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyclopentyl, Cyclohexyl, Cycloheptyl, Cyclooctyl, Cyclononyl, Cyclodecyl, 1,2,3,4-Tetrahydronaphthyl und 1,2,3-Tetrahydroindanyl.
Die hierin verwendete "Heterocycloalkylgruppe" oder "nichtaromatische heterocyclische Gruppe" ist ein nichtaromatisches Ringsystem, das 3 bis 10 Atome aufweist und mindestens ein Heteratom, wie Stickstoff, Sauerstoff oder Schwefel, umfasst. Eine Heterocycloalkylgruppe ist optional an einen carbocyclischen nichtaromatischen Ring, carbocyclischen aromatischen Ring, heterocyclischen aromatischen Ring oder einen anderen nichtaromatischen heterocyclischen Ring kondensiert. Beispiele für Heterocycloalkylgruppen umfassen Piperazinyl, Piperidinyl, Homopiperazinyl, Chinuclidinyl, Azetidinyl, Morpholinyl, Thiomorpholinyl, Thiazolidinyl, 1,2,3,4-Tetrahydrochinolinyl, 1,2,3-Tetrahydroindolyl, In dolyl, Furanyl oder Imidazolyl.
Der hierin verwendete Ausdruck "Arylgruppe" umfasst sowohl carbocyclische als auch heterocyclische aromatische Ringsysteme. Eine Arylgruppe ist optional an einen carbocyclischen nichtaromatischen Ring, einen heterocyclischen nichtaromatischen Ring, einen heterocyclischen aromatischen Ring oder einen anderen carbocyclischen aromatischen Ring kondensiert. Ein carbocyclisches aromatisches System besteht nur aus Kohlenstoffringatomen, vorzugsweise bis zu zehn.
Beispiele für carbocyclische Arylgruppen umfassen Phenyl, Naphthyl und 5,6,7,8-Tetrahydronaphthyl oder 5,6,7-Tetrahydroindanyl.
Die hierin verwendete "Heteroarylgruppe" oder "aromatische heterocyclische Gruppe" ist eine Arylgruppe, die 3 bis 10 Ringatome aufweist, die einen oder mehrere Ringheteroatome, wie Stickstoff, Sauerstoff und Schwefel, umfassen. Eine Heteroarylgruppe kann monocyclisch sein. Alternativ ist eine monocyclische Heteroarylgruppe an eine oder mehrere andere monocyclische Heteroarylgruppen oder monocyclische carbocyclische Arylgruppen kondensiert. Vorzugsweise weist eine Heteroarylgruppe 1 bis 3 Heteroatome auf. Eine Heteroarylgruppe ist optional an einen carbocyclischen aromatischen Ring, carbocyclischen nichtaromatischen Ring oder einen anderen Heteroarylring kondensiert. Beispiele für eine Heteroarylgruppe umfassen Thienyl, Pyridyl, Pyrazolyl, Isoxazolyl, Thiadiazolyl, Oxadiazolyl, Indazolyl, Furyl, Pyrrolyl, Imdiazolyl, Pyrazolyl, Triazolyl, Pyrimidinyl, Pyridazinyl, Pyrazinyl, Thiaolyl, Isoxazolyl, Isothiazolyl, Tetrazolyl, Oxazolyl, Oxadiazolyl, Chinolinyl, Carbazolyl, Benzocarbazolyl, Benzotriazolyl, Benzimidazol, Benzothiophen, Benzofuran oder Indolyl.
Die hierin verwendete "Aralkylgruppe" ist eine Arylgruppe, die durch eine Alkylgruppe mit einem bis etwa sechs Kohlenstoffatomen an eine Verbindung gebunden ist.
Die hierin verwendete "Heteroaralkylgruppe" ist eine Heteroarylgruppe, die durch eine Alkylgruppe mit einem bis etwa sechs Kohlenstoffatomen an eine Verbindung gebunden ist.
Das hierin verwendete "Halogen" umfasst Fluor-, Chlor-, Brom- und Iodatome.
Die hierin verwendete "Olefingruppe" ist eine Gruppe, die eine Doppelbindung enthält. Die Doppelbindung kann ein E- oder Z-Isomer sein. Vorzugsweise ist die Doppelbindung ein E-Isomer.
Die hierin verwendete "Alkylengruppe" wird durch -(CH₂)_n- dargestellt. n ist eine ganze Zahl von 1–10, vorzugsweise 1–4.
Die hierin verwendete "Heteroatome enthaltende funktionelle Gruppe" ist eine funktionelle Gruppe, die ein oder mehrere Heteroatome, wie Stickstoff, Sauerstoff oder Schwefel, enthält. Beispiele umfassen -NR₁-, -NR₁R₂-, -O-, -S-, -C(O)-, -C(O)O-, -OC(O)-, -P(O)(OH)-, -CR₁=N-, -N=CR₁-, -S(O)₂NR₁-, -NR₁S(O)₂-, -S(O)₂-, -S(O)₂CR₁R₂-, -CR₁R₂S(O)₂-, -S(O)₂NR₁S(O)₂-, -NR₁C(O)-, -C(O)NR₁-, -C(O)NR₁C(O)-, -NR₁C(O)NR₂-, -NR₁C(S)NR₂- oder -NR₁C(NR₃)NR₂-. R₁ und R₂ sind wie oben definiert.
Zwei Ringe sind "kondensiert", wenn sie zwei benachbarte Ringatome gemeinsam haben.
Geeignete Substituenten an einer substituierten Niederalkylgruppe, substituierten Heteroalkylgruppe, substituierten Cycloalkylgruppe, substituierten Heterocycloalkylgruppe, substituierten Arylgruppe, substituierten Heteroarylgruppe, substituierten Aralkylgruppe, substituierten Heteroaralkylgruppe, substituierten Alkoxygruppe oder substituierten Aryloxygruppe umfassen beispielsweise einen Wasserstoff, ein Halogen, eine elektronenziehende Gruppe, eine Hydroxygruppe, eine Alkoxygruppe, eine Niederalkylgruppe, eine Cycloalkylgruppe, eine Heterocycloalkylgruppe, eine Arylgruppe, eine Heteroarylgruppe, eine Aryloxygruppe, eine Aralkylgruppe, eine Heteroaralkylgruppe, -C(O)NR₄R₅, -C(O)OR₆, -P(O)(OR₆)₂ _, -NR₄R₅, -NCR(PO₃)₂, -NO₂, -SO₃, -S(O)₂R_6, -S(O)R₇, -SR₄, -SR₇=NR₄, -NR₄SO₂R₅, -N=N-R₄, -CN, -N₃ oder -N=C=S. R₄, R₅, R₆ und R₇ sind wie oben definiert. Eine substituierte Niederalkylgruppe, substituierte Heteroalkylgruppe, substituierte Cycloalkylgruppe, substituierte Heterocycloalkylgruppe, substituierte Arylgruppe, substituierte Heteroarylgruppe, substituierte Aralkylgruppe, substituierte Heteroaralkylgruppe, substituierte Alkoxygruppe oder substituierte Aryloxygruppe kann mehr als einen Substituenten aufweisen.
Der hier verwendete Ausdruck "elektronenziehende Gruppe" weist die dem Ausdruck einschlägig zugewiesene Bedeutung auf. Insbesondere ist eine elektronenziehende Gruppe eine funktionelle Gruppe, die Elektronendichte von der Einheit, an die sie gebunden ist, abzieht. Beispielsweise führt eine elektronenziehende Gruppe zu einem Ring, der eine geringere Elektronendichte, wenn die Gruppe vorhanden ist, als wenn sie nicht vorhanden ist, aufweist. Elektronenziehende Gruppen können Elektronendichte durch induktive oder Resonanzwirkungen abziehen. Elektronenziehende Gruppen weisen einen Hammet-sigma-Wert von größer als null auf (siehe beispielsweise C. Hansch, A. Leo und D. Hoeckman, "Exploring QSAR Hydrophobic, Electronic and Steric Constants", American Chemical Society (1995), S. 217-32). Beispiele für elektro nenziehende Gruppen umfassen Halogene, Alkylimine, Alkylsulfonyl, Carboxamido, Carbonsäurealkylester, -CH=NH, -CN und -NO₂.
In den hierin angegebenen Strukturformeln wird die Einfach- oder Doppelbindung, durch die eine chemische Gruppe oder Einheit an den Rest des Moleküls oder der Verbindung gebunden ist, durch das folgende Symbol angegeben:
In den hierin angegebenen Strukturformeln wird eine Bindung, die optional eine Einfach- oder Doppelbindung ist, durch das folgende Symbol angegeben:
Es ist selbstverständlich, dass die hierin angegebenen Strukturen von links nach rechts zu lesen sind. Beispielsweise ist, wenn X für -S(O)₂NH- steht, Schwefel der Punkt der Bindung an W und Stickstoff der Punkt der Bindung an Y.
Ein "Subjekt" ist vorzugsweise ein Mensch, doch kann es auch ein Tier, das eine Behandlung mit einem Phosphattransportinhibitor benötigt, beispielsweise Begleitertiere (beispielsweise Hunde, Katzen und dgl.), Hoftiere (beispielsweise Kühe, Schweine, Pferde und dgl.) und Labortiere (beispielsweise Ratten, Mäuse, Meerschweinchen und dgl.), sein.
Subjekte "mit Bedarf an einer Behandlung" mit einer Verbindung der vorliegenden Erfindung oder Subjekte "mit Bedarf an einer Hemmung des Phosphattransports" umfassen Subjekte mit Erkrankungen und/oder Zuständen, die durch Phosphat transportinhibitoren unter Erreichen eines vorteilhaften therapeutischen und/oder prophylaktischen Ergebnisses behandelt werden können. Ein vorteilhaftes Ergebnis umfasst eine Verringerung der Schwere von Symptomen oder eine Verzögerung des Einsetzens von Symptomen, längere Lebensdauer und/oder eine schnellere oder vollständigere Aufhebung der Erkrankung oder des Zustands. Beispielsweise weist ein Subjekt mit Bedarf an einer Behandlung typischerweise erhöhte Serumphosphatspiegel, Hyperphosphatämie infolge von beispielsweise beeinträchtigter Nierenfunktion oder Hypoparathyroidismus auf. Niedrigere Serumphosphatspiegel können beispielsweise durch Hemmung des Phosphattransports im Darm erreicht werden. Ein Subjekt "mit Bedarf an einer Behandlung" umfasst ferner ein Subjekt mit chronischem Nierenversagen, das Serumphosphatspiegel innerhalb des normalen Bereichs aufweisen kann. Eine Hemmung des Phosphattransports im Darm oder den Nieren kann die Rate der renalen Beeinträchtigung bei diesen Subjekten verlangsamen und das Risiko kardiovaskulärer Ereignisse verringern. Weitere Beispiele für Subjekte mit Bedarf an Phosphattransportinhibitoren umfassen Patienten mit einer Erkrankung, die mit Störungen des Phosphatstoffwechsels in Verbindung steht, oder einer Erkrankung, die im Hinblick auf eine beeinträchtigte Phosphattransportfunktion zu behandeln ist. Beispiele für Erkrankungen und/oder Störungen dieser Art umfassen Weichteilverkalkung, beispielsweise kardiovaskuläre Verkalkung, Hyperparathyroidismus, urämische Knochenerkrankung, renale Knochenerkrankung und Osteoporose.
Eine "wirksame Menge" einer hierin offenbarten Verbindung ist eine Menge, die zu einem vorteilhaften klinischen Ergebnis des mit der Verbindung zu behandelnden Zustands im Vergleich mit den Nichtvorhandensein einer Behandlung führt. Die zu verabreichende Menge einer den Phosphattransport hemmenden Verbindung hängt von dem Grad, der Schwere und der Art der Erkrankung oder des Zustands, dem Grad der gewünschten Therapie und den Freisetzungseigenschaften der pharmazeutischen Formulierung ab. Sie hängt auch von der Gesundheit, Größe, dem Gewicht, Alter, Geschlecht und der Arzneistofftoleranz des Subjekts ab. Typischerweise wird die Verbindung über einen Zeitraum, der ausreicht, um die gewünschte therapeutische Wirkung zu erhalten, verabreicht. Typischerweise werden zwischen etwa 5 g pro Tag und etwa 0,001 g pro Tag der Verbindung (vorzugsweise zwischen etwa 1 g pro Tag und etwa 0,001 g pro Tag) dem Subjekt mit Bedarf an einer Behandlung verabreicht.
Die Verbindung kann auf jedem geeigneten Weg verabreicht werden. Die Verbindung wird vorzugsweise oral (beispielsweise als Nahrung) in Kapseln, Suspensionen, Tabletten, Pillen, Dragees, Flüssigkeiten, Gelen, Sirupen, Aufschlämmungen und dgl. verabreicht. Verfahren zur Verkapselung von Zusammensetzungen (beispielsweise in einem Überzug von harter Gelatine oder Cyclodextran) sind einschlägig bekannt (Baker et al., "Controlled Release of Biological Active Agents", John Wiley and Sons, 1986). Die Verbindungen können dem Subjekt in Verbindung mit einem akzeptablen pharmazeutischen Träger als Teil einer pharmazeutischen Zusammensetzung verabreicht werden. Die Formulierung der pharmazeutischen Zusammensetzung variiert entsprechend dem gewählten Verabreichungsweg. Geeignete pharmazeutische Träger können inerte Bestandteile, die mit der Verbindung keine Interaktion eingehen, enthalten. Die Träger sollten biologisch kompatibel, d.h. nichttoxisch, nicht-inflammatorisch, nicht-immunogen und frei von anderen unerwünschten Reaktionen an der Verabreichungsstelle, sein. Beispiele für pharmazeutisch akzeptable Träger umfassen beispielsweise Kochsalzlösung, im Handel erhältliche inerte Gele oder Flüssigkeiten, die mit Albumin ergänzt sind, Methylcellulose oder eine Kollagenmatrix. Pharmazeutische Standardformulierungs techniken, beispielsweise diejenigen gemäß der Beschreibung in Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA, können verwendet werden.
Pharmazeutische Zubereitungen zur oralen Verwendung können durch Kombination einer Verbindung der vorliegenden Erfindung mit einem festen Streckmittel, optional Mahlen eines gebildeten Gemischs und Verarbeiten des Gemischs von Granulatkörnchen nach Zugabe geeigneter Hilfsstoffe, falls gewünscht, zur Gewinnung von Tabletten oder Drageekernen erhalten werden. Geeignete Streckmittel sind insbesondere Füllstoffe, wie Zucker, die Lactose, Saccharose, Mannit oder Sorbit umfassen; Cellulosezubereitungen, beispielsweise Maisstärke, Weizenstärke, Reisstärke, Kartoffelstärke, Gelatine, Tragantgummi, Methylcellulose, Hydroxypropylmethylcellulose, Natriumcarboxymethylcellulose und/oder Polyvinylpyrrolidon (PVP). Falls gewünscht, können Desintegrationsmittel, beispielsweise vernetztes Polyvinylpyrrolidon, Agaragar oder Alginsäure oder ein Salz derselben, wie Natriumalginat, zugesetzt werden.
Drageekerne werden mit geeigneten Überzügen bereitgestellt. Für diesen Zweck können konzentrierte Zuckerlösungen verwendet werden, die optional Gummiarabicum, Talkum, Polyvinylpyrrolidon, Carbopolgel, Polyethylenglykol und/oder Titandioxid, Lacklösungen und geeignete organische Lösemittel oder Lösemittelgemische enthalten können. Farbstoffe oder Pigmente können den Tabletten oder Drageeüberzügen zur Identifizierung oder Kennzeichnung verschiedener Kombinationen von Dosen der aktiven Verbindung zugesetzt werden.
Pharmazeutische Zubreitungen, die oral verwendet werden können, umfassen durchdrückbare Kapseln, die aus einem geeigneten Material, wie Gelatine, hergestellt sind, sowie weiche versiegelte Kapseln, die aus einem geeigneten Mate rial, wie Gelatine, und einem Weichmacher, wie Glycerin oder Sorbit, hergestellt sind. Die durchdrückbaren Kapseln können die Wirkstoffe im Gemisch mit einem Füllstoff, wie Lactose, Bindemitteln, wie Stärkearten, und/oder Gleitmitteln, wie Talkum oder Magnesiumstearat, und optional Stabilisierungsmitteln enthalten. In weichen Kapseln können die aktiven Verbindungen in geeigneten Flüssigkeiten, wie Fettölen, flüssigem Paraffin oder flüssigen Polyethylenglykolen, gelöst oder suspendiert sein. Ferner können Stabilisierungsmittel zugesetzt werden. Alle Formulierungen zur oralen Verabreichung sollten in für eine derartige Verabreichung geeigneten Dosierungen sein.
Selbstverständlich können bestimmte Verbindungen der Erfindung als verschiedene Stereoisomere (beispielsweise Diastereomere und Enantiomere) erhalten werden und selbstverständlich umfasst die Erfindung alle Isomerenformen und racemischen Gemische der offenbarten Verbindungen und ein Verfahren zur Behandlung eines Subjekts mit sowohl reinen Isomeren als auch Gemischen derselben, die racemische Gemische umfassen. Stereoisomere können unter Verwendung jedes geeigneten Verfahrens, wie Chromatographie, getrennt und isoliert werden.
Die Aktivität von Verbindungen der vorliegenden Erfindung kann unter Verwendung geeigneter Assays, beispielsweise dem ³³PO₄ Uptake In Rabbit Intestinal BBMV High Throughput Screening (HTS)-Assay gemäß der Beschreibung in Beispiel 66 und ³³PO₄-Aufnahme in isolierten Kaninchendarmringen gemäß der Beschreibung in Beispiel 91 festgestellt werden. Verbindungen der vorliegenden Erfindung können auch aufgrund von deren Fähigkeit zur Hemmung der Absorption von Phosphat in vivo, beispielsweise im Gastrointestinaltrakt eines Labortiers, identifiziert werden.
Die hierin offenbarten Erfindungen können wie in den Beispielen 1–25 angegeben hergestellt werden. Die Reaktionsschemata werden im folgenden detaillierter beschrieben.
In bestimmten Fällen kann es vorteilhaft sein, ein oder mehrere zusätzliche pharmakologisch aktive Mittel zusammen mit einem Phosphattransportinhibitor gemeinsam zu verabreichen. Beispiele umfassen pharmazeutisch aktive, Calcium, Aluminium oder Lanthan enthaltende Phosphatbindemittel oder pharmazeutisch aktive phosphatbindende Polymere, beispielsweise diejenigen gemäß der Offenbarung in US-Patent 5 496 545 , 5 667 775 und 6 083 495 , deren Inhalt hierdurch in ihrer Gesamtheit als Bezug aufgenommen ist. Vorzugsweise ist das pharmakologisch aktive Mittel ein phosphatbindendes Polymer eines Polyallylamins. Noch besser ist das pharmakologisch aktive Mittel ein Epichlorhydrin-vernetztes Poly(allylaminhydrochlorid)harz, das auch als Sevelamerhydrochlorid oder Sevelamer bezeichnet wird und als RENAGEL^® (GelTex Pharmaceuticals, Inc., Waltham, MA) auf dem Markt ist.
Eine weitere Ausführungsform der vorliegenden Erfindung ist eine der hierin offenbarten Verbindungen. Eine noch weitere Ausführungsform ist eine pharmazeutische Zusammensetzung, die einen pharmazeutisch akzeptablen Träger oder ein pharmazeutisch akzeptables Verdünnungsmittel und eine der hierin offenbarten Verbindungen umfasst.
Die Erfindung wird durch die folgenden Beispiele, die in keinster Weise beschränkend sein sollen, erläutert.
BEISPIELE
Beispiel 1 (Referenzbeispiel). Methyl-5-brom-2-[(4'-trifluormethoxyphenyl)sulfonyl]aminobenzoat
Methyl-2-amino-5-brombenzoat (2,78 g, 0,012 mol) wurde in Pyridin (3 ml) gelöst. Das Gemisch wurde in einem Eisbad unter 5 °C gelöst und 4-Trifluormethoxybenzolsulfonylchlorid (3,5 g, 0,013 mol, 1,1 Äquivalente) wurde langsam zu dem Gemisch gegeben. Das Gemisch wurde auf Raumtemperatur erwärmt und 1 h gerührt. Das Lösemittel wurde entfernt und der erhaltene Feststoff wurde in HCl (1 M, 40 ml) 40 min suspendiert. Das Gemisch wurde filtriert, der Feststoff in Hexan (40 ml) suspendiert und 30 min gerührt. Das Gemisch wurde filtriert und der Feststoff wurde mit Hexan (2 × 20 ml) gewaschen. Der Feststoff wurde in einem Vakuumofen bei 40 °C getrocknet. Ausbeute = 4,63 g (85 % Ausbeute).
Beispiel 2 (Referenzbeispiel). 5-Brom-2-[(4'-trifluormethoxyphenyl)sulfonyl]aminobenzoesäure
Methyl-5-brom-2-[(4'-trifluormethoxyphenyl)sulfonyl]aminobenzoat (0,854 g, 0,019 mmol) wurde in einem Gemisch von Tetrahydrofuran (20 ml)/Wasser (10 ml) gelöst. Eine Lösung von Natriumhydroxid (50 %, 5 ml) wurde zugegeben und das Gemisch wurde 2–3 h auf Rückflusstemperatur erhitzt. Das Tetrahydrofuran wurde durch Rotationsverdampfung entfernt und das Gemisch wurde mit HCl (2 M) angesäuert. Das Gemisch wurde mit Ethylacetat (20 ml) extrahiert. Das organische Lösemittel wurde bis zur Trockne entfernt und dann in Ethylacetat (3 × 15 ml) gelöst und das Lösemittel entfernt. Das Öl wurde in Hexan (20 ml) verrieben, bis sich ein Feststoff bildete. Das Gemisch wurde filtriert und der Feststoff wurde in einem Vakuumofen bei 40 °C getrocknet. Ausbeute = 0,691 g (83 Ausbeute). M/Z von (M-H)^- = 432, ¹H-NMR(DMSO) δ = 7,42-7,48 (1 H), 7,55-7,6 (2 H), 7,74-7,8 (1 H), 7,92-8,0 (3 H), 11,2 (br, 1 H).
Beispiel 3 (Referenzbeispiel). 5-Brom-2-[(4'-trifluormethoxyphenyl)sulfonyl]aminobenzoylchlorid
5-Brom-2-[(4'-trifluormethoxyphenyl)sulfonyl]aminobenzoesäure (3,27 g, 7,4 mmol) wurde in Thionylchlorid (30 ml) suspendiert und das Gemisch wurde 4 h auf Rückflusstemperatur erhitzt. Das Lösemittel wurde bis zur Trockne entfernt und der Rückstand wurde in wasserfreiem Ethylacetat (2 × 20 ml) gelöst und das Lösemittel wurde entfernt. Der Feststoff wurde bei 40 °C in einem Vakuumofen über Nacht getrocknet.
Beispiel 4. 5-Brom-2-[(4'-trifluormethoxyphenyl)sulfonyl]amino-N-(2''-methoxybenzyl)benzamid
5-Brom-2-[(4'-trifluormethoxyphenyl)sulfonyl]aminobenzoylchlorid (5,124 g, 11,6 mmol) wurde in Tetrahydrofuran (100 ml) gelöst und das Gemisch wurde in einem Eisbad unter 5 °C gekühlt. 2-Methoxybenzylamin (1,8 ml, 13,8 mmol, 1,2 Äquivalente) und Triethylamin (1,9 ml, 13,6 mmol, 1,2 Äquivalente) wurden zu dem Gemisch gegeben, wobei die Temperatur unter 10 °C gehalten wurde. Das Gemisch wurde auf Raumtemperatur erwärmt und das Lösemittel wurde bis zur Trockne entfernt. Der Rückstand wurde zwischen HCl (1 M, 50 ml) und Ethylacetat (100 ml) verteilt. Das organische Lösemittel wurde gewonnen und es wurde bis zur Trockne konzentriert. Der erhaltene Feststoff wurde in Ethylacetat (2 × 25 ml) gelöst und das Lösemittel wurde entfernt. Das Gemisch wurde durch Säulenchromatographie unter Verwendung von 20 % Ethylacetat in Hexan gereinigt. Der Feststoff wurde in einem Gemisch von 5 % Ethylacetat in Hexan (90 ml) suspendiert. Das Gemisch wurde zentrifugiert und der Feststoff wurde bei 40 °C über Nacht in einem Vakuumofen getrocknet. Ausbeute = 4,85 g (75 % Ausbeute). M/Z von (M-H)^- = 557, ¹H-NMR (CDCl₃) δ = 3,85 (s, 3 H), 4,5 (sd, 2 H), 6,5-6,6 (1 H), 6,9-7,05 (4 H), 7,3-7,4 (2 H), 7,45 (1 H), 7,5 (1 H), 7,6 (1 H), 7,8 (2 H), 10,8 (br, 1 H).
Beispiel 5. 5-Brom-2-[(4'-trifluormethoxyphenyl)sulfonyl]amino-N-(4''-fluorbenzyl)benzamid
Diese Verbindung wurde unter Verwendung des in Beispiel 4 beschriebenen Verfahrens hergestellt, wobei jedoch 4-Fluorbenzylamin anstelle von 2-Methoxybenzylamin verwendet wurde. M/Z von (M-H)^- = 545, ¹H-NMR (DMSO) δ = 4,4 (sd, 2 H), 7,15-7,23 (2 H), 7,3-7,4 (2 H), 7,4-7,5 (3 H), 7,65-7,7 (1 H), 7,8-7,9 (2 H), 7,9-8,0 (1 H), 9,4 (br, 1 H), 11,5 (br, 1 H).
Beispiel 6. 5-Brom-2-[(4'-chlorphenyl)sulfonyl]amino-N-(4''-fluorbenzyl)benzamid
Diese Verbindung wurde unter Verwendung des in Beispiel 4 beschriebenen Verfahrens unter Verwendung von 4-Fluorbenzylamin anstelle von 2-Methoxybenzylamin und von 5-Brom-2-[(4'-chlorphenyl)sulfonyl]aminobenzoylchlorid anstelle von 5-Brom-2-[(4'-trifluormethoxyphenyl)sulfonyl]aminobenzoylchlorid hergestellt. M/Z von (M-H)^- = 495, ¹H-NMR (DMSO) δ = 4,4 (sd, 2 H), 7,15-7,25 (2 H), 7,3-7,4 (22 H), 7,45-7,5 (1 H), 7,55-7,6 (2 H), 7,65-7,75 (3 H), 7,9-7,95 (2 H), 9,4 (1 H), 11,4 (br, 1 H).
Beispiel 7. 5-Brom-2-[(4'-chlorphenyl)sulfonyl]amino-N-(2''-methoxybenzyl)benzamid
Diese Verbindung wurde unter Verwendung des in Beispiel 4 beschriebenen Verfahrens unter Verwendung von 5-Brom-2-[(4'-chlorphenyl)sulfonyl]aminobenzoylchlorid anstelle von 5-Brom-2-[(4'-trifluormethoxyphenyl)sulfonyl]aminobenzoylchlorid hergestellt. M/Z von (M-H)^- = 507, ¹H-NMR (CDCl₃) δ = 3,85 (s, 3 H), 4,45 (sd, 2 H), 6,45 (br, 1 H), 6,8-7,0 (2 H), 7,15-7,2 (2 H), 7,3-7,5 (3 H), 7,55-7,6 (1 H), 7,6-7,65 (2 H), 10,65 (1 H).
Beispiel 8. 5-Brom-2-[(4'-trifluormethoxyphenyl)sulfonyl]amino-N-(4''-methylbenzyl)benzamid
Diese Verbindung wurde unter Verwendung des in Beispiel 4 beschriebenen Verfahrens unter Verwendung von 4-Methylbenzylamin anstelle von 2-Methoxybenzylamin hergestellt. M/Z von (M-H)^- = 541, ¹H-NMR (DMSO) δ = 2,3 (s, 3 H), 4,35 (sd, 2 H), 7,1-7,2 (4 H), 7,4-7,5 (3 H), 7,65-7,7 (1 H), 7,8-7,85 (2 H), 7,9-8,0 (1 H), 9,4 (1 H), 11,6 (1 H).
Beispiel 9. 5-Brom-2-[(4'-chlorphenyl)sulfonyl]amino-N-(2''-trifluormethoxybenzyl)benzamid
Diese Verbindung wurde unter Verwendung des in Beispiel 4 beschriebenen Verfahrens unter Verwendung von 2-Trifluormethoxybenzylamin anstelle von 2-Methoxybenzylamin und von 5-Brom-2-[(4'-chlorphenyl)sulfonyl]aminobenzoylchlorid anstelle von 5-Brom-2-[(4'-trifluormethoxyphenyl)sulfonyl]aminobenzoylchlorid hergestellt. M/Z von (M-H)^- = 561, ¹H-NMR (DMSO) δ = 4,4 (sd, 2 H), 7,38-7,5 (5 H), 7,55-7,62 (2 H), 7,7-7,8 (3 H), 7,95-8,0 (1 H), 9,4 (br, 1 H), 11,4 (br, 1 H).
Beispiel 10. In-vitro-Test der Hemmung des Phosphattransporters
Das folgende Beispiel gibt die Verfahren an, die zur In-vitro-Messung der Hemmung der Phosphataufnahme durch Kanin chendarm-Bürstensaummembranvesikel (Brush Border Membrane Vesicles, BBMV) erforderlich sind.
PUFFERLÖSUNGSZUBEREITUNG

300 MET	50 ml
300 mM Mannit	2,73 g
5 mM EGTA	117 mg
12 mM Tris-Base	73 mg
pH 7,1 (W/HCl)

60 MET	250 ml
60 mM Mannit	2,73 g
5 mM EGTA	585 mg
12 mM Tris-Base	363 mg
pH 7,1 (W/HCl)

Na-Aufnahmepuffer	50 ml
100 mM NaCl	292 mg
50 mM HEPES	596 mg
100 mM Mannit	911 mg
100 μM KH₂PO₄	50 ml 0,1 M Stammlösung
pH 7,4 (W/NaOH)

Stopp-Puffer	1000 ml
100 mM Mannit	18,22 g
20 mM HEPES-Tris	20 ml insgesamt von 1 M Stammlösungen
20 mM MgSO₄	4,93 g
100 mM Cholin-Cl	13,96 g
5 mM KH₂PO₄	681 mg

280 MH	250 ml
280 mM Mannit	12,75 g
20 mM Hepes	5 ml von 1 M Stammlösung
pH 7,4 (W/KOH)

K-Aufnahmepuffer	50 ml
100 mM KCl	373 mg
50 mM HEPES	596 mg
100 mM Mannit	911 mg
100 mM KH₂PO₄	50 ml 0,1 M Stammlösung
pH 7,4 (W/KOH)

BBMV-ISOLIERUNG
Kaninchendarm-Bürstensaummembranvesikel (BBMV) wurden aus Mucosaabschabmaterial des oberen Dünndarms (Duodenum) von männlichen New Zealand White Rabbits isoliert. Das Abschabmaterial wurde in 2-g-Aliquots in Kryokonservierungsampullen geteilt, in flüssigem Stickstoff eingefroren und bei –80 °C aufbewahrt.
Das im folgenden angegebene Verfahren wurde für jede 2-g-Probe von BBMV-Mucosaabschabmaterial durchgeführt. Puffervolumina und Behältergrößen wurden für die verwendete Zahl der 2-g-Proben entsprechend angepasst. Die Gesamtzubereitung wurde auf Eis durchgeführt, falls nicht anders angegeben.
Mucosaabschabmaterial (2 g pro Röhrchen) wurde in einem Wasserbad von 37 °C 3 min aufgetaut und dann auf Eis gesetzt. Das Abschabmaterial wurde mit insgesamt 7,5 ml von 300 MET suspendiert und in ein 250-ml-Corning-Röhrchen auf Eis überführt. Zu der Suspension wurden 30 ml kaltes (4 °C) entionisiertes Wasser (dH₂O) gegeben. Die Suspension wurde 2 min mit einem Gewebehomogenisator (Polytron) mit hoher Geschwindigkeit homogenisiert. Ein Rührstäbchen und MgCl₂ (81,3 mg) wurden zugegeben. Die Suspension wurde durch Umdrehen des geschlossenen Röhrchens gut gemischt. Die Suspension wurde 40 min auf Eis gerührt, wobei mit dem Rührstäbchen sichergestellt wurde, dass ein guter Wirbel erreicht wird. Die Suspension wurde in ein gekühltes Zentrifugenröhrchen überführt und 15 min mit 4000 × g geschleudert. Der Überstand wurde in ein neues gekühltes Zentrifugenröhrchen überführt und 30 min mit 32 000 × g geschleudert. Der Überstand wurde verworfen und das Pellet wurde mit 34 ml kaltem 60 MET resuspendiert. Die Suspension wurde mit einem Dounce-Homogenisator mit 8 Schlägen homogenisiert. Die Suspension wurde in ein frisches 250-ml-Corning-Röhrchen überführt. Ein Rührstäbchen und 69,1 mg MgCl₂ wurden zugegeben. Die Suspension wurde 10 min auf Eis gut gerührt. Die Suspension wurde in ein gekühltes Zentrifugenröhrchen überführt und 15 min mit 4000 × g geschleudert. Der Überstand wurde in ein neues gekühltes Zentrifugenröhrchen überführt und 30 min mit 32 000 × g geschleudert. Der Überstand wurde verworfen. In diesem Stadium kann die Zubereitung fortgesetzt werden oder dieses Pellet (P4) in flüssigem Stickstoff eingefroren und bei –80 °C aufbewahrt werden. Wenn es benötigt wird, kann dieses Pellet bei Raumtemperatur über 5 min auftauen. Bei Fortsetzung der Zubereitung wurde das Pellet mit 34 ml kaltem 280 MH resuspendiert. Die Suspension wurde in einem Dounce-Homogenisator mit 8 Schlägen homogenisiert. Die Suspension wurde in ein neues gekühltes Zentrifugenröhrchen überführt und 30 min mit 32 000 × g geschleudert. Der Überstand wurde verworfen. Zu dem Pellet wurden 500 μl 280 MH gegeben und das Pellet wurde sehr sorgfältig mit einer Tuberkulinspritze von 1 ml mit einer Nadel Nr. 25 sehr sorgfältig resuspendiert, wobei darauf geachtet wurde, keine Blasen zu erzeugen. Sobald das gesamte Pellet suspendiert war, wurde die Suspension in ein gekühltes 1,5-ml-Mikrozentrifugenröhrchen überführt. Die Suspension wurde durch achtmaliges Aufziehen der Suspension in die Spritze über die Nadel Nr. 25 und erneutes Ausstoßen unter Achten darauf, dass keine Blasen erzeugt werden, gleichmäßig dispergiert. Die Gesamtprotein konzentration wurde durch Durchführen eines Bradford Protein Assay bestimmt. Unter Verwendung dieses Werts wurden die BBMV mit 280 MH derart verdünnt, dass etwa 0,5–2,0 mg/ml erreicht wurden. Die Lösung wurde für Aufnahmeuntersuchungen möglichst bald verwendet.
SCREENING MIT HOHEM DURCHSATZ (High Throughput Screening, HTS) ³³PO₄-AUFNAHME IN KANINCHENDARM-BBMV
Das im folgenden angegebene Experiment wurde unter Verwendung eines 96-Spitzen-Pipettierroboters Beckman Multineck 96-Tip Robotic Pipettor durchgeführt. Das folgende gibt die Präparation an, die zum Screening einer 96-Vertiefungen-Platte von Verbindungen erforderlich ist. Jedoch können mehrere Platten in einem Experiment gescreent werden.
Zu den "Aufnahmepuffern" wurde ³³PO₄ bis zum Erreichen von 200 000 CPM/19 μl gegeben. Die Pufferlösungen wurden bei Raumtemperatur aufbewahrt. Die im folgenden angegebenen Kontrolllösungen wurden hergestellt und in entsprechende Vertiefungen einer 96-Vertiefungen-V-Boden-Platte aus Polypropylen ("Hot Stock Plate") gegeben:

a. Maximale Aktivität (MAX) – Na-Aufnahmepuffer + ³³PO₄ mit 200 000 CPM/19 μl
b. Mittlere Aktivität (MID) – MAX + 100 μM KH₂PO₄, pH 7,4
c. Minimale Aktivität (MIN) – K-Aufnahmepuffer + ³³PO₄ mit 200 000 CPM/19 μl

In die übrigen Vertiefungen, die für eine Verbindung enthaltende Reaktionslösungen verwendet werden, wird MAX-Kontrollpuffer gegeben. Die Hot Stock Plate wurde bei Raumtemperatur aufbewahrt. In jede Vertiefung einer entsprechenden 96-Vertiefungen-Filterplatte wurden etwa 200 μl Stopp-Puffer zur Vorbenetzung der Filter während mindestens 15 min vor dem Assay gegeben. Die "Verbindungsplatte" wurde durch Beladen entsprechender Vertiefungen einer 96-Vertie fungen-V-Boden-Platte aus Polypropylen mit Verbindungslö sungen eingerichtet. Dies kann zum Testen der Hemmung bei einer einzigen "Screening"-Konzentration oder zur Ermitt lung der Wirksamkeit von Verbindungen durch Dosis-Anspre chen-Analyse bei den entsprechenden Konzentrationen dienen. Eine "BBMV-Platte" wurde durch Beladen einer 96-Vertiefungen-V-Boden-Platte aus Polypropylen mit BBMVs mit 0,5–2,0 mg/ml (wie oben beschrieben hergestellt) eingerichtet. Die BBMV-Platte wurde bis unmittelbar vor dem Assay auf Eis gehalten. Die Reaktion wurde durch Ansaugen der heißen Aufnahmepuffer (19 μl) von der Hot Stock Plate und der Verbindungslösungen (2 μl) von der Verbindungsplatte, Dispensieren in eine leere 96-Vertiefungen-V-Boden-Platte (Assayplatte), dann sofortiges Ansaugen der BBMVs (19 μl) von der BBMV-Platte und Dispensieren in die gleiche Assayplatte initiiert. Die Zugabe der BBMVs zur Assayplatte markierte die Reaktionsstartzeit. Nach 15 min wurde die Reaktion durch Zugabe von 200 μl Stopp-Puffer aus einem Vorratsbehälter gequencht. Der Stopp-Puffer wurde durch Vakuum aus den Vertiefungen durch die Filter der vorgetränkten Filterplatte unter Verwendung eines Filterplattenverteilers angesaugt. Die gequenchten Reaktionsgemische wurden angesaugt und unter Vakuum auf die Filterplatte übertragen. Die Filter wurden zweimal mit 200 μl Stopp-Puffer unter Vakuum gewaschen. Die Filterplatte wurde entfernt, getrocknet und der Boden der Filterplatte wurde versiegelt. Zu jeder Vertiefung der Filterplatte wurden 50 μl Szintillationsmittel (Microscint-20) gegeben. Ein oberer Abschluss wurde dann an der Filterplatte angebracht. Die Platte wurde etwa 20 min vor der Ablesung der CPM von ³³P auf einem Szintillationszähler (d.h. Top Count – Packard Instruments) inkubiert. Die prozentuale Hemmung wurde durch Vergleich der CPM-Werte von Verbindung enthaltenden Vertiefungen mit den MAX- und MIN-Kontrollen auf der gleichen Platte unter Verwendung der im folgenden angegebenen Formel 1-((CPM – MIN)/(MAX – MIN))berechnet. IC₅₀-Werte wurden aufgrund einer nichtlinearen Regressionsanalyse in einem entsprechenden Softwarepaket (d.h. Prism GraphPad) berechnet.
Die Ergebnisse unter Verwendung von Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind in den Tabellen 1 und 2 angegeben. Wie ersichtlich ist, hemmen diese Verbindungen den Phosphattransport in Bürstensaummembranvesikeln.
Tabelle 1
Tabelle 2
Beispiel 11 (Referenzbeispiel). Methyl-5-brom-2-(4-trifluormethoxy-benzolsulfonylamino)benzoat
Methyl-2-amino-5-brombenzoat (2,78 g, 0,012 mol) wurde in Pyridin (3 ml) gelöst. Das Gemisch wurde in einem Eisbad unter 5 °C gekühlt und 4-Trifluormethoxybenzolsulfonylchlorid (3,5 g, 0,013 mol, 1,1 Äquivalente) wurde langsam zu dem Gemisch gegeben. Das Gemisch wurde auf Raumtemperatur erwärmt und 1 h gerührt. Das Lösemittel wurde entfernt und der erhaltene Feststoff wurde in HCl (1 M, 40 ml) 30 min suspendiert. Der Feststoff wurde durch Filtration gewonnen und dann in Hexan (40 ml) suspendiert und 30 min gerührt. Das Gemisch wurde filtriert und der Feststoff wurde mit Hexan (2 × 20 ml) gewaschen. Der Feststoff wurde in einem Vakuumofen bei 40 °C getrocknet. Ausbeute = 4,63 g (85 % Ausbeute).
Beispiel 12 (Referenzbeispiel). 5-Brom-2-(4-trifluormethoxy-benzolsulfonylamino)benzoesäure
Methyl-5-brom-2-(4-trifluormethoxy-benzolsulfonylamino)benzoat (0,854 g, 0,019 mmol) wurde in einem Gemisch von Tetrahydrofuran (20 ml)/Wasser (10 ml) gelöst. Eine Lösung von Natriumhydroxid (50 %, 5 ml) wurde zugegeben und das Gemisch wurde 2–3 h auf Rückflusstemperatur erhitzt. Das Tetrahydrofuran wurde durch Rotationsverdampfung entfernt und das Gemisch wurde mit wässrigem HCl (2 M) angesäuert. Das Gemisch wurde mit Ethylacetat (20 ml) extrahiert. Das organische Lösemittel wurde bis zur Trockne entfernt. Der Rückstand wurde durch Lösen in Ethylacetat und anschließendes Verdampfen (3 × 15 ml) durch Azeotropbildung getrocknet. Dies ergab ein Öl, das in Hexan (20 ml) bis zur Bildung eines Feststoffs verrieben wurde. Der Feststoff wurde durch Filtration gewonnen und in einem Vakuumofen bei 40 °C getrocknet. Ausbeute = 0,691 g (83 Ausbeute). M/Z von (M-H)^- = 432, ¹H-NMR (DMSO) δ = 7,42-7,48 (1 H), 7,55-7,6 (2 H), 7,74-7,8 (1 H), 7,92-8,0 (3 H), 11,2 (br, 1 H).
Beispiel 13 (Referenzbeispiel). 5-Brom-2-(4-trifluormethoxy-benzolsulfonylamino)benzoylchlorid
5-Brom-2-(4-trifluormethoxy-benzolsulfonylamino)benzoesäure (3,27 g, 7,4 mmol) wurde in Thionylchlorid (30 ml) suspendiert. Das Gemisch wurde 4 h auf Rückflusstemperatur erhitzt. Das Lösemittel wurde bis zur Trockne entfernt. Der Rückstand wurde in wasserfreiem Ethylacetat gelöst und das Lösemittel wurde entfernt (2 × 20 ml). Der Feststoff wurde bei 40 °C in einem Vakuumofen über Nacht getrocknet.
Beispiel 14. 5-Brom-N-(2-methoxy-benzyl)-2-(4-trifluormethoxy-benzylsulfonylamino)benzamid
5-Brom-2-(4-trifluormethoxy-benzolsulfonylamino)-benzoylchlorid (5,124 g, 11,6 mmol) wurde in Tetrahydrofuran (100 ml) gelöst und das Gemisch wurde in einem Eisbad unter 5 °C gekühlt. 2-Methoxy-benzylamin (1,8 ml, 13,8 mmol, 1,2 Äquivalente) und Triethylamin (1,9 ml, 13,6 mmol, 1,2 Äquivalente) wurden zu dem Gemisch gegeben, wobei die Temperatur unter 10 °C gehalten wurde. Das Gemisch wurde auf Raumtemperatur erwärmt und das Lösemittel wurde bis zur Trockne entfernt. Der Rückstand wurde zwischen wässrigem HCl (1 M, 50 ml) und Ethylacetat (100 ml) verteilt. Das organische Lösemittel wurde gewonnen und bis zur Trockne eingeengt. Der gebildete Feststoff wurde in Ethylacetat gelöst und das Lösemittel wurde entfernt (2 × 25 ml). Das gebildete Gemisch wurde durch Säulenchromatographie auf Silica mit einem Elutionsmittel von 20 % Ethylacetat in Hexan gereinigt. Der Feststoff wurde in einem Gemisch von 5 % Ethylacetat in Hexan (90 ml) suspendiert. Das Gemisch wurde zentrifugiert und der Feststoff wurde bei 40 °C über Nacht in einem Vakuumofen getrocknet. Ausbeute = 4,85 g (75 % Ausbeute). M/Z von [M-H]^- = 557, ¹H-NMR (CDCl₃) δ = 3,85 (s, 3 H), 4,5 (sd, 2 H), 6,5-6,6 (1 H), 6,9-7,05 (4 H), 7,3-7,4 (2 H), 7,45 (1 H), 7,5 (1 H), 7,6 (1 H), 7,8 (2 H), 10,8 (br, 1 H).
Beispiel 15. 5-Brom-N-(4-fluor-benzyl)-2-(4-trifluormethoxy-benzolsulfonylamino)-benzamid
Diese Verbindung wurde unter Verwendung des in Beispiel 70 beschriebenen Verfahrens unter Verwendung von 4-Fluorbenzylamin anstelle von 2-Methoxybenzylamin hergestellt. M/Z von [M-H]^- = 545, ¹H-NMR (DMSO) δ = 4,4 (sd, 2 H), 7,15-7,23 (2 H), 7,3-7,4 (2 H), 7,4-7,5 (3 H), 7,65-7,7 (1 H), 7,8-7,9 (2 H), 7,9-8,0 (1 H), 9,4 (br, 1 H), 11,5 (br, 1 H).
Beispiel 16. 5-Brom-2-(4-chlor-benzolsulfonylamino)-N-(2-trifluormethoxy-benzyl)-benzamid
Diese Verbindung wurde unter Verwendung des in Beispiel 70 beschriebenen Verfahrens unter Verwendung von 5-Brom-2-(4-chlor-benzolsulfonylamino)-benzoylchlorid anstelle von 5-Brom-2-(4-trifluormethoxy-benzolsulfonylamino)-benzoylchlorid und von 2-Trifluormethoxybenzylamin anstelle von 2-Methoxybenzylamin hergestellt. M/Z von [M-H)^- = 563,8, ¹H-NMR (DMSO) δ = 4,4 (sd, 2 H), 7,3-7,4 (5 H), 7,5 (2 H), 7,65-7,7 (3 H), 7,9-8,0 (1 H), 9,4 (br, 1 H), 11,5 (br, 1 H).
Beispiel 17 (Referenzbeispiel). 2-Chlor-N-(2-hydroxy-4-trifluormethoxy-benzyl)-acetamid
3-(Trifluormethoxy)phenol (4,827 g, 27 mmol) wurde in Eisessig (20 ml) gelöst. Das Gemisch wurde in einem Eisbad zwischen 14 und 17 °C gekühlt und konzentrierte Schwefelsäure (2 ml) wurde unter Halten der Temperatur unter 20 °C langsam zugegeben. Das Gemisch wurde unter 10 °C gekühlt und N-Hydroxymethyl-2-chloracetamid (3,52 g, 28,5 mmol) wurde zugegeben. Das Gemisch wurde langsam auf Raumtemperatur erwärmt und über Nacht gerührt. Das Gemisch wurde dann langsam in Eis (200 ml) gegossen und der pH-Wert wurde mit KOH-Pellets auf ~ 4-5 eingestellt, wobei die Temperatur unter 5 °C gehalten wurde. Das Reaktionsgemisch wurde auf Raumtemperatur erwärmt und zweimal mit Ethylacetat (150 ml) extrahiert. Die organische Schicht wurde gewonnen und mit NaHCO₃ (gesättigt, 30 ml) gewaschen. Die organische Schicht wurde über MgSO₄ getrocknet, filtriert und das Lösemittel wurde bis zur Trockne entfernt. Das Gemisch wurde durch Säulenchromatographie (SiO₂, 700 ml) unter Verwendung eines Elutionsmittels aus Hexan/Ethylacetat (10/2) gereinigt. Ausbeute: 2,42 g (33,8 % Ausbeute). ¹H-NMR (DMSO) δ = 10,23 (1 H, s), 8,56 (1 H, st), 7,16-7,14 (1 H, sd), 6,71-6,70 (2 H, br), 4,18-4,17 (2 H, d), 4,08 (2 H, s).
Beispiel 18 (Referenzbeispiel). 2-Aminomethyl-5-trifluormethoxy-phenol
2-Chlor-N-(2-hydroxy-4-trifluormethoxy-benzyl)-acetamid (9,9 g, 37,4 mmol) wurde in einem Gemisch von Ethanol (100 ml)/wässrige HCl (12 M, 50 ml) gelöst. Das Gemisch wurde ~ 6 h refluxiert. Das Lösemittel wurde durch Rotationsverdampfung entfernt und der Rückstand wurde durch Lösen in Ethylacetat und anschließende Rotationsverdampfung (6 × 150 ml) unter Azeotropbildung getrocknet. Der erhaltene Feststoff wurde in Ethylacetat (100 ml) suspendiert, durch Filtration gewonnen und bei 65 °C in einem Vakuumofen über Nacht getrocknet. Ausbeute: 8,68 g (95,3 Ausbeute). M/Z (-HCl) von [M-H]^- = 208, ¹H-NMR (D₂O) δ = 7,26-7,22 (1 H, sd), 6,76-6,75 (2 H, br), 4,07 (2 H, s).
Beispiel 19. 5-Brom-N-(2-hydroxy-4-trifluormethoxy-benzyl)-2-(4-trifluormethoxybenzolsulfonylamino)-benzamid
Diese Verbindung wurde unter Verwendung des in Beispiel 70 beschriebenen Verfahrens unter Verwendung von 2-Hydroxy-4-trifluormethoxybenzylaminhydrochlorid anstelle von 2-Methoxybenzylamin hergestellt. M/Z von [M-H]^- = 629, ¹H-NMR (DMSO) δ = 11,51 (1 H, s), 10,28 (1 H, s), 9,23 (1 H, st), 7,95 (1 H, sd), 7,81-7,79 (2 H, m), 7,67-7,64 (1 H, m), 7,45-7,40 (3 H, m), 7,16-7,14 (1 H, d), 6,73-6,71 (2 H, br), 4,29 (2 H, sd).
Beispiel 20 (Referenzbeispiel). 2-Chlor-N-(5-fluor-2-methoxy-benzyl)-acetamid
Diese Verbindung wurde unter Verwendung des in Beispiel 73 beschriebenen Verfahrens unter Verwendung von 4-Fluoranisol anstelle von 3-Trifluormethoxyphenol hergestellt. ¹H-NMR (DMSO) δ = 8,65 (1 H, Br), 7,09-7,03 (1 H, dt), 7,02-6,95 (2 H, m), 4,26-4,22 (2 H, d), 4,1 (2 H, s).
Beispiel 21 (Referenzbeispiel). 5-Fluor-2-methoxy-benzylaminhydrochlorid
Diese Verbindung wurde unter Verwendung des in Beispiel 74 beschriebenen Verfahrens unter Verwendung von 2-Chlor-N-(2-methoxy-5-trifluormethoxy-benzyl)-acetamid anstelle von 2-Chlor-N-(2-hydroxy-4-trifluormethoxy-benzyl)-acetamid hergestellt. ¹H-NMR (CD₃OD) δ = 7,15-7,11 (2 H, m), 7,06-7,03 (1 H, m), 4,06 (2 H, s), 3,88 (3 H, s).
Beispiel 22. 5-Brom-N-(5-fluor-2-methoxy-benzyl)-2-(4-trifluormethoxy-benzolsulfonylamino)-benzamid
Diese Verbindung wurde unter Verwendung des in Beispiel 70 beschriebenen Verfahrens unter Verwendung von 2-Methoxy-5-fluorbenzylaminhydrochlorid anstelle von 2-Methoxybenzylamin hergestellt. ¹H-NMR (DMSO) δ = 11,45 (1 H, s), 9,22 (1 H, st), 7,97-7,96 (1 H, sd), 7,82-7,80 (2 H, sd), 7,67-7,65 (1 H, sdd), 7,47-7,39 (3 H, m), 7,09-7,02 (1 h, dt), 6,98-6,92 (2 H, m), 4,31 (2 H, d), 3,31 (3 H, s).
Beispiel 23 (Referenzbeispiel). 2-Amino-5-brom-N-(2-methoxy-benzyl)-benzamid
In Stickstoffatmosphäre wurde 2-Methoxybenzylamin (10 g, 73 mmol) in wasserfreiem Toluol (30 ml) suspendiert. Diese Suspension wurde in einem Eisbad abgekühlt und eine (2 M) Trimethylaluminiumlösung in Hexanen (36 ml, 72 mmol) wurde langsam zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde bei Raumtemperatur 1 h nach Beendigung der Zugabe gerührt. Die gebildete Lösung wurde dann in einem Eisbad gekühlt und Methyl-2-amino-5-bromacetat wurde in kleinen Portionen zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Diese Lösung wurde in eine vorgekühlte Lösung von 2 N HCl (300 ml) gegossen. Der erhaltene Feststoff wurde durch Filtration gewonnen und in Methanol (50 ml) verrieben. Der Feststoff wurde gewonnen und in einem Hochvakuumofen bei 65 °C über Nacht getrocknet. Reines Produkt wurde gewonnen (16 g). ¹H-NMR (DMSO) δ = 3,8 (s, 3 H), 4,35 (sd, 2 H), 6,5 (2 H), 6,6 (1 H), 6,85 (1 H), 6,9 (1 H), 7,1-7,25 (3 H), 7,7 (1 H), 8,7 (br, 1 H).
Beispiel 24. 5-Brom-N-(2-methoxy-benzyl)-2-(4-trifluormethyl-2-nitro-benzolsulfonylamino)-benzamid
2-Amino-5-brom-N-(2-methoxy-benzyl)-benzamid (9 g, 28 mmol) wurde in wasserfreiem Dichlormethan (300 ml) suspendiert und in einem Eisbad gekühlt. Pyridin (20 ml) wurde unter Rühren zugegeben, worauf die Zugabe von 2-Nitro-4-trifluormethyl-benzolsulfonylchlorid (15 g, 52 mmol) folgte. Das Reaktionsgemisch wurde zwei Tage bei Raumtemperatur ge rührt. Das Gemisch wurde zur Entfernung eines festen Niederschlags filtriert und das Filtrat wurde zur Trockne eingedampft. Wässrige HCl (2 N, 300 ml) wurde zugegeben und die gebildete Lösung wurde mit Dichlormethan (500 ml) extrahiert. Die organische Schicht wurde eingeengt und der erhaltene Rückstand wurde in Ethylacetat gelöst. Die Zugabe von Hexanen zu dieser Lösung ergab einen festen Niederschlag. Dieser Feststoff wurde in Ethylacetat gelöst und unter Verwendung eines Elutionsmittels aus Dichlormethan und Ethylacetat durch eine kurze Silicasäule gegeben, wobei das gewünschte Produkt erhalten wurde (7,5 g, 46 Ausbeute). M/Z von [M-H]^- = 587, ¹H-NMR (DMSO) δ = 3,8 (s, 3 H), 4,35 (sd, 2 H), 6,85 (1 H), 6,95 (1 H), 7,1 (1 H), 7,2 (1 H), 7,4 (1 H), 7,65 (1 H), 8 (1 H), 8,15 (1 H), 8,25 (1 H), 8,55 (1 H).
Beispiel 25. In-vitro- und Ex-vivo-Tests von Phosphattransportinhibitoren
Die in Tabelle 3 angegebenen Phosphattransportinhibitoren wurden in sowohl einem In-vitro- als auch Ex-vivo-Assay zur Bestimmung von deren Aktivität getestet. Der In-vitro-Assay ist identisch mit dem in Beispiel 10 beschriebenen Assay, wobei jedoch die Glucosetransporthemmaktivität der Verbindungen ebenfalls ermittelt wurde. Die Ergebnisse sind als der IC₅₀-Wert für die verschiedenen Hemmungstypen angegeben. Eine bevorzugte Verbindung weist eine hohe Phosphattransporthemmaktivität, jedoch eine geringe oder keine Glucosetransporthemmaktivität auf.

Für den Ex-vivo-Assay wurde die ³³P-Aufnahme in isolierte Kaninchendarmringe unter Verwendung einer Modifikation des Verfahrens gemäß der Beschreibung von Crane und Mandelstam [Robert K. Crane und Paul Mandelstam "The active transport of sugars by various preparations of hamster intestine", Biochim. Biophys. Acta 45: 460–476, 1960; dessen Inhalt hierdurch als Bezug aufgenommen ist] ermittelt. Männliche New Zealand-Kaninchen eines Gewichts von 2–3 kg wurden durch eine i.v. Injektion von Fatal Plus^® euthanasiert. Eine Mittellinienlaparotomie wurde durchgeführt und der Duodenum wurde von der Pylorusjunktion bis zum Trietz-Ligament isoliert und herausseziert. Darmsegmente wurden nach außen gewendet, in ringähnliche Stücke von 2–4 mm zerschnitten und in eine modifizierte Hepes-gepufferte Ringer-Lösung, in der Na⁺ isoosmotisch durch N-Methyl-D-glucamin ersetzt worden war, gegeben. Zur Ermittlung der Phosphataufnahme wurden sechs Ringe in ein Konusröhrchen von 50 ml, die ein Volumen von 10 ml Ringer-Lösung mit oder ohne Na⁺, das mit 100 % O₂ durchperlt wurde, enthielt und bei 37 °C gehalten wurde, inkubiert. 0,5 μCi/ml ³³P wurden dann mit den Ringen über einen Zeitraum von 15 min inkubiert, das Gewebe wurde geerntet, gespült, trockengetupft und gewogen. Die Gewebe wurden dann durch Verdauen derselben in einem 5-ml-Volumen von Solvable^®-Gewebesolubilisierungsmittel über Nacht bei 50 °C solubilisiert und die ³³P-Konzentrationen wurden durch Szintillationszählung bestimmt. Die natriumabhängige Aufnahme von ³³P wurde durch Bestimmen der Differenz der Aufnahme zwischen Ringen, die in Gegenwart von und bei Abwesenheit von Na⁺ in der Hepesgepufferten Ringer-Lösung inkubiert wurden, berechnet. Die Ergebnisse sind als prozentuale Hemmung der Phosphat- bzw. Glucoseaufnahme angegeben. Tabelle 3. Biologische Tests von Phosphattransportinhibitoren

Verbindung	Phosphattransport-IC₅₀	Glucosetransport-IC₅₀	% Hemmung des Phosphattransports	% Hemmung des Glucosetransports
Beispiel 16	7 μM	> 100 μM	24 %	6 %
Beispiel 15	13 μM	> 100 μM	53 %	26 %
Beispiel 19	5,2 μM	80 μM	56 %	0 %
Beispiel 22	7,8 μM	100 μM	45 %	4 %
Beispiel 14	6,3 μM	> 100 μM	48 %	8 %
Beispiel 24	31 μM	> 100 μM	43 %	39 %

Die Tabelle 3 zeigt, dass die getesteten Verbindungen effektive und stark wirksame Inhibitoren des Phosphattransports sind. Die Tabelle 3 zeigt ferner, dass die getesteten Verbindungen insofern selektiv sind, als der Glucosetransport in Zellen und Geweben durch die Verbindungen allgemein minimal beeinflusst wird.

Claims

Verwendung einer Verbindung der folgenden Strukturformel:
worin die Ringe A, B und C optional substituiert sind, bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Hyperphosphatämie, chronischen Nierenversagen, Hypoparathyroidismus, urämischer Knochenerkrankung, renaler Knochenerkrankung, Weichteilverkalkung, kardiovaskulären Ereignissen oder Osteoporose.
Verwendung nach Anspruch 1, wobei das Medikaments zur Behandlung von Hyperphosphatämie dient.
Verwendung nach Anspruch 2, wobei die Verbindung eine Verbindung der im folgenden angegebenen Strukturformel ist:
worin: R₉ für Wasserstoff oder eine elektronenziehende Gruppe steht und der Ring A optional mit einem oder mehreren anderen Substituenten als R₉ substituiert ist.
Verwendung nach Anspruch 3, wobei R₉ für Wasserstoff oder ein Halogen steht.
Verwendung nach Anspruch 4, wobei die Verbindung eine Verbindung der im folgenden angegebenen Strukturformel ist:
worin: R₁₀ für Wasserstoff, ein Halogen, eine substituierte Alkylgruppe, eine Alkoxygruppe, eine substituierte Alkoxygruppe oder -NO₂ steht und der Ring B optional mit einem oder mehreren anderen Substituenten als R₁₀ substituiert ist.
Verwendung nach Anspruch 5, wobei R₁₀ für ein Halogen oder eine substituierte Alkoxygruppe steht.
Verwendung nach Anspruch 6, wobei R₁₀ für eine Trifluormethoxygruppe steht.
Verwendung nach Anspruch 7, wobei die Verbindung eine Verbindung der im folgenden angegebenen Strukturformel ist:
worin R₁₁ für Wasserstoff, ein Halogen, eine Alkoxygruppe, eine substituierte Alkoxygruppe oder -NO₂ steht.
Verwendung nach Anspruch 1, wobei das Medikament zur Behandlung von chronischem Nierenversagen dient.
Verwendung nach Anspruch 1, wobei das Medikament zur Behandlung von Hypoparathyroidismus, urämischer Knochenerkrankung, Weichgewebeverkalkung oder Osteoporose dient.
Verwendung nach Anspruch 1, wobei die Verbindung zur Co-Verabreichung mit einem oder mehreren Phosphatmaskierungsmitteln dient.
Verwendung nach Anspruch 11, wobei die Verbindung zur Co-Verabreichung mit Sevelamer dient.
Pharmazeutische Zusammensetzung, die eine Verbindung der folgenden Strukturformel:
worin R₃₀ für eine substituierte Alkoxy- oder Halogenalkylgruppe steht; die Ringe A und C optional substituiert sind und der Ring B optional einen oder mehrere andere Substituenten als R₃₀ umfasst, und einen pharmazeutischen Träger oder ein pharmazeutisches Verdünnungsmittel umfasst.
Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 13, wobei die Verbindung eine Verbindung der im folgenden angegebenen Strukturformel ist:
worin die Ringe A und C optional substituiert sind und der Ring B optional einen oder mehrere andere Substituenten als R₃₀ umfasst.
Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 14, wobei R₃₀ für eine Halogenalkoxygruppe steht.
Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 15, wobei die Verbindung eine Verbindung der im folgenden angegebenen Strukturformel ist:
worin: R₃₁ für ein Halogen steht und der Ring C optional substituiert ist und die Ringe A und B optional einen oder mehrere andere Substituenten als R₃₀ und R₃₁ umfassen.
Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 16, wobei die Verbindung eine Verbindung der im folgenden angegebenen Strukturformel ist:
worin der Ring C optional substituiert ist und die Ringe A und B optional einen oder mehrere andere Substituenten als R₃₀ und R₃₁ umfassen.
Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 17, wo bei R₃₀ für eine Trifluormethoxygruppe steht und R₃₁ für Brom steht.