DE60218299T2

DE60218299T2 - Eine Dispersion aus Beta-Glukan enthaltenden hochfeinen Partikel, ein entsprechender Herstellungsprozess und die Verwendung der Dispersion

Info

Publication number: DE60218299T2
Application number: DE60218299T
Authority: DE
Inventors: Tetsuya c/o AJINOMOTO CO. Chuo-ku SUGA; Yoshiaki c/o AJINOMOTO CO. Chuo-ku OGASAWARA; Yutaro c/o AJINOMOTO CO. Chuo-ku KANEKO; Masatoshi Tech.&Engine.Cen. Ajinomot Kawasaki-shi KAJIURA; Y. Pharmaceutical Res.Lab.Ajino Inc. Kawasaki-shi SUGA
Original assignee: Ajinomoto Co Inc
Current assignee: Ajinomoto Co Inc
Priority date: 2001-04-27
Filing date: 2002-04-26
Publication date: 2007-10-31
Anticipated expiration: 2022-04-27
Also published as: CN1505524A; US20040142000A1; KR20090057480A; EP1389466A1; EP1389466B1; WO2002087603A1; DE60218299D1; TWI300714B; KR20040039195A; JP3633601B2; EP1389466A4; JPWO2002087603A1; KR20100112205A; ATE354355T1; CN100391439C

Description

Technisches Gebiet
Die vorliegende Erfindung betrifft neue superfeine Teilchen einer von einem Pilz abgeleiteten Komponente, beispielsweise neue superfeine Teilchen aus einem Pilzextrakt und dergleichen (vorzugsweise superfeine Teilchen einer Komponente, die durch Extraktion eines Pilzes mit Wasser erhalten werden), oder neue superfeine Teilchen von β-Glucan, eine Zusammensetzung, die die neuen superfeinen Teilchen enthält (eine Dispersion der superfeinen Teilchen und dergleichen), einen Immunaktivator und/oder einen Immunregulator, der die superfeinen Teilchen oder die Zusammensetzung als aktiven Bestandteil enthält (Immunaktivator/Immunregulator), eine Arzneimittelzusammensetzung (insbesondere Arzneimittelzusammensetzungen für Krankheiten, die auf Anomalien der Immunfunktionen zurückzuführen sind, beispielsweise ein Antitumormittel, ein Antiinfektionsmittel, ein antivirales Mittel, ein Mittel gegen Autoimmunkrankheiten, ein Mittel gegen Diabetes und ein Mittel gegen Allergien, sowie Arzneimittelzubereitungen für Krankheiten der Verdauungsorgane (therapeutische Mittel für das Reizdarmsyndrom (IBS), Darmentzündung (IBD), Verstopfung, Durchfall und dergleichen), Nahrungsmittel und Getränke (Gesundheitsnahrungsmittel, funktionelle Nahrungsmittel und dergleichen) und ein Verfahren zur Herstellung der superfeinen Teilchen, die als aktive Bestandteile für diese Krankheiten nützlich sind, oder die Herstellung einer Zusammensetzung, welche die superfeinen Teilchen enthält.
Der erfindungsgemäße Immunaktivator/Immunregulator wird in verschiedenen Formen eingesetzt, beispielsweise als Arznei mittelpräparation (Arzneimittelzusammensetzung), Nahrungsmittel und Getränk (Gesundheitsnahrungsmittel, funktionelle Nahrungsmittel und dergleichen) und dergleichen, und ist für die Behandlung, Linderung und Verhinderung des Fortschreitens von Krankheiten nützlich, insbesondere durch Aktivieren und Regulieren der Immunfunktionen, für die Prophylaxe anderer Krankheiten, die aufgrund der Anomalitäten der Immunfunktionen in Patienten und dergleichen auftreten, und für die Prophylaxe verschiedener Krankheiten, die mit den Anomalien der Immunfunktionen einhergehen, von gesunden Personen durch Aktivieren oder Regulieren der Immunfunktionen, und für die Linderung leichter Krankheiten durch Verbessern der Immunfunktionen dafür, und dergleichen.
Die vorliegende Erfindung umfasst auch ein Verfahren zum Aktivieren der Immunität oder ein Verfahren zum Regulieren der Immunität, welches für die Behandlung (medizinische Behandlung), Linderung, Verhinderung des Fortschreitens und Prophylaxe etc. von Tumoren, Infektionen, viralen Infektionen (Krankheiten), Autoimmunkrankheiten, Diabetes, Allergien und Krankheiten der Verdauungsorgane (Reizdarmsyndrom (IBS), Darmentzündung (IBD), Verstopfung, Durchfall und dergleichen) nützlich ist, und die Erfindung umfasst eine Verwendung der neuen superfeinen Teilchen als aktiven Bestandteil für den Immun(Immunitäts)-Aktivator, den Immun(Immunitäts)-Regulator, und verschiedene Chemikalien (Agenzien), und für die Produktion von Nahrungsmitteln, Getränken und dergleichen, und außerdem für Arzneimittelzubereitungen und dergleichen.
Hintergrund der Erfindung
Pilze oder deren Bestandteile enthalten verschiedene pharmazeutisch wirksame Bestandteile, sodass Gesundheitsnahrungsmittel bekannt sind, die verarbeitete Pulver eines bestimmten Pilzes oder einen Heißwasserextrakt davon enthalten. In den herkömmlich bekannten Produkten werden jedoch deren verschiedene Komponenten nicht ausreichend ausgenutzt.
Dementsprechend wird erwartet, dass verschiedene Komponenten von Pilzen oder ähnlichen Materialien in der Form von Arzneimittelzubereitungen, Gesundheitsnahrungsmittel oder funktioneller Nahrungsmittel im Vergleich zu herkömmlichen Produkten viel effektiver genutzt werden, um die Gesundheit von Tieren, insbesondere Menschen, im täglichen Leben zu erhalten und zu verbessern, oder dass diese Komponenten in Arzneimittelzubereitungen zur Behandlung oder Linderung von Krankheiten eingesetzt werden.
US20010000229 A1 offenbart eine Arzneimittelzusammensetzung sowie Nahrungsmittel oder Tierfutter, welche Grifola-Pulver oder Extrakte, erhalten aus frischem oder getrocknetem Grifola (Grifola frondosa, Grifola albicans, Grifola gigantea) unter Verwendung von Wasser oder Wasser/organischem Lösungsmittel als Extraktionsmittel, umfasst. Der Extrakt enthält ein Polysaccharid (beispielsweise β-Glucan) oder einen Komplex eines Polysaccharids und eines Proteins. Der Grifola-Extrakt oder eine gereinigte Fraktion davon wird mit einem wasserlöslichen oder heißwasserlöslichen Träger gemischt (Dextrin, Cyclodextrin oder Lactose). Pharmazeutische Arzneimittelzusammensetzungen, die Grifola enthalten, werden für die Herstellung eines Medikaments oder Nahrungsmittels für die Chemoprävention von Krebs eingesetzt.
In Scand. J. Immunol. 1987. 25. 245–254 werden Mikroteilchen von 1,3-β-Glucan beschrieben, die in einem Vergleich der Stimulation von Interleukin 1 und der Makrophagen-vermittelten Tumorzellabtötung durch diese Substanz und andere Polysaccharide in Mikroteilchenform eingesetzt werden.
In DE 30 19 614 wird gezeigt, dass hydrolysiertes β-(1,3)(1,6)-Glucan, isoliert aus einem zu corticiaceae gehörenden Pilz, in Arzneimittelzusammensetzungen für die parenterale Verabreichung einverleibt wird und eine Aktivität gegen spezifische Arten von Krebs und Tumoren hat.
DE 199 44 695 offenbart Zusammensetzungen und ein Fermentationsverfahren für die Isolierung/Extraktion von β-Glucan aus Pilzen (Agaricus, Maitake, Shiitake, Matsutake, Shimejitake) mit einer Antitumoraktivität bei oraler Einnahme.
In US 5849720 wurden von Hefe abgeleitete Glucanteilchen aufgelöst, und das lösliche Glucan wurde für die Herstellung einer Arzneimittelzusammensetzung für die parenterale, topische, orale oder intranasale Verabreichung eingesetzt, um immungeschwächte Patienten zu behandeln.
In GB 1356449 wird ein Verfahren zur Extraktion wasserlöslicher Komponenten der Hyphen von essbaren Pilzen (Shiitake, Lentinus edodes, Basidiomycetes) beschrieben, welches die Bildung einer wässerigen Suspension feiner Teilchen, das Filtrieren der Suspension zur Entfernung unerwünschter Bestandteile daraus und somit die Bereitstellung einer wässerigen Lösung eines Extrakts des essbaren Pilzes umfasst. Die Zusammensetzung wird für die Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung von Tonsillitis, Bluthochdruck und Krebs verwendet.
Die frühere Anmeldung WO0212348 (eingereicht am 31. Juli 2001) zeigt Glucanteilchen (Größenbereich von 0,1–25 μm, vorzugsweise 0,5–15 μm, stärker bevorzugt 2–10 μm; Quelle: Hefe) für die Herstellung von Formulierungen zur Behandlung von Herzkreislaufkrankheiten, zur Verbesserung des Autoimmunzu standes, von Arthritis, Lupus, allergischem Asthma oder Multipler Sklerose.
Gegenstand der Erfindung/Aufgabe der Erfindung
Der Gegenstand der Erfindung ist es, Nahrungsmittel und Getränke (Gesundheitsnahrungsmittel, funktionelle Nahrungsmittel und dergleichen) oder eine Arzneimittelzubereitung (Arzneimittelzusammensetzung) bereitzustellen, die durch einfache präparative Maßnahmen hergestellt werden kann und verschiedene Komponenten, insbesondere pharmazeutisch wirksame Komponenten in Pilzen oder ähnlichen Materialien, effektiv nutzt.
Offenbarung der Erfindung
Um die vorstehend genannte Aufgabe zu lösen, haben die Erfinder der vorliegenden Erfindung umfangreiche Untersuchungen über die Verwendung verschiedener Komponenten in herkömmlichen Produkten durchgeführt und gefunden, dass die verschiedenen Komponenten im tierischen Körper nicht in ausreichendem Maße absorbiert werden und somit in den Körpern nicht wie erwartet genutzt werden. Als Ergebnis weiterer Untersuchungen haben die Erfinder gefunden, dass wenn von einem Pilz abgeleitete Komponenten, insbesondere ein Extrakt eines Pilzes mit Wasser, vorzugsweise ein Extrakt davon mit heißem Wasser, außerdem fein pulverisiert werden, um superfeine Teilchen herzustellen, und dann dispergiert werden, beispielsweise in Wasser, sodass der mittlere Teilchendurchmesser der superfeinen Teilchen 10 μm oder weniger, vorzugsweise 1 μm oder weniger, noch stärker bevorzugt 0,01 bis 1 μm im Mizellenzustand ist, die Einverleibung dieser Teilchen durch die Schleimhaut deutlich verbessert wird und somit die Immunfunktionen aktiviert oder reguliert werden können. Außerdem haben die Erfinder gefunden, dass dieselbe Aktivität und Wirkung in super feinen Teilchen von β-Glucan (einschließlich von einem Pilz abgeleitetes β-Glucan und nicht von einem Pilz abgeleitetes β-Glucan) vorhanden waren.
Auf der Grundlage der vorstehend beschriebenen Ergebnisse wurde die vorliegende Erfindung gemacht. Insbesondere wird die mukosale Immunität durch die Einverleibung durch die Schleimhäute (insbesondere durch den Dünndarm) in den Körper stimuliert und aktiviert (was zu einer Aktivierung der systemischen Immunität führt) und als Ergebnis kann eine Antitumorwirkung oder eine therapeutische Behandlungs- und/oder Linderungswirkung auf infektiöse Krankheiten mit Viren, wie AIDS, und Bakterien oder dergleichen erwartet werden. Dementsprechend können die superfeinen Teilchen als Immunaktivator/Immunregulator (das heißt ein Immunaktivator und/oder Immunregulator) eingesetzt werden, und es kann ihre Verwendung in der Form von Arzneimittelzusammensetzungen oder Nahrungsmitteln und Getränken (das heißt Nahrungsmittel und/oder Getränke) (Gesundheitsnahrungsmittel und dergleichen) erwartet werden.
Das heißt, ein Aspekt der vorliegenden Erfindung besteht in superfeinen Teilchen, die dadurch gekennzeichnet sind, dass eine Komponente, die unter einer von einem Pilz abgeleiteten Komponente und β-Glucan ausgewählt ist, in superfeine Teilchen umgewandelt wird, beispielsweise superfeine Teilchen, die dadurch gekennzeichnet sind, dass eine von einem Pilz abgeleitete Komponente oder β-Glucan in superfeine Teilchen umgewandelt wird. Im Stand der Technik zu der vorliegenden Anmeldung wird β-Glucan in Liposomen eingekapselt (vergleiche die Veröffentlichung der Internationalen Patentanmeldung WO 01/85141), wo hingegen in der vorliegenden Erfindung eine Komponente, die unter einer von einem Pilz abgeleiteten Kom ponente und β-Glucan ausgewählt ist, in der Form superfeiner Teilchen vorliegen kann, sodass sich die vorliegende Erfindung von diesem Stand der Technik dahingehend unterscheidet, dass die β-Glucan-Zubereitung durch ein einfacheres Verfahren ohne das Erfordernis von Verfahrensschritten, die im Stand der Technik notwendig sind, beispielsweise das Verkapseln von β-Glucan in Liposomen und das Abtrennen von nicht in die Liposomen verkapseltem β-Glucan aus den Liposomen durch Gelpermeationssäulenchromatografie und dergleichen, durch ein einfacheres Verfahren hergestellt werden können. Dementsprechend umfasst die vorliegende Erfindung nicht die Form von Liposomen, die dadurch gekennzeichnet sind, dass der aktive Bestandteil β-Glucan darin verkapselt ist.
In der vorliegenden Erfindung bezieht sich der Ausdruck "von einem Pilz abgeleitete Komponente" auf alle Komponenten, die durch, in und/oder aus Pilzen hergestellt werden.
Die von einem Pilz abgeleitete Komponente ist nicht besonders eingeschränkt, solange sie eine Komponente ist, die in einem Pilz enthalten ist oder durch und/oder aus einem Pilz hergestellt wird. Beispielsweise kann die von einem Pilz abgeleitete Komponente ein Extrakt sein, der eine Vielzahl von Arten der Komponenten enthält, die in einem Pilz und/oder in Pilzen enthalten sind, beispielsweise ein Pilzextrakt oder ein Extrakt eines Pilzes mit Wasser. Außerdem kann die von einem Pilz abgeleitete Komponente ein Kulturprodukt sein, das durch die in den Japanischen Patentveröffentlichungen JP-B-42-12000, JP-B-46-37873, JP-A-10-287584 und dergleichen beschrieben Verfahren der Kultivierung von Myzelien in einer Kulturlösung hergestellt wird. Die von einem Pilz abgeleitete Komponente kann eine einzelne Komponente, wie β-Glucan sein. Sie kann auch ein β-Glucan enthaltendes Material sein.
Auf der einen Seite kann das in der vorliegenden Erfindung eingesetzte β-Glucan wie vorstehend beschrieben eine von einem Pilz abgeleitete Komponente sein, oder es kann ein β-Glucan sein, das nicht in einer von einem Pilz abgeleiteten Komponente enthalten ist.
Das nicht in einer von einem Pilz abgeleiteten Komponente enthaltene β-Glucan umfasst β-Glucan als eine Komponente, die beispielsweise von Hefe (Bierhefe und dergleichen) abgeleitet ist, eine Komponente, die von Pilzen abgeleitet ist, eine Komponente, die von Bakterien abgeleitet ist, eine Komponente, die von Pflanzen abgeleitet ist und dergleichen.
Der Extrakt eines Pilzes ist vorzugsweise ein Extrakt mit Wasser (ein Wasserextrakt eines Pilzes) (einschließlich Extrakte mit Wasser, heißem Wasser, einer Wasser enthaltenden Lösung und dergleichen), um eine größere Menge des erfindungsgemäßen aktiven (wirksamen) Bestandteils zu erhalten. Der Pilzextrakt mit Wasser (Wasserextrakt eines Pilzes) kann ein oder mehrere Komponenten sein, die mit Wasser aus einem Pilz extrahiert werden, oder ein diese Komponenten enthaltendes Material, und der Extrakt umfasst beispielsweise ein Filtrat, das durch Filtrieren eines Wasserextrakts eines Pilzes durch ein Filterpapier (die eingesetzte Art des Filterpapiers kann bei Bedarf ohne Einschränkung ausgewählt sein) oder dergleichen erhalten wird, Komponenten, die darin enthalten sind (in der Form von Feststoffen oder einer wässerigen Lösung und dergleichen), und eine Dispersion, die in dem Filtrat einen Teil der Wasser-extrahierten Komponenten in der Form von dispergierten feinen Teilchen enthält (beispielsweise Niederschläge von Aggregaten, die jeweils einen Teilchendurchmesser von 100 μm oder mehr haben, und dergleichen. Danach kann ein solcher Wasserextrakt eines Pilzes einer Stufe der superfeinen Pulverisierung in der vorliegenden Erfindung unterworfen werden, um superfeine Teilchen herzustellen. Die wässerige Lösung, die diese Komponenten enthält, wird als eine wässerige Lösung bezeichnet, die einen Wasserextrakt eines Pilzes enthält, es ist jedoch nicht immer erforderlich, dass diese Komponenten in der wässerigen Lösung vollständig aufgelöst sind.
Andererseits kann β-Glucan, das als das andere Ausgangsmaterial eingesetzt wird, das der Stufe der superfeinen Pulverisierung unterworfen wird, ein β-Glucan-Extrakt (extrahierte β-Glucan-Komponenten) wie im Fall des vorstehend beschriebenen Pilzextrakts sein. Die Extraktion von β-Glucan kann durch bekannte Extraktionsverfahren durchgeführt werden, beispielsweise durch ein Verfahren der Extraktion mit Wasser oder heißem Wasser (vergleiche Biol. Pharm. Bull., 23(7), 866, 2000), ein Verfahren der Behandlung mit einem Enzym (vergleiche die offengelegten Japanischen Patentanmeldungen Kokai JP-A-5-268905, JP-A-10-287584 und dergleichen). Die wässerige Lösung, die einen β-Glucan-Extrakt enhält, wird als eine β-Glucan-Extrakt enthaltende wässerige Lösung bezeichnet, es ist jedoch nicht immer erforderlich, dass der β-Glucan-Extrakt in der wässerigen Lösung vollständig aufgelöst ist.
Im Fall der superfeinen Pulverisierung einer Komponente, die unter einer von einem Pilz abgeleiteten Komponente und β-Glucan ausgewählt ist, bildet die Komponente vorzugsweise ein Aggregat in einer wässerigen Lösung. Genauer gesagt hat das Aggregat einen Teilchendurchmesser von mindestens 50 μm (50 μm oder mehr).
Die erfindungsgemäßen superfeinen Teilchen haben einen mittleren Teilchendurchmesser von vorzugsweise 10 μm oder weni ger, stärker bevorzugt 1 μm oder weniger, noch stärker bevorzugt 0,01 bis etwa 1 μm, bestimmt nach der Dispergierung in Wasser. Dieser mittlere Teilchendurchmesser kann auf einfache Weise mit einem Teilchengrößenverteilungsmessgerät bestimmt werden.
Einige Beispiele solcher superfeinen Teilchen sind die Folgenden:

(1) Superfeine Teilchen in einem Zustand, behandelt oder dispergiert mit einem Dispergiermittel, vorzugsweise in einer wässerigen Lösung, die von einer Komponente erhalten werden, die unter einer von einem Pilz abgeleiteten Komponente und β-Glucan ausgewählt ist.
(2) Superfeine Teilchen, die Teilchen mit einem mittleren Teilchendurchmesser von 10 μm oder weniger aufweisen, die beim Mischen eines Dispergiermittels mit einer wässerigen Lösung, die eine Komponente enthält, die unter einer von einem Pilz abgeleiteten Komponente und β-Glucan ausgewählt ist, erhalten werden kann.
(3) Die in dem vorstehenden Punkt (1) oder (2) beschriebenen superfeinen Teilchen, die Teilchen mit einem mittleren Teilchendurchmesser von 1 μm oder weniger enthalten, erhältlich oder erhalten durch eine Feinpulverisierungsbehandlung.
(4) Die in dem vorstehenden Punkt (3) beschriebenen superfeinen Teilchen, worin der mittlere Teilchendurchmesser 0,01 bis 1 μm ist.
(5) Die superfeinen Teilchen nach einem der vorstehenden Punkte (1) bis (4), worin die wässerige Lösung, die eine Komponente enthält, die unter einer von einem Pilz abgeleiteten Komponente und β-Glucan ausgewählt ist, eine Pilzextrakt enthaltende wässerige Lösung ist, die durch Filtration eines Extrakts (einer Lösung) eines Pilzes mit Wasser oder heißem Wasser durch ein Filterpapier und dergleichen erhalten wird.
(6) Die superfeinen Teilchen, die im vorstehenden Punkt (5) beschrieben sind, worin die Pilzextrakt enthaltende wässerige Lösung eine wässerige Lösung ist, die Aggregate enthält, die durch Filtrieren eines Extrakts (einer Lösung) eines Pilzes mit Wasser oder heißem Wasser durch ein Filterpapier und dergleichen und durch anschließendes Konzentrieren und/oder Kühlen des Filtrats erhalten wird.
(7) Die superfeinen Teilchen, die in einem der vorstehenden Punkte (1) bis (6) beschrieben werden, worin die wässerige Lösung, die eine Komponente enthält, die unter einer von einem Pilz abgeleiteten Komponente und β-Glucan ausgewählt ist, eine wässerige Lösung von β-Glucan oder eine wässerige Lösung ist, die β-Glucan enthält.

Das β-Glucan kann eine Komponente sein, die in den von einem Pilz abgeleiteten Komponenten enthalten ist oder nicht.
Die wässerige Lösung, die eine Komponente enthält, die unter einer von einem Pilz abgeleiteten Komponente und β-Glucan ausgewählt ist, ist insoweit nicht besonders eingeschränkt, als sie eine wässerige Lösung ist, die eine Komponente enthält, die unter einer von einem Pilz abgeleiteten Komponente und β-Glucan ausgewählt ist, und es ist nicht erforderlich, dass die Komponente in der wässerigen Lösung vollständig aufgelöst ist. Beispielsweise kann sie eine Pilzextrakt enthaltende wässerige Lösung oder eine wässerige Lösung sein, die einen Wasserextrakt eines Pilzes enthält, oder sie kann eine Kulturlösung sein, die Kulturprodukte von Pilzmyzelien enthält. Die wässerige Lösung ist nicht besonders auf eine Lösung eingeschränkt, die neben der von einem Pilz abgeleiteten Komponente nur Wasser enthält, sodass die Lösung vielmehr eine andere Komponente zusätzlich zu Wasser und der Komponente, die unter einer von einem Pilz abgeleiteten Komponente und β- Glucan ausgewählt ist, enthalten kann. Die wässerige Lösung, die β-Glucan (Komponente) enthält, ist ebenfalls nicht besonders eingeschränkt und kann eine wässerige Lösung sein, die β-Glucan enthält, und es ist nicht erforderlich, dass β-Glucan in der wässerigen Lösung vollständig aufgelöst wird, und es kann eine β-Glucan enthaltende wässerige Lösung eingesetzt werden. Wie vorstehend beschrieben wurde, kann dieses β-Glucan eine Komponente sein, die von einem Pilz abgeleitet ist, oder es kann nicht dasjenige sein, das in den von einem Pilz abgeleiteten Komponenten enthalten ist. Dementsprechend kann die vorstehend beschriebene β-Glucan-Extraktkomponente dafür eingesetzt werden.
Was die Menge des verbrauchten Dispergiermittels betrifft, kann ein Dispergiermittel mit der wässerigen Lösung, welche die Komponenten (oder alle Komponenten) enthält, die unter einer von einem Pilz abgeleiteten Komponente und β-Glucan ausgewählt sind, gemischt werden, sodass das Gewichtsverhältnis des Dispergiermittels zu dem Gesamtzucker (1) (Gesamtmenge des Zuckers), der in der wässerigen Lösung enthalten ist, welche die Komponenten enthält, die unter einer von einem Pilz abgeleiteten Komponente und β-Glucan ausgewählt sind, vorzugsweise höchstens 100 (100 oder weniger), stärker bevorzugt 10 oder weniger, noch stärker bevorzugt 0,05 bis etwa 5 ist.
Der Gehalt einer Komponente, die unter einer von einem Pilz abgeleiteten Komponente und β-Glucan ausgewählt ist, in der wässerigen Lösung ist nicht besonders eingeschränkt, es ist jedoch hinsichtlich der Löslichkeit bevorzugt, dass der Gehalt der Komponenten (oder der gesamten Komponenten), die unter einer von einem Pilz abgeleiteten Komponente und β-Glucan ausgewählt sind, in der wässerigen Lösung bestimmt werden können, sodass die Konzentration des Gesamtzuckers höchstens 50 mg/ml (nicht höher als 50 mg/ml), stärker bevorzugt im Bereich von 0,5 bis etwa 50 mg/ml ist.
Die Art usw. des Dispergiermittels ist nicht besonders eingeschränkt, und Beispiele des Dispergiermittels umfassen oberflächenaktive Mittel, Polymere, Zucker, Zuckeralkohole, Glyceride, Säuren, Basen, Salze und dergleichen. Unter diesen ist ein Emulgiermittel als typisches Beispiel der oberflächenaktiven Mittel bevorzugt, wobei Lecithin stärker bevorzugt eingesetzt werden kann.
Die erfindungsgemäßen superfeinen Teilchen können im Zustand von Mizellen mit einem Emulgiermittel erhalten und verwendet werden.
Obwohl das Verfahren der Feinpulverisierungsbehandlung nicht besonders eingeschränkt ist, ist ein Nassmahlverfahren mit einem Hochdruckemulgiergerät (Homogenisator), eine Mediummühle, Ultraschallwellen (Ultraschallgerät) und dergleichen bevorzugt. Beispielsweise kann das Hochdruckemulgiergerät eingesetzt werden, um superfeine Teilchen von 1 μm oder weniger, wie vorstehend beschrieben, herzustellen. Der angewandte Emulgierdruck ist vorzugsweise mindestens 300 kgf/cm², stärker bevorzugt mindestens 500 kgf/cm², noch stärker bevorzugt mindestens 800 kgf/cm², und der Emulgierdruck kann durch Erhöhen der Anzahl der Behandlungswiederholungen verringert werden.
Die superfeinen Teilchen können vorzugsweise durch Filtrieren eines Wasserextrakts oder Heißwasserextrakts (Lösung) eines Pilzes oder einer Extraktionslösung von β-Glucan durch ein Filterpapier und dergleichen, wobei ein wässerige Lösung erhalten wird, die einen Filterextrakt oder einen β-Glucan- Extrakt enthält, und durch Zumischen eines Dispergiermittels vorzugsweise unter Rühren erhalten werden. Die superfeinen Teilchen, die Teilchen mit einem mittleren Teilchendurchmesser von 10 μm oder weniger aufweisen, können auf diese Weise erhalten werden.
In diesem Fall ist es möglich, beispielsweise nicht nur eine wässerige Lösung, die Aggregate enthält, die durch Filtrieren eines Wasser- oder Heißwasserextrakts eines Pilzes als die Pilzextrakt enthaltende wässerige Lösung (die wässerige Lösung, die einen Pilzextrakt enthält) durch beispielsweise ein Filterpapier und dergleichen und durch anschließendes Konzentrieren und/oder Kühlen des Filtrats erhalten wird, sondern auch die wässerige Lösung einzusetzen, die beim Konzentrieren und/oder Kühlen Aggregate ergibt. Das β-Glucan kann auch durch Herstellen derselben wässerigen Lösung wie vorstehend beschrieben durch dasselbe Behandlungsverfahren wie vorstehend beschrieben eingesetzt werden.
Für die Verwendung als Immunaktivator oder Immunregulator können die superfeinen Teilchen in der Form einer wässerigen Lösung oder Dispersion eingesetzt werden, worin der aktive Bestandteil beispielsweise fein pulverisiert ist (ein Pilzextrakt, der wie vorstehend beschrieben mit einem Dispergiermittel behandelt worden ist), wobei die Mizellenform bevorzugt ist. Unter diesen kann der Pilzextrakt oder β-Glucan, behandelt mit einem Dispergiermittel, bequem eingesetzt werden. Somit fallen auch die superfeinen Teilchen in solchen verschiedenen Formen unter den Begriff der erfindungsgemäßen superfeinen Teilchen.
Der Extrakt mit heißem Wasser, beispielsweise der Extrakt eines Pilzes mit heißem Wasser, ist im Hinblick auf eine effi ziente Extraktion des aktiven (wirksamen) Bestandteils mit heißem Wasser aus einem Pilz nach dem Mahlen bevorzugt.
Die superfeinen Teilchen können durch die Schleimhäute im Dünndarm von Tieren, insbesondere Menschen, absorbiert und einverleibt (aufgenommen) werden, sodass sie eine immunaktivierende Wirkung oder eine immunregulierende Wirkung zeigen.
Ein weiterer Aspekt der vorliegenden Erfindung besteht in einem Immunaktivator und/oder Immunregulator, der dadurch gekennzeichnet ist, dass er beliebige vorstehend definierte superfeine Teilchen enthält (Immunaktivator/Immunregulator).
Ein weiterer Aspekt der vorliegenden Erfindung besteht in einer Arzneimittelzusammensetzung, die dadurch gekennzeichnet ist, dass sie beliebige vorstehend beschriebene superfeine Teilchen enthält (mittel (Medizin); Arzneimittelzubereitung). Diese Arzneimittelzusammensetzung kann einen pharmazeutisch geeigneten Träger, Arzneimittelträger (Füllstoff) (oder Verdünnungsmittel) und dergleichen enthalten.
Der Immun(Immunitäts)-Aktivator/Immunregulator kann auch in der Form eines Nahrungsmittels oder Getränks (Nahrungsmittel und/oder Getränk) eingesetzt werden.
Beispiele der vorstehend genannten Medizin umfassen ein Antitumormittel, ein Antiinfektionsmittel, ein Antivirenmittel, ein Mittel gegen Autoimmunkrankheiten, ein Antidiabetesmittel und ein Antiallergiemittel, sowie Arzneimittelzubereitungen für Krankheiten der Verdauungsorgane (therapeutische Mittel für das Reizdarmsyndrom (IBS), entzündliche Darmkrankheiten (IBD), Verstopfung, Durchfall und dergleichen).
Ein weiterer Aspekt der vorliegenden Erfindung besteht in einem Nahrungsmittel und Getränk (Nahrungsmittel und/oder Ge tränk), das dadurch gekennzeichnet ist, dass es beliebige vorstehend beschriebene superfeine Teilchen (erfindungsgemäße superfeine Teilchen) enthält. Der Gehalt der superfeinen Teilchen ist nicht eingeschränkt, und der Gehalt der superfeinen Teilchen in einem Nahrungsmittel und Getränk, wie Gesundheitsnahrungsmittel, ist vorzugsweise etwa (annähernd) 0,01 bis 80 Gew.-%, stärker bevorzugt etwa (annähernd) 0,05 bis 20 Gew.-%, bezogen auf dessen Gesamtzuckergehalt.
Das erfindungsgemäße Nahrungsmittel und Getränk kann als Gesundheitsnahrungsmittel, funktionelle Nahrungsmittel, Gesundheitsgetränke, funktionelle Getränke und dergleichen eingesetzt werden. Das Nahrungsmittel und das Getränk sind insbesondere geeignet für Patienten mit Krankheiten, wie Krebs, Mikroben-Infektionskrankheiten, viralen Infektionskrankheiten, Autoimmunkrankheiten, Diabetes, Allergien und Krankheiten der Verdauungsorgane (Reizdarmsyndrom (IBS), entzündliche Darmkrankheiten (IBD), Verstopfung, Durchfall und dergleichen).
Ein weiterer Aspekt der vorliegenden Erfindung besteht in einer Zusammensetzung, die superfeine Teilchen enthält und dadurch gekennzeichnet ist, dass sie eine wässerige Lösung mit den darin dispergierten erfindungsgemäßen superfeinen Teilchen enthält, das heißt eine wässerige Lösung (Dispersion und dergleichen), welche die superfeinen Teilchen enthält.
Die Dispersion usw. kann in einer Arzneimittelzusammensetzung (Arzneimittelzubereitung) auf dieselbe Weise wie vorstehend beschrieben verwendet werden. In diesem Fall kann die Arzneimittelzusammensetzung einen pharmazeutisch geeigneten Träger oder Arzneimittelträger (Füllmittel) enthalten.
Die Dispersion usw. kann in einem Nahrungsmittel und Getränk (Nahrungsmittel und/oder Getränk) auf dieselbe Weise wie vorstehend beschrieben eingesetzt werden. In diesem Fall kann das Nahrungsmittel und Getränk (Nahrungsmittel und/oder Getränk) die Zusammensetzung in einer Menge von 0,05 bis 5 Gew.-%, ausgedrückt als (bezogen auf) Gesamtzuckergehalt, enthalten.
Das erfindungsgemäße Nahrungsmittel und Getränk kann als Gesundheitsnahrungsmittel, funktionelles Nahrungsmittel, Gesundheitsgetränk, funktionelles Getränk usw. verwendet werden. Das Nahrungsmittel und Getränk sind geeignet vorzugsweise für Patienten mit Krankheiten, wie Krebs, Mikroben-Infektionskrankheiten, viralen Infektionskrankheiten, Autoimmunkrankheiten, Diabetes, Allergien und Krankheiten der Verdauungsorgane (Reizdarmsyndrom (IBS), entzündliche Darmkrankheiten (IBD), Verstopfung, Durchfall und dergleichen).
Was den Gehalt der Komponenten in der Zusammensetzung betrifft, kann die Zusammensetzung Zucker in einer Menge von vorzugsweise 1 bis 20000 mg, stärker bevorzugt 10 bis 1000 mg und Dispergiermittel in einer Menge von 1 bis 20000 mg, stärker bevorzugt 10 bis 1000 mg pro 100 g der Zusammensetzung enthalten.
Die Zusammensetzung, die superfeine Teilchen enthält, ist insoweit nicht besonders eingeschränkt, als sie eine Zusammensetzung ist, welche die superfeinen Teilchen einer aus einem Pilz abgeleiteten Komponente, β-Glucan und dergleichen enthält. Die Zusammensetzung umfasst vorzugsweise die wässerige Lösung, welche die superfeinen Teilchen einer von einem Pilz abgeleiteten Komponente oder β-Glucan und ein Dispergiermittel, stärker bevorzugt die superfeinen Teilchen enthält, die durch Mischen der wässerigen Lösung, welche die Komponenten enthält, mit einem Dispergiermittel hergestellt werden, wobei die superfeinen Teilchen in der wässerigen Lösung dispergiert sind, und dergleichen.
Ein weiterer Aspekt der vorliegenden Erfindung besteht in einem Verfahren zur Herstellung der superfeinen Teilchen, welches dadurch gekennzeichnet ist, dass eine Komponente, die unter einer von einem Pilz abgeleiteten Komponente und β-Glucan ausgewählt ist, das heißt eine Komponente, die von einem Pilz abgeleitet ist, oder β-Glucan, der Stufe der superfeinen Pulverisierung unterworfen wird, beispielsweise ein Verfahren zum Herstellen von superfeinen Teilchen, welches die Extraktion eines Pilzes mit Wasser und die superfeine Pulverisierung des erhaltenen wässerigen Extrakts umfasst.
Insbesondere können die superfeinen Teilchen, die Teilchen mit einem mittleren Durchmesser von 10 μm oder weniger enthalten, durch Filtrieren eines Wasser- oder Heißwasserextrakts eines Pilzes durch ein Filterpapier und dergleichen hergestellt werden, wobei eine Pilzextrakt enthaltende wässerige Lösung (eine wässerige Lösung, die einen Extrakt aus einem Pilz enthält) erhalten wird, und anschließendes Zumischen eines Dispergiermittels vorzugsweise unter Rühren produziert werden. In diesem Fall ist es möglich, nicht nur eine wässerige Lösung, die Aggregate, erhalten durch Filtrieren eines Wasser- oder Heißwasserextrakts eines Pilzes als die Pilzextrakt enthaltende wässerige Lösung (wässerige Lösung, die den Extrakt enthält) durch beispielsweise ein Filterpapier und anschließendes Konzentrieren und/oder Kühlen des Filtrats, enthält, sondern auch das wässerige Filtrat als solches aus der Filtration, das wie vorstehend beschrieben beim Konzentrieren und/oder Kühlen Aggregate ergibt, einzusetzen. Im Fall von β-Glucan können die gewünschten Teilchen auch auf dieselbe Weise wie vorstehend beschrieben hergestellt werden.
Die Stufe der superfeinen Pulverisierung kann eine Stufe umfassen, bei der Teilchen mit einem mittleren Teilchendurchmesser von 10 μm oder weniger durch Mischen eines Dispergiermittels mit einer wässerigen Lösung, enthaltend eine Komponente, die unter einer von einem Pilz abgeleiteten Komponente und β-Glucan ausgewählt ist, beispielsweise mit einer wässerigen Lösung, die eine Komponente enthält, die von einem Pilz abgeleitet ist, hergestellt werden, und die Stufe der superfeinen Pulverisierung kann eine Stufe umfassen, bei der Teilchen mit einem mittleren Teilchendurchmesser von 1 μm oder weniger durch Feinpulverisierungsbehandlung hergestellt werden, beispielsweise eine Stufe, bei der eine Behandlung mit (durch) einem Hochdruckemulgiergerät durchgeführt wird.
Durch dieses Verfahren können die superfeinen Teilchen, die vorzugsweise eine immunaktivierende Aktivität und/oder eine immunregulierende Aktivität haben, erhalten werden.
Ein weiterer Aspekt der vorliegenden Erfindung besteht in einem Verfahren zur Herstellung einer Zusammensetzung, welche die superfeinen Teilchen enthält, dadurch gekennzeichnet, dass eine Komponente, die unter einer von einem Pilz abgeleiteten Komponente und β-Glucan ausgewählt ist, beispielsweise eine Komponente, die von einem Pilz abgeleitet ist, einer superfeinen Pulverisierung unterworfen wird.
Dieses Verfahren kann gemäß dem vorstehend beschriebenen Verfahren zur Herstellung der superfeinen Teilchen durchgeführt werden. Die Stufe der superfeinen Pulverisierung kann auf ähnliche Weise eine Stufe zur Herstellung von Teilchen mit einem mittleren Teilchendurchmesser von 10 μm oder weniger durch Mischen eines Dispergiermittels mit einer wässerigen Lösung, enthaltend eine Komponente, die unter einer von einem Pilz abgeleiteten Komponente und β-Glucan ausgewählt ist, oder eine Stufe umfassen, bei der Teilchen mit einem mittleren Teilchendurchmesser von 1 μm oder weniger durch Feinpulverisierungsbehandlung hergestellt werden, beispielsweise eine Stufe, bei der eine Behandlung mit (durch) einem Hochdruckemulgiergerät durchgeführt wird. Außerdem kann die Komponente, die unter einer von einem Pilz abgeleiteten Komponente und β-Glucan ausgewählt ist, ein Wasser- oder Heißwasserextrakt sein, der durch Extraktion eines Pilzes mit Wasser oder heißem Wasser erhalten wird, und die wässerige Lösung, die eine von einem Pilz abgeleitete Komponente enthält, kann eine wässerige Lösung sein, die einen Pilzextrakt (einen Extrakt eines Pilzes) enthält, erhalten durch Filtrieren eines Wasser- oder Heißwasserextrakts eines Pilzes durch ein Filterpapier und dergleichen. Andererseits kann im Fall des β-Glucan-Extrakts die Herstellung auf analoge Weise durchgeführt werden.
Durch dieses Verfahren kann die Dispersion, die vorzugsweise eine immunaktivierende Wirkung und/oder eine immunregulierende Wirkung und dergleichen hat, erhalten werden.
Der mittlere Teilchendurchmesser in den vorstehend beschriebenen Verfahren betrifft den mittleren Teilchendurchmesser der Teilchen, die in der Form einer wie vorstehend beschriebenen Dispersion in Wasser gemessen (bestimmt) wird.
Ein weiterer Aspekt der vorliegenden Erfindung besteht in einem Verfahren zur Aktivierung der Immunität oder ein Verfahren zum Regulieren der Immunität, dadurch gekennzeichnet, dass die erfindungsgemäßen superfeinen Teilchen in einen le benden Körper aufgenommen oder verabreicht werden, wobei das Verfahren für die Behandlung, Linderung, Verhinderung des Ausbreitens, Prophylaxe und dergleichen von Krankheiten, wie Tumoren, Infektionskrankheiten, viralen Infektionen, Autoimmunkrankheiten, Diabetes, Allergien und Krankheiten der Verdauungsorgane (Reizdarmsyndrom (IBS), entzündliche Darmkrankheiten (IBD), Verstopfung, Durchfall und dergleichen) und dergleichen extrem nützlich.
Was die Formen zur Aufnahme oder Verabreichung betrifft, ist es möglich, den Immunaktivator und den Immunregulator usw., oder das Antitumormittel, Antiinfektionsmittel, Antivirenmittel, Mittel gegen Autoimmunkrankheiten, Antidiabetesmittel und Antiallergiemittel, sowie Arzneimittelzubereitungen für Krankheiten der Verdauungsorgane (therapeutische Mittel für das Reizdarmsyndrom (IBS), entzündliche Darmkrankheiten (IBD), Verstopfung, Durchfall und dergleichen) wie vorstehend beschrieben einzusetzen. Insbesondere können die superfeinen Teilchen vorzugsweise in der Form der vorstehend beschriebenen Arzneimittelzusammensetzung und des Nahrungsmittels und Getränks (Nahrungsmittels und/oder Getränks) eingesetzt werden.
Ein weiterer Aspekt der vorliegenden Erfindung besteht in der Verwendung der neuen superfeinen Teilchen in einem (für einen) Immunaktivator oder Immunregulator oder dessen Herstellung, oder in der Verwendung der superfeinen Teilchen in einem (für ein) Antitumormittel, Antiinfektionsmittel, Antivirenmittel, Mittel gegen Autoimmunkrankheiten, Antidiabetesmittel und Antiallergiemittel, sowie Arzneimittelzubereitungen für Krankheiten der Verdauungsorgane (therapeutische Mittel für das Reizdarmsyndrom (IBS), entzündliche Darmkrankheiten (IBD), Verstopfung, Durchfall und dergleichen) und der gleichen, und außerdem in der Verwendung der superfeinen Teilchen in der (für die) Herstellung von Arzneimittelzubereitungen.
Der Immunaktivator und der Immunregulator, oder das Antitumormittel, Antiinfektionsmittel, Antivirenmittel, Mittel gegen Autoimmunkrankheiten, Antidiabetesmittel und Antiallergiemittel, sowie Arzneimittelzubereitungen für Krankheiten der Verdauungsorgane (therapeutische Mittel für das Reizdarmsyndrom (IBS), entzündliche Darmkrankheiten (IBD), Verstopfung, Durchfall und dergleichen) und dergleichen sind wie vorstehend beschrieben, wobei bevorzugte Beispiele davon die Form der Arzneimittelzusammensetzung oder die Form, die für das Nahrungsmittel und Getränk (Nahrungsmittel und/oder Getränk) eingesetzt wird und vorstehend beschrieben wurde, umfassen.
Kurze Beschreibung der Zeichnungen
[1]
1 zeigt die Teilchengrößenverteilung eines Shiitake-Extrakts und eines mizellenförmigen Shiitake-Extrakts in Beispiel 1.
Bei der Behandlung des Shiitake-Extrakts mit einem Emulgiermittel (Umwandlung in Mizellen) in Beispiel 1 sind die Teilchengrößenverteilungen des Shiitake-Extrakts (links: 1-a) und des mizellenförmigen Shiitake-Extrakts (erfindungsgemäßes Produkt) (rechts: 1-b) gezeigt. Der Teilchendurchmesser (μm) ist auf der Abszisse gezeigt, der Prozentsatz (%) der Häufigkeit der Teilchen für das Balkendiagramm ist auf der Ordinate (links) gezeigt, und der Prozentsatz (%) der kumulativen Häufigkeit der Teilchen für die Kurve ist auf der Ordinate (rechts) gezeigt.
[2]
2 zeigt die Teilchengrößenverteilung einer β-Glucan-Lösung und eines mizellenförmigen β-Glucans in Beispiel 2.
Bei der Behandlung des β-Glucans mit einem Emulgiermittel (Umwandlung in Mizellen) in Beispiel 2 sind die Teilchengrößenverteilungen der β-Glucan-Lösung (links: 2-a) und des mizellenförmigen β-Glucans (erfindungsgemäßes Produkt) (rechts: 2-b) gezeigt. Der Teilchendurchmesser (μm) ist auf der Abszisse angegeben, der Prozentsatz (%) der Häufigkeit der Teilchen für das Balkendiagramm ist auf der Ordinate (links) gezeigt, und der Prozentsatz (%) der kumulativen Häufigkeit der Teilchen für die Kurve ist auf der Ordinate (rechts) angegeben.
Ausführungsform der Erfindung
Im Folgenden wird die Ausführungsform der Erfindung eingehender beschrieben. Bevorzugte und typische Beispiele der vorliegenden Erfindung werden hauptsächlich beschrieben, die vorliegende Erfindung ist jedoch auf diese bevorzugten und typischen Beispiele nicht beschränkt.
(Superfeine Teilchen; superfeine Teilchen eines Pilzextrakts, eines β-Glucan-Extrakts und dergleichen)
Zuerst werden die erfindungsgemäßen superfeinen Teilchen hauptsächlich unter Bezugnahme auf die Produktion der superfeinen Teilchen eines Pilzextrakts beschrieben.
In der vorliegenden Erfindung ist die Art des Pilzes nicht besonders eingeschränkt. Außerdem ist auch die Stelle, die für die Extraktion verwendet wird, nicht besonders eingeschränkt. Es können essbare Pilze verwendet werden. Typische Beispiele umfassen, wobei sie jedoch nicht darauf beschränkt sind, die Folgenden.
Die in der vorliegenden Erfindung eingesetzten Pilze beziehen sich auf Pilze, die einen Fruchtkörper ausbilden können.
Lentinus edodes
Pleurotus ostreatus
Pholiota nameko
Flammulina velutipes
Tricholoma matsutake
Lyophyllum shimeji
Schizophyllum commune
Crepidotus variabilis
Lyophyllum ulmarium
Grifola umbellata
G. frondosa
Coriolus versicolor
Fomes fomentarius
Volvavella volvacea
Auricularia aurcula-judae
Ganoderma lucidum
G. applanatum
Fomitopsis pinicola
Dictyophora indusiata
Sparassis crispa
Agaricus blazei
Peziza vesiculosa
Die verwendete Stelle des Pilzes ist nicht besonders auf spezielle Bereiche, wie den Fruchtkörper, das Myzelium und dergleichen, wie vorstehend beschrieben, beschränkt. Die Bestandteile des Ausgangspilzes variieren in Abhängigkeit von der Art des Pilzes, wobei beispielsweise ein Shiitake- Fruchtkörper aus etwa 90 Gew.-% Wasser, etwa 5 Gew.-% Zucker, etwa 2 Gew.-% Protein, etwa 1 Gew.-% Faser und etwa 2 Gew.-% anderen Komponenten besteht. Dementsprechend ist der aktive (wirksame) Bestandteil in der vorliegenden Erfindung ein superfeines Teilchen der Nicht-Wasserkomponenten, die mit Wasser (heißem Wasser und dergleichen) extrahiert werden.
Einerseits ist β-Glucan ebenso nicht besonders eingeschränkt und kann eine von einem Pilz abgeleitete Komponente, eine von einer Hefe abgeleitete Komponente, eine von einem Pilz abgeleitete Komponente, eine von einem Bakterium (Bakterien) abgeleitete Komponente, eine von einer oder mehreren Pflanzen abgeleitete Komponente und dergleichen sein.
Es ist nicht besonders schwierig, einen Extrakt einer von einem Pilz abgeleiteten Komponente oder von β-Glucan zu erhalten. Beispielsweise kann ein Pilz bei der Extraktion mit Wasser, beispielsweise heißem Wasser, eingesetzt werden. In diesem Fall kann die Extraktionsstufe auf einfache Weise dadurch durchgeführt werden, dass das gemahlene Material einer Extraktion mit heißem Wasser unterworfen wird. Wenn heißes Wasser eingesetzt wird, wird eine Temperatur von etwa 60 bis 100°C eingesetzt. Ein Filtrat, das mit einem Filterpapier (das Filterpapier kann bei Bedarf ohne besondere Einschränkung seines Typs ausgewählt sein) und dergleichen nach der Extraktionsstufe erhalten wird, selbst wenn das Filtrat eine Suspension ist, die fein pulverisierte Teilchen enthält, oder eine Lösung, die durch weiteres Konzentrieren, Kühlen und dergleichen der Suspension erhaltene Aggregate enthält, fällt unter die Definition des erfindungsgemäßen Extrakts.
Der erfindungsgemäße Extrakt kann eine Komponente (die nicht unbedingt vollständig aufgelöst sein muss) sein, die in der Extraktionsstufe mit Wasser (heißem Wasser und dergleichen), wie vorstehend beschrieben wurde, in Wasser enthalten ist, und deshalb fällt das Filtrat, das durch Filtration durch ein Filterpapier und dergleichen nach der Extraktionsstufe erhalten wird, und die Feinteilchenkomponente (Aggregate), die durch Konzentration, Kühlen und dergleichen aus der Extraktionslösung koaguliert wird, ebenfalls unter die Definition dieses Extrakts.
Als Extraktionslösungsmittel ist es möglich, nicht nur Wasser, sondern auch andere organische Lösungsmittel einzusetzen, wobei das Extraktionslösungsmittel jedoch vorzugsweise Wasser allein oder ein Mischlösungsmittel aus Wasser und einer kleinen Menge eines organischen Lösungsmittels ist, wobei die Extraktion mit einer solchen Wasser enthaltenden Lösung selbstverständlich auch unter die Definition der Wasserextraktion in der vorliegenden Erfindung fällt. Selbst wenn eine Säure, eine Base oder eine anorganische Substanz in dem Extraktionslösungsmittel enthalten ist oder bei Bedarf in einem solchen Bereich zugegeben wird, dass die Menge des Pilzextrakts nicht beeinträchtigt wird, besteht hier außerdem kein Problem.
Durch weiteres Unterziehen der extrahierten Komponente unter eine Stufe der superfeinen Pulverisierung können superfeine Teilchen mit einer immunaktivierenden Wirkung oder einer immunregulierenden Wirkung hergestellt werden.
Im Folgenden wird die Produktion der erfindungsgemäßen superfeinen Teilchen unter Bezugnahme auf die bevorzugten Beispiele eingehender beschrieben.
In einem Extrakt eines Pilzes mit heißem Wasser und dergleichen, beispielsweise in einem durch Extraktion, anschließendem Filtrieren des heißen Extrakts (Filtration durch Celite und dergleichen) und Kühlen des Filtrats oder durch Konzentration und anschließendes Kühlen des Filtrats erhaltenen Extrakts werden Aggregate mit einem mittleren Teilchendurchmesser von 100 μm oder mehr koaguliert. Die Aggregate werden als solche betrachtet, die durch Aggregation von Polysacchariden, wie β-Glucan oder Peptidoglycan und dergleichen in den Extrakt gebildet werden. Wenn beispielsweise ein Filtrat, das durch Extrahieren aus einem gemahlenen Ausgangs-Shiitake-Pilz bei 95°C während 3 bis 15 Stunden und durch Filtrieren des Extrakts durch Celite erhalten wird, beobachtet wird, wird bestätigt, dass das Filtrat eine Suspension mit fein pulverisierten Teilchen ist, die in dem Filtrat dispergiert sind. Durch Messen des Teilchendurchmessers dieser Teilchen wurde auch bestätigt, dass die Teilchen Aggregate mit einem mittleren Durchmesser von etwa 250 μm sind, und dass die Komponenten dieser Teilchen β-Glucan, Peptidoglycan und dergleichen sind.
Wenn ein solcher Extrakt (Extrakt, der Aggregate enthält, die jeweils einen mittleren Teilchendurchmesser von 100 μm oder mehr haben) oral aufgenommen oder verabreicht wird, wird der aktive (wirksame) Bestandteil in jedem Extrakt durch die Schleimhaut im Verdauungstrakt nicht effizient absorbiert und wird somit vom Körper nicht effektiv genutzt. Gemäß den erfindungsgemäßen superfeinen Teilchen kann andererseits der aktive Bestandteil in dem Extrakt durch die Schleimhäute in dem Verdauungstrakt effizient absorbiert und einverleibt werden, um eine Immunreaktion in Lamina propria mucosae zu induzieren oder zu bewirken.
Das heißt, die Pilzextraktlösung, die Aggregate enthält, die durch Filtrieren eines heißen Extrakts eines Pilzes mit Wasser (heißes Wasser und dergleichen) und durch Kühlen des Filtrats oder Konzentrieren und Kühlen des Filtrats erhalten werden, wird mit einem Dispergiermittel und dergleichen dispergiert, um die koagulierten Aggregate zu dispergieren, wodurch superfeine Teilchen mit einem mittleren Teilchendurchmesser von vorzugsweise 10 μm oder weniger, stärker bevorzugt 1 μm oder weniger, noch stärker bevorzugt 0,01 bis 1 μm erhalten werden können.
Für die superfeine Pulverisierung des aktiven Bestandteils oder der koagulierten Aggregate in dem Pilzextrakt kann ein Dispergiermittel in einer Lösung, die den aktiven Bestandteil des Pilzextrakts, der darin enthalten ist, umfasst, eingesetzt werden, sodass die koagulierten Aggregate dispergiert werden, oder der aktive Bestandteil des darin enthaltenen Pilzextrakts kann in Mikrokapseln und dergleichen eingebettet werden, oder die koagulierten Aggregate können mit einem Dispergiermittel dispergiert werden und dann in Mikrokapseln und dergleichen eingebettet werden.
Ob eine immunaktivierende Wirkung vorhanden ist oder nicht, kann auf einfache Weise dadurch bestätigt werden, dass eine Antitumorwirkung, eine NK(natürliche Killer)-Wirkung, verzögerte hypersensitive Reaktion, die Menge von intrazellulären und extrazellulären Zytokinen, die Menge der hergestellten Antikörper oder dergleichen gemessen wird.
Das Verfahren der superfeinen Pulverisierung ist nicht besonders eingeschränkt, wobei die superfeine Pulverisierung beispielsweise mit einem Rührer oder einem Homogenisator und einem geeigneten Dispergiermittel bewirkt werden kann. Außerdem kann die superfeine Pulverisierung auch durch Feinpulverisierungsbehandlung mit einem Hochdruckemulgiermittel, einer Mediummühle, Ultraschallwellen und dergleichen bewirkt werden.
Wenn ein Dispergiermittel eingesetzt wird, ist das Dispergiermittel insoweit nicht besonders eingeschränkt, als es ein Dispergiermittel ist, das die Teilchen in einer Lösung dispergieren kann, wobei Beispiele davon oberflächenaktive Mittel, Polymere, Zucker, Zuckeralkohole, Glyceride, Säuren, Basen, Salze und dergleichen umfassen. Die Substanzen, die auch als Emulgiermittel eingesetzt werden, werden hierfür vorzugsweise eingesetzt. Die hierfür eingesetzten Emulgiermittel sind stärker bevorzugt essbare Emulgiermittel, wie Lecithin, Lysolecithin, Gallensäure und dergleichen. In der vorliegenden Beschreibung bezieht sich die Dispersion mit einem Emulgiermittel insbesondere auf die Umwandlung in Mizellen (Mizellenbildung), die vorliegende Erfindung ist jedoch nicht darauf beschränkt, wobei die Umwandlung in Mizellen mit einem Dispergiermittel, das nicht ein Emulgiermittel ist, ebenfalls unter den Umfang der vorliegenden Erfindung fällt.
Die in der vorliegenden Erfindung eingesetzte Stufe der feinen Pulverisierung kann zu jedem Zeitpunkt vor, nach und während der Stufe durchgeführt werden, bei der der aktive Bestandteil erhalten wird, beispielsweise in der Extraktionsstufe.
Wenn die erfindungsgemäßen superfeinen Teilchen in der Form einer Dispersion im Wasser gemessen werden, können die superfeinen Teilchen mit einem mittleren Teilchendurchmesser von vorzugsweise 10 μm oder weniger, stärker bevorzugt 1 μm oder weniger, noch stärker bevorzugt 0,01 bis 1 μm oder weniger, eingesetzt werden. Wenn sie als Immunaktivator/Immunregulator eingesetzt wird, wird eine Lösung (dispergierte Lösung) der superfeinen Teilchen, die mit einem Dispergiermittel behandelt wurden, insbesondere eine mizellenförmige Lösung, die mit einem Emulgiermittel behandelt wurde, vorzugsweise für die Verdauung und Aufnahme eingesetzt, die superfeinen Teilchen können jedoch auch im Trockenzustand als Immunaktivator/Immunregulator verwendet werden.
In der vorliegenden Erfindung kann das Verfahren zum Messen (Bestimmen) der superfeinen Teilchen durch Einsatz eines Verfahrens zum Messen üblicher Teilchen, insbesondere dispergierter Teilchen, durchgeführt werden. Beispielsweise können die superfeinen Teilchen mit einem Laserbeugungs-/Streuungs-Verfahren zum Messen der Teilchengrößenverteilung unter Verwendung eines Teilchengrößenverteilungsmessgeräts gemessen werden.
(Immunaktivator/Immunregulator)
Wie vorstehend bereits in einem gewissen Maß beschrieben wurde, können die erfindungsgemäßen superfeinen Teilchen als der aktive Bestandteil eines Immunaktivators/Immunregulators (erfindungsgemäßer Immunaktivator/Immunregulator) eingesetzt werden. Ein Träger oder ein Arzneimittelträger (Füllstoff)(oder ein Verdünnungsmittel), das in der Arzneimittelzusammensetzung oder dem Nahrungsmittel und Getränk (Nahrungsmittel und/oder Getränk) gemäß der vorliegenden Erfindung einsetzbar ist, kann ebenfalls verwendet werden. Genauer gesagt kann der Immunaktivator/Immunregulator als die Arzneimittelzusammensetzung, das Nahrungsmittel und Getränk (Nahrungsmittel und/oder Getränk) (Gesundheitsnahrungsmittel usw.) und dergleichen eingesetzt werden.
Ob eine immunaktivierende Wirkung oder eine immunregulierende Wirkung vorhanden ist oder nicht, kann auf einfache Weise dadurch bestätigt werden, dass beispielsweise die Antitumoraktivität, NK-Aktivität, verzögerte hypersensitive Reaktion, die Menge der intrazellulären und extrazellulären Zytokine oder die Menge der hergestellten Antikörper gemessen wird.
(Arzneimittelzusammensetzung)
Die erfindungsgemäße Arzneimittelzusammensetzung (Mittel; Arzneimittel; pharmazeutische Zubereitung) ist ein Mittel (Arzneimittelzubereitung), das die vorstehend beschriebenen superfeinen Teilchen, vorzugsweise die Lösung, die mit einem Dispergiermittel behandelt wurde (dispergierte Lösung), stärker bevorzugt die Lösung umfasst, welche die mizellenförmigen Komponenten als aktiven Bestandteil mit einem Emulgiermittel enthält, und für die Behandlung, Linderung und Vorbeugung der Ausbreitung von Krankheiten, die mit Anomalien der Immunität einhergehen, oder für die Prophylaxe und dergleichen von anderen Krankheiten durch Aktivieren oder Regulieren der Immunität, insbesondere der systemischen Immunität, eingesetzt werden. Beispielsweise kann die Arzneimittelzusammensetzung als Antitumormittel, Mittel gegen Infektionen, Antivirenmittel, Mittel gegen Autoimmunkrankheiten, Antidiabetesmittel und Mittel gegen Allergien sowie als Mittel für Krankheiten der Verdauungsorgane (therapeutisches Mittel für das Reizdarmsyndrom (IBS), entzündliche Darmkrankheiten (IBD), Verstopfung, Durchfall und dergleichen), und für die Behandlung oder Prävention (Vorbeugung) dieser verschiedenen Krankheiten eingesetzt werden.
Das Individuum, an das dieses Mittel (Arzneimittelzubereitung) verabreicht wird, ist ein Tier, insbesondere ein Mensch, der einer Aktivierung oder Regulation der Immunität, insbesondere der systemischen Immunität bedarf.
Eine Eigenschaft der erfindungsgemäßen Arzneimittelzubereitung ist es, dass eine hervorragende Wirkung selbst bei ora ler Verabreichung erzielt wird; dass eine von einem Pilz abgeleitete Komponente oder β-Glucan, beispielsweise ein extrahiertes Gemisch aus einem Pilz, insbesondere aus einem essbaren Pilz und dergleichen eingesetzt werden kann; und dass die Arzneimittelzubereitung insbesondere hervorragende Sicherheit aufweist. Dementsprechend ist die Form der Verabreichung nicht besonders eingeschränkt. Verschiedene Formen der Verabreichung, wie die orale Verabreichung, die parenterale Verabreichung (subkutane Verabreichung, intramuskuläre Verabreichung, nasale Verabreichung, Aerosolverabreichung und dergleichen) können verwendet werden, und die Arzneimittelzubereitung kann über einen weiten Bereich und in einfacher Weise an Patienten verabreicht werden, die einer immunaktivierenden Wirkung und/oder einer immunregulierenden Wirkung bedürfen. Die Arzneimittelzubereitung ist sicher und für die orale Verabreichung geeignet und kann deshalb in der Form von Gesundheitsnahrungsmitteln, funktionellen Nahrungsmitteln, Gesundheitsgetränken, funktionellen Getränken und dergleichen wie nachstehend beschrieben eingesetzt werden, um die genannten Krankheiten zu verhindern oder zu lindern.
In der vorliegenden Erfindung kann die Arzneimittelzubereitung mit anderen Arzneimittelkomponenten (pharmazeutisch wirksamen Substanzen) gemischt oder kombiniert werden, und soweit eine bestimmte Arzneimittelzubereitung den gewünschten erfindungsgemäßen aktiven Bestandteil enthält, um die gewünschte pharmakologische Wirkung zu erzielen (immunaktivierende Wirkung oder immunregulierende Wirkung), fällt eine solche Arzneimittelzubereitung unter den Umfang der erfindungsgemäßen Arzneimittelzubereitung.
Zudem kann die Arzneimittelzubereitung auch verschiedene pharmakologisch geeignete Arzneimittelmaterialien (wie Zu satzstoffe und dergleichen) für die Arzneimittelzubereitung enthalten. Die Arzneimittelmaterialien können in geeigneter Weise in Abhängigkeit von der Form der Zubereitung ausgewählt werden, wobei Beispiele davon Träger, Verdünnungsmittel, Additive, Zerfallshilfsmittel, Bindemittel, Beschichtungsmittel, Gleitmittel, Aromastoffe, Süßstoffe, Emulgiermittel, Lösungsvermittler und dergleichen umfassen. Weitere Beispiele der Arzneimittelmaterialien umfassen Magnesiumcarbonat, Titandioxid, Lactose, Mannitol und andere Zucker, Talk, Milchprotein, Gelatine, Stärke, Cellulose und Derivate davon, tierische und pflanzliche Öle, Polyethylenglykol und Lösungsmittel, wie sterilisiertes Wasser und einwertige oder mehrwertige Alkohole, beispielsweise Glycerin.
Die erfindungsgemäße Arzneimittelzubereitung kann in verschiedenen pharmazeutischen Formen, die im Stand der Technik bekannt sind oder wie vorstehend beschrieben in der Zukunft entwickelt werden, beispielsweise in der Verabreichungsform für die orale Verabreichung, intraperitoneale Verabreichung, transdermale Verabreichung, Inhalationsverabreichung und dergleichen präpariert werden. Um das erfindungsgemäße Mittel (Arzneimittelzubereitung) in solchen verschiedenen Arzneimittelzubereitungsformen herzustellen, können im Stand der Technik bekannte oder in der Zukunft zu entwickelnde Verfahren in geeigneter Weise eingesetzt werden.
Die Formen dieser verschiedenen Arzneimittelzubereitungen umfassen beispielsweise geeignete feste oder flüssige Arzneimittelformen, wie Granulate, Pulver, beschichtete Tabletten, Tabletten, (Mikro)-Kapseln, Zäpfchen, Sirupe, Säfte, Suspensionen, Emulsionen, Tropfmittel, Injektionslösungen, Präparationen, welche das aktive Mittel über einen längeren Zeitraum freisetzen und dergleichen.
Selbstverständlich sollte die erfindungsgemäße Arzneimittelzubereitung in den vorstehend beschriebenen Arzneimittelzubereitungsformen eine pharmazeutisch wirksame Menge der vorstehend beschriebenen Komponenten enthalten.
Die Menge der verabreichten erfindungsgemäßen Arzneimittelzubereitung wird in geeigneter Weise in Abhängigkeit von dem Typ und der Schwere der Krankheit, der Form der Arzneimittelzubereitung und dergleichen ausgewählt. Beispielsweise können die superfeinen Teilchen des aktiven Bestandteils oral an einen Patienten in einer täglichen Dosis von vorzugsweise 1 mg bis 50 g oder dergleichen, stärker bevorzugt 10 mg bis 10 g oder dergleichen, noch stärker bevorzugt 50 mg bis 5 g oder dergleichen, ausgedrückt als Gesamtzuckergehalt davon, verabreicht werden. Im Fall schwererer Krankheiten kann die Dosis weiter erhöht werden. Was die Häufigkeit und die Abstände der Verabreichung betrifft, kann die Arzneimittelzubereitung aus den superfeinen Teilchen einmal pro mehrerer Tage oder einmal täglich verabreicht werden, sie wird jedoch üblicherweise beispielsweise vor, zwischen und/oder nach den Mahlzeiten (oder jeder Mahlzeit) in 2 bis 4 geteilten Portionen mehrmals täglich verabreicht. Vorzugsweise wird die Arzneimittelzubereitung der superfeinen Teilchen vor der Mahlzeit verabreicht. Im Fall der intravenösen Verabreichung kann die Dosis ein Zehntel bis ein Hundertstel (1/10 bis 1/100) der Dosis bei der oralen Verabreichung sein.
(Nahrungsmittel und Getränk)
Selbst wenn das erfindungsgemäße Nahrungsmittel und Getränk (Nahrungsmittel und/oder Getränk) insbesondere als Gesundheitsnahrungsmittel oder funktionelles Nahrungsmittel verabreicht wird, kann das Nahrungsmittel oder das Getränk auf der Grundlage der vorstehend beschriebenen oralen Zubereitung durch Zugeben von Komponenten (einschließlich Extrakte, die von anderen Pilzen abgeleitet sind) und Additiven, die für Gesundheitsnahrungsmittel oder funktionelle Nahrungsmittel erforderlich sind, hergestellt werden. Selbstverständlich können genießbare Bestandteile oder Nährstoffbestandteile und dergleichen, die in Nahrungsmitteln und Getränken eingesetzt werden, bei Bedarf zugegeben und verwendet werden. Üblicherweise können die superfeinen Teilchen in einer Menge von vorzugsweise 0,01 bis 80 Gew.-% oder dergleichen, stärker bevorzugt 0,05 bis 20 Gew.-% oder dergleichen, ausgedrückt als Gesamtzuckergehalt darin, enthalten sein.
Aromastoffe oder Süßstoffe, die in Nahrungsmitteln und Getränken einsetzbar sind, können verwendet werden, um eine Lösung zu bilden, die in der Form eines Getränks oder in der Form von Tabletten, Granulaten oder Kapseln, oder in der Form eines Gels oder einer Eiscreme oder in gefrorener Form oder dergleichen einsetzbar sind.
Das Nahrungsmittel oder das Getränk kann nicht nur für die Vorbeugung für gesunde Personen eingesetzt werden, sondern auch für Patienten mit schweren bis leichten verschiedenen Krankheiten, insbesondere für Patienten, die eine systemische Immunaktivierung oder Immunregulation wünschen, ohne dass eine Einschränkung auf Patienten mit Krankheiten besteht, die mit Anomalien der Immunfunktionen einhergehen. Für andere Tiere als Menschen können die Nahrungsmittel und Getränke in der Form von Futtermitteln, pharmazeutischen Produkten (Zubereitungen) und pharmazeutischen Zusammensetzungen angewandt werden.
(Zusammensetzung, die superfeine Teilchen enthält)
Die vorliegende Erfindung beruht auf einer wässerigen Lösung, worin die superfeinen Teilchen aus einer Komponente, die von einer aus einem Pilz abgeleiteten Komponente und β-Glucan ausgewählt ist, dispergiert werden, und die Erfindung kann auf einfache Weise verstanden und ausgeführt werden aufgrund der Beschreibung der superfeinen Teilchen und der verschiedenen Verwendungen oder Produktionsverfahren, die vorstehend beschrieben wurden. Selbstverständlich kann die Zusammensetzung, ähnlich wie die superfeinen Teilchen, in verschiedenen Verwendungen, beispielsweise für eine Arzneimittelzusammensetzung oder ein Nahrungsmittel und Getränk (Nahrungsmittel und/oder Getränk) eingesetzt werden, und die vorstehenden Beschreibungen hierfür können auf die vorliegende Erfindung angewandt werden.
Wie vorstehend beschrieben wurde, beruht ein weiterer Aspekt der vorliegenden Erfindung auf einem Verfahren zur Aktivierung der Immunität oder ein Verfahren zur Regulierung der Immunität, dadurch gekennzeichnet, dass die erfindungsgemäßen superfeinen Teilchen in einen Körper durch Verdauung aufgenommen oder verabreicht werden, und ein weiterer Aspekt der vorliegenden Erfindung beruht in der Verwendung der superfeinen Teilchen als Immunaktivator oder Immunregulator; oder die Verwendungen der superfeinen Teilchen als Antitumormittel, Mittel gegen Infektionen, Antivirenmittel, Mittel gegen Autoimmunkrankheiten, Antidiabetesmittel und Mittel gegen Allergien sowie als Arzneimittelzubereitungen für Krankheiten der Verdauungsorgane (therapeutische Mittel für das Reizdarmsyndrom (IBS), entzündliche Darmkrankheiten (IBD), Verstopfung, Durchfall und dergleichen), und dergleichen, und außerdem in einer Verwendung zur Herstellung der Arzneimittelprodukte (Zubereitungen).
Diese Erfindungen können auf einfache Weise auf der Grundlage der vorstehenden Beschreibung für den Immunaktivator oder Immunregulator oder auf der Grundlage der Beschreibungen für Antitumormittel, Mittel gegen Infektionen, Antivirenmittel, Mittel gegen Autoimmunkrankheiten, Antidiabetesmittel und Mittel gegen Allergien sowie für Arzneimittelzubereitungen für Krankheiten der Verdauungsorgane (therapeutische Mittel für das Reizdarmsyndrom (IBS), entzündliche Darmkrankheiten (IBD), Verstopfung, Durchfall und dergleichen), und dergleichen oder der Beschreibungen für Arzneimittelzusammensetzungen, Nahrungsmittel und Getränke (Nahrungsmittel und/oder Getränk) und dergleichen oder auf der Grundlage der bevorzugten Ausführungsformen (Beispiele), die später beschrieben werden, oder bei Bedarf unter Bezugnahme auf bekannte Techniken durchgeführt werden.
Diese Erfindung (erfindungsgemäßes Produkt) kann nicht nur in Menschen, sondern wie vorstehend beschrieben auch in anderen Tieren eingesetzt werden, und beispielsweise ist das erfindungsgemäße Produkt auch als Futtermittel für Tiere in der Tierindustrie (Rinder, Schweine, Schafe, Pferde, Vögel und dergleichen), für Haustiere (Hunde, Katzen und dergleichen) oder für Fische in der Fischereiindustrie und in der Aufzuchtindustrie (Grätenfische, Krustentiere und dergleichen) oder als Additive, die Futtermitteln zugegeben werden, oder als Arzneimittelzubereitungen oder Arzneimittelzusammensetzungen nützlich.
Bevorzugte Ausführungsformen
Im Folgenden wird die vorliegende Erfindung unter Bezugnahme auf die Produktionsbeispiele, Beispiele und Vergleichsbeispiele eingehender beschrieben, die vorliegende Erfindung ist jedoch nicht auf diese Beispiele beschränkt.
(Beispiel 1)
(Verfahren zur Extraktion aus einem Shiitake-Pilz)
Etwa 4 l Wasser wurden zu einem kg (ausgedrückt als Ausgangs-Shiitake-Pilz) Shiitake-Pilzen gegeben, und die Pilze wurden mit einer Kolloidmühle und dergleichen aufgebrochen (Volumen der Lösung nach dem Aufbrechen: etwa 6 l) und 15 Stunden bei 95°C unter Erhitzen unter Rückfluss erhitzt, um ein Verdampfen von Wasser zu verhindern, und der erhaltene Extrakt wurde filtriert. Das Filtrat wurde bei 60°C unter vermindertem Druck konzentriert, wobei etwa 1 l Konzentrat erhalten wurde. Der Extrakt wurde durch das Phenolschwefelsäureverfahren auf seinen Zuckergehalt analysiert, wobei sich zeigte, dass der Zuckergehalt in dem Extrakt 20 mg/ml war (dieser Extrakt kann im Folgenden als "Extrakt aus Shiitake" oder "Shiitake-Extrakt" bezeichnet werden).
(Behandlung des Shiitake-Extrakts mit einem Emulgiermittel [Umwandlung in Mizellen])
Lecithin (SLP-PC70), hergestellt von Tsuru Lecithin Kogyo Co., Ltd., wurde zu entionisiertem Wasser gegeben, um eine Lösung herzustellen, die Lecithin in derselben Konzentration wie der Gesamtzucker in dem Shiitake-Extrakt enthält. Zu der Lecithin-Lösung wurde dasselbe Volumen des vorstehend beschriebenen Shiitake-Extrakts gegeben, und das Gemisch wurde unter Vakuum (Vakuumdruck: –60 cmHg; Anzahl der Umdrehungen (Rotationshäufigkeit) eines Ankermischers: 50 UpM; Anzahl der Umdrehungen eines Homomischers: 15.000 UpM) mithilfe eines Agi-Homomischers 2M-2 model, hergestellt von Tokushu Kika Kogyo Co., Ltd., gerührt, wobei eine vorläufige mizellenförmige Lösung erhalten wurde. Die erhaltene vorläufig emulgierte Lösung wurde einer Hochdruckemulgierungsbehandlung (Emulgie rungsdruck: 1.500 kgf/cm²) mit einem Hochdruckemulgiergerät H11 model in einem 2-Stufensystem, hergestellt von Sanwa Kikai Co., Ltd., unterworfen, wobei eine mizellenförmige Lösung des Shiitake-Extrakts mit einem mittleren Durchmesser von etwa 100 nm erhalten wurde (mizellenförmiger Shiitake-Extrakt: erfindungsgemäßes Produkt). Die Messung des mittleren Durchmessers wurde mit einem Teilchengrößenverteilungsmessverfahren auf der Grundlage von Laserbeugung/Streuung unter Verwendung eines LA-910-Teilchengrößenverteilungsmessgeräts, hergestellt von Horiba Seisakusho Co., Ltd., durchgeführt.
Die Messergebnisse der Teilchengrößenverteilung des Shiitake-Extrakts und des mizellenförmigen Shiitake-Extrakts sind in 1 gezeigt. Die Ergebnisse zeigen, dass die Komponente in dem Shiitake-Extrakt einen mittleren Teilchendurchmesser von etwa 120 μm hatte, und dass durch Behandlung der Komponente in dem Shiitake-Extrakt mit einem Emulgiermittel ("Umwandlung in Mizellen"), die Komponente in superfeine Teilchen mit einem mittleren Teilchendurchmesser von etwa 0,09 μm umgewandelt werden konnte.
(Beispiel 2)
(Herstellung einer β-Glucan-Lösung)
Die Reinigung von β-Glucan aus Ausgangs-Shiitake-Pilzen wurde nach den Verfahren von Chihara et al. (Cancer Res., 30, 2776 (1970) durchgeführt. Das heißt, Fruchtkörper von Ausgangs-Shiitake-Pilzen wurden einer Extraktion mit heißem Wasser unterworfen, dann wiederholt einer Fraktionierungsausfällung mit Ethanol unterworfen, dann einer Fraktionierungsausfällung mit Cetyltrimethylammoniumhydroxid, einer Fraktionierungselution mit Essigsäure und dann einer Fraktionierungselution mit Natriumhydroxid und anschließendem Entfernen des Proteins un terworfen, wobei ein weißes Pulver von β-Glucan erhalten wurde. Das erhaltene weiße Pulver wurde in destilliertem Wasser suspendiert, homogenisiert und einer Hochtemperatur- und Hochdruckbehandlung (121°C, 20 Minuten) in einem Autoklav unterworfen, um eine Lösung von 2 mg/ml β-Glucan herzustellen.
(Behandlung von β-Glucan mit einem Emulgiermittel [Umwandlung in Mizellen])
Lecithin (SLP-PC70), hergestellt von Tsuru Lecithin Kogyo Co., Ltd. wurde zu entionisiertem Wasser gegeben, um eine Lösung herzustellen, die darin aufgelöstes Lecithin in einer Konzentration von 8 mg/ml enthält. Zu der Lecithin-Lösung wurde dasselbe Volumen der vorstehend beschriebenen β-Glucan-Lösung gegeben, und das Gemisch wurde einer Hochdruckemulgierungsbehandlung (Emulgierungsdruck: 1.500 kgf/cm²) mit einem Hochdruckemulgierer H11 model in einem 2-Stufensystem, hergestellt von Sanwa Kikai Co., Ltd., unterworfen, um eine mizellenförmige Lösung von β-Glucan mit einem mittleren Durchmesser von etwa 100 nm herzustellen (mizellenförmiges β-Glucan: erfindungsgemäßes Produkt). Die Messung des mittleren Durchmessers wurde mit einem Teilchengrößenverteilungsmessverfahren mittels Laserbeugung/Streuung unter Verwendung eines LA-910-Teilchengrößenverteilungsmessgeräts, hergestellt von Horiba Seisakusho Co., Ltd., durchgeführt.
Die Messergebnisse der Teilchengrößenverteilung der β-Glucan-Lösung und des mizellenförmigen β-Glucans sind in 2 gezeigt. Die Ergebnisse zeigen, dass β-Glucan in der β-Glucan-Lösung Aggregate mit einem mittleren Teilchendurchmesser von etwa 120 μm bildete, und durch Behandlung dieser Lösung mit einem Emulgiermittel ("Umwandlung in Mizellen") konnten die Aggregate in superfeine Teilchen mit einem mittleren Teilchendurchmesser von etwa 0,09 μm umgewandelt werden.
(Beispiel 3)
(Beispiel unter Verwendung eines 5180 subkutanen Animpfmodells)
(Testverfahren)
Sarcoma 180-Tumorzellen, die durch intraperitoneale Injektion in ICR-Mäuse (weiblich, 4 Wochen alt) gehalten wurden, wurden in der Form einer Asziten-Flüssigkeit gewonnen und in einer Dichte von 3 × 10⁷ Zellen/ml mit physiologischer Natriumchloridlösung präpariert. Die Zellsuspension wurde subkutan in einem Volumen von 0,1 ml/Maus mittels einer 25 G-Nadel in eine rechte Leiste der ICR-Mäuse (weiblich, 4 Wochen alt) eingeimpft.
Am nächsten Tag wurden die Mäuse in Abhängigkeit von ihrem Gewicht gruppiert (7 Mäuse/Gruppe) und identifiziert, und dann wurden die Verabreichungen des Extrakts von Shiitake (Shiitake-Extrakt) und der mizellenförmigen Lösung des Extrakts von Shiitake (mizellenförmiger Shiitake-Extrakt) begonnen. Bei dieser Verabreichung wurde der Extrakt oral 5-mal pro Woche verabreicht (einmal/Tag), und die Verabreichung wurde insgesamt 10-mal durchgeführt. Die Dosis für jede Verabreichung war wie folgt: der Extrakt (die Probe), eingestellt auf eine Konzentration von 1 mg/ml, wurde in einer Dosis von 0,2 ml/Maus zu einer 10 mg (ausgedrückt als Gesamtzucker)/kg der Verabreichungsgruppe gegeben, und der Extrakt (die Probe), eingestellt auf 10 mg/ml, wurde in einer Dosis von 0,2 ml/Maus zu einer 100 mg (ausgedrückt als Gesamtzucker)/kg Verabreichungsgruppe gegeben.
Die Zahl in den Klammern nach "Shiitake-Extrakt" und "mizellenförmiger Shiitake-Extrakt", die in "Verabreichungsgruppe" in den Tabellen 1 und 2 gezeigt ist, ist die Verabreichungsdosis der Probe, ausgedrückt als Gesamtzucker (Einheit: mg/kg). In diesem Beispiel werden die Teilchen (die superfeinen Teilchen), die einer superfeinen Pulverisierungsbehandlung mit einem Emulgiermittel unterworfen wurden, als mizellenförmiger Shiitake-Extrakt bezeichnet.
Die Tumorgröße und das Körpergewicht wurden einmal pro Woche gemessen. Aus der Tumorgröße wurde das Tumorgewicht nach der folgenden Formel berechnet: Tumorgewicht (mg) = kleinster Tumordurchmesser (mm)2 × größter Tumordurchmesser (mm) ÷ 2
Außerdem wurde das Wirtsgewicht aus dem Tumorgewicht und dem Körpergewicht berechnet. Wirtsgewicht (g) = Körpergewicht (g) – Tumorgewicht (g)
Aus dem Tumorgewicht wurde das Maß der Inhibition des Tumorwachstums berechnet. Maß der Inhibition des Tumorwachstums (%) = (1 – Tumorgewicht der Verabreichungsgruppe ÷ Tumorgewicht der nicht-behandelten Gruppe) × 100
Aus dem Maß der Inhibition des Tumorwachstums in jeder Woche und der Anzahl der Tumor-tragenden Mäuse am Tag 35 nach dem Einimpfen des Tumors wurde die pharmazeutische Wirkung dieses Modells beurteilt. Die Ergebnisse der inhibitorischen Wirkung des mizellenförmigen Shiitake-Extrakts auf das Tumorwachstum sind in den Tabellen 1 und 2 gezeigt. Tabelle 1 Tumorgewicht (g)

Tag 16: Tag 16 nach dem Einimpfen des Tumors
t-Test: Student's t-Test: der t-Test jeder Gruppe wurde im Vergleich zu der nicht-behandelten Gruppe durchgeführt.
M-Test: Mannwhitney-U-Test: der Beurteilungstest für jede Gruppe wurde im Vergleich zu der nicht-behandelten Gruppe durchgeführt.
N.S.: nicht signifikant;
p < 0,01: signifikant.

In der Gruppe, der ein mizellenförmiger Shiitake-Extrakt verabreicht wurde, wurde das Tumorwachstum im Vergleich zu der nicht-behandelten Gruppe während der Verabreichungsperiode allmählich inhibiert, und am Tag 16 (Tag 2 nach Beendigung der Verabreichung) wurde das Tumorwachstum signifikant (p < 0,01) in der Gruppe inhibiert, der mizellenförmiger Shiitake-Extrakt in einer Verabreichungsdosis von 10 mg (ausgedrückt als Gesamtzucker)/kg oral verabreicht worden war. Tabelle 2 Inhibitorische Wirkung auf das Tumorwachstum

*: Tag 16 nach der Transplantation des Tumors

Aus den vorstehenden Ergebnissen geht hervor, dass bestätigt wurde, dass die erfindungsgemäßen superfeinen Teilchen die gewünschte pharmazeutische Wirkung im Vergleich zu den herkömmlichen Produkten zeigen.
(Beispiel 4)
(Quantifizierung von β-Glucan)
Um β-Glucan in dem Shiitake-Extrakt zu quantifizieren, wurde das in Beispiel 2 gereinigte β-Glucan in einer wässerigen Natriumhydroxidlösung (1→25) aufgelöst und dann mit Methanol ausgefällt (koaguliert), und dieses Verfahren wurde zweimal wiederholt, und dann wurde die Probe mit Methanol und Aceton gewaschen und unter vermindertem Druck (40°C, 15 Stunden) getrocknet, wobei Standard-β-Glucan erhalten wurde, das 0,03% oder weniger Stickstoff enthielt und 1,5% oder weniger Verlust beim Trocknen aufwies.
Für die quantitative Bestimmung des β-Glucans in dem Shiitake-Extrakt wurde unter Verwendung des vorstehend gereinigten Standard-β-Glucans die β-Glucan-Konzentration dadurch quantitativ bestimmt, dass das Verfahren von Sasaki et al. (Gann, 67(2) 191–5 (1976)) angewandt wurde. Das heißt, der Shiitake-Extrakt und das Standard-β-Glucan wurden in einer wässerigen Natriumhydroxidlösung (2 g/dl) hergestellt, und eine Congo-Rotlösung (10 mg/dl) und Phosphorsäure (2,5 g/dl) wurden zugegeben, und unter Ausnutzung der Verschiebung der lokalen maximalen Absorptionswellenlänge von Congo Rot durch β-Glucan wurde β-Glucan durch Messung der Absorption bei 535 nm mit einem Spektrofotometer quantitativ bestimmt.
Der Shiitake-Extrakt, für den die β-Glucan-Konzentration gemessen worden war, wurde eingesetzt, um einen mizellenförmigen Shiitake-Extrakt (Lecithin-Konzentration: 0,8 mg/ml), enthaltend β-Glucan in einer Konzentration von 0,2 mg/ml, auf dieselbe Weise wie in Beispiel 1 herzustellen. Die β-Glucan-Lösung wurde auch einer Emulgierungsbehandlung mit Lecithin unterworfen, um eine mizellenförmige β-Glucan-Lösung, enthaltend β-Glucan in einer Konzentration von 0,2 mg/ml, auf dieselbe Weise herzustellen.
(Beispiel 5)
(Inhibitorische Wirkung des mizellenförmigen β-Glucans auf das Tumorwachstum)
Die inhibitorischen Wirkungen des mizellenförmigen Shiitake-Extrakts, des mizellenförmigen β-Glucans und der β-Glucan-Lösung, die vorstehend hergestellt wurden, auf das Tumorwachstum wurden auf dieselbe Weise wie in Beispiel 3 untersucht. Das heißt, Sarcoma 180-Tumorzellen, die durch intrape ritoneale Injektion in ICR-Mäuse (weiblich, 4 Wochen alt) gehalten wurden, wurden in der Form einer Asziten-Flüssigkeit gewonnen und bei einer Dichte von 3 × 10⁷ Zellen/ml mit physiologischer Natriumchloridlösung präpariert. Diese Zellsuspension wurde in einem Volumen von 0,1 ml/Maus mittels einer 25 G-Nadel in die rechte Leiste von ICR-Mäusen (weiblich, 4 Wochen alt) subkutan eingeimpft.
Am nächsten Tag wurden die Mäuse in Abhängigkeit von ihrem Gewicht gruppiert (7 Mäuse/Gruppe) und identifiziert, und dann wurde mit den Verabreichungen des mizellenförmigen Shiitake-Extrakts, des mizellenförmigen β-Glucans und des β-Glucans begonnen. Bei dieser Verabreichung wurde der Extrakt 5-mal pro Woche (einmal täglich) oral verabreicht, und die Verabreichung wurde insgesamt 10-mal durchgeführt. Die Dosis für jede Verabreichung war wie folgt: die Probe, die auf eine β-Glucan-Konzentration von 0,2 mg/ml eingestellt war, wurde in einer Dosis von 0,1 ml/Maus gegeben, um 1 mg (ausgedrückt als β-Glucan)/kg Verabreichungsgruppe zu erreichen.
Die Zahl in den Klammern nach "mizellenförmiger Shiitake-Extrakt", "mizellenförmiges β-Glucan" und "β-Glucan", die in "Verabreichungsgruppe" in Tabelle 3 und 4 gezeigt ist, ist die Verabreichungsdosis, ausgedrückt als β-Glucan (Einheit: mg/kg). In diesem Beispiel beziehen sich die Teilchen (die superfeinen Teilchen), die einer superfeinen Pulverisierungsbehandlung mit einem Emulgiermittel unterworfen wurden, auf den mizellenförmigen Shiitake-Extrakt und das mizellenförmige β-Glucan. Tabelle 3 Tumorgewicht (g)

Tag 16: 16 Tage nach der Transplantation des Tumors
t-Test: Student's t-Test: es wurde ein t-Test für jede Gruppe im Vergleich zu der nicht-behandelten Gruppe durchgeführt.
M-Test (Assay): Mannwhitney-U-Test (Assay): es wurde eine Beurteilung jeder Gruppe im Vergleich zu der nichtbehandelten Gruppe durchgeführt.
N.S.: nicht signifikant;
p < 0,01: signifikant.

In der Gruppe, der der mizellenförmige Shiitake-Extrakt beziehungsweise das mizellenförmige β-Glucan verabreicht wurde, d. h. die Gruppe, der superfeine Teilchen nach der superfeinen Pulverisierungsbehandlung verabreicht wurden, wurde das Tumorwachstum im Vergleich zu der nicht-behandelten Gruppe während des Verabreichungszeitraums allmählich inhibiert, und am Tag 16 (2. Tag nach Beendigung der Verabreichung) wurde das Tumorwachstum signifikant (p < 0,01) in der Gruppe inhibiert, der die mizellenförmigen Teilchen in einer Dosis von 1 mg/kg, ausgedrückt als β-Glucan, oral verabreicht worden waren. Tabelle 4 Inhibitorische Wirkung auf das Tumorwachstum

*: Tag 16 nach der Transplantation des Tumors

Aus den vorstehenden Ergebnissen geht hervor, dass bestätigt wurde, dass die erfindungsgemäßen superfeinen Teilchen (mizellenförmiger Shiitake-Extrakt und mizellenförmiges β-Glucan) die gewünschte pharmazeutische Wirkung im Vergleich zu dem herkömmlichen Produkt (β-Glucan-Lösung) zeigte.
(Beispiel 6)
(Pathologisch-histologische Untersuchung: Aktivierung der mukosalen Immunität im Verdauungstrakt)
Die aktivierende Wirkung des mizellenförmigen Shiitake-Extrakts auf die mukosale Immunität im Verdauungstrakt wurde auf dieselbe Weise wie in Beispiel 3 untersucht. Das heißt, Sarcoma 180-Tumorzellen, die durch intraperitoneale Injektion in ICR-Mäuse (weiblich, 4 Wochen alt) gehalten wurden, wurden in der Form einer Asziten-Flüssigkeit gewonnen und bei einer Dichte von 3 × 10⁷ Zellen/ml mit physiologischer Natriumchloridlösung präpariert. Diese Zellsuspension wurde in einem Volumen von 0,1 ml/Maus mittels einer 25 G-Nadel in eine rechte Leiste der ICR-Mäuse (weiblich, 4 Wochen alt) subkutan eingeimpft.
Am nächsten Tag wurden die Mäuse in Abhängigkeit von ihrem Gewicht gruppiert (3 Mäuse/Gruppe) und identifiziert, und dann wurden die Verabreichungen eines Emulgiermittels (Lecithin) allein, des Emulgiermittels plus Shiitake-Extrakt (ohne superfeine Pulverisierungsbehandlung [Umwandlung in Mizellen]) und des mizellenförmigen Shiitake-Extrakts begonnen. Bei diesen Verabreichungen wurde der Extrakt 5-mal pro Woche (einmal täglich) oral verabreicht, und die Verabreichung wurde insgesamt 10-mal durchgeführt. Die Dosis für jede Verabreichung war wie folgt: Lecithin als Emulgiermittel wurde bei einer Konzentration von 2 mg/ml in einer Dosis von 0,1 ml/Maus zu einer Gruppe gegeben, der das Emulgiermittel verabreicht wurde. Das Emulgiermittel plus Shiitake-Extrakt wurden bei einer Konzentration von 0,2 mg/ml β-Glucan (Lecithin-Konzentration: 2,0 mg/ml) in einer Dosis von 0,1 ml/Maus zu einer Gruppe gegeben, der das Emulgiermittel plus Shiitake-Extrakt in einer Dosis von 1 mg/kg, ausgedrückt als β-Glucan, verabreicht wurde; und der mizellenförmige Shiitake-Extrakt, eingestellt auf eine Konzentration von 0,2 mg/ml β-Glucan (Lecithin-Konzentration: 2 mg/ml), wurde in einer Dosis von 0,1 ml/Maus zu einer Gruppe, der der mizellenförmige Shiitake-Extrakt in einer Dosis von 1 mg/kg, ausgedrückt als β-Glucan, verabreicht wurde, oder in einer Dosis von 0,3 ml/Maus zu einer Gruppe gegeben, der der mizellenförmige Shiitake-Extrakt in einer Dosis von 3 mg/kg, ausgedrückt als β-Glucan, verabreicht wurde.
Am zweiten Tag nach Beendigung dieser Verabreichung wurde der Dünndarm mit einem Peyer-Pflaster aus jeder Gruppe und aus normalen Mäusen (3 Tiere) entfernt und dann in 10% Formalin fixiert und in Paraffin eingebettet, um Paraffinabschnitte herzustellen, die dann von Paraffin befreit wurden und mit Hematoxylin/Eosin gefärbt wurden, und die Anhäufung von mononuklearen Zellen (immunokompetenten Zellen) in der Lamina propria mucosae im Darmextrakt wurde unter einem Mikroskop beobachtet.
Die Zahl in den Klammern nach "Shiitake-Extrakt" und "mizellenförmiger Shiitake-Extrakt" in "Verabreichungsgruppe" in Tabelle 5 ist die Verabreichungsdosis, ausgedrückt als β-Glucan (Einheit: mg/kg). In diesem Beispiel beziehen sich die Teilchen (die superfeinen Teilchen), die einer superfeinen Pulverisierungsbehandlung mit einem Emulgiermittel unterworfen wurden, auf den mizellenförmigen Shiitake-Extrakt. Tabelle 5 Anzahl der Flächen der mononuklearen Zellanhäufung in der Lamina propria mucosae im Darmtrakt (Prozentsatz (%): Anzahl der Flächen pro Anzahl der Zotten (Villi))
Die Anzahl der Villi (100 bis 300 Villi/Maus) wurde unter einem Mikroskop gemessen, und die Anzahl der Flächen der mono nuklearen Zellanhäufung in der Lamina propria mucosae im Darmextrakt wurde gemessen, und der Prozentsatz der Anzahl der angehäuften Flächen pro Villus wurde berechnet.

*¹: Die Fläche der Anhäufung der mononuklearen Zellen wurde in der Lamina propria mucosae im Darmtrakt in normalen Mäusen beobachtet.
*²: Der Shiitake-Extrakt wurde nur zu dem Emulgiermittel (Lecithin) gegeben, und nicht einer superfeinen Pulverisierungsbehandlung ("Umwandlung in die Zellen") unterworfen.
t-Test: Student's t-Test: ein t-Test wurde für jede Gruppe im Vergleich mit der nicht-behandelten Gruppe durchgeführt.
N.S.: nicht signifikant;
p < 0,1: falsch signifikant;
p < 0,01: signifikant.

Gewebe des Dünndarms von normalen Mäusen, der unbehandelten Gruppe in den Tumor-tragenden Mäusen (nicht-behandelte Gruppe), der mit einem Emulgiermittel behandelten Gruppe (Gruppe, der 10 mg/kg Lecithin oral verabreicht wurde), der Gruppe, der Emulgiermittel plus Shiitake-Extrakt in einer Dosis von 1 mg/kg, ausgedrückt als β-Glucan, oral verabreicht wurde, und der Gruppe, der mizellenförmiger Shiitake-Extrakt in Dosen von 1 mg/kg und 3 mg/kg, ausgedrückt als β-Glucan, oral verabreicht wurde, wurden unter einem Mikroskop beobachtet, und es wurde gefunden, dass die Gruppen, denen der mizellenförmige Shiitake-Extrakt verabreicht wurde, im Vergleich zu der nicht-behandelten Gruppe eine Anhäufung von mononuklearen Zellen (Lymphozyten, Makrophagen) in der Lamina propria mucosae im Dünndarm falsch signifikant (p < 0,1) in der Gruppe, der 1 mg/kg gegeben wurde, und signifikant (p < 0,01) in der Gruppe, der 3 mg/kg gegeben wurde, zeigten. In den Gruppen, denen der mizellenförmige Shiitake-Extrakt nicht verabreicht wurde, zeigte sich kein Unterschied zu der nicht-behandelten Gruppe. Dementsprechend wird angenommen, dass die Immunreaktion in der Lamina propria mucosae im Darmtrakt durch orale Verabreichung des mizellenförmigen Shiitake-Extrakts induziert (aktiviert) wird.
Aus den vorstehend beschriebenen Ergebnissen geht hervor, dass bestätigt wurde, dass die erfindungsgemäßen superfeinen Teilchen (mizellenförmiger Shiitake-Extrakt) die gewünschte pharmazeutische Wirkung im Vergleich zu dem herkömmlichen Produkt (Shiitake-Extrakt) zeigten.
(Beispiel 7)
(Aktivierung der systemischen Immunität: verzögerte hypersensitive Reaktion)
Um die Aktivierung der systemischen Immunreaktion spezifisch für das Tumorantigen zu untersuchen, wurde die verzögerte hypersensitive Reaktion beurteilt. Das Verfahren der Beurteilung einer verzögerten hypersensitiven Reaktion wird im Folgenden beschrieben.
Der Tumor wurde auf dieselbe Weise wie in Beispiel 3 transplantiert. Das heißt, Sarcoma 180-Tumorzellen, die durch intraperitoneale Injektion in ICR-Mäuse (weiblich, 4 Wochen alt) gehalten wurden, wurden in der Form einer Asziten-Flüssigkeit gewonnen und in einer Dichte von 3 × 10⁷ Zellen/ml mit einer physiologischen Natriumchloridlösung präpariert. Diese Zellen wurden in einem Volumen von 0,1 ml/Maus mittels einer 25 G-Nadel in eine rechte Leiste von ICR-Mäusen (weiblich, 4 Wochen alt) subkutan eingeimpft.
Am nächsten Tag wurden die Mäuse in Abhängigkeit von ihrem Gewicht gruppiert (7 Mäuse/Gruppe) und identifiziert, und dann wurde die Verabreichung des mizellenförmigen Shiitake-Extrakts, des mizellenförmigen β-Glucans und der β-Glucan-Lösung begonnen. Bei dieser Verabreichung wurde jede Probe 5-mal pro Woche (einmal täglich) verabreicht, und die Verabreichung wurde insgesamt 9-mal durchgeführt. Die Dosis für jede Verabreichung war wie folgt: der mizellenförmige Shiitake-Extrakt und das mizellenförmige β-Glucan, eingestellt auf eine Konzentration von 0,2 mg/ml, ausgedrückt als β-Glucan (Lecithin-Konzentration: 0,8 mg/ml, wurde in einer Dosis von 0,1 ml/Maus zu einer Gruppe gegeben, der dieses in einer Dosis von 1 mg/kg, ausgedrückt als β-Glucan, verabreicht wurde. Die β-Glucan-Lösung, eingestellt auf 0,2 mg/ml β-Glucan, wurde in einer Dosis von 0,1 ml/Maus einer Gruppe verabreicht, der die Lösung in einer Dosis von 1 mg/kg β-Glucan verabreicht wurde.
Jeweils 7 Mäuse der nicht-behandelten Gruppe, der Gruppe, der der mizellenförmige Shiitake-Extrakt verabreicht wurde, der Gruppe, der das mizellenförmige β-Glucan verabreicht wurde, der Gruppe, der die β-Glucan-Lösung verabreicht wurde, und 3 normale Mäuse wurden einem Test auf verzögerte Hypersensitivität (DTH) unterworfen. Das heißt, am Tag 9 nach der Tumoreinimpfung (das heißt, am Tag 8 nach Beginn der Verabreichung) wurden 50 μl physiologische Natriumchloridlösung als Kontrolle in die rechte Pfote verabreicht, während 50 μl Tumorantigenlösung, erhalten aus Sarcoma 180-Zellen durch das 3 M KCl-Auflösungsverfahren oder ein Gefrier- und Auftauverfahren (es wurde eine zelluläre Suspension bei einer Dichte von 5 × 10⁷ Zellen/ml behandelt), wurden in die linke Pfote verabreicht, und 24 Stunden später wurde jeweils die Dicke der rechten Pfote und der linken Pfote gemessen, und die Schwellung des Fußes wurde aus der folgenden Gleichung berechnet, um die DTH-Reaktion zu beurteilen. Schwellung des Fußes (mm) = Dicke der linken Pfote (mm) – Dicke der rechten Pfote (mm)
Die Zahl in den Klammern nach "Mizellenförmiger Shiitake-Extrakt", "Mizellenförmiges β-Glucan" und "β-Glucan-Lösung" in "Verabreichungsgruppe" in Tabelle 6 ist die Dosis der verabreichten Probe, ausgedrückt als β-Glucan (Einheit: mg/kg). In diesem Beispiel werden die superfeinen Teilchen, die mit einem Emulgiermittel einer superfeinen Pulverisierungsbehandlung unterworfen wurden, als mizellenförmiger Shiitake-Extrakt und mizellenförmiges β-Glucan bezeichnet. Tabelle 6 Verzögerte hypersensitive Reaktion; Schwellung des Fußes (mm)

*1: Die normalen Mäuse bewirkten keine DTH-Reaktion, weil sie keiner Tumoreinimpfung (Antigensensibilisierung) unterworfen wurden
t-Test: Student's t-Test: ein t-Test wurde für jede Gruppe im Vergleich zu der nicht-behandelten Gruppe durchgeführt.
N.S.: nicht signifikant;
p < 0,05: signifikant;
p < 0,01: signifikant.

Tabelle 6 zeigt, dass die Schwellung der Pfoten in normalen Mäusen, der nicht-behandelten Gruppe und der Gruppe, der die β-Glucan-Lösung verabreicht wurde, kaum beobachtet wurde, während im Vergleich zu der nicht-behandelten Gruppe eine signifikante Schwellung der Pfoten in der Gruppe, der der mizellenförmige Shiitake-Extrakt verabreicht wurde, und in der Gruppe beobachtet wurde, der das mizellenförmige β-Glucan verabreicht wurde, wodurch bestätigt wurde, dass die verzögerte hypersensitive Reaktion induziert wurde. Diese Ergebnisse zeigen, dass eine systemische Immunreaktion gegen das Tumorantigen durch die orale Verabreichung des mizellenförmigen Shiitake-Extrakts und des mizellenförmigen β-Glucans induziert werden kann.
(Beispiel 8)
(Antiallergische Wirkung)
Die antiallergische Wirkung des mizellenförmigen Shiitake-Extrakts wurde unter Einsatz von NC-Mäusen, d. h. Modellmäusen, mit atopischer Dermatitis untersucht. Das heißt, zwanzig 8 Wochen alte männliche NC-Mäuse wurden durch Auftragen von 150 μl/Maus eines Antigens; Picrylchlorid (5% (Gew./Vol.)), hergestellt und Ethanol und Aceton (4:1), auf ihrem Unterbauch und ihren Pfoten sensibilisiert, und vom vierten Tag nach der Sensibilisierung wurde ein induzierendes Antigen; Picrylchlorid (0,8% (Gew./Vol.)), hergestellt in Olivenöl, einmal pro Woche in einer Menge von 150 μl/Maus während 6 Wochen auf dem Rücken und die Ohren (Innenseite und Außenseite) aufgetragen. Die Verabreichung wurde am Tag vor der Sensibilisierung mit dem Antigen begonnen und 46 Tage einmal täglich durchgeführt. Die Menge jeder verabreichten Probe war wie folgt: Als Lösungsmittelkontrolle wurde eine physiologische Natriumchloridlösung in einer Menge von 0,1 ml/Maus in der Kontrollgruppe (10 Mäuse) oral verabreicht. Der mizellenförmige Shiitake-Extrakt, eingestellt auf eine Konzentration von 0,2 mg/ml, ausgedrückt als β-Glucan, wurde in einer Menge von 0,1 ml/Maus oral verabreicht. Diese Dosis bei jeder Verabreichung entspricht einer Dosis von 1 mg/kg, ausgedrückt als β-Glucan.
Für die Beurteilung der antiallergischen Wirkung wurde die Sensibilisierung mit Antigen einmal pro Woche durchgeführt, das Körpergewicht wurde gemessen, und für den Grad der Dermatitis wurden (1) das Jucken, (2) Rötung/Blutung, (3) Ödeme, (4) Wundreibung/Abschürfung und (5) Narbenbildung/Trockenheit beobachtet und beurteilt (Beurteilungspunkt: 0, asymptomatisch; 1, leicht; 2, mäßig; 3, schwer). Am 29. und 46. Tag nach Sensibilisierung mit dem Antigen wurde Blut aus der Augenhöhlenvene gewonnen, das Serum wurde daraus erhalten, und der Immunoglobulin E(IgE)-Spiegel in dem Serum wurde durch ELISA gemessen. Ergebnisse: Am 46. Tag nach der Sensibilisierung war der IgE-Spiegel mindestens 5,0 μg/ml in allen 10 Mäusen in der Kontrollgruppe, während der IgE-Spiegel in 4 Mäusen von 10 Mäusen in der Gruppe, der der mizellenförmige Shiitake-Extrakt verabreicht wurde, mindestens 5,0 μg/ml war, wobei jedoch die anderen 6 Mäuse einen IgE-Spiegel von weniger als 5,0 μg/ml aufwiesen, was zeigte, dass die Erhöhung des IgE-Spiegels signifikant unterdrückt wurde (Wahrscheinlichkeitstest nach Fischer: p < 0,05). Außerdem war am 46. Tag nach der Sensibilisierung die Gesamtdermatitisbeurteilung 9 oder mehr in 9 Mäusen von 10 Mäusen in der Kontrollgruppe, während die Gesamtdermatitisbeurteilung 9 oder mehr in 5 Mäusen von 10 Mäusen in der Gruppe, der der mizellenförmige Shiitake-Extrakt verabreicht wurde, war, und die anderen 5 Mäuse zeigten eine Gesamtdermatitisbeurteilung von weniger als 9, was zeigte, dass die Dermatitis im Vergleich zu der Kontrollgruppe unterdrückt wurde.
Durch die vorstehenden Ergebnisse wurde bestätigt, dass die erfindungsgemäßen superfeinen Teilchen (mizellenförmiger Shiitake-Extrakt) die gewünschte pharmazeutische Wirkung (antiallergische Wirkung) zeigten.
(Beispiel 9)
(Antidiabeteswirkung: Inhibitorische Wirkung auf die Erhöhung des Blutzuckerspiegels)
Um die Wirkung des mizellenförmigen Shiitake-Extrakts auf Diabetes zu untersuchen, wurden db/db-Mäuse, d. h. Modellmäuse, mit Typ II Diabetes verwendet, um die Wirkung auf die Erhöhung des Blutzuckerspiegels zu untersuchen. Das heißt, 5 Wochen alte männliche db/db-Mäuse wurden in 2 Gruppen aus jeweils 9 Mäusen aufgeteilt, und eine Gruppe wurde als Kontrollgruppe die Aufnahme von Wasser nach Belieben erlaubt, während der anderen Gruppe die Aufnahme von Wasser, das einen mizellenförmigen Shiitake-Extrakt enthielt, nach Belieben erlaubt wurde, bis die Mäuse 12 Wochen alt waren. Die Konzentration des mizellenförmigen Shiitake-Extrakts war 0,01 mg/ml, ausgedrückt als β-Glucan (Lecithin-Konzentration: 0,1 mg/ml). Die Menge des getrunkenen Wassers wurde jede Woche gemessen, um die Menge des oral aufgenommenen β-Glucans zu berechnen.
Für die Beurteilung der Wirkung wurde Blut aus der Augenhöhlenvene jede Woche entnommen, die Blutzuckerspiegel wurden gemessen, und die inhibitorische Wirkung auf die Erhöhung des Blutzuckerspiegels wurde untersucht. Die Menge des oral aufgenommenen β-Glucans war im Bereich von 0,15 mg/Maus/Tag bis 0,36 mg/Maus/Tag in den 6 bis 12 Wochen alten Mäusen.
In den 8 Wochen alten Mäusen war der Blutzuckerspiegel in der Kontrollgruppe 504,11 ± 50,03 mg/dl, während der Blutzuckerspiegel in der Gruppe, der der mizellenförmige Shiitake-Extrakt verabreicht wurde, 406,22 ± 75,55 mg/dl war, was darauf hinwies, dass die Erhöhung des Blutzuckerspiegels signifikant verhindert wurde (Student's t-Test: p < 0,01).
Durch die vorstehenden Ergebnisse wurde bestätigt, dass die erfindungsgemäßen superfeinen Teilchen (mizellenförmiger Shiitake-Extrakt) die gewünschte pharmazeutische Wirkung zeigte (inhibitorische Wirkung auf die Erhöhung des Blutzuckerspiegels in Diabetes).
Wirkung der Erfindung
Erfindungsgemäß kann ein Immunaktivator und ein Immunregulator bereitgestellt werden, der die Immunkompetenz eines Tieres, insbesondere eines Menschen verbessern kann, insbesondere wird eine Arzneimittelzusammensetzung, ein Nahrungsmittel oder Getränk (Gesundheitsnahrungsmittel, funktionelles Nahrungsmittel und dergleichen) mit einer solchen hervorragenden immunaktivierenden Wirkung und/oder immunregulierenden Wirkung und dergleichen bereitgestellt. Außerdem kann eine neue Substanz (oder eine neue Zusammensetzung) bereitgestellt werden, die als aktiver (effektiver) Bestandteil für solche hervorragenden Produkte einsetzbar ist, insbesondere superfeine Teilchen aus einer Komponente, die unter einer von einem Pilz abgeleiteten Komponente und β-Glucan ausgewählt ist, beispielsweise superfeine Teilchen eines Extrakts eines Pilzes, vorzugsweise ein Wasserextrakt davon, der mit einem Dispergiermittel behandelt wurde (Dispersion), insbesondere eine mizellenförmige Lösung davon, die durch Behandlung mit einem Emulgiermittel gehalten wird.
Erfindungsgemäß wird auch ein Verfahren zur Aktivierung der Immunität oder ein Verfahren zum Regulieren der Immunität für eine medizinische Behandlung, Prophylaxe (Vorbeugung) usw. verschiedener Krankheiten, eine Verwendung der superfeinen Teilchen für den Immunaktivator oder Immunregulator oder eine Verwendung der superfeinen Teilchen für das Antitumormittel, das Mittel gegen Infektionen, das Antivirenmittel, das Mittel gegen Autoimmunkrankheiten, das Antidiabetesmittel und das Mittel gegen Allergien, sowie Arzneimittelzubereitungen für Krankheiten der Verdauungsorgane (therapeutische Mittel für das Reizdarmsyndrom (IBS), entzündliche Darmkrankheiten (IBD), Verstopfung, Durchfall und dergleichen) und dergleichen bereitgestellt, sowie die Verwendung dieser Mittel für die Herstellung von Arzneimittelprodukten (Zubereitungen).
Erfindungsgemäß wird außerdem ein Verfahren zur Herstellung einer von einem Pilz abgeleiteten Komponente und β-Glucan als wirksamer Bestandteil durch einfache Herstellungsverfahren, insbesondere von superfeinen Teilchen des aktiven Bestandteils mit immunaktivierender Wirkung und/oder immunregulierender Wirkung (oder eine dieselbe enthaltende Zusammensetzung) bereitgestellt, welches die vorstehend beschriebenen superfeinen Teilchen oder die Zusammensetzung herstellen kann. Als Ergebnis kann eine Arzneimittelzusammensetzung und ein Nahrungsmittel und Getränk (Nahrungsmittel und/oder Getränk) (Gesundheitsnahrungsmittel, funktionelle Nahrungsmittel usw.) und dergleichen unter Verwendung des aktiven Bestandteils industriell und auf einfache Weise hergestellt werden.
Dementsprechend ist die vorliegende Erfindung in der Industrie, insbesondere auf vielen Gebieten, wie in der medizinischen Praxis (für medizinische Behandlungen), für Arzneimit telprodukte (Zubereitungen), Nahrungsmittel und dergleichen extrem nützlich.

Claims

Wässerige Dispersion, die Wasser und ein Dispergiermittel und durch die Wirkung des Dispergiermittels in dem Wasser dispergierte superfeine Teilchen, die β-Glucan enthalten und einen mittleren Durchmesser von 10 μm oder weniger haben, enthalten.
Wässerige Dispersion nach Anspruch 1, worin die Teilchen einen mittleren Durchmesser von 1 μm oder weniger haben.
Wässerige Dispersion nach Anspruch 1 oder 2, worin die Teilchen einen mittleren Durchmesser von 0,01 bis 1 μm haben.
Wässerige Dispersion nach einem der vorstehenden Ansprüche, worin die superfeinen Teilchen in der Form von Micellen sind.
Wässerige Dispersion nach einem der vorstehenden Ansprüche, worin das Dispergiermittel ein eßbares Emulgiermittel ist.
Wässerige Dispersion nach Anspruch 5, wobei das Emulgiermittel Lecithin ist.
Wässerige Dispersion nach einem der vorstehenden Ansprüche, die 1 bis 20.000 mg Zucker und 1 bis 20.000 mg Dispergiermittel pro 100 g der Dispersion enthält.
Verfahren zum Herstellen einer wässerigen Dispersion nach einem der Ansprüche 1 bis 7, welches das Mischen eines Dispergiermittels und einer β-Glucan enthaltenden wässerigen Lösung und das superfeine Pulverisieren des erhaltenen Gemisches umfaßt.
Verfahren nach Anspruch 8, wobei die wässerige Lösung ursprünglich Aggregate enthält, die β-Glucan enthalten, und die Aggregate durch die Wirkung des Dispergiermittels während der Stufe der superfeinen Pulverisierung dispergiert werden.
Verfahren nach Anspruch 8 oder 9, wobei ein Hochdruckemulgiermittel in der Stufe der superfeinen Pulverisierung eingesetzt wird, um das Dispergiermittel und die Lösung zu mischen, wodurch superfeine Teilchen mit einem mittleren Teilchendurchmesser von 1 μm oder weniger hergestellt werden.
Verfahren nach einem der Ansprüche 8 bis 10, wobei die β-Glucan enthaltende wässerige Lösung durch Extrahieren eines eßbaren Pilzes mit Wasser und Filtrieren des so erhaltenen Extrakts erhalten wird.
Verfahren nach Anspruch 11, welches außerdem das Konzentrieren und/oder Kühlen des Filtrats umfaßt, wodurch eine Aggregate enthaltende wässerige Lösung erhalten wird.
Verfahren nach Anspruch 11 oder 12, wobei der Pilz unter Lentinus edodes Pleurotus ostreatus Pholiota nameko Flammulina velutipes Tricholoma matsutake Lyophyllum shimeji Schizophyllum commune Crepidotus variabilis Lyophyllum ulmarium Grifola umbellata G. frondosa Coriolus versicolor Fomes fomentarius Volvavella volvacea Auricularia aurcula-judae Ganoderma lucidum G. applanatum Fomitopsis pinicola Dictyophora indusiata Sparassis crispa Agaricus blazei und Peziza vesiculosa ausgewählt ist.
Verfahren nach Anspruch 9 oder 12, wobei die Aggregate einen Teilchendurchmesser von mindestens 50 μm haben.
Verfahren nach einem der Ansprüche 8 bis 14, wobei das Dispergiermittel mit der ein β-Glucan enthaltenden wässerigen Lösung in einer Menge gemischt wird, so daß das Gewichtsverhältnis des Dispergiermittels zu dem in der wässerigen Lösung enthaltenen Gesamtzucker höchstens 100 ist.
Verfahren nach einem der Ansprüche 8 bis 15, welches außerdem das Trocknen der Dispersion umfaßt, wodurch superfeine Teilchen in einem trockenen Zustand erhalten werden.
Durch das Verfahren nach Anspruch 16 erhältliche superfeine Teilchen.
Arzneimittelzusammensetzung für die orale Verabreichung, welche die wässerige Dispersion nach einem der Ansprüche 1 bis 7 oder die superfeinen Teilchen nach Anspruch 17 und gegebenenfalls einen pharmazeutisch geeigneten Träger oder Corrigens (Füllmittel) umfaßt.
Nahrungsmittel oder Getränk, das eine wässerige Dispersion nach einem der Ansprüche 1 bis 7 oder die superfeinen Teilchen nach Anspruch 17 enthält.
Nahrungsmittel oder Getränk nach Anspruch 19, welches die superfeinen Teilchen in einer Menge von 0,01 bis 80 Gew.-%, bezogen auf den Gesamtzucker, enthält.
Verwendung einer wässerigen Dispersion nach einem der Ansprüche 1 bis 7 oder von superfeinen Teilchen nach Anspruch 17 bei der Herstellung einer Arzneimittelzusammensetzung für die orale Verabreichung, eines Nahrungsmittels oder Getränks für die Aktivierung oder Regulierung der Immunität.
Verwendung einer wässerigen Dispersion nach einem der Ansprüche 1 bis 7 oder von superfeinen Teilchen nach Anspruch 17 bei der Herstellung einer Arzneimittelzusammensetzung für die orale Verabreichung, eines Nahrungsmittels oder Getränks für die Verwendung in Patienten mit einer Krankheit, die unter einer Krebserkrankung, einer durch Mikroorganismen verursachten Infektionserkrankung, einer von Viren verursachten Infektionserkrankung, einer Autoimmunkrankheit, Diabetes, einer allergischen Erkrankung und Verdauungsorgankrankheiten (einschließlich Reizdarmsyndrom (IBS), Darmentzündung (IBD), Verstopfung und Durchfall) ausgewählt ist.