DE60114801T2

DE60114801T2 - Zubereitung zur äusserlichen anwendung zur verbesserung der permeabilität der haut für wirkstoffe

Info

Publication number: DE60114801T2
Application number: DE60114801T
Authority: DE
Inventors: Eui Seok Youngin-shi SHIN; Jang Young Lee; Mu Sung Suwon-shi KIM; Sung Gu Paldal LEE; Dong Chul Sungnam-shi LEE; Byung Young Dongjak-ku KANG
Original assignee: Pacific Corp
Current assignee: Amorepacific Corp
Priority date: 2000-05-16
Filing date: 2001-05-16
Publication date: 2006-11-23
Anticipated expiration: 2021-05-17
Also published as: WO2001087255A1; EP1282393B1; AU2001258876A1; DE60114801D1; EP1282393A1; US20040022753A1; KR20010104881A; CN1457253A; JP2004507458A; JP5013648B2; EP1282393A4; KR100338327B1; ATE308967T1

Description

GEBIET DER ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung betrifft die nicht-therapeutische Verwendung einer Protease als Hautabsorptionsmittel eines Wirkstoffs einer kosmetischen Zusammensetzung.
HINTERGRUND DER ERFINDUNG
Die Haut wird in drei Bereiche aufgeteilt, das Stratum corneum, die epidermale Schicht und die Dermis, und das im äußersten Teil der Haut befindliche Stratum corneum stellt die wichtigste Barriere für die Absorption eines in einer äußerlichen Applikationsform, wie einem kosmetischen Mittel, enthaltenen Wirkstoffs durch die Haut dar.
Da das Stratum corneum aus Hornzellen, die vorwiegend Keratine umfassen, und zwischen den Hornzellen befindlichen Lipidschichten aufgebaut ist, werden insbesondere fettlösliche Wirkstoffe gut von der Haut absorbiert, während wasserlösliche Wirkstoffe und großmolekülige Wirkstoffe nicht von der Haut absorbiert werden. Da die meisten in äußerlichen Applikationsformen, wie kosmetischen Mitteln, vorliegenden Wirkstoffe wasserlöslich sind, werden diese daher nicht leicht von der Haut absorbiert.
Um diese Probleme zu umgehen, wird üblicherweise die Verwendung von unpolaren Lösungsmitteln, Tensiden und Lipidsäuren, etc. als Hautabsorptionsverstärker offenbart [Chen LH, Chien YW, „Enhancement of skin penetration" aus „Novel cosmetic delivery systems", 1990, 60; Rhein LD, Robbins CR, Fernee K, Cantore R, „Surfactant structure effects on swelling of isolated human stratum corneum", J. Soc. Cosmet. Chem., 1986, 37: 125; Cooper ER, Merritt EW, Smith RL, „Effect of fatty acids and alcohols on the penetration of acyclovir across human skin in vitro", J. Pharm. Sci., 1985, 74: 688]. Obwohl diese Hautabsorptionsverstärker die Hautabsorption des Wirkstoffs verstärken, verursachen diese jedoch aufgrund ihres geringen Molekulargewichts heftige Hautreize, nachdem sie von der Haut absorbiert wurden.
Ferner wird die Anwendung einer Sonophorese oder Minuteniontophorese auf der Haut offenbart, um die Hautabsorption der wasserlöslichen Stoffe durch die Haut zu verstärken [Sloan JB, Slotani K, „Iontophoresis in dermatology: a review", J. Am. Acad. Dermatol., 1986, 4: 671; Langer R, „Ultrasound-mediated transdermal protein delivery", Science, 1995, 269: 850]. Da diese Verfahren jedoch teure Gerätschaften erfordern, werden diese in Zusammenhang mit äußerlichen Applikationsformen, wie kosmetischen Zusammensetzungen, so gut wie nicht eingesetzt.
Zudem lehren verschiedene Patente andere Verfahren zur Verstärkung der Hautabsorption eines Wirkstoffs durch Veränderung oder Abschwächung der Hautbarrierefunktion mittels Enzymen. Die U.S. Patente Nrn. 5,534,260 und 5,296,222 beschreiben beispielsweise Verfahren zur Verstärkung der Absorption eines Wirkstoffs durch Zugabe einer Protease. Diese Verfahren basieren jedoch lediglich auf der Zugabe einer Protease zu der Zusammensetzung, was dazu führt, dass die Protease durch die Einwirkung der anderen in der Formulierung vorliegenden Bestandteile degeneriert und mit der Zeit ihre Aktivität verliert. Wie das oben Gesagten vermuten lässt, sind die beschriebenen Verfahren nicht für äußerliche Applikationsformen, welche zusätzlich zu dem Wirkstoff noch zahlreiche andere Bestandteile umfassen, geeignet, da das Enzym (Wirkstoff) zu keiner verstärkten Hautabsorption führt.
Die Dokumente FR-A-2 791 059 (Pacific GRP) und SIM, LEE et al., „Stabilization of papein and hydrozyne for application to cosmetic products", Biotechnology Letters, Vol. 22, 2000, Seiten 137–140, offenbaren nur die stabilisierte Protease der vorliegenden Erfindung. Die Dokumente offenbaren oder suggerieren jedoch nicht, dass die stabilisierte Protease zur Verstärkung der Hautabsorptionseigenschaften eines Wirkstoffs einer kosmetischen Zusammensetzung verwendet werden kann.
Um die oben erwähnten Probleme zu umgehen, haben die Erfinder der vorliegenden Erfindung nach einem Verfahren zur Verstärkung der Hautabsorption eines in einer äußerlichen Applikationsform, wie einem kosmetischen Mittel, vorliegenden Wirkstoffs geforscht und haben letztlich gefunden, dass die Absorptionsrate erhöht werden kann, wenn eine durch β-1,3-Glucan mit β-1,6-Verzweigungen stabilisierte Protease in der äußerlichen Applikationsform als Mittel zur Verstärkung der Hautabsorption verwendet wird.
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
Daher betrifft ein Gegenstand der vorliegenden Erfindung die Bereitstellung einer Zusammensetzung zur äußerlichen Applikation auf die Haut, wobei die Zusammensetzung durch eine verstärkte Hautabsorptionseigenschaft des in der Zusammensetzung enthaltenen Wirkstoffs gekennzeichnet ist.
DETAILLIERTE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
Im Folgenden wird die vorliegende Erfindung detailliert beschrieben.
Die vorliegende Erfindung stellt eine Zusammensetzung zur äußerlichen Hautapplikation mit verstärkten Hautabsorptionseigenschaften bereit, wobei eine durch β-1,3-Glucan mit β-1,6-Verzweigungen stabilisierte Protease als Hautabsorptionsverstärker in der äußerlichen Hautapplikationszusammensetzung verwendet wird. Die Zusammensetzung verstärkt die Hautabsorption durch Veränderung der Struktur der Hornschicht oder Entfernung der Schicht, ohne dabei Hautreize zu verursachen.
Ein Verfahren zur Herstellung der als Hautabsorptionsverstärker der vorliegenden Zusammensetzung verwendeten Protease entspricht dem in KR 2000-60771 A1 (veröffentlicht am 16. Oktober 2000), Titel: „Method for preparing stabilized enzyme or protein, and composition for external application comprising the stabilized enzyme or protein provided by the method", beschriebenen Verfahren. Im Einzelnen umfasst das Verfahren zur Stabilisierung der Protease die Schritte des (1) Umsetzens eines Glucans mit Periodaten, um die β-1,6-Verzweigungen des Glucans in Aldehyd zu überführen, (2) Entfernens von nicht umgesetzten Periodaten aus der Reaktionslösung aus Schritt (1), (3) Zugebens einer Protease zu der Reaktionslösung aus Schritt (2) in einer Menge von 0,00001–10,0 Gew.-%, und (4) Waschens des Produktes aus Schritt (4).
Die in dem oben beschriebenen Verfahren verwendeten Glucane sind β-1,3-Glucane mit β-1,6-Verzweigungen und die Glucane können abhängig von der chemischen Reaktion nur in der β-1,6-Verzweigung funktionelle Gruppen erzeugen. Die gemäß der vorliegenden Erfindung verwendeten Glucane sind nicht beschränkt, insbesondere werden Schizophyllan aus Schizophyllum commune, Scleroglucan aus Sclerotinia sp. und Lentinan aus Lentinus edodes verwendet.
Zudem sind die durch das Verfahren der vorliegenden Erfindung stabilisierten Proteasen nicht beschränkt, insbesondere werden Papain, Chymotrypsin, Trypsin, Carboxypeptidase, Pepsin, etc. verwendet.
Die Menge der in der Zusammensetzung zur äußerlichen Applikation enthaltenen stabilisierten Protease beträgt 0,0001–99,9999 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht der Zusammensetzung. Ferner ist die Formulierung zur äußerlichen Applikation nicht beschränkt. Sie kann beispielsweise eine kosmetische Formulierung, wie ein Hautweichmacher, ein Nährwasser, eine Massagezusammensetzung, eine Creme, ein Make-up-Hauptbestandteil, ein Lippenstift, eine Packung, ein Gel, ein Schampon, eine Spülung, ein Haartonikum oder eine Seife, oder eine äußerliche dermatologische Formulierung, wie eine Lotion, eine Salbe, ein Gel, eine Creme, ein Pflaster oder ein Spray, sein.
Zudem sind die verschiedenen Wirkstoffe mit durch die Hautabsorptionsverstärker der vorliegenden Erfindung verstärkten Hautabsorptionseigenschaften herkömmliche Wirkstoffe und sind nicht besonders beschränkt. Beispielsweise werden wasserlösliche Derivate von L-Ascorbinsäure, wie L-Ascorbinsäure, L-Ascorbinphosphat, L-Ascorbinglucosid, etc., Vitamin B, Kojisäure, Kojicoffeinsäure, Kojiaminopropylphosphat, Hydrochinon, Arbutin, wasserlösliche natürliche Wasser- oder Ethanolextrakte aus Grünem Tee oder Weintraube, etc. als Wirkstoffe verwendet.
Im Folgenden wird die vorliegende Erfindung noch genauer hinsichtlich verschiedener Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung beschrieben, wobei der Umfang der vorliegenden Erfindung durch die Ausführungsformen nicht beschränkt wird.
BESCHREIBUNG DER BEVORZUGTEN AUSFÜHRUNGSFORMEN
<Bezugsbeispiel 1> Herstellung von stabilisiertem Papain

1) Zu 50 ml einer wässrigen 0,5 Gew.-% Lösung aus Schizophyllan (Molekulargewicht 2.000.000) wurden 2 g Natriumiodidperoxid (NaIO₄) gegeben und die resultierende Mischung wurde bei 4 °C für 1 Stunde im Dunkeln gerührt.
2) Die resultierende Schizophyllanlösung wurde über eine Membran (MW-Ausschluß 10.000) für 48 Stunden im Dunkeln dialysiert. Die Dialyse wurde unter Auswechslung von 2.500 ml Wasser alle 12 Stunden durchgeführt.
3) Betrug das Volumen der Schizophyllanlösung etwa 100 ml, wurden 0,1 Gew.-% Papain zugegeben und die resultierende Mischung wurde bei 4 °C für 2 Stunden im Dunkeln gerührt.
4) 0,05 g Natriumborhydrid (NaBH₄) wurden zu der Schizophyllan-Papain-Lösung zugegeben und es wurde für 4 Stunden gerührt. Dann wurden 0,1 g Lysin zugegeben und die resultierende Mischung wurde bei 4 °C für 2 Stunden im Dunkeln gerührt.
5) Die resultierende Schizophyllan-Papain-Lösung wurde wie in Schritt 2) beschrieben dialysiert, um eine Lösung aus Papain gekoppelt an Schizophyllan (GE-1) zu erhalten. Die Ausbeute des hergestellten GE-1 betrug, basierend auf der Enzymaktivität, 95 %.

<Beispiel 1 und Vergleichsbeispiele 1 und 2> Kosmetische Mittel vom Wasser-Gel-Typ
<Verfahren zur Herstellung>

1) Die Bestandteile 1–7 wurden zu dem destillierten Wasser zugegeben und dann vollständig durch Rühren gelöst.
2) Die Bestandteile 10–12 wurden zu dem Ethanol gegeben und dann vollständig durch Rühren gelöst.
3) Die in Schritt 2) hergestellte Lösung wurde langsam zu der in Schritt 1) hergestellten Lösung gegeben, während die Lösung gerührt wurde.
4) Der Bestandteil 8) wurde zu der Lösung aus Schritt 3) gegeben, um ein Gel zu erzeugen.
5) Gasblasen wurden durch Vakuumentgasung entfernt und dann wurde ein kosmetisches Mittel vom Wasser-Gel-Typ erhalten.

<Beispiel 2 und Vergleichsbeispiele 3 und 4> Kosmetische Mittel vom Wasser-in-Öl-Emulsionstyp
<Verfahren zur Herstellung>

1) Die Komponente A (Bestandteile 1–7) und die Komponente B (Bestandteile 8–10) wurden auf 75 °C erhitzt.
2) A wurde langsam unter Rühren bei 7.000 U/min zu B gegeben. Nachdem A vollständig zu B gegeben wurde, wurden die Bestandteile 14 und 16 sofort zu der Mischung gegeben und es wurde für zwei Minuten gerührt, um eine Emulgierung zu erreichen.
3) Die Bestandteile 11 und 15 wurden zugegeben und es wurde für zwei Minuten gerührt, um eine Emulgierung zu erreichen.
4) Die Mischung aus 3) wurde für 1 Minute bei 2.500 U/min gerührt, um Luft zu entfernen.
5) Die Mischung aus 4) wurde in einem Eisbad auf 28–30 °C gekühlt.
6) Der Bestandteil 12 oder 13 wurde zu der obigen gekühlten Mischung gegeben, dann wurde bei 2.000 U/min gerührt.
7) Das Produkt wurde bei Raumtemperatur für 24 Stunden stehen gelassen, um eine stabilisierte kosmetische Zusammensetzung vom Wasser-in-Öl-Typ zu erhalten.

<Experimentelles Beispiel 1> Messung der Hautabsorption der Kojisäure
Die Messung der Hautabsorption der Kojisäure wurde in Frantz-Permeationszellen unter Verwendung der Haut von Meerschweinchen durchgeführt. Vor dem Experiment wurde Abdomenhaut von den Meerschweinchen entnommen. Die entnommene Haut wurde auf eine Größe von 1 cm² geschnitten und wurde in die Permeationszelle mit einer Permeationslinse mit einem Durchmesser von 0,9 cm gestellt und dann durch die Haltevorrichtung fixiert. 0,5 ml der zu untersuchenden kosmetischen Zusammensetzung aus Beispiel 1 und Vergleichsbeispiel 1 wurden auf eine Seite der Haut aufgetragen, während die andere Seite der Haut mit einer Lösungsmittelmischung aus destilliertem Wasser und Glycerin in einem Verhältnis von 1:1 in Kontakt gebracht wurde. Die Temperatur wurde bei 32 °C gehalten, was der Hauttemperatur entspricht. Das Lösungsmittel wurde regelmäßig (in festen Zeitintervallen; Stunde) gesammelt und dann wurde die Menge der durch die Haut absorbierte Kojisäure durch HPLC bestimmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 gezeigt.
<Tabelle 1>
In Anbetracht der Tatsache, dass die Auftragszeitdauer von herkömmlichem Make-up 4–8 Stunden beträgt, zeigt Tabelle 1, dass die Hautabsorption der Kojisäure um etwa das Vierfache erhöht ist, wenn eine stabilisierte Protease zu der Zusammensetzung zugegeben wird, verglichen mit dem Fall, dass keine stabilisierte Protease zugegeben wird.
<Experimentelles Beispiel 2> Messung der Hautabsorption von Ascorbinsäure
Die Menge der durch die Haut absorbierte Ascorbinsäure wurde mithilfe des in dem experimentellen Beispiel 1 beschriebenen Verfahrens bestimmt, außer, dass die kosmetischen Zusammensetzungen vom Wasser-in-Öl-Typ aus Beispiel 2 und Vergleichsbeispiel 3 verwendet wurden. Die Ergebnisse sind in Tabelle 2 gezeigt.
<Tabelle 2>
Tabelle 2 zeigt, dass die Hautabsorption der Ascorbinsäure um das etwa Sechsfache erhöht ist, wenn eine stabilisierte Protease zu der Zusammensetzung zugegeben wird, verglichen mit dem Fall, wenn keine stabilisierte Protease zugegeben wird.
<Verfahren zur Herstellung>

1) A (Bestandteile 1–9 und Bestandteil 17) und B (Bestandteile 10–12) wurden auf 75 °C erhitzt.
2) A wurde langsam zu B gegeben und die Mischung wurde für 5 Minuten bei 7.500 U/min gerührt, um eine Emulgierung zu erreichen.
3) Der Bestandteil 13 wurde zu der Mischung gegeben und es wurde für 5 Minuten bei 7.500 U/min gerührt, um eine Emulgierung zu erreichen.
4) Die Mischung aus 4) wurde in einem Eisbad auf 25 °C abgekühlt.
5) Die Bestandteile 14–16 wurden zugegeben und es wurde bei 2.500 U/min gerührt, um ein Mischen zu erreichen.
6) Das Produkt wurde für 24 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen, um eine Salbe zu erzeugen.

<Experimentelles Beispiel 3> Messung der Hautabsorption von Hydrochinon
Die Menge des durch die Haut absorbierten Hydrochinons wurde mithilfe des in dem experimentellen Beispiel 1 beschriebenen Verfahrens bestimmt, außer, dass die in Beispiel 3 und Vergleichsbeispiel 5 hergestellten Salben verwendet wurden. Die Ergebnisse sind in Tabelle 3 gezeigt.
<Tabelle 3>
Tabelle 3 zeigt, dass die Hautabsorption des Hydrochinons um das etwa Sechsfache erhöht ist, wenn eine stabilisierte Protease zu der Zusammensetzung zugegeben wird, verglichen mit dem Fall, wenn keine stabilisierte Protease zugegeben wird.
<Experimentelles Beispiel 4> Messung der Hautabsorption der in der kosmetischen Zusammensetzung vom Wasser-Gel-Typ vorliegenden Kojisäure 30 Tage nach deren Herstellung
Die Menge der durch die Haut absorbierten Kojisäure wurde mithilfe des in dem experimentellen Beispiel 1 beschriebenen Verfahrens bestimmt, außer, dass die kosmetischen Zusammensetzungen vom Wasser-Gel-Typ von Beispiel 1 und Vergleichsbeispiel 2 30 Tage nach deren Herstellung verwendet wurden. Die Ergebnisse sind in Tabelle 4 gezeigt.
<Tabelle 4>
Tabelle 4 zeigt, dass, obwohl Papain in der kosmetischen Zusammensetzung enthalten ist, wie man anhand des Vergleichsbeispiels 2, welches kein stabilisiertes Papain enthält, sieht, Papain 30 Tage nach der Herstellung der kosmetischen Zusammensetzungen durch die Einwirkungen der anderen darin enthaltenen Bestandteile seine Aktivität verliert. Daher zeigt Papain keine Hautabsorptionsverstärkungswirkung mehr.
<Experimentelles Beispiel 5> Messung der Hautabsorption der in der kosmetischen Zusammensetzung vom Wasser-in-Öl-Typ vorliegenden Ascorbinsäure 30 Tage nach deren Herstellung
Die Menge der durch die Haut absorbierten Ascorbinsäure wurde mithilfe des in dem experimentellen Beispiel 2 beschriebenen Verfahrens bestimmt, außer, dass die kosmetischen Zusammensetzungen vom Wasser-in-Öl-Typ aus Beispiel 2 und Vergleichsbeispiel 4 30 Tage nach deren Herstellung verwendet wurden. Die Ergebnisse sind in Tabelle 5 gezeigt.
<Tabelle 5>
Tabelle 5 zeigt, dass, obwohl Papain in der kosmetischen Zusammensetzung enthalten ist, wie man anhand des Vergleichsbeispiels 4, welches kein stabilisiertes Papain enthält, sieht, Papain 30 Tage nach der Herstellung der kosmetischen Zusammensetzungen durch die Einwirkungen der anderen darin enthaltenen Bestandteile seine Aktivität verliert. Daher zeigt Papain keine Hautabsorptionsverstärkungswirkung mehr.
<Experimentelles Beispiel 6> Messung der Hautabsorption des in der Salbe vorliegenden Hydrochinons 30 Tage nach deren Herstellung
Die Menge des durch die Haut absorbierten Hydrochinons wurde mithilfe des in dem experimentellen Beispiel 3 beschriebenen Verfahrens bestimmt, außer, dass die Salben aus Beispiel 3 und Vergleichsbeispiel 6 30 Tage nach deren Herstellung verwendet wurden. Die Ergebnisse sind in Tabelle 6 gezeigt.
<Tabelle 6>
Tabelle 6 zeigt, dass, obwohl Papain in der kosmetischen Zusammensetzung enthalten ist, wie man anhand des Vergleichsbeispiels 6, welches kein stabilisiertes Papain enthält, sieht, Papain 30 Tage nach der Herstellung der kosmetischen Zusammensetzungen durch die Einwirkungen der anderen darin enthaltenen Bestandteile seine Aktivität verliert. Daher zeigt Papain keine Hautabsorptionsverstärkungswirkung mehr.
<Experimentelles Beispiel 7> Beobachtung von Hautschädigungen
Die in den Beispielen 1 bis 3 hergestellten äußerlichen Applikationsformen wurden, wie in dem experimentellen Beispiel 1 beschrieben, auf die Haut der Meerschweinchen aufgetragen. 24 Stunden nach dem Auftrag wurde die Haut aus der Frantz-Permeationszelle entnommen, um mit dem bloßen Auge untersucht zu werden.
Als Ergebnis der Untersuchungen, konnten im Falle der Beispiele 1 bis 3 keine Hautschädigungen beobachtet werden und es hat sich gezeigt, dass die stabilisierte Protease keine Hautschädigungen verursacht, jedoch die Hautabsorption der Wirkstoffe erhöht.
<Experimentelles Beispiel 8> Hautstabilisierung
Um die Hautstabilisierungseigenschaften der Protease zu untersuchen, wurden 300 ml der in den Beispielen 1 bis 3 hergestellten äußerlichen Applikationsformen einmal pro Tag für 30 Tage lang auf die gleiche Stelle auf den Rücken einer nackten Maus aufgetragen, um mit dem bloßen Auge nach Hautschädigungen, wie Schwellungen, Erythema, etc., zu suchen. Es wurden jedoch keine Hautschädigungen gefunden.
Die Hautabsorptionsverstärker der vorliegenden Erfindung verursachen keine Hautprobleme, wie Hautreizungen, Hautschädigungen, etc., erhöhen jedoch die Hautabsorption derjenigen Bestandteile, die aufgrund ihrer geringen Affinität für die Hornschicht oder ihres hohen Molekulargewichts Permeationsprobleme zeigen.

Claims

Nicht-therapeutische Verwendung einer Protease, die durch β-1,3-Glucan, das mit β-1,6-Verknüpfung verzweigt ist, stabilisiert ist, als ein Hautabsorptions-Verstärkungsmittel eines aktiven Mittels einer kosmetischen Zusammensetzung.
Verwendung gemäß Anspruch 1, wobei die Zusammensetzung eine Zusammensetzung für äußerliche Anwendung ist.
Verwendung gemäß Anspruch 1, wobei das aktive Mittel ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus L-Ascorbinsäure, Derivaten von L-Ascorbinsäure, Vitamin B, Kojisäure, Koji-Koffeinsäure, Koji-Aminopropylphosphat, Hydrochinon, Arbutin und wasserlöslichen Naturstoffen.
Verwendung gemäß Anspruch 1, wobei das β-1,3-Glucan, das mit β-1,6-Verknüpfung verzweigt ist, Schizophyllan, Scleroglucan oder Lentinan ist.
Verwendung gemäß Anspruch 1, wobei die Proteasen ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Papain, Trypsin, Chymotrypsin, Carboxypepidase und Pepsin.
Verwendung gemäß Anspruch 1, wobei die Proteasen durch das Verfahren stabilisiert sind, das die Schritte umfasst: (1) Umsetzen von β-1,3-Glucan, das mit β-1,6-Verknüpfung verzweigt ist und Periodaten, um die β-1,6-Verknüpfung des Glucans in Aldehyd zu überführen; (2) Entfernen von nicht umgesetzten Periodaten aus der Reaktionslösung aus Schritt (1); (3) Hinzufügen einer Protease zu der Reaktionslösung aus Schritt (2) in einer Menge von 0,00001–10,0 Gewichts-%; (4) Hinzufügen eines Reduktionsmittels zu der Reaktionslösung aus Schritt (3) in einer Menge von 0,0001–1,0 Gewichts-%; und (5) Waschen des Produkts aus Schritt (4).