DE550935C - Verfahren zur Trennung der wirksamen Substanzen des Hypophysenhinterlappens - Google Patents

Description

• Verfahren zur Trennung der wirksamen Substanzen des Hypophysenhinterlappens In The Journal of The American Chemical Society, 50, 1928, S. 573 ff ., ist ein Verfahren zur Trennung der wirksamen Substanzen des Hypophysenhinterlappens beschrieben. Das Verfahren besteht darin, daß man die Trockensubstanz mit verdünnter Essigsäure auszieht, die eingedampften Extraktlösungen mit Ammoniumsulfat versetzt, die hierbei entstandenen Fällungen mit Eisessig auszieht und die,erhaltene Lösung mit organischen Lösungsmitteln fraktioniert versetzt.
• Es wurde nun gefunden:, daß man die Trennung der wirksamen Substanzen des Hypophysenhinterlappens in technisch neinfacher Weise bewerkstelligen kann, wenn man Lösungen, welche die wirksamen Substanzen des Hinterlappens enthalten, mit Adsorptionsmitteln fraktioniert behandelt. Hierbei wird fast nur die blutdrucksteigernde Substanz adsorbiert, während die uteruswirksame Substanz zum weitaus .größten Teil in Lösung bleibt. Der Grad der Trennung der wirksamen Substanzen ist von der Wahl des Adsorptionsmittels und der verwendeten Mengen abhängig. Am besten haben sich Kieselsäure und bestimmte Silikate bewährt, z. B. der im Handel befindliche Bentonit. Da ein überschuß des Adsorptionsmittels natürlich auch die uteruswirksame Substanz zu adsorbieren vermag, so ermittelt man zweckmäßig in einem Vorversuch diejenige Menge Adsorptionsmittel, welche die optimalste Adsorption der blutdruckwirksamen Substanz bewerkstelligt. Auch die Wahl der Wasserstoffionenkonzentration ist von dem verwendeten Adsorptionsmittel abhängig und wird zweckmäßig in einem Vorversuch ermittelt. Man kann bei der Ausführung des Verfahrens entweder so vorgehen, daß man die Trennung mit einer einmaligen Zugabe des Adsorptionsmittels bewerkstelligt; es kann aber auch bezüglich einer vollständigeren Trennung der wirksamen Substanzen und Erzielung besserer Ausbeuten von Vorteil sein, daß man .das Adsorptionsmittel statt in .einem Arbeitsgang in mehreren Phasen mit entsprechend kleineren Mengen verwendet. Der Vorteil bei der ersten Ausführungsform ist der, daß man in einem Arbeitsgang fast eine quantitative Trennung der wirksamen Substanzen bewerkstelligen kann, wobei allerdings kleine Verluste an uteruswirksamer Substanz unvermeidbar sind. Das zweite Verfahren besitzt bei etwas größerer Umständlichkeit den Vorzug, daß die Verluste an uteruswirksamer Substanz nur unbedeutend sind.
• Aus dem erhaltenen Adsorbat kann: die blutdruckwirksame Substanz durch geeignete Lösungsmittel wieder herausgelöst und isoliert werden. Beispi.,ele i. Eine Lösung";,welche ini Kubikzentimeter je 6o E der @beiilen :Substanzen des Hypophysenhinterlappens enthält, wird auf pH = 6,4. eingestellt. Je i.o ccm dieser Lösung werden geschüttelt mit

  a) o, i 2 5 g Bentonit,

  b) o, i g -

  c) 0,05 g -

  d) 0,025 g -

  Die Adsorbabe werden jeweils abzentrifugiert; das Zentrifugat enthält vorwiegend die uteruswirksame Substanz, und zwär

  literuswirlisame Blutdruckwirksam

  Substanz: Substanz:

  a) 40 E 2 E

  b) 40 E 5 E

  c) 6o E 5 E

  d) 6o E 5 E

  Aus dieser Versuchsreihe geht hervor, daß bei a) und b) Verluste, bei c) und d) keine Verluste an uteruswirksamer Substanz zu verzeichnen sind, während die Trennung der beiden Substanzen bei a) am weitgehendsten durchgeführt ist. Eine weitgehendere Trennung kann. dann bei c) und d) 'durch nochmalige Behandlung der Lösung mit einer kleinen Menge Bentonit erzielt werden. Das abzentrifugierte Adsorbat wird zuerst heiß mit o,25 %iger Essigsäure@extrahiert, wobei die adsorbierte, uteruswirksame Substanz in Lösung geht, während die blutdruckwirksame Substanz nicht herausgelöst wird. Dann wird mit einer i %igen Sodalösung ausgezogen und so die blutdruckwirksame Substanz in gereinigter Form erhalten.
• 2. Eine eiweißfreie Lösung der wirksamen Substanzen des Hypophysenhinterlappens wird, wie in Beispiel i beschrieben, mit verschiedenen Mengen eines gereinigten Tonpräparats, z. B. des unter dem Namen Dazol im Handel befindlichen Präparats, bei PH = 6,2 behandelt und nach dem Ausfall der Vorprüfung die geeignete Menge des Adsorptionsmittels für den Hauptversuch verwendet. Die weitere Verarbeitung gestaltet sich wie in Beispiel i.
• 3. Eine eiweißfreie Lösung der wirksamen Substanzen des Hypophysenhinterlappenswird bei pH = 3,5 mit verschiedenen Mengen eines Kieselsäurepräparats, z. B. einer durch Elektroosmose gereinigten Kieselsäure, behandelt und so die geeignete Menge des Adsorptionsmittels gefunden, mit der dann der Hauptversuch ebenso wie in Beispiel i durchgeführt wird.
• q.. Eine fast eiweißfreie Lösung der wirksamen Substanzen -des Hypophysenhinterlappens wird mit Bentonit wie in Beispiel i adsorbiert. Das abgeschleuderte Adsorbat wird zuerst heiß mit n/6oo Salzsäure behandelt, wobei die adsorbierte, uteruswirksame Substanz in Lösung geht. Der Rückstand wird dann mit einer Chlorammonium-Ammoniak-Pufferlösung von etwa pEi 9 bis io ausgezogen und so die blutdruckwirksame Substanz in Lösung erhalten.
• 5. Eine Lösung der wirksamen Substanzen des Hypophysenhinterlappens wird, wie in Beispiel i, mit Bentonit behandelt; das abgeschleuderte Adsorbat wird heiß mit n/8oo Schwefelsäure ausgezogen, wobei die adsorbierte uteruswirksame Substanz in Lösung von sekundärem Natriumphosphat ausgezogen und so die blutdruckwirksame Substanz erhalten.

Claims (1)

1. PATRNTANSPRUCIi Verfahren zur Trennung der wirksamen Substanzen des Hypophysenhinterlappens, dadurch gekennzeichnet, daß man Lösungen dieser wirksamen Substanzen mit Adsorptionsmitteln bei schwach saurer Reaktion fraktioniert behandelt, die Adsorbate von der die uterusweksame Substanz enthaltenden Lösung abtrennt und zur Gewinnung des mitadsorbierten Teiles der uteruswirksamen Substanz mit verdünnten Säuren und dann zur Gewinnung der blutdruckwirksamen Substanz mit schwach alkalischen Lösungen behandelt.