DE3317107A1

DE3317107A1 - Immunomodulierendes mittel

Info

Publication number: DE3317107A1
Application number: DE19833317107
Authority: DE
Inventors: Hiroshi Enomoto; Makio Kobayashi; Iwao Kyoto Morita; Hiroaki Sagamihara Kanagawa Munakata; Shigeru Machida Tokyo Sato; Yoshihisa Shibata; Makoto Sugiyama; Makoto Tokyo Tsurufuji; Kazuo Wagatsuma
Original assignee: Mitsubishi Kasei Corp; Nippon Shinyaku Co Ltd
Current assignee: Mitsubishi Kasei Corp; Nippon Shinyaku Co Ltd
Priority date: 1982-05-11
Filing date: 1983-05-10
Publication date: 1983-11-24
Also published as: IT8321018A0; EP0094599A1; GB2124077B; SE8302694L; JPH0211568B2; IT1200011B; ATE26212T1; FR2526659B1; GB2124077A; US4720506A; BE896712A; JPS58194814A; DE3370585D1; SE8302694D0; CH656800A5; GB8311536D0; NL8301639A; EP0094599B1; FR2526659A1

Description

* Λ Ι» * β β.»

η 4 β 0

5 -

Beschreibung

Gegenstand der Erfindung ist ein immunomodulierendes Mittel, welches ein Phenylessigsäurederivat der allgemeinen Formel (I)

_Rl_N-(/

CCOOR⁴ (I)

in der R ein Wasserstoffatom oder eine Gruppe der Formel

0
5 ti 5

R C-, in der R für eine Alkylgruppe mit 1 bis 6 Kohlen-

2 3

stoff atomen oder eine Arylgruppe steht,, R und R unabhängig voneinander Wasserstoffatome oder Alkylgruppen mit

4
1 bis 4 Kohlenstoffatomen und R ein Wasserstoffatom oder eine Alkylgruppe mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen bedeuten, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon als Wirkstoff enthält.

Der hierin verwendete Ausdruck "immunomodulierende Wirkung" umfaßt sowohl die immunosuppressive Wirkung als auch die immunostimulierende Wirkung.

Die Erfindung sei im folgenden näher unter Bezugnahme auf die beigefügte Zeichnung erläutert.

Die einzige

Fig. 1 verdeutlicht anhand einer Kurvendarstellung die Ergebnisse der Untersuchung der Adjuvans-Arthritis an Ratten, wobei auf der horizontalen Achse die Anzahl der Tage nach der Injektion des Adjuvans und auf

der senkrechten Achse das relative Schwellungsvolumen (%) gegenüber dem Wert am 9. Tag aufgetragen sind.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen entsprechen der nachfolgenden allgemeinen Formel (I)

(I) 10

In dieser allgemeinen Formel (I) können als Alkylgruppen R bis R irgendwelche geradkettigen oder verzweigten Alkylgruppen vorliegen, wie Methylgruppen, Ethylgruppen, n-Propylgruppen, Isopropylgruppen, n-Butylgruppen, Isobutylgruppen, tert.-Butylgruppen, n-Pentylgruppen etc. Die Arylgruppe R umfaßt Phenylgruppen, Tolylgruppen, Xylylgruppen, Naphthylgruppen etc.

Beispiele für Phenylessigsäurederivate der allgemeinen Formel (I) sind die folgenden Verbindungen:

113CCnY⁷ T-C-COOH

O H

ιη-η

O H

(^/ 7-C-COOCH3

(CIl₃) 3C-C-N-// M-C-COOH I! W

H₂N

C-COOH

ι H

Il

-C-N H

C-COOCH₃

II

H l C-COOH

y H

H₃C-C-COOH H

H₂N-

CH2-COOC2H5

Il

,CH-C-N-

H ι

CII₃ (CH₂) 5-C-N-(Z ^Vc-COOCH₃

Die Salze dieser Phenylessigsaurederivate der allgemeinen Formel (I) sind pharmazeutisch annehmbare Salze und schließen beispielsweise in dem Fall, da R eine

5 " 4
Gruppe der Formel R -C- und R ein Wasserstoffatom bedeuten, Salze mit einer anorganischen Base, wie einem Alkalimetall oder einem Erdalkalimetall, beispielsweise Natrium, Kalium, Calcium etc. und Salze mit einer organischen Base, wie Procain, N,N¹-Dibenzylethylendiamin etc.;

1 4

und in dem Fall, da R ein Wasserstoffatom und R eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen bedeuten, Additionssalze mit anorganischen oder organischen Säuren, wie Chlorwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Fumarsäure, Maleinsäure, Ameisensäure etc. ein.

Gegenstand der Erfindung ist weiterhin ein Verfahren zur Herstellung der Phenylessigsaurederivate der obigen allgemeinen Formel (I), welches dadurch gekennzeichnet ist, daß man ein Nitrobenzolderivat der allgemeinen Formel (IV)

¹ 4 C - COOR

2 3 4
in der R , R und R die oben angegebenen Bedeutungen besitzen, zur Bildung eines Anilinderivats der allgemei nen Formel (II)

* ₄

Γ—\^ C - COOR (H)

H₂N

2 3 4

in der R , R und R die oben angegebenen Bedeutungen besitzen, reduziert, und

in dem Fall, da R der Ausgangsverbindung der allgemeinen Formel (II) ein Wasserstoffatom bedeutet, das erhaltene Anilinderivat mit einem Alkohol der allgemeinen

4 4

Formel R OH, in der R eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen bedeutet, verestert und gegebenenfalls das erhaltene Anilinderivat der allgemeinen Formel (II) mit einem Säureanhydrid der allgemeinen Formel (V) 10

5 " R-C

O
\

O (V)

R⁵ - C
· S

oder einem Säurechlorid der allgemeinen Formel (VI)

O

R⁵ - C - Cl (VI)

in denen R die oben angegebenen Bedeutungen besitzt„ umsetzt, unter Bildung eines Phenylessigsäurederivats der allgemeinen Formel (III)

(III)

2 3 4 5
xn der R ,R , R und R die oben angegebenen Bedeutungen besitzen, und

- ίο -

gegebenenfalls die erhaltene Verbindung mit einer anorganischen oder organischen Base oder einer anorganischen oder organischen Säure in das gewünschte pharmazeutisch annehmbare Salz umwandelt.
5

Die erfindungsgemäße Verfahrensweise zur Herstellung der Verbindungen der allgemeinen Formel (I) sei im folgenden naher mit der Maßgabe erläutert, daß die Verbindungen der allgemeinen Formel (I) in die nachfolgenden Gruppen der Verbindungen der allgemeinen Formeln (II) und (III)

C-COOR⁴

( ID \—/ k^j

O
R⁵-C-Ml-(/ ^T I/" (HD

aufgeteilt werden, in welchen Formeln (II) und (III) R bis R die bezüglich der al
benen Bedeutungen besitzen.

bis R die bezüglich der allgemeinen Formel (I) angegeDie Anilinderivate der obigen allgemeinen Formel (II) kann man in verschiedenartiger Weise herstellen. Beispiele für solche Synthesewege sind im folgenden Schema dargestellt:

+ HOR

Veresterung

Reduktion

O₂N-

R²O

1 I! C-COH

HOR

Veresterung

Reduktion

Die Reduktion kann durch katalytische Hydrierung unter Verwendung von Palladium, Palladiumschwarz oder Palladium-auf-Aktivkohle durchgeführt werden. Alternativ kann man eine Reduktion mit Eisenpulver/NHLCl oder dergleichen durchführen.

Die Veresterung kann man in der Weise bewirken, daß man das Ausgangsmaterial mit dem entsprechenden Alkohol in Gegenwart von Chlorwasserstoffsäure, Schwefelsäure oder p-Toluolsulfonsäure erhitzt, wonach man erforderlichenfalls eine azeotrope Entwässerung bei gleichzeitiger Anwesenheit eines azeotropen Entwässerungsmittels, wie Benzol, durchführt, wodurch man ohne weiteres den gewünschten Ester erhält.

Die als Ausgangsmaterial verwendeten Nitrobenzolderivate können in verschiedenartiger Weise synthetisiert werden. Nachfolgend sind Beispiele solcher Syntheserouten dargestellt;

C°^OC2"5 _Nali

(1) R-CH

COOC2115

(worin R für eine Methylgruppe oder eine Ethy!gruppe steht)

COOC2H5

1) NaOH
T-*

2) H⁺

(2)

EtOH

CH-COOH

COOH

Veresterung

O₂C

CIl-COOCoH

2"5

I Nail

2) ICH₃

Den 2-Alkyl-2-(4-nitrophenyl)-malonsäurediethylester für das obige Verfahren (1) kann man dadurch herstellen, daß man einen 2-Alkylmalonsäureester mit einer starken Base, wie Natriumhydrid, in N,N-Dimethylformamid und dann mit p-Halogennitrobcnzol umsetzt.

Die Hydrolyse des erhaltenen Esters kann durch Umsetzen mit Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid oder dergleichen in Wasser oder einem Alkohol (Methanol, Ethanol, etc.) oder einer Mischung davon erfolgen.

Die Ot'-Alkyl-nitrophenylessigsäure kann man dadurch erhalten, daß man einen 2-Alkyl-2-(4-nitrophenyl)-malonsäurediethylester mit überschüssigem Natriumhydroxid oder Kaliumhydroxid in Wasser oder einem Alkohol (Methanol, Ethanol, etc.) oder einer Mischung davon erhitzt oder indem man eine 2-Alkyl-2-(4-nitrophenyl)-malonsäure mit einer geeigneten Säure, wie Chlorwasserstoffsäure, Schwe-

felsäure oder p-Toluolsulfonsäure, in einem geeigneten Lösungsmittel, wie einem Alkohol (Methanol, Ethanol, etc.), Benzol oder Toluol erhitzt.

Die anschließende Veresterung kann in der Weise bewirkt werden, daß man das Material in Gegenwart von Chlorwasserstoff säure, Schwefelsäure oder p-Toluolsulfonsäure mit Ethanol erhitzt.

Den für das obige Verfahren (2) erforderlichen 2-Methyl-2-nitrophenylpropionsäureethylester kann man dadurch herstellen, daß man Nitrophenylessigsäureethylester mit einer starken Base, wie Natriumhydrid, in N,N-Dimethy!.formamid und dann mit überschüssigem Methyljodid umsetzt«

Die Carbonsäure der allgemeinen Formel (III)_?in der R* ein Wasserstoffatom darstellt, kann man ohne weiteres aus dem entsprechenden Ester, wie dem Methyl- oder Ethylester mit Hilfe einer üblichen Hydrolyse bilden,

Die Verbindung der allgemeinen Formel (III), in der R eine Alkylgruppe darstellt, kann man mit Hilfe irgendeiner üblichen Verfahrensweise herstellen. Beispielsweise kann man die Verbindung der allgemeinen Formel (III) dadurch herstellen, daß man ein Säureanhydrid, wie Essigsäureanhydrid oder Propionsaureanhydrid, mit einem Anilinderivat der allgemeinen Formel (II)

.—. ... c-COOR⁴ (II)

umsetzt.

Man kann die Verbindung der allgemeinen Formel (III) auch

dadurch herstellen, daß man ein Anilinderivat der allgemeinen Formel (II) mit einem Carbonsäurechlorid umsetzt,

Das folgende Reaktionsschema umfaßt zwei Synthesewege zur Herstellung von 4-Acetylaminophenylessigsäureethyl· ester:

10 (D H₅C₂OCCH₂-V_-

Il

H5C₂OCCH2

I!
C-CH₃

C-CH₃

O Il NHCCH₃

(2) H₅C₂OCCH₂-V 7~^N112

Il
ClCCH₃

H₅C₂OCCH₂

Die mit Hilfe dieser Verfahrensweisen erhaltenen gewünschten Verbindungen können durch Umkristallisation, durch eine Ionenaustauschbehandlung, durch Chromatographie/ durch Behandlung mit Aktivkohle oder dergleichen mit Hilfe an sich bekannter Verfahrensweise der organischen

30 Chemie gereinigt werden.

Die in dieser Weise erhaltenen Verbindungen werden als Wirkstoffe der erfindungsgemäßen xmmunomodulierenden Mittel zur therapeutischen und vorbeugenden Behandlung von verschiedenen Erkrankungen eingesetzt, die durch Immun-

reaktionen verursacht sind.

Die erfindungsgemäßen immunomodulierenden Mittel können oral oder parenteral (beispielsweise intramuskulär, subkutan, intravenös oder rektal) als solche oder in verschiedenartiger Verabreichungsform verabreicht werden.

Als feste Präparate kann man Tabletten, mit Zucker umhüllte Tabletten, filmbeschichtete Tabletten (Dragees), mit eine verzögerte Wirkstofffreisetzung sicherstellenden Umhüllung versehene Tabletten, harte oder weiche Gelatinekapseln, Pastillen, Pillen, Granulate, feine Granulate oder Pulver herstellen. Als halbharte Präparate kann man Suppositorien, endermal zu verabreichende Mittel (transdermale Systeme) oder Salben herstellen.

Als flüssige Präparate kann man Injektionsflüssigkeiten, Sirupe, Lösungen, zu inhalierende Materialien, Emulsionen, Suspensionen etc. bereiten.

Als Hilfsstoffe für die festen Präparate kann man Verdünnungsmittel (beispielsweise Lactose, Stärken, Mannit, Calciumhydrogenphosphat etc.), Bindemittel (beispielsweise Cellulosederivate, Polyvinylalkohol, Polyethylenglykol, Gelatine, Gummi arabicum, kristalline Cellulose, etc.), Sprengmittel (beispielsweise Carboxymethylcellulose, kristalline Cellulose, Hydroxypropylcellulose mit niedrigem Substitutionsgrad etc.), Gleitmittel (beispielsweise Magnesiumstearat, Talkum, leichtes Kieselsäureanhydrid, synthetisches Aluminiumsilikat, etc.), die Wirkstofffreisetzung verzögernde Mittel (beispielsweise Paraffine etc.), Beschichtungsmaterialien (beispielsweise Polyvinylacetaldiethylaminoacetat, HA (Warenzeichen), Hydroxypropylmethylcellulose und dessen Phthalat, Eudragit (Rohm & Haas), Schellack, Saccharose, gefälltes CaI-ciumcarbonat, Talkum, Calciumhydrogenphosphat, etc.),

Weichmacher (beispielsweise Rizinusöl und Polyethylenglykol) , Glanzbildner (beispielsweise Carnaubawachs), etc. verwenden.

Als Grundlage für die Suppositorien verwendet man PoIyethylenglykol, verschiedene Arten von Pflanzenfetten und gehärteten Pflanzenfetten, Witepsol (Glycerinfettsäureester der Fi'rma Dynamit Nobel AG), etc., wobei man oberflächenaktive Mittel in diese Grundlagen einarbeiten kann.

Als Salbengrundlage kann man Fettgrundlagen und Ölgrundlagen (beispielsweise Fette und Öle von Tieren und Pflanzen, Wachse, Vaseline, etc.), wasserlösliche Grundlagen (beispielsweise Polyethylenglykol, Cetylalkohol etc.) oder Emulsionsgrundlagen (beispielsweise Öl-in-Wasser- oder Wasser-in-Öl-Emulsionsgrundlagen aus tierischen und pflanzlichen Fetten und Ölen oder Mineralölen oder synthetischen Fetten und Ölen, einem Wasserbestandteil und oberflächenaktiven Mitteln) etc. verwenden.

Die flüssigen Präparate kann man dadurch herstellen, daß man einen niedrigmolekularen aliphatischen Alkohol,wie Ethylalkohol, einen mehrwertigen Alkohol, wie Polyethylenglykol und Polypropylenglykol, etc., Dimethylacetamid oder Fette und Öle oder Mischungen davon in destilliertem Wasser löst, emulgiert oder suspendiert. In diesem Fall kann man als lösungsvermittelnde Mittel, als Emulgiermittel oder als Suspendiermittel verschiedenartige oberflächenaktive Mittel, Gummi arabicum, Gelatine oder Cellulosederivate in Abhängigkeit von dem angestrebten Zweck verwenden, wobei man zusätzlich isotonische Mittel, wie Natriumchlorid, Konservierungsmittel wie p-Hydroxybenzoesäurederivate, umgekehrte Seifen (reversed soap) etc. und schließlich Puffer, Lokalanästhe-

- 17 -

tika, etc. einsetzen kann.

Zur Steigerung der Stabilität kann es beispielsweise von Vorteil sein, ein gefriergetrocknetes Pulver aufzubewahren und es erst unmittelbar vor der Verwendung zu lösen.

Die oben angesprochenen festen? halbfesten oder flüssigen Präparate können Farbstoffe, Duftstoffe, Aromastoffe, Süßungsmittel und Stabilisatoren enthalten. Diese Präparate können in an sich bekannter Weise zu Mitteln mit langer Wirkungsdauer oder zu Mikrokapseln modifiziert werden. Im allgemeinen sind einer oder mehrere erfindungsgemäße Wirkstoffe in einer Menge von 0,1 bis 99 % und im allgemeinen von 0,5 bis 90 %, bezogen auf das gesamte Mittel, in dem Präparat enthalten. In den erfindungsgemäßen Mitteln oder Präparaten kann man zusammen mit den erfindungsgemäßen Wirkstoffen einen oder mehrere andere Arzneimittelwirkstoffe, beispielsweise ein Nichtsteroidanalgetikum, ein antiinflammatorisches Mittel, wie Acetylsalicylsäure, Indomethacin oder Phenylbutazon etc. zum Zwecke der Kombinationstherapie verwenden.

Der orale Verabreichungsweg ist der übliche Verabreichungsweg, wenngleich man die Mittel auch rektal oder transdermal verabreichen kann.

Die Dosis des Wirkstoffs beträgt im allgemeinen 1 bis 3000 mgpro Tag bei parenteraler Verabreichung und 1 bis 3000 mg pro Tag bei oraler Verabreichung, wenngleich die angewandten Dosierungen auch kleiner oder größer sein können in Abhängigkeit von dem Alter, dem Körpergewicht, der Art der Erkrankung oder dem Ausmaß der Symptome des zu behandelnden Patienten. Im Fall der Verabreichung einer wesentlich größeren Dosis kann es von Vorteil sein,

die Dosis in mehrere Einzeldosierungen aufzuteilen.

Das erfindungsgemäße immunomodulierende Mittel besitzt eine geringe Toxizität und kann in der Therapie, beispielsweise zur Behandlung der folgenden Erkrankungen verwendet werden: Autoimmunerkrankungen, wie chronische rheumatische Arthritis, systemische Schmetterlingsflechte (SLE), Collagenerkrankung, etc.; allergischen Erkrankungen, wie Asthma, etc.; Krebs; Bakterieninfektionserkrankungen und dergleichen.

Die Erfindung sei im folgenden näher anhand der folgenden Herstellungsbeispiele und Beispiele erläutert. Es versteht sich, daß diese Beispiele nur der weiteren Verdeutlichung der Erfindung dienen sollen und diese nicht einschränken sollen.

Herstellunqsbeispiel 1
p-Aminophenylessigsäureethylester: Verbindung 1

Man erhitzt p-Aminophenylessigsäure in 15 % Chlorwasserstoff enthaltendem Ethanol zum Sieden am Rückfluß. Nach dem Abtrennen des Ethanols durch Destillation extrahiert man den Rückstand mit Ethylacetat, wäscht den Extrakt nacheinander mit Wasser, einer gesättigten Natriumbicarbonatlösung und Wasser und trocknet ihn. Dann destilliert man das Ethylacetat ab und erhält den p-Aminophenylossigsäureethyles.ter.

Herstellungsbeispiel 2

2-(4-Aminophenyl)-propionsauroethylester: Verbindung 2 Man wäscht 30,3 g Natriumhydrid (in B'orm einer 50 %-igen

Suspension in Mineralöl) mit η-Hexan, suspendiert es in 370 ml N,N-Dimethylformamid und rührt unter Eiskühlung. Dann gibt man tropfenweise 100 g (0,574 Mol) Methylmalonsäurediethylester zu und rührt die Mischung, bis die Freisetzung von Wasserstoff beendet ist. Anschließend gibt man eine Lösung von 90,5 g (0,574 Mol) p-Chlornitrobenzol in 145 ml N,N-Dimethylformamid tropfenweise zu und erhitzt die Mischung während 10 Stunden auf einem Ölbad auf 80⁰C. Anschließend destilliert man Ν,τΝ-Dimethyl-

10' formamid unter vermindertem Druck ab und extrahiert den Rückstand mit Ethylacetat. Man wäscht die Ethylacetatschicht mit 5 %-iger Chlorwasserstoffsäure und einer gesättigten Natriumchloridlösung und trocknet über wasserfreiem Magnesiumsulfat. Dann destilliert man das Ethylacetat unter vermindertem Druck ab und erhält 148 g 2-Methyl-2-(4-nitropheny1)-malonsäurediethylester.

Man löst 147 g des rohen 2-Methyl-2-(4-nitrophenyl)-raalonsäurediethylesters in 600 ml Ethanol,, gibt eine Lösung von 42,4 g (0,846 Mol) 93 %-igen Natriumhydroxids in 400 ml Wasser zu und setzt die Lösung während 3 Stunden bei 5O⁰C um. Anschließend gibt man 1 Liter Wasser zu der Reaktionsmischung und trennt die gebildete ölige Substanz von der wäßrigen Schicht ab. Man säuert die wäßrige Schicht mit konzentrierter Chlorwasserstoffsäure an und extrahiert mit 700 ml Ethylacetat. Man wäscht die Ethylacetatschicht mit einer gesättigten Natriumchloridlösung und trocknet über wasserfreiem Magnesiumsulfat. Nach dem Abfiltrieren des Magnesiumsulfats destilliert man das Ethylacetat ab und erhält 66,8 g rohe 2-(4-Nitrophenyl)-propionsäure.

Man löst 23,3 g der rohen 2-(4-Nitrophenyl)-propionsäure in 100 ml einer 22 %-igen Chlorwasserstoffsäurelösung in Ethanol, wonach man die Lösung während 2 Stunden auf einem Ölbad zum Sieden am Rückfluß erhitzt. Nach dem Ab-

destillieren des Ethanols unter vermindertem Druck neutralisiert man den Rückstand mit einer gesättigten Natriumbicarbonatlösung und extrahiert mit Ethylacetat. Die Ethylacetatschicht wird mit einer gesättigten Natriumchloridlösung gewaschen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Nach dem Abdestillieren des Ethylacetats unter vermindertem Druck unterwirft man den Rückstand einer Chromatographie über Kieselgel unter Verwendung von Chloroform als Lösungsmittel, wobei man 55 g 2-(4-Nitrophenyl)-propionsäureethylester erhält.

Man löst 48,3 g (0,216 Mol) 2-(4-Nitrophenyl}-propionsäureethylester in 400 ml Ethanol und hydriert die Lösung während 6 Stunden unter Verwendung von 1 g eines PalIadiumschwarz-Katalysators. Dann filtriert man den Palladiumschwarz-Katalysator ab und destilliert das Ethanol ab, wobei 48,3 g einer öligen Substanz zurückbleiben. Die ölige Substanz wird unter vermindertem Druck destilliert und ergibt 38,6 g 2-(4-Aminophenyl)-propionsäureethylester in Form einer Destillationsfraktion, die bei 124 bis 126°C/1,3 bis 2,7 mbar (1 bis 2 mmHg) übergeht.

Herstellungsbeispiel· 3

2-(4-Aminophenyl)-2-methylpropionsäureethylester: Verbindung 3

Man wäscht 10,56 g (entsprechend 0,22 Mol) Natriumhydrid (in Form einer 50 %-igen Suspension in Mineralöl) mit n-Hexan, suspendiert es in 100 ml N,N-Dimethylformamid und rührt unter Eiskühlen. Dann gibt man tropfenweise eine Lösung von 20,9 g (0,1 Mol) 4-Nitrophenylessigsäureethylester in 100 ml N,N-Dimethylformamid zu und rührt die Mischung unter Eiskühlen während 1 Stunde und dann bei Raumtemperatur während 2 Stunden.· Nach dem Abdestillie-

ren des N,N-Dimethylformamide unter vermindertem Druck, dem Extrahieren mit Ethylacetat und dem Waschen mit einer 5 %-igen Chlorwasserstoffsäurelösung und dem weiteren Waschen mit einer gesättigten Natriumchloridlösung trocknet man die Ethylacetatschicht über wasserfreiem Natriumsulfat. Dann destilliert man das Ethylacetat unter vermindertem Druck ab und erhält 20„33 g (0,086 Mol) 2-Methyl-2-(4-Nitrophenyl)-propionsäureethylester (Ausbeute: 86, %).

V

Man löst 20,33 g des in dieser Weise erhaltenen Esters in 120 ml Ethanol und hydriert in Gegenwart von 0,3 g Palladiumschwarz als Katalysator. Nach dem Abfiltrieren des Palladiumschwarzes und dem Abdestillieren des Ethanols. löst man den Rückstand in einer 5 %-igen Chlorwasserstof fsäurelösung und wäscht mit Ethylacetat. Man neutralisiert die wäßrige Schicht mit Natriumcarbonat und extrahiert mit Ethylacetat. Dann trocknet man die Ethylacetatschicht über wasserfreiem Natriumsulfat, destilliert das Ethylacetat unter vermindertem Druck ab und unterwirft den Rückstand einer Chromatographie über Kieselgel unter Verwendung von Chloroform als Lösungsmittel, wobei man 8,31 g (0,04 Mol) 2-(4-Aminophenyl)-2-methylpropionsäureethylester erhält (Ausbeute: 47 %).

■ , ■

Herstellungsbeispiel 4

4-Acetylaminophenylessigsäureethylesters Verbindung 4

Zu 179,2 g (X Mol) p-Aminophenylessigsäureethylester gibt man 800 ml Ethylacetat und bildet durch Rühren bei Raumtemperatur eine homogene Lösung. Zu der Lösung gibt man eine gemischte Lösung aus 103,4 ml (1,05 Mol) Essigsäureanhydrid (96 %) und 100 ml Ethylacetat, wonach man die Lösung während 3 Stunden rührt. Nach Beendigung der

Reaktion wäscht man die Reaktionsmischung mit einer gesättigten Natriumbicarbonatlösung und einer gesättigten Natriumchloridlösung. Nach dem Trocknen der Ethylacetatschicht über wasserfreiem Magnesiumsulfat destilliert man das Ethylacetat ab und kristallisiert den Rückstand aus einer Ethylacetat/n-Hexan-Mischung um, wobei 206,6 g 4-Acetyl-aminophenylessigsäureethylester anfallen (Ausbeute: 93,4 %). Schmelzpunkt: 77 bis 78⁰C.

Herstellungsbeispiel· 5

2-(4-Acetylaminophenyl)-2-methylpropionsäureethylester: Verbindung 5

Man löst 5,0 g 2-(4-Aminophenyl)-2-methylpropionsäureethylester in 50 ml Ethylacetat, gibt tropfenweise unter Rühren 2,5 ml Essigsäureanhydrid zu und rührt die Mischung unter diesen Bedingungen während weiterer 3 Stunden. Dann wäscht man die Reaktionsmischung mit einer gesättigten Natriumbicarbonatlösung und anschließend mit einer gesättigten Natriumchloridlösung, wonach man die Ethylacetatschicht über wasserfreiem Natriumsulfat trocknet, das Ethylacetat unter vermindertem Druck abdestilliert und den Rückstand aus einer Ethylacetat/n-Hexan-Mischung umkristallisiert, wobei 4,61 g 2-(4-Acetylaminophenyl)-2-methylpropionsäureethylester anfallen (Ausbeute: 76 %). Schmelzpunkt = 76,0 bis 76,5⁰C.

Herstellungsbeispiel 6
30

4-(Isobutyrylamino)-phenylessigsäureethylester: Verbindung 6

Man löst 10 g 4-Aminophenylessigsäureethylester in 100 ml Benzol und gibt 25 ml Wasser zu. Zu der Lösung gibt man

unter Rühren im Verlaufe von 15 Minuten tropfenweise eine Lösung von 6 g Isobutyrylchlorid in 20 ml Benzol und gleichzeitig eine Lösung von 2,4 g 93 %-igem NaOH in 25 ml Wasser. Nach Beendigung der tropfenweisen Zugabe rührt man die Reaktionsmischung während 3 Stunden und läßt sie dann über Nacht bei Raumtemperatur stehen» Nach dem Abtrennen der Benzolschicht, dem Waschen mit einer In HCl-Lösung und dem weiteren Waschen mit einer gesättigten Natriumchloridlösung trocknet man die Benzolschicht über wasserfreiem Natriumsulfat. Nach dem Abtrennen des Natriumsulfats durch Filtrieren destilliert man das Lösungsmittel unter vermindertem Druck ab, löst den Rückstand in 30 ml Benzol und kristallisiert ihn aus 90 ml η-Hexan um. Die gebildeten Kristalle werden abfiltriert und bei einer Temperatur unterhalb 60⁰C unter vermindertem Druck getrocknet, wobei 12,3 g 4-(Isobutyrylamino)-phenylessigsäureethylester anfallen (Ausbeute: 88,3 -%). Schmelzpunkt = 92,5 bis 93,5⁰C.

Herstellungsbeispiel· 7

4-(n-Butyrylamino)-phenylessigsäureethylester; Verbindung 7

Nach der Verfahrensweise von Beispiel 6 setzt man 10 g 4-Aminophenylessigsäureethylester mit 6 g n-Butyrylchlorid um und erhält nach der Isolation 8,5 g 4-(n-Butyrylamino)-phenylessigsäureethylester. Schmelzpunkt = 72,5 bis 73,5⁰C.

Herstellunqsbeispiel 8

4-{4-Methylbenzoylamino)-phenylessigsäureethylester: Verbindung 8
35

Man löst 10 g 4-Aminophenylessigsäureethylester in 120 ml

Benzol und gibt weiterhin 25 ml Wasser zu. Zu dieser Lösung gibt man im Verlaufe von 15 Minuten unter Rühren gleichzeitig tropfenweise eine Lösung von 8,6 g p-Toluoylchlorid in 20 ml Benzol und eine Lösung von 2,4 g 93 %-igen NaOH in 25 ml Wasser zu. Nach Beendigung der tropfenweisen Zugabe rührt man die Lösung während 3 Stunden und läßt sie dann über Nacht stehen. Nach der Zugabe von 200 ml Ethylacetat trennt man die Ölschicht ab, wäscht sie mit einer In HCl-Lösung und einer gesättigten Natriumchloridlösung, trocknet über wasserfreiem Natriumsulfat, destilliert das Lösungsmittel ab und kristallisiert den Rückstand aus einer Benzol/n-Hexan-Mischung um, wobei 12 g 4-(4-Methylbenzoylamino)-phenylessigsäureethylester anfallen.

Herstellungsbeispiel 9

2-(4-Acetylaminopheny1)-propionsäureethylester: Verbindung 9

Zu 10 g (0,0517 Mol) 2-(4-Aminophenyl)-propionsäureethy1-ester gibt man unter Rühren 50 ml Ethylacetat, worauf man tropfenweise eine gemischte Lösung aus 5,81 g Essigsäureanhydrid und 10 ml Ethylacetat zu der erhaltenen Lösung zusetzt und während 3 Stunden rührt. Nach Beendigung der Umsetzung wäscht man die Reaktionsmischung mit einer gesättigten NatriumbicarbonatlÖsung und einer gesättigten Natriumchloridlösung. Nach dem Trocknen der Ethylacetatschicht über wasserfreiem Magnesiumsulfat destilliert man das Ethylacetat unter vermindertem Druck ab, kristallisiert den Rückstand aus einer Ethylacetat/ n-Hexan-Mischung um und erhält 10,3 g 2-(4-Acetylaminophenyl)-propionsäureethylester (Ausbeute: 85 %). Schmelzpunkt = 94,5 bis 95,5°C.

Herstellungsbeispiel 10

4-Acetylaminopheny!essigsäure: Verbindung 10

Zu 110,6 g (0,5 Mol) 4-Acetylaminophenylessigsäureethylester gibt man 500 ml Wasser und rührt die Mischung bei Raumtemperatur. Zu der Lösung gibt man 300 ml einer 2n NaOH-Lösung und rührt die Mischung während 3 Stunden.

Nach Beendigung der Reaktion kühlt man das Reaktionssystem mit Eis und bildet durch Zugabe von 100 ml einer 20 %-igen Chlorwasserstoffsäurelösung Kristalle. Nach dem Rühren während 30 Minuten unter Eiskühlen filtriert man die gebildeten Kristalle ab, wäscht sie mit kaltem Wasser und trocknet sie, so daß man 93,6 g 4-Acetylaminophenylessigsäure erhält (Ausbeute: 96,8%). Schmelzpunkt = 173 bis 175⁰C=

Herstellungsbeispiel 11
20

2-(4-Acetylaminopheny1)-2-methylpropionsäure: Verbindung 11

Man löst 3,87 g 2-(4-Acetylaminophenyl)-2-methylpropionsäureethylester in einer gemischten Lösung aus 16,6 ml einer 2n-Natriumhydroxidlösung und 30 ml Ethylalkohol, wonach man die Lösung während 8 Stunden bei 50⁰C rührt. Nach dem Abdestillieren des Ethylalkohols unter vermindertem Druck extrahiert man die wäßrige Schicht mit Ether und trennt die nichtumgesetzten Materialien ab. Nach dem Ansäuern der wäßrigen Schicht mit konzentrierter Chlorwasserstoffsäure sammelt man die gebildeten Kristalle durch Filtration, wäscht sie mit Wasser und kristallisiert sie aus einer Aceton/ Wasser-Mischung um, wobei 2,15 g 2-(4-Acetylaminophenyl)·

-" 26 -

2-methylpropionsäure anfallen (Ausbeute: 62 %). Schmelzpunkt = 169,7 bis 170,8⁰C.

Herstellungsbeispiel 12
5

Nach der Verfahrensweise von Beispiel 10 bildet man die folgenden Carbonsäuren durch Hydrolysieren der Ethylester der entsprechenden Säuren:

2-(4-Acetylaminophenyl)-propionsäure: Verbindung 12 4-Isobutyrylaminophenylessigsäure: Verbindung 13 4-n-Butyrylaminophenylessigsäure: Verbindung 14 4-(4-Methylbenzoylamino)-phenylessigsäure: Verbindung 15

Beispiel 1

Wirkung gegen plättchenbildende Zellen in der Milz gegen Schaferythrozyten in Mäusen
20

Man immunisiert Mäuse (Balb/c) mit einem Alter von 5 Wo-

chen intravenös mit 1 χ 10 Schaferythrozyten/Maus. Pro Gruppe verwendet man jeweils 5 Mäuse. Das Arzneimittel wird oral während 4 Tagen beginnend mit dem Tag der Immunisierung der Mäuse verabreicht. Die Mäuse werden am 5. Tag getötet und es wird die Anzahl der plättchenbildenden Zellen (PFC) in der Milz gegen Schaferythrozyten nach der durch Fujiwara modifizierten Methode von Cunningham bestimmt ("Method in Immunological Experiment A" herausgegeben von der Japanese Society for Immunology, (1974), Seite 1272) .

Die hierbei erhaltenen Ergebnisse sind in den nachfolgenden Tabellen I und II zusammengestellt. 35

10

- 27 -

TABELLE I

Arzneimittel	Dosis (mg/kg)	PFC (x 2500/Milz) Mittelwert + Stan- dardabweichung	2 + 5,66	Prozent der Kontrolle
Physiologi sche Salzlö sung		64	4 + 8,64 **
Verbindung 10	30	116,	2 + 10,5 **	181
Verbindung 10	100	107	,2 ± 7,0	167
Verbindung 10	300	82	182

** P < 0,01

TABELLE II

20

Arzneimittel	Dosis (mg/kg)	PFC (x 2500/Milz) Mittelwert + Stan dardabweichung	Prozent der Kontrolle
Physiologische Salzlösung	_	66,4 - 3,6	_
Verbindung 1	30	89,4 + 10,4	135
Verbindung 1	100	60,6 +8,6	92
Verbindung 1	300	82,0 + 5,2 *	123

* P < 0,05

Beispiel 2

Wirkung auf die durch Schaferythrozyten induzierte verzögerte Hypersensibilität

Man injiziert 40 μΐ Schaferythrozyten, deren Konzentration 1 χ 10 /40 μΐ beträgt, subkutan in die rechte Pfotensohle von Mäusen (ddY, mit einem Gewicht von 25 bis 30 g), worauf man das Arzneimittel oral während insgesamt

4 Tagen einschließlich des Tages, an dem die Schaferythrozyten verabreicht worden sind, gibt.

Am 4. Tag nach der Verabreichung der Schaferythrozyten injiziert man in die linke Pfotensohle 40 μΐ Schaferythrozyten mit einer Konzentration von 5 χ 10 /40 μΐ auf subkutanem Wege. Nach 24 Stunden mißt man die Dicke der linken bzw. rechten Pfotensohle. Die Pfotensohlenschwellung als Folge der verzögerten Hypersensibilität ist als Unterschied in der Dicke der linken Pfotensohle gegenüber der rechten Pfotensohle feststellbar. Das Schwellen der Pfotensohle der mit dem Arzneimittel behandelten Gruppe wird mit jenen der Gruppe verglichen, die nur mit einer physiologischen Salzlösung behandelt worden ist (Kontrollgruppe). Die Ergebnisse sind in der nachfolgenden Tabelle III angegeben.

TABELLE

20 Arzneimittel	30	Verbindung 1	35	Dosis (mg/kg)	Prozentuale Kontrolle d.Pfotensohlenschwel- lung
Physiologische Salz lösung			_	—
Azathioprine		100	49,0 **
25 Verbindung 10	Verbindung 4	30	77,0 *
	100	85,7
	300	71,6 **
Verbindung 16	30	78,5 **
	100	81,4
300	90,8
30	79,8 *
100	85,9
300	77,9 *
30	91,5
100	93,8
300	68,4 *

* P < 0,05

** P < 0,01

Beispiel 3

Wirkung gegen die durch methyliortes Humanalbumin induzierte verzögerte Hypersensibilitat 5

Man injiziert auf subkutanem Wege 100 μΐ einer 0,25 %-igen wäßrigen Lösung von methyliertem Humanalbumin an Mäuse (C3H) mit einem Alter von 5 Wochen. Das Arzneimittel wird oral während vier aufeinanderfolgender Tage einschließlich des Immunisierungstags verabreicht. Am 4. Tage seit dem Immunisierungstag injiziert man subkutan in die Pfotensohle 25 μΐ einer 0,1 %-igen wäßrigen Lösung von methyliertem Humanalbumin. 24 Stunden später mißt man die Dicke der linken und der rechten Pfotensohle und bestimmt die Pfotensohlenschwellung als Folge der verzögerten Hypersensibilität über den Unterschied zwischen der Dicke der linken Pfotensohle und der rechten Pfotensohle. Die Pfotensohlenschwellung der mit dem Arzneimittel behandelten Gruppe wird mit derjenigen einer Gruppe verglichen, die nur mit einer physiologischen Salzlösung behandelt worden ist.

Die hierbei erhaltenen Ergebnisse sind in der nachfolgenden Tabelle IV zusammengestellt. 25

TABELLE IV

5	Arzneimittel	Dosis [mg/kg)	Pfotensohlenschwellung (χ 0,01 mm) Mittelwert + Standard abweichung	+ 1	,6	% Kontrolle	,3
	Experiment 1			+ 1	,6**		,2
	Physiologi sche Salzlö sung		63,3	± ¹	,8		,8
10	Verbindung 10	300	44,5	+ 1	,2**	70	,7
	Verbindung 6	30	59,0	± 2	,2*	93	,4
		100	55,6	+ 1	,9*	87	,9
		300	56,8	+ 1	,9	89	,4
	Verbindung 13	30	57,2	± 2	,4	90	,6
15		100	58,2	+ 1	,7**	91	,6
		300	58,5	+ 1	,8**	92	/7
	Verbindung 15	30	54,2	+ 1	,5*	85
		100	56,7			89
		300	57,4	+ 1	,6	90	,9
20	Experiment 2			+ 1	,5**		,9
	Physiologische Salzlösung	—	58,4	+ 1	,7**	—	,6
	Azathioprine	100	41,4	+ 2	,5**	70	,4
	Verbindung 10	30	46,1	+ 1	,8**	78	,2
25		100	41,8	+ 1	,7	71	,2
		300	42,3	+ 1	,5*	72	,1
	Verbindung 12	30	54,5	+ 1	,9*	93	,0
		100	52,1	+ 1	,8**	89	,1
		300	52,4	± 2	,0	89	,9
30	Verbindung 9	30	51,4	± ²	,0	88	,3
		100	55,3	+ 1	,7	94	,9
		300	56,0	± ¹	,8	95	,8
	Verbindung 11	30	54,5	± ²	,3*	93
		100	55,4		94
35		300	51,3	87

TABELLE IV (Fortsetzung)

5	Arzneimittel	Dosis (mg/kg)	Pfotensohlenschwel- lung (x 0,01 mm) Mittelwert + Stan dardabweichung	2,0**	% Kontrolle
	Verbindung 14	30	50,9 +	1,4**	87,2
		100	51,8 +	1,5	88,7
		300	56,7 +		97,1
	Experiment 3			1,7
10	Physiologische Salzlösung	—	64,0 +	2,8*	—
	Verbindung 16	30	57,2 +	3,1	89,4
		100	62,6 +	2,3**	97,8
		300	50,7 +	2,6**	79,2
15	Verbindung 4	30	48,3 +	3,5**	75,5
		100	49,4 +	2,9*	77,2
		300	56,5 +	88,3

* P < 0,05

Beispiel

** P < 0,01

Wirkung auf die Adjuvansarthritis bei Ratten

Exgerimentelle_Methgde

Man verwendet pro Gruppe 10 männliche Ratten (Spraque Dawley) mit einem Alter von 8 Wochen und verabreicht den Ratten 0,6 mg/0,05 ml in flüssigem Paraffin suspendiertes Mycobacterium butyricum intradermal in die rechte hintere Pfotensohle.

Vom Vortag der Adjuvansinjektion an verabreicht man 1 mg/ kg bis 125 mg/kg der Verbindung 10 auf oralem Wege während 27 Tagen, worauf man das Pfotenvolumen mißt.

Ergebnisse

Etwa 10 Tage nach der sogenannten Adjuvansinjektion erscheint eine Sekundärentzündung. Dies führt zu einem Schwellen des Glieds, in das das Adjuvans injiziert worden ist, und auch zu einem Schwellen des Glieds, in das kein Adjuvans injiziert worden ist, ebenso wie einer Schwellung der Herzohrknoten, des Schwanzes und der Glieder.

Die Verbindung 10 zeigt eine inhibierende Wirkung insbesondere bei einer geringen Dosis gegenüber dieser Sekundärentzündung .

Da die inhibierende Wirkung der Verbindung 10 gegenüber der Primärentzündung sehr gering ist als Folge der direkten Wirkung des Adjuvans, sind die Änderungen der relativen Schwellung des Glieds (%) gegenüber dem Wert am 9. Tag in der beigefügten Fig. 1 dargestellt. In dieser Zeichnung sind auf der horizontalen Achse die Anzahl der abgelaufenen Tage nach der Adjuvansinjektion und auf der senkrechten Achse die relative Schwellung (%) gegenüber der Schwellung am 9. Tag dargestellt.

Beispiel 5
25

Akute Toxizität

Das Arzneimittel wird in einer 3 %-igen "Tween-80"-Lösung suspendiert, worauf die Suspension oral bzw. intraperitoneal in der in der nachstehenden Tabelle V angegebenen Dosis an Mäuse (ddY, Gewicht 20 bis 25 g) verabreicht wird. Die Todesfälle der mit dem Arzneimittel behandelten Mäuse am 7. Tag nach der Verabreichung sind in der Tabelle V angegeben.

TABELLE V

Arzneimittel	6	Dosis (mg/kg)	Verabrei chungsweg	Anzahl der getöteten Tiere/Anzahl der ein gesetzten Tiere
Verbindung		5000	oral	1/5
	13	1000	intraperi- toneal	0/5
Verbindung		5000	oral	0/5
	15	1000	intraperi- toneal	1/5
Verbindung		5000	oral	5/5
		1000	oral	0/5
		1000	intraperi- toneal	5/5
	12	300	intraperi- toneal	0/5
Verbindung		5000	oral	0/5
	9	1000	intraperi- toneal	0/5
Verbindung		1500	oral	0/5
	11	1000	intraperi- toneal	0/5
Verbindung		5000	oral	0/5
	14	1000	intraperi- toneal	0/5
Verbindung	10	1000	intraperi- toneal	0/5
Verbindung		5000	oral	0/5
	1	1000	intraperi- toneal	0/5
Verbindung		3000	oral	0/5
	1000	intraperi- toneal	1/5

Leerseite

Claims

Pate ή Va η w ä 11 © Dipl.-Chem. Dr. N. ter Mocr · D:pl.-!nrj. F, Müller Dipl.- Ing. H. Steinrneister Triftstraße 4 - Tel. (089) 29 97 24 £>-8000 München-22 10. Mai 1983 tM/cb Case FD-146 MITSUBISHI CHEMICAL INDUSTRIES LIMITED 5-2, Marunouchi 2-chome Chiyoda-ku, Tokyo, Japan und NIPPON SHINYAKU COMPANY, LIMITED 14, Kisshoin Nishinosho Monguchicho Minami-ku, Kyoto-shi, Kyoto, Japan Immunomodulierendes Mittel Priorität: 11. Mai 1982, Japan, Nr. 78893/1982 Patentansprüche

1.j Immunomodulierendes Mittel enthaltend als Wirkstoff ein Phenylessigsäurederivat der allgemeinen Formel (I)

ccooR⁴ m

in der R ein Wasserstoffatom oder eine Gruppe der

5" 5

Formel R C-, worin R für eine Alkyl gruppe mit 1 bis Kohlenstoffatomen oder eine Arylgruppo steht,

2 R und R unabhängig voneinander Wasserstoffatome oder Alkylgruppen mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, und

4 R ein Wasserstoffatom oder eine Alkylgruppe mit 1 bis

4 Kohlenstoffatomen bedeuten, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.

2. Verfahren zur Herstellung eines Phenylessigsaurede-. rivats der in Anspruch 1 definierten allgemeinen Formel (I) und dessen pharmazeutisch annehmbaren Salzen, dadurch gekennzeichnet, daß man ein Nitrobenzolderxvat der allgemeinen Formel (IV)

c - coor'

R³

(IV)

2 3 4

in der R , R und R die in Anspruch 1 angegebenen Bedeu tungen besitzen, zur Bildung eines Anilinderivats der allgemeinen Formel (II)

¹ C - COOR

(II)

.234

in der R , R und R die oben angegebenen Bedeutungen besitzen,

4
reduziert und, in dem Fall, da R der Ausgangsverbindung ein Wasserstoffatom bedeutet, das erhaltene Anilinderivat der allgemeinen Formel (II) mit einem Alkohol der allge-

4 4

meinen Formel R OH, in der R eine Alkylgruppe mit 1 bis

4 Kohlenstoffatomen bedeutet, verestert und gegebenenfalls das erhaltene Anilinderivat der allgemeinen Formel (II) mit einem Säureanhydrid der allgemeinen Formel (V) 10

5 "

^R - c

0 (V)

R⁵ - C^
¹S 0

oder einem Säurechlorid der allgemeinen Formel (VI)

O

R⁵ - C - Cl (VI)

5 '

in denen R die in Anspruch 1 angegebenen Bedeutungen besitzt,

umsetzt unter Bildung eines Phenylessigsäurederivats der allgemeinen Formel (III)

R²

R⁵ - c - NH -(' ^) ρ (III)

in dor R , R-" , R und R die oben angegebenen Bedeutungen besitzen, und

3. Verwendung der Phenylessigsäurederivate der allgemeinen Formel (I), wie sie in Anspruch 1 definiert sind, und der pharmazeutisch annehmbaren Salze davon als solche oder zusammen mit üblichen Trägermaterialien, Bindemitteln und/oder Hilfsmitteln zur immunomodulierenden Behandlung von Patienten.