DE3229632A1

DE3229632A1 - Carboxyalkanoylpeptid-alkylamide, ihre herstellung und pharmazeutische mittel

Info

Publication number: DE3229632A1
Application number: DE19823229632
Authority: DE
Inventors: P&rcaron;emysl Fri&ccaron;; Ev&zcaron;en Dipl.-Ing. Kasafírek; Alena Praha Roubalová; Jan Dipl.-Ing. Slabý
Original assignee: Spofa Spojene Podniky Pro Zdravotnickou Vyrobu; Spofa Vereinigte Pharma Werke
Current assignee: Spofa Spojene Podniky Pro Zdravotnickou Vyrobu; Spofa Vereinigte Pharma Werke
Priority date: 1981-08-07
Filing date: 1982-08-09
Publication date: 1983-02-24
Also published as: JPH0349918B2; JPS5849351A; IT8222506A0; DE3229632C2; FR2510990B1; IT8222506A1; HU193029B; IT1156108B; CA1238902A; CH653038A5; BE894065A; US4554100A; FR2510990A1; GB2104082A; GB2104082B; CS226907B1

Description

SPOFA, spojene podniky pro zdravotnickou vyrobu

Prag, CSSR

Carboxyalkanoylpeptid-alkylamide, ihre Herstellung und pharmazeutische Mittel

Die Erfindung betrifft carboxyalkanoylpeptid-alkylamide der allgemeinen Formel I

.COOH

X (D,

^CO-B-AIa-A-NH-R

in der bedeuten:

R geradkettiges oder verzweigtes C,- bis C₅-Alkyl oder Aralkyl, insbesondere Phenylethyl,

A peptidisch gebundenes Prolin oder Alanin,

B peptidisch gebundenes Prolin oder Alanin oder keine Gruppe

und
X -CH₂-, -CH₂CH₂-, -CH₂CH₂CH₂- oder -CH=CH,

ein Verfahren zu ihrer Herstellung und pharmazeutische Mittel mit diesen Verbindungen als Wirkstoffen.

233-S10053-SF-Bk

-A-

Dipeptidalkylamide sind wirksame Elastaseinhibitoren (BE-PSen 855 851 und 856 064). In diesem Fall liegt eine Dipeptidsequenz vor, die eine für das elastolytische Substrat optimale Aminosäurezusammensetzung aufweist, dh beispielsweise Alanylalanin oder Alanylprolin. In diesen Patentschriften sind jedoch einige neue Erkenntnisse über die Wechselwirkung zwischen Substrat und Elastase nicht hinreichend berücksichtigt, die gemäQ den Erfahrungen für die Funktion eines wirksamen Inhibitors entscheidend sind. In früheren Arbeiten, die sich mit der Optimierung des Substrats für Pankreas-Elastase befassen, wurde festgestellt, daß für die Wechselwirkung zwischen dem Enzym und dem Substrat die elektrostatische Bindung zwischen P. - S. und P₁. - S₅ von entscheidender Bedeutung ist (J. Schechter, A. Berger, Biochem. Biophys. Res. Commun. 32 (1968) 898), die vor der primären Wechselwirkung bevorzugt wird (Eur. J. Biochem. 69^ (1976) 1, FEBS Lett. 40 (1974) 353).

Es wurde nun überraschenderweise festgestellt, daß die Carboxylgruppe im N-terminalen Teil des Inhibitors im Vergleich zu einem hydrophoben Rest, zB einer Acetylgruppe, dessen Inhibitionskapazität wesentlich erhöht, ähnlich, wie sie die Konstanten der elastolytischen Hydrolyse bei Substraten dieses Typs erhöht. Die reaktionskinetischen Eigenschaften eines elastolytischen Inhibitors sind auch, ebenso wie bei den Substraten, von der Länge der Peptidkette abhängig (Eur. J. Biochem. 69 (1976) 1), wobei ein Tripeptid eine höhere Inhibitionskapazität als ein Dipeptid aufweist. Bei Versuchen in vitro wurden die Inhibitonskonstanten K. von 3-Carboxypropionyl- und 4-Carboxybutyryl-di- und -tripeptiden mit Hilfe von pankreatischer Elastase und chromogenen Substraten, dh Succinyl- oder Glutaryltetraalanin-p-nitroaniliden, bestimmt; die Ergebnisse sind aus Tabelle 1 ersichtlich. Auf ähnliche

Weise wurden die Inhibitionskonstanten K. der erfindungsgemäBen Inhibitoren mit Human-Elastase, dh humaner Duodenalelastase nach Stimulierung mit Cholecystokinin E. bzw mit gefriergetrocknetem humanen, durch Kanulierung des Pankreasauslasses erhaltenen Pankreassaft E„ bestimmt und mit Elastase aus Schweinepankreas verglichen E₃; die Ergebnisse sind in Tabelle 2 angegeben.

Tabelle 1
Inhibitionskonstanten (K.) acylierter Di- und Tripeptid-alkylamide

K. (prnol)

Inhibitor

Sue-(Ala) .,-NAn GIt-(AIa) .-NAn

SuC-(AIa)₂-NH-Et GIt-(AIa)₂-NH-Et SuC-(AIa)₂-NH-EtPh GIt-(AIa)₂-NH-EtPh SuC-(AIa)₃-NH-Me GIt-(AIa)₃-NH-Me SuC-(AIa)₃-NH-Et GIt-(AIa)₃-NH-Et MaI-(AIa)₃-NH-Et Ac-(AIa)₃-NH-Et SuC-(AIa)₃-NH-Pr GIt-(AIa)₃-NH-Pr Suc-(Ala)₃-NH-iBu GIt-(AIa)₃-NH-IBu Suc-Ala-Pro-NH-Et

Suc-Ala-Pro-NH-iBu

Suc-Ala-Ala-Pro-NH-Et

Glt-Ala-Ala-Pro-NH-Et

95,2	166
68,1	109
1456	666
982	770
510	680
280	320
20	29
8,8	8,4
35	30
28	46
6,8	4,5
2,5	2,5
816	1474
668	794
111	80
2042	5747
2,5	4,7
1,6	2,7

Sue = Succinyl, dh 3-Carboxypropionyl; GIt = Glutaryl, dh 4-Carboxybutyryl; Mal = Maleyl, dh 3-Carboxyacryloyl; Ac = Acetyl; Me = Methyl, Et = Ethyl, Pr = Propyl, iBu = i-Butyl; EtPh = Phenylethyl.

Alanin (Ala) und Prolin (Pro) besitzen die L-Konfiguration.

Tabelle

Inhibitionskonstanten (K.) acylierter Tripeptid-alkylamide

K₁ (prnol)

Inhibitor

SuC-(AIa)₄-NAn

GIt-(AIa)₄-NAn

Ac-(AIa)₃-NH-Et	Sue	238	ω	5	4	28	,8	123	117	46	,4
MaI-(AIa)₃-NH-Et	Git	87	69			35	,5	73	117	30	,7
SUC-(AIa)₃-NH-Et	NAn	76	29		9	20	,6	89	47	29	,7
GIt-(AIa)₃-NH-Et	Et	15	7,			8	,8	19	19	8	,5
Suc-Ala-Ala-Pro-NH-Et	14	23		8	2	,5	19	17	4
Glt-Ala-Ala-Pro-NH-Et	10	2,		1		12	13,8	2
SuC-(AIa)₃-NH-Pr	12	13		6		21	14	4
GIt-(AIa)₃-NH-Pr	11	3,		2		7,2	4,5	2
= Succinyl;
= Glutaryl;
= 4-Nitroanilid
= Ethyl;

Pr = Propyl;

Mal = Maleyl, dh 3-Carboxyacryloyl.

Im Rahmen von in-vivo-Versuchen bei einer experimentellen Pankreatitis an Ratten, die durch Applikation von Natriumdesoxycholat in den Pankreas hervorgerufen worden war, wurde bei gleichzeitiger Applikation von GIt-(AIa)₃-NH-Et (20 mg intraperitoneal) ein niedrigerer Serumspiegel an Serumamylase nachgewiesen. Die Inhibitoren GIt-(AIa)₃-NH-ET, Glt-Ala-Ala-Pro-NH-Et und insbesondere Glt-Ala-Ala-Pro-NH-Pr (Dosis 20 mg/Ratte) vermindern die Entwicklung eines durch subcutane Injektion von Elastase in Rattenpfoten hervorgerufenen Ödems um 20 bis 40 %.

Im Vergleich zu den bekannten Alkanoylderivaten (Dipeptiden) (Bioorgan. Chem. i5 (1979)299) ist eine signifikante, größenordnungsmäßig höhere Steigerung der Inhibition der elastolytischen Hydrolyse feststellbar, was auf die Bedeutung der Art des N-terminalen Substituenten hindeutet.

Die erfindungsgemäßen Inhibitoren enthalten keine unphysiologische Gruppe, so daß sich beim pharmakotherapeutischen Einsatz, insbesondere bei akuter Pankreatitis, chronischer Lungenobstruktion und einigen Gelenkentzündungen, kein Auftreten von unerwünschten Reaktionen voraussetzen läßt.

Das erfindungsgemaße Verfahren zur Herstellung der Carboxyalkanoylpeptid-alkylamide der allgemeinen Formel I ist gekennzeichnet durch Umsetzung einer Verbindung der allgemeinen Formel II

A-NH-R (II)

mit R und A wie in Formel I

mit einer Verbindung der allgemeinen Formel III

Y-B-AIa (III),

mit B wie in Formel I

und

Y = eine leicht abspaltbare Schutzgruppe, beispielsweise Benzyloxycarbonyl,

Abspaltung der Schutzgruppe vom entstandenen Zwischenprodukt und anschließende Umsetzung des Zwischenprodukts mit einem reaktionsfähigen Derivat einer Dicarbonsäure der allgemeinen Formel IV

COOH

X (IV)

COOH

mit X wie in Formel I,

insbesondere mit einem Anhydrid, Monohalogenid, Monoester oder Monoamid.

Die Synthese dieser biologisch aktiven Peptide läßt sich im wesentlichen nach dem Verfahren der Fragmentkondensierung in Lösung oder durch schrittweisen Aminosäureaufbau, dh durch sog 'step-wise'-Verfahren oder nach Syntheseverfahren an festen Trägerphasen durchführen.

Als Schutzgruppe für die Zwischenprodukte wurde eine Gruppe vom Urethantyp (Benzyloxycarbonyl) benutzt; man kann allerdings auch in schwach saurem Medium labile Gruppen, zB t-Butyloxycarbonyl oder o-Nitrobenzolsulfenyl udgl, oder mit einem Metall und gegebenenfalls elektrolytisch reduzierte Gruppen, zB 2-Halogenethoxycarbonyl, verwenden.

Die Kondensationsreaktionen wurden nach der Azid- bzw Carbodiimidmethode und nach der Methode der gemischten Anhydride

durchgeführt, jedoch sind ebenso gut auch andere in der Peptidsynthese übliche Verfahren anwendbar.

Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung.

Beispiel 1

Benzyloxycarbonylalanin-ethylamid

Zu einer Lösung von Benzyloxycarbonylalanin (23,3 g) in Tetrahydrofuran (100 ml) wurden N-Ethylpiperidin (14 ml) und nach Abkühlen auf -10 ⁰C s-Butylchlorformiat (14 ml) zugegeben; nach 8 min Rühren und Kühlen (-6 ⁰C) wurde eine 4,1 M Ethylaminlösung in Tetrahydrofuran (30 ml) zugesetzt. Nach 0,5 h Rühren bei 0 ⁰C und 2 h Rühren bei Raumtemperatur wurde die Reaktionslösung eingedampft, der Rückstand in Ethylacetat (250 ml) gelöst, die Lösung nacheinander mit einer 5&Lgen Natriumhydrogencarbonatlösung und mit Wasser durchgeschüttelt, über wasserfreiem Natriumcarbonat getrocknet und wiederum eingedampft. Der Rückstand wurde aus Ethylacetat (30 ml) und Petrolether umkristallisiert. Es wurden 18,1 g eines Produkts mit F. 116 bis 117 ⁰C erhalten.

Alaninethylamid-hydrobromid

Benzyloxycarbonylalaninethylamid (10 g) wurde mit einer 36%igen Bromwasserstofflösung in Eisessig (40 ml) Übergossen; nach 1 h wurde zu der entstandenen Lösung Ether (150 ml) zugegeben; durch Kratzen schied sich das kristalline Produkt aus, das abfiltriert, gründlich mit Ether gewaschen und im Exsikkator über Phosphorpentoxid und Natriumhydroxid getrocknet wurde. Es wurden 7,7 g Hydrobromid mit F. 224 bis 226 ⁰C erhalten.

R_f 0,26/S₁; 0,58/S₂.

S,: n-Butanol - Essigsäure - Wasser (4:1:1), S₂: n-Butanol - Essigsäure - Pyridin - Wasser (15:3:10:6).

Benzyloxycarbonylalanyl-alanyl-alaninethylamid

Zu einer Lösung von Benzyloxycarbonylalanyl-alaninhydrazid (3,08 g) in Tetrahydrofuran (100 ml) und azeotropsiedender Salzsäure (4 ml) wurde bei einer Temperatur von -12 ⁰C eine Lösung von Natriumnitrit (690 mg) in Wasser (2,8 ml) zugegeben. Nach 8 min Rühren und Kühlen (-10 ⁰C) wurde die Reaktionslösung mit vorgekühltem Ethylacetat (200 ml) verdünnt; die organische Phase wurde bei -15 ⁰C mit einer 3%igen Natriumhydrogencarbonatlösung in Salzsole ausgeschüttelt und zu einer vorgekühlten (-10 ⁰C) Lösung von Alaninethylamid in Dimethylformamid (40 ml) zugegeben, das aus dem entsprechenden Hydrobromid (1,97 g) durch Neutralisieren mit N-Ethylpiperidin (1,4 ml) erhalten worden war. Nach 12 h Stehenlassen bei 0 ⁰C wurde die Lösung eingedampft; der feste Rückstand wurde aus einem Gemisch von Isopropanol (50 ml) und Dimethylformamid (50 ml) unter Zusatz von Wasser (250 ml) umkristallisiert. Es wurden 2,71 g eines Produkts mit F. 271 bis 273 ⁰C erhalten.

Kq° -8,3° (c = 0,3; Dimethylformamid).

Analyse: Für C₁₉H₂₈N₄O₅ (M = 392,5): berechnet: 58,15 % C, 7,19 % H, 14,28 % N; gefunden : 57,97 % C, 7,27 % H, 13,93 % N.

Alanyl-alanyl-alaninethylamid
Benzyloxycarbonylalanyl-alanyl-alaninethylamid (1 g) wurde

-limit einer 36%igen Bromwasserstofflösung in Essigsäure (3 ml) Übergossen; nach 1 h wurde die entstandene Lösung mit Ether (30 ml) versetzt. Das ausgeschiedene Hydrobromid wurde abfiltriert, 2 h im Exsikkator über Phosphorpentoxid und Natriumhydroxid getrocknet und danach in 90%igem wässerigen Methanol (20 ml) gelöst, worauf mit Zerolit FF im OH-Zyklus in Methanol entionisiert wurde. Nach Eindampfen des methanolischen Eluats wurde der Rückstand durch Azeotropdestillation mit einem Methanol-Benzol-Gemisch getrocknet und schließlich aus Methanol (10 ml) und Ether (30 ml) umkristallisiert. Es wurden 495 mg eines Produkts mit F. 259 bis 260 ⁰C erhalten.

Mq⁰ -67,1° (c = 0,3; Methanol). R_f 0,14/S₁; 0,58/S₂-Analyse: Für C₁₁H₂₂N₄O₃ (M = 258,3) berechnet: 51,15 % C, 8,58 % H, 21,69 % N; gefunden : 50,82 % C, 8,63 % H, 21,37 % N.

Eine Analysenprobe des Alanyl-alanyl-alaninethylamidhydrobromids wurde aus Methanol und Ether kristallisiert; F. 284 bis 289 ⁰C.

Analyse: Für C₁₁H₂₃N₄O₆-HBr (M = 339,2) berechnet: 38,95 % C, 6,83 % H, 16,52 % N; gefunden : 38,70 % C, 6,91 % H, 16,18 % N.

3-Carboxypropionylalanyl-alanyl-alaninethylamid

Zu einer Lösung von Alanyl-alanyl-alaninethylamid (260 mg) in Dimethylformamid (5ml) und Tetrahydrofuran (30 ml) wurde Bernsteinsäureanhydrid (300 mg) zugegeben; die Reaktionslösung wurde 2 h am Rückfluß zum Sieden erhitzt. Danach wurde das ausgeschiedene kristalline Produkt abfiltriert und mit Tetrahydrofuran und Ether gewaschen. Durch Umkristallisieren

aus Wasser (18 ml) wurden 180 mg eines Produkts mit F. 285 bis ⁰C erhalten.

[°3ρ° -⁶¹'⁸° ^(c= °'³ϊ 50%iges Methanol).

Analyse: Für C₁₅H₂₆N₄O₆ (M = 359,2) berechnet: 50,16 % C, 7,30 % H, 15,60 % N; gefunden: 50,10 % C, 7,40 % H, 15,61 % N.

4-Carboxybutyrylalanyl-alanyl-alaninethylamid

Diese Verbindung wurde in analoger Weise wie das 3-Carboxypropionylderivat durch Acylierung mit Glutarsaureanhydrid hergestellt; Ausbeute 65 % d.Th., F. 278 bis 280 ⁰C.

[o<^⁰ -86,0° (c = 0,3; 50%iges Methanol). Analyse: Für C₁₅H₂₈N₄O₅ (M = 372,4) berechnet: 51,60 % C, 7,58 % H, 15,04 % N, gefunden: 51,24 % C, 7,68 % H, 14,90 % N.

Beispiel 2

Benzyloxycarbonylalaninphenylethylamid

Diese Verbindung wurde in analoger Weise wie das entsprechende Ethylamid von Beispiel 1 in einer Ausbeute von 87 % d.Th. hergestellt. F. 125 bis 126 ⁰C.

[<x] 20 __{2j?0 (c} _ _0>3. oimethylformamid).

Analyse: Für C₁₉H₃₂N₃O₃ (M = 326,3) berechnet: 69,94 % C, 6,80 % H, 8,59 % N; gefunden: 70,32 % C, 7,01 % H, 8,70 % N.

Benzyloxycarbonylalanyl-alaninphenylethylamid

Zu einer Lösung von Alaninphenylethylamid (4,9 g), das aus dem entsprechenden Benzyloxycarbonylderivat mit einer 36%igen Bromwasserstofflösung in Eisessig freigesetzt worden war, (R_f 0,44/S₁; 0,58/S₂) und Benzyloxycarbonylalanin (5,6 g) in auf - 5⁰C vorgekühltem Dimethylformamid (200 ml) wurde N.N'-Dicyclohexylcarbodiimid (5,5 g) zugegeben. Nach 1 h Rühren bei 0 ⁰C und 3 h bei Raumtemperatur wurde der ausgeschiedene N.N'-Dicyclohexylharnstoff abfiltriert und mit Dimethylformamid gewaschen; das Filtrat wurde im Vakuum eingedampft. Der kristalline Rückstand wurde nacheinander mit 1 M Salzsäure, Wasser, 5%iger Natriumhydrogencarbonatlösung und Wasser verrieben und aus einem Ethanol-Wasser-Gemisch (150 und 100 ml) kristallisiert. Es wurden 7,75 g eines Produkts mit F. 211 bis 212 ⁰C erhalten.

IKJq⁰ -1,95° (c = 0,3; Dimethylformamid). Analyse: Für C₃₂H₂₇N₃O₄ (M = 397,5) berechnet: 66,55 % C, 6,85 % H, 10,57 % N; gefunden: 66,89 % C, 6,99 % H, 10,74 % N.

Alanyl-alaninphenylethylamid

Diese Verbindung wurde in analoger Weise wie das Alanylalanyl-alaninethylamid von Beispiel 1 in einer Ausbeute von 93 % d. Th. hergestellt; F. 107 bis 110 ⁰C. R_f 0,31/S₁; 0,63/S₂.

0*3P° -44,9° (c = 0,3; Methanol). Analyse: Für C₁₄H₂₁N₃O₂ (M = 263,4) berechnet: 63,85 % C, 8,04 % H, 15,96 % N; gefunden: 63,38 % C, 8,14 % H, 16,20 % N.

3-Carboxypropionylalanyl-alaninphenylethylamid

Diese Verbindung wurde in analoger Weise wie das 3-Carboxypropionylalanyl-alanyl-alaninphenylethylamid von Beispiel 1 in einer Ausbeute von 63 % d. Th. hergestellt; F. 209 bis 211 ⁰C.

[κ]ρ° -45,3° (c = 0,3; 50%iges Methanol). Analyse: Für C₁₃H₂₅N₃O₅ (M = 364,2) berechnet: 59,37 % C, 6,92 % H, 11,54 % N; gefunden: 59,22 % C, 6,85 % H, 11,82 % N.

4-Carboxybutyrylalanyl-alaninphenylethylamid

Diese Verbindung wurde in analoger Weise wie das 4-Carboxybutyrylalanyl-alanyl-alaninethylamid von Beispiel 1 in einer Ausbeute von 57 % d. Th. hergestellt; F. 208 bis 209 ⁰C.

Ö*] ²° -61,4° (c = 0,3; 50%iges Methanol). Analyse: Für C₁₉H₂₇N₃O₄ (M = 377,5) berechnet: 60,46 % C, 7,21 % H, U,13 % N; gefunden: 59,58 % C, 7,19 % H, 11,25 % N.

Beispiel 3

Prolinethylamid

Zu einer Lösung von Benzyloxycarbonylprolin (11 g) in Eisessig (10 ml) wurde eine 36%ige Bromwasserstofflösung in Eisessig (40 ml) zugegeben. Nach 1 h wurde zu der Reaktionslösung Ether (300 ml) gegeben; das ausgeschiedene, nicht kristalline Hydrobromid wurde 2 h im Exsikkator über Phosphorpentoxid und Natriumhydroxid getrocknet und danach in einer gesättigten Ammoniaklösung in Chloroform (0 ⁰C) (60 ml) suspendiert; die

Reaktionssuspension wurde nach 20 min Stehen bei 3 ⁰C filtriert; das Filtrat wurde eingedampft. Es wurden 5,7 g eines nichtkristallinen Produkts erhalten; R_f 0,25/S₁; 0,56/S₂·

Benzyloxycarbonylalanyl-prolinethylamid

Zu einer Lösung von Prolinethylamid (5,6 g) und Benzyloxycarbonylalanin (9,0 g) in einem auf -5 ⁰C abgekühlten Dimethylformamid-Tetrahydrofuran-Gemisch (5 bzw 60 ml) wurde N.N'-Dicyclohexylcarbodiimid (9,0 g) zugegeben. Nach 1 h Rühren bei 0 ⁰C wurde das Reaktionsgemisch 12 h bei Raumtemperatur stehengelassen; der ausgeschiedene N.N'-Dicyclohexylharnstoff wurde abfiltriert; das Filtrat wurde eingedampft und der Rückstand in einem Ethylacetat-Wasser-Gemisch gelöst; die organische Phase wurde nacheinander mit 1 M Salzsäure, Wasser, einer 5%igen Natriumhydrogencarbonatlösung und Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und eingedampft. Der Rückstand wurde aus einem Ether-Petrolether-Gemisch (30 bzw 30 ml) umkristallisiert; es wurden 5,4 g eines Produkts mit F. 99 bis 101 ⁰C erhalten.

C^a]p° -93,A⁰ (c = 0,3; Methanol).

Analyse: Für C₁₈H₂₅N₃O₄ (M = 347,4) berechnet: 62,23 % C, 7,25 % H, 12,09 % N; gefunden : 62,13 % C, 7,44 % H, 11,70 % N.

Alanyl-prolinethylamid

Diese Verbindung wurde in analoger Weise wie das Prolinethylamid aus dem entsprechenden Benzyloxycarbonylderivat in quantitativer Ausbeute erhalten. R_f 0,13/S₁; 0,57/S₂-

3-Carboxypropionylalanyl-prolinethylamid

Zu einer Lösung von Alanylprolinethylamid (500 mg) in Dioxan (10 ml) und Dimethylformamid (0,25 ml) wurde Bernsteinsäureanhydrid (500 mg) zugegeben; die Reaktionslösung wurde 30 min am Rückfluß zum Sieden erhitzt und danach eingedampft; der Rückstand wurde aus Aceton (10 ml) und Ether (30 ml) kristallisiert. Es wurden 510 mg eines Produkts mit F. 139 bis 141 ⁰C erhalten.

[«]ρ° -129,2° (c = 0,3; 50%iges Methanol). Analyse: Für C₁Ji^N₇O, (M = 359,2) berechnet: 53,53 % C, 7,38 % H, 13,38 % N-; gefunden : 52,90 % C, 7,45 % H, 12,98 % N.

Beispiel 4

Benzyloxycarbonylalanyl-alanyl-prolinethylamid

Zu einer auf -5 ⁰C abgekühlten Lösung von Alanyl-prolinethylamid (hergestellt aus 2,45 g des Benzyloxycarbonylderivats durch Einwirkung einer 36%igen Bromwasserstofflösung in Eisessig und durch anschließende Freisetzung mit Zerolit FF im OH-Zyklus) in Dimethylformamid (20 ml) und Benzyloxycarbonylalanin (1,55 g) wurde N.N'-Dicyclohexylcarbodiimid (1,6 g) zugegeben. Nach 1 h Rühren bei 0 ⁰C und 12 h Stehen bei 3 ⁰C wurde der ausgeschiedene N.N'-Dicyclohexylharnstoff abfiltriert und das Filtrat eingedampft. Der nichtkristalline Rückstand wurde in Ethylacetat gelöst (50 ml); nach 12 h Stehen bei 3 ⁰C wurde das ausgeschiedene Produkt abfiltriert. Es wurden 1,75 g eines Produkts mit F. 138 bis 139 ⁰C erhalten.

20

o -4⁷>° ° (c = 0,3; Dimethylformamid).

Analyse: Für C₂₁H₃₀N₄O₅ (M = 418,5) berechnet: 60,27 % C, 7,23 % H, 13,39 % N; gefunden : 59,97 % C, 7,21 % H, 13,12 % N.

Benzyloxycarbonylalanyl-alanyl-prolinethylamid

Zu einer Lösung von Benzyloxycarbonylalanyl-alanin (14,7 g) in Dimethylformamid (100 ml) und Prolinethylamid (7,6 g) (hergestellt aus dem entsprechenden Benzyloxycarbonylderivat), die auf -5 ⁰C abgekühlt war, wurde N.N'-Dicyclohexylcarbodiimid (11,0 g) zugegeben; das Reaktionsgemisch wurde in üblicher Weise aufgearbeitet. Es wurden 10,6 g eines Produkts mit F. 139 bis 140 ⁰C erhalten.

Kp -46,5° (c = 0,3; Dimethylformamid). Analyse: Für C₂₁H_3nN₄O₅ (^M = 418,5) berechnet: 60,27 % C, 7,23 % H, 13,39 % N; gefunden : 60,08 % C, 7,55 % H, 13,32 % N.

Alanyl-alanyl-prolinethylamid

Diese Verbindung wurde aus dem entsprechenden Benzyloxycarbonylderivat auf dieselbe Weise wie das Alanyl-alanylalaninethylamid von Beispiel 1 in einer Ausbeute von 69 % d. Th. hergestellt; F. 109 bis 111 ⁰C. R_f 0,14/S₁; 0,42/S₂.

[ftjp⁰ -126,1° (c = 0,3; Methanol).

Analyse: Für C₁₃H₂₄N₄O₃ (M = 284,4) berechnet: 54,91 % C, 8,51 % H, 19,70 % N; gefunden : 54,43 % C, 8,61 % H, 19,44 % N.

4-Carboxybutyrylalanyl-alanyl-prolinethylamid

Zu einer Lösung von Alanyl-alanyl-prolinethylamid (4,0 g)

in Dimethylformamid (25 g) wurde Glutarsäureanhydrid (1,7 g) zugegeben; die Reaktionslösung wurde 1 h auf 60 ⁰C erwärmt. Hiernach wurde die Reaktionslösung eingedampft und der nichtkristalline Rückstand in Ethylacetat (30 ml) gelöst. Nach 48 h Stehen bei 3 ⁰C wurde das ausgeschiedene Produkt (3,6 g) abfiltriert. F. 154 bis 156 ⁰C.

(&Jq° -137,3° (c = 0,3; 50%iges Methanol). Analyse: Für C₁₃H₃₀N₄O₄ (M = 398,5)

berechnet: 54,26 % C, 7,59 % H, 14,06 % N; gefunden : 53,96 % C, 7,75 % H, 13,87 % N.

3-Carboxypropionylalanyl-alanyl-prolinethylamid

Diese Verbindung wurde in analoger Weise wie das 3-Carboxypropionyl-alanyl-alanyl-alaninethylamid in einer Ausbeute von 71 % d. Th. hergestellt; F. 185 bis 186 ⁰C.

If^ q^Q -69,3° (c = 0,3; Dimethylformamid). Analyse: Für C₁₇H₂₈N₄O₆ (M = 385,2)

berechnet: 53,01 % C, 7,33 % H, 14,55 % N; gefunden : 52,74 % C, 7,45 % H, 14,44 % N.

Beispiel 5

Benzyloxycarbonylalaninisobutylamid

Zu einer Lösung von Benzyloxycarbonylalanin (23 g) in Methylenchlorid (200 ml) und N-Ethylpiperidin (14 ml) wurde bei -10 ⁰C s-Butylchloroformiat (14 ml) zugegeben. Nach 10 min Rühren bei -5 ⁰C wurde Isobutylamid (8,5 g) in Methylenchlorid (40 ml)

zugegeben. Narh analoger Aufarbeitung wie in Beispie] 1 wurden nach Kristallisieren aus Ethylacetat (60 ml) und Petrolether (200 ml) 20,7 g eines Produkts mit F. 109 bis 111 ⁰C erhalten.

0*3d° 0,7° (c = 0,3; Dimethylformamid). Analyse: Für C₁₅H₂₂N₂O₃ (M = 278,4) berechnet: 64,73 ?OC,7,97 % H, 10,06 % N; gefunden : 64,45 Ä C, 8,01 % H, 9,83 % N.

Alaninisobutylamid

Diese Verbindung wurde aus dem entsprechenden Benzyloxycarbonylderivat in analoger Weise wie in Beispiel 1 hergestellt. R_f 0,32/S₁; 0,69/S₂.

Benzyloxycarbonylalanyl-alanyl-alaninisobutylamid

Diese Verbindung wurde in analoger Weise wie das entsprechende Benzyloxycarbonylalanyl-alanyl-alaninethylamid in einer Ausbeute von 58 % d. Th. hergestellt; F. 260 bis 262 ⁰C.

C°3n° -10,9° (c = 0,3; Dimethylformamid).

Analyse: Für C₂₁H₃₂N₄O₅ (M = 420,5) berechnet: 59,98 % C, 7,67 % H, 13,32 % N; gefunden : 59,63- % C, 7,70 % H, 13,20 % N.

Alanyl-alanyl-alaninisobutylamid

Diese Verbindung wurde in analoger Weise wie das entsprechende Alanyl-alanyl-alaninethylamid in einer Ausbeute von 76 % d. Th. hergestellt; F. 249 bis 252 ⁰C. R_f 0,28/S₁; 0,68/S_r

[pcjp⁰ -66,4° (c = 0,3; Methanol).

Analyse: Für C₁,H_O,N.O₇-H₀O (M = 304,4)
Lj Zo Hj l

berechnet: 51,30 % C, 9,27 % H, 18,41 % N; gefunden : 51,10 % C, 8,73 % H, 18,71 % N.

Die Analysenprobe des Alanyl-alanyl-alaninisobutylamidhydrobromids wurde aus Methanol und Ether umkristallisiert» F. 214 bis 216 ⁰C.

Analyse: Für ^c ₁₃ ^H ₂6^N4⁰3'^{HBr (M =}

berechnet: 42,51 % C, 7,41 ?i H, 15,25 % N; gefunden : 42,54 % C, 7,36 % H, 15,23 % N.

3-Carboxypropionylalanyl-alanyl-alaninisobutylamid

Diese Verbindung wurde in analoger Weise wie das entsprechende Ethylamid-Derivat in einer Ausbeute von 81 % d. Th. hergestellt; F. 283 bis 286 ⁰C.

C°0q° -58,2° (c = 0,3; Dimethylformamid). Analyse: Für C₁J^_nN₇O, (M = 387,2)

1/ JU Q ο

berechnet: 52,74 % C, 7,81 % H, 14,47 % N; gefunden : 52,34 % C, 7,93 % H, 14,58 % N.

4-Carboxybutyrylalanyl-alanyl-alaninisobutylamid

Diese Verbindung wurde in analoger Weise wie das Ethylamid-Derivat von Beispiel 1 in einer Ausbeute von 69 % d. Th. hergestellt; F. 292 bis 293 ⁰C.

Kn⁰ -82,7° (c = 0,3; 50 ?iiges Methanol)

Analyse: Für Ci₈H₃₂ ¹V³S ^^{M =} ^⁰⁰»⁵)

berechnet: 53,99 % C, 8,05 % H, 13,99 % N; gefunden : 54,33 % C, 7,88 % H, 14,19 % N.

Beispiel 6

Benzyloxycarbonylalaninpropylamid

Diese Verbindung wurde in analoger Weise wie das Benzyloxycarbonylalaninethylamid von Beispiel 1 in einer Ausbeute von 87 % d. Th. hergestellt; F. 118 bis 119 ⁰C.

Ify _n 8,4° (c = 0,3; Dimethylformamid).

Analyse: Für C₁₄H₂₀N₂O₃ (M = 264,3) berechnet: 63,62 ?i C, 7,63 % H, 10,60 % N; gefunden : 63,64 % C, 7,74 % H, 10,46 % N.

Benzyloxycarbonylalanyl-alanyl-alaninpropylamid

Diese Verbindung wurde in analoger Weise wie das entsprechende Ethylamid von Beispiel 1 in einer Ausbeute won 56 % d. Th. hergestellt; F. 268 bis 269 ⁰C.

0*3p° -10,6° (c = 0,3, Dimethylformamid). Analyse: Für C_2nH₃₀N₄O₅ (M = 406,5)

berechnet: 59,10 % C, 7,44 % H, 13,78 % N; gefunden : 58,74 % C, 7,61 % H, 13,78 % N.

Alanyl-alanyl-alaninpropylamid

Diese Verbindung wurde in analoger Weise wie das entsprechende Alanyl-alanyl-alaninethylamid von Beispiel 1 in einer Ausbeute von % d. Th. hergestellt; F. 265 bis 268 ⁰C. R_f 0,18/S₁; 0,57/S₂-

[⁰^d° -82,1° (c = 0,3; 50?oiges Methanol). Analyse: Für C₁₂H₂₄N₄O₃ (M = 272,4)

berechnet: 52,92 % C, 8,88 % H, 20,57 % N; gefunden : 53,15 % C, 8,87 % H, 20,54 % N.

3-Carboxypropionylalanyl-alanyl-alaninpropylamid

Diese Verbindung wurde in analoger Weise wie das entsprechende Ethylamid-Derivat von Beispiel 1 in einer Ausbeute von 88 % d. Th. hergestellt; F. 284 bis 287 ⁰C.

j&lp⁰ -59,1° (c = 0,3; 50?iiges Methanol).

Analyse: Für C₁₆H₂₃N₄O₆ (M = 373,2)

berechnet: 51,50 % C, 7,56 % H, 15,01 58 N; gefunden : 51,69 % C, 7,52 % H, 14,67 % N.

4-Carboxybutyrylalanyl-alanyl-alaninpropylamid

Diese Verbindung wurde in analoger Weise wie das entsprechende Ethylamid-Derivat von Beispiel 1 in einer Ausbeute von 89 % d. Th. hergestellt; F. 283 bis 285 ⁰C.

° -84,7° (c = 0,3; 50%iges Methanol).

Analyse: Für C₁₇H₃₀N₄O₅ (M = 386,5)

berechnet: 52,84 % C, 7,82 % H, 14,50 % N; gefunden : 53,24 % C, 7,92 % H, 14,55 % N.

Beispiel 7

Benzyloxycarbonylprolinpropylamid

Diese Verbindung wurde in analoger Weise wie das entsprechende Benzyloxycarbonylalaninderiuat von Beispiel 1 in einer Ausbeute von 83 % d. Th. hergestellt; F. 74 bis 75 ⁰C.

Analyse: Für C₁Ji₇JvLO, (M = 290,4)
berechnet: 66,19 50 C, 7,64 SS H, 9,65 % N; gefunden : 66,05 SS C, 7,41 % H, 9,52 % N.

Prolinpropylamid

Diese Verbindung wurde in analoger Weise wie das entsprechende

Prolinethylamid von Beispiel 3 hergestellt. R_f 0,21/S,; 0,61/S₂-Benzyloxycarbonylalanyl-prolinpropylamid

Diese Verbindung wurde in analoger Weise wie das entsprechende Ethylamid von Beispiel 3 in einer Ausbeute von 73 % d. Th. hergestellt; F. 117 bis 120 ⁰C.

Analyse: Für C₁₉H₂₇N₃O₄ (M = 361,4) berechnet: 63,14 % C, 7,53 % H, 11,63 % N; gefunden : 63,03 % C, 7,39 % H, 11,28 % N.

Alanyl-prolinpropylamid

Diese Verbindung wurde in analoger Weise wie das Ethylamid von Beispiel 1 und 3 in einer Ausbeute von 79 % d. Th. hergestellt. R_f 0,14/S₁; 0,49/S₂.

Benzyloxycarbonylalanyl-alanyl-prolinpropylamid

Diese Verbindung wurde in analoger Weise wie das Benzyloxycarbonylalanin-ethylamid aus Benzyloxycarbonylalanin und Alanylprolinpropylamid in einer Ausbeute von 71 % d. Th. hergestellt. F. 101 bis 103 ⁰C.

(oÖJ ^⁰ -47,7 ° (c = 0,3; Dimethylformamid). Analyse: Für C₂₂H₃₂N₄O₅ (M = 432,5)

berechnet: 61,09 % C, 7,46 % H, 12,95 % N; gefunden : 61,Il % C, 7,69 % H, 12,98 % N.

Alanyl-alanyl-prolinpropylamid

Diese Verbindung wurde in analoger Weise wie das entsprechende Ethylamid von Beispiel 4 in einer Ausbeute von 68 % d. Th. hergestellt; F. 103 bis 105 ⁰C. R_f 0,12/S₁; 0,56/S₂·

0*3D° -153,3° (c = 0,3; Methanol). Analyse: Für C₁,H_OZ.N,O, (M = 298,4). berechnet: 56,35 % C, 8,78 % H, 18,78 % N; gefunden : 55,87 % C, 8,93 % H, 18,78 % N.

4-Carboxybutyrylalanyl-alanyl-prolinpropylamid

Diese Verbindung wurde in analoger Weise wie das Ethylamid von Beispiel 4 in einer Ausbeute von 73 % d. Th. hergestellt\ F. 131 bis 134 ⁰C.

[ot]p° -148,7° (c = 0,3; 5O5Kiges Methanol). Analyse: Für C₁₉H₃₂N₄O₄ (M = 412,5)

berechnet: 55,32 % C, 7,82 % H, 13,58 % N; gefunden : 55,25 % C, 7,99 % H, 13,74 % N.

Beispiel 8

Benzyloxycarbonylprolyl-alaninmethylester

Zu einer Lösung von Benzyloxycarbonylprolin (12,45 g), das aus dem entsprechenden Hydrochlorid (7,0 g) mit N-Ethylpiperidin (7 ml) in Methylenchlorid (40 ml) freigesetzt worden war, wurde nach Abkühlen auf -5 ⁰C N.N'-Dieyclohexylcarbodiimid (11,0 g) zugegeben; die Reaktionssuspension wurde 1 h bei 0 ⁰C gerührt. Nach 12 h Stehen bei 3 ⁰C wurde der ausgeschiedene N.N'-Dicyclohexylharnstoff abfiltriert; das Filtrat wurde nacheinander mit 1 M Salzsäure, Wasser, einer 5%igen Natriumhydrogencarbonatlosung und Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und eingedampft. Der feste Rückstand wurde aus Ethylacetat (100 ml) und Petrol-

ether (500 ml) kristallisiert. Es wurden 12,2 g eines Produkts mit F. 45 bis 49 ⁰C erhalten.

Benzyloxycarbonylprolyl-alaninhydrazid

Zu einer Lösung von Benzyloxycarbonylprolyl-alaninmethylester (10,0 g) in Methanol (100 ml) wurde 80%iges Hydrazinhydrat (7,5 ml) zugegeben; die Reaktionslösung wurde 2 h am Rückfluß zum Sieden erhitzt. Danach wurde die Lösung eingedampft; der feste Rückstand wurde aus Wasser (40 ml) kristallisiert. Es wurden 6,8 g eines Produkts mit F. 142 bis 143 ⁰C erhalten.

Analyse: Für C₁₅H₂₂N₄O₄ (M =334,4) berechnet: 57,47 % C, 6,63 % H, 16,76 % N; gefunden : 57,41 % C, 6,85 % H, 16,90 % N.

Benzyloxycarbonylprolyl-alanyl-alaninethylamid

Diese Verbindung wurde in analoger Weise wie das entsprechende Benzyloxycarbonylalanyl-alanyl-alaninethylamid von Beispiel 1 aus Benzyloxycarbonylprolyl-alanin und Alaninethylamid in einer Ausbeute von 49 % d. Th. hergestellt; F. 219 bis 220 ⁰C.

-36,2° (c = 0,3; Dimethylformamid).

Analyse: Für ^C ₂1^H3O^N4°5 ^¹

berechnet: 60,27 % C, 7,23 56 H, 13,39 % N; gefunden : 60,08 % C, 7,41 % H, 13,22 % N.

Prolyl-alanyl-alaninethylamid

Diese Verbindung wurde in analoger Weise wie das Alanylalanyl-alaninethylamid von Beispiel 1 in einer Ausbeute von 53 % d. Th. hergestellt; F. 216 bis 219 ⁰C, R_f 0,07/S₁; 0,54/S

::^::::- ^:-^: 322963?

Analyse: Für C₁₃H₂₄N₄O₃ (M = 284,4) berechnet: 54,91 % C, 8,51 % H, 19,17 % N; gefunden : 54,49 % C, 8,42 % H, 19,39 % N.

4-Carboxybutyrylprolyl-alanyl-alaninethylamid

Diese Verbindung wurde in analoger Weise wie das 4-Carboxybutyrylalanyl-alanyl-alaninethylamid von Beispiel 1 in einer Ausbeute von 44 % d. Th. hergestellt; F. 172 bis 177 ⁰C.

Analyse: Für C₁₈H₃₀N₄O₄ (M - 398,5) berechnet: 54,26 % C, 7,59 % H, 14,06 % N; gefunden : 54,81 % C, 7,43 % H, 14,38 % N.

Beispiel 9

3-Carboxyacryloylalanyl-alanyl-alaninethylamid

Zu einer auf 60 ⁰C erwärmten Lösung von Alanyl-alanylalaninethylamid (260 mg) in Dimethylformamid (20 ml) wurde Maleinsäureanhydrid (200 mg) zugegeben; die Reaktionslösung wurde 30 min auf 80 ⁰C gehalten. Danach wurde das Reaktionsgemisch eingedampft und der Rückstand aus Dimethylformamid und Isopropanol umkristallisiert. Es wurden 185 mg eines Produkts mit F. 260 bis 266 ⁰C (unter Zersetzung) erhalten.

q⁰ -35,6° (c = 0,3; Dimethylformamid).

Analyse: Für C₁₅H₂₄N₄O₅ (M = 356,4) berechnet: 50,55 % C, 6,79 % H, 15,72 % N; gefunden : 49,97 % C, 7,13 % H, 15,83 % N.

Claims

BEETZ & PARTNER
Steinsdorfstr. 10 · D-8000 München 22 Telefon (0 89) 22 72 01 - 22 72 44 - 29 5910 Telex 5 22 048 - Telegramm Allpat München
233-34.o34P
Patentanwälte 3229632
European Patent Attorneys
Dipl.-Ing. R. BEETZ sen.
Dr.-Ing. R. BEETZ jun.
Dr.-Ing. W. TIMPE Dipl.-Ing. J. SIEGFRIED Priv.-Doz. Dipl.-Chem. Dr. rer. nat. W.SCHMITT-FUMIAN
Dipl.-Ing. K. LAMPRECHT 11981
9. Aug. 1982

Ansprüche

Γ\J Carboxyalkanoylpeptid-alkylamide der allgemeinen Formel I

COOH

X^ (D,

CO-B-AIa-A-NH-R

in der bedeuten:

R geradkettiges oder verzweigtes Alkyl mit 1 bis 5 C-Atomen oder Aralkyl,

A einen peptidisch gebundenen Prolin- oder Alaninrest,

B einen peptidisch gebundenen Prolin- oder Alaninrest oder keine Gruppe

und
X -CH₂-, -CH₂CH₂-, -CH₂CH₂CH₂- oder -CH=CH.

2. Carboxyalkanoylpeptid-alkylamide nach Anspruch 1 mit R = Phenylethyl.

3. Verfahren zur Herstellung der Carboxyalkanoylpeptid-alkylamide der allgemeinen Formel I nach Anspruch 1 oder 2, gekennzeichnet durch

Umsetzung einer Verbindung der allgemeinen Formel II

A-NH-R (II)

mit R und A wie in Anspruch 1

mit einer Verbindung der allgemeinen Formel III 233-S10053-SF-Bk

Y-B-AIa (III)

mit B wie in Anspruch 1

und
Y = eine leicht abspaltbare Schutzgruppe,

Abspaltung der Schutzgruppe vom entstandenen Zwischenprodukt und

Umsetzung des Zwischenprodukts mit einem reaktionsfähigen Derivat einer Dicarbonsäure der allgemeinen Formel IV

COOH

X (IV)

^COOH

mit X wie in Anspruch 1.

4. Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß eine Verbindung der Formel III mit Y = Benzyloxycarbonyl verwendet wird.

5. Verfahren nach Anspruch 3 oder 4, dadurch gekennzeichnet, daß als reaktionsfähiges Derivat der Dicarbonsäure der Formel IV das Anhydrid, ein Monohalogenid, ein Monoester oder ein Monoamid verwendet werden.

6. Pharmazeutische Mittel, gekennzeichnet durch ein Carboxyalkanoylpeptid-alkylamid nach Anspruch 1 oder 2 als Wirkstoff.