CS226907B1

CS226907B1 - Alkylamides of carboxyalkanoylpeptides

Info

Publication number: CS226907B1
Application number: CS815977A
Authority: CS
Inventors: Evzen Ing Csc Kasafirek; Premysl Doc Mudr Drsc Fric; Jan Ing Mudr Slaby; Alena Roubalova
Original assignee: Kasafirek Evzen; Premysl Doc Mudr Drsc Fric; Jan Ing Mudr Slaby; Alena Roubalova
Priority date: 1981-08-07
Filing date: 1981-08-07
Publication date: 1984-04-16
Also published as: US4554100A; GB2104082B; BE894065A; FR2510990B1; CH653038A5; FR2510990A1; IT1156108B; DE3229632A1; GB2104082A; JPH0349918B2; IT8222506A1; HU193029B; CA1238902A; JPS5849351A; IT8222506A0; DE3229632C2

Description

(54) Alkylamidy karboxyalkanoylpeptidů

Vynález se týká alkylamidů karboxyalkanoylpeptidů obecného· vzorce,

COOH /

X \ CO—B—Ala—A—NH—R , kde

R je přímý nebo rozvětvený alkyl s 1 až 5 atomy uhlíku nebo· fenylethyl,

A je zbytek peptidicky vázaného prolinu nebo· alaninu,

B je zbytek peptidicky vázaného prolinu nebo· alaninu nebo nula,

X je · skupina — CHž—CH2—, —CH2CH2CH2—, nebo —CH = CH—.

Alkylamidy dípeptidů jsou účinné inhibitory elastázy (belgický patent č. 855 851 a č. 856 064). Přitom sekvence dipeptidů sleduje aminokyselinové složení optimální pro elastolytický substrát, tj. např. alanyl-alanin, anebo alanyl-prolin. Nerespektují se však zcela některé nové poznatky o· interakci mezi substrátem a elastázou, které jsou podle zkušeností · rozhodující pro funkci účinného· inhibitoru. V dřívějších pracích, zabývajících se optimalizací substrátu pro pankre-atickou elastásu, bylo zjištěno, že rozhodující význam pro interakci mezi enzymem a substrátem má elektrostatická vazba mezi P4—S4 a Ps—Ss [I. Schechter a A. Berger: Biochem. Biophys. Res. Commun. 32, 898 (1968)], která je preferována před primární interakcí (Eur. J. Biochem. 69, 1 (1976), FEBS Lett. 40, 353 (1974)].

S překvapením bylo· zjištěno, že karboxylová skupina v N-terminální části inhibitoru ve srovnání s hydrofobním zbytkem (například acetylovým.) u známých dipeptidů podstatně zvyšuje jeho inhibiční kapacitu, podobně jako· zvyšuje konstanty elastolytické hydrolýzy u substrátů tohoto typu. Vlastnosti · elastolytického inhibitoru závisí také na délce peptidového řetězce stejně jako u substrátů (Eur. J. Biochem. 69, 1 (1976)]: vyšší inhibiční kapacita je u tripeptidu než u dipeptidů. V pokusech in vitro· byly stanoveny inhibiční konstanty (Ki) alkylamidů

3-karboxyoropionyl- a 4-karboxybutyryldi- a tripeptidů, pomocí pankreatické elastázy a chromogenních substrátů p-nitroanilidů succinyl-, anebo glutaryltetraalaninů; výsledky jsou uvedeny v tabulce I. Po dobným způsobem byly stanoveny inhiaiční lidské elastázy, tj. lidské duodenální elastázy po· stimulaci cholecystokininem (Ej),nebo lyofilizované lidské pankreatické šťávy získané kanylací pankreatického vývodu elastázou (Ез); výsledky jsou uvedeny v ta(E2J a porovnány s vepřovou pankreatickou bulce 2.

TABULKA 1

Inhibiční konstanty (Ki) alkylamidů acylovaných dl- a tripeptidů.

Inhibitor	Ki (μπίοΐ) Suc—(Ala )4—NAn	Git—(Ala)4—NAn
Suc—(Ala)?—NH—Et	95,2	166
Git— (Ala)2—NH—Et	68,1	109
Suc—(Ala)2—NH—EtPh	1456	666
Git—(Ala)2NH—EtPh	982	770
Suc— (Ala) 3—NH—Me	510	680
Git—(Ala)3—NH—Me	280	320
Sus— (А1а)з—NH—Et	20	29
Git—(А1а)з—NH—Et	8,8	8,4
Mal— (Ala)₃—NH—Et	35	30
Ас—(А1а)з—NH—Et	28	46
Suc—(А1а)з—NH—Pr	6,8	4,5
Git—(Ala)—NH—Pr	2,5	2,5
Suc—(А1а)з—NH—iBu	816	1474
Glit—(А1а)з—NH—ÍBu	668	794
Suc—Ala—Pro—NH—Et	111	80
Suc—Ala—Pro—NH—iBu	2042	5747
Suc—Ala—Ala—Pro—NH—Et	2,5	4,7
Git—Ala—Ala—Pro—NH—Et	1,6	2,7

Suc = sukcinyl, tj, 3-karboxypropionyl; Git = glutaryl, tj. 4-karboxybutyryl; Mal = 3-karboxyakryolyl; Ac = acetyl. Me = methyl, Et = ethyl, Pr = propyl, íBu '= isobutyl, EtPh = fenylethyl. Alanin (Ala) a prolln (Pro) jsou L-konfigurace.

TABULKA 2

Inhibiční konstanty (Ki) alkylamidů acylovaných tripeptidů

Inhibitor Ki (/zmol)

Suc—(Ala )4—NAn Git—(Ala)4—NAn

	Ei	E2	Ез	Ei	E2	Ез
Ac—(Ala)3—NH—Et	238	69	28	123	117	46
Mal—(А1а)з—NH—Et	87	69	35	73	117	30
Suc—(А1а)з—NH—Et	76	29	20	89	47	29
Git— (А1а)з—NH—Et	15	7,4	8,8	19	19	8,4
Suc—Ala—Ala—Pro—NH—Et	14	23	2,5	19	17	4,7
Git—Ala—Ala—Pro—NH—Et	10	2,9	1,6	12	3,8	2,7
Suc—(А1а)з—NH—Pr	12	13	6,8	21	14	4,5
Git— (Ala )з—NH—Pr	11	3,8	2,5	7,2	4,5	2,5

Suc = sukcinyl; Git = glutaryl; NAn = 4-nitroanilid; Et = ethyl, Pr = propyl; Mal = 3-karboxyakrylolyl, tj. maleyl.

V pokuse in vivo při experimentální pankreatitidě u krysy, vyvolané nitroorgánovou aplikací desoxycholátu sodného, byla prokázána při současné aplikaci

Git—(А1а)з—NH—Et (intraperitonálně 20 mg) nižší hladina sérové amylásy. Inhibitory

Git—(А1а)з—NH—Et, Git—Ala—Ala—Pro—NH—Et a zejména

Git—Ala—Ala—Pro—NH—Pr (v dávce 20 mg na krysu) snižují rozvoj edému vyvolaného podkožní injekcí elastázy do krysí tlapky o 20 až 40 °/o.

Ve srovnání se známými alkanoylderiváty (dipeptidy) [Bioorgan. Chenj. 8, 299 (1979)) je patrné signifikantní (řádově vyšší) zvýšení inhibice elastolytické hydrolýzy, což svědčí o významu charakteru N-terminálního substituentu.

Popsané inhibitory podle vynálezu neobsahují žádnou nepřirozenou skupinu, takže při jejich farmakoterapeutickém použití, zejména při akutní pankreatitidě, chronické | obstrukční chorobě plicní a některýchj kloubních zánětů, nejsou předpoklady prol výskyt nežádoucích reakcí,j

Podle vynálezu se alkylamidy karboxyal-j kanoylpeptidů obecného vzorce Ij

COOH

Z

X \ CO—B—Ala—A—NH—R , (I) kde

R je přímý nebo rozvětvený alkyl s 1 až 5 atomy uhlíku nebo fenylethyl,

A je zbytek peptidicky vázaného prolinu nebo alaninu,

В je zbytek peptidicky vázaného prolinu nebo alaninu nebo nula,

X je skupina —CHz—СНг—, —CH2—CHž—CH2— nebo — CH=CH—, připravují tak, že se nejprve sloučenina obecného vzorce II

A-NH-R , (II) kde R a A značí totéž co ve vzorci I, nechá reagovat se sloučeninou obecného vzorce III

Y-B-Ala , (IIIj kde В značí totéž co ve vzorci I a Y snadno odstranitelnou chránící skupinu, například benzyloxykarbonylovou skupinu, načež se vzniklý meziprodukt po odstranění chránící skupiny podrobí reakci s reaktivním derivátem dikarboxylové kyseliny obecného vzorce IV

COOH /

X \

COOH (IV) ve kterém X značí totéž co ve vzorci I, zejména jejím anhydridem, polohalogenidem, poloesterem nebo poloamidem.

Syntéza těchto¹ biologicky aktivních peptidů je provedena v podstatě fragmentovou kondenzací v roztoku, anebo postupnou aminokyselinovou výstavbou, tzv. „step-wise“ metodou, nebo ji lze uskutečnit syntézou na pevném nosiči.

Jako chránících skupin meziproduktů bylo použito skupiny urethanového typu (benzyloxykarbonylové), ale lze použít i skupin labilních v slabě kyselém prostředí (například terc.butyloxykarbonylové nebo o-nitrobenzensulfenylové apod.j, nebo skupin redukovaných kovem, popřípadě elektrolyticky (2-halogenethyloxykarbonylové).

Kondenzační reakce byly provedeny azidovou metodou, karbodiimidovou metodou smíšených anhydridů, ale stejně tak lze použít i jiné metody používané v syntéze peptidů.

Bližší podrobnosti přípravy vyplývají z příkladů provedení:

Příklad 1

Ethylamid benzyloxykarbonylalaninu

К roztoku benzyloxykarbonylalaninu (23,3 gramu) v tetrahydrofuranu (100 ml) byl přidán N-ethylpiperidin (14 ml) a po ochlazení na —10 °C byl přidán chlormravenčan sek-butylnatý (14 ml); po 8minutovém míchání a chlazení (—6°C) byl přidán roztok

4,1 M ethylaminu v tetrahydrofuranu (30 ml). Po У2 hod. míchání při 0 °C a 2 hod. míchání při teplotě místnosti byl reakční roztok odpařen, postupně protřepán 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou, vysušen bezvodým uhličitanem sodným a odpařen. Odparek byl krystalován z octanu ethylnatého (30 ml) a petroletheru. Bylo získáno 18,1 g produktu o t. t. 116 až 117 °C.

Hydrobromid ethylamidu alaninu

Ethylamid benzyloxykarbonylalaninu (10 gramů) byl přelit 36% bromovodíkem v ledové kyselině octové (40 ml); po 1 hodině byl к vzniklému roztoku přilit ether (150 ml) a škrabáním se vyloučil krystalický produkt, který byl odfiltrován, promyt důkladně etherem a vysušen v exsikátoru nad fosforpentoxidem a hydroxidem sodným. Bylo získáno 7,7 g hydrobromidu o t. t. 224 až 226 °C; Ri = 0,26/Si, 0.58/S2.

Sr. n-butanol — kyselina octová — voda (4:1:1),

S2: n-butanol — kyselina octová — pyridin — voda (15 : 3 :10 : 6).

Ethylamid benzyloxykarbonyl-alanyl-alaninu

К roztoku hydrazidu benzyloxykarbonylalanyl-alaninu (3,08 g) v tetrahydrofuranu (100 ml) a azeotropické kyselině chlorovodíkové (4 ml) byl při teplotě —12 °C přidán roztok dusitanu sodného (690 mg) ve vodě (2,8 ml). Po 8minutovém míchání a chlazení (—10 °C) byl reakční roztok zředěn předchlazeným octanem ethylnatým (200 ml), organická fáze byla vytřepána při —15° Celsia 3% roztokem hydrogenuhličitanu sodného v solance, vysušena síranem sodným a přidána к předchlazenému roztoku (—10°C) ethylamidu alaninu v dimethylformamidu (40 ml), připravenému z odpovídajícího hydrobromidu (1,37 g) neutralizací N-ethylpiperidinem (1,4 ml). Po 12 hodinách stání při teplotě 0 °C byl roztok odpařen a pevný odparek byl krystalován ze směsi 2-propanolu (50 ml) a dimethylformamidu (50 ml) přídavkem vody (250 ml). Bylo získáno 2,71 g produktu o t. t. 271 až 273 °Ο; f«]_D ²⁰ = —8,3° (c = 0,3; dimethylfonnamid).

2 5 9 O 7

Pro C19H28N4O5 (392,5) vypočteno:

58.15 % C, 7,19 % H, 14,28 % N, nalezeno:

57,97 % C, ' 7,27 % H, 13,93 % N.

Ethylamid alanyl-alanyl-alaninu

Ethylamid benzyloxykarbonylalanyl-alanyl-alaninu (1 g) byl přelit 36% bromovodíkem v kyselině octové (3 ml) a po 1 hodině byl vzniklý roztok přelit etherem. (30 ml). Vyloučený hydrobromid byl odfiltrován, 2 hodiny sušen v exsikátoru nad fosiorpentoxidem a hydroxidem sodným, potom byl rozpuštěn v 90'% vodném methanolu (20 ml) a delonizován na Zerolitu FF v OH-cyklu v methanolu. Methanolický eluát byl odpařen a odparek byl vysušen azeotropickou destilací ze směsi methanol — benzen a odparek byl krystalován z methanolu (10 ml) a etheru (30 ml). Bylo získáno 495 mg produktu o. t. t. 259 až 260 °C; [_a]_D20 = —67,1° (c = 0,3; methanol).

R_f = 0,14/Si; O.58/S2.

Pro C11H22N4O3 (258,3) vypočteno:

51.15 % C, 8,58 % H, 21,69 % N, nalezeno:

50,82 % C, 8,63 % H, 21,37 % N.

Analytický vzorek hydrobromidu ethylamídu alanyl-alanyl-alaninu byl krystalován z methanolu a. etheru; 1 1. 284 až 289 °C.

Pro C11H22N4O6 . HBr (339,2) vypočteno:

38,95 % C, 6,83 % H, 16,52 % N, nalezeno:

38,70 % C, 6,91 % H, 16,18 % N.

Ethylamid 3-karboxypr.opionylalanyl-alanyl-alaninu

K roztoku ethylamidu alanyl-alanyl-alaninu (260 mg) v dimethylformamidu (5 ml) a tetrahydrofuranu (30 ml) byl přidán anhydrid kyseliny jantarové (300 mg) a reakční roztok byl zahříván 2 hodiny pod zpětným chladičem. Potom byl vyloučený krystalický produkt odfiltrován, promyt tetrahydrofuranem a etherem. Krystalizací z vody (18 ml) bylo získáno· 180 mg produktu o t. t. 285 až 287 °C; [-a]_D ²⁰ = —61,8° (c = 0,3; 50% methanol).

Pro C15H26N4O6 (359,2) vypočteno:

50.16 % C, 7,30 % H, 15,60 % N, nalezeno:

50,10 % C, 7,40 % H, 15,61 % N.

Ethylamid 4-karboxybutyrylalanyl-alanyl-alaninu

Byl připraven obdobným způsobem jako 3-karboxyprooionylderitát acylací anhydridem kyseliny glutarové, ve výtěžku 65 % a s t. t. 278 až 280 °C; [a]_D ²⁰ ·= —86,0° (c = = 0,3; 50% methanol).

Pro· C15H28N4O5 (372,4) vypočteno:

51,60 % C, 7,58 % H, 15,04 % N, nalezeno:

51,24 % -C, 7,68 % H, 14,90 % N.

Příklad 2

Fenylethylamid benzyloxykarbonylalaninu

Byl připraven obdobným, způsobem jako odpovídající ethylamid uvedený v příkladě 1 ve výtěžku 87 % a .s t. t. 125 až 126 °C; [-«]_D 20 = —2,7° . (c = 0,3; dimethylformamid).

Pro C19H22N2O3 (326,3) vypočteno:

69,94 % C, 6,80 % H, 8,59 % N, nalezeno:

70,32 % C, 7,01 % H, 8,70 % N.

Fenylethylamid benzyloxykarbonylalanyl-alaninu

K roztoku fenylethylamidu alaninu (4,9 gramu), uvolněného z odpovídajícího benzyloxykarbonylderivátu 36% bromovodíkem v kyselině octové (Rf = 0,44/Si; 0,58/S2. a benzyloxykarbonylalaninu (5,6 g) v dim-ethylformamidu (200 ml), vychlazenému . na —-5 °C, byl přidán N,N‘-Уicy3lohexylkarbodiimid (5,5 g). Po 1 hodině míchání při 0 °C a 3 hod. při teplotě místnosti byla vyloučená N,N‘-dicyklohexylmrčovina odfiltrována, promyta УimtthylformamiУtm a filtrát byl vakuově odpařen. Krystalický odparek byl roztírán postupně s 1M kyselinou chlorovodíkovou, vodou, 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a krystalován ze směsi ethanolu (150 ml) a vody (100 ml). Bylo získáno 7,75 g produktu o· t. t. 211 až 212 °C; [w)d²0 = —1,95°; (c = 0,3; •dimethylformamid). .

Pro C22H27N3O4 (397,5) vypočteno:

66,55- % C, 6,85 % H, 10,57 % N,

Π31ΘΖΘΠ0’’

66,89 % C, 6,99 % Η, 10,74 % Ν.

Fenylethylamid alanyl-alaninu

Byl připraven obdobně jako ethylamid alanyl-alanyl-alaninu v příkladu 1 ve výtěžku 93 % a s t. t. 107 až 110 °C; R_f = 0,31/Si; 0,63/Sž; [a]_D ²⁰ = —44,9° (c = 0,3; methanol).

Pro CwHz>N5O2 (263,4) vypočteno:

63,85 % C, 8,04 % H, 15,96 % N, nalezeno ·

63,38 % C, 8,14. % H, 16,20 % N.

Fenylethylamid 3-karboxypropionylalanyl-alaninu

Byl připraven obdobně jako ethylamid 3-karboxypropionylalanyl-alanyl-alaninu uvedený v příkladu 1 ve výtěžku 63 % a s t. t. 209 až 211 °C; [a)_D ²⁰ = —45,3° (c = 0,3; 50°/o methanol).

Pro C18H25N3O5 (364,2) vypočteno:

59,37 % C, 6,92 0/0 H, 11,54 % N, nalezeno:

59,22 % C, 6,85 % H, 11,82 % N.

Fenylethylamid 4-karboxybutyrylalanyl-alaninu

Byl připraven obdobně jako ethylamid 4-karboxybutyrylalanyl-alanyl-alaninu uvedený v příkladu 1 ve výtěžku 57 °/o a s t. t. 208 až 209 °C; [a]_D ²⁰ = —61,4° (c = 0,3; 50% methanol).

Pro CJ9H27N3O4 (377,5) vypočteno:

60,46 % C, 7,21 % H, 11,13 % N,

ΓΊ Я 1 Ρ7ΡΤΊ П *

59,58 % C, 7,19 % H, 11,25 % N.

Příklad 3

Ethylamid prolinu

К roztoku ethylamidu benzyloxykarbonylprolinu (11 g) v kyselině octové (10 ml) byl přidán 36% bromovodík v kyselině octové (40 ml). Po 1 hodině byl к reakčnímu roztoku přidán ether (300 ml), vyloučený hydrobromid (nekrystalický) byl 2 hodiny sušen v exsíkátoru nad fosforpentoxídem a hydroxidem sodným, potom byl suspendován v nasyceném amoniakálním roztoku chloroformu (0°C) (60 ml), reakční suspenze byla po 20minutovém sténí při 3 °C zfiltrována a filtrát byl odpařen. Bylo získáno 5,7 g nekrystalického produktu; R_ř ~ 0,25/Si;

0,56/Sz.

Ethylamid benzyloxykarbonylalanyl-prolínu

К roztoku ethylamidu prolinu [5,6 g) a benzyloxykarbonylalaninu (9,0 g) ve směsi dimethylformamidu (5 ml) a tetrahydrofuranu (60 ml), ochlazenému na —5 °C, byl přidán N,N‘~dicyklohexylkarbodiimid (9,0 g). Po 1 hodině míchání při 0°C byla reakční směs ponechána 12 hodin při teplotě místnosti; vyloučená N,N‘-dicyklohexylmočovina byla odfiltrována, filtrát byl odpařen, odparek byl rozpuštěn ve směsi octan ethylnatý — voda, organická fáze byla postupně protřepána 1M kyselinou chlorovodíkovou, vodou, 5% hydrogenuhličitanem sodným, vodou, vysušena bezvodým síranem sodným a odpařena. Odparek byl krystalován ze směsi etheru (30 ml) a petroletheru (30 ml); bylo získáno 5,4 g produktu o t. t. 99 až 101° Celsia; [-a]_D ²⁰ = —93,4° (c = 0,3; methanol.

Pro C18H25N3O4 (347,4) vypočteno:

62,23 % C, 7,25 % H, 12,09 % N, nalezeno:

62,13 % C, 7,44 % H, 11,70 % N.

Ethylamid alanyl-prolinu

Byl připraven obdobným způsobem jako ethylamid prolinu v kvantitativním výtěžku z odpovídajícího benzyloxykarbonylderivátu; R_f = 0,13/Si; 0,57/Sž.

Ethylamid 3-karboxypropionylalanyl-prolinu

К roztoku ethylamidu alanyl-prolinu (500 mg) v dioxanu (10 ml) a dimethylformamidu (0,25 ml) byl přidán anhydrid kyseliny jantarové (500 mg) a reakční roztok byl 30 minut zahříván pod zpětným chladičem, potom byl odpařen a odparek byl krystalován z acetonu (10 ml) a etheru (30 ml). Bylo získáno 510 m.g produktu o t. t. 139 až 141° Celsia; [^]_D ²⁰ = -129,2* (c = 0,3; 50% methanol).

Pro C15H26N4O6 (359,2) vypočteno:

53,53 % C, 7,38 % H, 13,38 % N,₄nalezeno:

52,90 % C, 7,45 % H, 12,98 %N.

Příklad 4

Ethylamid benzyloxykarbonylalanyl-alanyl-prolmu

К roztoku ethylamidu alanyl-prolinu (připraveného z 2,45 g benzyloxykarb.onylderivátu působením 36% bromovodíku v kyselině octové a následným uvolněním na Zerolitu FF v OH-cyklu) v dimethylformamidu (20 ml) a benzyloxykarbonylalaninu (1,55 gramu), .ochlazenému na —5°C, byl přidán N,N‘-dicyklohexylkarbodiimid (1,6 g). Po 1 hodině míchání při 0 °C a 12 hodinách stání při 3 °C byla vyloučená N,N‘-dicyklohexylmočovina odfiltrována a filtrát byl odpařen. Nerystalický odparek byl rozpuštěn v octanu ethylnátém (50 ml) a po 12 hodinách stání při 3 °C byl vyloučený produkt odfiltrován. Bylo získáno 1,75 g produktu o t. t.

138 až 139 °C; («]₀2θ = -47,0° (c = 0,3;

dimethylf ormamid).

Pro C21H30N4O5 (418,5) vypočteno:

60,27 % C, 7,23 % H, 13,39 % N, nalezeno:

59,97 % C, 7,21 % H, 13,12 % N.

Ethylamid benzyloxykarbonylalanyl-alanyl-prolinu

К roztoku benzyloxykarbonylalanyl-alaninu (14,7 g) v dimethylformamidu (100 ml) a ethylamidu prolinu (připraveného z odpovídajícího benzyloxykarbonylderivátu) (7,6 gramu), ochlazenému na —5 °C, byl přidán N,N‘-dicyklohexylkarbodiímid (11,0 g) a reakční směs byla zpracována obvyklým způsobeni. Bylo získáno 10,6 g produktu o t. t.

139 až 140 ^CC; [a]_D ⁰² = —46,5° (c = 0,3; dimethylf ormamid ).

Pro C21H30N4O5 (418,5) vypočteno:

60,27 % C, 7,23 % H, 13,39 % N, nalezeno:

60,08 % C, 7,55 % H, 13,32 % N.

Ethylamid alanyl-alanyl-prolinu

Byl připraven z odpovídajícího benzyloxykarbonylderivátu stejným způsobem jako ethylamid alanyl-alanyl-alanínu, uvedený v příkladu 1, ve výtěžku 69 % a s t. t. 109 až 111 °C; R_f = 0,14/Si; 0,42/Sž; [·α]ο²⁰ = -126,1° (c = 0,3; methanol).

Pro C13H24N4O3 (284,4) vypočteno:

54,91 % C, 8,51 % H, 19,70 % N, n л 1Р7РП n ·

54,43 % C, 8,61 % H, 19,44 % H.

Ethylamid 4-karboxybutyrylalanyl-alanyl-prolinu

К roztoku ethylamidu alanyl-alanyl-proilinu (4,0 g) v dimethylformamidu (25 ml) byl přidán anhydrid kyseliny glutarové (1,7 g) a reakční roztok byl zahříván 1 hodinu při 60 °C. Potom byl reakční roztok odpařen a nekrystalický odparek rozpuštěn v octanti ethylnátém (30 ml). Po 48 hodinách stání při 3 °C byl vyloučený produkt odfiltrován (3,6 g); t. t. 154 až 156 °C; [ce]_D ²⁰ = —137,3° (c = 0,3; 50% methanol).

Pro C18H30N4O4 (398,5) vypočteno:

54,26 % C, 7,59 % H, 14,06 % N, nalezeno:

53,96 % C, 7,75 % H, 13,87 % N.

Ethylamid 3-karboxypropiony]alanyl-alanyl-prolinu

Byl připraven obdobně jako· ethylamid 3-кагЬохургор1опу1-а1апу1-а1апу1-а1ап1пи ve výtěžku 71 % a s t. t. 185 až 186 °C;

[«Jo²⁰ = — 69,3^C (c = 0,3; dimethylformamid).

Pro C17H28N4O6 (385,2) vypočteno:

53,01 % C, 7,33 % H, 14,55 % N, nalezeno:

52,74 % C, 7,45 % H, 14,44% N.

Příklad 5

Isobutylamid benzyloxykarbonylalaninu

К roztoku benzyloxykarbonylalaninu (23 gramů) v methylenchloridu (200 ml) a N-ethylpiperidínu (14 ml) byl přidán pří —10° Celsia chlormravenčan sek.butylnatý (14 ml). Po lOminutovém míchání při —5 °C byl přidán isobutylamin (8,5 g) v methylenchloridu (40 ml). Obdobným zpracováním ják uvedeno· v příkladě 1 bylo krystalizací z octanu ethylnatého (60 ml) a petroletheru (200 ml) získáno· 20,7 g produktu, o t. t. 109 až 11143; [-aJo²⁰ = 8,7° (c = 0,3; dimethylformamid).

Pro C15H22N2O3 (278,4) vypočteno:

64,73 % C, 7,97 % H, 10,06 % N, nalezeno:

64,45 % C, 8,01 % H, 8,83 % N.

Isobutylamid alaninu

Byl připraven z příslušného benzyloxykarbonylderivátu obdobným způsobem jako v příkladě 1; R_f ·= 0,32/Si; 0,69/S2.

Isobutylamíd benzyldxykarbonylálanyl-alanyl-alaninu

Byl připraven obdobným způsobem jako odpovídající ethylamid benzylóxykarbonylalanyl-alanyl-alaninu ve výtěžku 58 % s t. t. 260 až 262 °G; OJo²⁰ ·=“ —10,9° (o = O₄3; dimethylfopmamíd).

Pro C21H32N4O5 (420,5) vypočteno:

59,98 % C, 7,67 «/o H, 13,32 % N, nalezeno:

59,63 0/0 C, 7,70 % H, 13,20 % N.

Isobutylamíd alanyl-alanyl-alaninu

Byl připraven Obdobným způsobem jako odpovídající ethylamid alanyl-alanyl-alaninu ve výtěžku 76 % a s t. t. 249 až 252 °C. R_f = = 0,28/Si; 0,68/Sz; [iab²⁰ = — 66,4^C (c = 0,3; methanol).

Pro C13H26N4O3. H2O (304,4) vypočteno:

51,30 % C, 9,27 % H, 18,41 % N, nalezeno:

51,10 % C, 8,73 % H, 18,71 % N.

Analytický vzorek hydrobromidu isobutylamidu alanyl-alanyl-alaninu byl krystalován z methanolu a etheru; t. t. 214 až 216 °C.

Pro C13H26N4O3 . HBr (367,3) vypočteno:

42,51 % C, 7,41 % H, 15,25 % N, nalezeno·:

42,54 % C, 7,36 % H, 15,23 % N.

Isobutylamíd 3-karboxypropionylalanyl-alanyl-alaninu

Byl připraven obdobně jako příslušný ethylamidderivát ve výtěžku 81 % a s t. t. 283 až 286 °C; [«]_D ²⁰ = —58,2° (c = 0,3; dimethylf ormamid).

Pro C17H30N4O6 (387,2) vypočteno:

52,74 % C, 7,81 % H, 14,47 % N, τ*| a 1 Ρ7ΡΤΊ ПГ

52,34 % C, 7,93 % H, 14,58 % N.

Isobutylamíd 4-kaTboxybutyrylalanyl-alanyl-alanínu

Byl připraven obdobně jako ethylamidderívát uvedený v příkladě 1 ve výtěžku 69 % a s t. t. 292 až 293 °C; [tó]_D ²⁰ = -82,7° (c = = 0,3; 50¹% methanol).

Pro C18H32N1O5 (400,5) vypočteno:

53,99 % C, 8,05 % H, 13,99 % N, τί a 1Р7РПП*

54,33 % C, 7,88 % tí, 14,19 % N.

Příklad 6

Propylamid benzyloxykarbonylalaninu

Byl připraven obdobným způsobem jako ethylamid benzyloxykarbonylalaninu v příkladě 1 vě výtěžku 87 % á s t. t. 118 až 119 ⁰Celsia; [iá]ó²⁰ = 8.4° (c = 0,3; dimethylformamid).

Pro C14H20N2O3 (264,3) vypočteno:

63,62 % C, 7,63 % H, 10,60 % N, nalezeno:

63,64 % C, 7,74 % H, 10,46 % N.

Propylamid benzyloxykarbonylalanyl-álanyl-alanínu

Byl připraven obdobným způsobem jako odpovídající ethylamid, uvedený v příkladě 1 ve výtěžku 56 % a s t. t. 268 až 269 °C;

[«]d²⁰ = -40,6° (c = 0,3; dimethylfbrmamid).

Pro C20H30N4O5 (406,5) vypočteno:

59,10 % C, 7,44 % H, 13,78 % N, ιη o 1Ρ7ΡΠΟ·

58,74 % C, 7,61 % H, 13,78 % N.

Propylamid alanyl-alanyl-alaninu

Byl připraven obdobně jako ethylamid alanyl-alanyl-alaninu, uvedený v příkladě 1 ve výtěžku 71 % a s t. t. 265 až 268 °C. R_f = = 0,18/Si 0,57/Sz; [·ια]₀ ²θ = — 82,1° (č = 0,3; 50% methanol).

Pro C12H24N4O3 (272,4) vypočteno:

52,92 % C, 8,88 % H, 20,57 % N,

П 31 θ z o no *

53,15 % C, 8,87 % H, 20,54 % N.

Propylamid 3-karbO'Xypropi.onyialanyl-alanyl-alanlnu .223907

Byl připraven obdobným způsobem jako odpovídající ethylamidderivát uvedený v příkladě 1 ve výtěžku 88 % a s t. t. 284 až 287 °C; [w]_D ²⁰ = —59,Г (c = 0,3; 50% methanol ).

Pro C16H28N4O6 (373,2) vypočteno:

51,50 % C, 7,56 % H, 15,01 % N, nalezeno:

51,69 % C, 7,52 % H, 14,67 % N.

Propylamid-4-karboxybutyrylalanyl-alanyl-alaninu

Byl připraven obdobným způsobem jako odpovídající ethylamidderivát uvedený v příkladě 1 ve výtěžku 89 % a s t. t. 283 až 285 ⁰Celsia; [«]_D ²⁰ = —84,7° (c = 0,3; 50% methanol).

Pro C17H30N4O5 (386,5) vypočteno:

52,84 % C, 7,82 % H, 14,50 % N, nalezeno:

23,24 % C, 7,92 % H, 14,55 % N.

Příklad 7

Propylamid benzyloxykarbonylprolinu

Byl připraven obdobným způsobem jako odpovídající ethylamidderivát benzyloxykarbonylalaninu, uvedený v příkladě 1 ve výtěžku 83 % a s t. t. 74 až 75 °C.

Pro C16H22N2O3 (290,4) vypočteno:

66,19 % C, 7,64 % H, 9,65 % N, nalezeno:

66,05 % C, 7,41 % H, 9,52 % N.

Propylamid prolinu

Byl připraven obdobným způsobem jako ethylamid prolinu uvedený v příkladě 3; R_f = 0,21/Si; 0,61/52.

Propylamid benzyloxykarbonylalanyl-prolinu

Byl připraven obdobným způsobem jako odpovídající ethylamid uvedený v příkladě 3 ve výtěžku 73 % a s t. t. 117 až 120 °C.

Pro C19H27N3O4 (361,4) vypočteno:

63,14 % C, 7,53 % H, 11,63 % N, nalezeno:

63,03 % C, 7,39 % H, 11,28 % N.

Propylamid alanyl-prolinu

Byl připraven obdobným způsobem jako odpovídající ethylamid uvedený v příkladě a 3 ve výtěžku 79 %; Rf = 0,14/Si; 0.49/S2.

Propylamid benzyloxykarbonylalanyl-alanyl-prolinu

Byl připraven obdobným způsobem jako ethylamid benzyloxykarbonylalaninu z benzyloxykarbonylalaninu a propylamidu alanyl-prolinu ve výtěžku 71 % a s t. t. 101 až 103 °C; [a]_D ²⁰ = —47,7° (c = 0,3; dimethylfonmamid).

Pro C22H32N4O5 (432,5) vypočteno:

61,09 % C, 7,46 % H, 12,95 % N, nalezeno:

61,11 % C, 7,69 % H, 12,98 % N.

Propylamid alanyl-alanyl-prolinu

Byl připraven obdobným způsobem jako odpovídající ethylamid uvedený v příkladě 4 ve výtěžku 68 % a s t. t. 103 až 105 °C. R_f = 0,12/Si; 0.56/S2; [a]_D ²⁰ = —135,3° (c = = 0,3; methanol).

Pro C14H26N4O3 (298,4) vypočteno:

56,35 % C, 8,78 % H, 18,78 % N, nalezeno*

55,87 % C, 8,93 % H, 18,78 % N.

Propylamid 4-karboxybutyrylalanyl-alanyl-prolinu

Byl připraven obdobným způsobem jako odpovídající ethylamid uvedený v příkladě 4 ve výtěžku 73 % a s t. t. 131 až 134 °C. [_w]_d20 ₌ —148,7° (c = 0,3; 50% methanol).

Pro C19H32N4O4 (412,5) vypočteno:

55,32 % C, 7,82 % H, 13,58 % N, nalezeno:

55,25 % C, 7,99 % H, 13,74 % N.

Příklad 8

Methylester benzyloxykarbonylprolyl-alanlnu

К roztoku benzyloxykarbonylprolinu (12,45 gramu] a methylesteru alaninu uvolněného z příslušného hydrochloridu (7,0 g) N-ethylpiperidinem (7 ml) v methylenchloridu (40 ml) vychlazeném na —5°C byl přidán

N,N‘-dicykl'Ohexylkarbodiimid (11,0 g) a reakční suspense byla- míchána 1 hod. při 0 °C. Po 12 hod. stání při 3 ^QC byla vyloučená N,N‘-dicykOohexylmočovina odfiltrována, filtrát byl postupně -promyt 1 M kyselinou chlorovodíkovou, vodou, 5% hydrogenuhličitanem sodným, vodou, vysušen bezvodým síranem sodným a odpařen. Pevný odparek byl krystalován z octanu ethylnatého (100 miiilitrů) a pe-troletheru (500 ml). Bylo získáno 12,2 g produktu o t. t. 45 až 49 °C.

Hydrazíd benzylooyyarbboylprooyl-alaninu

K roztoku methylesteru benzyloyykarboyylrгolyl-rlryiyu (10,0 g) v methanolu (100 mililitrů) byl přidán 80% hydrazinhydrát (7,5 ml) a reakční roztok byl zahříván pod zpětným chladičem 2 hod. Potom byl roztok odpařen a pevný odparek byl krystalován z vody (40 ml). Bylo získáno 6,8 g produktu o 11. 142 až 143 °C.

Pro CuHísNdOí (334,4) vypočteno:

57,47 % C, 6,63 %, H, 16,76 % N, nalezeno:

57,41 % C, 6,85 -% H, 16,90 % N.

Ethylamid benzyloxykarbonylpro·lyl-rlanyl-alaninu

Byl připraven obdobným způsobem jako odpovídající ethylamid benzyloxykarboyylalryyl-rlrnyl-alayiyu uvedený v příkladě 1 z hydrazidu benzyloxykarbonylprolyl-alryinu a ethylamidu alaninu ve výtěžku 49 % a s t. t. 219 až 220 °C; [г)_о20 = —36,2° (c = = 0,3; dimethylformamid).

Pro C21H30N4O5 (418,5) vypočteno:

60,27 -% C, 7,23 % H, 13,39 % N, nalezeno:

60,08 % C, 7,41 % H, 13,22 % N.

Ethylamid rrolyl-alanyl-rlaniyu

Byl připraven obdobným způsobem jako ethylamid al.ryyl-rlrnyl-alrmyu uvedený v příkladě 1 ve výtěžku 53 % a s t. t. 216 až

219 °C; R_f = 0,07/Si; 0,54/Sž.

Pro C13H24N4O5 (284,4) vypočteno:

54,91 % C, 8,51 % H, 19,17 % N, nalezeno:

54,49 % C, 8,42 % H, 19,39 % N.

Ethylamid 4-karboxybutyгylrbOlyl-rlrnyl-alaninu

Byl připraven obdobným způsobem jako ethylamid 4-karboxybutyrylrlryyl-rlryyl-г1гу1уп uvedený v příkladě 1 ve výtěžku 44 % a -s t. t. 172 až 177 ^CC.

Pro CMH30N4O4 (398,5) vypočteno:

54,26 % C, 7,59 % H, 14,06 % N, nalezeno:

54,81 % C, 7,43 % H, 14,38 % N.

Příklad 9

Ethylamid 3-krrb.oxyakгolylrlryyl-alryyl-alaninu

K roztoku ethylamidu ιΙ^ιΙ-ιΙ^ιΙ-ιΙ^ϊnu (260 mg) v dimethylformamidu (20 ml) vyhřátému na 60 °C byl přidán anhydírid kyseliny maleinové (200 mg) a reakční roztok byl zahříván 30 minut při 80 °C. Potom byla reakční směs odpařena a odparek byl krystalován z dimethylformamidu a 2-propai^lu. Bylo· získáno 185 mg produktu o- t. t. 260 až 266 °C (rozklad); (ab²⁰ = —35,6° (c = 0,3; dimethylformamid).

Pro C15H24N4O6 (356,4) vypočteno:

50,55 % C, 6,79 % H, 15,72 % N, nalezeno:

49,97 % C, 7,13 % H, 15,83 % N.

Claims

PŘEDMĚT

1. Alkylamidy kaгboxyalkryoyIrβρtidů 0beoného vzorce I,

COOH /

X \

CO—B—Ala—A—NH—R , (I), kde

R je přímý nebo -rozvětvený alkyl s 1 až 5 atomy uhlíku nebo fenylethyl,

VYNÁLEZU

A je zbytek pe]^*^i^’dicky vázaného prolinu nebo alaninu,

B je zbytek peptidicky vázaného prolinu nebo alaninu nebo- nula,

X je skupina —CH2—CH2—, —CH2— CH2—CH2—, nebo — CH = CH—.
2. Způsob výroby alkylamidů karboyyalkanoylpeptidů obecného vzorce I podle bodu 1 vyznačující se tím, že nejprve sloučenina -obecného vzorce II,

226307

A—NH—R , [Π] kde R a A značí totéž co ve vzorci I, nechá reagovat se sloučeninou obecného vzorce III,

Y—B—Ala , (ΠΙ) ve kterém B značí totéž co ve vzorci I a Y snadno odstranitelnou chránící skupinu, například benzyloxykarbonylovou skupinu, načež se vzniklý meziprodukt po odstranění chránící skupiny podrobí reakci s reaktivním- derivátem dikarboxylové kyseliny obecného vzorce IV, •COOH /

X , \

COOH (IV) ve kterém X značí totéž co ve vzorci I, zejména jejím anhydridem, polohalogenideim, poloesterem nebo· polo-amidem.