DE2843485A1 - Indikator-roehrchen zur harnstoff- bestimmung - Google Patents
Indikator-roehrchen zur harnstoff- bestimmungInfo
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Description
YBB Arzneimittelwerk Dresden
DDB 8122 Eadebeul
Wilh.-Pieck-Str. 35
Die Erfindung betrifft ein Indikator-Röhrchen zur Harnstoff bestimmung·
Die enzymatische Reaktion von Harnstoff mit Urease, die
zur Bildung von Ammoniak und Kohlendioxid führt, ist bereits für Schnellteste beschrieben «orden·
Gemessen wird die durch die Ammoniak-Bildung eintretende pH-Änderung und Verfärbung von geeigneten Indikatoren·
Der Nachweis erfolgt entweder in der Urease-Zone direkt
durch einen gleichzeitig mit eingebrachten pH-Indikator (DE-AS 1 498 6Ö1 und DE-AS 1 598 756) oder auf einem
getrennt von der Urease-Zone angebrachten Indikator nach Freiwerden des Ammoniaks als Gas (DS-AS 1 245 619) und
DE-AS 2 249 647).
Durch bestimmte Zusätze wird die Empfindlichkeit der Reaktion und die Parbstabilität verbessert bzw. durch eine
alkalische Pufferung unter Zusatz von organischen Säuren und Stabilisierungsmitteln die Reaktionsfähigkeit und
Haltbarkeit erreicht*
Die Einstellung der Indikator-Zone erfolgt mit organisches
Säuren«
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Zunehmend wird die Harnstoffbestimmung im Vollblut im
Rettungswesen, am Krankenbett oder als Serie in der Ambulanz eingesetzt« Die bisher beschriebenen una hergestellten Streifen erfordern für eine genaue Aussage 9 d. h«
quantitative Bestimmung bzw« halbquantitative Bestimmung eine genaue Pipettierung zwischen 0,01 bis 031 ml. Die
Streifen Htissen, um sie längere Zeit verwenden zu können,
im Kühlschrank gelagert werden und sind empfindlich gegen
basische Bestandteile der Luft·
Die Auswertung erfordert Hilfsmittel für die Abmessung, die entweder aufgedruckt sind oder es wird eine Schablone
verwendet· Die Indikator-Zone färbt sich mit einem Übergangsbereich, der von blau über grtin verwaschen angezeigt
wird« Die Festlegung der Grenzlinie sowie der sich ausbildende Meniskus machen den Ungeübten bei der Auswertung
unsicher·
Die Produktion von geteilten Streifen mit so vielen verschiedenen Reagenzzusätzen ist kompliziert· um eine gute Reproduzierbarkeit der Produktionschargen zu erhalten, ist ein sehr
sorgfältiges Arbeiten und Einstellen der verschiedenen Bestandteile notwendig·
Da die TJrease-Aktivität bereits durch Spuren bestimmter Metallionen gehemmt wird, müssen an die Chemikalien hohe
Reinheitsforderungen gestellt werden·
Es ist deshalb Ziel der Erfindung, ein Indikator-Röhrchen
zu entwickeln, das zur Abnahme einer bemessenen Blut- oder Serummenge am Körper und zur Gehaltsbestimmung des Harnstoffes in dem abgenommenen Blut oder Serum dienen kann
und keine· weiteren Hilfsmittels bedarf·
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Die Aufgabe der Erfindung besteht darin, ein markiertes Kapillar-Röhrchen mit einem Indikator-Signalband zu schaffen,
das die Möglichkeit der Abnahme einer bestimmten Menge einer harnst off halt igen Lb'sung mit einer raschen Anzeige
bei hoher Genauigkeit vereint.
Die genannte Aufgabe wird erfindungsgemäß dadurch gelöst,
daß zur Reaktionsdurchführung ein Kapillar-Röhrchen aus Glas oder Kunststoff dient.
Das Kapillar-Röhrchen ist am unteren Ende mit einer farbigen Markierung versehen, bis zu der Blut oder Serum für
die Prüfung aufzunehmen ist.
Die Markierung richtet sich nach der aufzunehmenden Flüssigkeitsmenge
und wird bestimmt durch den Innendurchmesser des Kapillar-Röhrchens, das verwendete Trägermaterial und
die Länge der Reaktionezone des Indikatorstreifens· Das
Kapillar-Röhrchen mit einer Länge von 40 bis 120 mm, vor·
zugsweise 60 mm, kann mit einem gleichbleibenden Innendurchmesser von 1 bis 3 mm, vorzugsweise 2,5 mm, ausgeführt
sein. Es kann aber auch oberhalb der Markierung einen erweiterten Reaktionsraum durch teilweise Vergrößerung
des Innendurchmessers auf bis zu 10 mm aufweisen·
Im Inneren des Kapillar-Röhrehens befindet sich ein Indikator-Signalband,
auf dem hinter der Reaktionszone eine oder im Wechsel mehrere Indikator-Lösungen als Signalzonen
in Streifen nebeneinander mit einer Breite von 1 bis 5 mm,
vorzugsweise 2 mm, so aufgetragen sind, daß Zwischenräume von 1 bis 10 mm zwischen den Indikator-Signalzonen verbleiben,
die unbehandelt sind.
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Das Indikator-Sigaalband für daa Eapillar-Rb'hrchen kann
aus unterschiedlichen frägeriaaterial aus natürlichen oder
synthetischen fasern hergestellt sein, vorausgesetzt,, das
Trägermaterial hat keiüs:a Eiai'lt-j} auf die Reaktion usd ist
ausreichend saugfähig«
Vorzugsweise wird filterpapier mit einein Gewicht von 60
bis 400 g/si verwendet. Die Eiateilung des Indikator-Signalbandes in Reaktionazoxie xmi Indikator-Signalzone
richtet sich nach dar Papierstärke und der aufgetragenen
Enzymaktivität.
Durch die Verwendung eines Kayillae-Röhrchens ist eine aus
rechende Dosierung, £· B. von 10 bis 30 £il Serum oder
Blut auch durch ungeübte Kräfte oder Laien möglich· Die
Bestimmung ist durch das Kapillar-Röhrchen ohne jedes weitere Hilfsmittel an Krankenbett ausführbar. Die äußeren
Einflüsse, z. B. durch alkalische Luft auf den Indikator
sind durch den Schutz in Kapillar-Röhrchen nur unter- extre
jsen Bedingungen aöglich.
Das Kapillar-Röhrchen schafft gleichbleibende Reaktionsbedingungen, die au einer gesteuerten Gas-Entwicklung und
Diffusion führen«
Da die Gas-Entwicklung nicht linear mit der Harnatoffmenge
verläuft, sind die Indikator-Signalzonen entweder so ausgeführt, daß sie daa Verlauf entsprechen oder jede Zone
wird entweder durch einen anderen geeigneten Indikator oder Zusätze einer organischen Säure so eingestellt, daß
dieser Ibistand berücksichtigt wird· Die Reaktion verläuft so, daß bereits dia unterste Grenze im physiologischen Bereich mit erfaßt wird und ao immer eine Eontrolle der
Wirksamkeit der Kapillarröhrchen und des Indikator-Signalbandes gegeben ist.
Durch die Aufteilung dar Iadikator-Zone in Signal-Zonen
aus verschiedenen Streifen wird die Auswertung.für ungeübte Kräfta verbessert,
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Eine Markierung der Indikator»»Signalzonen mit verschiedenen,
abwechselnd aufgetragenen Indikatoren gibt einen besseren Farbkontrast, erleichtert die Auswertung und
macht diese präziser.
Der Indikatorstreifen zeichnet sich weiterhin dadurch aus, daß das zur HarnstoffbeStimmung in der Reaktionszone befindliche
Urease-Präparat einen Zusatz von Sacchariden oder
Polysacchariden von 1 bis 15 %» vorzugsweise Glukose enthält.
Ürease-Präparäte, die nicht hochgereinigt sind, fuhren
beim Auftragen auf einen saugfähigen Träger zu einer Hydrophobierung, so daß die Reaktionszone das Serum oder Blut
nicht schnell genug aufsaugen kann· Der Zusatz von Sacchariden oder Polysacchariden beseitigt diesen Mißstand und wirkt eich
gleichzeitig auf die Beständigkeit der Enzymaktivität bei der Lagerung unter Hormalbedingungen stabilisierend aus«
Eine Aufbewahrung im Kühlschrank kann entfallen·
Der Indikatorstreifen zeichnet sich auch dadurch aus, daß
die Reaktionszone keine Pufferung, keinen Zusatz von Alkalikarbonat und/oder Alkalihydroxid und eine wenig gereinigte
Urease enthält·
Damit kann eine Verkürzung der Reaktionszeit ohne Einschränkung der Genauigkeit erreicht werden·
Der Indikatorstreifen zeichnet sich dadurch aus, daß die Indikatorzone als zusätzlichen Indikator einen im alkalischen
Bereich umschlagenden Farbstoff, vorzugsweise den Farbstoff Brilliant-gelb, enthält.
Die Auswertung wird durch einen zusätzlichen Indikator, der einen anderen Farbumschlag besitzt, erleichtert und verbessert.
Der Farbstoff Brilliant-gelb wird durch das gebildete HH^-Gas rot gefärbt.
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— fO —
•2-
Ausführungebeispiel
Die Erfindung eoll in mehreren Ausführungsbeispielen näher
erläutert werden·
In der dazugehörigen Zeichnung zeigen:
Pig. 1: ein Indikator-Röhrchen mit gleichbleibendem Innendurchmeseer dea Kapillar-Röhrohena,
Fig. 2, 3: ein Indikator-Röhrchen mit teilweise vergrößertem
Innendurchmesser des Kapillar~Röhrchens·
PUr das in Figur 1 dargestellte Kapillar-Röhrehen wird eine Kapillare aua Kunststoff mit einem Innendurchmesser von
2,5 mm und einer Länge von 60 mm gewählt, die eine Markierung 2 bei 4 mm besitzt. Für das Indikator-Signalband 3
wird ein Filterkarton mit einem Flächengewicht von 200 g/m gewählt.
Die Reaktionszone 4 wird wie folgt imprägniert:
Die Reaktionszone 4 wird wie folgt imprägniert:
Urease entsprechend 4·500 IE
Glukose z.A. 1g
Aqua dest. 10 ml.
Eine 20 mm breite Kante des Eilterkartons wird mit dieser Lösung getränkt· Gleichzeitig wird anschließend an dieses
Reaktionssystem 4 ein 4 mm breiter Streifen einer 20#igen Lösung von Stearinsäure in Tetrachlorkohlenstoff gezogen.
Diese Hydrophobierungszone verhindert das Eindringen der Untersuchungsflüsaigkeit in die Indikator-Signalzonen 5.
Sie kann unterschiedlich mit den bekannten Hydrophobierungemitteln für Textilien oder Papier auegeführt sein und
in ihrer Breite zwischen 2 und 5 mm schwanken. Gleichzeitig mit der Urease-Lösung und der Hydrophobierungslösung
werden die Indikator-Signalzonen 5 oberhalb der Hydrophobierungezone gemäß den Beispielen 2 bis 4 aufgetragen.
Ihre Anordnung richtet sich danach, ob eine halbquantitative odsr quantitative Bestimmung durchgeführt werden soll.
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Der so vorbereitete Filterkarton wird in achmale Indikator-Signalbänder
3 geschnitten· Jeweils ein Indikator-Signalband 3 wird in ein Kapillar-Röhrchen 1 eingeschoben.
Soll eine Prüfung auf Harnstoff erfolgen, so wird das Indikator-Signalband 3 etwa 10 mm über die Markierung 2
hochgezogen· Das markierte Ende des Kapillar-Röhrchens 1
wird in die zu untersuchende Flüssigkeit getaucht· Ist die Füllung versehentlich über die Markierung 2 erfolgt, so
wird mit einem Filterpapierstreifen vorsichtig die überschüssige Flüssigkeitsmenge abgesaugt und so leicht und
genau eingestellt.
Durch Zurückschieben des Indikator-Signalbandes 3 an die Markierung 2 wird die Bestimmung eingeleitet.
Die Reaktion wird bei 25 0C durchgeführt und nach 15 Minuten
ausgewertet.
Brilliant-gelb 10 mg
Äthanol 10 ml
Äthanol 10 ml
Die Indikator-Lösung wird in 2 bis 3 mm breiten Streifen oberhalb der Hydrophobierungszone so aufgetragen, daß immer
ein 1 bis 2 mm breiter Zwischenraum verbleibt· Mit diesem Indikator-Signalband 3, das 5 Indikator-Signalzonen 5 enthält,
wird die Bestimmung in der unter Beispiel 1 beschriebenen Kapillare 1 mit Blut öder Serum bei 25 0C durchgeführt
und nach 15 Minuten die Auswertung vorgenommen. Eine erste Einschätzung höherer Konzentrationen kann nach
5 Minuten erfolgen. Jede Indikator-Signalzone 5 entspricht je nach eingestellter Breite und dem eingestellten Zwischen
raum einer bestimmten Menge Harnstoff· Die Werte dazu werden von einer mitgegebenen Tabelle abgelesen oder können
auf dem Streifen bzw· der Kapillare aufgedruckt sein.
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-tf. 2843A85
•40·
Ale Kapillar-Röhrchen 1 wird eine Kapillare gemäß Beispiel 1
verwendet.
Lösung a) Bromkresolgrün 40 mg
Weinsäure 100 mg
Äthanol 10 ml
Lösung b) Brilliantgelb 40 mg
Äthanol 10 ml
Die so hergestellten Indikator-Lösungen werden oberhalb der Hydrophobierungszone in folgender Anordnung aufgetragen:
1* Indikator-Signalzone Lösung a) 2 bis 3 mm breit
Zwischenraum 1 mm
2. Indikator-Signalzone Lösung b) 2 bis 3 mm breit
2. Indikator-Signalzone Lösung b) 2 bis 3 mm breit
Zwischenraum 1 mm
3· Indikator-Signalzone Lösung a) 2 bis 3 mm breit
3· Indikator-Signalzone Lösung a) 2 bis 3 mm breit
Zwischenraum 2 mm
4· Indikator-Signalzone Lösung a) 2 bis 3 mm breit
4· Indikator-Signalzone Lösung a) 2 bis 3 mm breit
Zwischenraum 3 mm
5· Indikator-Signalzone Lösung a) 2 bis 3 mm breit
5· Indikator-Signalzone Lösung a) 2 bis 3 mm breit
Die Zwischenräume 6 können ebenso wie die Breite der
Indikator-Signalzone 5 auch anders gewählt werden. Je nach ihrer Einstellung sind die Werte auf der Kapillare
oder auf dem Indikator-Signalband 3 bzw. der Ablese-Tabelle
entsprechend anzugeben·
Die Verwendung eines nach rot umschlagenden Indikators fUr die 2. Indikator-Signalzone soll den Beginn erhöhter
Harnstoff-Stickstoff-Werte signalisieren.
Die Reaktion wird bei 25 0C durchgeführt und nach 15 Minuten
ausgewertet.
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Beispiel 4 | 30 | rag |
BromkresGl^ ils | 60 | mg |
Weinsäure | 10 | ml |
Äthanol | ||
Die in beksimtcir Weise hergestellte Inöikat-rr-Lös^ag wird
in Signalson0n 5 von 1 bis 3 mm Breite Is iratersehisaliehen
Abatänden oberhalb der Hydrophobienmgszone aufgetragen·
Der Zwischenraum 6 tmd dis Zahl der Indikator-Signalzonen 5
bestimmen die Csaauigkeit «nd die beatijmnbare Menge.
Wird zwischen der 1e isnd 2S Signalzone ein Abstand von 1 mm,
zwischen der 2«, und 3e ein Abstand von 2 mm und zwischen der
3* und 4c ein Abstand von 4 mm eingestellt, so zeigt beispielsweise
die 1«, Signalzone bis 20 mg Harnstoff /Stickstoff an« Die 2O "Signaltöne zeigt 30 mg Harnstoff/Stickstoff, die
3. Signalscae 45 mg Harnstoff/Stickstoff und die 4· Signalzone 60 32g Harnstoff/Stickstoff an.
Verwendet -siird gemäß Figur 2 eine Kapillare mit erweitertem
ReaktioEsraum I9- dia im Bereich der Markierung 10 mm lang
ist und einen Innendurchmesser von 2r5 mm besitzt. Daran
schließt sich ein 30 mm lasgssj erweitertes Stück von 7 mm
Innendurehmesgsr an und ea folgt ein 20 mm langes Stttck
Kapillare von 295 mm Innendurchmesser.
Die Reaktioneseit verkürzt sich auf 7 Minuten.
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Claims (1)
- Anspruch^ι . Isdikator-Röhrchan zur Harnstoffbestimmunga dadurch gekennzeichnet,, daü ein in einem am unteren Ende farbig laarkierten Kapillar-Röhrchen (1) befindliches Indikator-Signalband (3) ein ungepuffartes, alkalikarbonat- und/oder alkalihydroxidfreies Reaktionssyatem (4) aus wenig gereinigter Urease und 1 bis 15 % eines Saccharides oder Polysaccharides und eine oder in Wechsel mehrere streifenförmige Indikator-Signalsonen (5) und unbehandelte Zwischenräume (6) enthält s wovon ein Indikator ein im alkalischen Bereich"umschlagender Farbstoff ist·2· Indikator-Röhrchen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Kapillarröhrchen (1) aus Glas oder Kunststoff entweder einen Innendurchmesser von 1 bis 3 mm, vorzugsweise 2,5 mm und eine Länge von 40 bis 120 mm, vorzugsweise 60 mm besitzt oder teilweise in seinem Innendurchmesser bis auf 10 mm erweitert ausgeführt ist.3» Indikator-Röhrchen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Indikator-Signalband (3) aus natürlichen oder synthetischen Fasern besteht»4. Indikator-Röhrchen nach Anspruch 1 und 3, dadurch gekennzeichnet, daß das Indikator-Signalband (3) aus Filterpapier mit einem Gewicht von 60 bis 400 g/m besteht·5, Indikator-Röhrchen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeich net, daß das Reaktionssystem (4) als Saccharid Glukose enthält·909819/0598ORIGINAL INSPECTiEO- -a. 2iU3'856. Indikator-Röhrchen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß der im alkalischen Bereich umschlagende Indikator Brilliant-gelb ist.7· Indikator-Röhrchen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die streifenförmigen Indikator-Signalzonen (5) eine Breite von jeweils 1 bis 5 mmf vorzugsweise 2 mm und die unbehandelten Zwischenräume (6) eine Breite von 1 bis 10 mm aufweisen«909819/0598
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