DE2800781A1

DE2800781A1 - Selen- oder tellur-derivate von gallensaeuren und -salzen

Info

Publication number: DE2800781A1
Application number: DE19782800781
Authority: DE
Inventors: Reginald Monks; Anthony Leornard Mark Riley
Original assignee: Radiochemical Centre Ltd
Current assignee: GE Healthcare Ltd
Priority date: 1977-01-07
Filing date: 1978-01-09
Publication date: 1978-07-13
Also published as: JPS5388331A; US4172085A; JPS5387346A; FR2376868B1; FR2376868A1; JPS587612B2; GB1592791A; DE2800781C2; US4202876A; DE2800780A1

Description

Die Erfindung bezieht sich auf Selen- und Tellur-Derivate, insbesondere γ-emittierende radioaktive Derivate von Gallensäuren und -salzen. Solche Verbindungen sind wertvoll für die Untersuchung von Körperfunktionen, insbesondere des Dünndarms.

Die entsprechenden Salze werden in der Leber aus Cholesterin aufgebaut, gelangen über Leber- und gewöhnliche Gallenwege in den Verdauungstrakt, werden im Ileum absorbiert und gelangen über das Pfortadersystem in die Leber zurück· Bei dem enterohepatischen Kreislauf in einem normalen Menschen werden mehr als 95 % der in den Dünndarm gelangenden Gallensalze wieder absorbiert, der Rest gelangt in den Dickdarm und erscheint eventuell in den Faeces. Eine gestörte Funktion des Ileum, die durch eine Reihe pathologischer Zustände ausgelöst werden kann, kann zu mangelhafter Absorption von Gallensalzen führen. Sine Kessung der

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-H

Gallensalz-Absorption durch das Gedärm würde daher eine nützliche Information liefern, die es ermöglichen würde, den distalen Dünndarm als Quelle für gastrointestinale Störungen zu erkennen oder auszuscheiden.

Gallensäuren können durch die folgende Formel dargestellt werden:

(1)

COOH

worin R*, R«, R, und R. unabhängig voneinander ein Wasserstoffatom oder eine α- oder ß-Hydroxyl-Gruppe "bedeuten und H₁- entweder in α- oder ß-Stellung steht.

Gallensalze sind Verbindungen der obigen Gallensäuren mit Aminosäuren, insbesondere Glycin und Taurin· Carboxyl- ^C-cholsäure (Formel 1, R₂ = H, R₁ = R, = R. = α-OH; ß-Hc) und ihre Taurinverbindung wurden zur Untersuchung der~Ai5sorptiüH ^von Gallensalzen im Gedärm sowohl von Tieren als auch von Menschen unter einer Reihe pathologischer Zustände verwendet, z.B. Ileitis regionalis, Ileum-ReSektion und induzierter Diarrhöe· Die Untersuchungen machten die Messung von ^"C-Radioaktivität in Faeces, Urin und Galle erforderlich. Im Atmungstest nach Fromm und Hof mann wird Glycin-1-(™C)glykocholat zum Nachweis verstärkter bakterieller Zersetzung oder Spaltung von Gallensalzen verwendet. Nach dieser Spaltung im Dünndarm als Ergebnis eines übermäßigen bak-

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teriellen V/aehstums oder im Dickdarm nach Malabsorption von Gallensalz unterliegt das freigesetzte Glycin dem Stoff-

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wechsel, wird absorbiert und teilweise als CO₂ ausgeatmet. Im Falle von Gallensalz-Malabsorption tritt ein Teil der ^C-Radioaktivität in den Faeces auf. Eine Faeces- C-Kessung ist wesentlich für die vollständige Auswertung des Diagnosebereichs des Atmungstests. Bei der Diagnose von Gallensäure-Malabsorption ist der Schilling-Test unter Verwendung von markiertem Cyanocobalamin mit Eigenfaktor oft hilfreich, er kann jedoch selbst nicht zwischen übermäßigem Bakterienwachstum und Ileum-Dysfunktion unterscheiden.

Die Messung der Gallensäure-Adsorption als Routinetest für die Dünndarmfunktion würde stark erleichtert, wenn die Gallensäuren mit einem y-emittierenden Isotop markiert werden könnten. Zählen von y-Strahlern ist im allgemeinen leichter und wirtschaftlicher als Zählen von ß-Strahlern: Dies gilt insbesondere für biologische Proben, wie Galle oder Faeces, wobei es für β-Strahler erforderlich wäre, die Probe zu bearbeiten, bevor mit dem Zählen begonnen werden könnte. Das Markieren mit einem y-Strahler würde den zusätzlichen Vorteil haben, eine Körperzählung zu ermöglichen und so die Notwendigkeit der Handhabung von Faeces-Proben umgehen; auch eine Sichtbarmachung des enterohepatischen Systems ware möglich. Die y-emittierenden Isotope, die möglicherweise zum Markieren von Gallensäuren ohne Änderung ihres biologischen Verhaltens verwendet werden könnten, und bei denen die Markierung durch den ganzen enterohepatischen Zyklus erhalten bliebe, sind zahlenmäßig begrenzt.

Die Erfindung betrifft die Verwendung von Radioisotopen des Selens und Tellurs, wie Selen-75 und Tellur-123m, zur Erfüllung der erforderlichen Funktion. Der Einbau entweder von Selen oder Tellur in die Struktur des Gallensäuremoleküls ist bisher noch nicht beschrieben worden; dies gilt

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-,r-fc

sowohl für die radioaktive als auch, die nicht-radioaktive Form dieser Elemente.

Die Erfindung führt zu markierten Gallensäuren und ihren Salzen, wie in der nachfolgenden Formel (2) angegeben, die durch Se oder Te in der C-17-Seitenkette des Moleküls substituiert sind.

„5

(2)

/ ψ

worin R -(CH)_A(CH₂)_B-Z-(CH₂)_cCH-C0R⁶,

O oder 1,
0 bis 4,

C O bis 4| vorzugsweise 0 oder 1, Z Se oder Te,

R -OH oder ein Aminosäurerest,

R' V/asserstoff oder eine gesättigte (L- bis C.-Alkylgruppe, vorzugsweise Methyl, wenn A 1 ist,

R V/asserstoff oder eine gesättigte C,- bis C--Alkylgruppe, vorzugsweise Wasserstoff,

η 0 oder 1,

2 3 4 5
R , R , R und R unabhängig voneinander V/asserstoff oder

eine α- oder ß-Hydroxylgruppe oder eine Oxogruppe und W ein α- oder ß-H
ist.

Zur Erfindung gehören die inaktiven Verbindungen und ins-

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besondere auch die mit radioaktiven Isotopen des Selens und Tellurs, z.B. Selen-75 und Tellur-123m_f markierten Verbindungen. Die inaktiven Verbindungen sind nützliche Hilfsmittel zur Bestimmung der Eigenschaften der radioaktiven Verbindungen. Die markierten Gallensäuren gemäß der Erfindung und ihre Aminosäure-Verbindungen können auf folgenden Wegen hergestellt werden:

Die Verbindungen können durch Umsetzen eines geeigneten Selen- oder Tellurnucleophils mit einer modifizierten Gallensäure mit einem endständigen Halogenatom, z.B. Brom oder Jod, in der C.„-Seitenkette hergestellt werden. Diese Umsetzungen erfolgen in Lösungsmitteln wie Äthanol, Propanol, Tetrahydrofuran oder Dimethylformamid.oder Gemischen dieser Lösungsmittel, im allgemeinen bei Raumtemperatur. Die Selenoder Tellumucleophile entstehen durch Umsetzung von Dinatriumdiselenid oder -ditellurid in flüssigem Ammoniak mit einer ω-halogenierten Carbonsäure oder deren Ester, wobei sich das anfallende organische Diselenid oder Ditellurid in einem der obigen Lösungsmittel löst und durch Reagentien wie Natriumborhydrid oder Dithiothreitol gespalten wird; weitere Umsetzung mit der modifizierten Gällensäure erfolgt in situ.

Alternativ kann die halogenierte Gallensäure mit Dinatriumdiselenid in einem Lösungsmittel, wie Propanol, bei erhöhten Temperaturen umgesetzt werden, um "ein Disteroid-diselenid zu liefern. Das Disteroid-diselenid wird in Äthanol gelöst, mit Natriumborhydrid gespalten, und das Selenol wird in situ mit einem ω-halogenierten Carbonsäureester umgesetzt«

Die Verwendung von Kaliumselenocyanat bietet einen brauchbaren Weg zu den Verbindungen dieser Gruppe. Kaliumselenocyanat, hergestellt durch Lösen von rotem Selen in äthanolischem Kaliumcyanid, wird in Äthanol bei niederen Temperaturen mit einem ω-Halogencarbonsäureester umgesetzt. Der

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entstandene w-Selenocyanat-carbonsäureester wird mit Natriumborhydrid reduziert und in situ mit der halogenieren Gallensäure-Zwischenstufe umgesetzt. Diese Reaktionen erfolgen gewöhnlich bei Raumtemperatur in Ithanol oder Äthanol/Tetrahydrofuran-Gemischen.

a-Halogenierte Garbonsäureester können anstelle von ω-halogenierten Verbindungen in der obigen Reaktion verwendet werden, um Produkte mit einer Seitenkette in α-Stellung zur Carboxylgruppe zu liefern·

Wurden Hydroxylgruppen durch Acylierung und Carbonsäuregruppen durch Veresterung geschlitzt, werden die Schutzgruppen vor der abschließenden Reinigung des Produkts nach Standafdmethoden durch präparative Chromatographie an Kieselgel entfernt.

Die Gallensäuren-Analoga mit entweder einem Selen- oder einem Tellur-Atom in der C₁ „-Seitenkette können über eine Amidbindung an Aminosäuren, wie Glycin und Taurin,gebunden werden. Die zur Herstellung der Gallensäure-Verbindungen angewandten Methoden sind auf dem Fachgebiet gut bekannt und hängen von der Kondensation der Gallensäure mit der Aminosäure in einem geeigneten Lösungsmittel, wie Dimethylformamid, und in Gegenwart eines Kondensationsmittels, wie Carbodiimid oder N-Äthoxy-carbonyl-Z-äthoxy-dihydrochinolin (lädch) ab.

Die nachfolgend gezeigten Reaktionsschemata veranschaulichen die vorstehend breit beschriebene Herstellung. Weitere Einzelheiten finden sich in den Beispielen. Natürlich können diese Herstellungen entweder mit natürlichem Selen oder !Tellur oder mit an ihren jeweiligen Radioisotopen angereicherten Elementen, z.B. ^Se oder ^^mTe, durchgeführt werden.

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-r-3

i) Na₀Se₀ + ICH₀COOH fluss. NH, [¹SeCH₀COOH ^{2 2 2} 1> [(Te)²

[(Te)

¹SeCH₀COOH (Te) ²

2 R

(CH₀L SeCH₀COOH R ^{2 n} (Te)²

Dithiothreitol

ii) Na₀Se₀ +

(CH₀).

X n-Propanol

Se

(CH₂)_nSe»

+ BrCH₂CO₂Et + NaBH

SeCH₂CO₂Et

iii) Se + KCN

KSeCN

KSeCN ₊ BrCH₂CO₂Et

NCSeCH₂CO₂Et

it

NaBH.

SeCH₂CO₂Et

R = Gallensäure-Kern, X = Halogen

Der Einbau entweder eines Selen- oder Tellur-Atoms in die C..,-Seitenkette einer Gallensäure gemäß Formel (2) hängt von der Verfügbarkeit modifizierter Gallensäure-Zwischenstufen mit einem endständigen Halogenatom, z.B. Brom oder Jod, in der C.„-Seitenkette ab. Die Bereitstellung solcher Zwischenstufen erforderte die Verkürzung oder Verlängerung der C₁„-Seitenkette nach auf dem Fachgebiet bekannten Methoden, z.B. dem Barbier-Wieland-Abbau bzw. der Arndt-Eistert-Reaktion. Ersatz der endständigen Carboxylgruppe durch ein Halogenatom kann nach dem Hunsdiecker-Abbau erfolgen. Eine besonders wirksame Maßnahme zur Erzielung dieses Ersatzes besteht darin, die Gallensäure in Tetrachlorkohlenstoff unter Rückfluß

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mit Bleitetraacetat/Jod-Reagens unter Bestrahlung des Reaktionsgemische mit Licht zu behandeln. Die Hydroxylgruppen der Gallensäure müssen mit geeigneten Gruppen, wie Formyl-, Acetyl-, Nitro-Gruppen usw., geschützt werden. Diese Reaktion führt zum Ersatz der Carboxylgruppe durch ein Jodatom. Der Abbau der Cjy-Seitenkette von Cholsäure, um ein 20-Jod-5ß-pregnan-Derivat zu liefern, kann durch drei aufeinanderfolgende Reaktionen erfolgen:

1. Rückflußkochen der geschützten Gallensäure in trockenem Benzo'l und unter Stickstoff mit Bleitetraacetat in Gegenwart von Kupfer(II)acetat und Pyridin liefert das ent-

22
sprechende Δ -24-Nor-5ß-cholen (A);

2. Behandeln von A mit Natriumperjodat/Kaliumpermanganat

in wässrigem 2-Methylpropan-2-ol in Gegenwart von Kalium-

22 carbonat führt zur Oxydation der Δ -Bindung und liefert die 3a,7a,12a-Triformoxy-23,24-bisnor-5ß-cholansäure (B);

3. 3 wird in Tetrachlorkohlenstoff mit Bleitetraacetat/Jod-Reagens unter Lichtbestrahlung rückflußgekocht, um das 3a,7ai12o-Triformoxy-20-jod-5ß-pregnan-Derivat (C) zu ergeben. C ist vermutlich ein Gemisch von R- und S-Isomeren, die Anteile wurden jedoch nicht bestimmt.

Die obige Reaktion kann ebenfalls unter Verwendung von Steroiden in der 5 a- oder 5ß-Konfiguration durchgeführt werden. Zu verfügbaren Steroiden in der 5α-Konfiguration gehören 5a-Cholansäure-3ß-ol und 22,23-Bisnor-5a-cholansäure-3ß-ol,

Die Erfindung wird durch die folgenden Beispiele weiter veranschaulicht.

Beispiel 1

Herstellung eines Gemischs von 19-methyl-'^Se-seleno-markierten Gallensalzen

Ein männliches Kaninchen (NZW χ LOP; 4_t8 kg) wurde mit Natriumpentobarbiton ("Sagatal"), intravenös injiziert, anäs-

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-& -ΑΛ

thesiert. Nach Traeheotomie wurde in eine Halsvene eine Kanüle mit einem 3-Wegehahn eingesetzt· Das Tier wurde durch intermittierende Druekbeaufschlagung beatmet und die Anästhesie durch intravenöse Verabreichung von Pentobarbiton nach Bedarf aufrechterhalten. Dann wurde in die Bauchdecke ein Einschnitt auf der Mittellinie vorgenommen und die lieber zurückgebogen, um die Gallenblase, den Gallenblasengang und den Gallengang freizulegen. Nach Abbinden des Gallenblasengangs wurde der Gallengang zum Sammeln von Galle kanüliert.

Nach einer Stabilisierungsperiode wurde 1 ml einer Lösung von 19-Methyl-('^Se)selenocholesterin (0,01 mg; 12mCi) in Polysorbat/Normalsalzlösung über die Halskanüle injiziert. Galle wurde in Porm einer Serie von 15 min-Proben in vorgewogenen Röhrchen gesammelt, Nach dem Sammeln wurde jede Probe gewogen und auf '^Se-Radioaktivität ausgezählt. Der Gallenfluß, anfangs bei 3,4 ml/15 min, fiel nach 6,5 Stunden auf 1,5 ml/15 min ab. In dieser Zeit wurden 56,65 g

ην.

Galle aufgefangen, die etwa 100 μθί '^Se-Radioaktivität enthielten (etwa 1 % der injizierten Dosis).

Die markierte Galle wurde in 1 000 ml absolutes Äthanol gegeben, kräftig gerührt und momentan zum Sieden gebracht. Nach dem Abkühlen wurde die äthanolische Lösung filtriert und auf 10 ml Volumen eingeengt. In dieser Stufe wurde eine kleine Fällung wieder abfiltriert, und das Eiltrat wurde im Vakuum zur Trockne eingeengt. Das verbliebene grüne Harz wurde mit 40-60° Petroläther (4 x 5 ml) zum Entfernen von Lipidmaterial extrahiert und dann in Methanol (2 χ 5 ml) gelöst und die Lösung filtriert. Ausbeute an ^Se-Gallensalzen 60 μΟΙ. TLC: Kieselgel 60 !"254» Chloroform, Methanol 5:1, Hauptkomponente (>90 %) R_f 0,00 (inaktive Markierungen von Glykocholsäure, R_f 0,00; Glykocheno-desoxyeholsäure, R_f 0,06; Cholsäure, R_f 0,14; Desoxycholsäure, R^ 0,70).

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Die methanolische Lösung^ die sowohl natürliche Gallensalze

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als auch Se-markierte Gallensalze enthielt, wurde auf ein kleineres Volumen gebracht und auf sechs PLC-Platten aufgebracht (Kieselgel 60 $054. t 2mm). Die Platten wurden mit Chloroform, Methanol (5si) eluiert, autoradiographiert, und die Komponente bei R^ 0,00 von den Platten entfernt und in Methanol extrahiert. Ausbeute: 26 uCi. Bei der Behandlung einer Probe dieses gereinigten 19-methyl-(' Se)seleno-markierten Gallensalzes mit dem Enzym Cholylglycinhydrolase änderte'sich die chromatographische Mobilität auf Merck Kieselgel 60 J¹O₅/ (Chloroform/Methanol 5:1) von R_f 0,00 zu R_f 0,50 und 0,47.

Beispiel 2

Herstellung von 3a,12a-Dihydroxy-22-(carboxymethyl-/'^Se7 seleno)-23,24-bisnor-5ß-cholan

(23-Selena-25-homodesoxycholsäure)

i) 3α« 12a-Diacetoxy-22-.jod-23.24-bisnor-5ß-cholan

3a,12a-Diacetoxy-24-nor-5ß-cholansäure (0,3 g) in trockenem Tetrachlorkohlenstoff (30 ml) wurde mit trockenem, gepulvertem Bleitetraacetat (0,3 g) behandelt und in einer Atmosphäre trockenen Stickstoffs zum Rückfluß erhitzt. Die Lösung wurde mit einer Atlas 275 Watt-IR-Lampe bestrahlt, und eine Lösung von Jod (0,16 g) in trockenem Tetrachlorkohlenstoff (12 ml) wurde über 10 min portionsv/eise zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde bestrahlt und eine weitere Stunde gerührt und abkühlen gelassen. Die Lösung wurde filtriert, das Piltrat nacheinander mit 5 >5iger Hatriumthiosulfatlösung und Wasser gewaschen und dann über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Verdampfen des Lösungsmittels und Kristallisieren des Rückstands aus Äthanol ergab 3a,12a-Diacetoxy-22-jod-23,24-bisnor-5ß-cholan (0,3 g, 85 %) Schmp. 172-174°.

TLC (Merck Kieselgel 60 ^5I*
Einzige Komponente R^ 0,50

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IR-Spektrum

ν max: 2960, 2930, 2870, 1735, 1453, 1374, 1239, 1194, 1018 cm"¹.

HMR (220MHz. CDCl^)

τ 4,95 (1H,S,C₁₂-PrOton); τ 5,32 (1H,M,C~-Proton); τ 6,76 (2H,M,C₂₂-H), τ 7,86 (3H, S, ^-Acetat-Protonen), τ 7,98 (3H,S,3-Acetat-Protonen), τ 8,00 - 9,05 (22H, Steroidkern),

τ 9,10 -{6H,S (mit geringer Aufspaltung), Cjo-H+C^-H),

τ 9,23 (3H₁S₁C₁₈-H).

ii) 23-Selena-25-homodesoxycholsäure- Se

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Rotes Se wurde durch Einperlen von Schwefeldioxid in eine lösung von Natriumselenit (15,9 mg) in V/asser (2 ml) und konzentrierter Salzsäure (4 ml) mit ' Se-Natriumselenit (11,7 mCi, 1,2 mg Selen) ausgefällt. Die Fällung wurde abzentrifugiert, gründlich mit entionisiertem Wasser gewaschen und über Phosphorpentoxid im Vakuum getrocknet.

Rotes ⁷⁵Se (8,4 mg, 0,11 mA, 109 mCi/mA) wurde in Äthanol (2 ml) suspendiert, und Kaliumcyanid (7 mg, 0,11 mMol) wurde zugesetzt; das Gemisch wurde bei Raumtemperatur 2 h bis zur völligen Lösung gerührt. Wiederholt destilliertes Äthylbromacetat (12 μΐ) wurden der Lösung bei O⁰C zugesetzt, und es wurde 1,5 h gerührt. 3a, 12a-Diacetoxy-22-jod-23,24-bisnor-5ß-cholan (60 mg) in trockenem Tetrahydrofuran (1 ml) wurde zu Natriumborhydrid (9 mg) in Äthanol (1 ml) gegeben.

Das Reaktionsgemisch wurde in Eis gekühlt, und die äthano-

75 lische Lösung von Athylselenoeyanatoacetat- ^Se wurde über 10 min zugegeben. Es wurde weitere 2 h gerührt, während die Temperatur auf Raumtemperatur stieg. Aceton (1 ml) wurde zugesetzt, und die Lösung wurde unter vermindertem Druck eingeengt. Dem Rückstand wurde Chloroform (2 ml) zugesetzt, unlösliches Material wurde abfiltriert und die Lösung auf

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eine kleine Menge aufkonzentriert. Das gewünschte Produkt wurde durch präparative Schichtchromatographie (Anachem Silicagel GI¹, 1 mm; Chloroform/Methanol 20:1) isoliert. Die Hauptkomponente, R_£ 0,85, festgestellt durch Autoradiographie, wurde von der Platte entfernt und in Äthylacetat (3x4 ml) extrahiert. Ausbeute an Äthyl-3a,12a-diacetoxy-23-

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selena-25-homo-5ß-cholanat- Se: 6,1 mCi.

IR-Spektrum

V max: 2935, 2860, 1735, 1450, 1378, 1245, 1050, 750 cm"¹.

Die Lösung wurde abgedampft, und Natriumhydroxid (100 mg) in Äthanol (5 ml) und V/asser (1 ml) wurde zugesetzt. Die Lösung wurde 2 h gerührt und auf Rückfluß erhitzt; dann wurde abgekühlt und eingeengt. Wasser (3 ml) wurde zugesetzt, die Lösung wurde von etwas unlöslichem Material abfiltriert und durch Zugabe von Bio-Rad AG- SOW-X^-Kationenaustauscherharz in der H⁺-5Orm angesäuert. Das Harz wurde abfiltriert, mit Methanol (3 ml) gewaschen, und das vereinigte I'll trat wurde eingedampft. Der Rückstand wurde in der Mindestmenge an Methanol gelöst, und das Produkt wurde durch präparative Schichtchromatographie (Anachem Silicagel G-P, 1 mm; Chloroform/Methanol 6:1) isoliert. Der gewünschte Bereich, R_f 0,42, wurde autoradiographisch lokalisiert; er wurde von der Platte entfernt und durch Extraktion in Methanol isoliert. Verdampfen des Lösungsmittels lieferte 23-Selena-25-homodesoxycholsäure- Se (2,4 mCi).

TLC (Mer-ck Kieselgel 60 Pnr/I.)

a) Chloroform/Methanol 5:1; Hauptkomponente (95 %) ~R_£ 0,36

b) Isooctan/Diisopropyläther/Essigsäure 2:1:1; Hauptkomponente R- 0,43

IR-Spektrum

Vmax: 3380, 2930, 2860, 1700, 1448, 1380, 1255, 1105, 1055 cm.

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75 iii) gauro~23-selena-25-homodesoxycliolsätire- Se

23-Selena-25-homodesoxyeholsäure-' Se (0,27 mGi, 2,0 mg) wurde mit einer Lösung von N-Äthoxycarbonyl-2~äthoxy-dihydrochinolin (3 mg) in trockenem Dimethylformamid (620 μΐ) "behandelt tind 30 min gerührt. Die Lösung wurde zu einem Gemisch von Taurin (1,55 mg) in Dimethylformamid (350 ul) mit einem Gehalt an Triäthylamin (3,3 ul) gegeben, und das Reaktionsgemisch wurde 30 min hei ca. 90⁰C gehalten, Nach dem Stehen über Nacht "bei Raumtemperatur wurde Wasser (1 ml) zugesetzt, die lösung wurde durch Zugabe von konzentrierter Salzsäure angesäuert und eingedampft, Äthanol (0,5 ml) wurde dem Rückstand zugesetzt, und das Produkt wurde durch präparative SchichtChromatographie (Anachem Silicagel GP, 1 mm; Chloroform/Methanol 5:2) isoliert. Der Produktbereich, R- 0,32, wurde von der Platte entfernt, und das Produkt wurde durch Extraktion mit Methanol isoliert. Verdampfen des Lösungsmittels ergab Tauro-23-selena-25-homodesoxycholsäure-Se (0,14 mCi),

TLC (Merck Kieselgel 60 F054· ^{Chlo:co:fo:nn}/^Me'^aiat101 5:1) Hauptkomponente (94 %) R_f 0,34 (vgl, 23-Selena-25-homodesoxycholsäure R_f 0,65 im gleichen System).

IR-Spektrum

Tmax: 3400, 2940, 2870, 1698, 1650, 1545, 1390, 1208, 1180, 1070 cm"¹.

iv) Äthyl-3a, 12a-Diacetoxy-23-selena-25-homo-5ß-cholanat und 23-Selena-25-homodesoxycholsäure

ITicht-radioaktives Äthyl-3α, 12a-diacetoxy-23-selena-25-homo-5ß-cholanat und 23-Selena-25-homodesoxycholsäure wurden nach der unter 2(ii) beschriebenen Methode hergestellt. Kengen der eingesetzten Reagentien: Äthylseleno cyanatoace tat 35 mg in 0,7 ml Äthanol; Katriumborhydrid 12,6 mg; 3q,12q-Diacetoxy-23-jod-23,24-bisnor-5ß-cholan 100 mg; Äthanol 5 ml;

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Tetrahydrofuran 1 ml. Ausbeute an Ätliyl-3a, 12a-diacetoxy-23-selena-25-homo-5ß-cholanat 64 mg.

IR-Spektrum

ν max: 2940, 2865, 1738, 1450, 1380, 1245, 1105, 1060 cm"¹. MMR (220 MHz, CDCIU)

τ 4,93 (1H,S,C₁₂-PrOton), τ 5,32 (ΙΗ,Μ,σ^-Proton), τ 5,84 (2H,q,Äthyl-CH₂),^-T 6,90 (2Η,S,C₂₄-PrOtonen), τ 7,06 <1H,M,C₂₂-Proton), τ 7,45 (iH,q,C₂₂-Proton), τ 7,90 (3H,S,12-Acetat-Protonen), τ 7,96 (3H,S,3-Acetat-Protonen), τ 8,72 (3H,t,Äthyl-CH₅), τ 9,08 (3H,d,C₂₁-Protonen^ τ 9,12 (3H,S,C^-Protonen), τ 9,25 (3H,S,C₁₈-Protonen), τ 8,0-9,25 (22H, Steroid-Kern).

Äthyl-3a, 12a-diacetoxy-23-selena-25-homo-5ß-cholanat (120 mg) wurde in Äthanol (5 ml) gelöst und wie in 2(ii) "beschrieben zu 23-Selena-25-homodesoxycholsäure (45 mg) hydrolysiert.

TLC (Merck Kieselgel 60 F ₂^l* ^Chlo:rof^orm/Methanol 5:1) Das Produkt, durch Joddämpfe sichtbar gemacht, zeigte bei Chromatographie eine einzige Komponente (R_f 0,32) und fiel mit der radioaktiven Markierung zusammen.

IR-S-pektrum

ν max: 3430, 2920, 2855, 1700, 1448, 1375, 1255, 1038 cm"¹.

KMR (220 MHz. C

τ 5,12 (lösungsmittel-Peak), τ 6,05 (1H,S,C.,,-Proton), τ 6,50 (1H,nijC^-Proton), τ 6,7 (Lösungsmittel-Peak), τ 6,93 (2H,S,C₂₄-PrOtonen), τ 7,07 (1H,m,C₂₂-PrOton), τ 7,54 (1H,q,C₂₂-PrOtOn), τ 7,85 (3H,S,CH₃CO₂H), τ 8,88 (3H,d,C₂.j-Protonen), τ 9,07 (3H,S,C.„-Protonen), τ 9,28 (3H,S,C₁₈-Protonen), τ 8,0-9,2 (22H,Steroid-Kern)

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- Air

75 ν) 25-Selena-25-homodesoxycholsäiire-selenoxid·» 'Se

ZS-Selena-eS-liomodesoxycholsäure- Se ( 68,4 μθΐ, 1,1 uMol) in Methanol (1,0 ml) wurde mit einer wässrigen Wasserstoffperoxidlösung (5 ul, 4 uMol) behandelt und 90 min bei Raumtemperatur stehengelassen.

TIC (Merck Kieselgel 60 I^>254» Dichlormethan/Aceton/Essigsäure 7/2/1)

Hauptkomponente (> 90 %) L 0,19 (vgl. 23-Selena-25-homodesoxycholsäure- Se R~ 0,84 in diesem System).

Beispiel 3

Herstellung von 3a,7a-Dihydroxy-23-(ß-carboxyäthylseleno)-24~nor-5ß-cholan

i) 3a,7a-Dihydroxy-23-(ß-carboxyäthylseleno)-24-nor-5ß-

75
cholan-3,7-dinitrat-' -^Se

Rotes Se (5,0 mg, 6,4 mCi) vnirde wie in Beispiel 2 (ii) beschrieben hergestellt und in entionisiertem Wasser (0,55 ml) suspendiert. Kaliumcyanid (4 mg) wurde zugesetzt, und das Gemisch wurde gerührt, bis das gesamte Selen sich gelöst hatte. ß-Propiolacton (5 μΐ) wurde zugesetzt, und nach 15-minütigem Rühren wurde die Lösung durch Zutropfen konzentrierter Salzsäure angesäuert (etwas rotes Selen fiel aus) und eingeengt. Dem Rückstand wurde Äther (3 ml) zugesetzt, und die Lösung von ß-Selenocyanatopropionsäure-

'^Se wurde zum Entfernen unlöslicher Produkte filtriert und eingeengt (5,4 mCi).

3a,7a-Dihydroxy-23-brom-24-nor-5ß-cholan-3,7-dinitrat (30,8 mg) wurde in Tetrahydrofuran (1,0 ml) gelöst und zu Natriumborhydrid (8,3 mg) in Äthanol (0,7 ml) gegeben. Die Lösung wurde in Eis gekühlt, und ß-Selenocyanatopro-

75
pionsäure-' Se in Äthanol (1,0 ml) wurde in Anteilen über 10 min zugegeben. Nach einer v/eiteren Stunde vnirde Aceton (1 ml) zugesetzt, die Lösung wurde mit konzen-

809828/0951

trierter Salzsäure angesäuert und zur Trockne eingeengt. Der Rückstand wurde in Äther extrahiert, und die Lösung wurde von unlöslichem Material filtriert. TLC (Merck Kieselgel 60 Fora» Chloroform/Methanol 10:1) zeigte drei radioaktive Hauptprodukte, R_f 0,97, 0,85 und 0,09. Die Komponente mit R-, 0,85 entsprach dem inaktiven Markierungsmaterial (Beispiel 3 (üi)).

Das Produkt wurde durch präparative SchichtChromatographie (Anachem Silicagel Gf, 1 mm; Chloroform/Methanol 10:1) isoliert. Es wurde autoradiographisch lokalisiert (R~ 0,41), von der Platte entfernt und in Äther (3 x 3 ml) extrahiert und ergab 1,1 mCi 3a,7a-Dihydroxy-23-(ß-carboxyäthylseleno)-24-nor-5ß-cholan-3,7-dinitrat.

TLC (Merck Kieselgel 60 F ₂54 ^; Chloroform/Methanol 10:1) Hauptkomponente (95 %) R_f 0,54 entspricht nicht-radioaktivem Standard.

ii) 3a,7a-Dihydroxy-23-(ß-carboxyäthylseleno)-24-nor-5ß-

75
cholan- Se

Das Dinitrat (1,1 mCi - hergestellt wie oben beschrieben 3 (i)) wurde in Eisessig (1 ml) gelöst, und Zinkstaub (60 mg) wurde in Portionen zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde bei Raumtemperatur 1 h gerührt und über Nacht bei -20⁰C aufbewahrt. Nach dem Erwärmen auf Raumtemperatur wurde die Lösung filtriert und das Filtrat lyophilisiert. Das Produkt wurde durch präparative Schichtchromatographie (Anachem Silicagel CfF, 1 mm; Chloroform/Methanol 7:1) isoliert. Es wurde autoradiographisch lokalisiert (R~ 0,30), von der Platte entfernt und in Methanol extrahiert und ergab 3a,7a-Dihydroxy-23-(ß-carboxyäthylseleno)-24-nor-5ß-cholan (0,6 mCi).

TLC (Merck Kieselgel 60

a) Chloroform/Methanol 5:1; Hauptkomponente (97 %) R_f 0,65

b) Chloroform/Methanol 10:1; Hauptkomponente R_f 0,22

809828/0981

c) Isooctan/Diisopropyläther/Essigsäure 2:1:1; Hauptkomponente R_f 0,41

In jedem Pall fiel das Produkt mit dem nicht-radioaktiven Standard zusammen.

iii) 3a,7a-Dihydroxy-23-(ß-carboxyäthylseleno)-24-nor-5ßcholan-3«7-dinitrat ;

Nicht-radioaktives 3a,7ar-Dihydroxy-23-(ß-carboxyäthylseleno)-24-nor-5ß-cholan wurde nach der unter 3 (i) beschriebenen Methode unter Verwendung folgender Mengen an Reagentien hergestellt: 3a,7a-Dihydroxy-23-brom-24-nor-5ß-cholan-3,7-dinitrat (173,1 mg) in Tetrahydrofuran (4 ml); Natriumborhydrid (45,8 mg) in Äthanol (2,2 ml) und ß-Selenocyanatopropionsäure (61,4 mg) in Äthanol (2,2 ml). Das Reaktionsgemisch wurde mit Aceton (1 ml) behandelt, in V/asser (25 ml) gegossen, mit konzentrierter Salzsäure angesäuert und mit Äther (2 χ 20 ml) extrahiert. Die vereinigten Ätherextrakte wurden mit 5 ftLger Natriumcarbonatlösung (2 χ 20 ml) gewaschen, und die vereinigten alkalischen Extrakte wurden angesäuert. Die Fällung wurde durch Äther isoliert, die Extrakte wurden getrocknet und eingeengt. Das Produkt wurde durch präparative Schichtchromatographie (Merck Kieselgel ^254* ^ ^¹¹* Chloroform/Methanol 10;1) gereinigt. Der gewünschte Bereich wurde unter u.V. lokalisiert, von der Platte entfernt und in Äther extrahiert. Abdampfen der Lösungsmittel hinterließ 3a,7a-Dihydroxy-23-(ß-carboxyäthylseleno)-24-nor-5ß-cholan-3,7-dinitrat als weißen Feststoff (82 mg).

IR-Spektrum

V max: 3450, 2940, 1710, 1620, 1278, 862 cm"¹

NMR (220 MHz. CDCl^)

τ 4,95 (1H,S, C₇-Proton), τ 5,22 (1H,m, C^-Proton), τ 7,23 (4H,S, C₂C- und C₂g-Protonen), τ 7,6 (2H,m, C^-Protonen), τ 9,05 (6H,s + d, CjQ-Protonen und C₂₁-Protonen), τ 9,32

809828/0951

- ys -

(3H,S,C_ig-Protonen), τ 7,85-9,10 (24H, Steroid-Kern).

iv) 3α,7α-Dihydroxy-23-(ß-carboxyäthylseleno)-24-nor-

gß-cholan

3 α, 7a-Dihydroxy-23- (ß-carboxyäthylseleno) -24-nor-5ß-cholan (50 mg) wurde aus seinem Dinitratester (80 mg) nach der -unter 3 (ii) "beschriebenen Methode hergestellt.

IR-Spektrum

V max: 3435, 2940, 2870, 1715, 1550, 1410, 1300, 1080, 960 cm"¹

MMR (220 MHz. CD^OP)

τ 5,16 (Lösungsmittel-Peak), τ 6,20 (1H,S, C₇-Proton), τ 6,94 .(1H,m, 0,-Proton), τ 6,99 (Lösungsmittel-Peak), τ 7,25 (4H,S, C₂₅-und C₂₆-Protonen), τ 7,45 (2H,m, C₂₅-Protonen), τ 9,02 (3H,d, C^-Protonen), τ 9,07 (3H,S, Cjg-Protonen), τ 9,29 (3H,S, C₁₈-Protonen).

Beispiel 4

Herstellung von 3a,7a,12a-Trihydroxy-23-(ß-carboxyäthylseleno)-24-nor-5ß-cholan

i) Cholinsäure-triformiat

Cholinsäure (50 g) wurde mit 100 % Ameisensäure (240 ml) behandelt, und das Ganze wurde 6 h bei 70-80⁰C gerührt. Die Lösung wurde gekühlt, und der größte Teil des Lösungsmittels wurde abgedampft. Der Rückstand wurde mit Äther (500 ml) verrieben und ergab einen weißen Feststoff, der filtriert und getrocknet wurde (43 g). Das Rohprodukt konnte durch mehrfaches Umkristallisieren aus 60 %igem wässrigem Äthanol und 1ϊ1 Petroläther (60-80°)/Aceton weiter gereinigt werden. Schmp. des gereinigten Materials 204-208⁰C.

ii) 3a.7a»12a-Triformoxy-23-Jod-24-nor-5ß-cholan Cholinsäure-triformiat (1,06 g) und Bleitetraacetat (0,97 g)

809829/0951

wurden in trockenem Tetrachlorkohlenstoff (100 ml) suspendiert, und die Suspension wurde gerührt und in einer trockenen Stickstoffatmosphäre auf Rückfluß erhitzt. Durch Bestrahlen mit einer Atlas 275 Watt-IR-Lampe wurde auf Rückfluß gehalten, und eine Lösung von Jod (0,52 g) in Tetrachlorkohlenstoff (40 ml) wurde in Portionen zugesetzt. Eine weitere Stunde wurde rückflußgekocht. Das Reaktionsgemisch konnte sich abkühlen und wurde dann filtriert.

Das Filtrat wurde nacheinander mit 5 ?oiger Natriumthiosulfatlösung und Wasser gewaschen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Verdampfen des Lösungsmittels und Umkristallisieren des Rückstands aus Äthanol (zweimal) ergab 3a, 7a,12a-Triformoxy-23-Dod-24-nor-5ß-cholan (0,65 g) in Form farbloser Kristalle, Schmp. 166-168°.

IR-Spektrum

7 max: 2960, 2938, 2862, 2712, 1721, 1518, 1360, 1160, 1060,

995, 6 ¹
NMR (220 MHz.

995, 600 cm"¹

τ 1,85, 1,90, 1,98 (3H, 3 Singuletts, 3-,7-und 12-Formiat-Protonen), τ 4,74 (1H,S, C|₂-Proton), τ 4,94 (1H,S, Cy-Protonen), τ 5,30 (1H,m, C^-Proton), τ 6,72 + 6,95 (2H,m, C₂₃-Protonen), τ 9,06 (3H,S, C_1g-Protonen), τ 9,15 (3H,d, C₂₁-Protonen), τ 9,22 (3H,S, C₁₈-PrOtonen), τ 7,8 - 9,O⁵(22H, Steroid-Kern)·

iii) 3a,7a,12a-Trihydroxy-23-(ß-carboxyäthylseleno)-24-nor-5ß-cholan-⁷⁵Se

ß-Selenpcyanatopropionsäure- -⁵Se (4,42 mCi, 108 mCi/mMol)

75
wurde aus rotem Se, wie in Beispiel 3 (i) beschrieben, hergestellt. 3α,7α,12a-Triformoxy-23-Dod-24-nor-5ß-cholan (23 mg) in Tetrahydrofuran (0,5 ml) wurde zu Natriumborhydrid (5,5 mg) in Ithanol (0,5 ml) gegeben, und die Lösung

75 wurde in Sis gekühlt. ß-Selenocyanatropropionsäure-' Se

809828/0951

(4,42 mCi) in Äthanol (0,8 ml) wurde der Lösung über 10 min zugesetzt, und es wurde 1 h weiter gerührt. Das Reaktionsgemisch, wurde mit Aceton (1 ml) behandelt, mit konzentrierter Salzsäure angesäuert und eingeengt. Der Rückstand wurde zwischen Äther und Wasser verteilt, und die Ätherphase wurde abgetrennt und mit 5 ^iger wässriger Natriumcarbonatlösung extrahiert. Der alkalische Extrakt wurde angesäuert, und die Fällung wurde durch Ätherextraktion isoliert.

Äthanol (2 ml), V/asser (0,75 ml) und Kaliumhydroxid (100 mg) wurden der rohen Probe des 3a,7a,12a-Triformoxy-23-(ß-carboxyäthylseleno)-24-nor-5ß-cholans zugesetzt. Die Lösung wurde bei Raumtemperatur 2 h gerührt, dann angesäuert und eingeengt. Methanol (2 ml) wurde dem Rückstand zugesetzt, die Lösung wurde von unlöslichem Material filtriert und auf eine kleine Menge aufkonzentriert. Das Produkt wurde durch präparative Schichtchromatographie (Merck Kieselgel 60 !"054 1 ¹¹¹¹¹¹J Chloroform/Methanol 5:1) gereinigt. Der gewünschte Bereich wurde autoradiographisch lokalisiert (R_f 0,35), von der Platte entfernt und in Methanol extrahiert, um 3o,7a,12a-Trihydroxy-23-(ß-carboxyäthylseleno)-24-nor-5ß-cholan-' Se (1,2 mCi) zu ergeben·

TLC (Merck Kieselgel

a) Chloroform/Methanol 5:1 - Hauptkomponente (95 %) R^ 0,57, entsprach nicht-radioaktivem Standard

b) Isooctan/Diisopropyläther/Essigsäure 2:1:1; R- 0,21 IR-Spektrum

ν max: 3520, 3416, 2930, 2870, 1740, 1718, 1440, 1380, 1322, 1170, 1080 cm"¹

809828/0951

iv) 3α, 7α, 12a-Trihydraxy-23-{ß-earboxyäthylseleno ) -24-nor-

5ß-cholan

Nicht-radioaktives 3α,7α, 12a-Trihydroxy-23-(ß-car'boxyäthylseleno)-24-nor-5ß-cholan wurde nach der unter 4 (iü) beschriebenen Methode hergestellt. Die folgenden Mengen an Reagentien wurden verwendet: 3a,7a,12a-Triformoxy-23-;jod-24-nor-5ß-cholan 258,7 mg; Natriumborhydrid 61,2 mg; ß-Selenoeyanatopropionsäure 79,6 mg, Nach der letzten Hydrolysestufe wurde das Produkt durch Verteilung zwischen Äther und 5 %iger Natriumcarbonatlösung gereinigt. Das saure Produkt wurde isoliert und mit Aceton verrieben, um 3a,7a,12a-Srihydroxy-23-(ß-carboxyäthylseleno)-24-nor-5ß-cholan (70 mg) als weißes Pulver, Schmp. 198-200°, zu ergeben.

IR-Spektrum

Vmax: 3520, 3410, 2930, 2870, 1740, 1718, 1440, 1382, 1323, 1170, 1080 cm"¹

MR (220 MHz, CD^OD)

τ 5,11 (Lösungsmittel-Peak), τ 6,06 (1H,S, C₁₂-£roton), τ 6,23 (1H,S, Cy-Proton), τ 6,67 (1H,m, C^-Proton), τ 6,71 (Lösungsmittel-Peak), τ 7,30 (4H,S, Cgc + Ggg-Protonen), τ 7,47 und τ 7,78 (2H,m, Cg^-Protonen), τ 8,97 (3H,d, C₂.j-Protonen), τ 9,10 (3H,S, C₅^-Protonen), τ 9,30 (3H,3, C^-Protonen), τ 9,70 (nicht identifiziert)·

Beispiel 5

Herstellung von 3a,7a,12a-Trihydroxy-20-(carboxy-methylseleno )-5ß-pregnan- (22-selenach5Lsäure)

i) 3α»7α» 12a-0?riformoxy-Δ -24-nor-5ß-cholen

Kupfer(Il)acetat-Dihydrat (1,0 g) und Pyridin (0,7 ml) wurden zu Benzol (170 ml) zugegeben, und die Suspension wurde durch azeotrope Destillation unter Verwendung einer Dean and Stark-Apparatur getrocknet. Nach geringfügigem Abkühlen wur-

809828/0951

den trockenes Bleitetraacetat (20 g) und Cholsäuretriformiat (10,5 g, hergestellt wie unter 4 (i) "beschrieben) zugesetzt, und das Reaktionsgemisch wurde gerührt und in einer trockenen Stickstoff atmosphäre 1,5 h auf Rückfluß erhitzt. Dann wurde abkühlen gelassen und filtriert. Das FiI-trat wurde nacheinander mit V/asser, 1 in Natriumhydroxidlösung und schließlich mit V/asser gewaschen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Verdampfen des !Lösungsmittels und Kristallisieren des Rückstands aus Äthanol ergab 3e,7ä_f12a-Triformoxy-A -24-nor-5ß-cholen (4,0 g), Schmp. 188-190°,

IR-5pektrum

Vmax: 3077, 2960, 2865, 1725, 1714, 1637, 1468, 1449, 1380, 1180 cm"¹

NMR-Spektrum

^T 1»83, 1,91, 1,98 (3H, drei Singuletts, 3-, 7- und 12-Formiat-Protonen), τ 4,4 (1H,a, C₂₂-Proton), τ 4,77 (1H,S, C₁₂-Proton), τ 4,97 (IH,3, C^-Proton), τ 5,16 (1H,d, C^-rroton (eis)), τ 5,18 (1H,S, C^-Proton (trans)), τ 5,30 (1H,m, ^-Prcrton), τ 9,07 (6H,s + d, C^-Protonen + C₂ .,-Protonen), τ 9,24 (3E,S, C_is-?rotonen), τ 7,75 - τ 9,1 (22H, Steroid-Kern).

ii) 3a»7a. 12(T-¹TrJfomoxy-2?«24-Msnor-5ß-cholansäure 3«,7a,12Ä-TriforEiox>'-A'^::2-Z4-nci^l-5ß-cholen (2,4 g) wurde in 2-Methylpropan~2-ol (800 ^l) gelöst, und Kaliumcarbonat (1»41 g) in V/asser (SOO ml) wurde zugesetzt. liatriumperjodat (20,86 g) und 'ialiumpernianganat (0,395 g) wurden in Wasser ( 1 l) gelöst, und ier Lcrang des Olefins wurde eine Teilmenge ( 435 ml) zugesetzt. Die Lösung wurde 24 h bei Raumtemperatur gerührt. 2ur Beseitigung der Permanganat-Pärbung wurde ausreichend 40 ?6ige Hatriumhydrogensulfitlösung zugesetzt, dann 5 ^ige Natriumcarbonatlösung zum pH 8, und die

809828/09 51 ^_{0 ORloifi},_u

2300781

Losting wurde unter vermindertem Druck auf ca. 250 ml aufkonzentriert. Sie wurde mit Chloroform (2 χ 100 ml) extrahiert, mit weiterem 40 ?&gen Natriumhydrogensulfit behandelt und mit konzentrierter Salzsäure angesäuert. Das Gemisch wurde mit Chloroform (4 χ 100 ml) extrahiert, und die kombinierten Extrakte wurden nacheinander mit 5 %iger Natriumthiosulfatlösung und Wasser gewaschen und dann getrocknet. Das Lösungsmittel wurde verdampft, und 100 ?oige Ameisensäure (30 ml) wurde dem Rückstand zugesetzt. Die lösung wurde gerührt und 6 h auf 70-80° erwärmt und dann abkühlen gelassen. Sie wurde in Wasser gegossen, und der Niederschlag wurde in Chloroform (3 x 50 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte wurden mit Wasser gewaschen, getrocknet und eingedampft. Der Rückstand wurde aus Äthanol unikristallisiert und ergab 3«,7<x,12a-Triformoxy-23,24-Msnor-5ß-cholansäure (0,8 g), Schmp. 165-170°.

IR-S-pektrum

"vmax: 3410, 2965, 2940, 2870, 1722, 1450, 1385, 1178, 890 cm"¹

NMR-S-pektrum (220 MHz« CDCl^)

τ 1,83, 1,91 und 1,98 (3H, 3 Singuletts, 3-, 7- und 12-Formiat-Protonen), τ 4,78 (1H,S,Cj₂-Proton), τ 4,93 (1H,S,C₇-Proton), τ 5,30 (1H,m, ^-Proton), τ 6,29 (2H,q,CH₂ des Äthanols vom Kristallisieren), τ 7»64 (IHjqjCgQ-Proton) τ 8,77 (3H,t,CH₅ des Äthanols vom Kristallisieren), τ 8,88 (3H,d,C₂.,-Protonen), τ 9,05 (3,S,C^-Protonen), τ 9,22 (3H,S,C₁₈-PrOtonen), τ 7,75 - 9,05 (19H, Steroid-Kern).

iii) 3tf«7«(«12(it-Triformoxy-20-nodpregnan

3(X,7Ä,12o(-Triformoxy-23,24-bisnor-5ß-cholansäure (0,2 g) wurde in 3a,7«,12«-Triformoxy-20-3odpregnan (0,11 g) nach der unter 2 (i) beschriebenen Methode umgewandelt, Schmp. 145-146,5° (Zers.).

809828/0951

280078t

IR-Spektrum

ν max: 3405, 2950, 2860, 1713, 1445, 1377, 1180 cm'¹

NHR-Spektrum (220 MHz, ₅

τ 1,81, 1,91 und 1,98 (3H, 3 Singuletts, 3-, 7- und 12-Forniiat-Protonen), τ 4,75 (1H,S,C₁₂-PrOton), τ 4,93 (1H,S,C₇-Proton), τ 5,30 (1H,m,C₅-PrOtOn), τ 5,80 (1H,q,C₂₀-Proton), τ 8,06 (3H,d,C₂^-Protonen), τ 9,07 (3H,S,C.|Q-Protonen), τ 9,25 (3H,S,C₁₈-Protonen), τ 7,5 - 9,0 (19H, Steroid-Kern).

iv) 22-Selenacholsäure- ^Se

Rotes Se (8,2 mg, 106 mCi/mA) vmrde hergestellt, wie unter 2 (ii) beschrieben. Es vmrde in Äthanol (2 ml) suspendiert, und trockner Stickstoff wurde durch die lösung geperlt. Die austretenden Gase wurden durch eine Falle geführt, die 5 /oige Bleiacetatlösung enthielt. Natriumborhydrid (2,7 mg) wurde zugegeben, und die Suspension wurde 20 min bei Raumtemperatur gerührt. n-Propanol (5 ml) wurde zugesetzt, und das Reaktionsgemisch vmrde auf einem siedenden Wasserbad 20 min erwärmt. 3or,7oc,12öf-Triformoxy-20-3odpregnan (35 mg) in warmem n-Propanol (2 ml) wurde der lösung

75
des Dinatriumdiselenid- Se zugesetzt, und das Ganze wurde auf einem siedenden Wasserbad in einer trockenen Stickstoffatmosphäre 3,5 h erwärmt. Nach dem Abkühlen wurde unter vermindertem Druck eingedampft und der Rückstand mit Chloroform (5 ml) behandelt. Die lösung wurde filtriert und zur Trockne eingeengt, wobei das unreine Dipregnandiselenid-'^Se (4,2 mCi) zurückblieb.

Natriumborhydrid (5 mg) wurde in Äthanol (1 ml) gelöst, die lösung wurde in Eis gekühlt und Äthylbromacetat (20 ul) zugesetzt. Das Dipregnandiselenid-'^?Se wurde in Äthanol (3 ml) gelöst und über 10 min zugetropft. Das Reaktionsgemisch wurde 2 h gerührt, Aceton (1 ml) wurde zugesetzt, und die lösung

809828/0951

2800181

wurde eingeengt, Chloroform (3 ml) wurde zugegeben, anorganische Salze -wurden abfiltriert, und die lösung wurde mit Natriumhydroxid (100 ag) in \iasser (1 ml) behandelt. Die Lösung wurde 3 h unter Rückfluß erwärmt, abgekühlt und eingeengt. Der Bückstand wurde in Wasser (2 ml) gelöst, und die lösung wurde mit konzentrierter Salzsäure angesäuert und lyophilisiert. Essigsäure (3 ml) wurde dem Rückstand zugesetzt, die lösung wurde filtriert und auf eine kleine Menge auf konzentriert. Das Produkt vmrde durch präparative Schichtchromatographie (Anachem Silicagel QF₉ 1 mm; Dichlormethan/Aceton/ Essigsäure 7:2:1) gereinigt. Seine lage wurde autoradiographisch bestimmt, der Bereich wurde von der Platte entfernt und das Produkt in Essigsäure extrahiert und das lösungsmittel "verdampft, um 22-Selenacholsäure- Se (0,8 mCi) zu ergeben.

510 (lierck Kieselgel 60 P₂ ^)

a) Dichlormethan/Aceton/Essigsäure (7:2:1) Hauptkomponente R₄, 0,22

^) Ohloroform/MeThanol (5:1)
Hauptkomponente IU 0,11

IP.-Spektrum

7i]iaxi 3400, 2925» 2730, 1715, 1440, 1373, 1265, 1073, 1040 cm"¹

ύ, ^l"kc-22-srtlenacholsäure-'"Se

■7 C

I_-3eienachoIsäure-"'Se {0,40 mCi| 1,3 mg) in Essigsäure ivur-Ij aur Srockne airxgeengt. Srockenes ithylaeetat (450 vl) vr-ir-Is angesetzt, dann. IT-jlthoxyoarbonyl^-ätlio^yäihydroohinolin (•;j.,2 3g), A-shylglycinat-Hydroohlcrid (8,0 mg). In troiicansni Ithylacetat (0,5 nil) suspendiert, "i-rarde mit 5riä-;iiylamin (3,3 μΐ) behandelt j das Gemisch wurde 30 min gerührt und zu einer lösung von 22-Selenachoisäure-'^Se gegeben, eine v/eitere Menge Ithylacetat (0,4 ml) wurde zur vollständigen

809828/09S1

Überführung verwendet. Das Reaktionsgemisch wurde unter Rückfluß auf einem siedenden Wasserbad 6 h erwärmt; dann wurde es gekühlt und eingeengt. Chloroform (4 ml) wurde dem Rückstand zugesetzt, und unlösliches Material wurde abfiltriert.

75
Athyl-22-selenaglykocholat- Se wurde durch präparative Schichtchromatographie (Anaehem Silicagel Gf, 1 mm; Chloroform/Methanol 8:1) gereinigt. Der radioaktive Hauptbereich wurde autoradiographisch lokalisiert, R_£ 0,4; er wurde von der Platte entfernt und in Methanol (3 x 4 ml) extrahiert. Das Lösungsmittel wurde verdampft, Äthanol (4 ml) und 10 %±ge Kaliumearbonatlösung (1 ml) wurden zugesetzt, .und die Lösung wurde 1 h auf Rückfluß erhitzt und über Nacht bei Raumtemperatur stehengelassen. Die Lösung wurde mit konzentrierter Salzsäure angesäuert, zur Trockne eingeengt, und das Itodukt wurde aus dem Rückstand durch Lösen in Äthanol extrahiert. Die Lösung wurde filtriert

nc

und eingeengt und hinterließ Glyko-22-selenacholsäure-' Se (0,21 mCi).

[PLC (Merck Kieselgel 60 ffo,-,: Chloroform/Methanol 5:1)

Hauptkomponente (ca. 85 %) R^ 0,04 (vgl. 22-Selenacholsäure, R^ 0,31 und Glykocholsäure, R_f 0,02 in diesem System).

Beispiel 6

Herstellung von 3*-Hydroxy-24-(carboxymethylseleno)-5ßcholan

i) 5«-Acetoxy-25-homo-5ß-cholan8äure

5cC-Acetoxy-25-homo-5ß-cholansäure wurde aus Lithocholsäure unter Anwendung der Arndt-Eistert-Reaktion zur Verlängerung der C. „-Seitenkette hergestellt.

809828/0951

- ar -$°

ii) 3rf-Acetoxy-24-.iod-5ß-cholan

wurde in 3<*~Acetoxy-24-3od-5ß-cholan nach der unter 4 (ü) angegebenen Methode überführt. Die Mengen der verwendeten Reagentxen waren wie folgt: pc^-Acetoxy^S-homo-Sß-cholansäure (1,8 g) in trockenem Tetrachlorkohlenstoff (120 ml), Bleitetraacetat (2,0 g) und Jod (1,04 g) in Tetrachlorkohlenstoff (80 ml). Das Rohprodukt wurde durch präparative Schichtchromatographie unter Verwendung von 5 Merck Kieselgel 60 Ppc.-Platten von 2 mm, entwickelt in Chloroform, gereinigt. Der gewünschte, UV-absorbierende Bandbereich wurde von jeder Platte entfernt und das Produkt durch Extraktion mit Äther isoliert. Abdampfen des Lösungsmittels und Verreiben des Rückstands mit Äthanol ergab 3«-Acetoxy-24-jod-5ß-cholan (0,45 g, Schmp. 140-146°) als weißes Pulver.

IR-Spektrum

7 max: 2940, 2865, 1738, 1473, 1459, 1383, 1366, 1258, 1028 cm"¹

NMR-Spektrum (220 MHz. CDCl^)

τ 5,19 (IHjHijC^-Proton), τ 6,83 (2H,m,C₂.-Protonen), τ 7,98 (3H,S,Acetat-Protonen), τ 9,07 (6H,1s + 1d, C₁₉ + C₂₁-Protonen), τ 9,36 (3H,S,C₁₈-PrOtonen), τ 8,0 - 9,1 (28H, Steroid-Iiern).

iii) 3e-Hydroxy-24-(carboxymethylseleno)-Sß-cholan- Se

Äthylselenocyanatoacetat- Se (17 mg, 9,2 mCi) wurde in der zuvor (2 (ii)) beschriebenen Weise hergestellt. Es wurde mit Natriumborhydrid (8,2 mg) in Äthanol (2 ml) und 3*-Aeetoxy-24-;jod-5ß-cholan (50 mg) in Tetrahydrofuran (3 ml), wie in 2 (ii) beschrieben, umgesetzt. Die Zwischenstufe, 3Ä-Acetoxy-24-(carboxymethylseleno)-5ß-

75
cholanäthylester- Se wurde durch präparative Schicht-

809828/09S1

Chromatographie (Anachem Silicagel Gi, Chloroform) isoliert. Der radioaktive Hauptbandbereich, wurde autoradiographisch lokalisiert (R_f 0,55); er wurde von der Platte entfernt, und das Produkt wurde durch. Extraktion mit Äthylacetat (3x4 ml) isoliert. Das Lösungsmittel wurde abgedampft, Äthanol (5 ml) und Kaliumhydroxid (100 mg) in V/asser (1 ml) wurden zugesetzt, und die Lösung wurde unter Rückfluß 3 h erhitzt und abkühlen gelassen. Die Lösung wurde mit konzentrierter Salzsäure angesäuert und unter vermindertem Druck eingeengt. Äthanol (1 ml) wurde dem Rückstand zugesetzt, die Lösung wurde filtriert und das Produkt durch präparative Schichtchromatographie (Anachem Silicagel GF, Chloroform/Methanol 12:1) isoliert. Der gewünschte Bandbereich (R^ 0,20) wurde autoradiographisch lokalisiert, von der Platte entfernt, und das Produkt wurde durch Extraktion mit Äthanol isoliert. Verdampfen des Lösungsmittels ergab 3«-Hydroxy-24-(carboxymethylseleno)-5ß-cholan-⁷⁵Se (0,8 mCi).

TO.C (Merck Kieselgel 60 F054» Dichlormethan/Methanol 15:1)

Hauptkomponente (94 %) R_f 0,25, fiel mit dem nicht-radioaktiven Standard zusammen.

IR-S-pektrum

7max: 3400, 2930, 2855, 1700, 1445, 1373, 1105, 1028 cm"¹

iv) 3cr-Acetoxy-24-( carboxymethylseleno) -5ß-cholan-äthylester

Nicht-radioaktiver 3c(-Acetoxy-24-(carboxymethylseleno)-5ßcholan-äthylester (160 mg) wurde nach der unter 6 (iii) angegebenen Methode aus 3ef-Acetoxy-24-jod-5ß-cholan (200 mg), Natriumborhydrid (32 mg) und Äthylselenocyanatoacetat (74,7 mg) hergestellt.

IR-Spektrum

•Vmax: 2925, 2855, 1733, 1445, 1375, 1360, 1238, 1100,

1023 cm"¹

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- 29 -W

NMR-Spektrum (220 MHz. ODCl-)

τ 5,29 (1H,m, ^-Proton), τ 5,83 (2H,q,lthyl-CH₂), τ 6,86 (2H,S,C₂₆-Erotonen), τ 7,98 (3Η,S,Acetat-Protonen), τ 8,72 (3H,q,Äthyl-CH₅), τ 9,0 (6H,1s + 1d, C_1g-Protonen + C₂₁-Protonen), τ 9,36 (3H,S,Cj₈-Protonen).

v) 3<x-Hydroxy-24-(carboxymethylseleno)-5ß-oholan

Hydrolyse von 3tf-Aeetoxyr-24-(carboxymethylseleno)-5ßclxolan-äthylester nach der Methode 6 (iii) ergab 3(X-Hydroxy-24-(carboxymethylseleno)-5ß-cholan, Schmp. 117 121⁰C.

IR-Spektrum

v"max: 3440, 2920, 2855, 1705, 1443, 1372, 1270, 1165, 1105, 1026 cm"¹

Beispiel 7

Herstellung von 23-(Carboxymethylseleno)-24-nor-5ßcholan-3 »7.12-trion-'⁷^Se

i) 23-Jod-24-nor-5ß-cholan-3.7.12-trion

5ß-Cholansäure-3,7,12-trion wurde in 23-Jod-24-nor-5ßcholan-3,7,12-trion nach der unter 4 (ii) beschriebenen Methode überführt. Die Mengen der verwendeten Reagentien waren v/ie folgt: 5ß-Cholansäure-3,7,12-trion (2 g) in Tetrachlorkohlenstoff (200 ml), Bleitetraacetat (2,3 g), Jod (1,2 g) in Tetrachlorkohlenstoff (100 ml). Das Produkt wurde nacheinander aus Äthanol und Petroläther (60-80°)-Athylacetat umkristallisiert, Schmp. 256-257⁰C.

TlC (Merck Kieselgel 60

Hauptkomponente R_f 0,36 (vgl. 5ß-Cholansäure-3,7,12-trion, R- 0,08 in diesem System).

IR-Spektrum

Vmax: 2960, 2930, 1727, 1708, 1472, 1438, 1392, 1382,

809828/0951

28G0781 -3α

1304, 1280, 1226 ce"¹

ii) 23-(Carboxymethylseleno)-24-nor-5ß-cholan-3,7,12-trion-⁷⁵Se

Eine äthanolische lösung von Äthyl-selenocyanatoacetat-'^Se (15,3 mg, 8,8 mCi) wurde nach der unter 2 (ii) beschriebenen Methode hergestellt; sie wurde zu einer Lösung von Natriumborhydrid (6,6 mg) in Äthanol (1 ml) bei 0° gegeben. Nach 20-minütigem Rühren bei 0° wurde Aceton (1 ml) zugesetzt, dann 23-Jod-24-nor-5ß-cholan-3,7,12-trion (39 mg) in Tetrahydrofuran (1 ml). Das Reaktionsgemisch wurde bei Raumtemperatur 16 h gerührt. Die Lösung wurde eingeengt, Chloroform (2 ml) wurde zugesetzt, und nach dem Filtrieren wurde die Lösung aufkonzentriert und auf eine Siliciumdioxid-Platte (Anachem, 1mm) gebracht, die in Chloroform/Methanol 20:1 entwickelt wurde. Drei radioaktive Hauptbandbereiche wurden autoradiographisch lokalisiert (R^-Werte 0,33, 0,49 und 0,69); sie wurden getrennt von der Platte entfernt, und die radioaktive Komponente wurde jeweils durch Extraktion mit Äther/Äthanol (10:1) isoliert. Eine Untersuchung der getrennten Komponenten durch Dünnschichtchromatographie (Herck Kieselgel Chloroform) und durch IR-Spektroskopie zeigte, daß die Komponente mit R^ 0,49 der gewünschte 23-(Carboxymethylseleno)-24-nor-5ß-eholaji-3,7,12-trion-äthylester- ^Se war, die Komponente mit R_f 0,33 war ein Gemisch von zwei nicht identifizierten Verbindungen und die Komponente mit R_f 0,69 wax kein Steroid·

23-(Carboxymethylseleno)-24-nor-5ß-cholan-3,7,12-trionäthylester-'^Se (2,05 mCi) wurde in Äthanol (5 ml) gelöst, und 10 %ige Kaliumcarbonatlösung (1 ml) wurde zugesetzt. Die .Lösung wurde 2 h auf Rückfluß erwärmt, gekühlt und unter vermindertem Druck abgedampft. V/asser (4 ml) wurde zugesetzt, etwas unlösliches Material wurde abfiltriert, und die Lösung wurde mit konzentrierter Salzsäure angesäuert

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- 9\ -33

und lyophilisiert. Chloroform (0,5 ml) wurde dem Rückstand zugesetzt, und das Produkt wurde durch präparative Schichtchromatographie (Anachem Silicagel G-3?, 1 mm, Chloroform/Me thanol 10:1) isoliert. Der radioaktive Hauptbandbereich wurde autoradiographisch lokalisiert (R^ 0,32), von der Platte entfernt, und das Produkt wurde durch Extraktion mit Methanol isoliert. Verdampfen des Lösungsmittels ergab 23-(Carboxymethylseleno)-24-nor-5ß-cholan-3,7>12-trion ⁷⁵Se (1,3 MJi).
TLO (Merck Kieselgel 60 ffogi« Chlorofomn/Methanol 20;1)

Hauptkomponente > 95 %$ R^ 0,51

IR-Spektrum

H max: 2965, 2895, 1717, 1475, 1428, 1395, 1275, 1118 cm"¹

Beispiel 8

Herstellung von 3«,12iC-Dihydroxy-23-(carboxymethylseleno)-24-nor-5ß-cholan ^

i) 5*. 12<x-Diformoxy-23-,iod-24-nor-5ß-cholan

3*, 12tf-Diformoxy-5ß-cholansäure wurde aus Desoxycholsäure (25 g) und 100 % Ameisensäure (100 ml) nach der unter 4 (i) "beschriebenen Methode hergestellt. Das Produkt wurde aus Äthanol umkristallisiert und ergab farblose Kristalle (17»5 g), Schmp. 197-199⁰C

3o(,12(!(-Diformoxy-5ß-cholansäure (4 g) wurde in 3oc, 12<x-Diformoxy-23-jod-24-nor-5ß-cholan nach der zuvor unter 4 (ü) beschriebenen Methode überführt, wozu Bleitetraacetat (4,0 g) und Jod (1,9 g) verwendet wurden. Das Rohprodukt wurde aus Äthanol umkristallisiert und lieferte farblose Kristalle, Schnp. 123-125⁰C (3,1 g).

IR-Spektrum

Vinax: 2940, 2865, 1723, 1447, 1383, 1205, 1190, 1180 cm"¹

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MMR-Spektrnm (220 MHz, CDCl-)

τ 1,89 und 1,98 (2Η, zwei Singuletts, 3- und 12-Formiat-Protonen), τ 4,75 (1H,S,C₁₂-PrOton), t 5,19 (ΙΗ,πι,σ,-Proton), τ 6,71 (1H,m,C₂~-Proton), τ 6,96 (1H₁(IjC₂*- Proton), τ 9,06 (3H,S,C₁₉-Protonen), τ 9,16 (3H,d,C₂₁-Protonen), τ 9,22 (3H, S, C .^-Protonen), τ 7,95 - 9,15 (24H, Steroid-Kern).

ii ) 3 *, 12«-Dihydroxy-23- (carboxymethyltelluro ) -24-nor-5ß-cholan-^123mTe

^^m-Tellur (6 mg, 5 mCi) wurde in konzentrierter Salzsäure (2 ml) und Wasserstoffperoxid (100 YoI., 2 Tropfen) gelöst. Telluroxid (23 mg, inaktiv) wurde zugesetzt, und die erhaltene Lösung wurde mit Wasser (32 ml) verdünnt. Metallisches Tellur wurde mit Schwefeldioxid-Gas ausgefällt, zweimal mit Wasser und dann mit Äthanol gewaschen und schließlich im Vakuum getrocknet.

Zu metallischem Tellur (24,6 mg, 5 mCi) in einem Reaktionskolhen mit 15 ml flüssigem Ammoniak wurde Natrium (4,4 mg) gegeben, wobei der Kolben mit einer Vakuumleitung verbunden und zur Atmosphäre über eine Carbosorb/Aktivkohle-Fal-Ie belüftet war. Das Reaktionsgemisch wurde 5 min gerührt, um Dinatriumditellurid- ^5mTe zu erhalten, und dann wurde Jodessigsäure (35,8 mg) zugesetzt. Das Ammoniak konnte abdampfen, und Spuren flüchtigen Materials wurden unter vermindertem Druck entfernt.

Der Rückstand wurde erneut in Äthanol (20 ml) und Dimethylformamid (10 ml) gelöst und unter einer Stickstoffatmosphäre gerührt. Natriumhydroxid (0,1 g) in Wasser (3 ml) und Dithiothreitol (50 mg) in Wasser (2 ml) wurden zugesetzt. Nach 20 min wurde 3*,12ff-Diformoxy-23-jod-24-nor-5ß-cholan in Dimethylformamid (2 ml) zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 1 h bei 60° und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt.

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28ÖCTS1

Die !lösungsmittel wurden' im "Vakuum abgedampft und der Rückstand in Chloroform (2 ml) gelöst und dann durch präparative SchichtChromatographie an Cellulose (Avieel 1, Butanol/Wasser/Essigsäure 60:25:15) gereinigt. Der aktive Bandbereich mit R_f 0,9-0,96 wurde autoradiographisch festgestellt, von der Platte entfernt und in Chloroform hinein extrahiert. Abdampfen des Chloroforms ergab einen Rückstand von 350 -μΟΙ (7 /Ό),

Cellulose (Butanol/Wasser/Essigsäure 60:25:15) Hauptkomponente (> 95 %) R^ 0,95

IR-Spektrum

ν max: 2950, 2920, 2860, 1725, 1450, 1385, 1125, 1070, 1035, 875, 790, 740 cm"¹

iii ) 3o(, 12* -Dihydroxy-23- ( carboxymethyltellurο ) -24-nor-5ß-cholan

Diese Verbindung wurde wie unter 8 (ii) hergestellt. lur (59 mg), Natrium (11,5 mg), Jodessigsäure (84 mg), Katriumhydroxid (0,2 g), Dithiothreitol (100 mg) und 3*,-12«-Diformoxy-23-jod-24-nor-5ß-cholan (190 mg) wurden verwendet.

Ausbeute 30 mg (16 ^c/o)
IR-Spektrum

ν max: 2940, .2860, 1725, 1450, 1385, 1130, 1070, 875, 790 cm"¹

HHR-Spektrum (CD₃OD) (220 MHz)

τ 6,05 (1H,S,C₁₂-PrOtOn), τ 8,97 (3H,d,C₂^Protonen), τ 9,08 (3H,S,C₁₉-PrOtonen), τ 9,28 (3H,S,C₁₈-PrOtonen).

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Claims

Patentansprüche

7 //

in der R -(CH)_A(CH₂)_B-Z-(CH₂)^H-COR⁶,

A O oder 1,

B 0 bis 4,

C O bis 4,

Z Se oder Te,

R -OH oder ein Aminosäurerest,

R' V/asserstoff oder eine gesättigte Cj bis O,-Alkyl-

Gruppe, wenn A 1 ist,
R⁸ V/asserstoff oder eine gesättigte C₁ bis C.-Alkyl-

Gruppe,
η 0 oder 1,
R , R^, R^ und R-³ unabhängig voneinander V/asserstoff

oder eine α - oder ß-Hydroxylgruppe oder eine Oxo-

gruppe und
5
Br ein α- oder ß-H ist.

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ORlGfMAL !SUSPECTED

75
2. Verbindungen nach Anspruch 1, in denen Z Se oder

^123mTe ist.
3. Verbindungen nach Anspruch 1 oder 2, in denen R ein Glycin- oder Taurinrest ist.
4. Verbindungen nach einem der Ansprüche 1 bis 3, in denen

C O oder 1,

R⁷ Methyl,

R⁸ Wasserstoff, η O und

H⁵ ß- H ist.
5. 3a,12a-Dihydroxy-22-(carboxymethyl- '^Se seleno)-23,24-bisnor-5ß-cholan.
6. 3a,7a-Dihydroxy-23-(ß-carboxyäthyl-P⁵Se seleno)-24-nor-5ß-cholan.
7. 3a,7a,12a-Trihydroxy-23-(ß-carboxyäthyl- '^SeIseleno)-24-nor-5ß-cholan.
8. 3a,7a,12a-Trihydroxy-20-(carboxymethyl- 'Seiseleno)-5ß-pregnan.

75
9. Glyko-22- Se-selenacholsäure.
10. 3a-Hydroxy-24-(carboxymethyl- '-³Se seleno)-5ß-cholan.
11. 3a,12a-Dihydroxy-23-(carboxymethyl- ^125mTe telluro)-24-nor-5ß-cholan.
12. Tauro-23- Se selena-25-homodesoxycholsäure.
13. 3,7,12-Triketo-23-(carbo:qymethyl-R^Se seleno)-24-nor-5ß-cholan. ■- J

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