DE2718588B2 - Verfahren und Reagens zur Bestimmung von Harnsäure - Google Patents
Verfahren und Reagens zur Bestimmung von HarnsäureInfo
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Description
Die Erfindung betrifft ein Verfahren und Reagens gemäß den Oberbegriffen der Ansprüche 1 bzw. 6.
Ein erhöhter Harnsäurespiegel im Serum (Plasma) stellt einen wichtigen Hinweis auf das Bestehen einer
Gichtkrankheit dar. Die quantitative Analyse der Harnsäure im Serum gehört daher zu den im
klinisch-chemischen Laboratorium häufig auszuführenden Untersuchungen.
Zur enzymatischen Bestimmung der Harnsäure werden bisher in der Praxis im wesentlichen zwei
Methoden angewendet, die als Uricase-Mcthodc und Urica-quant-Methode bekannt sind (vgl. »Methoden der
enzymatischen Analyse« (Bcrgmcycr, H. U, Ed.), Band 2. [1974] 1999 bis 2005, Verlag Chemie).
Neuerdings wurde ein neues enzymatischcs Verfahren bekannt (DE-OS 24 50 726), das auf dem folgenden
Prinzip beruht:
Urica.se
Harnsäure + 21I2O I O, " ( ' '> Allantoin ^ CO2 ( M2O,
Harnsäure + 21I2O I O, " ( ' '> Allantoin ^ CO2 ( M2O,
Kalalasc
H2O2 t Alkohol lfC Ml·'-61. AkIcImI t 2IhO
H2O2 t Alkohol lfC Ml·'-61. AkIcImI t 2IhO
Aldehyd ι NAI)(I') ι
Aldehv d-l)ehyilroizenasc
(IC" Ι.2.Ί.4 b/w. IX Ί.2.1.5)
Carbonsäure I NAI)(P)H t M '
Die Bildung von NAD(P)H, gemessen an der Extinktions/.unahem bei 340 nm, Hg 334 nm oder — Hg
nm, ist der Harnsäuremenge proportional.
Verglichen mit der als Referenzmethode angeschenen Uricase-Methodc zeichnet sich dieses neuere
Verfahren nach Haedkel durch eine geringere
Störanfälligkeit gegenüber Verunreinigungen im Analysenansalz
aus, da die Messung im längerwclligcn UV-Bereich durchgeführt wird (334 bis 365 nm anstelle
von 293 bis 297 nm). Im Vergleich zum Urica-quant-Verfahren ist der Zeitbedarf pro Analyse wesentlich
geringer, wodurch diese neuere Methode besonders gut für schnellaufcnde Analysenautomaten geeignet ist.
Bei Anwendung der oben beschriebenen Harnsäuretests nach H a eck el stellte sich heraus, daß in vielen
Fällen insbesondere bei Seren von Nierenkranken oder Leberkranken, erhebliche Störungen des Tests durch
Schleichreaktioncn auftraten. Beim Arbeiten nach der Endwert-Methode findet man bereits vor Zugabe der
als Starter dienenden Uricase-Lösung eine NAD(P)H-Zunahmc bzw. NADH-Abnahmc. Ferner kommt die
Reaktion auch nach Umsetzung der gesamten Harnsäure nicht zum Stillstand, sondern es wird weiterhin
NAD(P)H gebildet. Die Geschwindigkeit dieser Schleichreaktionen beträgt bei 25"C ca. 0.001 bis
0,004 Δ E/min, wobei außerdem auch noch die Geschwindigkeiten
vor dem Start und nach Ablauf der Harnsäurereaktion oft voneinander verschieden sind.
Dies erschwert die genaue Auswertung der Meßergebnisse sehr, da man die der umgesetzten Harnsäuremen-
ge entsprechende Exiinkiionsdifferenz nur ungenau
feststellen kann. Aus dieser Exiinktionsdifferen/, dem
Analysenansatz und dem molaren Extinkiionskoeffizienlen
von NADH ist jedoch das Analysenergebnis zu h berechnen.
S" Diese Schleichreaktionen machen sich bei der
H Harnsäurebestimmung auf kinetischer Basis noch
Ii weitaus störender als bei der Bestimmung nach dem
U Endwerl-Vcrfahren bemerkbar. Bei den kinetischen
|j Verfahren muß man bekanntlich zur stets erforderlichen
p Kalibrierung eine Standardbcsiimmung durchführen,
[κ wozu man im allgemeinen einen wäßrigen Standard
f; einsetzt (). Ziegen hör η in »Grundlagen der
k· enzymatischen Analyse«, H. Bcrgmeycr, Seite 81
?'.' bis 85, Verlag Chemie [1977]. Da bei dieser Standard-
V analyse keine Schleichreaktionen auftreten, erhält man
f;; bei der Analyse der obenerwähnten Seren, in denen
['; Schleichreaktionen auftreten, falsch positive bzw.
U negative Resultate; denn der auf die Harnsäure-Umsetzung
zurückgehenden Reaktion überlagert sich die Schleichreaktion. Ore kinetischen Tests sind jedoch für
das automatisierte Laboratorium von großer Bedeutung. Sie ermöglichen es, den Zeitbedarf pro Analyse
drastisch zu reduzieren und nutzen somit die Analysenauiomaten
bessser aus. Darüber hinaus sind sie im allgemeinen weniger anfällig gegen Störungen durch
Trübungen oder Eigenfarbe der Probe ils Endwcrt-Verfahren.
Wie beim Enwcrl-Verfahren können zwar auch bei den kinetischen Verfahren die durch Schlcichreaklionen
bedingten Störungen bis zu einem gewissen Grade durch die Bestimmur.o von Proben-Leerwerten berücksichtigt
werden. Dies hat jedoch Nachteile; denn Proben-Lecrwert-Bestimmungcn bedeuten immer eine
Verdoppelung des Zeit- und Rc^gens^cdarfs bei der
Durchführung der Analyse. Vor allem an modernen, schnellaufenden Analyscnautomaicn (Centrifugal Fast
Analyzer und verwandte Geräte Geäle), beeinträchtigen Probcn-Lcerwert-Analyscn die optimale Ausnutzung
der Geräte sehr.
)e nach Ausmaß der Schleichreaktion wurden Fehler von 5 bis 20% für die Analyscnresultatc festgestellt.
Dies bedeutet eine starke Einschränkung der Anwendbarkeit der Hacckclschcn Methode zur Harnsäurebestimmung
in der Roulinediagnostik, wo bekanntlich Harnsäuretests besonders oft an Seren von Nierenkranken
vorgenommen werden müssen. Gerade bei Gicht ist eine Erkrankung der Niere außerordentlich häufig.
Der Erfindung liegt daher die Aufgabe zugrunde, ein Verfahren zu schaffen, mit dem sich die geschilderten
Störungen bei der Harnsäurebestimmungsmelhodc nach H a c c k c I vermeiden lassen.
Gelöst wird diese Aufgabe erfindungsgemäß durch ein Verfahren zur Bestimmung von Harnsäure in
biologischem Material mittels Uricase, Katalasc und Aldehyddehydrogcnase in Gegenwart von Alkohol und
Nicotinamid-adenin-dinucleotid bzw. -phosphat (NAD(P)), welches dadurch gekennzeichnet ist, daß
wenigstens eine Verbindung aus der Gruppe Oxalat, Malonsäuremono(niedrig)-Alkylester, Trihalogenäthanol,
gegebenenfalls mit ein oder mehreren Niedrigalkylgruppen oder/und Halogenatomen substituiertes Pyra/ol
oder Pyridin, gegebenenfalls durch eine Niedrigalkylgruppc substituierte Pyridincarbonsäurc, deren Amid
oder Nidrigalkylestcr, Thioharnstoff, Isobiityramid oder chelatbildendcs Komplexierungsmittel zugesetzt wird.
Als biologisches Material kommen insbesondere Serum und Blut in Frage, es können jedoch auch Harn,
durch /-ellaufschluU gewonnene Flüssigkeiten oder
dergleichen, als Ausgangsmaterial eingesetzt werden.
Unter Niedrigalkylgruppen werden im Rahmen der Erfindung solche mit I bis 4 Kohlenstoffatomen
verstanden. Halognaiome sollen im Rahmen di-r
Erfindung Chlor-, Brom- und |odutome sein. Hei den
Pyrazoldcrivaten werden solche bevorzugt, bei welchen ein Subsiitiient in Stellung 44 steht. Bei den Pyridincarbonsäuren
steht die Carboxylgruppe in Stellung i. Typische Beispiele für geeignete Verbindungen sind
Pyrazol, 4-Brompyrazol, 4-Jodpyrazol, 4-Chlorpyrazol,
4-Methylpyrazol, 4-Äthylpyrazol, 4-Propylpyra/ol.
3,4-Dibrompyra/ol, Pyridin, N-Methylnicotinamid u.a.
Als chelatbildende Komplexierungsmittel werden Nitrilotriessigsäure
und Äthylendiamintetracssigsäure bevorzugt.
Die erfindungsgemäß einzusetzenden Zusaizmiucl
können einzeln oder in Kombination zugegeben werden. Während in vielen Fällen ein einziges
Zusatzmittel ausreicht, um eine Schleichreaktion vollständig zu unterdrücken, wird doch der Zusatz von
wenigstens zwei der erfindungsgemäßen Mittel bevorzugt.
Besonders bevorzugt wird die Verwendung eines Mittels aus der Gruppe Oxalat und Maloniäiiremono(niedrig)alkylester
zusammen mit einem oder mehreren Mitteln aus der Gruppe der Trihalogeriäthanole,
Isobutyramid, Thioharnstoff substituierten rxicr unsubstituierten
Pyrazole, Pyridine oder Pyridincurbonsäurcn. Unter den Oxalaien werden die Alkalisalze bevorzugt.
Das Verfahren kann nach dem Endwcrt-Verfahren durchgeführt werden, bei dem die Konzentration der
Harnsäure nach Ablauf der Reaktion aus der gemessenen Extintionsdifferenz ermittelt wird. Ferner können
kinetische Verfahren angewendet werden, bei denen die Geschwindigkeit der Reaktion als Meßgröße dient. Die
Lehre, wie derartige kinetische Testsysteme beim Vorliegen von gekoppelten Enzymreaktionen aufzubauen
sind, ist aus der DE-OS 25 58 536 bekannt. Außerdem ist aus DE-PS 24 40 011 bereits bekannt, daß die an sich
für die Anwendung von kinet'schcn Verfahren zu niedrige Michaelis-Konstante der Uricasc in bezug auf
Harnsäure durch Zusatz eines komoclitivcn Inhibitors
scheinbar erhöht werden kann, so daß kinetische Meßprinzipien benutzt werden können. Ein solcher
kompetitiver Inhibitor ist z. B. Xanthin.
Die crfindungsgcmäB zugesetzten Verbindungen
werden in solchen Mengen verwendet, daß vorkommende Schlcichreaktioncn vollständig unterdrückt
werden. Die erforderlichen Mengen lassen sich leicht durch einen einfachen Vorversuch bestimmen. Im
allgemeinen reichen jedoch Zusätze zwischen 0,005 und 0,5 Mol Zusatzverbindung pro Liter Reagens vollständig
ai'S. In Einzelfällen können größere oder kleinere Zusätze in Betracht kommen.
Die Verfahrensbedingungen hinsichtlich pH-Wert, Zeit, Temperatur und dergleichen entsprechen den aus
der DE-OS 24 'iO 726 bekannten. Vorzugsweise wird bei pH 8.0 bis 9,0 gearbeitet unter Verwendung eines in
diesem Bereich seine maximale Kapazität aufweisenden Puffers. Besonders gute Ergebnisse wurden mit
Diphospahtpuffer (K4P2O7/HCL) erzielt. Zweckmäßig
erfolgt die Bestimmung bei Raumtemperatur.
Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist ein Reagens zur Bestimmung von Harnsäure, enthaltend
Uricasc, Katalasc, Aldehyddehydrogcnase, Alkohol, NAD(P) und Puffer, welches dadurch gekennzeichnet
ist, daß es wenigstens eine Verbindung aus der Gruppe Oxalat, Malonsäuremono(niedrig)alkylestcr,
Trihalogcnäthanol.gegcbenefalls mil ein »der melireren
Niedrigalkylgruppcn oder/und Halogenatomen substiluierles
l'yru/ol oder Pyridin, gegebenenfalls durch eine
Niedrigalkylgruppc substituierte Pyridincarbonsäuie.
deren Amid oder Niedrigalkylestcr, Thioharnstoff. Isobuiyramid oder chclatbildcndes Komplexicrungsmittel,
wie Nitrilotriessigsäure oder Äthylcndiaminteiiaessigsüure
enthält.
Ein bevorzugtes Reagens der obengenannten Art enthält etwa 1x10- bis Ix 10' U/l Uricasc, 500 bis
1500 kU/l Katalase, 500 bis 1000 U/1 AldehyddchydrogenascO.3
bis 2 Mol/l Äthanol, 0,5 bis 1,5 niMol/l NAD ·
oder NADP1. 20 bis 100 mMol/l Puffer pH 8.0 bis 9.0
und 0,005 bis 0,5 Mol/l erfindungsgemäßes Zusatzmitiel.
Erfindungsgcmäß gelingt es. wie oben beschrieben, störende Schleichrcaktionen bei der Bestimmung
auszuschließen und damit die Genauigkeit des Verfahrens zu verbessern und durch Einsparung von
Proben-I.ccrwcrt-Bcstimmung den Zeit- und Reagenticnbedarf
herabzusetzen.
Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung weilen
B c i s ρ i c I e 1 bis 27
Die nachstehend beschriebenen Beispiele wurden nach dem Endwcrt-Vcrfahren durchgeführt unter
Verwendung folgender Reagcnticti:
Reagens 1
K4P2O7/HCI-Puffcr (30 bis 50 mMol/l. pi I 8.0 bis 9.0).
Äthanol (0.3 bis 2 Mol/l), NAD* (> 0.5 mMol/l). Katalase
aus Rindcrleber(> 500 kU/l). Aldchyddchydrogcnasc aus Hefe (>
500 U/l).
Reagens 2
I Jrii-ase aus .Schweineleber (=i 1,b χ KJ'' ij/l).
Bestimmungsansalz
Bestimmungsansalz
Melistrahlung: Hg J34 nm, 340 mn, Hg 3b5nm;
Schichtdicke der Küvette: 1 cm; Inkubationstemperalur: Raunileniperatur.
2,0 ml des Reagens I in Küvette pipetlieren. 0,1-ml-Probe zusetzen und mischen. Kxtinktion ca. i
Minuten lang registrieren, auf Zeilpunkt de/ Zugabe
von Reagens 2 extrapolieren und /:Ί bestimmen. 10 μΙ
des Reagens 2 einmischen, Extintion ca. 2 bis 10 Minuten
lang registrieren, durch Extrapolation auf den Zeitpunkt der Zugabe von Reagens 2 C>
ermitteln.
Berechnung der Konzentration (c)ucr Harnsäure im
Serum:
c· = (Ii2-E,) ■ 3.41 mMol/l β = Hg 334 nm)
ν = (E2 - £"i) - 3.35 mMol/l (λ - Hg 340 nm)
c- = (F,-Εή · fa.20 mMol/l β = Hg 365 nm.
NAD)
c· = (F2-F,) ■ b.03 mMol/l (/. = Hg 365 nm.
NADP)
Probcnmaicrial
.Serum. Plasma, verdünnter Harn.
.Serum. Plasma, verdünnter Harn.
Bei dem wie oben beschrieben durchgeführten Verfahren wurden die aus der folgenden Tabelle
ersichtlichen erfindungsgemäßen Zusatzmiitel eingesetzt.
Die Tabelle gibt an die Art des verwendeten Probcnmaterials. das eingesetzte Coenzym, die Verwendung
des Zusatzmiltels sowie die unspezifischc Exlinktionsänderung
(Schlcichreaklion) in F. pro Minute. Die
Beispiele 1. 4. 6. 8. 10, 13. 17, 22, 24 und 26 sind
Vergleichsbeispielc. die übrigen Beispiele erläutern die Erfindung.
| Beispiel | Probe | Cnon/ym | /usiil/iiiillcl | - | Schleich- |
| Nr. | Trichlc.äthanol | rc:il.linM | |||
| (Mol/l) | !0.0I -0,07) | I /:/Minutc | |||
| I | Uriimikcrscruni Nr. I | NAD | - | - | + 0,004 |
| 2 | Urämikcrscrum Nr. I | NAD | I'yrazol | Nalriiimoxalat | 0,000 |
| (0.05-0.3) | (0,05-0,15) | ||||
| 3 | Urämikerserum Nr. I | NAD | Pyridin | Malonsii jremonoäthyl- | 0,(XX) |
| (0,05-0,20) | ester (K-SaI/) | ||||
| 4 | Urämikcrscrum Nr. 2 | NAD | (O.O5-O.I5) | +0,002 | |
| 5 | Urämikcrscrum Nr. 2 | NAD | 4-Mcthylpyridin | 0,000 | |
| (0,1-0,3, | |||||
| 6 | Urämikcrscrum Nr. 3 | NAD | - | +0,003 | |
| 7 | Uriimikcrscrum Nr. 3 | NAD | a) I'yrazol | 0,001 | |
| (0,05-0.15) | |||||
| b) Natriumoxaliit | 0,000 | ||||
| (0,05-0,15) | |||||
| 8 | Urämikerserum Nr. 4 | NAD | + 0,002 | ||
| 9 | Urämikerserum Nr. 4 | NAD | 0,000 | ||
| IO | Urämikerserum Nr. 5 | NAD | - 0,(X)3 | ||
| Il | Uriimikcrscrum Nr. 5 | NAD | 0,(XK) | ||
| !2 | Urämikcrscrum Nr. 5 | NAD | 0,(KX) | ||
Beispiel l'nibe
Nr.
14
17
IX
20
21
22
23
IJriimikcrsLTuni Nr. U
llrämikcrserum Nr. d
1 ;r;imikcrscrum Nr. (>
I ι rii
Nr tS
Uriiinikerscrum Nr. 6
llriiniikcrscrum Nr. d
l'riiniikcrseruni Nr. d
Urämikcrscruni Nr. U
Uriimikerscrum Nr. 6
Uriimikerscrum Nr. 7 Urämikerserum Nr. 7
('iien/Wii
NAD NAD
NAD
NM)
NADP NADP
NADP
NADP
NADP
NADP NADP
| 24 | Urämikerserum | Nr. | 8 | NAD |
| 25 | Urämikerserum | Nr. | 8 | NAD |
| 26 | Serum Nr. 9 | NAD | ||
| 27 | Serum Nr. 9 | NAD |
+ = Extinklionszunahme. - = Extinktionsabnahme.
Aus den Beispielen 1 bis 27 geht hervor, daß erfindungsgemäß die störende Schleichreaktion vollständig
unterdrückt werden kann, gleichgültig, ob es Ais.il/mittel
(Mol/t)
(Mol/t)
a) Pyra/ol
(0.05-0,15)
h) Malonsiiiiremonoiilhylcstcr (K-SaI/) (0.(15-0.15)
h) Malonsiiiiremonoiilhylcstcr (K-SaI/) (0.(15-0.15)
a) Pyra/ol
(0.05 -0.15)
(0.05 -0.15)
h) Pyridin
(0.05-0.10)
Thioharnsloff
Thioharnsloff
(0.1-0.2)
Trichloriithanol
(0.01-0.07)
(0.01-0.07)
a) Pyra/ol
(O.O5-O.I5)
hi Malonsa'urcmonoiithylcstcr (K-SaI/) (0.(15-0.15)
hi Malonsa'urcmonoiithylcstcr (K-SaI/) (0.(15-0.15)
a) Pyra/ol
(Ö.O5-O.I5)
(Ö.O5-O.I5)
b) Natriumoxalat
(0.05-0.15)
(0.05-0.15)
a) Pyra/ol
((1.05-0.15)
((1.05-0.15)
b) Pyridin
(0.05-0.10)
(0.05-0.10)
al Trichloräthanol
(0.01-0.07)
b) Malonsäuremonoäthylester (K-SaI?) (0.05-O.iO)
b) Malonsäuremonoäthylester (K-SaI?) (0.05-O.iO)
EDTA
(O.O5-O.2O)
(O.O5-O.2O)
Isobutyramid
(0.1-0.3)
(0.1-0.3)
Schleichreaktion
ι //Minute
+ 0.003 0.(KIl
0.(KKl
(l.(K)l (I.IKK) (1.(KK)
+ 0.002 (1.(KKI
(1.(KII 0.(KKl
0.(101 (UKiO (UKlI (UKKI
+ 0.003 (UK)I
(UKK)
+ 0.002 0.(KK)
+ 0.001 0.000
sich dabei um eine Extinktionszunahme oder Extinl tionsabnahme handelt.
Beispiel 28
Zur Harnsäurebestimmung auf kinetischer Basis kann das folgende Reagens eingesetzt werden:
Reagens
K4P2O7/HCi-Puffer(30bis50mivioi/l. pH 8,0bis9,ö). drogenase aus Hefe (>50ö U/1), uricase (470 fa
Äthanol (03 bis 2 Mol/l). NAD+ (>0,5 mVtol/1). 710 U/l).Xanthin. K-SaIz(180bis240 μτηοΐ/ί).
Katalase aus Rinderleber (>500kU/l), Aldehyddehy-
Bcstimmungsunsut/.
Durchführung der Analyse nuch dem kinetischen »fixed-time-Verfahrcn« (vgl. DK-OS 25 58 536.8) unier
Benutzung eines GEMSAKC Fast Analy/crs.
Meösiruhlung: i40 mn; Inkubationstemperatur: 25 C.
| <* obe bzw. Standard | 50 μΙ |
| Nail-Lösung. 0.9% | 200 μΙ |
| Reagens | 500 μΙ |
IO
Automaten die Harnsäurckonzentratioii
der Formel:
der Formel:
I''-: '-ι
>i'r,.tv
'■■l'si.imJ.inl
1 SUml.iril
niMol
Die erste Ablesung I'.\ wird 33 bis 100 Sekunden nach
dein Start der Reaktion, die /weite Ablesung /:_>
I 50 bis 200 Sekunden später durchgeführt. Unter Bezugnahme auf einen Standardansatz berechnet der Computer des
Proben material
Serum. Plasma, \enliinnler Harn.
Die Durchführung der Versuche erfolgte analog wie bei den Beispielen I bis 27 mit und ohne Zusatz der
erfindungsgemaUen /usatzmittel. Die Ergebnisse entsprachen
dabei völlig denen, die mit den entsprechenden Zusätzen nach den Beispielen I bis 27 erzielt wurden.
Claims (7)
1. Verfahren zur Bestimmung von Harnsäure in biologischem Material mittels Uricase, Katalase und
Aldehyddehydrogenase in Gegenwart von Alkohol und Nicotinamid-adenin-dinucleotid bzw. -phosphat
(NAD(P)), dadurch gekennzeichnet, daß
wenigstens eine Verbindung aus der Gruppe Oxalat, Malonsäuremono(niedrig)alkylester, Trihalogenäthanol,
gegebenenfalls mit ein oder mehreren Niedrigalkylgruppen oder/und Halogenatomen substituiertes
Pyrazol oder Pyridin, gegebenenfalls durch eine Niedrigalkylgruppe substituierte Pyridincarbonsäure,
deren Amid oder Niedrigalkylester, Thioharnstoff, Isobutyramid oder chelaibildcndes
Komplexierungsmittel zugesetzt wird.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet,
daß 0,005 bis 0,5 Mol/l ZusaUmitlel verwendet werden.
3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß wenigstens ein Zusatzmittel aus
der Gruppe Oxalat und Malonsäuremono(niedrig)alkylester zusammen mit einem oder mehreren
Zusatzmitteln aus der Gruppe Thioharnstoff, Isobutyramid, Komplexbildner, der substituierten Pyrazole,
Pyridine oder Pyridincarbonsäuren zugesetzt wird.
4. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß bei
pH-Werten von 8,0 bis 9,0 gearbeitet wird.
5. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß als Komplexierungsmittel
Nitrilotriessigsäure oder Äthylendiamintetraessigsäure zugesetzt wird.
6. Reagens zur Bestimmung von Harnsäure, enthaltend Uricase, Katalase, Aldehyddehydrogenase.
Alkohol, NAD(P) und Puffer, dadurch gekennzeichnet, dall es wenigstens eine Verbindung aus der
Gruppe Oxalat, Malonsäuremono(niedrig)alkylester, Trihalogenäthanol, gegebenenfalls mit ein oder
mehreren Niedrigalkylgruppen oder/und Halogenatomen substituiertes Pyrazol oder Pyridin, gegebenenfalls
durch eine Niedrigalkylgruppe substituierte Pyridincarbonsäure, deren Amid oder Niedrigalkylester,
Thioharnstoff, Isobutyramit oderchelatbildendes Komplexierungsmittel, wie Nitrilotriessigsäure
oder Äthylendiamintetraessigsäure enthält.
7. Reagens nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß es etwa I χ IOJ bis 1 χ 10' U/1 Uricase.
500 bis 1500 kU/l Katalase, 500 bis 1000 U/l
Aldehyddehydrogenase, OJ bis 2 Mol/l Äthanol, 0,5 bis 1.5 mMol/l NAD' oder NADP\ 20 bis 100
niMol/l Puffer pH 8,0 bis 9,0 und 0,005 bis 0,5 Mol/l
erfindungsgemäßes Zusaizmittel enthält.
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