DE2718588A1 - Verfahren und reagens zur bestimmung von harnsaeure - Google Patents
Verfahren und reagens zur bestimmung von harnsaeureInfo
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Description
Patentanwälte Dipl.-Ing. H. Weickmann, Dipl.-Phys. Dr. K.Fincke
Dipl.-Ing. F. A.Weickmann, Dipl.-Chem. B. Huber
8 MÜNCHEN 86, DEN POSTFACH 860 820 int. Nr. 2126 MÖHLSTRASSE 22, RUFNUMMER 98 39 21/22
BOEHRINGER MANNHEIM GMBH Sandhofer Straße 112-132, 6800 Mannheim
Verfahren und Reagens zur Bestimmung von Harnsäure
Die Erfindung betrifft ein Verfahren und Reagens zur störungsfreien
Bestimmung von Harnsäure, insbesondere in Serum und Plasma, mit Hilfe des Uricase/Katalase/Aldehyddehydrogenase-Systems.
Ein erhöhter Harnsäurespiegel im Serum (Plasma) stellt einen wichtigen Hinweis auf das Bestehen einer Gichtkrankheit dar.
Die quantitative Analyse der Harnsäure im Serum gehört daher zu den im klinisch-chemischen Laboratorium häufig auszuführenden
Untersuchungen.
Zur enzymatischen Bestimmung der Harnsäure werden bisher in der Praxis im wesentlichen zwei Methoden angewendet, die als
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Uricase-Methode und Urica-quant-Methode bekannt sind (vgl.
"Methoden der enzymatischen Analyse" (Bergmeyer, H.U., Ed.),
Band 2, (1974) 1999 bis 2005, Verlag Chemie). Neuerdings wurde ein neues enzymatisches Verfahren bekannt (DT-OS 24 50 726),
das auf dem folgenden Prinzip beruht:
üricase
Harnsäure + 2 H3O + O3 Allantoin + CO2 + H3O2
Harnsäure + 2 H3O + O3 Allantoin + CO2 + H3O2
Katalase
H2O2 + Alkohol Aldehyd + 2 H2O
H2O2 + Alkohol Aldehyd + 2 H2O
Aldehyd-Dehydrogenase
Aldehyd + NAD(P) + Carbonsäure +
NAD(P)H + H+
Die Bildung von NAD(P)H, gemessen an der Extinktionszunahme bei 340 nm, Hg 334 nm oder Hg 36 5 nm, ist der Harnsäuremenge
proportional.
Verglichen mit der als Referenzmethode angesehenen Uricase-Methode
zeichnet sich dieses neuere Verfahren nach Haeckel durch eine geringere Störanfälligkeit gegenüber Verunreinigungen
im Analysenansatz aus, da die Messung im längerwelligen UV-Bereich durchgeführt wird (334 bis 365 nm anstelle von
293 bis 297 nm). Im Vergleich zum Urica-quant-Verfahren ist
der Zeitbedarf pro Analyse wesentlich geringer, wodurch diese neuere Methode besonders gut für schnell laufende Analysenautomaten
geeignet ist.
Bei Anwendung der oben beschriebenen Harnsäuretests nach Haeckel stellte sich heraus, daß in vielen Fällen, insbesondere
bei Seren von Nierenkranken oder Leberkranken, erhebliche Störungen des Tests durch Schleichreaktionen auftraten.
Beim Arbeiten nach der Endwert-Methode findet man bereits vor Zugabe der als Starter dienenden Uricase-Lösung eine NAD(P)H-
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Zunahme bzw. NADH-Abnahme. Ferner kommt die Reaktion auch nach
Umsetzung der gesamten Harnsäure nicht zum Stillstand, sondern es wird weiterhin NAD(P)H gebildet. Die Geschwindigkeit dieser
Schleichreaktionen beträgt bei 25° C ca. 0,001 bis 0,004ÖE/min,
wobei außerdem auch noch die Geschwindigkeiten vor dem Start und nach Ablauf der Harnsäurereaktion oft voneinander verschieden
sind. Dies erschwert die genaue Auswertung der Meßergebnisse sehr, da man die der umgesetzten Harnsäuremenge entsprechende
Extinktionsdifferenz nur ungenau feststellen kann. Aus dieser Extinktionsdifferenz, dem Analysenansatz und dem molaren Extinktionskoeffizienten
von NADH ist jedoch das Analysenergebnis zu berechnen.
Diese Schleichreaktionen machen sich bei der Harnsäurebestimmung auf kinetischer Basis noch weitaus störender als bei der Bestimmung
nach dem Endwert-Verfahren bemerkbar. Bei den kinetischen
Verfahren muß man bekanntlich zur stets erforderlichen Kalibrierung eine Standardbestimmung durchführen, wozu man im allgemeinen
einen wäßrigen Standard einsetzt (J. Ziegenhorn in "Grundlagen der enzymatischen Analyse" H. Bergmeyer, Seite 81 bis 85,
Verlag Chemie (1977). Da bei dieser Standardanalyse keine Schleichreaktionen auftreten, erhält man bei der Analyse der
oben erwähnten Seren, in denen Schleichreaktionen auftreten, falsch positive bzw. negative Resultate; denn der auf die Harnsäure-Umsetzung
zurückgehenden Reaktion überlagert sich die Schleichreaktion. Die kinetischen Tests sind jedoch für das automatisierte
Laboratorium von großer Bedeutung. Sie ermöglichen es, den Zeitbedarf pro Analyse drastisch zu reduzieren und nutzen somit
die Analysenautomaten besser aus. Darüber hinaus sind sie
im allgemeinen weniger anfällig gegen Störungen durch Trübungen oder Eigenfarbe der Probe als Endwert-Verfahren.
Wie beim Endwert-Verfahren können zwar auch bei den kinetischen
Verfahren die durch Schleichreaktionen bedingten Störungen bis zu einem gewissen Grade durch die Bestimmung von
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Proben-Leerwerten berücksichtigt werden. Dies hat jedoch Nachteile;
denn Proben-Leerwert-Bestimmungen bedeuten immer eine Verdoppelung des Zeit- und Reagensbedarfs bei der Durchführung
der Analyse. Vor allem an modernen, schnell laufenden Analysenautomaten (Centrifugal Fast Analyzer und verwandte Geräte),
beeinträchtigen Proben-Leerwert-Analysen die optimale Ausnutzung der Geräte sehr.
Je nach Ausmaß der Schleichreaktion wurden Fehler von 5 bis 20 % für die Analysenresultate festgestellt. Dies bedeutet
eine starke Einschränkung der Anwendbarkeit der Haeckel'sehen
Methode zur Harnsäurebestimmung in der Routinediagnostik, wo bekanntlich Harnsäuretests besonders oft an Seren von Nierenkranken
vorgenommen werden müssen. Gerade bei Gicht ist eine Erkrankung der Niere außerordentlich häufig.
Der Erfindung liegt daher die Aufgabe zugrunde, ein Verfahren zu schaffen, mit dem sich die geschilderten Störungen bei
der Harnsäurebestimmungsmethode nach Haeckel vermeiden lassen.
Gelöst wird diese Aufgabe erfindungsgemäß durch ein Verfahren zur Bestimmung von Harnsäure in biologischem Material mittels
Uricase, Katalase und Aldehyddehydrogenase in Gegenwart von Alkohol und Nicotinamid-adenin-dinucleotid bzw. -phosphat
(NAD(P)), welches dadurch gekennzeichnet ist, daß wenigstens eine Verbindung aus der Gruppe Oxalat, Malonsäuremono(niedrig)-alkylester,
Trihalogenäthanol, gegebenenfalls mit ein oder mehreren Niedrigalkylgruppen oder/und Halogenatomen substituiertes
Pyrazol oder Pyridin, gegebenenfalls durch eine Niedrigalkylgruppe substituierte Pyridincarbonsäure, deren Amid oder
Niedrigalkylester, Thioharnstoff, Isobutyramid oder chelatbildendes
Komplexierungsmittel, wie Nitrilotriessigsäure oder Äthylendiamintetraessigsäure zugesetzt wird.
Als biologisches Material kommen insbesondere Serum und Blut in Frage, es können jedoch auch Harn, durch Zellaufschluß ge-
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wonnene Flüssigkeiten oder dergleichen, als Ausgangsmaterial
eingesetzt werden.
Unter Niedrigalkylgruppen werden im Rahmen der Erfindung solche
mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen verstanden. Halogenatome sollen
im Rahmen der Erfindung Chlor-, Brom- und Jodatome sein. Bei den Pyrazolderivaten werden solche bevorzugt, bei welchen ein
Substituent in Stellung 4 steht. Bei den Pyridincarbonsäuren steht die Carboxylgruppe in Stellung 3. Typische Beispiele
für geeignete Verbindungen sind Pyrazol, 4-Brompyrazol, 4-Jodpyrazol,
4-Chlorpyrazol, 4-Methylpyrazol, 4-fithylpyrazol,
4-Propylpyrazol, 3,4-Dibrompyrazol, Pyridin, N-MethyInicotinamid
u.a..
Die erfindungsgemäß einzusetzenden Zusatzmittel können einzeln oder in Kombination zugegeben werden. Während in vielen Fällen
ein einziges Zusatzmittel ausreicht, um eine Schleichreaktion vollständig zu unterdrücken, wird doch der Zusatz von wenigstens
zwei der erfindungsgemäßen Mittel bevorzugt. Besonders bevorzugt
wird die Verwendung eines Mittels aus der Gruppe Oxalat und Malonsäuremono(niedrig)alkylester
zusammen mit einem oder mehreren Mitteln aus der Gruppe der Trihalogenäthanole, Isobutyramid,
Thioharnstoff substituierten oder unsubstituierten Pyrazole, Pyridine oder Pyridincarbonsäuren. Unter den Oxalaten werden
die Alkalisalze bevorzugt.
Das Verfahren kann nach dem Endwert-Verfahren durchgeführt werden, bei dem die Konzentration der Harnsäure nach Ablauf
der Reaktion aus der gemessenen Extinktionsdifferenz ermittelt wird. Ferner können kinetische Verfahren angewendet werden,
bei denen die Geschwindigkeit der Reaktion als Meßgröße dient. Die Lehre, wie derartige kinetische Testsysteme beim Vorliegen
von gekoppelten Enzymreaktionen aufzubauen sind, ist aus der DT-OS 25 58 536 bekannt. Außerdem ist aus DT-PS 24 40 011
bereits bekannt, daß die an sich für die Anwendung von kinetischen Verfahren zu niedrige Michaelis-Konstante der Uricase
in bezug auf Harnsäure durch Zusatz eines kompetitiven Inhibi-
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tors scheinbar erhöht werden kann, so daß kinetische Meßprinzipien
benutzt werden können. Ein solcher kompetitiver Inhibitor ist z. B. Xanthin.
Die erfindungsgemäß zugesetzten Verbindungen werden in solchen
Mengen verwendet, daß vorkommende Schleichreaktionen vollständig unterdrückt werden. Die erforderlichen Mengen lassen sich leicht
durch einen einfachen Vorversuch bestimmen. Im allgemeinen reichen
jedoch Zusätze zwischen 0,005 und 0,5 Mol Zusatzverbindung pro Liter Reagens vollständig aus. In Einzelfällen können größere
oder kleinere Zusätze in Betracht kommen.
Die Verfahrensbedingungen hinsichtlich pH-Wert, Zeit, Temperatur und dergleichen entsprechen den aus der DT-OS 24 50 726 bekannten.
Vorzugsweise wird bei pH 8,0 bis 9,O gearbeitet unter Verwendung eines in diesem Bereich seine maximale Kapazität aufweisenden
Puffers. Besonders gute Ergebnisse wurden mit Diphosphatpuffer
(K-P-O./HCl) erzielt. Zweckmäßig erfolgt die
Bestimmung bei Raumtemperatur.
Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist ein Reagens zur Bestimmung von Harnsäure, enthaltend Uricase, Katalase, Aldehyddehydrogenase,
Alkohol, NAD(P) und Puffer, welches dadurch gekennzeichnet ist, daß es wenigstens eine Verbindung aus
der Gruppe Oxalat, Malonsäuremono(niedrig)alkylester, Trihalogenäthanol,
gegebenenfalls mit ein oder mehreren Niedrigalkylgruppen oder/und Halogenatomen substituiertes Pyrazol oder Pyridin,
gegebenenfalls durch eine Niedrigalkylgruppe substituierte Pyridincarbonsäure, deren Amid oder Niedrigalkylester, Thioharnstoff,
Isobutyramid oder chelatbildendes Komplex!erungsmittel,
wie Nitrilotriessigsäure oder Äthylendiamintetraessigsäure enthält.
Ein bevorzugtes Reagens der oben genannten Art enthält etwa 1 χ 102 bis 1 χ 103 U/l Uricase, 500 bis 1500 kU/1 Katalase,
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500 bis 1000 U/l Aldehyddehydrogenase, 0,3 bis 2 Mol/l Äthanol, 0,5 bis 1,5 mMol/1 NAD+ oder NADP+, 20 bis 100 mMol/1 Puffer
pH 8,0 bis 9,0 und 0,005 bis 0,5 Mol/l erfindungsgemäßes Zusatzmittel.
Erfindungsgemäß gelingt es, wie oben beschrieben, störende
Schleichreaktionen bei der Bestimmung auszuschließen und damit die Genauigkeit des Verfahrens zu verbessern und durch Einsparung
von Proben-Leerwert-Bestimmung den Zeit- und Reagentienbedarf herabzusetzen.
Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung weiter. Beispiele 1 bis 27
Die nachstehend beschriebenen Beispiele wurden nach dem Endwert-Verfahren
durchgeführt unter Verwendung folgender Reagentien:
Reagens 1
K4P2O7/HCl-Puffer (30 bis 50 mMol/1, pH 8,0 bis 9,0), Äthanol
(0,3 bis 2 Mol/l), NAD+ (= 0,5 mMol/1), Katalase aus Rinderleber
(= 500 kU/1), Aldehyddehydrogenase aus Hefe (^ 500 U/l).
Reagens 2
Uricase aus Schweineleber (- 1.6 χ 10 U/l).
Meßstrahlung: Hg 334 nm, 340 nm, Hg 365 nm; Schichtdicke der Küvette: 1 cm; Inkubationstemperatur: Raumtemperatur.
2,0 ml des Reagens 1 in Küvette pipettieren, 0,1 ml Probe zusetzen
und mischen. Extinktion ca. 3 Minuten lang registrieren, auf Zeitpunkt der Zugabe von Reagens 2 extrapolieren und E^ be-
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stimmen. 10,ul des Reagens 2 einmischen. Extinktion ca. 2 bis
10 Minuten lang registrieren, durch Extrapolation auf den Zeitpunkt der Zugabe von Reagens 2 E_ ermitteln.
Berechnung der Konzentration (c) der Harnsäure im Serum:
c = (E2-E1) . 3,41 mMol/1 (λ = Hg 334 nm)
c = (E2-E1) . 3,35 mMol/1 (λ = Hg 340 nm)
c = (E2-E1) . 6,20 mMol/1 (λ = Hg 365 nm, NAD)
c = (E2-E1) . 6,03 mMol/1 (λ = Hg 365 nm, NADP)
Serum, Plasma, verdünnter Harn.
Bei dem wie oben beschrieben durchgeführten Verfahren wurden die aus der folgenden Tabelle ersichtlichen erfindungsgemäßen Zusatzmittel
eingesetzt. Die Tabelle gibt an die Art des verwendeten Probenmaterials, das eingesetzte Coenzym, die Verwendung des
Zusatzmittels sowie die unspezifische Extinktionsänderung (Schleichreaktion) in E pro Minute. Die Beispiele 1, 4, 6, 8,
10, 13, 17, 22, 24 und 26 sind Vergleichsbeispiele, die übrigen Beispiele erläutern die Erfindung.
| Beispiel Nr. |
Probe | Coenzym | Zusatzmittel (Mol/l) |
Schieichreaktion Δ E/Minute |
| 1 | Urämikerserum Nr.1 | NAD | — | ^ 0,004 |
| 2 | ürämikerserum Nr.1 | NAD | Pyrazol (0,05-0,3) |
0,000 |
| 3 | Urämikerserum Nr.1 | NAD | Pyridin (0,05-0,20) |
Ο,ΟΟΟ |
| 4 | Urämikerserum Nr.2 | NAD | - | + 0,002 |
| 5 | Urämikerserum Nr.2 | NAD | 4-Methylpyri- din (0,1-0,3) |
0,0OO |
| 6 | Urämikerserum Nr.3 | NAD | - | + 0,003 |
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| Beispiel Nr. |
Probe | Coenzyn | Zusatzmittel (Mol/l) |
Schleichreaktion Δ E/Minute |
| 7 | Urämikerserum Nr.3 | NAD | a) Pyrazol (0,05-0,15) :>) Natrium- oxalat (0,05-0,15) |
0,001 0,000 |
| 8 | Urämikerserum Nr.4 | NAD | - | f 0,002 |
| 9 | Urämikerserum Nr.4 | NAD | Trichlorätha- iol (0,01-0,07) |
Ο,ΟΟΟ |
| 10 | Urämikerserum Nr.5 | NAD | - | - 0,003 |
| 11 | Urämikerserum Nr.5 | NAD | Natriumoxalat (0,05-0,15) |
0,000 |
| 12 | Urämikerserum Nr.5 | NAD | Malonsäure- monoäthyl- ester (K-SaIz) (0,05-0,15) |
0,000 |
| 13 | Urämikerserum Nr.6 | NAD | - | + 0,003 |
| 14 | Urämikerserum Nr.6 | NAD | a) Pyrazol (0,05-0,15) b) Malonsäure- monoäthyl- ester (K- salz) (0,05- 0,15) |
0,001 0,000 |
| 15 | Urämikerserum Nr.6 | NAD | a) Pyrazol (0,05-0,15) b) Pyridin (0,05-0,10) |
0,001 0,000 |
| 16 | Urämikerserum Nr.6 | NAD | Thioharnstoff (0,1-0,2) |
0,000 |
| 17 | Urämikerserum Nr.6 | NADP | - | + 0,002 |
| 18 | Urämikerserum Nr.6 | NADP | Trichloräthanol (0,01-0,07) |
0,000 |
| 19 | Urämikerserum Nr.6 | NADP | a) Pyrazol (0,05-0,15) 3) Malonsäure- monoäthyl- ester (K-SaIz) (0,05-0,15) |
0,001 Ο,ΟΟΟ |
| 20 | Urämikerserum Nr.6 | NADP | a) Pyrazol (0,05-0,15) b) Natriumoxa lat (0,05- 0,15) |
0,001 0,000 |
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Δ*
| Beispiel Nr. |
Probe | Nr. | 6 | Coenzym | Zusatzmittel (Mol/l) |
Schleichreaktion Δ E/Minute |
| 21 | ürämikerserum | Nr. | 7 | NADP | a) Pyrazol (0,05-0,15) b) Pyridin (0,05-0,10) |
0,001 O,000 |
| 22 | ürämikerserum | Nr. | 7 | NADP | - | + 0,003 |
| 23 | Urämikerserum | Nr. | 8 | NADP | a) Trichlor- äthanol (0,01-0,07) b) Malonsäure- monoäthyl- ester K-SaIz (0,05-0,10) |
0,001 0,000 |
| 24 | Urämikerserum | Nr. | 8 | NAD | - | + 0,002 |
| 25 | Ur ämi ke rs er um | Nr. | 9 | NAD | EDTA (0,05-0,20) | 0,000 |
| 26 | Serum | Nr. | 9 | NAD | - | + 0,001 |
| 27 | Serum | NAD | Isobutyramid (0,1-0,3) |
0,000 | ||
+ = Extinktionszunahme
- = Extinktionsabnahme
- = Extinktionsabnahme
Aus den Beispielen 1 bis 27 geht hervor, daß erfindungsgemäß die
störende Schleichreaktion vollständig unterdrückt werden kann, gleichgültig, ob es sich dabei um eine Extinktionszunahme oder
Extinktionsabnahme handelt.
Beispiel 28
Zur Harnsäurebestimmung auf kinetischer Basis kann das folgende Reagens eingesetzt werden:
Reagens
K4P2O7/HCl-Puffer (3O bis 5O mMol/1, pH 8,0 bis 9,O), Äthanol
(0,3 bis 2 Mol/l), NAD+ (= 0,5 mMol/1), Katalase aus Rinderleber
(= 500 kü/1), Aldehyddehydrogenase aus Hefe (^ 500 U/l),
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Uricase (470 bis 710 U/l), Xanthin, K-SaIz (180 bis 240 .umol/1)
Bestimmungsansatz
Durchführung der Analyse nach dem kinetischen "fixed-time-Verfahren"
(vgl. DT-OS 25 58 536.8) unter Benutzung eines GEMSAEC Fast Analyzers.
Meßstrahlung: 340 nm; Inkubationstemperatur: 25°C. Probe bzw. Standard 50,ul
NaCl-Lösung, 0,9 % 200,ul
Reagens 500.ul
NaCl-Lösung, 0,9 % 200,ul
Reagens 500.ul
Die erste Ablesung E1 wird 35 bis 100 Sekunden nach dem Start
der Reaktion, die zweite Ablesung E- 150 bis 200 Sekunden später
durchgeführt. Unter Bezugnahme auf einen Standardansatz berechnet der Computer des Automaten die Harnsäurekonzentration
) nach der Formel:
cStandard* *E2~E1*Probe cProbe = (E2-E1>
Standard ™ol/1
Serum, Plasma, verdünnter Harn.
Die Durchführung der Versuche erfolgte analog wie bei den Beispielen
1 bis 27 mit und ohne Zusatz der erfindungsgemäßen Zusatzmittel.
Die Ergebnisse entsprachen dabei völlig denen, die mit den entsprechenden Zusätzen nach den Beispielen 1 bis 27 erzielt
wurden.
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Claims (6)
1.) Verfahren zur Bestimmung von Harnsäure in biologischem
iaterial mittels Uricase, Katalase und Aldehyddehydrogenase in Gegenwart von Alkohol und Nicotinamid-adenin-dinucleotid
bzw. -phosphat (NAD(P)), dadurch gekennzeichnet, daß wenigstens eine Verbindung aus der Gruppe Oxalsäure, Malonsäuremono
(niedrig) alkylester , Trihalogenäthanol, gegebenenfalls mit ein oder mehreren Niedrigalkylgruppen oder/und Halogenatomen
substituiertes Pyrazol oder Pyridin, gegebenenfalls durch eine Niedrigalkylgruppe substituierte Pyridincarbonsäure, deren Amid
oder Niedrigalkylester, Thioharnstoff, Isobutyramid oder chelatbildendes Komplexierüngsmittel, wie Nitrilotriessigsäure
oder Äthylendiamintetraessigsäure zugesetzt wird.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß 0,005 bis 0,5 Mol/l Zusatzmittel verwendet werden.
3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß wenigstens ein Zusatzmittel aus der Gruppe Oxalat und Malonsäuremono
(niedrig) alkylester zusammen mit einem oder mehreren Zusatzmitteln aus der Gruppe Thioharnstoff, Isobutyramid, Komplexbildner
der substituierten Pyrazole, Pyridine oder Pyridincarbonsäuren zugesetzt wird.
4. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß bei pH-Werten von 8,0 bis 9,0 gearbeitet
wird.
5. Reagens zur Bestimmung von Harnsäure, enthaltend Uricase, Katalase, Aldehyddehydrogenase, Alkohol, NAD(P) und Puffer,
dadurch gekennzeichnet, daß es wenigstens eine Verbindung aus der Gruppe Oxalat, Malonsäuremono(niedrig)alkylester, Trihalogenäthanol,
gegebenenfalls mit ein oder mehreren Niedrigalkyl-
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-J-
gruppen oder/und Halogenatomen substituiertes Pyrazol oder Pyridin,
gegebenenfalls durch eine Niedrigalkylgruppe substituierte Pyridincarbonsäure, deren Amid oder Niedrigalkylester, Thioharnstoff,
Isobutyramid oder chelatbildendes Komplexierungsmittel,
wie Nitrilotriessigsäure oder Äthylendiamintetraessigsäure enthält.
wie Nitrilotriessigsäure oder Äthylendiamintetraessigsäure enthält.
6. Reagens nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß es
etwa 1 χ 102 bis 1 χ 103 U/l Uricase, 500 bis 1500 kü/1 Katalase, 500 bis 1000 U/l Aldehyddehydrogenase, 0,3 bis 2 Mol/l Äthanol, 0,5 bis 1,5 mMol/1 NAD+ oder NADP+, 20 bis 100 mMol/1 Puffer pH 8,0 bis 9,O und 0,005 bis 0,5 Mol/l erfindungsgemäßes Zusatzmittel enthält.
etwa 1 χ 102 bis 1 χ 103 U/l Uricase, 500 bis 1500 kü/1 Katalase, 500 bis 1000 U/l Aldehyddehydrogenase, 0,3 bis 2 Mol/l Äthanol, 0,5 bis 1,5 mMol/1 NAD+ oder NADP+, 20 bis 100 mMol/1 Puffer pH 8,0 bis 9,O und 0,005 bis 0,5 Mol/l erfindungsgemäßes Zusatzmittel enthält.
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