SE432949B - Forfarande och reagens for bestemning av urinsyra - Google Patents
Forfarande och reagens for bestemning av urinsyraInfo
- Publication number
- SE432949B SE432949B SE7803056A SE7803056A SE432949B SE 432949 B SE432949 B SE 432949B SE 7803056 A SE7803056 A SE 7803056A SE 7803056 A SE7803056 A SE 7803056A SE 432949 B SE432949 B SE 432949B
- Authority
- SE
- Sweden
- Prior art keywords
- liter
- acid
- nad
- lower alkyl
- group
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 25
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 18
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 18
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 title claims description 18
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims description 16
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N NAD zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N 0.000 claims description 33
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 15
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Malonic acid Chemical compound OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N thiourea Chemical compound NC(N)=S UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- WFKAJVHLWXSISD-UHFFFAOYSA-N isobutyramide Chemical compound CC(C)C(N)=O WFKAJVHLWXSISD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 claims description 9
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 9
- 102000005369 Aldehyde Dehydrogenase Human genes 0.000 claims description 8
- 108020002663 Aldehyde Dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 8
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 claims description 7
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 claims description 7
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Natural products NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 7
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 108010092464 Urate Oxidase Proteins 0.000 claims description 6
- 229940047889 isobutyramide Drugs 0.000 claims description 6
- SIOXPEMLGUPBBT-UHFFFAOYSA-N picolinic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=N1 SIOXPEMLGUPBBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 claims description 5
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims description 4
- MGFYIUFZLHCRTH-UHFFFAOYSA-N nitrilotriacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CC(O)=O MGFYIUFZLHCRTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- NOIXNOMHHWGUTG-UHFFFAOYSA-N 2-[[4-[4-pyridin-4-yl-1-(2,2,2-trifluoroethyl)pyrazol-3-yl]phenoxy]methyl]quinoline Chemical compound C=1C=C(OCC=2N=C3C=CC=CC3=CC=2)C=CC=1C1=NN(CC(F)(F)F)C=C1C1=CC=NC=C1 NOIXNOMHHWGUTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000012620 biological material Substances 0.000 claims description 3
- 150000003217 pyrazoles Chemical class 0.000 claims description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000008139 complexing agent Substances 0.000 claims description 2
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 claims description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 2
- 150000003222 pyridines Chemical class 0.000 claims description 2
- 229950006238 nadide Drugs 0.000 claims 4
- 241001122767 Theaceae Species 0.000 claims 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 claims 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 33
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 24
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 11
- WTKZEGDFNFYCGP-UHFFFAOYSA-N Pyrazole Chemical compound C=1C=NNC=1 WTKZEGDFNFYCGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N [[(2r,3r,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3-hydroxy-4-phosphonooxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [(2s,3r,4s,5s)-5-(3-carbamoylpyridin-1-ium-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl phosphate Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N 0.000 description 9
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 229940039748 oxalate Drugs 0.000 description 4
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 3
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- -1 monoethyl ester Chemical class 0.000 description 3
- KPWDGTGXUYRARH-UHFFFAOYSA-N 2,2,2-trichloroethanol Chemical compound OCC(Cl)(Cl)Cl KPWDGTGXUYRARH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical compound O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 2
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- DFUAIALZXKLUQU-UHFFFAOYSA-N 4,5-dibromo-1h-pyrazole Chemical compound BrC=1C=NNC=1Br DFUAIALZXKLUQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WVGCPEDBFHEHEZ-UHFFFAOYSA-N 4-bromo-1h-pyrazole Chemical compound BrC=1C=NNC=1 WVGCPEDBFHEHEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BADSZRMNXWLUKO-UHFFFAOYSA-N 4-chloro-1h-pyrazole Chemical compound ClC=1C=NNC=1 BADSZRMNXWLUKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IHNXHUNMFYXQCG-UHFFFAOYSA-N 4-ethyl-1h-pyrazole Chemical compound CCC=1C=NNC=1 IHNXHUNMFYXQCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LLNQWPTUJJYTTE-UHFFFAOYSA-N 4-iodopyrazole Chemical compound IC=1C=NNC=1 LLNQWPTUJJYTTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YAXKXMVDJJMGRY-UHFFFAOYSA-N 4-propyl-1h-pyrazole Chemical compound CCCC=1C=NNC=1 YAXKXMVDJJMGRY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical group [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000005569 Gout Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 101100381510 Mus musculus Bcl10 gene Proteins 0.000 description 1
- ZYVXHFWBYUDDBM-UHFFFAOYSA-N N-methylnicotinamide Chemical compound CNC(=O)C1=CC=CN=C1 ZYVXHFWBYUDDBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001447 alkali salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000010580 coupled enzyme reaction Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 239000001177 diphosphate Substances 0.000 description 1
- XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J diphosphate(4-) Chemical compound [O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 235000011180 diphosphates Nutrition 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- RIKMMFOAQPJVMX-UHFFFAOYSA-N fomepizole Chemical compound CC=1C=NNC=1 RIKMMFOAQPJVMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004285 fomepizole Drugs 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 1
- 150000003891 oxalate salts Chemical class 0.000 description 1
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 description 1
- 238000007430 reference method Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- ZNCPFRVNHGOPAG-UHFFFAOYSA-L sodium oxalate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)C([O-])=O ZNCPFRVNHGOPAG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940039790 sodium oxalate Drugs 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 229940075420 xanthine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/62—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving uric acid
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
lO
20
25
30
35
40
7803056-6
2
Bildningen av NAD(P)H, mätt på extinktionsökningen vid
340 nm, Hg 334 nm eller Hg 365 nm, är proportionell mot urin-
syramängden.
Jämförd med den som referensmetod ansedda urikasmetoden
kännetecknas detta.nyare förfarande enligt Haeckel av en mindre
mottaglighet för störningar gentemot föroreningar i analyssatsen,
enär mätningen sker i det långvågiga UV-området (334 till 365 nm
i stället för 293 till 297 nm). I jämförelse med "urica-quant"-
förfarandet är tidsåtgången per analys väsentligt mindre, vari-
genom denna.nyare metod är synnerligen väl lämpad för snabb- o
gående analysautomater. 7 _
Vid användning av ovan beskrivna.urinsyratest enligtf
Haeckel visade det sig, att i många fall, isynnerhet vid serum
från njursjuka eller leversjukdomar, väsentliga störningar av
testen erhölls genom krypreaktioner. Vid arbete enligt slutvärde-
metoden finner man redan före tillsatsen av urikas-lösningen,
som skall igångsätta reaktionen, en NAD(P)H-ökning resp. NADH-
minskning. Vidare avstannar reaktionen icke heller efter omsätt-
ning ay hela.urinsyramängden, utan det bildas fortsättningsvis
NAD(P)H. Dessa krypreaktioners hastighet utgör vid 25°C ca
0,001-0,004 A E/min, varvid dessutom hastigheterna.före starten
och efter förloppet av urinsyrareaktionen ofta skiljer sig
från varandra. Detta.försvârar mycket en noggrann utvärdering
av mätresultaten, enär man endast mindre noggrant kan fastställa
den extinktionsdifferens som motsvarar den omsatta.urinsyra-
mängden. Av denna.extinktionsdifferens, av analyssatsen och av
den molära extinktionskoeffícienten NADH skall dock analys-
resultat beräknas. U
Dessa krypreaktioner verkar vid urinsyrabestämningen på
kinetisk bas ännu avsevärt mera.störande än vid bestämningen
enligt slutvärde-förfarandet. Vid de kinetiska förfarandena
måste man som känt för en alltid erforderlig kalibrering genom-
föra.en standardbestämning, varför man i allmänhet insätter en
vattenhaltig standard. LJ. Ziegenhorn i "Grundlagen der enzy-
matischen Analyse" H. Bergmeyer, s. 81-85, Verlag Chemie (l977)].
Enär vid en sådan standardanalys inga krypreaktioner uppträder,
erhåller man vid analys av ovan anförda sera, i vilka krypreak-
tioner uppträder, felaktiga.positiva resp. negativa resultat,
enär till den på urinsyraomsättningen àtergående reaktionen
krypreaktionen överlagras. De kinetiska testerna är emellertid
10
15
25
30
35
40
7803056-6
3
av stor betydelse för det automatiserade laboratoriet. De möjlig-
gör att tidsbehovet per analys drastiskt reduceras och utnyttjar
sålunda analysautomaterna bättre. Därutöver är de i allmänhet
mindre känsliga för störningar genom grumlingar eller provets
egenfärg än slutvärde-förfarandet.
Såsom vid slutvärde-förfarandet kan visserligen även vid
det kinetiska förfarandet de genom krypreaktioner betingade stör-
ningarna till en viss grad beaktas genom bestämning av noll-
värden för proverna. Detta innebär emellertid nackdelar, emedan
prov-noll-värde-bestämningar betyder i regel en fördubbling av
tids- och reagensbehovet vid genomföringen av analysen. Framför
allt vid modärna, snabbgàende analysautomater ("Centrifugal
Fast Analyzer" och liknande automater) inkräktar prov-noll-
värde-analyser mycket pâ det optimala utnyttjandet av auto-
materna.
Allt efter omfattningen av krypreaktionen fastställdes fel
pä 5 till 20 % för analysreaktionen. Detta innebär en stark in-
skränkning av användbarheten av metoden för urinsyrabestämning
enligt Haeckel inom rutindiagnostiken, där som känt urinsyra-
tester ofta maste utföras på serum från njursjuka. Speciellt
vid gikt är en njursjukdom mycket vanlig.
Till grund för uppfinningen ligger sålunda uppgiften, att
åstadkomma ett förfarande, vid vilket de beskrivna.störningarna
vid urinsyrabestämningsmetoden enligt Haeckel kan undvikas.
Denna.uppgift löses enligt uppfinningen genom ett förfaran-
de för bestämning av urinsyra i biologiskt material medelst urikas,
katalas och aldehyddehydrogenas i närvaro av alkohol och nikotin-
amid-adenin-dinukleotid resp. -fosfat [NAD(Pfl, som kännetecknas
därav, att minst en förening ur gruppen oxalat, malonsyramono(låg)-
alkylester, trihalogenetanol, eventuellt med en till flera låg-
alkylgrupper eller/och halogenatomer substituerad pyrazol eller
pyridin, eventuellt med en làgalkylgrupp substituerad pyridin-
karbonsyra, dess amid eller lågalkylester, tiokarbamid, isobutyr-
amid eller kelatbildande komplexeringsmedel, såsom nitrilotri-
ättiksyra eller etylendiamintetraättiksyra tillsättes.
Som biologiskt material som avses bestämmas ifrågakommer
isynnerhet serum och blod, men även serin, genom celluppslutning
erhållna vätskor eller dylikt kan insättas som utgàngsmaterial.
Med lágalkylgrupper avses inom ramen för uppfinningen så-
dana.med l-4 kolatomer. Halogenatomer bör inom ramen för upp-
10
15
20
25
30
35
40
7803056-6
4
finningen vara klor-, brom och Jodatomer. Av pyrazolderivat är
sådana.att föredraga, vilka har en substituent 1 ställning 4.
Hos pyridinkarbonsyror förefinnes karboxylgruppen i ställning 3.
Typiska exempel på lämpliga föreningar är pyrazol, 4-brompyrazol,
4-jodpyrazol, 4-klorpyrazol, 4-metylpyrazol, 4-etylpyrazol, 4-
propylpyrazol, 3,4-dibrompyrazol, pyridin, N-metylnikotinamid
o.dyl. ' -
De enligt uppfinningen för insättning avsedda tillsatsmed-
len kan tillsättes enskilt eller i kombination. Medan i många
fall ett enda tillsatsmedel är tillräckligt för att fullständigt
undertrycka en krypreaktion, är dock en tillsats av minst två av
medlen enligt uppfinningen att föredragas Speciellt att föredraga
är användningen av ett medel ur gruppen oxalat och malonsyra-
mono(lâg)alkylester tillsammans med ett eller flera.medel ur
gruppen trihalogenetanoler, isobutyramid, tiokarbamid, substitu-
erade eller osubstituerade pyrazoler, pyridiner eller pyridin-
karbonsyror. Av oxalaterna är alkalisalter att föredraga.
Förfarandet kan genomföras enligt slutvärde-förfarandet,
vid vilket koncentrationen av urinsyra efter reaktionens slut
bestämmes ur den uppmätta.extiktionsdifferensen. Vidare kan
kinetiska förfaranden användas, vid vilka reaktionens hastighet
användes som mätstorlek. Uppgifter betr. huru sådana kinetiska
testsystem vid förekomsten av kopplade enzymreaktioner skall'
uppbyggas, är kända från DT-OS 25 58 536. Dessutom är det från
DT-PS 24 40 011 redan känt, att den i och för sig för använd-
ningen av kinetiska förfaranden för låga Michaelis-konstanten
hos urikas med hänsyn till urinsyra synbarligen kan höjas genom
tillsats av en kompetitiv inhibitor, så att kinetiska mätprin-
ciper kan användas. En sådan kompetitiv inhibitor är t.ex. xantin.
De enligt uppfinningen tillsatta.föreningarna.användes i
sådana mängder, att förekommande krypreaktioner fullständigt
undertryckes. De erforderliga.mängderna.kan lätt bestämmas genom
ett enkelt förförsök. I allmänhet är dock tillsatser mellan
0,005 och 0,5 mol tillsatsförening per liter reagens fullt till-
räckliga. I enstaka fall kan större eller mindre tillsatsmängder
komma i betraktande.
Förfarandebetingelserna med avseende på pH-värde, tid, tem-
peratur och dyligt motsvarar de från DT-OS 24 50 726 kända. Före-
trädesvis arbetas vid pH 8,0 till 9,0 under användning av en i
detta område sin maximala kapacitet uppvisande buffert. Speciellt
10
15
35
40
7803056-'6
5
goda resultat har erhållits med difosfatbuffert (K4P207/H01).
Bestämningen sker lämpligen vid rumstemperatur.
Ett ytterligare föremål enligt uppfinningen är ett reagens
för bestämning av urinsyra, innehållande urikas, katalas, aldehyd-
dehydrogenas, alkohol, NAD(P) och buffert, vilket kännetecknas
därav, att det innehåller minst en förening ur gruppen oxalat,
malonsyramono(låg)alkylester, trihalogenetanol, eventuellt med
en eller flera lågalkylgrupper eller/och halogenatomer substi-
tuerad pyrazol eller pyridin, eventuellt med en lågalkylgrupp
substituerad pyridinkarbonsyra, dess amid eller lågalkylester,
tiokarbamid, isobutyramid eller kelatbildande komplexerings-
medel, såsom nitrilotriättiksyra eller etylendiamintetraëttiksyra.
Ett föredraget reagens av ovan angivna slag innehåller ca
1 x 102 till 1 x 103 U/liter urikas, 500 till 1500 kU/liter
katalas, 500 till 1000 U/liter aldehyddehydrogenas, 0,3 till
2 mol/liter etanol, 0,5 till 1,5 mmol/liter NAIÜ eller NADP+,
20 till 100 mmol/liter buffert pH 8,0 till 9,0 och 0,005 till
0,5 mol/liter tillsatsmedel enligt uppfinningen.
Enligt uppfinningen lyckas det, såsom ovan beskrivits,
att utes1uta.störande krypreaktioner vid bestämingen och däri-
genom att förbättra noggrannheten för förfarandet och att genom
inbesparande av prov-nollvärde-bestämning nedsätta tids- och
reagensbehovet.
Följande exempel åskådliggör ytterligare uppfinningen.
Exempel 1-27.
De i det följande beskrivna.exemplen genomfördes enligt
slutvärde-förfarandet under användning av följande reagenser:
Reagens 1.
K4P2OT/HC1-buffert (30 till 50 mmol/liter, pH BAD till 9,0),
etanol (0,3 'C111 2 moi/liter), NAD* ( e 0,5 mmoi/liter), kataias
ur nötlever (à 500 kU/liter), aldehyddehydrogenas från jäst
(e 500 U/liter). '
Reagens 2.
Urikas ur svinlever (= 1,6 X 105 U/liter).
Genomföring av bestämningen
Mätstrålning: Hg 334 nm, 340 nm, Hg 365 nm;
skikttjocklek: l cm; inkubationstemperatur: rumstemperatur.
2,0 ml av reagens 1 pipetteras i kyvetten, 0,1 ml prov
tillsättes och blandas. Extinktionen registreras under ca 3 min,
tidpunkt för tillsats av reagens 2 extrapoleras och El bestämmes.
kyvettens
10
15
7803056-6
6
10 p/liter av reagens 2 tillblandas. Extinktionen registreras ca
2 till 10 min, och genom extrapolering av tidpunkten för till-
sats av reagens 2 bestämmes E22.
Beräkning av koncentrationen (c) av urinsyra i serum:
c = (EQ-El) . 3,41 moi/liter (,\= Hg 3314 nm)
c = (E2-El) . 3,35 mmol/liter (Å\= Hg 340 nm) å
e = (EE-El) . óßommol/iiter t(,\ = Hg 365 nm, NAD) i
e = (EE-El) . 6,03 moi/liner (Ä = Hg 365 nm, NADP)
i
Provmaterial §
Serum; plasma, utspädd urin. (_
Vid det enligt beskrivningen ovan genomförda förfarandet
insattes av följande tabell framgående tillsatsämnen enligt
uppfinningen. Tabellen anger slaget av det använda provmateri-
alet, det insatta koenzymet, användningen av tillsatsmedel
ävensom den ospecifika extinktionsändringen (krypreaktion)
i E per min. Exemplen 1, 4, 6, 8, 10, 13, 17, 22, 2Ä och 26
är jämförelseexempel och de övriga.exemplen åskådliggör
uppfinningen.
7803056-'6
7
Exempel Prov Koenzym Tillsatsmedel Krypreaktion
nr (mol/liter) A E/min
l Uremikerserum nr 1 NAD - + 0,004
2 Uremikerserum nr 1 NAD pyrazol 0,000
(0,05-0,3)
3 Uremikerserum nr 1 NAD pyridin 0,000
(0,05-0,20)
4 Uremikerserum nr 2 NAD - + 0,002
5 Uremikerserum nr 2 NAD 4-metylpyrij 0,000
ann (o,1-o,3)-
6 Uremikerserum nr 3 NAD - + 0,003
7 Uremikerserum nr 3 NAD a)pyrazo1 0,001
<0,05-0,15)
b) nafcrium- 0,000
oxalat
(0,05-0,15)
8 Uremikerserum nr 4 NAD - + 0,002
9 ' Uremikerserum nr 4 NAD trikloretanol 0,000
(0,01-0,07)
10 Uremikerserum nr 5 NAD - - 0,003
ll Uremikerserum nr 5 NAD natriumoxalat 0,000
(O:O5"O:
12 Uremikerserum nr 5 NAD malonsyra- 0,000
monoetyl-
ester (K-salt)
(0,05-0,15) '
13 ' Uremikerserum nr 6 NAD - + 0,003
14 Uremikerserum nr 6 NAD a) pyrazol 0,001
(0,05-0,15
b)ma1onsyra- 0,000
monoety1~
ester EK-
saltš 0,05-
0,15
15 Uremikerserum nr 6 NAD a) pyrazol 0,001
(O: O5'O:
b) pyriain o,ooo
(0,05-0,10)
16 Uremikerserum nr 6 NAD tiokarbamid 0,000
(0,1-0,2)
17 Uremikerserum nr 6 NADP - + 0,002
18 Uremikerserum nr 6 NADP trikloretanol 0,000
(0.o1-0,07)
19 Uremixerserum nr 6 NADP a) pyrazol 0,001
(0,05-0,15)
b) malonsyraf 0,000
monoetyl-
ester (K-
salt (0,05-O,l?)
10
7803056-6
8
Exempel Prov Koenzym Tillsatsmedel Krypreaktiøn
nr (mol/liter) A E/min
20 Uremikerserum nr 6 NADP a) pyrazol 0,001
(0,05-0,15)
b) natriumoxa- 0,000
lat (o,o5-
0,15)
21 Uremikerserum nr 6 NADP a) pyrazol 0,001
~ (o: o5fo: 1-5)
b) pyridín 0,000
(0,05-0,10)
22 Uremikerserum nr 7 NADP - + 0,003
23 Uremikerserum nr 7 NADP a)triklor- 0,001
etanol .
_ (o:Ûl-O;O7)
b) malonsyra- 0,000
monoetyl-
ester
K-salt
_ (O, 1
24 Uremikerserum nr 8 NAD - + 0,002
25 Uremikerserum nr 8 NAD EDTA (0,05- 0,000
0,20) _
26' Serum nr 9 NAD - + 0,001
27 Serum nr 9 NAD isobutyramid 0,000
0 (0,1-0,3)
+ = Extinktionsökning
- = Extinktionsminskning
Av exemplen 1 till 27 framgår, att enligt uppfinningen den
störande krypreaktionen fullständigt kan undertryckas oberoende
av, om det därvid rör sig om en extinktionsökning eller extink-
tionsminskning.
Exempel 28.
För urinsyrabestämning på kinetisk bas kan följande rea-
gens insättas.
K4P207/Hcl-buffert (30 till 50 mmol/liter, pH 8,0 till
9,0), etanol (0,3 till 2 mel/liter), NAD* (e 0,5 mmol/liter),
katalas ur nötlever (à 500 kU/liter), aldehyddehydrøgenas ur
jäst (à 500 U/liter), urikas (470 till 710 U/liter, xantin,
K-salt (180 till 240 ymol/liner). “
10
15
20
7803056~6
Genomföring av bestämningen
Genomföring av analysen sker enligt kinetiska "fixed-
nme-förfarandec" (Jämför Dr-os 25 58 536,8) under användning
av "GEMSAEC" snabbanalysator.
Mätstrålning: 340 nm; inkubationstemperatur 2500.
Prov resp. standard 50 pl
NaC1-lösning, 0,9 % 200 pl
Reagens 500 pl
Den första.aNläsningen El göres 35 till 100 s efter reak-
tionsstarten och den andra avläsningen E2 150 till 200 s
senare. Under beaktande av en standardberäkning uträknar auto-
matens matematikmaskin urinsyrakoncentrationen (cprov) enligt
formeln:
cstandard '(E2'El)prov
cprov = (E2'El)standard mmol/liter _
Material för undersökning
Serum, plasma, utspädd urin.
Genomföringen av undersökningarna skedde analogt med
exemplen l till 27 med och utan användning av tillsatsmedlen
enligt uppfinningen. Resultaten motsvarade därvid fullstän-
digt de, som erhölls med motsvarande tillsatser enligt
exemplen l till 27.
-----~~-_-_-____--_-
Claims (5)
1. Förfarande för bestämning av urinsyra i biologiskt material medelst urikas, katalas och aldehyddehydrogenas i när- varo av alkohol och níkotinamid-adenin-dinukleotid resp. -fosfat [NAD(PIY, k ä n n e t e c k n a t därav, att minst en förening ur gruppen oxalsyra, malonsyramono(lâg)alkylester, trihalogen- etanol, eventuellt med en till flera lågalkylgrupper eller/och halogenatomer substituerad pyrazol eller pyridín, eventuellt med en lågalkylgrupp substituerad pyridinkarbonsyra, dess amid eller lågalkylester, tiokarbamid, isobutyramid eller nitrilotriättik- syra eller etylendiamintetraättiksyra tillsättes i en mängd av 0,005 till 0,5 mol/liter. '
2. Förfarande enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a t därav, att minst ett tillsatsmedel ur gruppen oxalat och malon- syramono(lâg)alkylester tillsammans med minst ett tillsatsmedel ur gruppen tiokarbamíd, isobutyramid, komplexbildare tillsättes de substituerade pyrazolerna, pyridinerna eller pyridínkarbon- syrorna.
3. Förfarande enligt ett av föregående krav, k ä n n e - t e c k n a t därav, att man arbetar vid pH-värden av 8,0 till 9,0.
4. Reagens för bestämning av urinsyra, innehållande urikas, katalas, aldehyddehydrogenas, alkohol, NAD(P) och buffert, k ä n n e t e c k n a t därav, att det innehåller minst en för- ening ur gruppen oxalat, malonsyramono(låg)alkylester, trihalogen- etanol, eventuellt med en eller flera lågalkylgrupper eller/och halogenatomer substituerad pyrazol eller pyridin, eventuellt med en lågalkylgrupp substituerad pyrídinkarbonsyra, dess amid eller lågalkylester, tiokarbamid, isobutyramid eller nitrilotriättik- syra eller etylendiamintetraättiksyra i en mängd av 0,005 till 0,5 mol/liter.
5. Reagens enligt krav 4, k ä n n e t e c k n a t därav, ett det innehåller te 1 x 10.2 till 1 x 103 u/liter urlkee, 500 till 1500 kU/liter katalas, 500 till 1000 U/liter aldehyddehydro- genas, 0,3 till 2 mol/liter etanol, 0,5 till 1,5 mmol/liter NAD+ eller NAmW, 20 liter 100 mmel/llter buffert pu 8,0 till 9,0 och 0,05 till 0,5 mmol/liter tillsatsmedel enligt uppfinningen.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2718588A DE2718588C3 (de) | 1977-04-26 | 1977-04-26 | Verfahren und Reagens zur Bestimmung von Harnsäure |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SE7803056L SE7803056L (sv) | 1978-10-27 |
| SE432949B true SE432949B (sv) | 1984-04-30 |
Family
ID=6007336
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SE7803056A SE432949B (sv) | 1977-04-26 | 1978-03-16 | Forfarande och reagens for bestemning av urinsyra |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4247630A (sv) |
| JP (1) | JPS53135390A (sv) |
| AT (1) | AT354642B (sv) |
| AU (1) | AU511846B2 (sv) |
| BE (1) | BE866414A (sv) |
| CA (1) | CA1098013A (sv) |
| CH (1) | CH643661A5 (sv) |
| DE (1) | DE2718588C3 (sv) |
| DK (1) | DK149476C (sv) |
| FR (1) | FR2389135A1 (sv) |
| GB (1) | GB1578176A (sv) |
| IT (1) | IT1095369B (sv) |
| NL (1) | NL179145C (sv) |
| SE (1) | SE432949B (sv) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6031472B2 (ja) * | 1978-12-14 | 1985-07-22 | 協和醗酵工業株式会社 | 酸性ウリカ−ゼ |
| DE3025170A1 (de) * | 1980-07-03 | 1982-01-28 | C.H. Boehringer Sohn, 6507 Ingelheim | Verfahren und reagenz zur bestimmung von harnsaeure |
| DE3743405A1 (de) * | 1987-05-14 | 1988-11-24 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur bestimmung von fructosamin |
| IT1247946B (it) * | 1991-05-17 | 1995-01-05 | Instrumentation Lab Srl | Stabilizzazione in forma liquida dell'enzima urato ossidasi |
| US5265301A (en) * | 1992-11-02 | 1993-11-30 | Lawrence Irwin F | Drain cleaning apparatus |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3411887A (en) * | 1964-06-15 | 1968-11-19 | Miles Lab | Diagnostic composition |
| US3335069A (en) * | 1964-12-14 | 1967-08-08 | Miles Lab | Composition and method for determining uric acid |
| US3536448A (en) * | 1967-07-28 | 1970-10-27 | Miles Lab | Uric acid detection |
| DE2237940C3 (de) * | 1972-08-02 | 1980-12-11 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur quantitativen Bestimmung von Harnsäure |
| JPS53711B2 (sv) * | 1973-01-16 | 1978-01-11 | ||
| JPS5013356A (sv) * | 1973-06-08 | 1975-02-12 | ||
| US3956069A (en) * | 1974-04-29 | 1976-05-11 | Abbott Laboratories | Enzymatic assays for glucose, creatine phosphokinase or plasma ammonia |
| JPS5123294A (en) * | 1974-08-19 | 1976-02-24 | Seishin Seiyaku Kk | Nyosanno anteikaho |
| DE2450726C3 (de) * | 1974-10-25 | 1981-02-19 | Rainer Prof. Dr.Med. Haeckel | Verfahren zur enzymatischen quantitativen Bestimmung von Wasserstoffperoxid |
-
1977
- 1977-04-26 DE DE2718588A patent/DE2718588C3/de not_active Expired
-
1978
- 1978-01-31 AT AT65778A patent/AT354642B/de not_active IP Right Cessation
- 1978-02-03 CA CA296,266A patent/CA1098013A/en not_active Expired
- 1978-03-02 AU AU33786/78A patent/AU511846B2/en not_active Expired
- 1978-03-16 SE SE7803056A patent/SE432949B/sv not_active IP Right Cessation
- 1978-03-24 IT IT7821633A patent/IT1095369B/it active
- 1978-03-30 NL NLAANVRAGE7803366,A patent/NL179145C/xx not_active IP Right Cessation
- 1978-03-31 US US05/892,360 patent/US4247630A/en not_active Expired - Lifetime
- 1978-03-31 FR FR7809688A patent/FR2389135A1/fr active Granted
- 1978-04-20 JP JP4713878A patent/JPS53135390A/ja active Granted
- 1978-04-20 DK DK172678A patent/DK149476C/da active IP Right Grant
- 1978-04-21 CH CH434578A patent/CH643661A5/de not_active IP Right Cessation
- 1978-04-21 GB GB15854/78A patent/GB1578176A/en not_active Expired
- 1978-04-26 BE BE187138A patent/BE866414A/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| SE7803056L (sv) | 1978-10-27 |
| DK172678A (da) | 1978-10-27 |
| ATA65778A (de) | 1979-06-15 |
| JPS5643240B2 (sv) | 1981-10-09 |
| CA1098013A (en) | 1981-03-24 |
| DK149476B (da) | 1986-06-23 |
| GB1578176A (en) | 1980-11-05 |
| NL179145B (nl) | 1986-02-17 |
| US4247630A (en) | 1981-01-27 |
| NL179145C (nl) | 1986-07-16 |
| JPS53135390A (en) | 1978-11-25 |
| FR2389135A1 (fr) | 1978-11-24 |
| AT354642B (de) | 1979-01-25 |
| DE2718588A1 (de) | 1978-11-09 |
| BE866414A (fr) | 1978-10-26 |
| IT1095369B (it) | 1985-08-10 |
| CH643661A5 (de) | 1984-06-15 |
| DE2718588B2 (de) | 1979-03-08 |
| IT7821633A0 (it) | 1978-03-24 |
| DK149476C (da) | 1986-12-01 |
| AU3378678A (en) | 1979-09-06 |
| FR2389135B1 (sv) | 1981-02-13 |
| AU511846B2 (en) | 1980-09-11 |
| DE2718588C3 (de) | 1979-11-08 |
| NL7803366A (nl) | 1978-10-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Moss et al. | Kinetic enzymatic method for determining serum creatinine | |
| EP0496730B1 (en) | Method and reagent for determination of an analyte via enzymatic means using a ferricyanide/ferric compound system | |
| Noma et al. | Polarographic method for rapid microdetermination of cholesterol with cholesterol esterase and cholesterol oxidase. | |
| JP5906604B2 (ja) | 全血検体の成分測定方法 | |
| CZ972183A3 (en) | Process of determining nad(p)h or substrates or enzymes reacting under the formation or consumption of nad(p)h and a testing system for making the same | |
| EP1598426B1 (en) | Method of pretreatment of sample for quantitating cholesterol and method for quantitating cholesterol in specific lipoproteins by using the same | |
| Sampson et al. | Chemical inhibition used in a kinetic urease/glutamate dehydrogenase method for urea in serum. | |
| Kohlbecker et al. | Direct spectrophotometric determination of serum and urinary oxalate with oxalate oxidase | |
| JP2009072136A (ja) | 還元系色素を用いた安定な測定方法、およびその試薬 | |
| EP0140589B1 (en) | Enzymatic determination of d-3-hydroxybutyric acid or acetoacetic acid, and reagents therefor | |
| SE432949B (sv) | Forfarande och reagens for bestemning av urinsyra | |
| Pesce et al. | Rapid kinetic measurement of lactate in plasma with a centrifugal analyzer | |
| Masayoshi et al. | A new enzymatic method to determine creatine | |
| EP0285998A2 (en) | Method and reagent for determination of dehydrogenase or its substrate | |
| US5436133A (en) | Enzyme assay of biochemical substances | |
| JP2534859B2 (ja) | 生体物質のエンザイムアツセイ | |
| JP2000253898A (ja) | 物質または酵素の定量方法および定量試薬 | |
| US7300769B2 (en) | Stabilized coenzyme solutions for determining dehydrogenase activity | |
| JP3598438B2 (ja) | エタノールアミン類緩衝液の安定化方法 | |
| CN114908139B (zh) | 线粒体异柠檬酸脱氢酶的活性检测系统及其应用 | |
| White et al. | Enzyme-coupled measurement of uric acid in serum with a centrifugal analyzer. | |
| CN115201134B (zh) | 一种抗白皮杉醇干扰的肌酐检测试剂盒及其应用 | |
| DiCesare | Optimum kinetic enzymatic procedures for glucose and triglycerides in plasma and serum | |
| US7407774B2 (en) | Method for reducing influence of hemoglobin with albumin in an assay | |
| CN117625735A (zh) | 一种用于检测β-羟丁酸的试剂及试剂盒 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| NAL | Patent in force |
Ref document number: 7803056-6 Format of ref document f/p: F |
|
| NUG | Patent has lapsed |
Ref document number: 7803056-6 Format of ref document f/p: F |