DE2366191C2 - Teststreifen zum Nachweis von Wasserstoffperoxid oder Wasserstoffperoxid erzeugenden Systemen - Google Patents

Teststreifen zum Nachweis von Wasserstoffperoxid oder Wasserstoffperoxid erzeugenden Systemen

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Description

10
X \ welcher Λ NH, r--YV Sauerstoffatom oder zwei Wasser- 15 in welcher
I 0 ^ XJ X
N R, Y
I /
(CHA —C-N 		20 Ri und R2
Il \
Y R2
in Wasserstoff oder ein Halogenatom, 25
X ein
Y
(CH2),,-C-N
Il "
stoff a tome,
Ri und R2 ein ein Wasserstoffatom, eine niedere Alkylgruppe, die gegebenenfalls durch eine Hydroxygruppe substituiert sein kann und η die Zahlen 1 oder 2 bedeuten, wobei für den Fall, daß η die Zahl 2 bedeutet, X, Y, Ri und R2 nicht gleichzeitig ein Wasscrsloffaiom bedeuten können,
oder deren Salze enthalten sind. /
Die Erfindung betrifft einen Teststreifen oder Testfilm zum Nachweis von Wasserstoffperoxid oder Wasserstoffperoxid erzeugenden Systemen gemäß den Merkmalen des Oberbegriffs des Anspruchs 1.
Gegenstand des DBP 22 05 733 ist das 9-(y-Aminopropyl)-3-amino-carbazol der Formel
NH,
40
(CH2)J-NH2
sowie dessen Salze, Verfahren zu ihrer Herstellung sowie dessen Verwendung als Indikator für enzymatische Nachweisreaktionen.
Das 9-(}>-Aminopropyl)-3-amino-carbazol ist ein geeigneter Indikator für den enzymatischen Glucosenachweis, der zusammen mit anderen Oxidalionsindikatoren, insbesondere mit o-Tolidin, in weiten Grenzen temperaturunabhängige und damit reproduzierbare Farbwerte je nach Glucosekonzentration liefert. Darüber hinaus wird dieser Indikator durch ständige Bestandteile des Urins wie z. B. Acetessigsäure oder Ascorbinsäure nicht beeinflußt, so daß die Testpapiere mit diesem Indikator ein gutes Hamdiagnostikum sind.
45
50
55 Wasserstoff oder ein Halogenatom,
ein Sauerstoffatom oder zwei Wasserstoffatome,
ein Wasserstoffatom, eine niedere Alkylgruppe, die gegebenenfalls durch eine Hydroxygruppe substituiert sein kann und η die Zahlen 1 oder 2 bedeuten, wobei für den Fall, daß η die Zahl 2 bedeutet, X, Y, Ri und R2 nicht gleichzeitig ein Wasserstoffatom bedeuten können.
30 sowie deren Salze mit organischen und anorganischen Säuren für Teststreifen gemäß der Gattung des Anspruchs 1 hervorragend geeignet sind.
Es werden mit den erfindungsgemäßen Indikatoren Testpapiere erhalten, die im Test eine wesentlich bessere Farbabstufung zeigen als Teststreifen mit o-Tolidin als Indikator, was zur schnellen und exakten Auswertung der Ergebnisse von erheblichem Vorteil ist. Ferner reagieren die mit o-Tolidin getränkten Teststreifen ir Reduktionsmittel-enthaltendem Urin wesentlich schwächer als in Urin, der keine Reduktionsmittel enthält, während bei Teststreifen mit den erfindungsgemäßen Iiiuikatoren diese Schwächung nicht wesentlich auftritt.
Die erfindungsgemäßen Indikatoren können auch zusammen mit o-Tolidin angewendet werden, ohne daß daraus eine größere Störanfälligkeit der Testpapiere resultieren würde. Diese Kombination führt manchmal zu besseren Farbabstufungen. Bei der Bestimmung von Glucose im Blut oder Serum erhält man dann je nach dem verwendeten Indikator Γ gelbe bis rote Färbungen (bei niedrigem Glucosegehalt); bei höheren Glucosegehalten tritt die blaue bis grüne Farbe des o-Tolidin-Radikals auf. Ein weiterer Vorteil der erfindungsgemäßen Indikatoren ist darin zu sehen, daß sie in Teststreifen, in denen sie zusammen mit o-Tolidin verwendet werden, nahezu temperaturunabhängige Farbwerte liefern, was eine exakte Testauswertung gewährleistet (vgl. die Fig.). Wird an Stelle des erfindungsgemäßen Indikators S-Amino-Q-äthylcarbazol verwendet, so erweisen sich die erhaltenen Farbwerte als sehr stark temperaturabhängig.
Außer den bei Teststreifen üblichen Phosphat- und Zitrat-Puffern kommen auch weniger gebräuchliche Puffer, wie z. B. 3,3-Dimethyl-glutarat, Mellithat und Äthylendiamintetraessigsäure sowie die sogenannten Good-Puffer in Frage sofern sie im pH-Bereich von 4,5 — 7 wirksam sind.
Beispiel 1 Testpapier zum Nachweis von Glucose im Harn
Filterpapier wird mit einer Lösung folgender Zusammensetzung getränkt und bei 50° C getrocknet
1,2 m Citratpuffer pH 5 50,0 ml 9-(y-Dimethylaminopropyl)-6-chlor-
3-aminocarbazoI-dihydrochlorid 0,75 g
Glucoseoxidase (104 U/mg) 0,25 g
Peroxidase (63 U/mg) 0,05 g
Wasser ad 100,0 ml
Das Testpapier reagiert mit glucosehaltigem Urin mit rotorangen bis schwärzlich roten Farbtönen. Urine verschiedener Herkunft sowie acetessigsäurehaltige Urine der gleichen Glucosekonzentration zeigen im Farbton keine ins Gewicht fallende Abweichung.
Beispiel 2
Verwendet man in der Rezeptur von Seispiel 1 als Indikatoren je 0,02 Mol der folgenden Indikatoren, so erhält man Testpapiere mit praktisch gleichen Eigenschaften und lediglich anderen Reaktionsfarben:
Q-^-DimethylaminoäthylJ-ö-chlor^-aminocarbazol-dihydrochlorid (Farbabstufungen von ocker über sepia nach schwarz)
9-(/?-Dimethylaminoäthyl)-3-aminocarbazol-dihydrochlorid (Farbabstufungen von gelb über sepia nach schwarz)
1 m Citratpuffer pH 6
9-(/?-Dimethylaminoäthyi)-3-aminocarbazoldihydrochlorid
o-Tolidin
Glucoseoxidase (104 U/mg)
Peroxidase (63 U/mg)
Natriumlaurylsulfat
Äthanol
Wasser
ad
50,0 ml
1.0 g
0,4 g
0.3 g
0,06 g
0,1g
33,0 ml
100,0 ml
Das Testpapier liefert mit glucosehaltigen Urinen Farbabstufungen von gelb über braunoliv nach grün. Urine verschiedener Herkunft sowie acetessigsäurehaltige Urine der gleichen Glucosekonzentration zeigen keine ins Gewicht fallenden Farbabweichungen.
Beispiel 4 Testfilm zum Nachweis von Glucose im Blut
Bestandteile:
Polyvinylacetatpropionatdispersion l,85°/oige Lösung von Natriumalginat in 0,5 m Phosphatpuffer vom pH 5,5
Natriumnonylsulfat in 5,0 ml Wasser gelöst
45,0 g 35,0 g 0,75 g
30
Beispiel 3
Filterpapier wird mit einer Lösung folgender Zusammensetzung getränkt und bei 50°C getrocknet,
40 in 10 ml Wasser gelöst
Glucoseoxidase
(62,7 U/mg)
Peroxidase
(68,8 U/mg)
o-Tolidin in 2,5 ml Aceton gelöst
9-[(j3-Hydroxyäthyl)-aminocarboiiyläthyl)]-
3-aminocarbazol-hydrochlorid in 2,0 ml
Wasser gelöst
0,189 g
0,235 g 0,600 g
0,035 g
Die Bestandteile werden gut gemischt, in einer Schichtdicke von 300 μ auf PVC-Folie ausgestrichen und 35 Minuten bei 60 C getrocknet. Auftropfen von glucosehaltigem Blut und Abwischen desselben nach einer Minute Hefen nach weiteren zwei Minuten folgende temperaturunabhängige Reaktionsfarben:
60 mg% Glucose — bräunlich rot
120 mg% Glucose — braunrot
180mg°/o Glucose — dunkeloliv
240 mg% Glucose und mehr — grün mit wachsender Farbtiefe.
Fig. 1 zeigt bei 200C und 35°C mit einem handelsüblichen Remissionsphotometer gemessene Eichkurven.
Beispiel 5
Testfilme gemäß Beispiel 4, die an Stelle von 0,035 g g-dS-HydroxyäthylJ-aminocarbonyläthylJ-S-aminocarbazol-hydrochlorid 0,025 g 9-(jS-Carbamidomethyl)-3-aminocarbazol (A) oder 0,034 g 9-(j8-Dimethylaminoäthyl)-3-aminocarbazol-dihydrochlorid (B) enthalten, reagieren mit glucosehaltigem Blut in temperaturunabhängiger Reaktion mit folgenden Farben:
mg% Glucose
60
120
180
240 und mehr
bräunlich rot beige
oliv grünlich
beige
gelblich
grün
grün mit wachsender Farbtiefe
bräunlich grün
Beispiel 6
Verwendet man in der Rezeptur von Beispiel 1 als Indikator 0,6 g o-Tolidin, so erhält man Testpapiere, die mit den Urinen verschiedener Herkunft mit grünen Farbtönen verschiedener Stärke reagieren.
In Reduklionsmittel-enthaltenden Urinen reagiert das so erhaltene Testpapier schwächer als in Urinen, in denen keine Reduktionsmittel enthalten sind (z. B. Ascorbinsäure).
Beispiel 7
Testfilme gemäß Beispiel 4, die an Stelle von 0,035 g
9-[(/?-hydroxyäthyl)-aminocarbonyläthyl]-3-aminocarbazolhydrochlorid 0,022 g 3-Amino-9-äthylcarbazol enthalten, sind stark temperaturabhängig.
Fig. 2 zeigt bei 20°C und 35°C mit einem handelsüblichen Remissionsphoiometer gemessene Eichkurven.
Hierzu 1 Blatt Zeichnungen

Claims (1)

  1. Patentanspruch:
    Teststreifen oder Testfilm zum Nachweis von Wasserstoffperoxid oder Wasserstoffperoxid erzeugenden Systemen durch Oxidation eines Chromogens in Gegenwart von Peroxidase oder peroxidatisch wirkenden Substanzen, dadurch gekennzeichnet, daß als Chromogen substituierte 3-Aminocarbazol-Derivate der allgemeinen Formel I
    Weitere Chromogene die temperaturunabhängige Farbwerte liefern, zu finden ist Aufgabe der vorliegenden Erfindung.
    Es wurde nun gefunden, daß auch Substanzen der Forme! I
DE2366191A 1973-08-01 1973-08-01 Teststreifen zum Nachweis von Wasserstoffperoxid oder Wasserstoffperoxid erzeugenden Systemen Expired DE2366191C2 (de)

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DE19813979C2 (de) * 1998-03-28 2003-04-03 Jenlab Gmbh Verfahren zum Nachweis von Wasserstoffperoxid, wasserstoffperoxidbildenden Systemen, Peroxidasen und Oxidasen bzw. peroxidatisch wirksamen Substanzen

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DE2338932C3 (de) 1979-08-16
DE2338932A1 (de) 1975-02-13
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